JP2008507966A - 生体液の細胞成分を同定する方法および装置 - Google Patents
生体液の細胞成分を同定する方法および装置 Download PDFInfo
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Abstract
【選択図】 図1
Description
−特有な細胞成分を、同定された細胞の特性に基づいて細胞学的に分析して、前記の細胞特性を同定するために試料の少なくとも1つの集団または亜集団を分類および計数を可能にする補足的結果を得ることができる追加ステップ。
−特定の細胞集団または特定の細胞成分の存在または数に対応する少なくとも1つの細胞特性を同定する手段
−同定された特性の機能としての特異的な細胞標識手段
標識手段は、好ましくは、少なくとも1つの染料、染料または蛍光色素と結合する少なくとも1つの抗体からなるグループから選択される分子プローブを意味する少なくとも1つの細胞マーカーを包含し、より好ましくは、少なくとも1つの抗体または蛍光色素をグラフトさせた抗体の混合物である。
−単色レーザー10
−光線を形作る装置11
−抵抗率および光学的測定による細胞の容積を測定するための循環コンテナー12
−軸方向の回折(FSC)の放射を採集するための光学的システム13
−寸法の解釈を提供する軸方向の回折(FSC)センサー14
−観察対象の細胞の構造を表現する直交性拡散(SSC)センサー15
−細胞内のRNAおよびDNAの発現を測定する直交性蛍光発光(FL1)センサー16
−蛍光色素とグラフトした抗体の反応性を測定する直交性蛍光発光(FL2)センサー17
−直交性放射を採集するための光学的システム18
−コンテナー12に組み込まれた抵抗率(RES)を測定するための電極19
−コンピュータ20
−結果を表示するシステム21
一定分量の生体液を、軸方向の回折、直交の拡散および細胞の直交性蛍光発光により光学的に測定するチャネルを包含する装置1を用いて分析する。その原理は以下に簡潔に述べる。
Claims (24)
- 生体液試料に存在する細胞成分を分類し計数する方法であって、
−すべての細胞成分が種々の集団に分類され計数されることを可能にする一連の一次的結果を得るための、従来、フローサイトメトリーで実施していた細胞学的分析の一次ステップと、
−同定された細胞特性に基づき特有の細胞成分を細胞学的に分析し、前記試料中の少なくとも1つの細胞集団または亜集団が分類され計数されて、前記細胞特性の同定を可能にする、補足的結果を得るための補足ステップとを包含することを特徴とする方法。 - 第1に一次ステップをそれ自体で実施し、初期結果により、同定された細胞特性に関連する少なくとも1つの異常を同定することができる場合は、前記一次ステップを再度実施し、一連の初期結果をもう一度得て、同時に前記補足ステップを実施し、この細胞特性に関連する補足的結果を得ることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 前記同定された細胞特性に基づき特異的な細胞を標識するステップをさらに包含し、その後、細胞学的分析のステップにより、前記試料に含有される集団すべてを同定した一次的結果のすべて、ならびに前記同定された細胞特性に関連した集団または亜集団を同定するための補足的結果へと導かれることを特徴とする、請求項2に記載の方法。
- 前記細胞学的分析の一次ステップが、前記試料中に存在する細胞成分すべてを分類するための第1の測定手段を用い、インピーダンスを含む少なくとも1つの電気的な分類手段または回折、拡散、透過および蛍光発光を含む光学的分類手段を包含することを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記一次ステップが、前記試料中に存在するすべての細胞成分を分類するための1つ以上の試薬の使用を包含することができることを特徴とする、請求項4に記載の方法。
- 前記細胞学的分析の補足ステップが、分類し計数する生体液である前記試料中に存在する少なくとも1つの細胞の集団または亜集団を分類および計数するための第2の測定手段の使用を包含することを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の測定手段が、少なくとも1つの光学的分類手段の使用を包含することを特徴とする、請求項6に記載の方法。
- 二次的な測定手段が、回折、透過、蛍光発光または吸光度、特に、特定の波長または特定範囲の波長から選択した光学的パラメータを、単一または組み合わせたかたちで測定することのできる1つ以上の光学的測定方法を包含することを特徴とする、請求項7に記載の方法。
- 前記第2の測定手段が、蛍光発光とともに機能し、1つ以上の慎重に選択された波長を用いた、少なくとも1つの測定方法からなることができることを特徴とする、請求項8に記載の方法。
- 前記第2の蛍光発光を用いる測定手段が、紫外線から赤外線までの範囲の選択された波長において操作可能であることを特徴とする、請求項9に記載の方法。
- 請求項3および6に記載の方法であって、これらをもとに、前記特異的細胞の標識ステップが、前記細胞特性を識別できる少なくとも1つのマーカーの使用を包含し、前記細胞学的分析の補足ステップが、一連の測定と同時に行われる1つまたは複数のマーカーを同定することのできる少なくとも1つの測定方法を包含する前記第2の測定手段の使用を包含することを特徴とする、請求項3および6に記載の方法。
- 前記生体液の試料が
−希釈または未希釈の全血または非全血
−血清
−希釈または未希釈の骨髄
−脳脊髄液
−尿
−滑液
−胸膜液
の中から選択されることを特徴とする、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。 - 前記生体液の試料が血液であり、前記細胞学的分析の一次ステップが、血球計数、白血球式および血小板計数のパラメータのすべてまたはいくつかを含む血液像を提供するのに必要な測定を包含することを特徴とする、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生体液の試料が血液であり、前記標識ステップが、赤血球、白血球および血小板の集団から選択された前記血液試料の細胞成分に対する特異的なマーカー抗体の使用を包含することを特徴とする、請求項3〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞標識ステップが、前記血液試料の細胞集団に存在する少なくとも1つの特異的な亜集団を標識するための特異的な抗体の使用を包含することを特徴とする、請求項14に記載の方法。
- 前記細胞標識ステップが、リンパ球、好中球、好塩基球、好酸球、単球、赤血球、血小板およびこれらすべての前駆細胞から選択される少なくとも1つの亜集団を標識するための、特異的な抗体の使用を包含することを特徴とする、請求項14および15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞標識ステップが、少なくとも1つの抗体または蛍光色素と抱合した抗体の混合物とともに実施され、前記細胞学的分析の補足ステップでは、直交性の蛍光発光型(FL2)の細胞蛍光発光を用いた測定手段を使用することを特徴とする、請求項3〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞標識ステップが、CD3、CD4、CD8、CD9、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD33、CD34、CD45、CD63、CD64、CD71、CD203、CRTH2、FMC7およびHLA−DRから選択された少なくとも1つの抗体を用いて実施されることを特徴とする、請求項3〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞標識ステップが、少なくとも1つの染料、少なくとも1つの染料または蛍光色素と抱合させた抗体からなるグループから選択した分子プローブを代表する、少なくとも1つの細胞マーカーを使用することを特徴とする、請求項3〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞学的分析の一次ステップおよび前記細胞学的分析の補足ステップが、同時に、同じフロー中で、同じ細胞成分の、異なる物理的特性を測定することを特徴とする、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- フローサイトメトリーによって操作する装置(1)を包含し、回折、拡散、透過および蛍光発光からなるグループの光学的パラメータ、およびインピーダンスを含む電気的パラメータから選択されたパラメータを測定することのできる少なくとも1つの測定チャネルを包含する第1の測定手段(14、15、16、19)と、回折、透過、蛍光発光および吸光度から選択される光学的パラメータを測定することのできる少なくとも1つの測定チャネルを包含する二次的な分析手段(17)と、第1の測定手段および第2の測定手段から得られた結果を処理するコンピュータ(20)とを有することを特徴とする、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法を実施するための装置。
- 前記第1の測定手段が、軸方向の回折(FSC)センサー(14)と、直交性の拡散(SSC)センサー(15)と、直交性の蛍光発光(FL1)センサー(16)と、抵抗率(RES)とを測定する電極(19)を包含し、前記第2の測定手段が直交性の蛍光発光(FL2)センサー(17)を包含することを特徴とする、請求項21に記載の装置。
- 前記コンピュータ(20)が、前記第1の測定手段および第2の測定手段から得られた結果を相関させるべく設計され、前記第1の測定手段および第2の測定手段から得られた結果をグラフ状に表示することを特徴とする、請求項21および22のいずれか一項に記載の装置。
- 前記コンピュータ(20)が、細胞成分のそのファミリーまたはその物理的特性に応じた解釈および分類を実施するべく設計されていることを特徴とする、請求項23に記載の装置。
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