JP2008509160A - エリスロポエチン受容体作動薬の安定な懸濁製剤 - Google Patents

Abstract

治療用途用懸濁製剤に、粘性のある流体特徴を示す非水性の単相ビヒクルおよび前記ビヒクルの中に分散しているエリスロポエチン受容体作動薬を含んで成る粒子製剤を含有させる。

Description

本発明は、一般に、連続送達に適するように調製した薬製剤に関する。

エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、主に腎臓で産出される多面的糖蛋白ホルモンである。ＥＰＯは骨髄による赤血球生成を促進しかつ骨髄の外側では組織保護効果、例えば神経防護作用などを及ぼす。ＥＰＯはこれの細胞表面受容体と結合することで生物学的効果を及ぼす。ＥＰＯ受容体作動薬（ＥＲＡ）はＥＰＯ受容体を活性化し得る種類の組換え型分子である。ＥＲＡの種類の組換え型分子は生来のヒトＥＰＯ（ｈＥＰＯ）に相同性を示す配列を含有しているか或は含有していなくてもよい。生来のｈＥＰＯに相同性を示す配列を含有するＥＲＡクラスに入る製品の例を以下の表１に示す。

ＥＲＡ製品は、慢性腎不全による貧血、癌の化学療法および手術に伴う貧血およびエイズのＡＺＴ治療に続発性の貧血の治療で処方されている。現在市場に出ているＥＲＡ製品は週に３回（ＥＰＲＥＸ^（Ｒ）， ＥＲＹＰＯ^（Ｒ）およびＰＲＯＣＲＩＴ^（Ｒ））または週に１回（ＡＲＡＮＥＳＰ^（Ｒ））の皮下または筋肉内注射で患者に投与される。現在市場に出ている数種のＥＲＡ製品は液状であり、２から８℃で貯蔵する必要がありかつ室温および高温で不安定である。ＥＲＡは凝集を起こし易いことから、薬剤の効力が低下する可能性がありかつ望まれない副作用を誘発する可能性もある。現在のＥＲＡ投与に伴う副作用には、これらに限定するものでないが、血栓事象、感染、高血圧、筋肉痛および頭痛が含まれる。

ＥＲＡを低い投薬量で連続的に送達、例えば移植可能送達デバイス、例えば浸透圧、機械的または電気機械的ポンプインプラント（ｐｕｍｐ ｉｍｐｌａｎｔｓ）などを用いて連続的に送達することができるようになれば、ＥＲＡ投与に伴う治療効果が向上する可能性がある。移植可能送達デバイスを用いると一般に患者の応諾が確保される、と言うのは、患者による移植可能デバイスの改ざんは容易ではなくかつ薬剤を患者に投入することなく数週間、数カ月または数年間にさえ及んで治療投薬を行うことができるようにそれをデザインすることができるからである。注射を数日毎に行うのではなく、そのようなデバイスを１回挿入すると、比較的短い時間的間隔で多数回投与する必要がある注射に比べて、部位の刺激が軽減され、患者および医者の労働災害が少なくなり、廃棄物処分災害が減少し、注射を繰り返し行う時に要する装置費用が低下することで費用効果が向上しかつ効力が向上する。

移植可能送達デバイスを用いてＥＲＡを長期間に渡って制御された速度で送達するには
、ＥＲＡの安定性を高温、例えば３７℃以上で当該デバイスの有効寿命に渡って維持する製剤の中にそれを含有させる必要がありかつそのような製剤は流動し得る形態でなければならない。

発明の要約
本発明は、１つの態様において、粘性のある流体特徴を示す非水性の単相ビヒクルおよび前記ビヒクルの中に分散しているエリスロポエチン受容体作動薬を含んで成る粒子製剤を含んで成る懸濁製剤に関する。

本発明は、別の態様において、ある被験体における赤血球生成を促進する方法に関し、この方法は、前記被験体にこの上に記述した如き懸濁製剤を有効量で投与することを含んで成る。

本発明は、更に別の態様において、移植可能送達デバイスに関し、これは、この上に記述した如き懸濁製剤がエリスロポエチン受容体作動薬が使用環境中で治療的に有効な速度で連続的に送達されるに充分な量で入っている貯蔵部を含んで成る。

以下の説明から本発明の他の特徴および利点が明らかになるであろう。

発明の詳細な説明
ここに、好適な態様をいくつか言及することで本発明を詳細に説明する。以下に行う説明では、本発明を完全に理解することができるように数多くの具体的詳細を挙げる。しかしながら、本発明はそのような具体的な詳細のいくつかまたは全部を用いなくても実施することができることは本分野の技術者に明らかであろう。他の例として、良く知られている特徴および／または工程段階の詳細な説明は行わないが、これは本発明を不必要に曖昧にするものではない。添付図および以下の考察の言及によって本発明の特徴および利点がより良好に理解されるであろう。

本発明の態様では、エリスロポエチン受容体作動薬（ＥＲＡ）を持続時間に渡って制御された速度で送達することを可能、例えば移植可能送達デバイスなどを用いて可能にする安定な製剤を提供するものである。本発明は、ある程度ではあるが、ＥＲＡ粒子製剤を非水性の単相ビヒクルの中に懸濁させておくと高温、例えば３７℃以上で長期間、例えば３カ月から１２カ月に及んで安定なＥＲＡ懸濁製剤がもたらされることを見いだしたことが基になっている。前記ＥＲＡ粒子製剤を前記ビヒクルに入れて懸濁させる前にそれが示す水分含有量は一般に低く、好適には５％未満である。そのようなＥＲＡ粒子製剤の製造は、蛋白質粒子を生じさせるに適することが本技術分野で公知の技術、例えば噴霧乾燥および凍結乾燥などを用いて実施可能である。そのようなＥＲＡ粒子製剤は全体が高純度のＥＲＡであってもよいか或は高純度のＥＲＡが１種以上のアジュバントまたは賦形剤と一緒に配合された粒子製剤であってもよい。

用語「ＥＲＡ」または「エリスロポエチン受容体作動薬」は、ＥＰＯ受容体を活性化させ得る種類の分子を指す。そのような分子は生来のｈＥＰＯに相同性を示す配列を含有しているか或は含有していなくてもよい。本発明の１つの態様に従うＥＲＡは、組換え型ｈＥＰＯの生物学的活性を有するポリペプチドおよび蛋白質、ＥＰＯ類似物、ＥＰＯアイソフォーム、ＥＰＯ疑似物、ＥＰＯフラグメント、ハイブリッドＥＰＯ蛋白質、融合蛋白質オリゴマーおよび前記の多量体、前記の同族体、前記のグリコシル化パターン変形、前記の変異体およびこの上に挙げた主要でない修飾形を含有するＥＰＯ分子から成る群から選択可能である。本発明に従うＥＲＡは合成方法によっても製造方法によっても限定されず、組換え（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡから生じさせるか否かに拘わらず）、合成、遺伝子組換えおよび遺伝子活性化方法で合成または製造されたそれらが含まれる。

特に好適なＥＲＡは、哺乳動物における赤血球生成を促進し得るＥＲＡである。哺乳動物における赤血球生成を促進し得るＥＲＡの例には、これらに限定するものでないが、エポエチンアルファ（商標名ＥＰＲＥＸ^（Ｒ），ＥＲＹＰＯ^（Ｒ），ＰＲＯＣＲＩＴ^（Ｒ）），エポエチンベータ（商標名ＮＥＯＲＥＣＯＲＭＯＮ^（Ｒ））およびダーベポエチンアルファ（商標名ＮＥＳＰ^ＴＭ， ＡＲＡＮＥＳＰ^（Ｒ））が含まれる。ダーベポエチンアルファの１つの形態がＰＣＴ公開ＷＯ ９５／０５４６５（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）に記述されており、これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れられる。そのＷＯ ９５／０５４６５ 公開に示されているダーベポエチンアルファには、グリコシル化用追加的部位を少なくとも１個含有するか或はそれ用の部位が少なくとも１個転位しているアミノ酸配列を含んで成るｈＥＰＯ類似物が含まれる。そのグリコシル化部位は炭化水素鎖がＮ結合もしくはＯ結合するための部位である。

哺乳動物における赤血球生成を促進し得るとして示された他のＥＲＡには、ｈＥＰＯ類似物、例えばＰＣＴ公開ＷＯ ９９／６６０５４ （Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ Ｃｏｒｐ）（これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）に記述されているヒト血清アルブミン融合蛋白質など、およびＥＰＯ変異体、例えばＰＣＴ公開ＷＯ ９９／３８８９０ （Ｂｅｔｈ Ｉｓｒａｅｌ Ｄｅａｃｏｎｅｓｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）（これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）に記述されているＥＰＯ変異体などが含まれる。そのＷＯ ９９／３８８９０公開に示されているＥＰＯ変異体には、ＥＰＯをコードする単離された核酸が含まれ、その場合の核酸は、非コード領域の中に変異を１個以上有しかつＥＰＯの生物学的活性が変化している。１つの態様における変異は５１非コード領域の中に存在する。

哺乳動物における赤血球生成を促進し得るとして示された他のＥＲＡには、ＥＰＯオメガ［これは米国特許第５，６８８，６７９号（Ｐｏｗｅｌｌ） （これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）に記述されているｈＥＰＯ遺伝子のＡｐａ Ｉ制限フラグメントから生じ得る］、および変化したグリコシル化ｈＥＰＯ、例えばＰＣＴ公開ＷＯ ９９／１１７８１ （Ｈｏｅｃｈｓｔ Ｍａｒｉｏｎ Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧＭＢＨ）（これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）に記述されているそれらが含まれる。そのＷＯ ９９／１１７８１公開に示されている変化したグリコシル化ｈＥＰＯには、ＥＰＯの主構造形態の一部または全部を有するポリペプチドが含まれ、それは外因性ＤＮＡ配列の真核生物発現の産物である。

哺乳動物における赤血球生成を促進し得るとして示された別のＥＲＡには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）接合エリスロポエチン類似物が含まれ、それは例えばＰＣＴ公開ＷＯ ９８／０５３６３ （Ｏｒｔｈｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ） （これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）およびＷＯ ０１／７６６４０ （Ａｍｇｅｎ， Ｉｎｃ．） （これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）および米国特許第５，６４３，５７５号（Ｍａｒｔｉｎｅｚ他） （これの内容は引用することによって本明細書に組み入れら）などに記述されている。

他の例には、ＰＣＴ公開ＷＯ ９９／０５２６８ （Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ ＧＭＢＨ） （これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）およびＷＯ ９４／１２６５０ （Ｔｒａｎｓｋａｒｙｏｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ， Ｉｎｃ．）（これの個別の内容は引用することによって本明細書に組み入れら）に記述されている如き内因性ヒトＥＰＯの発現が修飾を受けた細胞株が含まれる。また、ＥＲＡの組織および細胞保護形態も考えられる。

本発明に従うＥＲＡには、また、長期に作用するＥＰＯ形態も含まれ得る。本明細書で用いる如き「長期に作用するＥＰＯ」には、循環半減期が長い持続放出型ＥＰＯ組成物および製剤が含まれ、これらは典型的に免疫原性およびクリアランス値の低下などの如き修飾、およびＥＰＯを重合体微小球の中に封じ込めることなどで達成される。

長期に作用するＥＰＯの一例がＰＣＴ公開ＷＯ ０２／４９６７３ （Ｆ． Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ ＡＧ） （これの内容は引用することによって本明細書に組み入れら）に開示されている。そのＷＯ ０２／４９６７３公開には、Ｎ末端にアルファ−アミノ基を有するエリスロポエチン糖蛋白を含んで成る接合体が記述されており、それはｈＥＰＯまたはｈＥＰＯの配列を有する類似物から選択されるが、そのような類似物では、糖蛋白がＰＥＧ基と共有結合するようにグリコシル化部位が１−６個付加しているか或はグリコシル化部位が転位していることによる修飾を受けている。

長期に作用するＥＰＯの他の例には、これらに限定するものでないが、ＰＣＴ公開ＷＯ
０２／３２９５７ （中外製薬株式会社）に開示されているＰＥＧ修飾ＥＰＯ、ＰＣＴ公開ＷＯ ９４／２８０２４ （Ｅｎｚｏｎ， Ｉｎｃ．）に開示されている非抗原性重合体と共有結合している酸化された炭水化物部分を少なくとも１個有していてエリスロポエチン活性を示す糖蛋白質接合体、およびスクシニミジルカルボキシメチル化ＰＥＧ（ＳＣＭ−ＰＥＧ）、スクシニミジルプロピオネートＰＥＧ（ＳＰＡ−ＰＥＧ）およびＳＢＡ−ＰＥＧを用いて作られた他のＰＥＧ−ＥＰＯが含まれる。

本発明の１つの態様では、ＥＲＡが高温、例えば３７℃以上で凝集を起こさないように、それに安定化を非水性の単相ビヒクルの中に懸濁させる前に受けさせておく。１つの態様では、ＥＲＡが凝集を起こさないように、それに安定剤および緩衝剤を用いた安定化を受けさせる。１つの態様における安定剤には糖が含まれる。そのような糖をＥＲＡ粒子製剤中に０．１から９９．９重量％の範囲の量で存在させてもよい。そのような粒子製剤に含有させることができる糖の例には、これらに限定するものでないが、スクロース、トレハロース、グルコース、ラクトース、マルトースおよびフルクトースが含まれる。１つの態様では、前記粒子製剤で用いる緩衝剤を０．１から９９．８重量％の範囲の量で存在させる。そのような緩衝剤が有するｐＨ値は、好適には５．０から８．０、より好適には５．５から７．５の範囲である。１つの態様では、溶液中の緩衝剤の濃度を５ｍＭから５０ｍＭの範囲内にする。緩衝剤の例には、これらに限定するものでないが、クエン酸塩、ヒスチジン、燐酸塩、こはく酸塩、マレイン酸塩、トリス、酢酸塩、炭酸塩およびグリ−グリ（ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれる。これらの例の中でクエン酸塩およびヒスチジン緩衝剤が最も好適である。ＥＲＡに対する安定剤の比率は多様であり得る。クエン酸塩緩衝剤を用いる場合、ＥＲＡに対する安定剤の比率を好適には２．０より高くする。

本発明の他の態様では、ＥＲＡ粒子製剤で用いる安定剤に、更に、アミノ酸、ポリオールおよび重合体から成る群から選択した１種以上の成分を含めることも可能である。前記粒子製剤にアミノ酸を０から９９．９重量％、ポリオールを０から９９．９重量％および重合体を０から９９．９重量％含有させてもよい。前記粒子製剤に入れることができるアミノ酸の例には、これらに限定するものでないが、ヒスチジン、グリシン、アラニン、Ｌ−ロイシン、グルタミン酸、イソロイシン、メチオニン、Ｌ−トレオニン、２−フェニルアミンおよびアルギニンが含まれる。前記粒子製剤に入れることができるポリオールの例には、これらに限定するものでないが、ソルビトールおよびマンニトールが含まれる。前記粒子製剤に入れることができる重合体の例には、これらに限定するものでないが、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、デキストランおよびプロピレングリコールが含まれる。

前記粒子製剤に他の賦形剤、例えば界面活性剤、充填剤および塩などから選択した他の
賦形剤を含有させることも可能である。前記粒子製剤に界面活性剤を０から１０重量％、好適には０から５重量％、充填剤を０から９９．９重量％、好適には０から７０重量％、および塩を０から９９．９重量％、好適には０から７０重量％含有させてもよい。前記粒子製剤に含有させる界面活性剤はイオン性または非イオン性であってもよい。界面活性剤の例には、これらに限定するものでないが、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（商標名 ＴＷＥＥＮ^（Ｒ） ２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（商標名 ＴＷＥＥＮ^（Ｒ） ８０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレングリコール（商標名 ＰＬＵＲＯＮＩＣ^（Ｒ） Ｆ６８）およびドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が含まれる。充填剤の例には、これらに限定するものでないが、マンニトールおよびグリシンが含まれる。塩の例には、これらに限定するものでないが、塩化ナトリウム、塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムが含まれる。

以下の表２に、凝集に対抗する安定化を受けさせた凍結乾燥エポエチンアルファ（ＥＰＯ）組成物の例に加えて前記組成物を３７℃で３カ月間貯蔵した時の可溶凝集物総量をサイズエクスクルーシブクロマトグラフィー（Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）（ＳＥＣ）で測定した時の値も示す。

本発明で用いるに適した非水性の単相ビヒクルは、溶媒、重合体（液状および非液状）、非重合体（液状および非液状）および界面活性剤の如何なる組み合わせであってもよい。そのようなビヒクルの成分の選択では、そのビヒクルが水と混和し得るように選択するが、そのビヒクルのあらゆる成分が水と容易に混和する必要はない。結果としてもたらされるビヒクルが物理的および化学的の両方で全体に渡って均一である均質な系であるようにビヒクルの成分を選択して組み合わせる。そのようなビヒクルは、生物学的環境に反応して経時的に崩壊または分解する点で生分解性である。そのようなビヒクルが生物学的環境中で起こす分解は、１つ以上の物理的もしくは化学的過程、例えば酵素の作用、酸化、還元、加水分解（例えば蛋白分解）、置換、または可溶化、乳化もしくはミセル形成による溶解などで起こり得る。

本発明のビヒクルに含める成分の選択では、そのビヒクルが示す粘度が約１，０００か
ら１０，０００，０００ポイズ、好適には１０，０００から２５０，０００ポイズの範囲などであるように選択する。ＥＲＡが高温、例えば３７℃以上の温度で長期間に渡って示す安定性を維持する目的で、そのビヒクルがＥＲＡと反応しないようにビヒクル成分を選択する。そのビヒクルの成分に重合体および溶媒を含める場合、例えば薬剤投与中に送達デバイスの部分的または完全な遮断が起こる度合を軽減するなどの目的で、好適には、そのビヒクルを水と混合した時に前記ビヒクルに入っている重合体と溶媒が相分離を全く起こさないか或は起こすとしても僅かであるようにする。その選択したＥＲＡが乾燥した粒子のままであることで前記選択したＥＲＡの安定性が達成されるようにする目的で、そのビヒクルが選択したＥＲＡをほとんどまたは全く溶かさないようにビヒクル成分を選択する。

１つの態様では、そのようなビヒクルに少なくとも１種の重合体を含める。そのような重合体は好適には生体適合性でありかつ生分解性であるか或は生分解性でなくてもよい。そのようなビヒクルを生じさせようとする時に用いるに有用な重合体の例には、これらに限定するものでないが、ピロリドン、例えばポリビニルピロリドン（分子量が２，０００から１，０００，０００）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ乳酸ポリグリコール酸（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリオキシエチレン−ポリオキシ−プロピレンブロック共重合体（３７℃で高い粘度を示す）、例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ（商標）１０５など、および不飽和アルコールのエステルまたはエーテル、例えば酢酸ビニルなどが含まれる。そのようなビヒクルには、また、前記重合体と一緒になって生体適合性で水と混和し得る非水性の単相ビヒクルをもたらし得る薬学的に受け入れられる溶媒のいずれも含まれ得る。そのようなビヒクルを生じさせようとする時に用いるに有用な溶媒の例には、これらに限定するものでないが、安息香酸ベンジル（ＢＢ）、ベンジルアルコール（ＢＡ）、乳酸ラウリル（ＬＬ）、ラウリルアルコール（ＬＡ）、ポリエチレングリコール、グリコフラール（ＧＦ）、ビタミンＥが含まれる。

そのようなビヒクルに異なる２種以上の重合体または単一重合体のいろいろなグレードを含めてもよい。そのようなビヒクルに前記重合体１種または２種以上と組み合わせた２種以上の溶媒を含めることも可能である。特に、水と混和しかつ安定なＥＲＡ製剤の生成を助長するビヒクルを生じさせようとする時には２種以上の溶媒を用いる必要があり得る。そのようなビヒクルに含める重合体１種または２種以上および溶媒１種または２種以上の量を変えることで所望の性能特徴を有するビヒクルを生じさせることができる。一般的には、そのようなビヒクルに重合体１種または２種以上を約４０から８０重量％含有させかつ溶媒１種または２種以上を約２０から６０重量％含有させることになるであろう。

そのビヒクルに、重合体および溶媒以外に、また、他の賦形剤、例えば１種以上の界面活性剤または防腐剤などを含有させることも可能である。そのようなビヒクルで用いることができる界面活性剤には、これらに限定するものでないが、ポリソルベート、例えば商標名ＴＷＥＥＮ（商標）の下で入手可能なポリソルベートなど、エチレンオキサイド−プロピレンオキサイド共重合体、例えば商標名ＰＬＵＲＯＮＩＣ（商標）の下で入手可能な共重合体など、ソルビタンの脂肪酸エステル、例えば商標名ＳＰＡＮ（商標）の下で入手可能なエステルなど、カプリル酸グリセリル、ラウリン酸グリセリル、ＰＥＧ−８カプリル酸カプリン酸グリセリド、オレイン酸ポリグリセリル−６、ジオクチリルナトリウム、スルホスクシネートおよびビタミンＥ ＴＰＧＳが含まれる。当該製剤が使用環境に送達された後にＥＲＡがビヒクルから放出されるのを助長するか或はＥＲＡをビヒクルの中に懸濁させた時にＥＲＡが示す安定性の維持に役立たせる目的で界面活性剤１種または２種以上をビヒクルに含めてもよい。界面活性剤１種または２種以上を含める場合、それがビヒクルを占める度合を典型的には２０重量％未満、好適には１０重量％未満、より好適には５重量％未満にする。そのようなビヒクルで用いることができる防腐剤には、例えば、
抗酸化剤および抗菌剤が含まれる。潜在的に有用な抗酸化剤の例には、これらに限定するものでないが、トコフェロール（ビタミンＥ）、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンおよび没食子酸プロピルが含まれる。１種以上の防腐剤をビヒクルに混合する場合、それの使用量は用途、使用する防腐剤および望まれる結果に応じて変わるであろう。含有させる防腐剤の量は一般に所望の防腐効果を達成するに充分な量のみである。

しかしながら、そのようなビヒクルは重合体１種または２種以上および溶媒１種または２種以上を含有するビヒクルに限定されない。さらなる例として、そのようなビヒクルは非重合体を含有するビヒクルであってもよい。非重合体材料の例には、単相ビヒクルとして機能する疎水性糖材料、オルガノゲルまたは脂質材料が含まれる。典型的な糖材料には、これらに限定するものでないが、周囲または生理学的温度下で流体として存在するスクロースエステル、例えば酢酸イソ酪酸スクロース（ＳＡＩＢ）などが含まれる。ＳＡＩＢは液状の非重合体である。ＳＡＩＢの如きある種の非重合体材料は「混ぜ物無し」、即ち他の溶媒の添加無しに使用可能である。非重合体材料を含有させたビヒクルにまた１種以上の溶媒を含有させることも可能である。非重合体材料を含有させたビヒクルにまた１種以上の界面活性剤を含有させることも可能であり、それのいくつかの例をこの上に挙げた。非重合体材料を含有させたビヒクルにまた防腐剤を含有させることも可能であり、それのいくつかの例もまたこの上に挙げた。

そのような非水性の単相ビヒクルにＥＲＡ粒子製剤をいろいろな量で充填することでＥＲＡが所望の速度で選択した期間に渡って投与されることを可能にする懸濁製剤を生じさせることができる。本懸濁製剤のＥＲＡ含有量を０．１から４０重量％、好適には０．１から２０重量％にしてもよい。本懸濁製剤の調製では、移植可能送達デバイスからそれが所望の流量で分与されるように調製を実施してもよい。ＥＲＡが１日当たり１ｎｇから１日当たり６００μｇの範囲の量で数カ月から１年に渡って送達されるように本懸濁調製を調製してもよい。ＥＲＡが低い流量で供給されるようにデザインした浸透圧性ポンプインプラントを用いて送達する場合、好適には、それが１日当たり０．５から５μＬの範囲で送達されるように本懸濁製剤を調製するが、約１．５μＬ／日および１．０μＬ／日の流量が特に好適である。本懸濁製剤をポンプインプラントなどの如き移植可能送達デバイスに限定するものでなく、それをまた蓄積注射として用いることも可能であることを注目すべきである。

本発明は、また、本発明の態様に従うＥＲＡ懸濁製剤を充填しておいた移植可能送達デバイスも包含する。そのような移植可能送達デバイスの具体化では、被験体の中に移植した後に流動性製剤を制御された速度で持続期間に渡って送達し得る如何なる送達システムデバイスも使用可能である。本発明に従う移植可能送達デバイスには、例えば浸透圧性ポンプインプラント、例えば商標名ＤＵＲＯＳ（商標）の下で入手可能なポンプインプラントなど、または調節装置型ポンプインプラント、例えばＣｏｄｍａｎ ｏｆ Ｒａｙｎｈａｍ（マサチューセッツ）、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ ｏｆ Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ（ミネソタ）およびＴｒｉｃｕｍｅｄ Ｍｅｄｉｎｚｉｎｔｅｃｈｎｉｋ ＧｍｂＨ（ドイツ）などから入手可能なポンプインプラント、または他の非浸透圧性ポンプインプラントが含まれ得る。

ＥＰＯ（エポエチンアルファ）の粒子製剤が非水性の単相ビヒクル中で示す安定性を評価する検定を実施した。サイズエクスクルーシブクロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて粒子製剤の安定性を評価した。その安定性をＥＰＯ充填率および可溶凝集物総量に換算して評価した。ＥＰＯ充填率は粒子製剤に入っている可溶ＥＰＯ全体（単量体、二量体および他の高分子量生成物を包含）のパーセントである。ＥＰＯ充填率は、不溶なＥＰＯが貯蔵または送達中に有意な量で生じたか否かに関する情報をいくらか与えるものである。可
溶凝集物総量は、単量体より大きくかつ水に溶解するＥＰＯ関連化合物のパーセントである。

以下の実施例は説明の目的で示すものであり、本明細書に特に記述しない限り、本発明を限定することを意図するものではない。

ＥＰＯ粒子製剤の調製を下記の如く実施した：ＥＰＯのバルク溶液を濃度が約３．１ｍｇ／ｍｌの凍結溶液として得た。そのＥＰＯ溶液に１０ｍＭのヒスチジン緩衝溶液を用いた透析を受けさせた。その透析を受けさせたＥＰＯ溶液にスクロース（安定剤）およびＴＷＥＥＮ（商標）２０（界面活性剤）をＥＰＯとスクロースと界面活性剤の比率が所望の比率になるように添加した。その緩衝剤を添加した溶液に噴霧乾燥を受けさせることでＥＰＯ：スクロース：Ｔｗｅｅｎ ２０：１０ｍＭのヒスチジンの比率が１：４．５３：０．０３：０．５０に相当し、ｐＨが６．９でありそしてＥＰＯ充填率が１６．５％の固体状粒子を得た。

前記ＥＰＯ粒子製剤を高温で貯蔵した時にそれが示す安定性を評価した。実施例１で調製したままのＥＰＯ粒子製剤の３サンプルを４０℃で３カ月間貯蔵した。これらのサンプルにＳＥＣを用いた分析を初期、１カ月、２カ月および３カ月目に受けさせた。初期時点のＥＰＯ粒子製剤が示した平均粒径は約４．５μｍであり、ガラス転移温度は５４．９±５．６℃でありかつ水分含有量は１．１６±０．０１％であった。以下の表３に安定性の結果を示す。この結果から前記ＥＰＯ粒子はこれを４０℃で３カ月間貯蔵した時に凝集に対抗する安定化を受けていることが分かる。

懸濁製剤の調製を下記の如く実施した：実施例１に記述した如く調製したＥＰＯ粒子製剤をＣｅｒａｐｈｙｌ（商標）３１／ＰＶＰビヒクルに目標粒子充填率が約１０％（重量
／重量）になるように入れて懸濁させた。

実施例３で調製した懸濁液の３サンプルをガラス製容器に入れて４０℃で３カ月間貯蔵した。これらのサンプルにＳＥＣを用いた分析を初期、１カ月、２カ月および３カ月目に受けさせた。以下の表４に安定性の結果を示す。３カ月目の懸濁液で観察した可溶凝集物総量は約１．５７％であるのに対比して、３カ月目のＥＰＯ粉末で観察したそれは０．１％であった。４０℃で３カ月間貯蔵した時の結果は、Ｃｅｒａｐｈｙｌ（商標）３１／ＰＶＰビヒクルに入れて懸濁させたＥＰＯが安定であることを示している。

ＥＰＯ粒子製剤を非水性の単相ビヒクルに入れて懸濁させそして移植可能送達デバイス、例えば浸透圧性ポンプインプラントなどを用いてそれを放出させた時の放出速度を評価する検定を実施した。図１に、この検定で用いる浸透圧性ポンプインプラント１００の図式図を示す。浸透圧性ポンプインプラント１００には、開放末端部１０４、１０６を有するチタン製円筒１０２が含まれている。拡散調節装置１０８を前記円筒１０２の末端部１０６に取り付ける。その拡散調節装置１０８に、前記円筒１０２の内側から外側に向かう流体の送達を可能にする送達用導管１１０を持たせる。その拡散調節装置１０８による送達用導管１１０は真っすぐである。しかしながら、真っすぐ以外の形態を持たせた拡散調節装置も考えられ、それらも本発明に包含させる。本検定では、直径が０．２５ｍｍおよび０．５ｍｍで長さが１．５ｍｍの真っすぐな送達用導管が備わっている拡散調節装置を用いた。半透膜１１４を円筒１０２の末端部１０４に挿入することで、円筒１０２の外側と内側の間に流体透過性バリヤーを生じさせる。ピストン１１６および浸透圧剤１２２を円筒１０２の中に配置する。薬剤貯蔵部１２０を円筒１０２の中に限定する。

以下の実施例は説明の目的で示すものであり、本明細書に特に記述しない限り、本発明を限定することを意図するものでない。

浸透圧性ポンプインプラント１００の薬剤貯蔵部１２０の中に実施例３で調製した懸濁液［１２４（図１）で示す如き］を約１５０μＬ（約１５０ｍｇ）充填した。目標投薬量は３０００ＩＵ／日（２４μｇ／日）であった。

実施例５に記述した如き浸透圧性ポンプを数個調製した。その浸透圧性ポンプの各々の膜末端部を、燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）を３ｍＬ充填して栓をしておいたＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（商標）の中に入れた後、前記浸透圧性ポンプの拡散調節装置末端部を乾燥しているＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（商標）の中に入れた。このシステムをキャップ付き試験管の中に前記拡散調節装置側が下に来るように入れた後、それの一部を３７℃の水浴の中に浸漬した。７日後、前記システムの中の数個を前記水浴から取り出した後、前記システムの拡散調節装置末端部の所の乾燥したＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）を、放出速度用ビヒクル（クエン酸塩が２０ｍＭでスクロースが５０ｍｇ／ｍＬでｐＨが６．９）を２．５ｍＬ充填しておいたＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）に置き換え、そしてそのシステムを水浴の中に戻した。このようにして、前記システムの中の数個は放出速度用ビヒクルの中にポンプ輸送（放出速度用ビヒクルの中にポンプ輸送）する一方で他は空の容器の中にポンプ輸送（空気の中にポンプ輸送）するようにした。

特定時間点で、前記システムが放出速度用ビヒクルの中にポンプ輸送するように、拡散調節装置末端部の所のＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）を、この上で説明したように、放出速度用ビヒクルを２．５ｍＬ充填しておいた新しいＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）に置き換えた。前記拡散調節装置末端部から取り出したＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）から集めたサンプルを高性能液クロ（ＨＰＬＣ）で分析した。特定時間点で、前記システムが空気の中にポンプ輸送するように、前記システムを前記水浴から取り出し、前記拡散調節装置末端部の所のＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）を新しい乾燥しているＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）に置き換えた後、そのシステムを水浴の中に戻した。前記拡散調節装置末端部から取り出したＶａｃｕｔａｉｎｅｒｓ（商標）から集めたサンプルの重量を測定した後、それをＨＰＬＣで分析した。分析に充分な量の材料を集める目的で、放出された製剤を３または４日間に渡って集めた。

３７℃で３カ月に渡る１日当たりの放出速度を図２Ａおよび２Ｂにプロットする。図２Ａに、前記システムが放出速度用ビヒクルの中にポンプ輸送した時の放出速度を示す。図２Ｂに、前記システムが空気の中にポンプ輸送した時の放出速度を示す。この結果は、前記システムがＥＰＯを３７℃で３カ月に渡ってほぼ目標速度（２３．５μｇ）で一定に送達することを示している（ゼロ次送達）。その放出されたサンプルが２．５カ月の時点で示す生物活性を細胞増殖方法で評価した。その結果を図３に示す。その結果から３７℃で２．５カ月間に渡って放出されたＥＰＯが示す生物活性はバルク溶液のそれに比べてあまり低下していないことが分かる。３７℃で２．５カ月間に渡って放出されたＥＰＯが含有する単量体の量は９９％を超えていた。

本発明を限られた数の態様に関して記述してきたが、本開示の利点を習得した本分野の技術者は、本明細書に開示した如き本発明の範囲から逸脱することのない他の態様を考案することができることを理解するであろう。以下に本発明の典型的な態様を要約する。

図１は、本発明の１つの態様に従うＥＲＡ製剤が入っている浸透圧性ポンプを示す図式図である。 図２Ａに、本発明の１つの態様に従うＥＲＡ製剤が入っている浸透圧性ポンプが放出速度用ビヒクルの中にポンプ輸送している時の放出速度を示す。 図２Ｂに、本発明の１つの態様に従うＥＲＡ製剤が入っている浸透圧性ポンプが空気の中にポンプ輸送している時の放出速度を示す。 図３に、本発明の１つの態様に従って放出された製剤が示した生物活性を示す。

Claims (20)

1. 粘性のある流体特徴を示す非水性の単相ビヒクル、および
   前記ビヒクルの中に分散しているエリスロポエチン受容体作動薬を含んで成る粒子製剤、を含んで成る治療用途用懸濁製剤。
2. ４０℃で少なくとも３カ月に渡って安定である請求項１記載の懸濁製剤。
3. ４０℃で１２カ月に及んで安定である請求項１記載の懸濁製剤。
4. 粒子製剤をビヒクルの中に分散させる前にそれが示す水分含有量が５重量％未満である請求項１記載の懸濁製剤。
5. 粒子製剤が更に糖、アミノ酸、ポリオール、重合体およびこれらの組み合わせから成る群から選択される安定剤および緩衝剤も含んで成る請求項１記載の懸濁製剤。
6. 緩衝剤がヒスチジンおよびクエン酸塩緩衝剤から成る群から選択される請求項５記載の懸濁製剤。
7. 糖がスクロースである請求項５記載の懸濁製剤。
8. 緩衝剤がクエン酸塩緩衝剤でありそしてエリスロポエチン受容体作動薬に対する前記安定剤の比率が２．０よりも大きい請求項５記載の懸濁製剤。
9. 粒子製剤が更に界面活性剤、充填剤および塩の中の少なくとも１種も含んで成る請求項５記載の懸濁製剤。
10. ビヒクルが溶媒、重合体、非重合体および界面活性剤から成る群から選択される１種以上の成分を含んで成る請求項１記載の懸濁製剤。
11. エリスロポエチン受容体作動薬が該懸濁製剤中に約０．１から４０重量％の範囲の量で存在する請求項１記載の懸濁製剤。
12. エリスロポエチン受容体作動薬がエポエチンアルファ、エポエチンベータおよびダーベポエチンアルファから成る群から選択される請求項１記載の懸濁製剤。
13. 移植可能送達デバイスを用いる送達可能な請求項１記載の懸濁製剤。
14. エリスロポエチン受容体作動薬を使用環境中で１２カ月に及んで目標投薬量で連続的に放出する請求項１記載の懸濁製剤。
15. ある被験体における赤血球生成を促進する方法であって、
    前記被験体に粘性のある流体特徴を示す非水性の単相ビヒクルおよび前記ビヒクルの中に分散しているエリスロポエチン受容体作動薬を含んで成る粒子製剤を含んで成る懸濁製剤を有効量で投与することを含んで成る方法。
16. 被験体への投与が移植可能送達デバイスによる投与である請求項１５記載の方法。
17. 被験体への投与が長期の連続投与である請求項１５記載の方法。
18. 移植可能送達デバイスであって、粘性のある流体特徴を示す非水性の単相ビヒクルおよび前記ビヒクルの中に分散しているエリスロポエチン受容体作動薬を含んで成る粒子製剤を含んで成る懸濁製剤がエリスロポエチン受容体作動薬が使用環境中で治療的に有効な速度で連続的に送達されるに充分な量で入っている貯蔵部を含んで成る移植可能送達デバイス。
19. エリスロポエチン受容体作動薬を３カ月間に及んで連続的に送達する請求項１８記載の移植可能送達デバイス。
20. エリスロポエチン受容体作動薬を１２カ月間に及んで連続的に送達する請求項１８記載の移植可能送達デバイス。

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