JP4419020B2 - 体液中の結核菌抗原を検出する方法 - Google Patents
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先ず、皮膚のテスト(Skin test)が挙げられる。これは結核を検出する最も一般的な初期の診断方法。下膊に約0.1mlの結核菌の純化抗原(Tuberculin purified protein derivate:PPDと称する)を皮下注射する。注射の48〜72時間後、皮膚が腫れる。この方法は陽性の患者が結核菌に感染したことがあることを検出する。活動性の結核病(active TB)であるかどうかを判断する場合には、レントゲン検査及びその他の診断方法を合わせて行わなければならない。結核のスキンテストにおける敏感度は約65%である。
1.結核菌が分泌する特異な抗原を選択する。これは結核菌遺伝子内のRD1、RD2、もしくはRD3などの遺伝子グループに翻訳する。
2.抗原の製造は遺伝子工程の方式によるものであって、大腸桿菌によって組替え蛋白質を生成する。
3.組替え蛋白質の抗原はRD1、RD2もしくはRD3などの遺伝子グループから転移した単一蛋白質か、もしくは融合蛋白質である。
4.選定する抗原は主にRD3遺伝子に翻訳されるCFP10、(culuture filtrated protein−10)、ESAT−6、及びCFP10/ESAT6(early secreting antigen−6)融合蛋白質である。
5.モノクローナル抗体とポリクローナル抗体は組替え蛋白質か、もしくはその一部を抗原とする免疫動物から製造する。
6.本発明においては、anti―CFP―10、anti―ESAT−6、anti―CFP10/ESAT6のモノクローナル抗体、及びポリクローナル抗体を製造する。
7.本発明におけるポリクローナル抗体、及びポリクローナル抗体は、酵素免疫分析法、蛍光免疫分析法、冷光免疫分析法、免疫ゲル法、高速免疫クロマトグラフ分析法、抗体チップなどの各種免疫検出方法に適用することができる。
8.本研究が最終的に理想とする免疫分析法は、酵素免疫分析法か、もしくは高速免疫クロマトグラフ分析法であって、一級の反応抗体を固体に吸着させ、有色物質か、もしくは酵素を他の抗体に結合させて色を有する検出用の抗体とする。
本発明は結核菌が体液内に分泌する特異な抗原を検出するものであって、該体液には血液、血漿、血清、痰液、尿液、脳髄液、肋膜液、及び組織液などの各種生物性体液を含む。
係る体液中の結核菌抗原を検出する方法について具体的な実施例を挙げて以下に説明する。ただし、以下の説明は、この発明の好ましい実施例であって、この発明の実施の範囲を限定するものではない。よって、当業者のなし得る修正、もしくは変更であって、この発明の精神の下においてなされ、この発明に対して均等の効果を有するものは、いずれもこの発明の特許請求の範囲に属するものとする。
Claims (2)
- 結核菌の分泌する特異な抗原であるESAT−6及びCFP−10を検出するための試剤セットと、上記特異な抗原のモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体の任意の一とを利用し、酵素免疫分析法で結核菌が各種体液内に分泌する特異の抗原を検出して、検体内の結核菌の抗原を検出する体液中の結核菌抗原を検出する方法であって、
上記試剤セットが、上記ESAT−6及びCFP−10から翻訳される抗原を識別する能力を有し、固定フェーズの抗体と、第2抗体に酵素を含む標識がなされた抗体の2種類の抗体を有し、
上記酵素免疫分析法において、上記試剤セットの上記固定フェーズの抗体に上記検体を加え、該検体内の抗原を第1抗体として認識して、上記固定フェーズに吸着させ、次いで、上記酵素標識を有する第2抗体を加えて、該酵素の特定の基質の色の濃淡によって判読して、ESAT−6及びCFP−10を検出する、
ことを特徴とする体液中の結核菌抗原を検出する方法。 - 前記検体が、血液、血漿、血清、痰液、尿液、脳髄液、肋膜液、もしくは組織液などの各種生物性体液を含むことを特徴とする請求項1に記載の体液中の結核菌抗原を検出する方法。
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