JP2008514633A - 線条体または黒質緻密部における神経学的欠損の治療 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から起こる神経学的欠損の治療法において、ドーパミン作動性表現型に分化する能力を有する細胞群を実際に当該ドーパミン作動性表現型に分化させるのに有効な量で、ヒト組換えGDF5をヒトの線条体または黒質緻密部に投与することによる神経学的欠損の治療法、および、この治療法での使用に適した神経栄養組成物およびマトリックスに向けられたものである。
【選択図】なし
Description
本発明は、ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から起こる神経学的欠損を、ヒト組換えGDF5の線条体または黒質緻密部への投与により治療する方法、また、当該治療法での使用のためのヒト組換えGDF5を含有する組成物およびマトリックスに向けられる。
パーキンソン病(パーキンソン症候群(Parkinsonism))、または卒中に起因するとされるような神経障害(neuropathies)によって惹起される損傷の修復には、満足できる方法がない。パーキンソン病は、振顫(tremor)、硬直、運動緩慢、運動低下などの神経障害、および、平衡および姿勢における他の障害から成る症候群である。パーキンソン病は、神経系の老化に伴うことがしばしばである。同様に、卒中が、運動系を冒し、患者は片側不全麻痺または麻痺の徴候を呈する場合がある。
本発明は、ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から生じる神経学的欠損の治療法において、ドーパミン作動性表現型に分化する能力を有する細胞群を誘導し、実際に当該ドーパミン作動性表現型に細胞を分化させるのに有効な量でヒト組換えGDF5をヒトの線条体または黒質緻密部に投与する段階を含む前記神経欠損の治療法、および、前記欠損の治療に適したヒト組換えGDF5を含む組成物およびマトリックスに向けられたものである。
神経発生は、成人の海馬、脳室下帯、黒質および嗅球で実証されている。よって、これらの細胞を動員し、および/または、DA特異的ニューロンに分化させる作用物質は、パーキンソン病の原因とされるヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から生じる神経学的欠損の治療における細胞置換の提供に不可欠である。本発明の治療法および組成物では、内因性、外因性にかかわらず、幹細胞群または前駆細胞群を分化させるための分化前(pre-differentiation)の薬剤または分化剤(differentiation agent)として、ヒト組換えGDF5が用いられる。本発明は、少なくとも一部は、ヒト組換えGDF5が、成熟神経海馬前駆細胞を選択的に誘導し、ドーパミン作動性表現型に分化させる神経栄養因子であるという発見に基づく。本明細書に記述されるデータは、ヒト組換えGDF5が神経幹細胞分化の強力な誘導物質であることを実証している。よって、これらの結果は、神経保護機能に加えて、神経再生機能を提供するためのヒト組換えGDF5の相乗的有用性を実証するものである。
成熟ゲッ歯類海馬神経前駆細胞の、ドーパミン作動性表現型へのMP-52誘導分化
これまでに発表されている方法[スヴェンソン他(Svendson et al.), 「ネイチャー・リビューズ・ジェネティクス(Nat Rev Genet.)」, 5(2) 136〜44 (2004)]に従って、成熟ラットの脳から成熟ゲッ歯類海馬神経前駆細胞が単離された。単離細胞は、ラミニン被覆24ウェル組織培養プレート(ベクトン・ディクソン社(Becton Dickson),マサチューセッツ州ベッドフォード)に細胞1,000個/cm2で接種された。
分娩後細胞におけるMP52-誘導Nurr1発現
分娩後細胞は、米国特許出願第10/887,012号および第10/877,446号に記述されているように、臍帯および胎盤消化物から単離された。手短に言えば、ヒト臍帯および胎盤細胞は、分娩後組織の外植片から単離された。当該組織は、分娩または正常な外科的分娩時に妊婦から入手された。以下の細胞単離プロトコルが、層流フード中、無菌条件下で実施された。
成熟ゲッ歯類海馬神経前駆細胞のオリゴデンドロサイトおよびアストロサイトへのMP52-誘導分化
MP52含有微小球コアは、二重エマルジョン技術によって調製された。手短に言えば、固有粘度0.4 dl/gの、ポリ(D,L-乳酸-コ-グリコール酸)(poly(D,L-lactic-co-glycolic) acid)の90:10コポリマー(メディソーブ(MEDISORB)の商品名で販売、アルカームズ・インコーポレイティッド(Alkermes, Inc.),オハイオ州ウィルミントン)50 mgが、塩化メチレン1.5 mL、およびアセトン0.5 mLに溶解された。25マイクログラムのMP52は、0.1%(w/v)ヒト血清アルブミン(HSA)(シグマ社(Sigma)、ミズーリ州セントルイス)含有16mMクエン酸塩緩衝液(pH 6.0)0.15 mLに溶解された。MP52は、前記微小球への取り込み前に、タンパクを安定化させるために、賦形剤で再構成された。ポリマー/MP52水溶液は、ブランソン・ソニファイアー450(Branson Sonifier 450)(ブランソン・ウルトラソニックス社(Branson Ultrasonics),コネチカット州ダンベリー)を使って、10秒間振動させることによる連続的に超音波を当てて分解され、単一エマルジョンを生じた。当該単一エマルジョンは、5%(w/v)ポリビニルアルコール(MW 31,000-50,000、87〜89%加水分解;アルドリッチ・ケミカル・カンパニー(Aldrich Chemical Company),ウィスコンシン州ミルウォーキー)、および5%(w/w) NaClを含有する水溶液30 mLに添加された。生じた溶液は、1分間電磁攪拌され、二重エマルジョンを生成した。
(1) ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から起こる神経学的欠損を治療する方法において、
ドーパミン作動性表現型に分化する能力を含む細胞群を実際に前記ドーパミン作動性表現型に分化させるのに有効な量で、GDF5-HRを前記ヒトの前記線条体または前記黒質緻密部に投与する段階、
を含む、方法。
(2) 実施態様1に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、単回量で投与される、
方法。
(3) 実施態様1に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、徐放量で投与される、
方法。
(4) 実施態様1に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、生理的に受容可能なキャリアを含む神経栄養組成物として投与される、
方法。
(5) 実施態様4に記載の方法において、
前記キャリアが、臨床級滅菌水、滅菌食塩水、滅菌リン酸緩衝食塩水、滅菌水中デキストロース、滅菌液体培地、および生理的に受容可能な等張液から成る群から選択される、
方法。
前記GDF5-HRが、マトリックス中で投与される、
方法。
(7) 実施態様6に記載の方法において、
前記マトリックスが、粒子、足場、立方体、円柱、管、ブロック、フィルム、ハイドロゲル、またはシートから成る群から選択される形態である、
方法。
(8) 実施態様1に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、マイクロカテーテル、カテーテル内挿入、クモ膜下送達を経る注射(injection)、あるいは、ミニポンプから脳室内への、または、クモ膜下内への、または、鼻内への注射によって頭蓋内に投与される、
方法。
(9) 実施態様1に記載の方法において、
前記細胞群が、幹細胞、または、成熟神経前駆細胞である前駆細胞、海馬前駆細胞、海馬幹細胞、間葉幹細胞、造血幹細胞、胚幹細胞、胚幹細胞由来前駆細胞、分娩後由来細胞、臍帯幹細胞、臍帯前駆細胞、胎盤幹細胞、胎盤前駆細胞、筋肉幹細胞、肝臓幹細胞、膵臓幹細胞、辺縁幹細胞、網膜幹細胞、筋肉前駆細胞、膵臓前駆細胞、辺縁前駆細胞、網膜前駆細胞、および肝臓前駆細胞から成る群から選択される細胞を含む、
方法。
(10) 実施態様1に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、MP52、BMP-14、およびCDMP-1から成る群から選択される、
方法。
前記GDF5-HRが、MP52を含む、
方法。
(12) 実施態様4に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、MP52を含む、
方法。
(13) 実施態様12に記載の方法において、
前記神経栄養組成物が、約0.5〜約1,000ナノグラムの前記MP52を含む、
方法。
(14) 実施態様12に記載の方法において、
前記神経栄養組成物が、ソニックヘッジホッグ、およびFGF8をさらに含む、
方法。
(15) ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から起こる神経学的欠損の治療に適した神経栄養組成物において、
ドーパミン作動性表現型に分化する能力を含む細胞群を実際に前記ドーパミン作動性表現型に分化させるのに有効な量のGDF5-HRと、
ソニックヘッジホッグと、
FGF8と、
生理的に受容可能なキャリアと、
を含む、神経栄養組成物。
前記GDF5-HRが、MP52、BMP-14、およびCDMP-1から成る群から選択される、
神経栄養組成物。
(17) 実施態様15に記載の方法において、
前記GDF5-HRが、MP52を含む、
方法。
(18) 実施態様17に記載の方法において、
前記神経栄養組成物が、約0.5〜約1,000ナノグラムの前記MP52を含む、
方法。
(19) 実施態様17に記載の組成物において、
ソニックヘッジホッグ、およびFGF8、
をさらに含む、組成物。
(20) 実施態様15に記載の組成物において、
ソニックヘッジホッグ、およびFGF8、
をさらに含む、組成物。
Claims (7)
- ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から起こる神経学的欠損を治療する方法において、
ドーパミン作動性表現型に分化する能力を含む細胞群を実際に前記ドーパミン作動性表現型に分化させるのに有効な量で、GDF5-HRを前記ヒトの前記線条体または前記黒質緻密部に投与する段階、
を含む、方法。 - ヒトの線条体または黒質緻密部への損傷または疾患から起こる神経学的欠損の治療に適した神経栄養組成物において、
ドーパミン作動性表現型に分化する能力を含む細胞群を実際に前記ドーパミン作動性表現型に分化させるのに有効な量のGDF5-HRと、
ソニックヘッジホッグと、
FGF8と、
生理的に受容可能なキャリアと、
を含む、神経栄養組成物。 - 請求項2に記載の神経栄養組成物において、
前記GDF5-HRが、MP52、BMP-14、およびCDMP-1から成る群から選択される、
組成物。 - 請求項2に記載の組成物において、
前記GDF5-HRが、MP52を含む、
組成物。 - 請求項4に記載の組成物において、
前記神経栄養組成物が、約0.5〜約1,000ナノグラムの前記MP52を含む、
組成物。 - 請求項4に記載の組成物において、
ソニックヘッジホッグ、およびFGF8、
をさらに含む、組成物。 - 請求項2に記載の組成物において、
ソニックヘッジホッグ、およびFGF8、
をさらに含む、組成物。
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