JP2008507544A - マイコバクテリア感染検出用濃縮抗体、使用方法、及びそれを使用する診断検査 - Google Patents
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Abstract
【選択図】 図8
Description
・喀痰塗抹標本の直接鏡検
・PCRベースのアッセイ
・免疫診断法
一世紀以上前に、ロベルトコッホ(Robert Koch)は、臨床検査試料から結核の病原体を染色、培養することによって、それを同定した。今日の結核の診断法は、通常、コッホが用いた技術と実質的に異ならない染色培養技術を用いて確立されたものである。喀痰の直接鏡検は、今日の開発途上国における標準的な結核診断法であり、また、新たな検査法の性能を評価する際の基準である。この方法は肺結核に適用されるが、小児、又は初期段階の肺結核患者に対してはあまり有効でない。
7つの研究所におけるPCR検査の性能比較試験において、3%〜20%の範囲の高レベルの偽陽性PCR結果が示された(ある研究所では77%という極端な数値を示した)。このような比較的見劣りする性能は、この方法の各工程のモニタリングが不十分であったことによるものであり、アッセイの全段階で注意深く品質管理を行う必要があることを強く示している。
結核皮膚検査:この検査は、恐らく、結核の最も古典的な免疫検査である。少量のPPDツベルクリンと呼ばれる物質を、小型針を用いて前腕の皮膚の最上層の真下に接種する。この検査では、物質投与後48〜72時間に判定する。一般に、10mm以上の腫脹が陽性であると考えられている。多数の開発途上国が、結核予防のためにBCG接種を行っている。BCG接種後、PPD皮膚検査は通常陽性になる。皮膚検査の結果は、PPD抗原の質、免疫系の反応性によって、また、恐らくは個体の人種によっても異なる。また、この検査は、感染の段階及び部位に関する絶対的な指標を提供するものではない。
文脈上異なる意味に解するべきでない限り、以下の用語は以下に示す意味を有するものとする。
このセクションでは、上述の定義の「直接法」及び「強化法」を実施するのに好適なプロトコールを説明する。この説明自体は、直接法か強化法かによって厳密に区分されるものではないが、文脈に応じて、いずれかの、又は両方の方法における使用に適したカラムの作製方法が特に説明されている。図8は、直接法及び強化法の概略図である。
まず、使用前に、細胞をフロイントアジュバントと共に室温で最低1週間置く。アジュバントバイアルからキャップを取り除き、バイアルの底にある細胞を分散させることなく、多量の鉱油を取り出す。少量の鉱油は、細胞沈殿物が入るのを避ける予防措置としてバイアル中に残してもよい。鉱油を廃棄し、次いで、6.0Lのエタノール及び6.0Lのジエチルエーテルを混合し、各バイアルへ5mLのエタノール:ジエチルエーテル混合物を加える。
250mLのパイレックス培地ボトルにヒト型結核菌の乾燥細胞を入れ、細胞に、加温した脱イオン水を加える。ボルテックスにかけ、懸濁液が均質になるまで超音波水浴中で懸濁液に超音波処理する(〜20秒パルス)。
0.25%の酢酸溶液15mLに800mgの粗LAM Agを溶解させる。ボルテックスにかけ、超音波浴中で超音波処理し、完全に溶解させる。5000rpmで5分間、微小遠心で遠心分離する。20mLのガラス製バイアルに上清を回収し、別々のクロマトグラフィーを実施するために上清を3つの均等部に分け、次いで、先に回収したLAM Ag上清の1/3をクロマトカラムに静かに加える。100mLの容量をカラムから流出させた後、画分の回収を始める。クロマトグラフィーの開始から350mLの移動相が通過するまで、画分の回収を続ける。全ての画分を覆い、2〜8℃で保存する。250mLのエバポレーションフラスコでロータリーエバポレーションを行う(容量は25mLを超えない)。最小容量まで蒸発させるが、試料をカラメル化しないようにする。水20mLに蒸発させた物質を希釈し、超音波処理し、完全に溶解するまでボルテックスにかけ、次いで、凍結乾燥する(約8時間)。スパーテルで乾燥させた物質を秤量用ガラスバイアルに掻き集め、秤量する。
まず、0.5M重炭酸ナトリウムと1M炭酸カリウム溶液を調製する。次いで、脱イオン水1.5mL中に30.0gの精製LAM Agを溶解する。パルス超音波処理(10〜20秒パルス)を用いて、ボルテックスにかけ、LAM Agを完全に溶解させる。
3〜4mLバイアル中の脱イオン水1.25mLにLAM抗原を溶解させる。超音波処理し、ボルテックスにかけて完全に溶解させる。0.1M過ヨウ素酸ナトリウム溶液を調製する(NaOAc緩衝液中、pH4.0)。0.1M NaIO4溶液1.25mLを1.25mLのLAM溶液に加える。ボルテックスにかけて混合する。バイアルをアルミニウムホイルで覆い、振盪パレットに置き、室温で1時間+/−5分間混合する。
BSAヒドラジン溶液に酸化LAM溶液を加え、ボルテックスにかける。シアノ水素化ホウ素ナトリウムを100mg加え、密閉する。最終溶液10μLをサンプリングし、90μLの1×PBS緩衝液(QC溶液)で希釈し、更なる分析用に保存する(LAM濃度は約0.75mg/mLになる)。
沈降ゲル80mlに対応するセファロース4B−CLの懸濁液のアリコートを測定し、焼結ガラスフィルター上に移す。500mLの水で洗浄し、ゲル表面の粒状構造が見えるようになるまで、低真空(約300mmHg)で流出させる。ゲル層に空気の隙間が形成されないようにする。0.1M酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.0溶液)を調製し、これを用いて、0.1M NaOAcに溶解した30mM NaIO4溶液を調製する。
マトリックスの作製:
1×PBS(リン酸緩衝生理食塩水)に溶解した0.1%のアジ化ナトリウム溶液を調製する。60mlの沈降ゲル(又は別の好適なマトリックス)に対応する活性化セファロースの懸濁液を測定し、焼結ガラスフィルター上に移す。ゲルを充填し、粒状構造が見えるようになるまで、低真空(300mmHg)でゲルを流出させるが、ゲル表面に割れ目が形成されないようにする。
250mL培地ボトル中、約17〜20mLのBSA−LAMリガンド溶液をリン酸ナトリウム緩衝液(pH6.8)で90mLに希釈する。結晶性シアノ水素化ホウ素ナトリウム90mgをこの溶液に加える。供給品のプラスチックキャップを用いて、しっかりとボトルを閉める。短時間ボルテックスにかけて十分に混合する。この溶液は乳白色に見えるかもしれないが、沈殿物はないはずである。シアノ水素化ホウ素ナトリウムによって形成された微小の気泡は見えるかもしれない。
上で調製したLAM溶液に、流出させた活性化セファロースゲルを加える。しっかりと閉め、緩やかにボルテックスにかけ、懸濁液を完全に混合する。37℃+/−2℃で約4時間インキュベートし、1時間毎に反応混合物を(逆さにして)混合する。1.5Mトリス緩衝液4.5mLを加え、再度キャップをしっかりと閉める。37℃+/−2℃で約16時間(一晩)インキュベーションを続ける。
250mLビーカー中で、調製したゲルに1×PBSを100mL加える。手動で攪拌してスラリーにする。1×PBSを用いて、標準の手順に従ってカラムへ充填する。1×PBS及び0.1%アジ化ナトリウムでカラムを平衡化する。
沈降ゲル100mlに対応する活性化セファロースの懸濁液を測定し、焼結ガラスフィルター上に移す。ゲルが充填され、粒状構造が見えるようになるまで、低真空(300mmHg)でゲルを流出させるが、ゲル表面上に割れ目が形成されないようにする。後で使用するために流出ゲルを保存する。
250mLパイレックス培地ボトル中で、BSA−LAMリガンドの約27.5mLの溶液を、リン酸ナトリウム緩衝液(pH6.8)を用いて100mLに希釈する。この溶液に結晶性シアノ水素化ホウ素ナトリウムを100mg加える。供給品のプラスチックキャップを用いてボトルをしっかりと閉める。短時間ボルテックスにかけることにより十分混合する。この溶液は乳白色のように見えるかもしれないが、沈殿物はないはずである。シアノ水素化ホウ素ナトリウムによって形成された微小の気泡は見えるかもしれない。
上で調製したLAM溶液に、流出した活性化セファロースゲルを加える。供給品のプラスチックキャップでしっかりと閉める。緩やかにボルテックスにかけること(中間スピード)により、懸濁液を完全に混合し、37℃±2℃で約4時間インキュベートし、1時間毎に反応混合物を(逆さにして)混合する。1.5Mトリス緩衝液7.5mLを加え、しっかりと閉める。37℃±2℃で約16時間(一晩)インキュベーションを続ける。
250mLビーカー中で、上述のゲルに1×PBSを約160mL加える。(スパーテル/ガラスロッドを用いて)手動で攪拌してスラリーにする。1×PBSを用いて、標準の手順に従ってカラムへ充填する。1×PBS及び0.1%アジ化ナトリウムでカラムを平衡化する。
以下のストック溶液を調製する。
0.1Mグリシン緩衝液1リットル。これを1M HClでpH2.5に調整する。
3×PBS溶液1リットル(脱イオン水で10×PBSストック溶液を希釈)。pHをチェックし、必要に応じて、1M HCl又は1M NaOHで7.2〜7.4に再調整する。
1×PBS及び0.1%のアジ化ナトリウム溶液 200mL。
0.5Mリン酸水素二ナトリウム(Na2HPO4)溶液100mL。
凍結血清を、完全に溶解するまで冷蔵庫内でゆっくりと解凍する(約16時間/一晩)。血清容量を測定し、血清100mL毎に塩化ナトリウム2.9gを秤量し、血清に加える。完全に溶解するまで穏やかに振盪する。最終濃度は0.5M NaClである。
1×PBSで平衡化することにより、血清使用のためのカラムI(カラム材料に結合した非変性LAM)を作製する。流速を2.0mL/分に調整し、基準線が少なくとも1時間安定を維持するまで、1×PBSを加え続ける。必要に応じて、記録計及び検出器を0に調整する。基準線が安定したならば、0.5〜0.6mL/分に流速を調整し、次いで、0.5〜0.6ml/分の流速でLAMアフィニティーカラムIに、上で調製した血清をアプライする。排出容量溶離液を回収する(これはカラム容量の約30%になる)。260〜280nmのUV検出により画分をモニターし、シグナルの上昇が生じた場合、500〜1000mL血清のうちの、カラムを通過した血清の回収を開始する。カラムに全容量の血清を加えた後、すぐにカラムの送流を止め、3×PBS緩衝液を加え、次いで、液体流出を再開する。シグナルが基準線の約50%に下がるまで、3×PBSでカラムを洗浄し続ける。この時点で血清の回収を止め、全ての回収画分を保存する。流速を2.0mL/分に変え、基準線が約10〜15%になるまで、3×PBSでのカラム洗浄を続ける。流出液を廃棄する。3×PBS緩衝液を1×PBS緩衝液に置換し、2.0mL/分の流速で約2〜2.5カラム容量で洗浄する。流出液を廃棄する。
流速を1.0mL/分に調整する。1×PBSを、上で調製した冷却0.1M Gly−HCl緩衝液に置換し、吸着抗体の溶離を開始する。シグナルが速やかに上昇し、フルスケールの約10〜15%が得られたら、氷水浴(0℃)中に置いた15mlコニカルチューブに溶離液カラムを回収し始める。5mlの画分を回収する。
中性(pH7)になるまで1×PBSでカラムを平衡化する。使用しない間は、1×PBS及び0.1%アジ化ナトリウム溶液でカラムを平衡化し、その後、使用時まで4〜8℃でカラムを保管する。
作製した抗体を10,000Gで最低5分間遠心分離にかける。上清を12〜14mol.wt.カットオフの透析チューブに移し、Ab溶液対全容積の比が>1:20であるようにして、最低4回緩衝液を変えて2〜3日間1×PBSに対して透析する。透析から抗体を取り出す。ガラスメスシリンダーを用いて、抗体溶液の容量を測定する。何らかの更なる(沈殿物形態の)破砕物/剥離物が存在する場合、抗体溶液を最低5分間10,000Gで更に遠心分離にかける。1×PBS緩衝液で分光光度計をブランキングした後、280nmで抗体のODを測定する。濃度をmg/mLで算出し、保存のために4〜8℃に置く。
高特異性抗体の精製:
基準線が少なくとも15分間安定して維持されるまで、上で作製したLAMアフィニティーカラム2(NaIO4を用いてカラム材料にカップリングされ、強度の酸化によって修飾されたLAM)に、1×PBSを2.0mL/分の流速で加える。必要に応じて、記録計及び検出器を0に調整する。次の30分間、基準線をモニターし続け、安定したら、抗体をカラムに加える。流速を0.5〜0.6mL/分に調整し、Econoポンプ又は類似の器具を用いて、Abの〜100〜150mgに対応する容量の、上で作製した抗体をLAMアフィニティーカラム2に加える。280nmにおける排出容量溶離液を回収する(これはカラム体積の約30%になる)。綺麗な血清ボトルで上記基準線より約10〜15%上までシグナルが上昇したら、抗体を回収し始める。全抗体容量を加えたら、即座に液体送流を止め、1×PBS緩衝液を加え、0.5〜0.6mL/分で液体送流を再開する。280nmでカラムを通過して流出する物質の回収を続ける。シグナルが回収開始時の10〜15%上(基準線の30〜50%上)になったら、溶液の回収を止める。
2.0〜2.5mL/分の流速の1×PBSでカラムの洗浄を続ける。最低3カラム容量の1×PBSを通す。上で調製した冷却0.1M Gly−HCl緩衝液で、カラム上に吸着されている物質を溶出する。溶出した物質をガラスバイアル中に回収する。モニター/シグナルが基準線の〜10〜15%になったら、回収を止める。上で調製した0.5Mリン酸ナトリウムの全容量の10%を0.5mLずつ加えることにより、回収した抗体溶液を中和する。280nmで抗体のODを測定し、抗体濃度を算出する。直ちに、回収した抗体溶液を4〜8℃に置き、上記工程で回収した抗体の分析が完了するまで保存する。上記抗体の濃度が0.3mg/mL未満である場合は、濃縮する。
Moduline300システムのセットアップ:
Abコーティングは、コーティング溶液M815の調製終了から最大8時間以内に終わらなければならない。抗体コーティング溶液は、コーティング工程中、氷(0℃)上で保存されなければならない。
予め空のプレートを計量、検査し、全ての破損プレートは廃棄する。Moduline300システムを用いて、各ストリッププレートの各ウェルへMTB−LAM特異的Abコーティング溶液100μlを分注する。コーティング工程中、充填が十分に均一であるかどうかについて、各プレートの96ウェル全てを目視によりチェックする。未使用のAb溶液は残し、プレートのロット全体が処理され、使用に供されるまで、2〜8℃で保存する。10枚の各プレートのスタック中に、分注したAb入りのプレートを積み重ね、カバーとして使用する空のプレートで最上部をカバーする。積み重ねカバーした1〜18枚の各プレートを標識化する。積み重ねたプレートを2〜8℃で冷蔵し、一晩(14〜18時間)インキュベートする。
Moduline300システムをセットアップし、洗浄サイクルを3回、直後にブロック溶液312μLの分注サイクルを行う。ブロック溶液は、調製終了から最大24時間以内に使用しなければならない。プレートを冷蔵庫から取り出し、Moduline上にプレートが置かれている場合、カバーしているプレートを取り除き、横に置く。タイマーを6時間に設定する。連番を付したトレー上に、コンベヤーから来るブロックしたプレートをセットし、室温(20〜28℃)で5〜6時間ブロックする。
MTB−Ab溶液調製は、コンジュゲーションの少なくとも7日前に行うべきである。
2〜8℃で、最低4回変えながら最低48時間、1×PBSに対して必要量のMTB−LAM−Ab溶液を透析する。MWCOが12〜14,000の透析チューブを用いる。12,000rpmで10分間、Ab溶液を透析遠心分離した後、15mlの目盛り付き遠心管へ上清を注意深く吸引する。
Amicon Ultrafree−15遠心濾過装置を1×PBSで予備洗浄する。装置に1×PBS溶液約15mLを入れ、約5分間、3500rpmで遠心分離する。全ての溶液を装置一式から廃棄する。3500rpmで約5分間×3回、ベンチトップ遠心分離機(バケットローター)で遠心分離することにより、Ultrafree−15遠心濾過装置で、透析後の上述のAb溶液を4.5〜5.5mg/mlまで濃縮する。Amicon装置のフィルターユニットから得た濃縮Ab溶液を、15mLチューブに注意深く吸引する。回収を最大化するために、遠心分離直後に濃縮試料を取り出し、Ab吸引前にピペットで濃縮物容量を数回再懸濁して適切な混合を確実に行う。
コンジュゲーション工程用の全てのガラスバイアル及び攪拌棒、並びにコンジュゲート保存用ガラスバイアルをH2SO4溶液で洗浄し、水道水及び脱イオンH2Oで完全にすすぐ。
セファデックスG−25(ファイン)を充填した、約V=50mlのカラム(1.5×30cm)を入手する。上述のようにカラムを充填する。1mMナトリウムでカラムを平衡化するため、次のクロマトグラフィー条件を設定する。
・緩衝酢酸溶液、pH4.4
・280nmのUVモニター波長
・モニター感度:0.2OD
・チャート記録計スピード:2mm/分
・カラム洗浄のポンプ流速:60ml/時間
V型ガラスバイアルにHRP8mgを秤量する。脱イオンH2Oを2.0ml加える。HRPが全て溶解するまで、この溶液を2〜3分間穏やかに攪拌する。溶解していないHRP粒子がガラスバイアル壁に残っていないことを確認する。
工程5.4.7の終了直後に、セファデックスG−25(ファイン)カラムのゲル濾過によって酸化HRPを精製する。試料溶離のポンプ流速を約50ml/時間に設定する。上で調製した酸化HRPの全容量を乾燥ゲル床上に注意深く加えるが、この場合、ゲル床を乱さないように注意する。乾燥ゲルを超えないようにする。全ての酸化HRP(有色溶液)を1本の15mlチューブに回収する。クロマトグラフィーチャート上の第1のピーク、OD280nm>0.05。クロマトグラフィー終了後、セファデックスG−25カラムを空にし、ゲルを廃棄し、クロマトグラフィー後のHRP溶液の容量を記録する。
1mM酢酸ナトリウム(pH4.4)及び約15mLの1mM酢酸ナトリウム(pH4.4)でUltrafree−15遠心濾過装置を予備洗浄し、ベンチトップ遠心分離機(バケットローター)を用いて、3500rpmで約5分間、フィルターユニットを遠心分離する。次いで、フィルターユニットからの全ての溶液を廃棄する。クロマトグラフィー後直ちに、Ultrafree−15遠心分離機フィルターユニット(Biomax−10K膜)を用いて、3500rpm、約5分間の遠心分離で約2±0.2mlまで(上で得た)酸化HRP溶液を濃縮する。濃縮HRP溶液を装置のフィルターユニットから綺麗なガラスバイアルへ注意深く吸引し、容量を測定、記録し、2〜8℃で保存する。
HRPへのコンジュゲーションに必要なMTB−LAM−Ab溶液の量を算出する。三角形の攪拌棒を備えたV字型ガラスバイアルに、バイアル壁にAb溶液の液滴を残すことなく、(上で得た)MTB−LAM−Abを入れる。MTB−LAM−Ab溶液に、(上で得た)酸化HRP溶液の1/2容量を加え、アルミニウムホイルでバイアルを覆って反応混合物を光から保護し、室温で30分間ガラスバイアル中の反応混合物を攪拌する。泡立たないようにする。
透析後、コンジュゲート溶液を4000rpmで約4分間遠心分離する。注意深く上清を取り出し、綺麗な6mlのガラスバイアルにコンジュゲート溶液を入れる。磁気攪拌棒を入れた50mlガラス瓶へGardianペルオキシダーゼコンジュゲート安定剤/希釈剤18mlを測り分ける。MTB−Ab−HRPコンジュゲート2mlを加え、約10分間混合物を攪拌する。2〜8℃で保存し、遮光する。
以下に、濃縮抗体製造のための「直接法」を用いて未処理の非濃縮尿中のLAMを検出する直接抗原ELISAの評価から得られたデータを提示する(上述した「強化法」を用いて製造した濃縮抗体を使用することにより、より優れたデータが得られるものと思われる)。これらのデータを得た研究は、限局性結核及びハンセン病プログラム、及びMbeyaメディカルリサーチプロジェクト(Mbeya Medical Research Project:MMRP)との共同で、タンザニアの南西高地に位置するMbeya地域で行った。Mbeya領域では、毎年約3,500件の新規結核症例が診断されており、国のDOTS計画に従って治療が行われている。全ての治療は、Mbeya Referral Hospitalの中心施設で開始されている。結核治癒率は、2002年は72.3%であった。この研究の目的は、医療における市販LAM捕捉ELISAの性能を評価し、それらの結果を結核診断用の最も標準的な検査、即ち喀痰鏡検、結核培養、胸部X線撮影及び臨床検査と比較することである。
(LAM−ELISAの説明)
MTB−ELISA直接抗原サンドイッチイムノアッセイ(MTB−ELISA、Chemogen,So.Portland,ME、米国)は、第三者によって開発されたアッセイに類似のLAM−ELISAである。免疫血清は、ヒト型結核菌H37Rvを非活性化した全細胞で免疫した白色ニュージーランドウサギから回収した。ポリクローナルLAM特異的抗体は、リガンドとして固定化LAMを用いて、アフィニティークロマトグラフィーによって単離した。検査キットは、乾燥剤が入ったプラスチックパウチ中に詰めて密閉したLAM特異的抗体事前被覆96ウェルELISAプレート;LAM特異的HRP結合LAM特異ポリクローナル抗体を入れたバイアル;TMBの一成分である発色性基質を入れたバイアル;陰性対照溶液を入れたバイアル;並びに、尿試料のLAM0.5ng/ml、1.5ng/ml及び4.5ng/mlに対応するキャリブレータを入れた3本のバイアルからなる。450nmで得られた光学濃度が陰性対照のシグナルよりも少なくとも0.1上であった場合、尿試料は、ELISAで陽性であると考えられた(>2SD)。
8週間以内に、結核の疑いがある242名の患者がタンザニアのMbeyaにある5ヶ所の医療センターの外来に集まった。検査の標準プロトコールには、臨床的診断、胸部X線撮影、ESR、白血球x数及びHIV検査、1、2及び3日目の喀痰の3×AFB染色(Ziehl Neelson)、Loewenstein Jenssen培地における2痰培養、並びに尿及び血清のLAM−ELISAが含まれていた。
Ziehl Neelson染色及び鏡検は、経験を積んだ、十分に熟練した実験技術者によって行われた。浄化喀痰試料は、2連で、Loewenstein Jenssen培地で培養した。培養は、8週間、増殖について毎週試験した。
各患者から尿30mlを、各患者のデータ形態のコード番号で標識した殺菌済みプラスチック容器に採取した。新しく未処理の尿100μlを2連のELISAプレートのウェルに加えた。また、二連の各プレートに、陰性対照、低陽性対照、中間陽性対照及び高陽性対照も加えた。24時間以内に標本を処理し、次いで、ドイツで更なる試験を行うために−20℃で保管した。
Mbeya Referral Hospitalの23名のスタッフメンバーから得た尿試料、Chemogen,Inc.の20名のスタッフメンバーから得た尿試料、及びニューヨークの2つの病院の患者200人から得た尿試料をLAM ELISAで試験した。彼らは全て、臨床検査で健康であることが明らかであり、いかなる呼吸器感染症の徴候も有していなかった。
(ELISA系の前臨床評価)
図4Aは、尿中の異なる濃度のLAMを用いた用量応答曲線を示す。最適のカットオフ値は、陰性対照のODを0.1OD超える光学濃度(OD)を生じるLAM濃度として、この曲線に従って決定されるが、これは、陰性対照試料のシグナルより2以上の標準偏差分超えた値に相当する。このカットオフ値より上の光学濃度を有する全ての試料をELISA陽性と見なした。カットオフ値は、新しい未処理の尿中のLAM約0.25ng/mlと等しかった。
表1に従って、242名の結核が疑われる人を3つの大きなカテゴリーに分類した:(1)確認済みの鏡検診断及び/又は培養診断を有する肺結核患者、(2)典型的な臨床的徴候及びX線写真の徴候を有する患者、及び、(3)入手可能な診断ツール(X線撮影、喀痰鏡検及び培養)が全て陰性だったために結核患者とは考えられないが、結核の臨床症状を有する患者。
確認された肺結核に罹患している137名の患者(培養又はAFBで陽性)のうち、111名は、所定のカットオフ値(陰性対照+0.1の光学濃度(OD))に対してLAM−ELISA陽性であった(感度81.02%)。塗抹標本及び培養で陽性の集団(82)に関する平均ODインクリメント(=絶対平均OD−陰性対照のOD)は、0.604であった。塗抹標本陰性及び培養陽性の症例(50)に関しては、平均ODインクリメントは0.293であり、塗抹標本陽性であるが培養陰性の症例(5)では0.249であった。
結核診断のための古典的なツール(痰培養及び塗抹標本鏡検)には、明らかに不利な点がある。両方法は、周知の肺結核の症例のみを検出する。これによって、器官症状に関わらず、活動性結核の症例を全て検出する可能性が著しく損なわれる。このため、特に手段の乏しい場で古典的ツールを補うことが可能な複数の新たな方法が過去に評価されてきた。このような新たなアッセイで設定された基準は、a)鏡検より高感度、b)比較可能な特異性、c)限定された追加的作業負荷、d)喀痰陰性結核の診断の可能性、及びe)HIV重感染によって損なわれない感度、である。
Claims (27)
- マイコバクテリア由来の表層多糖抗原に高度に特異的な濃縮抗体群。
- 抗体が、抗原活性を示す抗原を維持する環境で産生されることによって濃縮されたものである、請求項1に記載の濃縮抗体群。
- 抗体が、比較的不活性な抗原を認識する抗体を排除することによって濃縮されたものである、請求項1に記載の濃縮抗体群。
- 抗体が、比較的不活性な抗原を認識する抗体を排除することによって濃縮されたものである、請求項2に記載の濃縮抗体群。
- マイコバクテリアがヒト型結核菌である、請求項1に記載の濃縮抗体群。
- 表層多糖がリポアラビノマンナン(LAM)である、請求項5に記載の濃縮抗体群。
- マイコバクテリアの抗原に高度に特異的な濃縮抗体を製造する方法であって、
マイコバクテリア由来の抗原に対する抗体を産生、単離する工程と、
単離抗体から、比較的不活性な抗原に特異的な抗体群を分離して、単離濃縮抗体を得る工程と、
を含む方法。 - マイコバクテリアの抗原に特異的な濃縮抗体を製造する方法であって、
抗原活性を保持する条件下でマイコバクテリア由来の抗原を単離する工程と、
単離抗原に対する抗体を、その抗原活性を保持させながら産生する工程と、
を含む方法。 - マイコバクテリアの抗原に高度に特異的な濃縮抗体を製造する方法であって、
マイコバクテリア由来の単離抗原で作製した第1のアフィニティーマトリックスに、単離抗原に特異的な抗体が第1のアフィニティーマトリックスに保持されるように、マイコバクテリアを接種した哺乳動物に由来の血清をアプライする工程と、
単離抗原に特異的な抗体を第1のアフィニティーマトリックスから単離する工程と、
マイコバクテリア由来の修飾抗原で作製した第2のアフィニティーマトリックスに、修飾抗原に特異的な抗体が第2のアフィニティーマトリックスに保持されるように、単離抗体をアプライする工程と、
第2のアフィニティーマトリックスからの溶出物を回収することにより単離抗原に特異的な濃縮抗体を単離して、マイコバクテリア抗原に対する特異性及び感受性が非濃縮抗体より高い濃縮抗体を得る工程と、
を含み、
前記修飾抗原が、薬剤で処理されて、単離抗原と比較して非活性化されたものである方法。 - マイコバクテリアがヒト型結核菌である、請求項7〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 表層多糖がリポアラビノマンナン(LAM)である、請求項10に記載の方法。
- 前記薬剤が過ヨウ素酸ナトリウムである、請求項9に記載の方法。
- 表層多糖が、フロイントアジュバントから単離されたものである、請求項7〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 被験者由来の試料中のマイコバクテリア感染を検出する方法であって、
請求項1〜4のいずれか一項に記載の濃縮抗体から作り出された免疫反応環境を提供する工程と、
免疫反応環境下で試料を反応させて、マイコバクテリア感染を検出する工程と、
を含む方法。 - マイコバクテリア感染が、ヒト型結核菌によるものである、請求項14に記載の方法。
- 表層多糖がリポアラビノマンナン(LAM)である、請求項15に記載の方法。
- 免疫反応環境がELISAを含む、請求項14に記載の方法。
- マイコバクテリア感染がヨーネ病である、請求項14に記載の方法。
- マイコバクテリア感染が肺結核菌感染である、請求項14に記載の方法。
- マイコバクテリア感染が肺外結核菌感染である、請求項14に記載の方法。
- 前記試料が、喀痰、血液、尿、組織又は他の適切な試料のいずれかである、請求項14に記載の方法。
- 前記試料が未処理の非濃縮尿である、請求項14に記載の方法。
- 試料中のマイコバクテリア感染を検出するためのキットであって、
免疫反応環境を提供するアッセイを含み、
免疫反応環境が、請求項1〜4のいずれか一項に記載の濃縮抗体を含むキット。 - 免疫反応環境がELISAを含む、請求項23に記載のキット。
- マイコバクテリア感染が、ヒト型結核菌によるものである、請求項23に記載のキット。
- 抗体がリポアラビノマンナン(LAM)である、請求項25に記載のキット。
- 免疫反応環境がストリップテストとして行われる、請求項23に記載のキット。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019506412A (ja) * | 2016-02-10 | 2019-03-07 | ラトガース, ザ ステイト ユニバーシティー オブ ニュージャージー | 結核菌(Mycobacterium Tuberculosis)感染の診断および治療のための新規な抗−LAMおよび抗−PIM6/LAMモノクローナル抗体 |
WO2020045625A1 (ja) | 2018-08-31 | 2020-03-05 | 富士フイルム株式会社 | イムノクロマトグラフキットおよび結核菌の検出方法 |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BRPI0513596B8 (pt) * | 2004-07-20 | 2021-07-27 | Chemogen Inc | método e kit para detectar uma infecção micobacteriana em uma amostra de um indivíduo de interesse por meio da detecção de antígeno micobacteriano |
WO2008067497A2 (en) * | 2006-11-29 | 2008-06-05 | Chemogen, Inc. | Enriched antibody for detecting mycobacterial infection, methods of use and diagnostic test employing same |
US20100317037A1 (en) * | 2009-06-16 | 2010-12-16 | Sina Biotechnical Co. | Detection of Mycobacterium Tuberculosis Bacilli |
SG10201600531TA (en) | 2011-01-24 | 2016-02-26 | Univ Singapore | Pathogenic mycobacteria-derived mannose-capped lipoarabinomannan antigen binding proteins |
US10830760B2 (en) | 2017-12-20 | 2020-11-10 | General Electric Company | Device for rapid detection of tuberculosis-lipoarabinomannan (TB-LAM) with enhanced sensitivity |
US10837962B2 (en) | 2017-12-20 | 2020-11-17 | General Electric Company | Method and associated device for rapid detection of target biomolecules with enhanced sensitivity |
EP3823670A4 (en) * | 2018-07-19 | 2022-04-20 | Rutgers, the State University of New Jersey | METHODS FOR COMBINED DETECTION AND DIFFERENTIATION OF INFECTION BY MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS COMPLEX AND NON-TUBERCULOSIS MYCOBACTERIA |
CN111234026A (zh) * | 2020-02-21 | 2020-06-05 | 首都医科大学附属北京胸科医院 | 特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的单克隆抗体及其在分枝杆菌检测中的应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992014155A1 (en) * | 1991-02-12 | 1992-08-20 | Dynagen, Inc. | Monoclonal antibodies directed towards mycobacterial antigens |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6214789B1 (en) * | 1993-03-12 | 2001-04-10 | Xoma Corporation | Treatment of mycobacterial diseases by administration of bactericidal/permeability-increasing protein products |
US5756327A (en) * | 1994-09-13 | 1998-05-26 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Recombinant mycobacterial isoleucyl-tRNA synthetase genes, tester strains and assays |
AU1750197A (en) * | 1996-01-17 | 1997-08-11 | Trustees Of Boston University | Mycobacterium antigens and methods for their detection |
GB9605083D0 (en) * | 1996-03-11 | 1996-05-08 | Royal Ordnance Plc | Howitzer anchor spade |
SE9600949D0 (sv) * | 1996-03-12 | 1996-03-12 | Stefan Svenson | Method of diagnosing a mycobacterial disease and immunoassay kit |
US6545130B2 (en) * | 1997-06-04 | 2003-04-08 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Monoclonal antibodies to mycobacterium tuberculosis and a modified ELISA assay |
EP1259249B1 (en) * | 2000-03-01 | 2009-07-15 | Binax, Inc. | Method for detecting the presence of target bacteria or a target component carbohydrate antigen thereof |
US20040038201A1 (en) * | 2002-01-22 | 2004-02-26 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Diagnostic and therapeutic applications for biomarkers of infection |
BRPI0513596B8 (pt) | 2004-07-20 | 2021-07-27 | Chemogen Inc | método e kit para detectar uma infecção micobacteriana em uma amostra de um indivíduo de interesse por meio da detecção de antígeno micobacteriano |
WO2008067497A2 (en) | 2006-11-29 | 2008-06-05 | Chemogen, Inc. | Enriched antibody for detecting mycobacterial infection, methods of use and diagnostic test employing same |
-
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Patent Citations (1)
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WO1992014155A1 (en) * | 1991-02-12 | 1992-08-20 | Dynagen, Inc. | Monoclonal antibodies directed towards mycobacterial antigens |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019506412A (ja) * | 2016-02-10 | 2019-03-07 | ラトガース, ザ ステイト ユニバーシティー オブ ニュージャージー | 結核菌(Mycobacterium Tuberculosis)感染の診断および治療のための新規な抗−LAMおよび抗−PIM6/LAMモノクローナル抗体 |
JP2021105034A (ja) * | 2016-02-10 | 2021-07-26 | ラトガース ザ ステイト ユニバーシティー オブ ニュージャージー | 結核菌(Mycobacterium Tuberculosis)感染の診断および治療のための新規な抗−LAMおよび抗−PIM6/LAMモノクローナル抗体 |
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