JP2008507253A5

JP2008507253A5 -

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Publication number: JP2008507253A5
Application number: JP2006551695A
Authority: JP
Filing date: 2005-02-04
Publication date: 2008-04-24

Description

[00083] さらなる実施態様は、ＮＹＲ−１００２のＶ_Ｈ及びＶ_Ｋ領域内に同定されるＣＤＲのアミノ酸配列及びそれに対応する核酸配列：軽鎖のＣＤＲ１（配列番号４４）、ＣＤＲ２（配列番号４５）及びＣＤＲ３（配列番号４６）、ならびに重鎖のＣＤＲ１（配列番号４７）、ＣＤＲ２（配列番号４８）及びＣＤＲ３（配列番号４９）、を提供する。しかしながら、これらのＣＤＲのアミノ酸配列を、修飾してもよい。各ＣＤＲのアミノ酸配列を、アミノ酸置換、挿入及び／または欠失によって好ましくは１０％まで、より好ましくは２０％まで、より好ましくは３０％まで、そしてよりいっそう好ましくは４０％まで、変化させてもよいが、但し、該アミノ酸配列を含んでなる結果として得られるヒト化抗体が結合標的に対してその結合特異性を維持する。したがって、各ＣＤＲは、１、２またはそれより多くのアミノ酸置換、挿入及び／または欠失を含んでもよい。好ましくは、各ＣＤＲのアミノ酸配列は、本発明に開示される特定のＣＤＲの配列と実質的には相同性である。当業者は、特定のアミノ酸配列の列挙が、配列の活性及び有用性が実質的に保持される限り、その列挙内にこれらの修飾のすべてを本質的に含むことを理解するであろう。

[000149] 別の実施態様には、可変重鎖配列または可変軽鎖配列のいずれか、あるいは双方を含んでなるキメラ抗体が含まれる。好ましくは、該キメラ抗体は、ｃｈＮＹＲ−１００２である。

[000152] 特に好ましいヒト化抗体またはフラグメントには、軽鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）及び重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）が以下のアミノ酸配列を有する、ＡＦ−２０と結合するものが含まれる：
軽鎖：
ＣＤＲ１（配列番号４４）［ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４５）［ＹＡＳＥＳＩＳ］；及び、
ＣＤＲ３（配列番号４６）［ＱＱＳＳＳＷＰＦＴ］；
重鎖：
ＣＤＲ１（配列番号４７）［ＧＹＴＦＡＧＨＹＶＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４８）［ＷＩＦＰＧＫＶＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ］；及び、
ＣＤＲ３（配列番号４９）［ＶＧＹＤＹＰＹＹＦＤＹ］。

[000155] 本明細書に記載されるヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント（「ｈｕｍｏＡｂ」）は、好ましくは、ｈｕｍｏＡｂが由来する抗体の少なくとも１０％の、ＡＦ−２０に対する抗原結合親和性を有する。特に好ましいｈｕｍｏＡｂは、ヒト化可変重鎖配列またはヒト化可変軽鎖配列のいずれか、あるいは双方を、含んでなる。

[000156] さらなる実施態様には、１またはそれより多くの以下のポリペプチドを含んでなるポリペプチド配列が、含まれる：
配列番号４７［ＧＹＴＦＡＧＨＹＶＨ］；
配列番号４８［ＷＩＦＰＧＫＶＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ］；
配列番号４９［ＶＧＹＤＹＰＹＹＦＤＹ］；
配列番号４４［ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ］；
配列番号４５［ＹＡＳＥＳＩＳ］；及び／または、
配列番号４６［ＱＱＳＳＳＷＰＦＴ］。

[000157] 本明細書に記載される実施態様には、上述の抗体、ポリペプチドまたは抗体フラグメント、及びその任意のフラグメント、バリアントまたは誘導体をコードするＤＮＡもまた含まれる。好ましくは、該ＤＮＡ分子は、抗体またはフラグメントがそれによって特異的にＡＦ−２０と結合する、ヒト化抗体またはそのフラグメントのアミノ酸配列をコードし、ここで、軽鎖可変領域のＣＤＲ及び重鎖可変領域のＣＤＲは、以下のアミノ酸配列を有している：
軽鎖：
ＣＤＲ１（配列番号４４）［ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４５）［ＹＡＳＥＳＩＳ］；及び、
ＣＤＲ３（配列番号４６）［ＱＱＳＳＳＷＰＦＴ］；
重鎖：
ＣＤＲ１（配列番号４７）［ＧＹＴＦＡＧＨＹＶＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４８）［ＷＩＦＰＧＫＶＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ］；及び、
ＣＤＲ３（配列番号４９）［ＶＧＹＤＹＰＹＹＦＤＹ］。

[000158] 実施態様には、上述のｈｕｍｏＡｂの軽鎖または重鎖のいずれかをコードするＤＮＡ分子もまた含まれる。好ましいＤＮＡ分子は、抗体またはフラグメントがそれによって特異的にＡＦ−２０と結合する、ヒト化抗体またはそのフラグメントのアミノ酸配列をコードし、ここで、軽鎖可変領域のＣＤＲは、以下のアミノ酸配列を有している：
ＣＤＲ１（配列番号４４）［ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４５）［ＹＡＳＥＳＩＳ］；及び、
ＣＤＲ３（配列番号４６）［ＱＱＳＳＳＷＰＦＴ］。

[000159] 別の好ましいＤＮＡ分子は、抗体またはフラグメントの重鎖をコードし、ここで、重鎖ＣＤＲのヌクレオチド配列は以下のとおりである：
ＣＤＲ１（配列番号４７）［ＧＹＴＦＡＧＨＹＶＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４８）［ＷＩＦＰＧＫＶＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ］；及び、
ＣＤＲ３（配列番号４９）［ＶＧＹＤＹＰＹＹＦＤＹ］。

[000178] ＮＹＲ−１００２重鎖Ｖ領域のＤＮＡおよびアミノ酸配列を図１に示した。第一バッチの細胞からは、有益な（productive）重鎖遺伝子は単離されなかった。第二バッチからは、１５の独立したクローンが、同一の完全な重鎖配列を与えた。ＣＤＲの位置は、他の抗体配列を参照して決定した（Kabat EA et al., 1991）。ＣＤＲは、配列番号４７（ＣＤＲ１）、４８（ＣＤＲ２）および４９（ＣＤＲ３）で与えられる。ＮＹＲ−１００２Ｖ_Ｈアミノ酸配列を、マウス重鎖サブグループＩＩＢについてのコンセンサス配列と比較し、そしてそのサブグループに割り当てた。

[000179] ＮＹＲ−１００２軽鎖Ｖ領域のＤＮＡおよびアミノ酸配列を図２に示した。各バッチの細胞からの５つのクローンは同一の配列を与えた。ＣＤＲの位置は、他の抗体配列を参照して決定した（Kabat EA et al., 1991）。ＣＤＲは、配列番号４４（ＣＤＲ１）、４５（ＣＤＲ２）および４６（ＣＤＲ３）で与えられる。ＮＹＲ−１００２Ｖ_Ｈアミノ酸配列を、マウスカッパ鎖サブグループＶについてのコンセンサス配列と比較し、そしてそのサブグループに割り当てた。

[00036] 図１は、ＮＹＲ−１００２Ｖ_Ｈ鎖のＤＮＡ（配列番号１）及びアミノ酸配列（現れる順に、それぞれ、配列番号２及び３）を、その中に同定された四つのＦＲ及び三つのＣＤＲとともに示す。 [00037] 図２は、ＮＹＲ−１００２可変軽鎖のＤＮＡ（配列番号４）及びアミノ酸配列（現れる順に、それぞれ、配列番号５および６）を、その中に同定された四つのＦＲ及び三つのＣＤＲとともに示す。 [00038] 図３は、抗体重鎖の発現ベクターを示す。 [00039] 図４は、抗体軽鎖の発現ベクターを示す。 [00040] 図５は、ＮＹＲ−１００２の重鎖及び軽鎖可変領域において同定された潜在的なヒトＴ細胞エピトープを示す（現れる順に、それぞれ、配列番号７〜２３）。 [00041] 図６は、ＮＹＲ−１００２のＶ_Ｈ領域のバリアントにおいて創出されたアミノ酸変化及び潜在的なエピトープを示す。 [00041] 図６は、ＮＹＲ−１００２のＶ_Ｈ領域のバリアントにおいて創出されたアミノ酸変化及び潜在的なエピトープを示す。表２は、現れる順に、それぞれ、配列番号２４〜３１を開示する。 [00042] 図７は、ＮＹＲ−１００２のＶ_Ｋ領域のバリアントにおいて創出されたアミノ酸変化及び潜在的なエピトープを示す。 [00042] 図７は、ＮＹＲ−１００２のＶ_Ｋ領域のバリアントにおいて創出されたアミノ酸変化及び潜在的なエピトープを示す。表２は、現れる順に、それぞれ、配列番号３２〜３７を開示する。 [00043] 図８は、第一のＮＹＤＩＶＨ１のＤＮＡ（配列番号３８）及びアミノ酸配列（現れる順に、それぞれ、配列番号３９及び４０）を示す。 [00044] 図９は、ＮＹＲ−１００２Ｖ_Ｋの第一バリアントであるＮＹＤＩＶＫ１のＤＮＡ（配列番号４１）及びアミノ酸配列（現れる順に、それぞれ、配列番号４２及び４３）を示す。 [00045] 図１０：産生された修飾抗体、及び１リットルの培養上清から得られたプロテインＡ精製抗体の収量を、示す。 [00046] 図１１：ヒトＴ細胞アッセイにおける、ＮＹＤＩＶＨ２／ＮＹＤＩＶＫ２抗体及びＮＹＲ−１００２マウス抗体に対する２０名のドナーの応答。

Claims

ＡＦ−２０と結合可能な抗体の重鎖または軽鎖可変領域由来の抗原結合領域を含んでなる、組換え抗体分子。
ＡＦ−２０と結合する非ヒト抗体から得られた可変領域およびヒト定常領域を含んでなるキメラ抗体。
ＡＦ−２０と結合するネズミ抗体から得られた可変領域およびヒト定常領域を含んでなる、請求項２に記載のキメラ抗体。
ネズミ抗体がハイブリドーマ細胞株ＡＴＣＣ指定ＨＢ９６８６により産生されるネズミモノクローナル抗体（ｍｏＡｂ）であり、およびヒト定常領域の、請求項３に記載のキメラ抗体。
キメラ抗体ｃｈＮＹＲ−１００２。
ＡＦ−２０と結合するヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントであって、ＡＦ−２０を結合する非ヒト抗体に由来する、前記ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント（ｈｕｍｏＡｂ）が、ＡＦ−２０を結合するネズミモノクローナル抗体（ｍｏＡｂ）に由来する、請求項６に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
ｈｕｍｏＡｂが、ハイブリドーマ細胞株ＡＴＣＣ指定ＨＢ９６８６により産生されるネズミｍｏＡｂに由来する、請求項７に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
ヒト化抗体ｈｕＮＹＲ−１００２。
ＡＦ−２０と結合する非ヒト抗体から得られた相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸残基およびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）アミノ酸残基を含んでなる、ＡＦ−２０を結合するヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸残基が、ＡＦ−２０を結合するネズミｍｏＡｂから得られる、請求項１０に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
ＡＦ−２０と結合するネズミｍｏＡｂがハイブリドーマ細胞株ＡＴＣＣ指定ＨＢ９６８６により産生され、およびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）アミノ酸残基の、請求項１１に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
ＡＦ−２０を結合するヒト化抗体またはそのフラグメントであって、軽鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）ならびに重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）が、以下のアミノ酸配列：
軽鎖：
ＣＤＲ１（配列番号４４）［ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ］
ＣＤＲ２（配列番号４５）［ＹＡＳＥＳＩＳ］
ＣＤＲ３（配列番号４６）［ＱＱＳＳＳＷＰＦＴ］
重鎖：
ＣＤＲ１（配列番号４７）［ＧＹＴＦＡＧＨＹＶＨ］
ＣＤＲ２（配列番号４８）［ＷＩＦＰＧＫＶＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ］
ＣＤＲ３（配列番号４９）［ＶＧＹＤＹＰＹＹＦＤＹ］
を含んでなる、前記ヒト化抗体およびそのフラグメント。
ヒトフレームワーク領域（ＦＲ）において、１またはそれより多くのアミノ酸の付加、置換または欠失がなされている、請求項１３に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
可変領域において同定された潜在的なヒトヘルパーＴ細胞エピトープがアミノ酸残基の置換、付加または欠失により除去されている、請求項１３に記載のヒト化抗体またはフラグメント。
抗体が、ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントが由来する抗体のＡＦ−２０に対する抗原結合親和性の少なくとも１０％のＡＦ−２０に対する抗原結合親和性を有する、請求項６に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメント。
請求項１３に記載のヒト化抗体またはフラグメントのアミノ酸配列をコードするＤＮＡ分子。
請求項６に記載の抗体の軽鎖またはフラグメントをコードするＤＮＡ分子。
軽鎖ＣＤＲのヌクレオチド配列が以下：
ＣＤＲ１（配列番号４４）［ＲＡＳＱＳＩＧＴＳＩＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４５）［ＹＡＳＥＳＩＳ］；および
ＣＤＲ３（配列番号４６）［ＱＱＳＳＳＷＰＦＴ］
である、請求項１８に記載のＤＮＡ分子。
配列番号６に記載の抗体の重鎖またはフラグメントをコードするＤＮＡ分子。
重鎖ＣＤＲのヌクレオチド配列が以下：
ＣＤＲ１（配列番号４７）［ＧＹＴＦＡＧＨＹＶＨ］；
ＣＤＲ２（配列番号４８）［ＷＩＦＰＧＫＶＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ］；および
ＣＤＲ３（配列番号４９）［ＶＧＹＤＹＰＹＹＦＤＹ］
である、請求項２０に記載のＤＮＡ分子。
発現ベクターの形である、請求項１７に記載のＤＮＡ分子。
請求項２２に記載の発現ベクターで形質転換された宿主。
請求項１３に記載の抗体または抗体フラグメントの軽鎖および重鎖をコードする組換え発現系を含んでなる宿主細胞。
請求項２に記載のキメラ抗体を産生するハイブリドーマ細胞株。
請求項６に記載のヒト化抗体または抗体フラグメントを産生するハイブリドーマ細胞株。
癌を治療するための組成物であって、治療有効量の請求項６に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントを含んでなる、前記組成物。
ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントが、直接的または間接的に、治療活性を有するエフェクター部分と付随または連結している、請求項２７に記載の組成物。
エフェクター部分が、抗癌剤、化学療法剤、細胞毒素、放射性核種、治療用酵素、プロドラッグ、サイトカイン、抗増殖剤、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項２８に記載の組成物。
放射性核種が、^３２Ｐ、^４７Ｓｃ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^１０５Ｒｈ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１１７ｍＳｎ、^１５３Ｓｍ、^１６６Ｄｙ、^１７５Ｙｂ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１９４Ｏｓ、^２１１Ａｔ、^２１２Ｂｉ、^２１３Ｂｉ、^２２５Ａｃ、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項２９に記載の組成物。
ＡＦ−２０を発現している癌を有する哺乳動物を治療するための組成物であって、治療有効量の請求項２７に記載の組成物を含んでなる、前記組成物。
癌を検出するための組成物であって、診断上有効量の請求項６に記載のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントを含んでなる、前記組成物。
ヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントが、直接的または間接的に、検出可能な標識に付随または連結している、請求項３２に記載の組成物。
検出可能な標識が、放射性核種、蛍光剤、酵素、酵素基質、酵素補助因子、酵素阻害剤、リガンド、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項３３に記載の組成物。
放射性核種が、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^１８Ｆ、^６４Ｃｕ、^７６Ｂｒ、^８６Ｙ、^９９ｍＴｃ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１７７Ｌｕ、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
ＡＦ−２０を発現している癌細胞の免疫検出のための方法であって、癌細胞を請求項３２に記載の組成物と接触させることを含んでなる、前記方法。
組成物のヒト化抗体またはヒト化抗体フラグメントが固体担体に結合されている、請求項３６に記載の方法。
哺乳動物におけるＡＦ−２０を発現している癌細胞の免疫検出するための組成物であって、診断上有効量の請求項３２に記載の組成物を含んでなる、前記組成物。