JP2006234627A - 体液中の結核菌抗原を検出する方法 - Google Patents

Abstract

【課題】 特異性の抗原抗体反応を利用して、直接体液中の結核菌が分泌する特異抗原を検出することができる体液中の結核菌抗原を検出する方法を提供する。
【解決手段】 体液内の結核菌抗原を検出する方法であって、
（ａ） 任意の抗原抗体結合反応法で結核菌が各種体液内に分泌する特異の抗原を検出すること、
（ｂ） 結核菌に対抗する特異な抗原の単単一株及び多株抗体、
（ｃ） 上述する抗体の任意の位置を利用して結核菌の抗原の検出を行うこと、
（ｄ） 結果菌の分泌する特異な抗原の試剤セット、などのステップとキーポイントを含む。
【選択図】 図１

Description

この発明は、体液中の結核菌抗原を検出する方法に関し、特に体液中の結核菌が分泌する特異性抗原を直接検出する方法に関する。

結核の感染経路は主に空気中の飛沫感染で、結核の主な病原菌は結核菌（Mycobacterium Lubercuiosis）である。世界保健機関によると、現在、年間約８００万件の結核が新しい病例として報告され、年間約３００万人が結核により死亡している。世界では約３３％の人が潜伏性の結核患者であるため、すばやく正確に結核病患者を検知することが非常に重要になっている。

現在、常用されている結核の診断方法には次に掲げるいくつかが挙げられる。
先ず、皮膚のテスト（Ｓｋｉｎ ｔｅｓｔ）が挙げられる。これは結核を検出する最も一般的な初期の診断方法。下膊に約０．１mlの結核菌の純化抗原（Tuberculin purified protein derivate：PPDと称する）を皮下注射する。注射の４８〜７２時間後、皮膚が腫れる。この方法は陽性の患者が結核菌に感染したことがあることを検出する。活動性の結核病（active TB）であるかどうかを判断する場合には、レントゲン検査及びその他の診断方法を合わせて行わなければならない。結核のスキンテストにおける敏感度は約６５％である。

次に、胸部レントゲン撮影（Chest x-ray）が挙げられる。胸部レントゲン撮影による検査は肺の結核を診断するためにとても重要になっている。この方法は肺が結核に感染しているかどうかを判断することができる以外に、スキンテストで陽性反応がでた患者についても、更に一歩進んで確認を行うことができる。しかしながら、患部が肺でない結核の場合には診断することができない。胸部レントゲン撮影の敏感度は約５０％である。

次に抗酸性染色（Acid−fast stain：AFRと称する）が挙げられる。結核菌の細胞壁は比較的厚い脂質層を含んでいる。このため酸性の染色剤によって染色すると、染色剤の色が落ちにくくなる。よって、顕微鏡でもピンク色の菌の存在を確認することができ、この検出方法はすばやく行うことができる。痰液の検査では、肺から吐き出された深層痰液が最も効果的だが、患者が自分で痰を吐き出すことができない場合、霧状で高浸透圧の食塩水で引き出すか、胃から液を抽出するか、もしくは気管支洗浄液を検出物とする。抗酸性染色の敏感度は約５０％である。

次に細菌培養（Culture）が挙げられる。目下、結核を正確に診断するための最も正確な方法は細菌培養であって、細菌を培養した後、抗薬性テストを行うことができるのみならず、投薬の依拠として医師に提供することができる。但し、結核菌の成長はとても緩慢であって、実験室での培養には４−６週間を要する。また、抗薬性テストは２−３週間を要する。よってこれらは極めて時間のかかる診断方法と言える。細菌培養の特性度は約９５％である。

次に、ポリメラーゼ連鎖反応（Polumerase Chain Reaction：PCRと称する）が挙げられる。ポリメラーゼ連鎖反応は現在、診断方法の１つとして積極的に開発されている。初期の結核感染の診断では、その他の方法に比べて敏感であるため、病院でも、この方法を結核病の診断方法として使用し始めている。しかしながら、この方法は費用が高く、診断する人は訓練が必要であるため、比較的研究開発に適している。ポリメラーゼ連鎖反応の敏感度は薬９５％である。

次に血清テスト（Seoiogy test）が挙げられる。最近十年の間に多くの研究グループがいずれも結核の血清テストによる診断を開発している。しかし、この方法は活動性結核患者であるか、或いは結核に感染したことがある患者かを判断できない。また、結核予防ワクチンを接種した人は陽性反応が出易い。血清テストの敏感度は約６０〜８５％である。

全世界の約３分の１の人が結核に感染している。よって、結核及び関連疾患をいかに早期に診断するかが非常に重要になっている。特に結核病患者、或いは多重抗薬性の結核菌に感染した患者をいかに隔離するかは結核の感染をコントロールする大きな難題である。しかし、現在、臨床医学上では、結核を診断する方法は完璧ではないため、診断の正確性が低くなっている。

この発明は、特異性の抗原抗体反応を利用して、直接体液中の結核菌が分泌する特異抗原を検出することができる体液中の結核菌抗原を検出する方法を提供することを課題とする。

そこで、本発明の発明者は従来の技術に見られる欠点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、任意の抗原抗体結合反応法で結核菌が各種体液内に分泌する特異の抗原を検出すること、結核菌に対抗する特異な抗原の単単一株及び多株抗体、上述する抗体の任意の位置を利用して結核菌の抗原の検出を行うこと、及び結果菌の分泌する特異な抗原の試剤セットを具えることなどを含んでなる体液中の結核菌抗原を検出する方法の構造によって課題を解決できる点に着眼し、かかる知見に基づいて本発明を完成させた。

以下、この発明について具体的に説明する。

請求項１に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、結核菌の分泌する特異な抗原の試剤セットと、結核菌に対抗する特異な抗原の単一株か、もしくは多株抗体の任意の一とを利用し、任意の抗原抗体結合反応法で結核菌が各種体液内に分泌する特異の抗原を検出して、検体内の結核菌の抗原を検出する。

請求項２に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項１における結核菌の特異な抗原が、結核菌ＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３遺伝子グループから翻訳した任意の蛋白質、合成したＲＤｓ領域ペプチド、細胞培養または遺伝子工程などの技術で純化したものから選択される抗原の一部を含む。

請求項３に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項１における結核菌の特異な抗原の抗体がｃｕｉｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ―１０（ＣＦＰ−１０）、ｅａｌｙ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎｅ−６（ＥＡＳＴ−６）、もしくは両者が融合した蛋白質（ＣＦＰ−１０／ＥＳＡＴ−６）から派生する多株、単一株抗体である。

請求項４に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項１における抗原抗体結合反応法が酵素免疫分析法、蛍光免疫分析法、冷光免疫分析法、放射線免疫分析法、免疫ゲル法、高速免疫クロマトグラフ分析法、免疫ブロッティング法、及び抗体チップなどを含む。

請求項５に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項４における高速免疫クロマトグラフ分析法が、一級抗体をフィルムに吸着させ、蛍光物質を有する二級抗体を有色の顆粒球上に標示する。

請求項６に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項１における検体が血液、血漿、血清、痰液、尿液、脳髄液、肋膜液、もしくは組織液などの各種生物性体液を含む。

請求項７に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項１における試剤セットが、
固定フェーズの抗体であって、結核菌内のＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３遺伝子グループから翻訳される抗原であるか、もしくは合成されたペプチドであるか、を識別する能力を有するものか、
二級抗体に酵素、蛍光、冷光、もしくは放射性物質を含む標示がなされたものか、
組換え蛋白質と合成されたペプチドを標準品とするか、もしくは陽性制御用とするもの、の内の任意の一を含む。

請求項８に記載する体液中の結核菌抗原を検出する方法は、請求項１における試剤セットが固定フェーズの抗体であって、
結核菌のＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３遺伝子グループから翻訳される抗原であるか、合成されたペプチドであるか、を識別する能力を具え、
該抗体を固定する材料が有色の顆粒球か、ｇｏｌｄ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ粒か、磁性顆粒から選択され、
圧電式トランジスタ、表面マイクロウェーブ音声変換器、電極、半導体、あるいは任意の光電転換器である生物検出転換器を利用し、
組換え蛋白質と合成されたペプチドを標準品とするか、もしくは陽性制御用とする。

この発明による体液中の結核菌抗原を検出する方法は、結核菌に感染したことを早く正確に検査できるという利点を有する。

この発明は結核病の検出方法を提供するものであって、体液内の結核菌が分泌する特異な抗原を直接検出する。よって、検出の正確性を高めることができる。また、この発明において検査を行う体液には血液、血漿、血清、痰液、尿液、脳髄液、肋膜液、及び組織液などの各種生物性体液を含む。

また、この発明における方法は以下を含む。
１．結核菌が分泌する特異な抗原を選択する。これは結核菌遺伝子内のＲＤ１、ＲＤ２、もしくはＲＤ３などの遺伝子グループに翻訳する。
２．抗原の製造は遺伝子工程の方式によるものであって、大腸桿菌によって組替え蛋白質を生成する。
３．組替え蛋白質の抗原はRD1、RD2もしくはRD3などの遺伝子グループから転移した単一蛋白質か、もしくは融合蛋白質である。
４．選定する抗原は主にRD3遺伝子に翻訳されるＣＦＰ１０、（ｃｕｌｕｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ−１０）、ＥＳＡＴ−６、及びＣＦＰ１０／ＥＳＡＴ６（ｅａｒｌｙ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ−６）融合蛋白質である。
５．単単一株抗体と多株抗体は組替え蛋白質か、もしくはその一部を抗原とする免疫動物からせ製造する。
６．本発明においては、ａｎｔｉ―ＣＦＰ―１０、ａｎｔｉ―ＥＳＡＴ−６、ａｎｔｉ―ＣＦＰ１０／ＥＳＡＴ６の単単一株、及び多株抗体を製造する。
７．本発明における単一株、及び多株抗体は、酵素免疫分析法、蛍光免疫分析法、冷光免疫分析法、免疫ゲル法、高速免疫クロマトグラフ分析法、抗体チップなどの各種免疫検出方法に適用することができる。
８．本研究が最終的に理想とする免疫分析法は、酵素免疫分析法か、もしくは高速免疫クロマトグラフ分析法であって、一級の反応抗体を固体に吸着させ、有色物質か、もしくは酵素を他の抗体に結合させて色を有する検出用の抗体とする。
本発明は結核菌が体液内に分泌する特異な抗原を検出するものであって、該体液には血液、血漿、血清、痰液、尿液、脳髄液、肋膜液、及び組織液などの各種生物性体液を含む。
係る体液中の結核菌抗原を検出する方法について具体的な実施例を挙げて以下に説明する。ただし、以下の説明は、この発明の好ましい実施例であって、この発明の実施の範囲を限定するものではない。よって、当業者のなし得る修正、もしくは変更であって、この発明の精神の下においてなされ、この発明に対して均等の効果を有するものは、いずれもこの発明の特許請求の範囲に属するものとする。

図１から図７に開示するように、結核病の検出の正確性を高めるため、最近、結核菌の特異性抗原を検出する研究が進められてきた。研究報告によると、結核菌は感染したマウス組織においてESAT-6（early-secreted antigenic target 6-kDa protein）蛋白が現われる。この蛋白は分泌性の蛋白に属し、T細胞の免疫反応発生を引き起こす。また、esat-6遺伝子はM.tubercuiosisと、発病性のM.bovisにのみ存在する。M.bovisBCGワクチンとその他一部の非典型的な肺結核菌は、係る遺伝子を具えない。よって、ＥＳＡＴ−６の存在は、真正の結核と、ＢＣＧワクチンの接種とが異なることを区別するものであると推定することができる。

ESAT-6の表現制御の転換を正確に知るために、ある学者が分子生物の方法で発病性のM.bovisとM.bovisBCGとをに分析したところ、RD１（region of deletion １）、RD2、及びRD3の３つの領域の遺伝子が異なることを発見した。これらRDｓは、発病性のバチルス・ラモザス(Bacillus ramosus)にのみ存在し、すべてのBCGにはいずれもRDｓが存在しない。RDｓoperonは多くの遺伝子を持ち、seat-6遺伝子はRD1に位置する。これとは別にseat-6の遺伝子の起動子はseat-6遺伝子をコントロールする以外に、lbp遺伝子をもコントロールすることが発見されている。この遺伝子は他の蛋白CFP-10（culture filtrate protein）に翻訳することができる。この蛋白も分泌性の蛋白であって、T細胞によって発生する免疫反応を招く恐れがある。

この発明においては遺伝子の無性生殖の方法をESAT-6及びCFP-10の２種類の蛋白に表現し、この２種類の蛋白に対抗する単一株及び二株抗体を製造した。更に酵素免疫分析法、免疫ゲル法、免疫色層分析及び抗体チップ等を含む各種の免疫検出方法を研究開発した。これらの体外検出方法は人体の各種の体液から結核菌が分泌する特異性抗原を検出でき、診断の速度と正確性を高める。

この発明において使用する結核菌抗原は組替え蛋白のCFP-10、EAST-6、融合蛋白のCFP10/ESAT-6を含む。ポリマー酵素連鎖反応(PCR)を利用し、特異性のプライマーを結核菌上のlhp及びeast-6遺伝子に拡大する。PCRの産物をpGEM-Tキャリアに組み込み、E.coli(DH５a)に送る。次いで抗生素を具えた培養基からlhp及びesat-6遺伝子に代替できる遺伝子の単一菌を選択して滴下する。また、遺伝子の序列を決定する方法により序列が誤っていないか確認し、酵素を制限することによって遺伝子を切り落とし、接合反応を進行させ、両遺伝子を接合する。最後にlhpとesat-6とをコレクトした結核後の遺伝子と、表現キャリアpET２９bとにそれぞれ結合してE.coli（BL２１DE３）に送る。

多くの研究によって明かにされていることであるが、結核菌、BCG菌株、環境中の結核桿菌類の菌種は、同様の抗原を多く具えている。これらの抗原の多くはワクチンの設計に応用することができる。しかし、交差反応を有するため診断用の抗原として使用することができない。よって、ますます多くの研究が結核菌の特異性抗原を見つける事を課題としている。現在使用されている結核菌の純化抗原（PPD）はBCGワクチンと交差反応を起こす。よって、抗原がワクチン、或いは環境における菌株と交差反応を起こすか否かを予測することは困難である。このため、結核を診断する抗原はワクチン、或いは環境における菌株が有していない極めて高い特異性を具えていなければならない。

Ｍａｈａｉｒａｓ等の人士は、新規な生物技術で結核菌の特異性を有する抗原を定義し、遺伝子の交雑反応によって発病性の結核桿菌属と１９２５年に開発されたＢＣＧ菌株とを比較して一部の遺伝子に差異の有ることを発見した。これらＢＣＧ菌株に存在しない遺伝子はそれぞれＲＤ１、ＲＤ２、及びＲＤ３と命名された。よって、多くの研究はこれら領域から翻訳された蛋白質をワクチン、もしくは検疫診断上の抗原候補にしてきた。ＲＤ２は、更にＭＰＴ６４と称する分泌蛋白質に翻訳することができる。該蛋白質のサイズは約３２ＫＤである。多くの研究は該蛋白質がＴ細胞を刺激し、遅発性の過敏現象（delayed type hyporsonsitivity：DTHと称する）を発生させることを発見した。ＢＣＧ菌株がｍｐｔ６４遺伝子を具えないことから、ＭＴＰ６４をスキンテストの抗原とすると結核菌の感染を受けた患者と、ＢＣＧワクチンを注射した健康な人とを見分けることができる。

Ｍｐｔ６４遺伝子には、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒｖ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ１１３７Ｒａ、Ｍ．ｂｏｖｉｓＢＣＧ ｓｕｂｓｔｒａｎｓ Ｔｏｋｙｏ、Ｍｏｒｅａｕ、Ｒｕｓｓｉａｎなどの菌株が存在する。また、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ｂｏｖｉｓ ＢＣＧ ｓｕｂｓｔｒａｉｎｓ Ｇｌａｘｏ、Ｐａｓｉｅｕｒ、Ｃａｎａｄｉａｎ、Ｔｉｃｅ、Ｄａｎｉｓｈ １３３１などの菌株はｍｐｔ６４遺伝子を具えない。但し、原始的なＢＣＧ菌株（Ｐａｓｔｅｕｒ）について言えば、ＭＰＴ６４は極めて効果のあるスキンテスト抗原である。

結核菌のＲＤ１遺伝子グループにおいて、ＥＳＡＴ−６は目下最も特性が理解されている蛋白質である。あらゆるＢＣＧ菌株には、いずれもｅｓａｔ―６遺伝子を具えていない。ＥＳＡＴ−６は分泌性の蛋白質である。研究の結果ＥＳＡＴ−６は、結核菌に感染した記憶性免疫細胞を刺激して大量のＩＦＮ−γを放出することが発見されている。しかも、ＥＳＡＴ−６は結核菌において一種のＴｈ１免疫反応を引き起こす主要な抗原である。細胞学の実験によればＥＳＡＴ−６はＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、もしくはＭ．ａｖｉｕｍによって引き起こされる肺の疾患を区別することが発見されている。故にＥＳＡＴ−６は結合性の併発症状を診断する為の特異性抗原として極めて大きな潜在能力を具える。

ＲＤ１遺伝子のグループには１３個の遺伝子が含まれる。ｅｓａｔ−６がＲＤ１に位置することの他に、seat-6の遺伝子の起動子はseat-6遺伝子をコントロールする以外に、lbp遺伝子をもコントロールすることが同時に発見されている。この遺伝子は他の蛋白CFP-10に翻訳することができる。この蛋白も分泌性の蛋白である。

益々多くの研究によってＥＳＡＴ−６ファミリー（ＥＳＡＴ−６、ＣＦＰ−１０、ＴＢ１０．４）に属するグループの蛋白質は、いずれも人体の免疫反応を引き起こし、大量のＩＦＮ−γを放出する機能を有することが発見されている。また、血清テストによってこれらファミリーを構成する蛋白質は診断を行う上での特異性を増加させることができる。そこで本発明においてはＥＳＡＴ−６と、ＣＦＰ−１０蛋白質を選択して特異性抗原のスタイルとし、研究開発された試剤が結核を診断する上での新規性と、進歩性と、実用性を具えることを説明する。

本発明の抗体の製造は、多株抗体と、単一株抗体の製造と分析を包括する。結核菌抗体の多株抗体の製造と分析については、結核菌抗原免疫用として雌のニュージーランドホワイトウサギを用意し、第一次免疫は完全性の補助材を混合して定量化した抗原を皮下注射した。この後２週間毎に非完全性の補助材を混合して定量化した抗原を筋肉注射した。更に最後に注射してから２週間後にウサギの血液を大量に抽出し、抗体を具えるウサギの血清を得た。これとともに硫酸アンモニア沈殿法と、透析法で抗体をＰＢＳに保存して−２０℃の温度条件で冷凍した。ＥＬＩＳＡの方法で抗体の結合価を測定し、更に各種の抗原と共に抗体の特異性と親和性を検出し、最後に抗体を定量化した。

抗結核菌抗原の単一株抗体の製造と分析について結核菌抗原免疫用としてマウスを用意し、その脾臓を摘出し、脾臓内のリンパ球細胞と骨髄瘤細胞に対して細胞融合を行った。生成した融合瘤細胞は培養液に抗体を分泌する。極限稀釈法で融合瘤細胞を稀釈し、単一抗原の一における単一株抗体を選択し、識別した。単一の細胞株をＢａｌａ／ｃマウスの腹部に注射し、腹水を活性させた。腹水から単一株抗体を分離、純化して得た。ＥＬＩＳＡの方法で抗体の結合価を測定し、更に各種抗原と共に抗体の特異性と親和性を測定した。最後に抗体を定量化した。

この発明に用いる免疫法は、抗原抗体を結合させ反応させる方法であって、酵素免疫分析法、蛍光免疫分析法、冷光免疫分析法、放射線免疫分析法、免疫ゲル法、高速免疫クロマトグラフ分析法、免疫ブロッティン法、抗体チップなどを含む。これらのうち免疫クロマトグラフ分析法、免疫ゲル法、酵素免疫分析法、及び免疫チップ法ついて以下に説明する。

免疫クロマトグラフ分析法は安定性を有する分析方法であって、必要とする検体の体積は小さく、単一のステップだけでよく、特殊な機器を必要としない。よって極めて短時間で、且つ十分判読が十分に容易である。１球抗体をフィルムに吸着させ、蛍光物質を有する２球抗体を有色の顆粒球に標示する。検体を分析フィルム上に滴下させると、検体内の結核菌抗原が抗体に接する有色顆粒球と反応し、抗原抗体の複合物を形成する。更に毛細管拡散の原理によって該複合物を、二級抗体を吸着させた固定フェーズに移動させると、抗原抗体が接合した有色の顆粒球が固定フェーズ上に判読可能なカラーラインを形成する。

免疫ゲル法は安定性を有する分析法であって、必要とする検体の体積は小さく、単一のステップだけでよく、特殊な機器を必要としない。よって極めて短時間で、且つ十分判読が十分に容易である。検体内の抗原と、表面に菌抗体が付着したゲルとを反応させると、抗原と抗体の接合か、もしくは微小なゲルが連結することによって凝集反応が発生する。このため検体の濁りの程度が高まり、吸光度の変化によって抗原が存在するか否かを知ることができる。

酵素免疫分析法は、親和性の分離管によって純化して、結核菌に対抗する２種類の抗体を得る。１種類を固定フェーズに吸着させ、検体を加える。検体内の抗原を一級の抗体として認識し、固定フェーズに吸着させる。次いで酵素表示を有する二級抗体を加える。二級抗体は固定フェーズ上の抗原に変化し、結合反応が発生する。最後に酵素の特定の基質が有色となるため、色の濃淡によって判読する。係る方法の一級と二級抗体は、専一性を高めるために好ましくは異なる物質から製造する。

免疫チップ法は結核菌の特異な抗体を特殊な技術で電子伝導機器と組み合わせる方法である。これには例えば圧電式トランジスタ、液体伝導器、音波共振伝導器、電極、熱エネルギーもしくは光エネルギー検知装置などが含まれ、検体内の抗原と固定フェーズ上の抗体とを接合して、抗原抗体反応によって電子信号の変動を発生させる。

以上の説明をまとめると、この発明による方法は医療関係の担当者が結核の診断を行う場合に、すばやく正確に検出することができ、且つ検出の確立を高めることができる。上述するように、この発明は多くの長所と実用的価値を具え、極めて好ましい創意を有する発明といえる。しかも同様の技術の分野において同一、もしくは類似した創作、製品、などは公開されていない。よって本発明は新規性を具える。

この発明における組換え蛋白質ＥＳＡＴ−６と、ＣＦＰ−１０の製造に係る説明図である。 この発明におけるウェスタンブロッティング法で体液内のＣＦＢ−１０及びＥＳＡＴ−６の存在を検出した説明図である。 この発明における酵素結合免疫吸着法でｃｕｉｔｕｒｅ ｆｉｌｌｒａｔｅを検出し、ＰＣＲ及びｃｕｉｔｕｒｅの結果と比較した表である。 この発明における酵素結合免疫吸着法で肋膜液を検査した結果を示す説明図である。 この発明における酵素結合免疫吸着法で血清を検査した結果を示す説明図である。 この発明における酵素結合免疫吸着法で痰液を検査し、且つ抗酸性染色グラム法とｃｕｉｔｕｒｅの結果を比較した表である。 この発明による酵素結合免疫吸着法で健康な人体の血清を検査した結果を示す説明図である。

Claims (8)

1. 結核菌の分泌する特異な抗原の試剤セットと、結核菌に対抗する特異な抗原の単一株か、もしくは多株抗体の任意の一とを利用し、任意の抗原抗体結合反応法で結核菌が各種体液内に分泌する特異の抗原を検出して、検体内の結核菌の抗原を検出することを特徴とする体液中の結核菌抗原を検出する方法。
2. 前記結核菌の特異な抗原が、結核菌ＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３遺伝子グループから翻訳した任意の蛋白質、合成したＲＤｓ領域ペプチド、細胞培養または遺伝子工程などの技術で純化したものから選択される抗原の一部を含むことを特徴とする請求項１に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
3. 前記結核菌の特異な抗原の抗体がｃｕｉｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ―１０（ＣＦＰ−１０）、ｅａｌｙ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎｅ−６（ＥＡＳＴ−６）、もしくは両者が融合した蛋白質（ＣＦＰ−１０／ＥＳＡＴ−６）から派生する多株、単一株抗体であることを特徴とする請求項１に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
4. 前記抗原抗体結合反応法が酵素免疫分析法、蛍光免疫分析法、冷光免疫分析法、放射線免疫分析法、免疫ゲル法、高速免疫クロマトグラフ分析法、免疫ブロッティング法、及び抗体チップなどを含むことを特徴とする請求項１に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
5. 前記高速免疫クロマトグラフ分析法は、一級抗体をフィルムに吸着させ、蛍光物質を有する二級抗体を有色の顆粒球上に標示することを特徴とする請求項４に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
6. 前記検体が血液、血漿、血清、痰液、尿液、脳髄液、肋膜液、もしくは組織液などの各種生物性体液を含むことを特徴とする請求項１に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
7. 前記試剤セットが、
   固定フェーズの抗体であって、結核菌内のＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３遺伝子グループから翻訳される抗原であるか、もしくは合成されたペプチドであるか、を識別する能力を有するものか、
   二級抗体に酵素、蛍光、冷光、もしくは放射性物質を含む標示がなされたものか、
   組換え蛋白質と合成されたペプチドを標準品とするか、もしくは陽性制御用とするもの、の内の任意の一を含むことを特徴とする請求項１に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
8. 前記試剤セットが固定フェーズの抗体であって、
   結核菌のＲＤ１、ＲＤ２、ＲＤ３遺伝子グループから翻訳される抗原であるか、合成されたペプチドであるか、を識別する能力を具え、
   該抗体を固定する材料が有色の顆粒球か、ｇｏｌｄ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ粒か、磁性顆粒から選択され、
   圧電式トランジスタ、表面マイクロウェーブ音声変換器、電極、半導体、あるいは任意の光電転換器である生物検出転換器を利用し、
   組換え蛋白質と合成されたペプチドを標準品とするか、もしくは陽性制御用とすることを特徴とする請求項１に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。