JP2020504087A - ４−１ｂｂ結合タンパク質及びその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）に特異的に結合する結合タンパク質に関する。より具体的には、ヒト４−１ＢＢに特異的に結合する抗体に関する。このような結合タンパク質は、４−１ＢＢのレベル又は活性を変えることで癌などの疾患を治療又は予防できる。

Description

本願は、２０１６年１１月２３日に提出した米国特許出願６２／４２６,０７４の優先権を主張し、その全内容を引用により本願に組み込める。

本開示は、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）結合タンパク質及びこれらの使用に関し、特に複数種の疾患の治療に関する。

癌免疫療法は、Ｔ細胞の制御メカニズム（チェックポイント）を克服することによって抗腫瘍応答を増強させる。４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）タンパク質受容体は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞や樹状細胞などのさまざまな免疫細胞に見られる。４−１ＢＢは、細胞傷害性Ｔ細胞応答を増強させることが示されている。総説については、Ｙｏｎｅｚａｗａら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ,２１：３１１３−２０（２０１５）を参照すればよい。

本開示は、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）結合タンパク質に関する。本開示に係る結合タンパク質は、抗体、抗原結合部分及びヒト４−１ＢＢに結合可能なほかの抗原結合タンパク質を含むが、これらに限定されない。また、本開示は、４−１ＢＢ結合タンパク質を製造する方法、及び、４−１ＢＢ結合タンパク質を用いて癌などの疾患を治療する方法を提供する。

本明細書は、ヒト４−１ＢＢに結合して、免疫細胞の数の増加を刺激する複数種のヒト４−１ＢＢ抗体を開示する。これら抗体は、自体により強化された抗腫瘍免疫機能を提供する。これら抗体は、さらに、Ｔ細胞機能を阻害する免疫チェックポイントの阻害剤（即ちＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１ ｍＡｂ）と相乗作用することができる。

一実施形態において、本開示は、４−１ＢＢに結合可能な結合タンパク質に関する。別の実施形態において、結合タンパク質は、ヒト４−１ＢＢに結合する。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢの１種又は複数種の生物学的機能を調整できる。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢを中和できる。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢを中和しない。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合して、４−１ＢＢとほかの結合標的との結合を阻害できる。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢのアゴニストとして利用できる。

本開示の一実施形態は、単離抗体又はほかの抗原結合断片を提供し、前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒト４−１ＢＢに結合して細胞における４−１ＢＢとその結合パートナーとの結合を阻害する。別の実施形態において、５０ｎＭ ４−１ＢＢの濃度では、開示された抗体のＥＣ５０は、１０^−６Ｍ、１０^−７Ｍ、１０^−８Ｍ、１０^−９Ｍ又は１０^−１０Ｍである。

別の実施形態において、結合タンパク質は、単離抗体である。別の実施形態において、本開示は、単離抗体又はその抗原結合断片を提供し、前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒト４−１ＢＢに結合して、４−１ＢＢのレベル及び／又は活性を調整する。一態様では、治療有効量の前記抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すると、前記抗体又はその抗原結合断片は、４−１ＢＢを発現させる細胞における４−１ＢＢの活性を約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％抑制する。別の態様では、治療有効量の前記抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すると、前記抗体又はその抗原結合断片は、４−１ＢＢを発現させる細胞における４−１ＢＢのレベルを約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％低下させる。別の態様では、治療有効量の前記抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すると、前記抗体又はその抗原結合断片は、４−１ＢＢを発現させる細胞における４−１ＢＢの活性を約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％強化させる。

一実施形態において、表面プラズモン共鳴により測定した結果、本開示の結合タンパク質と４−１ＢＢは、少なくとも約１０^２Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^３Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^４Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^５Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^６Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^７Ｍ^−１ｓ^−１又は少なくとも約１０^８Ｍ^−１ｓ^−１のオン速度定数（ｋ_ｏｎ）を有する。

別の実施形態において、表面プラズモン共鳴により測定した結果、本開示の結合タンパク質と４−１ＢＢは、多くとも約１０^−３ｓ^−１、多くとも約１０^−４ｓ^−１、多くとも約１０^−５ｓ^−１、多くとも約１０^−６ｓ^−１、多くとも約１０^−７ｓ^−１又は多くとも約１０^−７ｓ^−１のオフ速度定数（ｋ_ｏｆｆ）を有する。

別の実施形態において、本開示の結合タンパク質と４−１ＢＢは、多くとも約１０^−７Ｍ、多くとも約１０^−８Ｍ、多くとも約１０^−９Ｍ、多くとも約１０^−１０Ｍ、多くとも約１０^−１１Ｍ、多くとも約１０^−１２Ｍ又は多くとも約１０^−１３Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

一実施形態において、ヒト４−１ＢＢに特異的に結合可能な結合タンパク質が開示されており、前記結合タンパク質は、抗原結合ドメインを含み、且つ、前記抗原結合ドメインは、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３の６種類のＣＤＲを含み、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０からなる群より選ばれる。

別の実施形態において、６種類のＣＤＲのうち、３種類は、下記ＣＤＲセットからなる可変ドメインＣＤＲセットからなる群より選ばれる。
ＶＨ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
ＶＬ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
ＶＨ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
ＶＬ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
ＶＨ ＺＷ１０５ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５
ＶＬ ＺＷ１０５ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８
ＶＨ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１
ＶＬ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４
ＶＨ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７
ＶＬ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０。

別の実施形態において、結合タンパク質は、ＶＨ ＺＷ１０３ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット、ＶＨ ＺＷ１０４ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット、ＶＨ ＺＷ１０５ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０５ ＣＤＲセット、ＶＨ ＺＷ１０６ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット、及びＶＨ ＺＷ１０７ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０７ ＣＤＲセットからなる群より選ばれる少なくとも２種の可変ドメインＣＤＲセットを含む。

別の実施形態において、本明細書に開示された結合タンパク質はさらにヒトＦｃ領域を含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なヒト抗体又はその抗原結合部分である。

別の実施形態において、本明細書に開示された結合タンパク質は、ヒト受容体フレームワークをさらに含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分である。別の実施形態において、ＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された１種又は複数種のＣＤＲを含む。別の実施形態において、ＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分は、ヒト受容体フレームワークを含む。

別の実施形態において、開示された結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なヒト化抗体又はその抗原結合部分である。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、以上開示された１種又は複数種のＣＤＲを含み、ヒト受容体フレームワークのヒト抗体可変ドメインに組み込まれる。別の実施形態において、ヒト抗体可変ドメインは、コンセンサスヒト可変ドメインである。

別の実施形態において、ヒト受容体フレームワークは、キー残基での少なくとも１つのフレーム領域アミノ酸置換を含み、前記キー残基は、ＣＤＲに隣接する残基、グリコシル化部位残基、希少残基、ヒト４−１ＢＢと相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基、Ｖｅｒｎｉｅｒ領域における残基、及びＣｈｏｔｈｉａで定義された可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔで定義された第１重鎖ワークフレームとの間のオーバーラップ領域における残基を含む。

実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なヒト化抗体又はその抗原結合部分である。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された１種又は複数種のＣＤＲを含む。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された３種類以上のＣＤＲを含む。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された６種類のＣＤＲを含む。

別の実施形態において、結合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．： １〜１０からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する可変ドメインを少なくとも１種含む。

別の実施形態において、結合タンパク質は、少なくとも１種の重鎖可変ドメイン及び少なくとも１種の軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、３、５、７、９、５２及び５６からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、４、６、８、１０、５３及び５７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態において、結合タンパク質は、下記可変ドメインセットからなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する２種の可変ドメインを含んでもよい。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と４、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５と６、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７と８、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９と１０、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２と５３、又は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６と５７。

一実施形態において、本開示は、以上開示されたいずれか１種の結合タンパク質及びリンカーポリペプチド又は免疫グロブリンを含む抗体構築物を提供する。別の実施形態において、抗体構築物は、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、完全ヒト抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異抗体（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）及び二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）からなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記抗体構築物は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群より選ばれる重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示された抗体構築物及び薬剤を含む抗体コンジュゲートを提供し、前記薬剤は、免疫接着分子、造影剤、治療薬、及び細胞傷害剤からなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記造影剤は、放射性マーカー、酵素、蛍光マーカー、発光マーカー、生物発光マーカー、磁気マーカー、及びビオチンからなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記造影剤は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏ、及び^１５３Ｓｍからなる群より選ばれる下記放射性マーカーである。別の実施形態において、治療薬又は細胞傷害剤は、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素、及び抗アポトーシス剤からなる群より選ばれる。

別の実施形態において、抗体構築物はグリコシル化される。別の実施形態において、前記グリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンである。

別の実施形態において、本明細書に開示された結合タンパク質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートは、結晶として存在している。別の実施形態において、前記結晶は、無担体医薬放出制御結晶である。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲートは、インビボにおいて可溶性対応物よりも長い半減期を有する。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲートは、結晶化後に生物学的活性を保留する。

一態様によれば、結合タンパク質は、多重特異性抗体、二重特異抗体（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）及び二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）であってもよい。このような抗体構築物は、本分野において公知するものであり、且つ、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（ｅｄ．）,Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ,ＮＹ（２０１１）、及びＳｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２）：９６−１０６（２０１５）において説明してキャラクタリゼーションしたとおりである。このような二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）構築物は、４−１ＢＢ及び第２標的に結合可能な１つ又は複数の結合ドメインを含む。一実施形態において、前記第２標的は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体、ＣＳＦ１、ＭＣＳＦ、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３ （ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ１、ＩＦＮγ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２α、ＩＬ−１２β、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒα、ＩＬ−８Ｒα、ＩＬ−８Ｒβ、ＩＬ−１２Ｒβ１、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＧＤＦ１１Ｒα１、ＧＤＦ１１Ｒα２、ＩＬ−１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、及びＬＴＢＲからなる群より選ばれる。

別の実施形態において、本開示では、以上開示された結合タンパク質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートのうちのいずれか１種をコーディングする単離核酸に関する。さらなる一実施形態は、以上開示された単離核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターは、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００２,Ｖｏｌ ３０,Ｎｏ．２）、ｐＴＴ３（追加したマルチクローニングサイトを含むｐＴＴ、ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ,Ｓ及びＮａｇａｔａ,Ｓ．,（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ １８,Ｎｏ．１７）、ｐＢＶ、ｐＪＶ、及びｐＢＪからなる群より選ばれる。

一実施形態において、宿主細胞が以上開示されたベクターで形質転換される。別の実施形態において、前記宿主細胞は、原核細胞である。別の実施形態において、前記宿主細胞は、大腸菌である。別の実施形態において、前記宿主細胞は、真核細胞である。別の実施形態において、前記真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、及び真菌細胞からなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記宿主細胞は、ＣＨＯ及びＣＯＳを含むがこれらに限定されない哺乳動物細胞、又はサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞、又はＳｆ９などの昆虫細胞である。

別の実施形態において、４−１ＢＢに結合する結合タンパク質を産生する方法を提供する。前記方法は、４−１ＢＢに結合する結合タンパク質の産生に十分な条件下で、培地において以上開示されたいずれか１種の宿主細胞を培養することを含む。別の実施形態において、以上開示された方法により産生される結合タンパク質を提供する。
別の実施形態において、結合タンパク質を放出する組成物が開示されており、前記組成物は、製剤及び少なくとも１種の重合体担体を含み、前記製剤はさらに、以上開示された結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲート、及び成分を含む。別の実施形態において、前記重合体担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）又はＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール（ｐｌｕｒｏｎｉｃ ｐｏｌｙｏｌ）、アルブミン、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖、及びそれらのブレンドと共重合体からなる群より選ばれる１種又は複数種の重合体である。別の実施形態において、前記成分は、アルブミン、蔗糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール、及びポリエチレングリコールからなる群より選ばれる。

別の実施形態において、前記哺乳動物に本明細書に開示された組成物を有効量で投与するステップを含む哺乳動物の治療方法が開示されている。

本開示は、本明細書に開示された結合タンパク質、抗体構築物又は抗体コンジュゲート及び薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態において、前記医薬組成物は、４−１ＢＢ活性が有害となる障害を治療するための少なくとも１種の別の治療薬を含む。別の実施形態において、別の薬剤は、次の薬剤からなる群より選ばれ、すなわち、治療薬、造影剤、細胞傷害剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体又はＶＥＧＦトラップ（ＶＥＧＦ−ｔｒａｐ）を含むが、これらに限定されない）；キナーゼ阻害剤（ＫＤＲ及びＴＩＥ−２阻害剤を含むが、これらに限定されない）；共刺激分子ブロッカー（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−１ｇ、抗ＣＤ２０を含むが、これらに限定されない）；接着分子ブロッカー（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤を含むが、これらに限定されない）；抗サイトカイン抗体又はその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体を含むが、これらに限定されない）；メトトレキセート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能なマーカー又はレポーター；ＴＮＦ拮抗薬；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬（ｎａｒｃｏｔｉｃ）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬（ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ）、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫剤、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬、抗うつ薬、抗精神病薬、覚醒剤、喘息治療薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリン又は類似体、サイトカイン、及びサイトカイン拮抗薬などが挙げられる。

一態様によれば、本開示は、ヒト４−１ＢＢと本明細書に開示された結合タンパク質とを接触させて、ヒト４−１ＢＢを活性化させるステップを含むヒト４−１ＢＢの活性を活性化させる方法を提供している。

別の態様では、本開示は、対象における４−１ＢＢ関連障害を治療（例えば、治癒、抑制、改善、遅延又は発症又は再発又は逆戻りの予防）又は予防する方法を提供する。前記方法は、前記４−１ＢＢ関連障害を治療又は予防するのに十分な量の４−１ＢＢ結合剤、例えば本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片を前記対象に投与するステップを含む。４−１ＢＢ結合タンパク質を対象に単独で投与又は本明細書に記載のほかの治療方式、例えば抗４−１ＢＢ抗体又はその断片と組み合わせて投与することができる。

一実施形態において、対象は、哺乳動物、例えば１種又は複数種の４−１ＢＢ関連障害に罹患する人間であり、前記障害（疾患）は、例えば、本明細書に記載の呼吸器疾患（例えば、喘息（例えばアレルギー性及び非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び気道炎症、好酸球増加症、線維症及び粘液の過剰な産生に関するほかの状態、アトピー性疾患（例えば、アトピー性皮膚炎及びアレルギー性鼻炎）、皮膚の炎症性及び／又は自己免疫障害、胃腸器官の炎症性及び／又は自己免疫障害（例えば、潰瘍性結腸炎及び／又はクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、ならびに、肝臓の炎症性及び／又は自己免疫障害（例えば、肝硬変、線維症）、強皮症、ホジキンリンパ腫などの腫瘍又は癌を含む。したがって、本開示は、４−１ＢＢ結合剤（本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片など）の本明細書に記載の治療における使用、及び１ＢＢ複合剤（本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片など）の本明細書に記載の治療のための医薬の調製における使用を含む。４−１ＢＢ関連障害の例は、本明細書に記載の癌を含むが、これらに限定されない。

別の態様では、本願は、サンプル（例えば、生物サンプル、例えば血清、プラズマ、組織や生検切片）における４−１ＢＢの存在をインビトロで検出する方法を提供する。かかる方法は、障害の診断に利用できる。前記方法はステップ（ｉ）とステップ（ｉｉ）を含み、（ｉ）サンプル又は対照サンプルと本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片とを接触させ、（ｉｉ）抗４−１ＢＢ抗体又はその断片とサンプル又は対照サンプルとの複合体の形成を検出し、ここで、対照サンプルに対する、前記サンプルにおける複合体形成の統計学的に有意な変化が前記サンプルにおける４−１ＢＢの存在を示している。

別の態様では、本願は、４−１ＢＢの存在をインビボ（例えば、在対象の体内でイメージング）で検出する方法を提供する。かかる方法は、障害、例えば４−１ＢＢ関連障害の診断に用いられる。前記方法は、ステップ（ｉ）とステップ（ｉｉ）を含み、（ｉ）本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片と４−１ＢＢとの結合を許可する条件下で、前記抗体又は断片を対象又は対照対象に投与し、（ｉｉ）抗前記抗体又は断片と４−１ＢＢとの複合体の形成を検出し、ここで、対照対象に対する、前記対象における複合体形成の統計学的に有意な変化が４−１ＢＢの存在を示している。

別の態様では、本開示に係る結合タンパク質は、下記障害からなる群より選ばれる障害を治療でき、すなわち、サラセミア、ベータサラセミア、貧血、鉄欠乏性貧血、プランマー・ビンソン症候群、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、タンパク質欠乏性貧血、壊血病、有棘赤血球増加症、アルファサラセミア、再生不良性貧血、先天性赤血球形成異常性貧血、溶血性貧血、ファンコーニ貧血、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性熱変形赤血球症（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｐｙｒｏｐｏｉｌｉｋｏｃｙｔｏｓｉｓ）、寒冷凝集素症、溶血性尿毒症症候群、充血（ｈｙｐｅｒａｎｅｍｉａ）、無効赤血球生成（ｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｒｙｔｈｒｏｐｅｓｉｓ）、大細胞性貧血（ｃａｃｒｏｃｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、骨髄癆性貧血、神経有棘赤血球症、舞踏病、有棘赤血球増加症、ピルビン酸キナーゼ欠損症、鎌状赤血球症、トリオースリン酸イソメラーゼ欠損症、関節炎、骨関節炎、若年性特発性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植片拒絶反応、臓器移植に関連する急性又は慢性の免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、多発血管炎性肉芽腫症、ヘノッホ−シェンレイン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、中毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患（ｓｐｏｒａｄｉｃ）、多腺性機能不全症候群Ｉ型及び多腺性機能不全症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸炎、腸炎性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、Ｃｏｏｍｂｓ陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、虚血性脳炎／慢性疲労症候群、慢性皮膚粘膜カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性の不妊、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性肺線維症、ポスト炎症性間隙性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病に関連する間質性肺疾患、混合性結合組織疾患に関連する肺疾患、全身性硬化症に関連する間質性肺疾患、慢性関節リウマチに関連する間質性肺疾患、全身性エリテマトーデスに関連する肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に関連する肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデーシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球性浸潤性肺疾患、感染性間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド性肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体性肝炎）、自己免疫性低血糖症、黒皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、男性不妊症特発性又はＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、強直性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐａｅｎｉａ）、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎（ｐｈａｃｏｇｅｎｉｃ ｕｖｅｉｔｉｓ）、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型によって媒介される疾病、急性及び慢性疼痛（様々な形態の疼痛）、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌、及び血液悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症（Ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動（ａｅｒｉａｌ ｅｃｔｏｐｉｃ ｂｅａｔｓ）、ＡＩＤＳ認知症症候群、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種異系移植片拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応、大動脈及び動脈瘤（ａｏｒｄｉｃ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｎｅｕｒｙｉｓｍｓ）、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｕｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植片拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序な又は多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳症、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚病、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）、真性糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、薬物誘発性運動疾患（ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される）、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路及び小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺インプラント拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器又は組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病（Ｈａｌｌｅｒｒｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ ｄｉｓｅａｓｅ）、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植片拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈（Ｈｉｓ ｂｕｎｄｌｅ ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ）、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞傷害、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植片拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系障害、脂肪性浮腫、肝臓移植片拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性疾患、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（Ｍｅｎｃｅｌ Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、腎臓病、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ＯＫＴ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植片拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植片拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群［多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症及び皮膚変化症候群］、灌流後症候群、ポンプ後症候群、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象及び疾患、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ ｎａｒｒｏｗ ＱＲＳ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植片拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植片拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳構造的障害、亜急性硬化性全脳炎、卒倒、心血管系の梅毒、全身性アレルギー反応、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器又は組織の異種移植片拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アレルギー反応、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アテローム性動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に関連する自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群（Ｈｕｇｈｅｓ Ｓｙｎｄｒｏｍ
ｅ）、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｃｃａ）、クスマウル病又はクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺（Ｌａｎｄｒｙ’ｓ Ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（又は結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成及び骨髄炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、概要中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、Ｉ型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、および創傷治癒からなる群より選ばれる障害を治療できる。

別の態様では、本開示に係る結合タンパク質は、下記障害からなる群より選ばれる障害を治療でき、すなわち、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、小脳星状細胞腫、大脳星細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路及び視床下部神経膠腫、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、カルチノイド腫瘍、原発不明の原発性胃腸癌、中枢神経系リンパ腫、原発性小脳星細胞腫、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング腫瘍、頭蓋内胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ） （Ｓｔｏｍａｃｈ）、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、脳幹神経膠腫、脳星細胞腫神経膠腫、小児視覚路及び視床下部神経膠腫、ヘアリーセル白血病、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内メラノーマ、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ヘアリーセル白血病、口唇及び口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、口腔癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞性腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔癌、咽頭癌、神経芽細胞腫、口癌、口腔癌、リップ及び中咽頭癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍、形質細胞性腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂と尿管の移行上皮癌、網膜芽細胞腫、唾液腺癌、肉腫、ユーイング腫瘍、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚癌（非黒色腫）、皮膚癌（黒色腫）、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、扁平上皮癌、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、喉癌、胸腺腫、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂と尿管の移行上皮癌、妊娠性絨毛腫瘍、腎盂と尿管の移行上皮癌、尿道癌、子宮癌、子宮内膜子宮肉腫、Ｖ膣癌、視覚路及び視床下部神経膠腫、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、及びウィルムス腫瘍からなる群より選ばれる障害を治療できる。

別の態様では、本開示は、ヒト４−１ＢＢ活性に関する障害に罹患している患者を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の第２薬剤を投与する前、それと同時に又はその後にいずれかの結合タンパク質を投与するステップを含む。実施形態において、１種又は複数種の４−１ＢＢ結合タンパク質と同時投与及び／又は共調製できる別の治療薬は、吸入ステロイド、経口ステロイド、短時間作用型又は長時間作用型βアゴニストなどのβアゴニスト、ロイコトリエン又はロイコトリエン受容体の拮抗薬、ＡＤＶＡＩＲなどの併用薬、抗ＩｇＥ抗体（例えばＸＯＬＡＩＲ）などのＩｇＥ阻害薬、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ４阻害剤）、キサンチン、抗コリン薬、クロモリンなどの肥満細胞安定化剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−５阻害剤、エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤、ヒスタミン又はその受容体（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４を含む）の拮抗薬、及びプロスタグランジンＤ又はその受容体（ＤＰＩ及びＣＲＴＨ２）の拮抗薬のうちの１種又は複数種を含むが、それらに限定されない。そのような組合せは、喘息及び他の呼吸器障害を治療できる。１種又は複数種の抗４−ＬＢＢ抗体又はその断片と同時投与及び／又は共製剤できる治療薬の追加例としては、ＴＮＦ拮抗薬（例えば、ＴＮＦ受容体（例えば、Ｐ５５又はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体）の可溶性断片又はその誘導体、例えば、７５ｋＤのＴＮＦＲ−ＬＧＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ））、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤などのＴＮＦ酵素拮抗薬、ムスカリン受容体拮抗薬、ＴＧＦ−β拮抗薬、インターフェロンγ、ピルフェニドン、メトトレキサート、レフルノミド、又はシロリムス（ラパマイシン）又はそれらの類似体、例えばＣＣＩ−７７９などの化学療法剤、ＣＯＸ２及びｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、免疫調節剤、ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２阻害剤、ＭＫ−２阻害剤及びＮＦｋＢ阻害剤などを含む。別の第２薬剤は、ブデノシド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸塩、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体拮抗薬、抗ＩＬ−ｌβモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、及びＰＤＧＦの抗体又はアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はそのリガンドの抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、Ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−ｌβ、変換酵素阻害剤、ＴＮＦ変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性のｐ７５ＴＮＦ受容体、ＳＩＬ−ＬＲＩ、ＳＩＬ−ｌＲＩＩ、ＳＬＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、及びＴＧＦ−βのうちの１種又は複数種を含む。

別の実施形態において、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｔｅａｌ）、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣内、直腸内、頬側、舌下、鼻腔内、及び経皮からなる群より選ばれる少なくとも１種の方式で、本明細書に開示された医薬組成物を対象に投与する。

別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示された少なくとも１種の結合タンパク質の少なくとも１種の抗４−１ＢＢイディオタイプ抗体を提供する。抗４−１ＢＢイディオタイプ抗体は、以下のような分子を含む任意のタンパク質又はペプチドを含み、前記分子は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含み、この一部は、例えば、重鎖又は軽鎖又はそのリガンド結合部分のうちの少なくとも１種の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖又は軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖定常領域、ワークフレーム領域、又は、本開示に係る結合タンパク質に組み込める以上のいずれかの部分を含む。

ＺＷ１０３（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））が１種又は複数種の共刺激分子とともにＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞を増幅できることを示している。 ＺＷ１０３及びＺＷ１０４（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））がヒト４−１ＢＢ及びサル４−１ＢＢに結合できることを示している。 ＺＷ１０３及びＺＷ１０４（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））がＴ細胞を刺激して増殖させることができることを示している。 ＺＷ１０３及びＺＷ１０４（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））がヒトＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化してＩＦＮ−γを産生するようにヒトＴ細胞を刺激できることを示している。 移植片対宿主病（ＧＶＨ）疾患モデルの手順を示している。 異種−ＧＶＨＤマウスモデルにおいて、４−１ＢＢｍＡｂによる治療によりＴ細胞増殖が促進されることを示している。 開示されたヒト化４−１ＢＢ ＡｂによりヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスのＧＶＨＤが促進されることを示している（図６Ａ）。 異種−ＧＶＨＤモデルにおいて、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが血清ＩＦＮ−を増加させることを示している。 異種−ＧＶＨＤモデルにおいて、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが脾臓のサイズを増大させることを示している。 開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが末梢血におけるヒトＴ細胞を用量依存的に増加させることを示している。 開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが肝臓におけるヒトＴ細胞の浸潤を増加させることを示している。 ４−１ＢＢ ｍＡｂのインビボ抗腫瘍作用を示している。 各用量の完全ヒト化４−１ＢＢ ｍＡｂのインビボ作用を示している。

本開示は、４−１ＢＢ結合タンパク質に関し、且つ、より具体的には、４−１ＢＢに結合する抗４−１ＢＢ抗体又はその抗原結合部分に関する。本開示の各態様は、抗体、抗体断片及びその医薬組成物、並びに、このような抗体及び断片を製造する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞に関する。さらに、本開示に係る抗体を用いてヒト４−１ＢＢを検出することにより、インビトロ又はインビボでヒト４−１ＢＢ活性及び／又はレベルを調整する方法を開示している。
本明細書において、特に断らない限り、本開示について使用される科学及び技術用語は、当業者が通常理解しうる意味を有する。用語の意味及び範囲が明瞭であるが、潜在的なあいまいさがある場合、本明細書において提供される定義は辞書又は外部定義よりも優先される。さらに、文脈によって別段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、且つ、複数形の用語は単数形を含むものとする。本開示において、特に明記しない限り、「又は」の使用は、「及び／又は」を意味する。さらに、用語「含み/含む/含まれる/含有する/〜からなる（英語の「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、及び「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」や「ｉｎｃｌｕｄｅｄ」）などの他の形態の使用は限定的ではない。さらに、特に明記しない限り、「要素」又は「コンポーネント」などの用語は、１つ／１種の単位を含む要素及びコンポーネント、ならびに複数／複数種のサブ単位を含む要素及びコンポーネントの両方を包含する。
一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質及び核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される用語は、当技術分野で一般的に使用されるものである。他に示さない限り、本開示の方法及び技術は、一般的に、当該分野で周知の常法に従って、そして、本開示を通して引用・考察される種々の一般的なそしてより具体的な参考文献に記載されるように行われる。酵素反応及び精製技術は、当技術分野において一般的に達成されているように、又は本明細書に記載されているように、製造業者の仕様書に従って行われる。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学及び医薬化学に関連して使用される用語、及びそれらの実験室手順及び技法は、当技術分野において周知であり一般的に使用されているものである。カノニカル技術は、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、送達及び患者の治療に使用される。

本開示をより理解しやすくするために、以下、使用される用語が定義される。
本明細書に使用されている用語「ポリペプチド」とは、アミノ酸の任意の高分子鎖である。用語「ペプチド」、「タンパク質」及び用語ポリペプチドは、交換して使用でき、且つ、アミノ酸の高分子鎖をも意味する。用語「ポリペプチド」は、タンパク質配列の天然又は人工タンパク質、タンパク質断片及びポリペプチドのアナログを含む。ポリペプチドは、単量体又は重合体であり得る。

用語「単離タンパク質」又は「単離ポリペプチド」は、その起源又は由来のために、その天然の状態でそれに付随する天然結合成分と結合していない、同じ種由来の他のタンパク質を実質的に含まない、異なる種由来の細胞によって発現され、又は自然に存在しないタンパク質又はポリペプチドである。したがって、化学的に合成されるか、又はその天然由来である細胞とは異なる細胞系において合成されるポリペプチドは、その天然結合成分から「単離される」。当技術分野で周知のタンパク質精製技術を用いて、タンパク質を単離によって天然結合成分を実質的に含まないようにすることもできる。

本明細書で使用されるとき、「生物学的活性」又は「活性」は、タンパク質のすべての固有の生物学的特性を指す。

抗体、タンパク質、又はペプチドと第２化学物質との相互作用に関しては、本明細書で使用される用語「特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ）」又は「特異的に結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」は、その相互作用が化学物質における特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、一般的なタンパク質よりも特定のタンパク質構造を認識しそれに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識「Ａ」と抗体を含む反応中にエピトープＡ（又は遊離した未標識Ａ）を含む分子が存在すると、抗体に結合する標識Ａの量を減少させる。

本明細書で使用される用語「抗体」は、４本のポリペプチド鎖（２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖を含む任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子の必須エピトープ結合特徴を保持している任意の機能的断片、変異体、変異体もしくは誘導体）を広く指す。そのような変異体、変異体、もしくは誘導体抗体の形態は当技術分野において公知である。以下、その非限定的な実施形態を説明する。

全長抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＨＣＶ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれてより保存されている点在領域にさらに細分できる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。

本明細書で使用される用語「抗体の抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）は、抗原（例えば４−１ＢＢ）に特異的に結合する能力を保持している抗体の１種又は複数種の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実行され得ることが示されている。 そのような抗体の実施形態はまた、二重特異性、又は多重特異性の形態としてもよい。それは、２種以上の異なる抗原に特異的に結合する。多重特異性、及び二重特異性抗体構築物は当該分野で周知であり、そして、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（ｅｄ）,Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ,ＮＹ（２０１１）及びＳｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２）：９６−１０６（２０１５）に記載されてキャラクタリゼーションされる。

用語「抗体の抗原結合部分」に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片：ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋を介して連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）Ｖ Ｈドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６、Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／０５１４４Ａ１、ここで引用により組み込む。）；及び（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、組換え法を用いて、ＶＬ領域及びＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一タンパク質鎖として製造されることを可能にする合成リンカーによって連結され得る（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として呼ばれる。例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６と、Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３などを参照）。そのような一本鎖抗体はまた、用語「抗体の抗原結合部分」に包含されることを意図する。ダイアボディなどの他の形態の一本鎖抗体も含まれる。ダイアボディは二価二重特異性抗体であり、この二価二重特異性抗体において、ＶＨ及びＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーが使用され、それによってドメインを他の鎖の相補ドメインと対合させて、２つの抗原結合部位を発生させる（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ,Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８と、Ｐｏｌｊａｋ,Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１〜１１２３などを参照）。そのような抗体結合部分は、当技術分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．,Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．７９０ ｐｐ．（ＩＳＢＮ ３−５４０−４１３５４−５）。
本明細書で使用される用語「抗体構築物」は、リンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常ドメインに連結された本開示の１つ又は複数の抗原結合部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合を介して連結された２つ以上のアミノ酸残基を含み、そして１つ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。そのようなリンカーポリペプチドは、当技術分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ,Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８と、Ｐｏｌｊａｋ,Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１〜１１２３などを参照）。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖又は軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインアミノ酸配列及びそれらの機能的変化は、当技術分野において公知である。

さらに、抗体又はその抗原結合部分は、抗体又は抗体部分と１つ又は複数の他のタンパク質又はペプチドとが共有結合又は非共有結合されることによって形成されるより大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例には、ストレプトアビジンコア領域を用いて四量体ｓｃＦｖ分子を製造すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ,Ｓ．Ｍ．ら（１９９５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６：９３−１０１）、及びシステイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグを用いて二価−ビオチン化ｓｃＦｖ分子を製造すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ,Ｓ．Ｍ．ら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）を含む。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体部分は、それぞれ全抗体のパパイン又はペプシン消化などの従来の技術を用いて全抗体から調製できる。さらに、本明細書中に記載されるように、抗体、抗体部分及び免疫接着分子は、カノニカル組換えＤＮＡ技術を使用して得られ得る。

本明細書で使用される「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体（例えば、ヒト４−１ＢＢに特異的に結合する単離抗体は、ｈ４−１ＢＢ以外の抗原を特異的に結合する抗体を実質的に含まない）を指す。しかしながら、ｈ４−１ＢＢに特異的に結合する単離抗体は、他の抗原（他の種由来の４−１ＢＢ分子など）に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。

本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムな部位特異的突然変異誘発又はインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、他の哺乳動物種（マウス）の生殖系列に由来するＣＤ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。

本明細書で使用される用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製、発現、産生又は単離されるすべてのヒト抗体を含むことを意図し、そのような抗体としては、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体（この開示では、さらに詳細に説明する）、組み換え型コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．,（１９９７）ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ Ｈ．,ａｎｄ Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ Ｗ．Ｅ．,（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ Ｊ．Ｖ．ａｎｄ Ｌａｒｒｉｃｋ Ｊ．Ｗ．（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ Ｐ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子について遺伝子導入を行われた動物（例えばマウス）から単離した抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ,Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；ａｎｄ Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ ＳＡ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ Ｌ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：５９３−５９７； Ｌｉｔｔｅｒ Ｍ．ら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：３６４−３７０を参照）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、産生又は単離した抗体が挙げられる。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体に対しては、インビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列について遺伝子導入を行われた動物を使用する場合は、インビボでの体細胞突然変異誘発）を行うことで、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、抗体は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、それらに関連するが、インビボヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在し得ない配列となる。本開示の一実施形態は、限定されるものではないが、ＪｅｒｍｕｔｕｓらによるＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ２００５／００７６９９ Ａ２に開示されているものヒトＩｇファージライブラリーを使用するなど、当技術分野で周知の技法を使用して生成できるヒト４−１ＢＢに結合できる完全ヒト抗体を提供する。

用語「キメラ抗体」は、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体などの、ある種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列と別の種由来の定常領域配列とを含む抗体を指す。

用語「ＣＤＲ移植抗体」は、例えば、１つ以上のマウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体など、１つの種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を有するが、ＶＨ及び／又はＶＬの１つ以上のＣＤＲ領域の配列が別の種のＣＤＲ配列で置き換えられている抗体を指す。

用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を有するが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が「よりヒトに似ている」すなわち、ヒト生殖細胞系可変配列により類似しているように改変されている抗体を指す。１つのタイプのヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体であり、ここでヒトＣＤＲ配列は、非ヒトＶＨ及びＶＬ配列に導入されて対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換する。一実施形態において、ヒト化抗ヒト４−１ＢＢ抗体及び抗原結合部分が提供される。そのような抗体は、伝統的なハイブリドーマ技術を用いてマウス抗ｈ４−１ＢＢモノクローナル抗体を得た後、インビトロ遺伝子工学（例えば、ＫａｓａｉａｎらがＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ２００５／１２３１２６ Ａ２に開示したもの）を用いてヒト化することによって生成される。

用語「Ｋａｂａｔ番号付け」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔ標識付け」は、本明細書では互換的に使用され得る。当該分野において認められたこのような用語は、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域においてほかのアミノ酸残基よりも可変（すなわち超可変）であるアミノ酸残基の番号付けシステム（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ,Ｓｃｉ．１９０：３８２〜３９１ ａｎｄ Ｋａｂａｔ,Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２）を指す。

本明細書で使用される場用語「受容体」及び「受容体抗体（ａｃｃｅｐｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つ以上のフレームワーク領域の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％のアミノ酸配列を提供又はコードする抗体又は核酸配列を指す。いくつかの実施形態において、用語「受容体」は、定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。さらに別の実施形態において、用語「受容体」は、１つ以上のフレームワーク領域及び定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。特定の実施形態において、用語「受容体」は、１つ以上のフレームワーク領域の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％のアミノ酸配列を提供又はコードするヒト抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。この実施形態によれば、受容体は、ヒト抗体の１つ以上の特定部位に存在しない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、又は少なくとも１０個のアミノ酸残基を含み得る。受容体フレームワーク領域及び／又は受容体定常領域は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば、当技術分野において周知の抗体、開発中の抗体、又は市販抗体）に由来し得る。

本明細書で使用される用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲがあり、これらは各可変領域についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれる。本明細書で使用される用語「ＣＤＲセット」は、抗原に結合可能な単一可変領域に存在する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムによって定義される。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（国立衛生研究所,Ｂｅｔｈｅｓｄａ,ＭＤ．（１９８７）及び（１９９１））によるシステムは、抗体の任意の可変領域に利用できる明瞭な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、この３つのＣＤＲの正確な残基境界を提供する。これらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれる。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ,Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）及びＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７〜８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定の小部分が、アミノ酸配列のレベルで非常に多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションを採用することを見出した。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３、又はＨ１、Ｈ２及びＨ３として指定されており、ここで、「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ軽鎖及び重鎖領域を指定する。これら領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれることがあり、これらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。 Ｋａｂａｔ ＣＤと重複してＣＤＲを限定するほかの境界Ｒは、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３−１３９（１９９５））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）：７３２−４５（１９９６））に記載されている。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、厳密には上記のシステムの１つに従わないかもしれないが、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複し、ただし、特定の残基又は残基群、もしくは全ＣＤＲが抗原結合に大きな影響を与えないという予測又は重大実験的発見に基づいて、短縮又は延長され得る。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用し得るが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用する。

本明細書で使用される用語「カノニカル」残基とは、Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９０７（１９８７）と、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９（１９９２）と共に引用により本明細書に組み込まれる）によって定義されるような、特定のカノニカルＣＤＲ構造を定義するＣＤＲ又はフレームワーク中の残基を指す。Ｃｈｏｔｈｉａらによれば、多くの抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列のレベルで非常に多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションを有する。各カノニカル構造は、主にループを形成するアミノ酸残基の連続セグメントについて一組のペプチド骨格ねじれ角を特定する。

本明細書で使用される用語「ドナー」及び「ドナー抗体」とは、１つ以上のＣＤＲを提供する抗体を指す。一実施形態において、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られる又は由来する抗体とは異なる種由来の抗体である。ヒト化抗体の文脈において、用語「ドナー抗体」は、１つ又は複数のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。

本明細書で使用される用語「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」とは、可変領域におけるＣＤＲ以外の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義が異なる系によって決定され得るので、フレームワーク配列の意味については、異なる解釈が対応して得られ得る。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３、ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）もまた、軽鎖及び重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、この中でも、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間、及びＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４として特定しない場合、他の者によって言及されるように、フレームワーク領域は、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内において組み合わされたＦＲを表す。本明細書で使用されるとき、１つのＦＲは、４つのサブ領域のうちの１つを表し、２つ以上のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つのサブ領域のうちの２つ以上を表す。

ヒト重鎖及び軽鎖受容体配列は、当該分野で公知である。一実施形態において、当技術分野において公知の受容体配列は、本明細書に開示される抗体に使用され得る。

本明細書で使用される用語「生殖系列抗体遺伝子」又は「遺伝子断片」とは、特定の免疫グロブリンを発現させるための遺伝的再編成及び突然変異をもたらす成熟過程を経ていない非リンパ細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００（２００２）と、Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０（２００１）を参照）。本開示の各実施形態による利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子が成熟抗体遺伝子よりも種の個体に特徴的な必須アミノ酸配列構造を保存する可能性が高いという知見によるものであり、したがって、その種で治療的に使用された場合、外来源であるとして認められる可能性が低い。

本明細書で使用される場合、用語「キー」残基とは、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性及び／又は親和性により大きな影響を及ぼす可変領域内の特定の残基を指す。キー残基には、ＣＤＲに隣接する残基、潜在的グリコシル化部位（Ｎ−又はＯ−グリコシル化部位のいずれかであり得る）、希少残基、残基抗原と相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基、Ｖｅｒｎｉｅｒ領域における残基、Ｃｈｏｔｈｉａにより定義された可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔにより定義された第１重鎖フレームワークとの間における重複領域内の残基のうちの１種又は複数種を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される用語「ヒト化抗体」は、目的抗原に免疫特異的に結合しヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、その変異体、誘導体、アナログ又は断片である。ＣＤＲの文脈において、本明細書で使用される用語「実質的に」は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１種、通常２種の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）のすべてを実質的に含み、ここで、すべて又は実質的にすべてのＣＤＲは、非ヒト免疫グロブリン（すなわちドナー抗体）に対応し、そして、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常、ヒト免疫グロブリンの定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖及び少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含む。抗体はまた、重鎖のＣ Ｈ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域及びＣＨ４領域を含み得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含む。別の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖のみを含む。

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、及び、限定するものではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選ばれ得る。ヒト化抗体は、２つ以上のクラス又はアイソタイプからの配列を含み得、そして、特定の定常ドメインは、当該分野で周知の技術を使用して所望のエフェクター機能を最適化させるために選択され得る。

一実施形態において、ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によって変異誘発されて、その部位でのＣＤＲ又はフレームワーク残基がドナー抗体又はコンセンサスフレームワークに対応しないようにすることができる。しかしながら、他の実施形態において、そのような突然変異は、広範囲ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％は、親ＦＲ及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書で使用される用語「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列におけるフレームワーク領域を指す。本明細書で使用される用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」とは、関連する免疫グロブリン配列ファミリーにおいて最も頻繁に存在するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ,Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ,Ｗｅｉｎｈｅｉｍ,Ｇｅｒｍａｎｙ １９８７を参照）。免疫グロブリンファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各部位は、ファミリーのうちその部位で最も頻繁に存在するアミノ酸によって占められている。別の実施形態において、２種のアミノ酸が等しく頻繁に現れる場合、両方のうちのいずれかをコンセンサス配列に含めることができる。

本明細書で使用される「Ｖｅｒｎｉｅｒ」領域とは、Ｆｏｏｔｅ及びＷｉｎｔｅｒ（１９９２,Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＣＤＲ構造を調整し抗原への適合を微調整し得るフレームワーク残基のサブセットを指す。Ｖｅｒｎｉｅｒ領域残基は、ＣＤＲの下で層を形成し、ＣＤＲの構造及び抗体の親和性に影響を及ぼし得る。

本明細書に使用される用語「多価結合タンパク質」は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を指す。別の実施形態において、多価結合タンパク質は、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作されてもよく、しかも、それは一般的に天然に存在する抗体ではない。

用語「多重特異性結合タンパク質」は、２つ以上の関連する又は非関連標的に結合できる結合タンパク質を指す。先に引用したように、そのような抗体構築物は、当該分野で周知であり、そしてＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（ｅｄ）,Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ,ＮＹ（２０１１）及びＳｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２）：９６−１０６（２０１５）に記載されてキャラクタリゼーションされる。そのような二重特異性抗体構築物には、ミニボディ（Ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ、ダイアボディ（Ｄｉａｂｏｄｙ）、Ｂｉｔｅ、Ｄｕｏｂｏｄｙ、Ｔａｎｄｅｍａｂ、Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ Ｉｇ、ＤＡＦ、ＣＴ−Ｉｇ、ＤｕｔａｍＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＣｏＤＶＤ−Ｉｇ、ＣｏＤＶ−Ｉｇ、 ＦＩＴ−Ｉｇ、ＣｒｏｓｓｍＡｂ、ＣｒｏｓｓｆＡｂ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ＴｒｉｏｍＡｂ、ＬＵＺ−Ｙｓ、Ｚｙｂｏｄｙとして一般に知られているものが含まれる。本明細書で使用される多重特異的結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、そして四価又は多価結合タンパク質である結合タンパク質である。そのようなＤＶＤは、単一特異性であって、すなわち１種の抗原に結合できるか、又は多重特異性であって、すなわち２種以上の抗原に結合できる。

本明細書で使用される用語「中和」とは、結合タンパク質が標的タンパク質に特異的に結合するときに標的タンパク質の生物学的活性を中和することを指す。例えば、中和４−１ＢＢ結合タンパク質は、４−１ＢＢとの結合により４−１ＢＢの生物学的活性を阻害する中和抗体であり得る。一実施形態において、中和結合タンパク質は、４−ＩＢＢに結合し、４−１ＢＢの生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％以上減少させる。中和結合タンパク質による４−１ＢＢの生物学的活性の阻害は、当技術分野において周知の４−１ＢＢの生物学的活性の１つ又は複数の指標を測定することによって評価できる。別の実施形態において、本開示の４−１ＢＢ結合タンパク質は、中和抗体ではない。

用語「活性」は、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性などの活性を含む。

用語「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体に特異的に結合できる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含み、そして特定の実施形態において、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。特定の実施形態において、抗体は、タンパク質及び／又は高分子の複合混合物におけるその標的抗原を優先的に認識するときに、抗原に特異的に結合すると言われる。

本明細書で使用される用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ,Ｕｐｐｓａｌａ, Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ, Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによってリアルタイムの生物特異的相互作用を分析する光学現象を指す。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ,Ｕ．ら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９〜２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ,Ｕ．ら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０〜６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ,Ｂ．ら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５〜１３１；及びＪｏｈｎｓｏｎ,Ｂ．ら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８〜２７７を参照すればよい。

本明細書で使用される用語「ｋ_ｏｎ」は、当技術分野で知られているように、抗体と抗原とが結合して抗体／抗原複合体を形成するときの結合速度定数（オン速度定数）を指すことを意図する。

本明細書で使用される用語「ｋ_ｏｆｆ」は、当技術分野で知られているように、抗体／抗原複合体から抗体が解離するときの解離速度定数（オフ速度定数）を指すことを意図する。

本明細書で使用される用語「Ｋ_Ｄ」は、当技術分野で知られているように、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すことを意図する。

本明細書で使用される用語「標識結合タンパク質」は、結合タンパク質の同定のための組み込まれたマーカーを有するタンパク質を指す。一実施形態において、標識は、検出可能なマーカー、例えば、放射性標識を組み込んだアミノ酸、又は標識アビジン（例えば、蛍光マーカーを含むストレプトアビジン又は光学的方法又は比色法によって検出できる酵素活性）によって検出できるビオチニル部分に結合されたポリペプチドである。ポリペプチド用標識の例には、以下のものが含まれるがこれらに限定されなく、すなわち、放射性同位体又は放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏ及び^１５３Ｓｍ）、蛍光マーカー（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素マーカー（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次結合部位）抗体、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、及び磁気物質（例えば、ガドリニウムキレート）が挙げられる。

用語「抗体コンジュゲート」は、第２化学部分（治療薬又は細胞傷害薬など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を指す。用語「薬剤」は、本明細書では、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的高分子、又は生物学的材料から製造された抽出物を表す。別の実施形態において、治療薬又は細胞傷害薬としては、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒシン、ドキソルビシン、ダウノルキシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシン、Ｄ,１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、ならびにそれらの類似体又は相同体を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される用語「結晶」及び「結晶化」は、結晶の形態で存在する抗体又はその抗原結合部分を指す。結晶は物質の固体状態の一形態であり、これは非晶質固体状態又は液晶状態のような他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）、又は分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な繰り返し三次元アレイからなる。これらの三次元アレイは、当分野で周知の特定の数学的関係に従って配置されている。結晶内で繰り返される基本単位又はビルディングブロックは、非対称単位と呼ばれる。明確に定義された所定の結晶学的対称性に一致する配置で非対称単位を繰り返すことにより、結晶の「単位セル」が提供される。三次元にわたって規則的に翻訳される単位セルの繰り返しにより結晶が提供される。Ｇｉｅｇｅ,Ｒ．及びＤｕｃｒｕｉｘ,Ａ． Ｂａｒｒｅｔｔ, Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ, ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ, ２ｎｄ ｅａ．, ｐｐ． ２０ １−１６, Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, Ｎ．Ｙ．, （１９９９）を参照すればよい。

本明細書で言及される用語「ポリヌクレオチド」は、２つ以上のヌクレオチド（リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドもしくは２種のタイプのヌクレオチドのいずれかの修飾形態）の重合形態を指す。この用語は一本鎖及び二本鎖形態のＤＮＡを含む。

本明細書で使用される用語「単離ポリヌクレオチド」は、その起源のために、天然に存在する「単離ポリヌクレオチド」が結合したポリヌクレオチドの全部又は一部に結合しておらず、天然に連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されており、又は、天然にはより大きな配列の一部として発生しないポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ、又は合成起源、又はそれらの組み合わせのもの）である。

本明細書で使用される用語「ベクター」は、核酸分子が結合している別の核酸を輸送できる核酸分子を指すことを意図している。ベクターの一種は別のＤＮＡセグメントを内部に連結できる環状二本鎖ＤＮＡループである「プラスミド」である。別の種類のベクターは、別のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結できるウイルスベクターである。一部のベクターは、それらが導入された宿主細胞中で自律複製できる（例えば、細菌性複製起点を有する細菌性ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれて、宿主ゲノムと共に複製され得る。さらに、一部のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指導できる。そのようなベクターは、本明細書において「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において利用される発現ベクターは通常プラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、本開示は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）のような他の形態の発現ベクターを含むことを意図している。

用語「作動可能に連結された」は、前記コンポーネントがそれらが意図された方式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合する条件下で達成されるように連結されている。「作動可能に連結された」配列は、ターゲート遺伝子に隣接する発現制御配列及びターゲート遺伝子を制御するためにトランスに又はある距離をおいて作用する発現制御配列の両方を含む。本明細書で使用される用語「発現制御配列」は、それらが連結されているコード配列の発現及びプロセシングに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列は、適切な転写開始配列、終止配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；スプライシング及びポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡ処理シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を高める配列；及び必要に応じてタンパク質分泌を増強する配列を意味する。そのような制御配列の性質は宿主生物によって異なり、そのような制御配列は、原核生物では、一般にプロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、真核生物では、一般にプロモーター及び転写終結配列を有する。用語「制御配列」は、その存在が発現及びプロセシングに必須であるコンポーネント、その存在が有利であるさらなるコンポーネント、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列も含み得るを含むことを意図している。本開示のタンパク質構築物は、当該分野で公知の発現ベクター及び宿主細胞（発現カセット、ベクター、組換え宿主細胞を含む）、ならびに単一のオープンリーディングフレーム由来の組換えポリタンパク質及びプレタンパク質の組換え発現及びタンパク質加水分解プロセシングのための方法を用いて、発現・精製され得る（例えば、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ ２００７／０１４１６２）。

本明細書で定義される「形質転換」とは、外因性ＤＮＡが宿主細胞に侵入するあらゆる過程を指す。形質転換は、当技術分野において周知の様々な方法を用いて、天然又は人工の条件下で起こり得る。形質転換は、原核又は真核の宿主細胞への外来核酸配列の挿入のための任意の公知の方法により行われ得る。この方法は、形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション、及び粒子衝撃を含み得るが、これらに限定されない。そのような「形質転換」細胞には、挿入されたＤＮＡが自律複製プラスミド又は宿主染色体の一部として複製できる安定的に形質転換された細胞が含まれる。それらはまた、限られた時間内で挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを一時的に発現する細胞を含む。

本明細書で使用される用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、外因性ＤＮＡが導入されている細胞を指すことを意図している。なお、そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことを意図している。突然変異又は環境の影響のために、子孫にはある修飾が起こり得るので、そのような子孫は実際には親細胞と同一ではないかもしれないものの、本明細書で用いる用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。別の実施形態において、宿主細胞は、生命界のいずれかから選択される原核細胞及び真核細胞を含む。別の実施形態において、真核細胞は、原生生物細胞、真菌細胞、植物細胞及び動物細胞を含む。別の実施形態において、宿主細胞は、原核細胞株大腸菌；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ ２９３及びＣＯＳ；昆虫細胞株Ｓｆ９；及び真菌細胞であるサッカロマイセス・セレビシエを含むが、これらに限定されない。

標準的な技術は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養・形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に使用され得る。酵素反応及び精製技術は、製造元の仕様書に従って、又は当技術分野において一般的に達成されているように、又は本明細書に記載されているように実施することができる。通常、当技術分野において周知の常法を用い、及び本明細書を通して引用して議論されている様々な一般的及びより具体的な参考文献に記載されているように、前記技術及び手順は行われ得る。例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ, Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ, Ｎ．Ｙ． （１９８９））を参照すればよく、あらゆる目的のためにも参照により本明細書に組み込まれる。

当技術分野において公知でありかつ本明細書において使用されるように、「遺伝子導入生物」とは、導入遺伝子を含む細胞を有する生物を指し、ここで前記生物（又は生物の祖先）に導入された導入遺伝子は前記生物に天然に発現されないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」とは、遺伝子導入生物まで発達する細胞のゲノムに安定的かつ作動可能に組み込まれ、遺伝子導入生物の１つ又は複数の細胞型又は組織におけるコード遺伝子産物の発現を指導するＤＮＡ構築物である。

用語「制御」及び「調節」は互換的に使用され得、本明細書で使用されるとき、標的分子の活性（例えば、４−１ＢＢの生物学的活性）の変化又は改変を指す。調節は、標的分子の特定の活性又は機能のスケールの増加又は減少であり得る。分子の例示的な活性及び機能としては、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化、及びシグナル伝達を含むが、これらに限定されない。

それに対応して、本明細書で使用される用語「調節剤」は、標的分子の活性又は機能（例えば、４−１ＢＢの生物学的活性）を変化又は改変できる化合物である。例えば、調節剤は、調節剤の非存在下で観察される分子の特定の活性又は機能のスケールと比較して、前記活性又は機能のスケールの増加又は減少を引き起こし得る。特定の実施形態において、調節剤は、分子の少なくとも１つの活性又は機能のスケールを減少させる阻害剤である。例示的な阻害剤としては、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、炭水化物又は有機小分子を含むが、これらに限定されない。ペプチド抗体は、例えば、ＷＯ０１８３５２５に記載されている。

本明細書で使用される用語「アゴニスト」は、標的分子と接触したときに、前記アゴニストの非存在下で観察される分子の特定の活性又は機能のスケールと比較して、前記活性又は機能のスケールの増加を引き起こす調節剤を指す。４−１ＢＢのアゴニストは、４−１ＢＢに結合するタンパク質（例えば、Ａｂ）、核酸、炭水化物、又は任意の他の分子を含み得るが、これらに限定されない。一実施形態において、本開示の４−１ＢＢ結合タンパク質は、４−１ＢＢアゴニストである。

本明細書で使用される用語「拮抗薬」又は「阻害剤」は、標的分子と接触したときに、前記拮抗薬の非存在下で観察される分子の特定の活性又は機能のスケールと比較して、前記活性又は機能のスケールの減少を引き起こす調節剤を指す。具体的な標的拮抗薬は、４−１ＢＢの生物学的又は免疫学的活性を遮断又は調節する拮抗薬を含む。４−１ＢＢの拮抗薬及び阻害剤は、４−１ＢＢに結合するタンパク質（例えば、Ａｂ）、核酸、炭水化物、又は他の任意の分子を含み得るが、これらに限定されない。他の実施形態において、本開示の４−１ＢＢ結合タンパク質は、４−１ＢＢ拮抗薬ではない。

本明細書で使用される用語「有効量」とは、障害又はその１つもしくは複数の症状の重症度及び／又は持続期間を軽減又は改善し、障害の進行を防ぎ、障害を解消して、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発展、発症又は進行を防止し、障害を検査し、又は他の治療法（例えば、予防薬又は治療薬）の予防又は治療効果を増強又は改善するのに十分な量を指す。

本明細書で使用される用語「サンプル」は、その最も広い意味で使用されている。本明細書で使用される「生物学的サンプル」は、生物又は死んだ生物由来の任意の量の物質を含むが、これらに限定されない。そのような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギや他の動物が含まれるが、これらに限定されない。そのような物質としては、血液、血清、尿、滑液、細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓を含むが、これらに限定されない。

Ｉ．ヒト４−１ＢＢに結合する結合タンパク質

本開示の一態様は、単離抗体である抗体又はその一部を提供する。 本開示の一態様は、高親和性、低オフレート及び高中和能で４−１ＢＢに結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合部分を提供する。本開示の別の態様は、ヒト４−１ＢＢ（ｈ４−１ＢＢ）に特異的に結合する抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合する完全ヒト抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合するマウス抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合するキメラ抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合するヒト化抗体、又はその抗原結合部分を提供する。一実施形態において、抗体又はその一部は、ｈ４−１ＢＢに特異的に結合する。

Ａ．抗４−１ＢＢ抗体の調製方法

実施例に説明されるように、本開示の抗体は、当該分野で公知の多数の技術のうちのいずれかによって調製され得る。

１．４−１ＢＢ結合タンパク質

表１は、候補抗４−１ＢＢ抗体クローンの略記された配列表である。

以下の表２〜６には、各クローンのＣＤＲ配列が記載されている。

表７は、ＺＷ１０３−１０７クローンのリーダー配列を有する重鎖配列を示す。

前述の単離抗４−１ＢＢ抗体ＣＤＲ配列は、本開示に従って単離され、表１〜７に記載の配列を有するポリペプチドを含む４−１ＢＢ結合タンパク質の新規なファミリー及びモチーフを確立する。

ヒト化抗４−１ＢＢ抗体も調製されている。例えば、表８はヒト化ＺＷ１０５及びＺＷ１０６の配列を示す。

２．抗４−１ＢＢキメラ抗体
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる起源又は動物種に由来する分子である。キメラ抗体を産生するための方法は当技術分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ,Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）と、Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）と、Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２と、米国特許第５,８０７,７１５号、第４,８１６,５６７号及び第４,８１６,３７９号とを参照でき、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、「キメラ抗体」を産生するために開発された、適切な抗原特異性を有するマウス抗体分子由来の遺伝子を適切な生物学的活性を有するヒト抗体分子由来の遺伝子と共にスプライシングする技術が使用できる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４, Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８４, Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら、１９８５, Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４；これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）。

一実施形態において、本開示のキメラ抗体は、本明細書に記載の抗４−１ＢＢ結合タンパク質のＣＤＲをヒトＩｇＧ１定常領域と共に挿入することによって産生される。

３．抗４−１ＢＢヒト化抗体

ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。既知のヒトＩｇ配列が以下に開示されている。
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ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原供与体を改変又は改善するために、ＣＤドナー抗体からの対応する残基で置換されてもよい。これらフレームワーク置換は、当分野で周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、及び特定の位置での異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５,５８５,０８９号と、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）とを参照する。これらは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる）によって同定される。三次元免疫グロブリンモデルは、当業者にはよく知られているものとして、一般に入手可能である。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元立体配座構造を例示し表示するコンピュータプログラムが取得可能である。これらの表示を観察することによって、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析、すなわち候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原に対する親和性の増大などの所望の抗体特性が達成されるように、コンセンサス配列及びインポート配列から選択して組み合わせられ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接そして最も実質的に影響している。抗体は、当該分野において公知の複数の技術によりヒト化することができ、前記技術は、下記に記載の技術を含むが、これらに限定されない。Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））；Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ,Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）,Ｐａｄｌａｎ,Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９〜４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）,Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ国際公開ＷＯ９１／０９９６７、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１３４４、ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＥＰ２２９２４６、ＥＰ５９２,１０６；ＥＰ ５１９,５９６、ＥＰ ２３９,４００、米国特許第５,５６５,３３２号、第５,７２３,３２３号、第５,９７６,８６２号、第５,８２４,５１４号、第５,８１７,４８３号、第５,８１４,４７６号、第５,７６３,１９２号、第５,７２３,３２３号、第５,７６６８８６号、第５,７１４,３５２号、第６,２０４,０２３号、第６,１８０,３７０号、第５,６９３,７６２号、第５,５３０,１０１号、第５,５８５,０８９号、第５,２２５,５３９；第４,８１６,５６７号。これらは、それぞれ参照により全体として本明細書に組み入れられる。

一実施形態において、本開示の抗４−１ＢＢ結合タンパク質は、例えば当技術分野で公知のいくつかのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏアッセイのうちのいずれかによって評価されたように、４−１ＢＢ活性を低下又は増強する高能力を示し得る。

特定の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。他の実施形態において、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、軽鎖定常領域（κ軽鎖定常領域又はλ軽鎖定常領域）を含み得る。別の実施形態において、抗体は、κ軽鎖定常領域を含む。あるいは、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片又は一本鎖Ｆｖ断片であり得る。

抗体エフェクター機能を変化させるためのＦｃ部分のアミノ酸残基の置換は当技術分野において公知である（Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５,６４８,２６０号、第５,６２４,８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体と抗原−抗体複合物の半減期／クリアランス速度を媒介する。ある場合には、これらエフェクター機能が治療用抗体にとって望ましいが、他の場合には、治療目的に応じて不要であるか又は有害にあることもある。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑへの結合を介してＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な要素である。別の実施形態において、抗体のエフェクター機能が変化するように、抗体の定常領域、例えば抗体のＦｃ領域において少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されている。

一実施形態は、本開示の抗体又は抗体部分が他の機能的分子（例えば、他のペプチド又はタンパク質）に誘導体化又は連結されている標識結合タンパク質を提供する。例えば、本開示の標識結合タンパク質は、本開示の抗体又は抗体部分を他の抗体などの１つ又は複数の他の分子実体（化学結合、遺伝子融合、非共有結合又はほかの方式より）に機能的に連結することによって得られ、前記１つ又は複数の他の分子実体は、例えば、別の抗体（例えば二重特異性抗体又はダイアボディ）、検出可能薬剤、細胞傷害剤、医薬及び／又は抗体もしくは抗体部分と他の分子（ストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグなど）との結合を媒介し得るタンパク質又はペプチドである。

本開示の抗体又は抗体部分を誘導体化しうる有用な検出可能薬剤には、蛍光化合物が含まれる。例示的な蛍光検出可能薬剤には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、塩化５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニル、フィコエリトリンなどが含まれる。抗体はまた、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素で誘導体化されてもよい。抗体が検出可能な酵素で誘導体化されている場合、酵素が検出可能な反応生成物を生成するために使用される別の薬剤を添加することによって検出され得る。例えば、検出可能な薬剤として西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素及びジアミノベンジジンを添加することによって、検出可能な着色反応生成物を生成する。抗体をビオチンで誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジンの結合を間接的に測定することでに検出することもできる。

本開示の別の実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示されている全抗４−１ＢＢ抗体及びその断片の結晶、ならびにそのような結晶を含む製剤及び組成物に関する。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質は、インビボでは、結合タンパク質の可溶性対応物よりも長い半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、結晶化後に生物学的活性を保持している。

本開示の結晶化結合タンパク質は、当技術分野で公知の方法及びＷＯ ０２０７２６３６（参照により本明細書に組み入れられる）に開示されている方法に従って製造することができる。

本開示の別の実施形態は、抗体又はその抗原結合部分が１つ又は複数の炭水化物残基を含むグリコシル化結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質の産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセシングを受け得る。具体的には、糖（グリコシル）残基を酵素的に付加することができ、このプロセスは、グリコシル化として知られる。共有結合したオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化タンパク質又は糖タンパク質として知られている。抗体は、Ｆｃドメイン及び可変ドメインに１つ以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に重要な影響を及ぼし、抗体の抗原結合又は半減期にはほとんど影響を及ぼさない（Ｒ． Ｊｅｆｆｅｒｉｓ, Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｐｒｏｇ． ２１ （２００５）, ｐｐ． １１−１６）。それに対して、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に影響を及ぼし得る。可変ドメインにおけるグリコシル化は、抗体結合親和性に悪影響を及ぼし得るか（おそらく立体障害のために）（Ｃｏ, Ｍ． Ｓ．,ら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９９３） ３０：１３６１−１３６７）、その結果として抗原に対する親和性が増大させる（Ｗａｌｌｉｃｋ, Ｓ． Ｃ．ら、Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． （１９８８） １６８：１０９９−１１０９と、Ｗｒｉｇｈｔ, Ａ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ． （１９９１） １０：２７１７ ２７２３を参照）。

本開示の一態様は、結合タンパク質のＯ−又はＮ−結合グリコシル化部位が変異しているグリコシル化部位変異体を生成することに関する。当業者は、標準的な周知の技術を用いてそのような変異体を産生することができる。生物学的活性を保持しているが増加又は減少した結合活性を有するグリコシル化部位突然変異体は、本開示の別の目的である。

別の実施形態において、本開示の抗体又は抗原結合部分のグリコシル化は修飾されている。例えば、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｌａｔｅｄ）抗体（すなわち、抗体はグリコシル化を欠く）を調製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるために改変することができる。そのような炭水化物修飾は、例えば抗体配列内の１つ又は複数のグリコシル化部位を変えることによって達成できる。例えば、１つ以上の可変領域グリコシル化部位の排除をもたらし、それによりその部位でのグリコシル化を排除する１つ以上のアミノ酸置換がなされ得る。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させる可能性がある。そのような手法は、ＰＣＴ国際公開ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２、及び米国特許第５,７１４,３５０号と第６,３５０,８６１号にさらに詳細に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

それに加えて又はその代わりに、フコシル残基の量が少ない低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体、又は二分枝ＧｌｃＮＡｃ構造が多い抗体など、グリコシル化の種類が変更された本開示の修飾抗体を調製することができる。そのような改変グリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増大させることが実証されている。そのような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構が改変された宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成できる。グリコシル化機構が改変された細胞は、当技術分野において記載されており、本開示の組換え抗体を発現させてグリコシル化が改変された抗体を産生するための宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ, Ｒ． Ｌ．ら、 （２００２） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７７：２６７３３−２６７４０と、Ｕｍａｎａら、（１９９９） Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． １７：１７６−１と、ヨーロッパ特許第ＥＰ １,１７６,１９５号と、ＰＣＴ国際公開ＷＯ ０３／０３５８３５と、ＷＯ ９９／５４３４２ ８０などを参照することができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

タンパク質のグリコシル化は、標的タンパク質のアミノ酸配列、及びそのタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼ及びグリコシダーゼ）を産生し得、そして利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有する。そのような要因により、タンパク質グリコシル化パターン、及びグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主細胞によって異なり得る。本開示において使用され得るグリコシル残基は、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸を含み得るが、これらに限定されない。別の実施形態において、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトになるように、グリコシル残基を含む。

異なるタンパク質グリコシル化が異なるタンパク質特性をもたらし得ることは、当業者に知られている。例えば、酵母などの微生物宿主において産生され酵母内因性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の効力は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳動物細胞において発現される同じタンパク質の効力と比較して低下する可能性がある。そのような糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性を有し得、そして投与後にインビボで減少した半減期を示す。ヒトや他の動物における特定の受容体は、特定のグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の急速な除去を促進し得る。他の有害作用は、タンパク質の折り畳み、可溶性、プロテアーゼに対する感受性、トラフィッキング、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質又は因子による認識、抗原性又はアレルゲン性の変化を含み得る。したがって、当業者は、特定のグリコシル化組成及びパターンを有する治療用タンパク質、例えば、ヒト細胞又は標的動物の種特異的細胞において産生されるこれらと同一又は少なくとも類似したグリコシル化組成及びパターンを有する治療用タンパク質を好ましく利用できる。

異種グリコシル化酵素を発現するように宿主細胞を遺伝子改変することによって、宿主細胞とは異なるグリコシル化タンパク質を発現させることができる。当技術分野において公知の技術を使用して、当業者は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体又はその抗原結合部分を調製することができる。例えば、酵母株で産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を示すように、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するように酵母株を遺伝子改変する（米国特許出願第２００４００１８５９０号、第２００２０１３７１３４号及びＰＣＴ国際公開ＷＯ２００５１００５８４ Ａ２）。

結合タンパク質に加えて、本開示はまた、本開示のそのような結合タンパク質に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体に関する。抗Ｉｄ抗体は、他の抗体の抗原結合領域に一般的に関連する独特の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質又はそのＣＤ含有領域で動物を免疫することによって調製することができる。免疫された動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識しそれに応答して抗Ｉｄ抗体を産生する。抗Ｉｄ抗体はまた、別の動物において免疫応答を誘導するための「免疫原」としても使用されて、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生することもできる。

さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞が変異型グリコシル化パータンを有する標的タンパク質を産生するように、様々なグリコシル化酵素を発現するように遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを用いて、標的タンパク質を発現できることは、当業者によって理解できる。その後、当業者は、特定の新規グリコシル化パターンを有する標的タンパク質を選択して単離することができる。他の実施形態において、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善又は変化した生物学的特性を示す。

本開示はまた、本開示の結合タンパク質、抗体、又はその抗原結合部分、及び製薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本開示の抗体を含む医薬組成物は、障害の診断、検出、又は監視、障害又はその１つ以上の症状の予防、治療、管理又は改善、及び／又は研究に使用されるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、本開示の１つ又は複数の抗体を含む。別の実施形態において、医薬組成物は、本開示の１つ以上の抗体、及び４−１ＢＢ活性の過不足による障害を治療するための、本開示の抗体以外の１つ以上の予防薬又は治療薬を含む。一実施形態において、予防薬又は治療薬は、障害又はその１つもしくは複数の症状の予防、治療、管理、もしくは改善に有用であるか、現在使用されたか、又は現在使用されていることが知られている。これらの実施形態によれば、組成物はさらに担体、希釈剤又は賦形剤を含み得る。

本開示の抗体及び抗体部分は、対象への投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。通常、医薬組成物は、本開示の抗体又は抗体部分と薬学的に許容される担体とを含む。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性のあるありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体の例には、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びそれらの組み合わせのうちの１つ又は複数が含まれる。多くの場合、組成物には、等張剤、例えば糖、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトールなど）、又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される担体はさらに、抗体又は抗体部分の有効期間又は有効性を高める、湿潤剤又は乳化剤、防腐剤又は緩衝剤などの補助物質を少量で含んでもよい。

様々な送達システムが知られており、本開示の１つ以上の抗体、又は本開示の１つ以上の抗体と障害又はその１つもしくは複数の症状の予防、治療、管理、もしくは改善に有用な予防薬又は治療薬との組み合わせを投与するために使用でき、例えばリポソーム、微粒子、マイクロカプセル、抗体又は抗体断片を発現できる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ及びＷｕ, Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２：４４２９−４４３２ （１９８７）を参照）への封入、逆転写ウイルス又はその他の担体の一部としての核酸の構築などが挙げられる。本開示の予防薬又は治療薬を投与する方法には、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外（ｅｐｉｄｕｒａｌａ）投与、腫瘍内投与、及び粘膜投与（例えば、経鼻腔内及び経口）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、例えば吸入器又は噴霧器、及びエアロゾル剤を含む製剤を使用して肺内投与することができる。例えば、米国特許第６,０１９,９６８号、第５,９８５,３２０号、第５,９８５,３０９号、第５,９３４,２７２号、第５,８７４,０６４号、第５,８５５,９１３号、第５,２９０,５４０号及び第４,８８０,０７８号と、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ９２／１９２４４号、第ＷＯ ９７／３２５７２号、第ＷＯ ９７／４４０１３号、第ＷＯ ９８／３１３４６号及び第ＷＯ ９９／６６９０３号などを参照することができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。一実施形態において、本開示の抗体、併用療法、又は本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ．ＲＴＭ．肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ．Ｉｎｃ．,Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ,Ｍａｓｓ）を使用して投与される。特定の実施形態において、本開示の予防薬又は治療薬は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺内、又は皮下に投与される。予防薬又は治療薬は、任意の好都合な経路、例えば注入又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜表層（ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌｉｎｉｎｇ）（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通した吸収にを介して投与でき、そして他の生理活性剤と同時投与することができる。投与は全身的又は局所的であり得る。

特定の実施形態において、本開示の予防薬又は治療薬を治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい。これは、限定ではなく例として、局所注入、注射、又はインプラントを用いて達成することができ、前記インプラントは、膜及びマトリックスを含む多孔質又は非多孔質材料であり、前記膜及びマトリックスは、シアラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）、ポリマー、繊維状マトリックス、又はコラーゲンマトリックスを含む。一実施形態において、本開示の拮抗薬の１つ又は複数の抗体を対象の患部に有効量で局所投与して、障害もしくはその症状を予防、治療、管理、及び／又は改善する。別の実施形態において、本開示の抗体以外の有効量の１つ以上の治療法（例えば、１つ以上の予防薬又は治療薬）と組み合わせた有効量の本開示の１つ以上の抗体を患部に局所投与して、障害もしくはその１つもしくは複数の症状を予防、治療、管理及び／又は改善する。

別の実施形態において、本開示の予防薬又は治療薬は、放出制御又は持続放出システムで送達することができる。一実施形態において、ポンプを使用して放出制御又は持続放出を達成できる（以上のＬａｎｇｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ, １９８７, ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０, Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら、１９８９, Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２１：５７４を参照）。別の実施形態において、ポリマー材料を本開示の治療薬の放出制御又は持続放出に利用できる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ, Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ （ｅｄｓ．）, ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．, Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ, Ｆｌａ． （１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ, Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ, Ｓｍｏｌｅｎ及びＢａｌｌ （ｅｄｓ．）, Ｗｉｌｅｙ, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ及びＰｅｐｐａｓ, １９８３, Ｊ．, Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｓｃｉ． Ｒｅｖ． Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２３：６１；さらにＬｅｖｙら、１９８５, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９, Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら、１９８９, Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ． ７ １：１０５；米国特許第５,６７９,３７７号,第５,９１６,５９７号,第５,９１２,０１５号,第５,９８９,４６３号,第５,１２８,３２６号；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９９／１５１５４；及びＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９９／２０２５３を参照）。徐放性製剤に使用されるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態におい
て、徐放性製剤に使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物がなく、貯蔵安定性に優れて、無菌性、及び生分解性を有する。別の実施形態において、制御又は持続放出系を予防又は治療標的の近くに配置することができ、したがって全身投与量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ, ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ,同 ｖｏｌ． ２, ｐｐ． １１５−１３８ （１９８４）を参照）。

放出制御システムは、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）による総説で検討されている。当業者に公知の任意の技術を用いて、本開示の１つ以上の治療薬を含む持続放出製剤を製造することができる。例えば、米国特許第４,５２６,９３８号,ＰＣＴ国際公開ＷＯ ９１／０５５４８,ＰＣＴ国際公開ＷＯ ９６／２０６９８, Ｎｉｎｇら、１９９６, “Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ,” Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９−１８９, Ｓｏｎｇら、１９９５, “Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ,” ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２−３９７, Ｃｌｅｅｋら、１９９７, “Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ,” Ｐｒｏ． Ｉｎｔ’ｌ． Ｓｙｍｐ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌ． Ｂｉｏａｃｔ． Ｍａｔｅｒ． ２４：８５３−８５４,及びＬａｍら、１９９７, “Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ,” Ｐｒｏｃ． Ｉｎｔ’ｌ． Ｓｙｍｐ． Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ． Ｂｉｏａｃｔ． Ｍａｔｅｒ． ２４：７５９−７６０を参照することができ、これらの各々は、その全体が参考として本明細書中に援用される。

特定の実施形態において、本開示の組成物が予防薬又は治療薬をコードする核酸である場合、前記核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築して以下の方式で投与することにより、前記核酸をインビボ投与してそのコードされる予防薬又は治療薬の発現を促進することができる。前記方式は、例えば、レトロウイルスベクターを使用すること（米国特許第４,９８０,２８６号を参照）、直接注射、又は微粒子衝撃（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ, Ｄｕｐｏｎｔ）、脂質又は細胞表面受容体又はトランスフェクト剤でコーティングすること、又はそれを核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結して投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、１９９１, Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８を参照）。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えにより発現させるために、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。

本開示の医薬組成物は、その意図された投与経路と適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば吸入）、経皮（例えば局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内又は局所投与に適した医薬組成物として、日常的な手順に従って製剤化される。通常、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位の痛みを緩和するための局所麻酔薬（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅなど）を含んでもよい。

本開示の組成物を局所投与する場合、組成物は、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ剤、ローション剤、ゲル剤、シャンプー剤、スプレー剤、エアロゾル剤、液剤、乳剤の形態、又は当業者が周知のほかの形態で製剤化できる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ,第１９版,Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ．, Ｅａｓｔｏｎ, Ｐａ． （１９９５）を参照できる。噴霧不可能な局所剤形については、高粘度から半固体又は固体の形態に調製されて、担体又は局所適用に適合して水よりも大きい動的粘度を有する１以上の賦形剤を含むのが一般的である。適切な製剤としては、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏、粉末剤、リニメント剤、膏薬などが挙げられるが、これらに限定されず、これらは、必要に応じて滅菌されるか、又は様々な特性（例えば浸透圧）に影響を与える補助剤（例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤又は塩）と混合される。他の適切な局所剤形には、固体又は液体の不活性担体と組み合わせた活性成分が圧縮揮発剤（例えばフレオンなどの気体推進剤）との混合物又は絞り出し瓶に包装されている噴霧可能なエアロゾル製剤が含まれる。必要に応じて、保湿剤又は湿潤剤も医薬組成物及び剤形に添加することができる。そのような追加の成分の例は、当技術分野において周知である。

本開示の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合、組成物はエアロゾル形態、スプレー、ミスト、又は滴剤の形態で製剤化できる。具体的には、本開示において使用する予防薬又は治療薬は、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又はほかの適切な気体）を使用して、加圧パック又はネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で都合よく送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、定量を送達するための弁を提供することによって決定され得る。吸入器又は吹送器で使用するカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる）は、化合物と適切な粉末基剤（ラクトース又はデンプンなど）との粉末混合物を含有するように処方することができる。

本開示の方法が経口投与を含む場合、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ剤、液剤、懸濁剤などの経口的形態に製剤化することができる。錠剤又はカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）などの薬学的に許容される賦形剤、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、又はリン酸水素カルシウム）、滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ポテトスターチ又はスターチグリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）を用いて従来の手段によって調製することができる。錠剤は当技術分野で周知の方法でコーティングすることができる。経口投与用の液体製剤は、溶液、シロップ又は懸濁液の形態をとり得るが、それらに限定されず、又は、使用前に水又は他の適切な媒体で回復する乾燥製品として提供され得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、又は水素添加食用脂肪）、乳化剤（例えば、レシチン又はアラビアゴム）、非水性媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、又は分留植物油）、及び防腐剤（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）のような薬学的に許容される添加剤を用いて従来の手段によって調製することができる。場合によって、製剤はまた、緩衝塩、香味剤、着色剤、及び甘味剤を含んでもよい。経口投与用製剤は、予防薬又は治療薬の徐放、放出制御、又は徐放用に適切に製剤化することができる。

本開示の方法は、エアロゾル化剤と共に製剤化された組成物の、例えば吸入器又はネブライザーの使用による肺投与を含み得る。例えば、米国特許第６,０１９,９６８号、第５,９８５,３２０号、第５,９８５,３０９号、第５,９３４,２７２号、第５,８７４,０６４号、第５,８５５,９１３号、第５,２９０,５４０号及び第４,８８０,０７８号と、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ９２／１９２４４号、ＷＯ ９７／３２５７２、ＷＯ ９７／４４０１３、ＷＯ ９８／３１３４６及びＷＯ ９９／６６９０３などを参照することができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態において、本開示の抗体、併用療法、及び／又は本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ．ＲＴＭ．肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ, Ｉｎｃ．, Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ, Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。

本開示の方法は、注射による（例えば、ボーラス注射又は持続注入による）非経口投与用に調製された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、防腐剤を添加した単位剤形（例えば、アンプル又は複数回投与用容器）で提供することができる。組成物は、油性又は水性媒体中の懸濁液、溶液又はエマルジョンのような形態をとり得、そして懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤のような処方剤を含み得る。 あるいは、活性成分は、使用前に適切な媒体（例えば、無菌パイロジェンフリー水）で回復する粉末形態であり得る。

本開示の方法は、デポー製剤として調製された組成物の投与をさらに含み得る。そのような長時間作用型製剤は、移植（例えば皮下又は筋肉内）又は筋肉内注射により投与できる。したがって、例えば、組成物は、適切なポリマー材料又は疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を用いて調製され、又は微溶性誘導体（例えば、微溶性塩）として調製され得る。

本開示の方法は、中性又は塩形態として調製された組成物の投与を包含する。薬学的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するのアニオンと形成されるもの、及びナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチオンと形成されるものが含まれる。

一般に、組成物の成分は、別々に又は混合して単位剤形（例えば、活性凍結剤の量を示すアンプル又はサシェなどの密閉容器中の乾燥させた凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として）で供給され得る。投与方法が注入である場合、組成物は、医薬グレードの無菌水又は食塩水を含む輸液ボトルで分散させることができる。投与方法が注射である場合、成分を投与前に混合できるように、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルを提供することができる。

具体的には、本開示はまた、薬剤の量を示すアンプルもしくはサシェなどの密封容器に包装される本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうち１種又は複数種ことを提供する。一実施形態において、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうち１種又は複数種は、密封容器内の無菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として供給され、且つ（例えば水又は食塩水で）対象への投与に適切な濃度に再溶解回復させる。別の実施形態において、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうち１種又は複数種は、密封無菌容器中の無菌凍結乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、又は少なくとも１００ｍｇの単位用量で供給される。本開示の凍結乾燥予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物は、２℃−８℃の間で元の容器に保存されるべきであり、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物は、再溶解してから１週間以内、５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内に投与されるべきである。代替の実施形態において、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうちの１種又は複数種は、薬剤の量及び濃度を示す密閉容器内における液体形態で供給される。別の実施形態において、液体形態の投与対象の組成物は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７５ｍｇ／ｍＬ、又は少なくとも１００ｍｇ／ｍＬで密閉容器に供給される。液体の形態は２℃−８℃間で元の容易に保存されるべきである。

本開示の抗体及び抗体部分は、非経口投与に適した医薬組成物に混合することができる。別の実施形態において、抗体又は抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する注射用溶液として調製される。注射用溶液は、フリントバイアル（ｆｌｉｎｔ ｖｉａｌ）又はアンバーバイアル、アンプル又はプレフィルドシリンジ中の液体又は凍結乾燥剤形で構成することができる。緩衝液は、ｐＨ５．０〜７．０（最適にはｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適には５〜１０ｍＭであり得る。他の適切な緩衝剤としては、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムを含むが、これらに限定されない。塩化ナトリウムを使用して、０〜３００ｍＭ（液体剤形の場合、最適には１５０ｍＭ）の濃度での溶液の毒性を調整することができる。凍結乾燥剤形は、主に０〜１０％スクロース（最適には０．５〜１．０％）である凍結保護剤を含み得る。他の適切な凍結保護剤には、トレハロース及びラクトースが含まれる。凍結乾燥剤形には、主に１〜１０％のマンニトール（最適には２４％）を含む増量剤を含み得る。液体剤形及び凍結乾燥剤形の両方は、主に１〜５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には５〜１０ｍＭ）である安定剤を使用できる。他の適切な増量剤としては、グリシン、アルギニンを含み、０〜０．０５％のポリソルベート−８０（最適には０．００５〜０．０１％）を含み得る。別の界面活性剤としては、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤を含むが、これらに限定されない。非経口投与用の注射用溶液として調製された本開示の抗体及び抗体部分を含む医薬組成物は、治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収又は分散を増加させるために使用される薬剤のようなアジュバントとして有用な薬剤をさらに含み得る。特に有用なアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼである。注射用溶液にヒアルロニダーゼを添加すると、非経口投与、特に皮下投与後のヒトのバイオアベイラビリティが改善される。それはまた、より少ない痛み及び不快感、ならびに注射部位反応の最小の発生率を有するより大きい注射部位体積（すなわち、１ｍＬを超える）を可能にする（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００４０７８１４０、ＵＳ２００６１０４９６８を参照）。

本開示の組成物は、様々な形態であり得る。これら形態には、例えば、液剤（例えば、注射用及び注入用液剤（ｉｎｆｕｓｉｂｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ））、分散剤又は懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、リポソーム及び坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与方式及び治療使用に依存する。別の実施形態において、典型的な組成物は、他の抗体を含むヒトの受動免疫用の組成物と類似した組成物などの注射用溶液又は注入用溶液の形態である。別の実施形態において、投与方式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。別の実施形態において、抗体は、静脈内注入又は注射によって投与される。別の実施形態において、抗体は、筋肉内注射又は皮下注射によって投与される。

治療用組成物は、通常、製造及び貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の規則的な構造として製剤化することができる。無菌注射用溶液は、所望量の活性化合物（すなわち、抗体又は抗体部分）を、上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒中に混合して、続いて、必要に応じて濾過滅菌をすることによって調製できる。一般に、分散液の場合は、活性化合物を、アルカリ性分散媒及び上記に列挙した所望のほかの成分成分を含有する滅菌媒体に混合することによって調製される。別の実施形態において、無菌注射用溶液を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から活性成分及び任意の別の所望の成分の粉末を得る真空乾燥及び噴霧乾燥である。例えばレシチンのようなコーティングを使用すること、分散液の場合には必要な粒径を維持すること、及び界面活性剤を使用することによって、溶液を適切な流動性に維持することができる。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅らせる薬剤（例えばモノステアリン酸塩及びゼラチン）を含めることによって達成できる。

本開示の抗体及び抗体部分は、当技術分野において公知の様々な方法によって投与することができるが、多くの治療使用にとって好ましい投与経路／方式は、皮下注射、静脈内注射又は注入である。当業者が理解されるように、投与経路及び／又は方式は、所望の結果に応じて変わる。特定の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む放出制御製剤など、化合物の高速放出を防止する担体と共に調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための多くの方法が特許を取得しているか、又は一般に当業者に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ, Ｊ． Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ, ｅｄ．, Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ, Ｉｎｃ．, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, １９７８を参照できる。

特定の実施形態において、本開示の抗体又は抗体部分は、例えば、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体と共に経口投与することができる。 化合物（及び必要に応じて他の成分）はまた、ハード又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入するか、錠剤に圧縮されるか、又は対象の食べ物に直接混入してもよい。経口治療投与の場合、化合物を賦形剤と混合し、吸収可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤（ｗａｆｅｒ）などの形態で使用することができる。非経口投与以外の方式によって本開示の化合物を投与するためには、その不活性化を防止するための材料で化合物をコーティングするか、又はそれと共に化合物を同時投与することが必要であり得る。

補助的な活性化合物もまた組成物に混入することができる。特定の実施形態において、本開示の抗体又は抗体部分は、４−１ＢＢ活性が低すぎる障害を治療するのに有用である１つ又は複数の別の治療薬と同時処方及び／又は同時投与され得る。例えば、本開示の抗４−１ＢＢ抗体又は抗体部分は、他の標的に結合する１つ以上の別の抗体（例えば、他のサイトカインに結合するか又は細胞表面分子に結合する抗体）と同時処方及び／又は同時投与され得る。

さらに、本開示の１つ以上の抗体は、２つ以上の前述の治療薬と組み合わせて使用することができる。そのような併用療法は、投与量が低い治療薬を有利に利用でき、それにより様々な単独療法に関連して起こり得る毒性又は合併症を回避する。

特定の実施形態において、４−１ＢＢの抗体又はその断片は、当技術分野において公知の半減期延長媒体に連結されている。そのような媒体としては、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、及びデキストランを含むが、これらに限定されない。そのような媒体は、例えば、米国特許出願第０９／４２８,０８２号、ＰＣＴ出願第ＷＯ９９／２５０４４号に記載されており、これらは、あらゆる目的のために、参照により本明細書に組み入れられる。

特定の実施形態において、本開示の抗体又は本開示の別の予防薬もしくは治療薬をコードするヌクレオチド配列を有する核酸配列は、遺伝子治療によって障害又はその１つもしくは複数の症状を治療、予防、管理又は改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現された又は発現可能な核酸を対象へ投与することによって行われる治療を指す。本開示の該実施形態において、核酸は、予防又は治療効果を媒介するそれらのコードされた本開示の抗体、又は予防薬もしくは治療薬を産生する。

当技術分野で利用可能な遺伝子治療のための方法のいずれも本開示に従って使用することができる。遺伝子治療方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３, Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；Ｗｕ及びＷｕ, １９９１, Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ, １９９３, Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ． ３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２ （１９９３）；及びＭｏｒｇａｎとＡｎｄｅｒｓｏｎ, １９９３, Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６２：１９１−２１７；Ｍａｙ, １９９３, ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５を参照できる。分野で一般に知られている使用可能な組換えＤＮＡ技術の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ．）, Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ, Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ, ＮＹ （１９９３）と、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ, Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ, Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ, Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ, ＮＹ （１９９０）とに記載されている。様々な遺伝子治療方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み入れられるＵＳ２００５００４２６６４ Ａ１に開示されている。

本開示の抗体、又はその抗原結合部分は、そのような疾患を治療するために単独で又は組み合わせて使用することができる。なお、本開示の抗体又はその抗原結合部分は、単独で又は別の薬剤（例えば治療薬）と組み合わせて使用することができ、前記別の薬剤は、その意図する目的に応じて当業者によって選択される。例えば、別の薬剤は、本開示の抗体で治療されている疾患又は病症を治療するのに有用であると当技術分野で認められている治療薬としてもよい。別の薬剤はまた、治療用組成物に有益な特性を付与する薬剤、例えば組成物の粘度に影響を及ぼす薬剤であり得る。

また、本開示内に含まれる組み合わせは、それらの意図する目的のための組み合わせであることを理解されたい。以下の薬剤は、説明のためのものであり、限定的なものではない。本開示の一部の組み合わせは、本開示の抗体及び以下のリストから選択される少なくとも１つの別の薬剤の組み合わせであり得る。組み合わせは、２つ以上の別の薬剤、例えば２つ又は３つの別の薬剤を含み得、このような組み合わせであれば、形成された組成物がその意図された機能を果たすことができる。

本明細書において詳細に説明したとおり、併用療法は、例えば１種以上のサイトカイン、成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、抗線維化剤、代謝阻害剤、酵素抑制剤及び／又は細胞傷害剤もしくは細胞増殖抑制剤のような１種以上の別の治療薬と同時処方され及び／又は同時投与される１種以上の４−１ＢＢアゴニスト又は拮抗薬、例えば抗４−１ＢＢ抗体又はその断片を含み得る。本明細書中により詳細に記載される通りである。

本開示の医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の本開示の抗体又は抗体部分を含み得る。「治療有効量」とは、所望の投与量及び期間で所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。抗体又は抗体部分の治療有効量は、当業者によって決定され得、そして個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに抗体又は抗体部分の個人に望ましい反応を引き出す能力などの要因によって変わる。治療有効量はまた、抗体又は抗体部分の治療上有益な効果があらゆる毒性又は有害な効果よりも大きい量である。「予防有効量」とは、所望の投与量及び期間で所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。通常、予防的投与量が疾患の発症前又は初期段階で対象に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量よりも少ない。

薬剤投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療的又は予防的応答）を提供するように調整することができる。例えば、単回ボーラス（ｓｉｎｇｌｅ ｂｏｌｕｓ）を投与してもよく、数回に分割した用量を経時的に投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に減少又は増加させてもよい。投与の容易さ及び投薬量の均一性から、非経口組成物を投与単位形態で調製することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態は、治療対象の哺乳動物対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を指す。各単位は、所望の薬学的担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本開示の投与単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の独特の特徴及び達成されるべき特定の治療的又は予防的効果、及び（ｂ）個人における感受性の治療のためのそのような活性化合物を調合する技術分野に固有の制限によって決まり、そしてこれらに直接依存する。

本開示の抗体又は抗体部分の治療的又は予防的有効量の例示的で非限定的な範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇである。なお、投与量の値は、軽減されるべき病症の種類及び重症度によって変わる。また、なお、任意の特定の対象について、個々のニーズ及び組成物を投与し又はその投与を管理する人の専門的判断に従って具体的な投与計画を経時的に調整すべきであり、本明細書に記載の投与量範囲は、例示的なものに過ぎず、特許請求された組成物の範囲又は実施を限定することを意図していない。

当業者にとって自明なように、本明細書に記載された本開示の方法の他の適切な修正及び変化が明らかであり、本開示の範囲又は本明細書に開示された実施形態から逸脱することなく適切な均等物を用いて他の適切な修正及び変化がなされ得る。

これまでは、本開示を詳細に説明してきたが、以下の実施例を参照することによって本開示ことがより明確になり、これらの実施例は説明のみを目的として含まれ、本開示を限定することを意図しない。

（実施例１） 抗ヒト４−１ＢＢモノクローナル抗体の調製

ヒト抗原を選択しそして産生して、動物を免疫した。ヒト４−１ＢＢ（ａ．ｋ．ａ． ＣＤ１３７） （ＮＰ＿００１５５２．２）細胞外ドメインのＮ末端断片（Ｍｅｔ １−Ｇｉｎ １８６）をコードするＤＮＡ配列を、Ｃ末端で、ヒトＩｇＧ１のＣ末端ポリヒスチジンタグ付きＦｃ領域と融合させた。構築物を宿主細胞（例えば、ＮＳＯ由来のマウス骨髄腫細胞株）に導入し、宿主細胞中で組換えタンパク質として発現させた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定したところ、組換えタンパク質を９５％を超える純度まで精製した。

タンパク質のドメイン構造は、Ｎ末端｛｛ヒト４−１ＢＢ（Ｌｅｕ２４−Ｇｌｎ１８６）−ＤＩＥＧＲＭＤ−ヒトＩｇＧ１（Ｐｒｏ１００−Ｌｙｓ３３０）−６−Ｈｉｓタグ｝｝Ｃ末端である。予測された分子量（ＭＷ）は４４．８ｋＤａ（単量体）であり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで測定したＭＷは５０〜６５ＫＤであった。

機能的ＥＬＩＳＡにおいて組換えタンパク質の結合能力によって測定されるように、組換えタンパク質は、４−１ＢＢのいくつかの機能的特性を有することが示された。組換えヒト４−１ＢＢ Ｆｃキメラを１０ｎｇ／ｍＬ（１００μＬ／ウェル）で固定化したところ、５０％の最適結合応答を発生させた組換えヒト４−１ＢＢリガンド（カタログ番号２２９５−４Ｌ）の濃度は、約０．５〜２．５ｎｇ／ｍＬである。２０μｇ／ｍＬ（１００μＬ／ウェル）の固定化組換えマウス４−１ＢＢリガンドは、１５．６〜５００ｎｇ／ｍＬの線形範囲でヒト４−１ＢＢに結合できた。

マウスハイブリドーマスクリーニングをＥＬＩＳＡで行い、ウエスタンブロットにより確認した。選択されたクローンの結合親和性を細胞表面結合アッセイにより確認した。４−１ＢＢ ｍＡｂ上清について染色する前に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を対照又はヒト／サル４−１ＢＢプラスミドで一晩トランスフェクトした。選択されたクローンの大多数は、ヒト及びサルの４−１ＢＢタンパク質と交差反応性を示した。

（実施例２） 抗ヒト４−１ＢＢモノクローナル抗体の特徴付け

プレートコートＣＤ３ ｍＡｂ共刺激

９６ウェル培養プレートを１×ＰＢＳの異なる濃度のＣＤ３ ｍＡｂ（ＯＫＴ３）で一晩コーティングした。１×ＰＢＳで３回洗浄した後、培養開始時に、プレートをさらに１０μｇ／ｍＬのｈ４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照マウスＩｇＧ１でコーティングした。ヒトＴ細胞をヒト末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離し、抗体コートプレートに添加する前にＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）で標識した。４〜６日培養後、Ｔ細胞の分裂（又は増殖）をフローサイトメトリーを用いて、ＣＦＳＥ希釈によって調べた。

Ｔ細胞増殖を刺激する能力によっていくつかのクローンを選択した。これらクローンは、４−１ＢＢの共刺激アゴニストとして利用できる。これらのクローンの一つはＺＷ１０３でした。ＺＷ１０３は、１つ又は複数の共刺激物と共にＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させることができた（図１）。他のクローンは、ＺＷ１０４、ＺＷ１０５、ＺＷ１０６、及びＺＷ１０７などを含む。

選択されたクローンがヒト及びサル４−ＩＢＢに結合することができることを確認するために、ヒト又はサル４−１ＢＢを発現させた２９３Ｔ細胞を使用して、ＺＷ１０３及びＺＷ１０４のヒト及びサル４−１ＢＢへの結合を試験した。ＺＷ１０３及びＺＷ１０４は両方ともヒト及びサル４−１ＢＢに結合することができた（図２）。 ＺＷ１０５、ＺＷ１０６及びＺＷ１０７もヒト及びサル４−１ＢＢに結合することができた。表８は、ＺＷ１０５及びＺＷ１０６と組換えヒト４−１ＢＢ ＥＣＤタンパク質との結合親和性を示す。

選択されたクローンが共刺激物ＣＤ３ ｍＡＢの存在下でＴ細胞増殖を刺激できることを確認するために、共刺激アッセイをコードプレート中で実施した。ＺＷ１０３及びＺＷ１０４は両方ともＴ細胞増殖を刺激することができた（図３）。精製ヒトＴ細胞をＣＦＳＥ標識し、ＯＫＴ３、及びコード４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質で刺激した。５日間培養した後に、細胞を回収して、ＣＤ４及びＣＤ８について染色して、フローサイトメトリー分析に供した。示されたＣＦＳＥ希釈細胞を分裂Ｔ細胞として計数した（図３）。

図４は、精製ヒトＴ細胞を、ＯＫＴ３、及びコード４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質で刺激したことを示すグラフである。Ｔ細胞応答を促進するために、組換えヒトインターロイキン−２（６０ＩＵ／ｍＬ）を一部の培養物に添加した。５日目に上清を回収してサイトカインＩＦＮ−γを測定した（図４）。これらの結果は、選択されたクローンがヒトＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化し、ヒトＴ細胞によるＩＦＮ−γの産生を刺激できることを確認した。

図５Ａは、移植片対宿主（ＧＶＨ）疾患モデルの手順を示す。０日目に、１０００万個のＣＦＳＥ標識ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＮＯＤ ｓｃｉｄ γ（ＮＳＧ）マウスに注射した。０日目及び２日目に、４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質でマウスを処理した。６日目に脾細胞を採取して、フローサイトメトリー分析に供した。図５Ｂに示すように、４−１ＢＢ ｍＡｂ処理は、異種−ＧＶＨＤマウスモデルにおいて、Ｔ細胞増殖を促進した。６日目に脾細胞を採取し、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ３及びｈＣＤ８について染色した。示されているデータは、ＣＦＳＥ希釈によって測定した、分裂したヒトＴ細胞の平均パーセンテージ（Ｎ＝４）であった。ＧＶＨＤモデルにおいてＴ細胞増殖から確認したとおり、ＺＷ１０３は免疫を増強した（図５Ｂ）。

開示された４−１ＢＢ Ａｂの、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスのＧＶＨＤに対する影響を試験するために、５、８、１２、１５日目に、１５００万のヒトＰＢＭＣを注射したＮＳＧを、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂ又はＰＢＳ対照３００μｇで処理した。ｈＰＢＭＣ移植時に体重をモニターした。その結果、開示されたヒト化４−１ＢＢ ＡｂがヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスのＧＶＨＤを促進したことを示す（図６Ａ）。

図６Ｂは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが、異種−ＧＶＨＤモデルにおいて血清ＩＦＮ−γを増加させたことを示す。上方図は、８日目に測定した血清中のＩＦＮ−γ濃度を示し、下方図は、２１日目に測定した血清中のＩＦＮ−γ濃度を示す（左側の２本のバーは、それぞれＺＷ１０３−２及びＺＷ１０３−４である。右側のバーはＰＢＳである）。

図６Ｃは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが、異種−ＧＶＨＤモデルにおいて脾臓サイズを増大させたことを示す。図４Ａのように、２１日目に脾臓を採取して秤量した。

図６Ｄは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが末梢血中のヒトＴ細胞を増加させ、そしてその作用が用量依存的であることを示す。図６Ａのように、ｈＰＢＭＣ移植の２８日後、ヒトＣＤ４５染色についてヒトＰＢＭＣの生着をＦＡＣＳにより分析した。

図６Ｅは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが肝臓におけるヒトＴ細胞浸潤を増加させたことを示す。図６Ａのように、ｈＰＢＭＣ移植の２８日後、肝臓組織切片を抗ヒトＣＤ３抗体で染色した。

表９は、開示されたヒト化４−１ＢＢ ＡｂがＧＶＨＤによって引き起こされる組織損傷を増強したことを示す。図６Ａのように、２８日目にマウスを屠殺し、組織を４％パラホルムアルデヒドに浸して、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。２人の独立した病理学者によって組織損傷について採点した。

図７Ａは、インビボでのヒト４−１ＢＢ ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す。 キメラヒト４−１ＢＢ細胞外遺伝子を有する４−１ＢＢノックインマウスへＭＣ３８癌細胞（０．５×１０^６）を皮下注射することにより腫瘍モデルを作成した。５、８、１２日目に、マウスを４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質で静脈内処置した。１８日目に腫瘍を分離して測定した。対照群（マウス３及びマウス４）と比較して、ＺＷ１０６で処置した群（マウス１及びマウス２）では、腫瘍サイズが有意に小さかった。

図７Ｂは、インビボでの異なる用量の完全ヒト化４−１ＢＢ ｍＡｂの作用を示す。キメラヒト４−１ＢＢ細胞外遺伝子を有する４−１ＢＢノックインマウスへＭＣ３８癌細胞（０．５×１０^５）を皮下注射することにより腫瘍モデルを作成した。腫瘍サイズが１００ｍｍ^３に達したとき、３ｍｇ／ｋｇ（低用量）及び１５ｍｇ／ｋｇ（高用量）のヒト化４−１ＢＢ ｍＡｂ ＺＷ１０５−ＩｇＧ４及びＺＷ１０６−ＩｇＧ４又は対照タンパク質で３日毎にマウスを静脈内処置した。各群においてＮ＝６であった。

（実施例３）エピトープのマッピング

２種の精製抗体ＺＷ１０５及びＺＷ１０６によって認識される４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）リガンドのエピトープを同定するために、抗体により、４−１ＢＢ組換えタンパク質のトリプシン及びキモトリプシン消化物のを沈殿させた。Ｔｈｅｒｍｏ Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計を用いて、ナノ液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）分析によって、沈殿物をさらに検出した。その結果、４−１ＢＢ組換えタンパク質由来のペプチド領域Ｔ９０ＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬ１２４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ５１）が、抗体ＺＷ１０５及びＺＷ１０６の両方によって認識される主なエピトープであることを示した。

本願は、２０１６年１１月２３日に提出した米国特許出願６２／４２６,０７４の優先権を主張し、その全内容を引用により本願に組み込める。

本開示は、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）結合タンパク質及びこれらの使用に関し、特に複数種の疾患の治療に関する。

癌免疫療法は、Ｔ細胞の制御メカニズム（チェックポイント）を克服することによって抗腫瘍応答を増強させる。４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）タンパク質受容体は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞や樹状細胞などのさまざまな免疫細胞に見られる。４−１ＢＢは、細胞傷害性Ｔ細胞応答を増強させることが示されている。総説については、Ｙｏｎｅｚａｗａら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ,２１：３１１３−２０（２０１５）を参照すればよい。

本開示は、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）結合タンパク質に関する。本開示に係る結合タンパク質は、抗体、抗原結合部分及びヒト４−１ＢＢに結合可能なほかの抗原結合タンパク質を含むが、これらに限定されない。また、本開示は、４−１ＢＢ結合タンパク質を製造する方法、及び、４−１ＢＢ結合タンパク質を用いて癌などの疾患を治療する方法を提供する。

本明細書は、ヒト４−１ＢＢに結合して、免疫細胞の数の増加を刺激する複数種のヒト４−１ＢＢ抗体を開示する。これら抗体は、自体により強化された抗腫瘍免疫機能を提供する。これら抗体は、さらに、Ｔ細胞機能を阻害する免疫チェックポイントの阻害剤（即ちＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１ ｍＡｂ）と相乗作用することができる。

一実施形態において、本開示は、４−１ＢＢに結合可能な結合タンパク質に関する。別の実施形態において、結合タンパク質は、ヒト４−１ＢＢに結合する。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢの１種又は複数種の生物学的機能を調整できる。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢを中和できる。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢを中和しない。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合して、４−１ＢＢとほかの結合標的との結合を阻害できる。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢのアゴニストとして利用できる。

本開示の一実施形態は、単離抗体又はほかの抗原結合断片を提供し、前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒト４−１ＢＢに結合して細胞における４−１ＢＢとその結合パートナーとの結合を阻害する。別の実施形態において、５０ｎＭ ４−１ＢＢの濃度では、開示された抗体のＥＣ５０は、１０^−６Ｍ、１０^−７Ｍ、１０^−８Ｍ、１０^−９Ｍ又は１０^−１０Ｍである。

別の実施形態において、結合タンパク質は、単離抗体である。別の実施形態において、本開示は、単離抗体又はその抗原結合断片を提供し、前記抗体又はその抗原結合断片は、ヒト４−１ＢＢに結合して、４−１ＢＢのレベル及び／又は活性を調整する。一態様では、治療有効量の前記抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すると、前記抗体又はその抗原結合断片は、４−１ＢＢを発現させる細胞における４−１ＢＢの活性を約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％抑制する。別の態様では、治療有効量の前記抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すると、前記抗体又はその抗原結合断片は、４−１ＢＢを発現させる細胞における４−１ＢＢのレベルを約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％低下させる。別の態様では、治療有効量の前記抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すると、前記抗体又はその抗原結合断片は、４−１ＢＢを発現させる細胞における４−１ＢＢの活性を約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％強化させる。

一実施形態において、表面プラズモン共鳴により測定した結果、本開示の結合タンパク質と４−１ＢＢは、少なくとも約１０^２Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^３Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^４Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^５Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^６Ｍ^−１ｓ^−１、少なくとも約１０^７Ｍ^−１ｓ^−１又は少なくとも約１０^８Ｍ^−１ｓ^−１のオン速度定数（ｋ_ｏｎ）を有する。

別の実施形態において、表面プラズモン共鳴により測定した結果、本開示の結合タンパク質と４−１ＢＢは、多くとも約１０^−３ｓ^−１、多くとも約１０^−４ｓ^−１、多くとも約１０^−５ｓ^−１、多くとも約１０^−６ｓ^−１、多くとも約１０^−７ｓ^−１又は多くとも約１０^−７ｓ^−１のオフ速度定数（ｋ_ｏｆｆ）を有する。

別の実施形態において、本開示の結合タンパク質と４−１ＢＢは、多くとも約１０^−７Ｍ、多くとも約１０^−８Ｍ、多くとも約１０^−９Ｍ、多くとも約１０^−１０Ｍ、多くとも約１０^−１１Ｍ、多くとも約１０^−１２Ｍ又は多くとも約１０^−１３Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

一実施形態において、ヒト４−１ＢＢに特異的に結合可能な結合タンパク質が開示されており、前記結合タンパク質は、抗原結合ドメインを含み、且つ、前記抗原結合ドメインは、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３の６種類のＣＤＲを含み、ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１からなる群より選ばれ、ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２からなる群より選ばれる。

別の実施形態において、６種類のＣＤＲのうち、３種類は、下記ＣＤＲセットからなる可変ドメインＣＤＲセットからなる群より選ばれる。
ＶＨ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
ＶＬ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
ＶＨ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
ＶＬ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０

ＶＨ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３
ＶＬ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６
ＶＨ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７
ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８
ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９
ＶＬ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット
ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０
ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１
ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２。

別の実施形態において、結合タンパク質は、ＶＨ ＺＷ１０３ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット、ＶＨ ＺＷ１０４ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット、ＶＨ ＺＷ１０６ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット、及びＶＨ ＺＷ１０７ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０７ ＣＤＲセットからなる群より選ばれる少なくとも２種の可変ドメインＣＤＲセットを含む。

別の実施形態において、本明細書に開示された結合タンパク質はさらにヒトＦｃ領域を含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なヒト抗体又はその抗原結合部分である。

別の実施形態において、本明細書に開示された結合タンパク質は、ヒト受容体フレームワークをさらに含む。別の実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分である。別の実施形態において、ＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された１種又は複数種のＣＤＲを含む。別の実施形態において、ＣＤＲ移植抗体又はその抗原結合部分は、ヒト受容体フレームワークを含む。

別の実施形態において、開示された結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なヒト化抗体又はその抗原結合部分である。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、以上開示された１種又は複数種のＣＤＲを含み、ヒト受容体フレームワークのヒト抗体可変ドメインに組み込まれる。別の実施形態において、ヒト抗体可変ドメインは、コンセンサスヒト可変ドメインである。

別の実施形態において、ヒト受容体フレームワークは、キー残基での少なくとも１つのフレーム領域アミノ酸置換を含み、前記キー残基は、ＣＤＲに隣接する残基、グリコシル化部位残基、希少残基、ヒト４−１ＢＢと相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基、Ｖｅｒｎｉｅｒ領域における残基、及びＣｈｏｔｈｉａで定義された可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔで定義された第１重鎖ワークフレームとの間のオーバーラップ領域における残基を含む。

実施形態において、結合タンパク質は、４−１ＢＢに結合可能なヒト化抗体又はその抗原結合部分である。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された１種又は複数種のＣＤＲを含む。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された３種類以上のＣＤＲを含む。別の実施形態において、前記ヒト化抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に開示された６種類のＣＤＲを含む。

別の実施形態において、結合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．： １〜８からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する可変ドメインを少なくとも１種含む。

別の実施形態において、結合タンパク質は、少なくとも１種の重鎖可変ドメイン及び少なくとも１種の軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、３、５、７及び４２からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、４、６、８及び４３からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する。

別の実施形態において、結合タンパク質は、下記可変ドメインセットからなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する２種の可変ドメインを含んでもよい。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と２、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と４、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５と６、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７と８、又は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２と４３。

一実施形態において、本開示は、以上開示されたいずれか１種の結合タンパク質及びリンカーポリペプチド又は免疫グロブリンを含む抗体構築物を提供する。別の実施形態において、抗体構築物は、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、完全ヒト抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、及び二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）からなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記抗体構築物は、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群より選ばれる重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示された抗体構築物及び薬剤を含む抗体コンジュゲートを提供し、前記薬剤は、免疫接着分子、造影剤、治療薬、及び細胞傷害剤からなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記造影剤は、放射性マーカー、酵素、蛍光マーカー、発光マーカー、生物発光マーカー、磁気マーカー、及びビオチンからなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記造影剤は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏ、及び^１５３Ｓｍからなる群より選ばれる下記放射性マーカーである。別の実施形態において、治療薬又は細胞傷害剤は、代謝拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、毒素、及び抗アポトーシス剤からなる群より選ばれる。

別の実施形態において、抗体構築物はグリコシル化される。別の実施形態において、前記グリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンである。

別の実施形態において、本明細書に開示された結合タンパク質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートは、結晶として存在している。別の実施形態において、前記結晶は、無担体医薬放出制御結晶である。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲートは、インビボにおいて可溶性対応物よりも長い半減期を有する。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲートは、結晶化後に生物学的活性を保留する。

一態様によれば、結合タンパク質は、多重特異性抗体、及び二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）であってもよい。このような抗体構築物は、本分野において公知するものであり、且つ、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（ｅｄ．）,Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ,ＮＹ（２０１１）、及びＳｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２）：９６−１０６（２０１５）において説明してキャラクタリゼーションしたとおりである。このような二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）構築物は、４−１ＢＢ及び第２標的に結合可能な１つ又は複数の結合ドメインを含む。一実施形態において、前記第２標的は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体、ＣＳＦ１、ＭＣＳＦ、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３ （ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮα１、ＩＦＮβ１、ＩＦＮγ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２α、ＩＬ−１２β、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＫＩＴＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５Ｒα、ＩＬ−８Ｒα、ＩＬ−８Ｒβ、ＩＬ−１２Ｒβ１、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＧＤＦ１１Ｒα１、ＧＤＦ１１Ｒα２、ＩＬ−１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、及びＬＴＢＲからなる群より選ばれる。

別の実施形態において、本開示では、以上開示された結合タンパク質、抗体構築物又は抗体コンジュゲートのうちのいずれか１種をコーディングする単離核酸に関する。さらなる一実施形態は、以上開示された単離核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターは、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００２,Ｖｏｌ ３０,Ｎｏ．２）、ｐＴＴ３（追加したマルチクローニングサイトを含むｐＴＴ、ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ,Ｓ及びＮａｇａｔａ,Ｓ．,（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｖｏｌ １８,Ｎｏ．１７）、ｐＢＶ、ｐＪＶ、及びｐＢＪからなる群より選ばれる。

一実施形態において、宿主細胞が以上開示されたベクターで形質転換される。別の実施形態において、前記宿主細胞は、原核細胞である。別の実施形態において、前記宿主細胞は、大腸菌である。別の実施形態において、前記宿主細胞は、真核細胞である。別の実施形態において、前記真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、及び真菌細胞からなる群より選ばれる。別の実施形態において、前記宿主細胞は、ＣＨＯ及びＣＯＳを含むがこれらに限定されない哺乳動物細胞、又はサッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞、又はＳｆ９などの昆虫細胞である。

別の実施形態において、４−１ＢＢに結合する結合タンパク質を産生する方法を提供する。前記方法は、４−１ＢＢに結合する結合タンパク質の産生に十分な条件下で、培地において以上開示されたいずれか１種の宿主細胞を培養することを含む。別の実施形態において、以上開示された方法により産生される結合タンパク質を提供する。
別の実施形態において、結合タンパク質を放出する組成物が開示されており、前記組成物は、製剤及び少なくとも１種の重合体担体を含み、前記製剤はさらに、以上開示された結晶化結合タンパク質、結晶化抗体構築物又は結晶化抗体コンジュゲート、及び成分を含む。別の実施形態において、前記重合体担体は、ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリレート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）又はＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテルコポリマー、プルロニックポリオール（ｐｌｕｒｏｎｉｃ ｐｏｌｙｏｌ）、アルブミン、アルギン酸塩、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリコサミノグリカン（ｇｌｙｃａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ）、硫酸化多糖、及びそれらのブレンドと共重合体からなる群より選ばれる１種又は複数種の重合体である。別の実施形態において、前記成分は、アルブミン、蔗糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール、及びポリエチレングリコールからなる群より選ばれる。

別の実施形態において、前記哺乳動物に本明細書に開示された組成物を有効量で投与するステップを含む哺乳動物の治療方法が開示されている。

本開示は、本明細書に開示された結合タンパク質、抗体構築物又は抗体コンジュゲート及び薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態において、前記医薬組成物は、４−１ＢＢ活性が有害となる障害を治療するための少なくとも１種の別の治療薬を含む。別の実施形態において、別の薬剤は、次の薬剤からなる群より選ばれ、すなわち、治療薬、造影剤、細胞傷害剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体又はＶＥＧＦトラップ（ＶＥＧＦ−ｔｒａｐ）を含むが、これらに限定されない）；キナーゼ阻害剤（ＫＤＲ及びＴＩＥ−２阻害剤を含むが、これらに限定されない）；共刺激分子ブロッカー（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−１ｇ、抗ＣＤ２０を含むが、これらに限定されない）；接着分子ブロッカー（抗ＬＦＡ−１抗体、抗Ｅ／Ｌセレクチン抗体、小分子阻害剤を含むが、これらに限定されない）；抗サイトカイン抗体又はその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体を含むが、これらに限定されない）；メトトレキセート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能なマーカー又はレポーター；ＴＮＦ拮抗薬；抗リウマチ薬；筋弛緩薬、麻薬（ｎａｒｃｏｔｉｃ）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、麻酔薬（ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ）、鎮静薬、局所麻酔薬、神経筋遮断薬、抗微生物薬、抗乾癬薬、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫剤、免疫グロブリン、免疫抑制薬、成長ホルモン、ホルモン補充薬、放射性医薬、抗うつ薬、抗精神病薬、覚醒剤、喘息治療薬、βアゴニスト、吸入ステロイド、エピネフリン又は類似体、サイトカイン、及びサイトカイン拮抗薬などが挙げられる。

一態様によれば、本開示は、ヒト４−１ＢＢと本明細書に開示された結合タンパク質とを接触させて、ヒト４−１ＢＢを活性化させるステップを含むヒト４−１ＢＢの活性を活性化させる方法を提供している。

別の態様では、本開示は、対象における４−１ＢＢ関連障害を治療（例えば、治癒、抑制、改善、遅延又は発症又は再発又は逆戻りの予防）又は予防する方法を提供する。前記方法は、前記４−１ＢＢ関連障害を治療又は予防するのに十分な量の４−１ＢＢ結合剤、例えば本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片を前記対象に投与するステップを含む。４−１ＢＢ結合タンパク質を対象に単独で投与又は本明細書に記載のほかの治療方式、例えば抗４−１ＢＢ抗体又はその断片と組み合わせて投与することができる。

一実施形態において、対象は、哺乳動物、例えば１種又は複数種の４−１ＢＢ関連障害に罹患する人間であり、前記障害（疾患）は、例えば、本明細書に記載の呼吸器疾患（例えば、喘息（例えばアレルギー性及び非アレルギー性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び気道炎症、好酸球増加症、線維症及び粘液の過剰な産生に関するほかの状態、アトピー性疾患（例えば、アトピー性皮膚炎及びアレルギー性鼻炎）、皮膚の炎症性及び／又は自己免疫障害、胃腸器官の炎症性及び／又は自己免疫障害（例えば、潰瘍性結腸炎及び／又はクローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、ならびに、肝臓の炎症性及び／又は自己免疫障害（例えば、肝硬変、線維症）、強皮症、ホジキンリンパ腫などの腫瘍又は癌を含む。したがって、本開示は、４−１ＢＢ結合剤（本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片など）の本明細書に記載の治療における使用、及び１ＢＢ複合剤（本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片など）の本明細書に記載の治療のための医薬の調製における使用を含む。４−１ＢＢ関連障害の例は、本明細書に記載の癌を含むが、これらに限定されない。

別の態様では、本願は、サンプル（例えば、生物サンプル、例えば血清、プラズマ、組織や生検切片）における４−１ＢＢの存在をインビトロで検出する方法を提供する。かかる方法は、障害の診断に利用できる。前記方法はステップ（ｉ）とステップ（ｉｉ）を含み、（ｉ）サンプル又は対照サンプルと本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片とを接触させ、（ｉｉ）抗４−１ＢＢ抗体又はその断片とサンプル又は対照サンプルとの複合体の形成を検出し、ここで、対照サンプルに対する、前記サンプルにおける複合体形成の統計学的に有意な変化が前記サンプルにおける４−１ＢＢの存在を示している。

別の態様では、本願は、４−１ＢＢの存在をインビボ（例えば、在対象の体内でイメージング）で検出する方法を提供する。かかる方法は、障害、例えば４−１ＢＢ関連障害の診断に用いられる。前記方法は、ステップ（ｉ）とステップ（ｉｉ）を含み、（ｉ）本明細書に記載の抗４−１ＢＢ抗体又はその断片と４−１ＢＢとの結合を許可する条件下で、前記抗体又は断片を対象又は対照対象に投与し、（ｉｉ）抗前記抗体又は断片と４−１ＢＢとの複合体の形成を検出し、ここで、対照対象に対する、前記対象における複合体形成の統計学的に有意な変化が４−１ＢＢの存在を示している。

別の態様では、本開示に係る結合タンパク質は、下記障害からなる群より選ばれる障害を治療でき、すなわち、サラセミア、ベータサラセミア、貧血、鉄欠乏性貧血、プランマー・ビンソン症候群、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、タンパク質欠乏性貧血、壊血病、有棘赤血球増加症、アルファサラセミア、再生不良性貧血、先天性赤血球形成異常性貧血、溶血性貧血、ファンコーニ貧血、遺伝性球状赤血球症、遺伝性楕円赤血球症、遺伝性熱変形赤血球症（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｐｙｒｏｐｏｉｌｉｋｏｃｙｔｏｓｉｓ）、寒冷凝集素症、溶血性尿毒症症候群、充血（ｈｙｐｅｒａｎｅｍｉａ）、無効赤血球生成（ｉｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｅｒｙｔｈｒｏｐｅｓｉｓ）、大細胞性貧血（ｃａｃｒｏｃｙｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、骨髄癆性貧血、神経有棘赤血球症、舞踏病、有棘赤血球増加症、ピルビン酸キナーゼ欠損症、鎌状赤血球症、トリオースリン酸イソメラーゼ欠損症、関節炎、骨関節炎、若年性特発性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植片拒絶反応、臓器移植に関連する急性又は慢性の免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固症候群、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、多発血管炎性肉芽腫症、ヘノッホ−シェンレイン紫斑病、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、中毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染症、寄生虫症、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、散発性疾患（ｓｐｏｒａｄｉｃ）、多腺性機能不全症候群Ｉ型及び多腺性機能不全症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸窮迫症候群、脱毛症、円形脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ ｇｒｅａｔａ）、血清陰性関節症、関節症、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸炎、腸炎性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節症、脊椎関節症、アテローム性疾患／動脈硬化、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、Ｃｏｏｍｂｓ陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、虚血性脳炎／慢性疲労症候群、慢性皮膚粘膜カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、原因不明自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性の不妊、卵巣不全、早発卵巣不全、線維性肺疾患、特発性肺線維症、ポスト炎症性間隙性肺疾患、間質性肺炎、結合組織病に関連する間質性肺疾患、混合性結合組織疾患に関連する肺疾患、全身性硬化症に関連する間質性肺疾患、慢性関節リウマチに関連する間質性肺疾患、全身性エリテマトーデスに関連する肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎に関連する肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患、ヘモジデーシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、線維症、放射性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球性浸潤性肺疾患、感染性間質性肺疾患、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド性肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体性肝炎）、自己免疫性低血糖症、黒皮腫を伴うＢ型インスリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、男性不妊症特発性又はＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（すべてのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、強直性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐａｅｎｉａ）、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎（ｐｈａｃｏｇｅｎｉｃ ｕｖｅｉｔｉｓ）、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型によって媒介される疾病、急性及び慢性疼痛（様々な形態の疼痛）、ならびに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌、及び血液悪性腫瘍（白血病及びリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症（Ａｂｅｔａｌｉｐｏｐｒｏｔｅｍｉａ）、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房異所性拍動（ａｅｒｉａｌ ｅｃｔｏｐｉｃ ｂｅａｔｓ）、ＡＩＤＳ認知症症候群、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種異系移植片拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応、大動脈及び動脈瘤（ａｏｒｄｉｃ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｎｅｕｒｙｉｓｍｓ）、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ ｓｔｕｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植片拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序な又は多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳症、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚病、糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）、真性糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、薬物誘発性運動疾患（ＣＮＳドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発される）、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路及び小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺インプラント拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、いずれかの臓器又は組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病（Ｈａｌｌｅｒｒｏｒｄｅｎ−Ｓｐａｔｚ ｄｉｓｅａｓｅ）、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植片拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈（Ｈｉｓ ｂｕｎｄｌｅ ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ）、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞傷害、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植片拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系障害、脂肪性浮腫、肝臓移植片拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性疾患、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（Ｍｅｎｃｅｌ Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｔｈｏｍａｓ Ｓｈｉ−Ｄｒａｇｅｒ及びＭａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、腎臓病、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ＯＫＴ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植片拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植片拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群［多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症及び皮膚変化症候群］、灌流後症候群、ポンプ後症候群、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧症、放射線療法、レイノー現象及び疾患、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ ｎａｒｒｏｗ ＱＲＳ ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植片拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植片拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳構造的障害、亜急性硬化性全脳炎、卒倒、心血管系の梅毒、全身性アレルギー反応、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢ ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、いずれかの臓器又は組織の異種移植片拒絶、急性冠症候群、急性特発性多発性神経炎、急性炎症性脱髄性多発神経根神経障害、急性虚血、成人スチル病、円形脱毛症、アレルギー反応、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、アテローム性動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に関連する自己免疫異常、自己免疫性腸症、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性早期卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心血管疾患、劇症型抗リン脂質症候群、セリアック病、頚部脊椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを有する臨床的孤発症候群（ＣＩＳ）、結膜炎、小児発症精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病性網膜症、真性糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板脱出、薬物誘発免疫性溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼内炎、上強膜炎、多形性紅斑、重症型多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群（Ｈｕｇｈｅｓ Ｓｙｎｄｒｏｍ

ｅ）、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ媒介性アレルギー、免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症疾患、炎症性脱髄疾患、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、ＩＰＦ／ＵＩＰ、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｃｃａ）、クスマウル病又はクスマウル−マイヤー病、ランドリー麻痺（Ｌａｎｄｒｙ’ｓ Ｐａｒａｌｙｓｉｓ）、ランゲルハンス細胞性組織球症、網状皮斑、黄斑変性、顕微鏡的多発性血管炎、モルブス・ベヒテレフ（ｍｏｒｂｕｓ ｂｅｃｈｔｅｒｅｖ）、運動ニューロン疾患、粘膜性類天疱瘡、多臓器不全、重症筋無力症、骨髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、神経障害、非Ａ非Ｂ型肝炎、視神経炎、骨溶解、小関節性ＪＲＡ、末梢動脈閉塞疾患（ＰＡＯＤ）、末梢血管疾患（ＰＶＤ）、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発性動脈炎（又は結節性動脈周囲炎）、多発性軟骨炎、リウマチ性多発性筋痛、白毛症、多関節性ＪＲＡ、多内分泌欠損症候群、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛（ＰＭＲ）、ポンプ後症候群、原発性パーキンソニズム、前立腺癌、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、アクネ、膿疱症、骨過形成及び骨髄炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨神経痛、二次性副腎不全、シリコーン関連結合組織病、スネドン−ウィルキンソン皮膚症、強直性脊椎炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、全身性炎症反応症候群、側頭動脈炎、トキソプラスマ性網膜炎、概要中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体）、Ｉ型アレルギー反応、ＩＩ型糖尿病、じんましん、通常型間質性肺炎（ＵＩＰ）、血管炎、春季結膜炎、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性、および創傷治癒からなる群より選ばれる障害を治療できる。

別の態様では、本開示に係る結合タンパク質は、下記障害からなる群より選ばれる障害を治療でき、すなわち、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、小脳星状細胞腫、大脳星細胞腫、基底細胞癌、胆管癌、肝外胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨肉腫／悪性線維性組織球、脳幹グリオーマ、脳腫瘍、脳幹神経膠腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚路及び視床下部神経膠腫、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、カルチノイド腫瘍、原発不明の原発性胃腸癌、中枢神経系リンパ腫、原発性小脳星細胞腫、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング腫瘍、頭蓋内胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ） （Ｓｔｏｍａｃｈ）、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫、脳幹神経膠腫、脳星細胞腫神経膠腫、小児視覚路及び視床下部神経膠腫、ヘアリーセル白血病、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内メラノーマ、膵島細胞癌（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、喉頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ヘアリーセル白血病、口唇及び口腔癌、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、骨悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、口腔癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞性腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔癌、咽頭癌、神経芽細胞腫、口癌、口腔癌、リップ及び中咽頭癌、骨肉腫／悪性線維性組織球腫、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓癌、膵島細胞膵臓癌、副鼻腔及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍、形質細胞性腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎盂と尿管の移行上皮癌、網膜芽細胞腫、唾液腺癌、肉腫、ユーイング腫瘍、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚癌（非黒色腫）、皮膚癌（黒色腫）、メルケル細胞皮膚癌、小腸癌、扁平上皮癌、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、喉癌、胸腺腫、胸腺腫及び胸腺癌、甲状腺癌、腎盂と尿管の移行上皮癌、妊娠性絨毛腫瘍、腎盂と尿管の移行上皮癌、尿道癌、子宮癌、子宮内膜子宮肉腫、Ｖ膣癌、視覚路及び視床下部神経膠腫、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、及びウィルムス腫瘍からなる群より選ばれる障害を治療できる。

別の態様では、本開示は、ヒト４−１ＢＢ活性に関する障害に罹患している患者を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に記載の第２薬剤を投与する前、それと同時に又はその後にいずれかの結合タンパク質を投与するステップを含む。実施形態において、１種又は複数種の４−１ＢＢ結合タンパク質と同時投与及び／又は共調製できる別の治療薬は、吸入ステロイド、経口ステロイド、短時間作用型又は長時間作用型βアゴニストなどのβアゴニスト、ロイコトリエン又はロイコトリエン受容体の拮抗薬、ＡＤＶＡＩＲなどの併用薬、抗ＩｇＥ抗体（例えばＸＯＬＡＩＲ）などのＩｇＥ阻害薬、ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ４阻害剤）、キサンチン、抗コリン薬、クロモリンなどの肥満細胞安定化剤、ＩＬ−４阻害剤、ＩＬ−５阻害剤、エオタキシン／ＣＣＲ３阻害剤、ヒスタミン又はその受容体（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３及びＨ４を含む）の拮抗薬、及びプロスタグランジンＤ又はその受容体（ＤＰＩ及びＣＲＴＨ２）の拮抗薬のうちの１種又は複数種を含むが、それらに限定されない。そのような組合せは、喘息及び他の呼吸器障害を治療できる。１種又は複数種の抗４−ＬＢＢ抗体又はその断片と同時投与及び／又は共製剤できる治療薬の追加例としては、ＴＮＦ拮抗薬（例えば、ＴＮＦ受容体（例えば、Ｐ５５又はｐ７５ヒトＴＮＦ受容体）の可溶性断片又はその誘導体、例えば、７５ｋＤのＴＮＦＲ−ＬＧＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ））、ＴＮＦ変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤などのＴＮＦ酵素拮抗薬、ムスカリン受容体拮抗薬、ＴＧＦ−β拮抗薬、インターフェロンγ、ピルフェニドン、メトトレキサート、レフルノミド、又はシロリムス（ラパマイシン）又はそれらの類似体、例えばＣＣＩ−７７９などの化学療法剤、ＣＯＸ２及びｃＰＬＡ２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、免疫調節剤、ｐ３８阻害剤、ＴＰＬ−２阻害剤、ＭＫ−２阻害剤及びＮＦｋＢ阻害剤などを含む。別の第２薬剤は、ブデノシド、上皮成長因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチル酸塩、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体拮抗薬、抗ＩＬ−ｌβモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、成長因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、及びＰＤＧＦの抗体又はアゴニスト、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はそのリガンドの抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、Ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−ｌβ、変換酵素阻害剤、ＴＮＦ変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性のｐ７５ＴＮＦ受容体、ＳＩＬ−ＬＲＩ、ＳＩＬ−ｌＲＩＩ、ＳＬＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、及びＴＧＦ−βのうちの１種又は複数種を含む。

別の実施形態において、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔａｒｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝内、心筋内、骨内（ｉｎｔｒａｏｓｔｅａｌ）、骨盤内、心膜内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑液内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣内、直腸内、頬側、舌下、鼻腔内、及び経皮からなる群より選ばれる少なくとも１種の方式で、本明細書に開示された医薬組成物を対象に投与する。

別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示された少なくとも１種の結合タンパク質の少なくとも１種の抗４−１ＢＢイディオタイプ抗体を提供する。抗４−１ＢＢイディオタイプ抗体は、以下のような分子を含む任意のタンパク質又はペプチドを含み、前記分子は、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含み、この一部は、例えば、重鎖又は軽鎖又はそのリガンド結合部分のうちの少なくとも１種の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖又は軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖定常領域、ワークフレーム領域、又は、本開示に係る結合タンパク質に組み込める以上のいずれかの部分を含む。

ＺＷ１０３（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））が１種又は複数種の共刺激分子とともにＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞を増幅できることを示している。 ＺＷ１０３及びＺＷ１０４（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））がヒト４−１ＢＢ及びサル４−１ＢＢに結合できることを示している。 ＺＷ１０３及びＺＷ１０４（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））がＴ細胞を刺激して増殖させることができることを示している。 ＺＷ１０３及びＺＷ１０４（ほかのクローンは、類似した作用を示す（データは示さず））がヒトＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化してＩＦＮ−γを産生するようにヒトＴ細胞を刺激できることを示している。 移植片対宿主病（ＧＶＨ）疾患モデルの手順を示している。 異種−ＧＶＨＤマウスモデルにおいて、４−１ＢＢｍＡｂによる治療によりＴ細胞増殖が促進されることを示している。 開示されたヒト化４−１ＢＢ ＡｂによりヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスのＧＶＨＤが促進されることを示している（図６Ａ）。 異種−ＧＶＨＤモデルにおいて、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが血清ＩＦＮ−を増加させることを示している。 異種−ＧＶＨＤモデルにおいて、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが脾臓のサイズを増大させることを示している。 開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが末梢血におけるヒトＴ細胞を用量依存的に増加させることを示している。 開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが肝臓におけるヒトＴ細胞の浸潤を増加させることを示している。 ４−１ＢＢ ｍＡｂのインビボ抗腫瘍作用を示している。

本開示は、４−１ＢＢ結合タンパク質に関し、且つ、より具体的には、４−１ＢＢに結合する抗４−１ＢＢ抗体又はその抗原結合部分に関する。本開示の各態様は、抗体、抗体断片及びその医薬組成物、並びに、このような抗体及び断片を製造する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞に関する。さらに、本開示に係る抗体を用いてヒト４−１ＢＢを検出することにより、インビトロ又はインビボでヒト４−１ＢＢ活性及び／又はレベルを調整する方法を開示している。
本明細書において、特に断らない限り、本開示について使用される科学及び技術用語は、当業者が通常理解しうる意味を有する。用語の意味及び範囲が明瞭であるが、潜在的なあいまいさがある場合、本明細書において提供される定義は辞書又は外部定義よりも優先される。さらに、文脈によって別段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、且つ、複数形の用語は単数形を含むものとする。本開示において、特に明記しない限り、「又は」の使用は、「及び／又は」を意味する。さらに、用語「含み/含む/含まれる/含有する/〜からなる（英語の「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、及び「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」や「ｉｎｃｌｕｄｅｄ」）などの他の形態の使用は限定的ではない。さらに、特に明記しない限り、「要素」又は「コンポーネント」などの用語は、１つ／１種の単位を含む要素及びコンポーネント、ならびに複数／複数種のサブ単位を含む要素及びコンポーネントの両方を包含する。
一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、タンパク質及び核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションに関連して使用される用語は、当技術分野で一般的に使用されるものである。他に示さない限り、本開示の方法及び技術は、一般的に、当該分野で周知の常法に従って、そして、本開示を通して引用・考察される種々の一般的なそしてより具体的な参考文献に記載されるように行われる。酵素反応及び精製技術は、当技術分野において一般的に達成されているように、又は本明細書に記載されているように、製造業者の仕様書に従って行われる。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学及び医薬化学に関連して使用される用語、及びそれらの実験室手順及び技法は、当技術分野において周知であり一般的に使用されているものである。カノニカル技術は、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、送達及び患者の治療に使用される。

本開示をより理解しやすくするために、以下、使用される用語が定義される。
本明細書に使用されている用語「ポリペプチド」とは、アミノ酸の任意の高分子鎖である。用語「ペプチド」、「タンパク質」及び用語ポリペプチドは、交換して使用でき、且つ、アミノ酸の高分子鎖をも意味する。用語「ポリペプチド」は、タンパク質配列の天然又は人工タンパク質、タンパク質断片及びポリペプチドのアナログを含む。ポリペプチドは、単量体又は重合体であり得る。

用語「単離タンパク質」又は「単離ポリペプチド」は、その起源又は由来のために、その天然の状態でそれに付随する天然結合成分と結合していない、同じ種由来の他のタンパク質を実質的に含まない、異なる種由来の細胞によって発現され、又は自然に存在しないタンパク質又はポリペプチドである。したがって、化学的に合成されるか、又はその天然由来である細胞とは異なる細胞系において合成されるポリペプチドは、その天然結合成分から「単離される」。当技術分野で周知のタンパク質精製技術を用いて、タンパク質を単離によって天然結合成分を実質的に含まないようにすることもできる。

本明細書で使用されるとき、「生物学的活性」又は「活性」は、タンパク質のすべての固有の生物学的特性を指す。

抗体、タンパク質、又はペプチドと第２化学物質との相互作用に関しては、本明細書で使用される用語「特異的結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ）」又は「特異的に結合（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」は、その相互作用が化学物質における特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、一般的なタンパク質よりも特定のタンパク質構造を認識しそれに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識「Ａ」と抗体を含む反応中にエピトープＡ（又は遊離した未標識Ａ）を含む分子が存在すると、抗体に結合する標識Ａの量を減少させる。

本明細書で使用される用語「抗体」は、４本のポリペプチド鎖（２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖を含む任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又はＩｇ分子の必須エピトープ結合特徴を保持している任意の機能的断片、変異体、変異体もしくは誘導体）を広く指す。そのような変異体、変異体、もしくは誘導体抗体の形態は当技術分野において公知である。以下、その非限定的な実施形態を説明する。

全長抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＨＣＶ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれてより保存されている点在領域にさらに細分できる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。

本明細書で使用される用語「抗体の抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）は、抗原（例えば４−１ＢＢ）に特異的に結合する能力を保持している抗体の１種又は複数種の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実行され得ることが示されている。 そのような抗体の実施形態はまた、二重特異性、又は多重特異性の形態としてもよい。それは、２種以上の異なる抗原に特異的に結合する。多重特異性、及び二重特異性抗体構築物は当該分野で周知であり、そして、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（ｅｄ）,Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ,ＮＹ（２０１１）及びＳｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２）：９６−１０６（２０１５）に記載されてキャラクタリゼーションされる。

用語「抗体の抗原結合部分」に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片：ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋を介して連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）Ｖ Ｈドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６、Ｗｉｎｔｅｒら、ＰＣＴ国際公開ＷＯ９０／０５１４４Ａ１、ここで引用により組み込む。）；及び（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、組換え法を用いて、ＶＬ領域及びＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一タンパク質鎖として製造されることを可能にする合成リンカーによって連結され得る（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として呼ばれる。例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６と、Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３などを参照）。そのような一本鎖抗体はまた、用語「抗体の抗原結合部分」に包含されることを意図する。ダイアボディなどの他の形態の一本鎖抗体も含まれる。ダイアボディは二価二重特異性抗体であり、この二価二重特異性抗体において、ＶＨ及びＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーが使用され、それによってドメインを他の鎖の相補ドメインと対合させて、２つの抗原結合部位を発生させる（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ,Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８と、Ｐｏｌｊａｋ,Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１〜１１２３などを参照）。そのような抗体結合部分は、当技術分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．,Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．７９０ ｐｐ．（ＩＳＢＮ ３−５４０−４１３５４−５）。
本明細書で使用される用語「抗体構築物」は、リンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常ドメインに連結された本開示の１つ又は複数の抗原結合部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合を介して連結された２つ以上のアミノ酸残基を含み、そして１つ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。そのようなリンカーポリペプチドは、当技術分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ,Ｐ．ら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８と、Ｐｏｌｊａｋ,Ｒ．Ｊ．ら（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１〜１１２３などを参照）。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖又は軽鎖定常ドメインを指す。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインアミノ酸配列及びそれらの機能的変化は、当技術分野において公知である。

さらに、抗体又はその抗原結合部分は、抗体又は抗体部分と１つ又は複数の他のタンパク質又はペプチドとが共有結合又は非共有結合されることによって形成されるより大きな免疫接着分子の一部であり得る。このような免疫接着分子の例には、ストレプトアビジンコア領域を用いて四量体ｓｃＦｖ分子を製造すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ,Ｓ．Ｍ．ら（１９９５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ６：９３−１０１）、及びシステイン残基、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグを用いて二価−ビオチン化ｓｃＦｖ分子を製造すること（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ,Ｓ．Ｍ．ら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）を含む。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片などの抗体部分は、それぞれ全抗体のパパイン又はペプシン消化などの従来の技術を用いて全抗体から調製できる。さらに、本明細書中に記載されるように、抗体、抗体部分及び免疫接着分子は、カノニカル組換えＤＮＡ技術を使用して得られ得る。

本明細書で使用される「単離抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体（例えば、ヒト４−１ＢＢに特異的に結合する単離抗体は、ｈ４−１ＢＢ以外の抗原を特異的に結合する抗体を実質的に含まない）を指す。しかしながら、ｈ４−１ＢＢに特異的に結合する単離抗体は、他の抗原（他の種由来の４−１ＢＢ分子など）に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。

本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図する。本開示のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムな部位特異的突然変異誘発又はインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、他の哺乳動物種（マウス）の生殖系列に由来するＣＤ配列がヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。

本明細書で使用される用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製、発現、産生又は単離されるすべてのヒト抗体を含むことを意図し、そのような抗体としては、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体（この開示では、さらに詳細に説明する）、組み換え型コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．,（１９９７）ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ Ｈ．,ａｎｄ Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ Ｗ．Ｅ．,（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ Ｊ．Ｖ．ａｎｄ Ｌａｒｒｉｃｋ Ｊ．Ｗ．（２００２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ Ｐ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子について遺伝子導入を行われた動物（例えばマウス）から単離した抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ,Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；ａｎｄ Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ ＳＡ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ Ｌ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：５９３−５９７； Ｌｉｔｔｅｒ Ｍ．ら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２１：３６４−３７０を参照）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、産生又は単離した抗体が挙げられる。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。しかしながら、特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体に対しては、インビトロ突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列について遺伝子導入を行われた動物を使用する場合は、インビボでの体細胞突然変異誘発）を行うことで、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、抗体は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、それらに関連するが、インビボヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在し得ない配列となる。本開示の一実施形態は、限定されるものではないが、ＪｅｒｍｕｔｕｓらによるＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ２００５／００７６９９ Ａ２に開示されているものヒトＩｇファージライブラリーを使用するなど、当技術分野で周知の技法を使用して生成できるヒト４−１ＢＢに結合できる完全ヒト抗体を提供する。

用語「キメラ抗体」は、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体などの、ある種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列と別の種由来の定常領域配列とを含む抗体を指す。

用語「ＣＤＲ移植抗体」は、例えば、１つ以上のマウスＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体など、１つの種由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を有するが、ＶＨ及び／又はＶＬの１つ以上のＣＤＲ領域の配列が別の種のＣＤＲ配列で置き換えられている抗体を指す。

用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を有するが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が「よりヒトに似ている」すなわち、ヒト生殖細胞系可変配列により類似しているように改変されている抗体を指す。１つのタイプのヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体であり、ここでヒトＣＤＲ配列は、非ヒトＶＨ及びＶＬ配列に導入されて対応する非ヒトＣＤＲ配列を置換する。一実施形態において、ヒト化抗ヒト４−１ＢＢ抗体及び抗原結合部分が提供される。そのような抗体は、伝統的なハイブリドーマ技術を用いてマウス抗ｈ４−１ＢＢモノクローナル抗体を得た後、インビトロ遺伝子工学（例えば、ＫａｓａｉａｎらがＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ２００５／１２３１２６ Ａ２に開示したもの）を用いてヒト化することによって生成される。

用語「Ｋａｂａｔ番号付け」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔ標識付け」は、本明細書では互換的に使用され得る。当該分野において認められたこのような用語は、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域においてほかのアミノ酸残基よりも可変（すなわち超可変）であるアミノ酸残基の番号付けシステム（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ,Ｓｃｉ．１９０：３８２〜３９１ ａｎｄ Ｋａｂａｔ,Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２）を指す。

本明細書で使用される場用語「受容体」及び「受容体抗体（ａｃｃｅｐｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、１つ以上のフレームワーク領域の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％のアミノ酸配列を提供又はコードする抗体又は核酸配列を指す。いくつかの実施形態において、用語「受容体」は、定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。さらに別の実施形態において、用語「受容体」は、１つ以上のフレームワーク領域及び定常領域を提供又はコードする抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。特定の実施形態において、用語「受容体」は、１つ以上のフレームワーク領域の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は１００％のアミノ酸配列を提供又はコードするヒト抗体アミノ酸又は核酸配列を指す。この実施形態によれば、受容体は、ヒト抗体の１つ以上の特定部位に存在しない少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、又は少なくとも１０個のアミノ酸残基を含み得る。受容体フレームワーク領域及び／又は受容体定常領域は、例えば、生殖系列抗体遺伝子、成熟抗体遺伝子、機能的抗体（例えば、当技術分野において周知の抗体、開発中の抗体、又は市販抗体）に由来し得る。

本明細書で使用される用語「ＣＤＲ」は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲがあり、これらは各可変領域についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれる。本明細書で使用される用語「ＣＤＲセット」は、抗原に結合可能な単一可変領域に存在する３つのＣＤＲの群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムによって定義される。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（国立衛生研究所,Ｂｅｔｈｅｓｄａ,ＭＤ．（１９８７）及び（１９９１））によるシステムは、抗体の任意の可変領域に利用できる明瞭な残基番号付けシステムを提供するだけでなく、この３つのＣＤＲの正確な残基境界を提供する。これらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれる。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ,Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）及びＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７〜８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定の小部分が、アミノ酸配列のレベルで非常に多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションを採用することを見出した。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３、又はＨ１、Ｈ２及びＨ３として指定されており、ここで、「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ軽鎖及び重鎖領域を指定する。これら領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれることがあり、これらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。 Ｋａｂａｔ ＣＤと重複してＣＤＲを限定するほかの境界Ｒは、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３−１３９（１９９５））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）：７３２−４５（１９９６））に記載されている。さらに他のＣＤＲ境界の定義は、厳密には上記のシステムの１つに従わないかもしれないが、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複し、ただし、特定の残基又は残基群、もしくは全ＣＤＲが抗原結合に大きな影響を与えないという予測又は重大実験的発見に基づいて、短縮又は延長され得る。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用し得るが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａにより定義されたＣＤＲを使用する。

本明細書で使用される用語「カノニカル」残基とは、Ｃｈｏｔｈｉａら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９０７（１９８７）と、Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９（１９９２）と共に引用により本明細書に組み込まれる）によって定義されるような、特定のカノニカルＣＤＲ構造を定義するＣＤＲ又はフレームワーク中の残基を指す。Ｃｈｏｔｈｉａらによれば、多くの抗体のＣＤＲの重要な部分は、アミノ酸配列のレベルで非常に多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格コンホメーションを有する。各カノニカル構造は、主にループを形成するアミノ酸残基の連続セグメントについて一組のペプチド骨格ねじれ角を特定する。

本明細書で使用される用語「ドナー」及び「ドナー抗体」とは、１つ以上のＣＤＲを提供する抗体を指す。一実施形態において、ドナー抗体は、フレームワーク領域が得られる又は由来する抗体とは異なる種由来の抗体である。ヒト化抗体の文脈において、用語「ドナー抗体」は、１つ又は複数のＣＤＲを提供する非ヒト抗体を指す。

本明細書で使用される用語「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」とは、可変領域におけるＣＤＲ以外の残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の正確な定義が異なる系によって決定され得るので、フレームワーク配列の意味については、異なる解釈が対応して得られ得る。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３、ならびに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）もまた、軽鎖及び重鎖上のフレームワーク領域を各鎖上の４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、この中でも、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間、及びＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４として特定しない場合、他の者によって言及されるように、フレームワーク領域は、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内において組み合わされたＦＲを表す。本明細書で使用されるとき、１つのＦＲは、４つのサブ領域のうちの１つを表し、２つ以上のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つのサブ領域のうちの２つ以上を表す。

ヒト重鎖及び軽鎖受容体配列は、当該分野で公知である。一実施形態において、当技術分野において公知の受容体配列は、本明細書に開示される抗体に使用され得る。

本明細書で使用される用語「生殖系列抗体遺伝子」又は「遺伝子断片」とは、特定の免疫グロブリンを発現させるための遺伝的再編成及び突然変異をもたらす成熟過程を経ていない非リンパ細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を指す（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００（２００２）と、Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓら、Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０（２００１）を参照）。本開示の各実施形態による利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子が成熟抗体遺伝子よりも種の個体に特徴的な必須アミノ酸配列構造を保存する可能性が高いという知見によるものであり、したがって、その種で治療的に使用された場合、外来源であるとして認められる可能性が低い。

本明細書で使用される場合、用語「キー」残基とは、抗体、特にヒト化抗体の結合特異性及び／又は親和性により大きな影響を及ぼす可変領域内の特定の残基を指す。キー残基には、ＣＤＲに隣接する残基、潜在的グリコシル化部位（Ｎ−又はＯ−グリコシル化部位のいずれかであり得る）、希少残基、残基抗原と相互作用可能な残基、ＣＤＲと相互作用可能な残基、カノニカル残基、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の接触残基、Ｖｅｒｎｉｅｒ領域における残基、Ｃｈｏｔｈｉａにより定義された可変重鎖ＣＤＲ１とＫａｂａｔにより定義された第１重鎖フレームワークとの間における重複領域内の残基のうちの１種又は複数種を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される用語「ヒト化抗体」は、目的抗原に免疫特異的に結合しヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体、その変異体、誘導体、アナログ又は断片である。ＣＤＲの文脈において、本明細書で使用される用語「実質的に」は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の相同性を有するアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１種、通常２種の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）のすべてを実質的に含み、ここで、すべて又は実質的にすべてのＣＤＲは、非ヒト免疫グロブリン（すなわちドナー抗体）に対応し、そして、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である。一実施形態において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常、ヒト免疫グロブリンの定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖及び少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含む。抗体はまた、重鎖のＣ Ｈ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域及びＣＨ４領域を含み得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含む。別の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖のみを含む。

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、及び、限定するものではないがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選ばれ得る。ヒト化抗体は、２つ以上のクラス又はアイソタイプからの配列を含み得、そして、特定の定常ドメインは、当該分野で周知の技術を使用して所望のエフェクター機能を最適化させるために選択され得る。

一実施形態において、ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、ドナー抗体ＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失によって変異誘発されて、その部位でのＣＤＲ又はフレームワーク残基がドナー抗体又はコンセンサスフレームワークに対応しないようにすることができる。しかしながら、他の実施形態において、そのような突然変異は、広範囲ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも８０％、８５％、９０％、又は９５％は、親ＦＲ及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書で使用される用語「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列におけるフレームワーク領域を指す。本明細書で使用される用語「コンセンサス免疫グロブリン配列」とは、関連する免疫グロブリン配列ファミリーにおいて最も頻繁に存在するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ,Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ,Ｗｅｉｎｈｅｉｍ,Ｇｅｒｍａｎｙ １９８７を参照）。免疫グロブリンファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各部位は、ファミリーのうちその部位で最も頻繁に存在するアミノ酸によって占められている。別の実施形態において、２種のアミノ酸が等しく頻繁に現れる場合、両方のうちのいずれかをコンセンサス配列に含めることができる。

本明細書で使用される「Ｖｅｒｎｉｅｒ」領域とは、Ｆｏｏｔｅ及びＷｉｎｔｅｒ（１９９２,Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＣＤＲ構造を調整し抗原への適合を微調整し得るフレームワーク残基のサブセットを指す。Ｖｅｒｎｉｅｒ領域残基は、ＣＤＲの下で層を形成し、ＣＤＲの構造及び抗体の親和性に影響を及ぼし得る。

本明細書に使用される用語「多価結合タンパク質」は、２つ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を指す。別の実施形態において、多価結合タンパク質は、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作されてもよく、しかも、それは一般的に天然に存在する抗体ではない。

用語「多重特異性結合タンパク質」は、２つ以上の関連する又は非関連標的に結合できる結合タンパク質を指す。先に引用したように、そのような抗体構築物は、当該分野で周知であり、そしてＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（ｅｄ）,Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ｓｐｒｉｎｇｅｒ,ＮＹ（２０１１）及びＳｐｉｅｓｓら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７（２）：９６−１０６（２０１５）に記載されてキャラクタリゼーションされる。そのような二重特異性抗体構築物には、ミニボディ（Ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ、ダイアボディ（Ｄｉａｂｏｄｙ）、Ｂｉｔｅ、Ｄｕｏｂｏｄｙ、Ｔａｎｄｅｍａｂ、Ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ Ｉｇ、ＤＡＦ、ＣＴ−Ｉｇ、ＤｕｔａｍＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＣｏＤＶＤ−Ｉｇ、ＣｏＤＶ−Ｉｇ、 ＦＩＴ−Ｉｇ、ＣｒｏｓｓｍＡｂ、ＣｒｏｓｓｆＡｂ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ＴｒｉｏｍＡｂ、ＬＵＺ−Ｙｓ、Ｚｙｂｏｄｙとして一般に知られているものが含まれる。本明細書で使用される多重特異的結合タンパク質は、２つ以上の抗原結合部位を含み、そして四価又は多価結合タンパク質である結合タンパク質である。そのようなＤＶＤは、単一特異性であって、すなわち１種の抗原に結合できるか、又は多重特異性であって、すなわち２種以上の抗原に結合できる。

本明細書で使用される用語「中和」とは、結合タンパク質が標的タンパク質に特異的に結合するときに標的タンパク質の生物学的活性を中和することを指す。例えば、中和４−１ＢＢ結合タンパク質は、４−１ＢＢとの結合により４−１ＢＢの生物学的活性を阻害する中和抗体であり得る。一実施形態において、中和結合タンパク質は、４−ＩＢＢに結合し、４−１ＢＢの生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％以上減少させる。中和結合タンパク質による４−１ＢＢの生物学的活性の阻害は、当技術分野において周知の４−１ＢＢの生物学的活性の１つ又は複数の指標を測定することによって評価できる。別の実施形態において、本開示の４−１ＢＢ結合タンパク質は、中和抗体ではない。

用語「活性」は、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性などの活性を含む。

用語「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体に特異的に結合できる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含み、そして特定の実施形態において、特定の三次元構造特性及び／又は特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。特定の実施形態において、抗体は、タンパク質及び／又は高分子の複合混合物におけるその標的抗原を優先的に認識するときに、抗原に特異的に結合すると言われる。

本明細書で使用される用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ,Ｕｐｐｓａｌａ, Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ, Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによってリアルタイムの生物特異的相互作用を分析する光学現象を指す。さらなる説明については、Ｊｏｎｓｓｏｎ,Ｕ．ら（１９９３）Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９〜２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ,Ｕ．ら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０〜６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ,Ｂ．ら（１９９５）Ｊ．Ｍｏｌ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５〜１３１；及びＪｏｈｎｓｏｎ,Ｂ．ら（１９９１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８〜２７７を参照すればよい。

本明細書で使用される用語「ｋ_ｏｎ」は、当技術分野で知られているように、抗体と抗原とが結合して抗体／抗原複合体を形成するときの結合速度定数（オン速度定数）を指すことを意図する。

本明細書で使用される用語「ｋ_ｏｆｆ」は、当技術分野で知られているように、抗体／抗原複合体から抗体が解離するときの解離速度定数（オフ速度定数）を指すことを意図する。

本明細書で使用される用語「Ｋ_Ｄ」は、当技術分野で知られているように、特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を指すことを意図する。

本明細書で使用される用語「標識結合タンパク質」は、結合タンパク質の同定のための組み込まれたマーカーを有するタンパク質を指す。一実施形態において、標識は、検出可能なマーカー、例えば、放射性標識を組み込んだアミノ酸、又は標識アビジン（例えば、蛍光マーカーを含むストレプトアビジン又は光学的方法又は比色法によって検出できる酵素活性）によって検出できるビオチニル部分に結合されたポリペプチドである。ポリペプチド用標識の例には、以下のものが含まれるがこれらに限定されなく、すなわち、放射性同位体又は放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏ及び^１５３Ｓｍ）、蛍光マーカー（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素マーカー（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターにより認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次結合部位）抗体、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、及び磁気物質（例えば、ガドリニウムキレート）が挙げられる。

用語「抗体コンジュゲート」は、第２化学部分（治療薬又は細胞傷害薬など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を指す。用語「薬剤」は、本明細書では、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的高分子、又は生物学的材料から製造された抽出物を表す。別の実施形態において、治療薬又は細胞傷害薬としては、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒシン、ドキソルビシン、ダウノルキシン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ ａｎｔｈｒａｃｉｎ ｄｉｏｎｅ）、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシン、Ｄ,１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、ならびにそれらの類似体又は相同体を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される用語「結晶」及び「結晶化」は、結晶の形態で存在する抗体又はその抗原結合部分を指す。結晶は物質の固体状態の一形態であり、これは非晶質固体状態又は液晶状態のような他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）、又は分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な繰り返し三次元アレイからなる。これらの三次元アレイは、当分野で周知の特定の数学的関係に従って配置されている。結晶内で繰り返される基本単位又はビルディングブロックは、非対称単位と呼ばれる。明確に定義された所定の結晶学的対称性に一致する配置で非対称単位を繰り返すことにより、結晶の「単位セル」が提供される。三次元にわたって規則的に翻訳される単位セルの繰り返しにより結晶が提供される。Ｇｉｅｇｅ,Ｒ．及びＤｕｃｒｕｉｘ,Ａ． Ｂａｒｒｅｔｔ, Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ, ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ, ２ｎｄ ｅａ．, ｐｐ． ２０ １−１６, Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, Ｎ．Ｙ．, （１９９９）を参照すればよい。

本明細書で言及される用語「ポリヌクレオチド」は、２つ以上のヌクレオチド（リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドもしくは２種のタイプのヌクレオチドのいずれかの修飾形態）の重合形態を指す。この用語は一本鎖及び二本鎖形態のＤＮＡを含む。

本明細書で使用される用語「単離ポリヌクレオチド」は、その起源のために、天然に存在する「単離ポリヌクレオチド」が結合したポリヌクレオチドの全部又は一部に結合しておらず、天然に連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されており、又は、天然にはより大きな配列の一部として発生しないポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ、又は合成起源、又はそれらの組み合わせのもの）である。

本明細書で使用される用語「ベクター」は、核酸分子が結合している別の核酸を輸送できる核酸分子を指すことを意図している。ベクターの一種は別のＤＮＡセグメントを内部に連結できる環状二本鎖ＤＮＡループである「プラスミド」である。別の種類のベクターは、別のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結できるウイルスベクターである。一部のベクターは、それらが導入された宿主細胞中で自律複製できる（例えば、細菌性複製起点を有する細菌性ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれて、宿主ゲノムと共に複製され得る。さらに、一部のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指導できる。そのようなベクターは、本明細書において「組換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において利用される発現ベクターは通常プラスミドの形態である。本明細書では、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、本開示は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）のような他の形態の発現ベクターを含むことを意図している。

用語「作動可能に連結された」は、前記コンポーネントがそれらが意図された方式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。コード配列に「作動可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合する条件下で達成されるように連結されている。「作動可能に連結された」配列は、ターゲート遺伝子に隣接する発現制御配列及びターゲート遺伝子を制御するためにトランスに又はある距離をおいて作用する発現制御配列の両方を含む。本明細書で使用される用語「発現制御配列」は、それらが連結されているコード配列の発現及びプロセシングに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列は、適切な転写開始配列、終止配列、プロモーター配列及びエンハンサー配列；スプライシング及びポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡ処理シグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を高める配列；及び必要に応じてタンパク質分泌を増強する配列を意味する。そのような制御配列の性質は宿主生物によって異なり、そのような制御配列は、原核生物では、一般にプロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、真核生物では、一般にプロモーター及び転写終結配列を有する。用語「制御配列」は、その存在が発現及びプロセシングに必須であるコンポーネント、その存在が有利であるさらなるコンポーネント、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列も含み得るを含むことを意図している。本開示のタンパク質構築物は、当該分野で公知の発現ベクター及び宿主細胞（発現カセット、ベクター、組換え宿主細胞を含む）、ならびに単一のオープンリーディングフレーム由来の組換えポリタンパク質及びプレタンパク質の組換え発現及びタンパク質加水分解プロセシングのための方法を用いて、発現・精製され得る（例えば、参照により本明細書に組み入れられるＷＯ ２００７／０１４１６２）。

本明細書で定義される「形質転換」とは、外因性ＤＮＡが宿主細胞に侵入するあらゆる過程を指す。形質転換は、当技術分野において周知の様々な方法を用いて、天然又は人工の条件下で起こり得る。形質転換は、原核又は真核の宿主細胞への外来核酸配列の挿入のための任意の公知の方法により行われ得る。この方法は、形質転換される宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、エレクトロポレーション、リポフェクション、及び粒子衝撃を含み得るが、これらに限定されない。そのような「形質転換」細胞には、挿入されたＤＮＡが自律複製プラスミド又は宿主染色体の一部として複製できる安定的に形質転換された細胞が含まれる。それらはまた、限られた時間内で挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを一時的に発現する細胞を含む。

本明細書で使用される用語「組換え宿主細胞」（又は単に「宿主細胞」）は、外因性ＤＮＡが導入されている細胞を指すことを意図している。なお、そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことを意図している。突然変異又は環境の影響のために、子孫にはある修飾が起こり得るので、そのような子孫は実際には親細胞と同一ではないかもしれないものの、本明細書で用いる用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。別の実施形態において、宿主細胞は、生命界のいずれかから選択される原核細胞及び真核細胞を含む。別の実施形態において、真核細胞は、原生生物細胞、真菌細胞、植物細胞及び動物細胞を含む。別の実施形態において、宿主細胞は、原核細胞株大腸菌；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ ２９３及びＣＯＳ；昆虫細胞株Ｓｆ９；及び真菌細胞であるサッカロマイセス・セレビシエを含むが、これらに限定されない。

標準的な技術は、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養・形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に使用され得る。酵素反応及び精製技術は、製造元の仕様書に従って、又は当技術分野において一般的に達成されているように、又は本明細書に記載されているように実施することができる。通常、当技術分野において周知の常法を用い、及び本明細書を通して引用して議論されている様々な一般的及びより具体的な参考文献に記載されているように、前記技術及び手順は行われ得る。例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ, Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ, Ｎ．Ｙ． （１９８９））を参照すればよく、あらゆる目的のためにも参照により本明細書に組み込まれる。

当技術分野において公知でありかつ本明細書において使用されるように、「遺伝子導入生物」とは、導入遺伝子を含む細胞を有する生物を指し、ここで前記生物（又は生物の祖先）に導入された導入遺伝子は前記生物に天然に発現されないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」とは、遺伝子導入生物まで発達する細胞のゲノムに安定的かつ作動可能に組み込まれ、遺伝子導入生物の１つ又は複数の細胞型又は組織におけるコード遺伝子産物の発現を指導するＤＮＡ構築物である。

用語「制御」及び「調節」は互換的に使用され得、本明細書で使用されるとき、標的分子の活性（例えば、４−１ＢＢの生物学的活性）の変化又は改変を指す。調節は、標的分子の特定の活性又は機能のスケールの増加又は減少であり得る。分子の例示的な活性及び機能としては、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化、及びシグナル伝達を含むが、これらに限定されない。

それに対応して、本明細書で使用される用語「調節剤」は、標的分子の活性又は機能（例えば、４−１ＢＢの生物学的活性）を変化又は改変できる化合物である。例えば、調節剤は、調節剤の非存在下で観察される分子の特定の活性又は機能のスケールと比較して、前記活性又は機能のスケールの増加又は減少を引き起こし得る。特定の実施形態において、調節剤は、分子の少なくとも１つの活性又は機能のスケールを減少させる阻害剤である。例示的な阻害剤としては、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、炭水化物又は有機小分子を含むが、これらに限定されない。ペプチド抗体は、例えば、ＷＯ０１８３５２５に記載されている。

本明細書で使用される用語「アゴニスト」は、標的分子と接触したときに、前記アゴニストの非存在下で観察される分子の特定の活性又は機能のスケールと比較して、前記活性又は機能のスケールの増加を引き起こす調節剤を指す。４−１ＢＢのアゴニストは、４−１ＢＢに結合するタンパク質（例えば、Ａｂ）、核酸、炭水化物、又は任意の他の分子を含み得るが、これらに限定されない。一実施形態において、本開示の４−１ＢＢ結合タンパク質は、４−１ＢＢアゴニストである。

本明細書で使用される用語「拮抗薬」又は「阻害剤」は、標的分子と接触したときに、前記拮抗薬の非存在下で観察される分子の特定の活性又は機能のスケールと比較して、前記活性又は機能のスケールの減少を引き起こす調節剤を指す。具体的な標的拮抗薬は、４−１ＢＢの生物学的又は免疫学的活性を遮断又は調節する拮抗薬を含む。４−１ＢＢの拮抗薬及び阻害剤は、４−１ＢＢに結合するタンパク質（例えば、Ａｂ）、核酸、炭水化物、又は他の任意の分子を含み得るが、これらに限定されない。他の実施形態において、本開示の４−１ＢＢ結合タンパク質は、４−１ＢＢ拮抗薬ではない。

本明細書で使用される用語「有効量」とは、障害又はその１つもしくは複数の症状の重症度及び／又は持続期間を軽減又は改善し、障害の進行を防ぎ、障害を解消して、障害に関連する１つ以上の症状の再発、発展、発症又は進行を防止し、障害を検査し、又は他の治療法（例えば、予防薬又は治療薬）の予防又は治療効果を増強又は改善するのに十分な量を指す。

本明細書で使用される用語「サンプル」は、その最も広い意味で使用されている。本明細書で使用される「生物学的サンプル」は、生物又は死んだ生物由来の任意の量の物質を含むが、これらに限定されない。そのような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギや他の動物が含まれるが、これらに限定されない。そのような物質としては、血液、血清、尿、滑液、細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓を含むが、これらに限定されない。

Ｉ．ヒト４−１ＢＢに結合する結合タンパク質

本開示の一態様は、単離抗体である抗体又はその一部を提供する。 本開示の一態様は、高親和性、低オフレート及び高中和能で４−１ＢＢに結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合部分を提供する。本開示の別の態様は、ヒト４−１ＢＢ（ｈ４−１ＢＢ）に特異的に結合する抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合する完全ヒト抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合するマウス抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合するキメラ抗体を提供する。本開示の別の態様は、４−１ＢＢに結合するヒト化抗体、又はその抗原結合部分を提供する。一実施形態において、抗体又はその一部は、ｈ４−１ＢＢに特異的に結合する。

Ａ．抗４−１ＢＢ抗体の調製方法

実施例に説明されるように、本開示の抗体は、当該分野で公知の多数の技術のうちのいずれかによって調製され得る。

１．４−１ＢＢ結合タンパク質

表１は、候補抗４−１ＢＢ抗体クローンの略記された配列表である。

以下の表２〜５には、各クローンのＣＤＲ配列が記載されている。

表６は、ＺＷ１０３−１０７クローンのリーダー配列を有する重鎖配列を示す。

前述の単離抗４−１ＢＢ抗体ＣＤＲ配列は、本開示に従って単離され、表１〜６に記載の配列を有するポリペプチドを含む４−１ＢＢ結合タンパク質の新規なファミリー及びモチーフを確立する。

ヒト化抗４−１ＢＢ抗体も調製されている。例えば、表７はヒト化ＺＷ１０６の配列を示す。

２．抗４−１ＢＢキメラ抗体
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる起源又は動物種に由来する分子である。キメラ抗体を産生するための方法は当技術分野において公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ,Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）と、Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）と、Ｇｉｌｌｉｅｓら、（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２と、米国特許第５,８０７,７１５号、第４,８１６,５６７号及び第４,８１６,３７９号とを参照でき、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さらに、「キメラ抗体」を産生するために開発された、適切な抗原特異性を有するマウス抗体分子由来の遺伝子を適切な生物学的活性を有するヒト抗体分子由来の遺伝子と共にスプライシングする技術が使用できる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４, Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８４, Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら、１９８５, Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２−４５４；これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）。

一実施形態において、本開示のキメラ抗体は、本明細書に記載の抗４−１ＢＢ結合タンパク質のＣＤＲをヒトＩｇＧ１定常領域と共に挿入することによって産生される。

３．抗４−１ＢＢヒト化抗体

ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来の抗体分子である。既知のヒトＩｇ配列が以下に開示されている。
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ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原供与体を改変又は改善するために、ＣＤドナー抗体からの対応する残基で置換されてもよい。これらフレームワーク置換は、当分野で周知の方法、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング、及び特定の位置での異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較（例えば、Ｑｕｅｅｎら、米国特許第５,５８５,０８９号と、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）とを参照する。これらは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる）によって同定される。三次元免疫グロブリンモデルは、当業者にはよく知られているものとして、一般に入手可能である。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元立体配座構造を例示し表示するコンピュータプログラムが取得可能である。これらの表示を観察することによって、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析、すなわち候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原に対する親和性の増大などの所望の抗体特性が達成されるように、コンセンサス配列及びインポート配列から選択して組み合わせられ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接そして最も実質的に影響している。抗体は、当該分野において公知の複数の技術によりヒト化することができ、前記技術は、下記に記載の技術を含むが、これらに限定されない。Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２（１９８６）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４（１９８８））；Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ,Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３（１９９３）,Ｐａｄｌａｎ,Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９〜４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）,Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ国際公開ＷＯ９１／０９９６７、ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０、ＵＳ９６／１８９７８、ＵＳ９１／０９６３０、ＵＳ９１／０５９３９、ＵＳ９４／０１２３４、ＧＢ８９／０１３３４、ＧＢ９１／０１３４４、ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３、ＷＯ９０／１４４２４、ＷＯ９０／１４４３０、ＥＰ２２９２４６、ＥＰ５９２,１０６；ＥＰ ５１９,５９６、ＥＰ ２３９,４００、米国特許第５,５６５,３３２号、第５,７２３,３２３号、第５,９７６,８６２号、第５,８２４,５１４号、第５,８１７,４８３号、第５,８１４,４７６号、第５,７６３,１９２号、第５,７２３,３２３号、第５,７６６８８６号、第５,７１４,３５２号、第６,２０４,０２３号、第６,１８０,３７０号、第５,６９３,７６２号、第５,５３０,１０１号、第５,５８５,０８９号、第５,２２５,５３９；第４,８１６,５６７号。これらは、それぞれ参照により全体として本明細書に組み入れられる。

一実施形態において、本開示の抗４−１ＢＢ結合タンパク質は、例えば当技術分野で公知のいくつかのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏアッセイのうちのいずれかによって評価されたように、４−１ＢＢ活性を低下又は増強する高能力を示し得る。

特定の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。他の実施形態において、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ４重鎖定常領域である。さらに、抗体は、軽鎖定常領域（κ軽鎖定常領域又はλ軽鎖定常領域）を含み得る。別の実施形態において、抗体は、κ軽鎖定常領域を含む。あるいは、抗体部分は、例えば、Ｆａｂ断片又は一本鎖Ｆｖ断片であり得る。

抗体エフェクター機能を変化させるためのＦｃ部分のアミノ酸残基の置換は当技術分野において公知である（Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５,６４８,２６０号、第５,６２４,８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体と抗原−抗体複合物の半減期／クリアランス速度を媒介する。ある場合には、これらエフェクター機能が治療用抗体にとって望ましいが、他の場合には、治療目的に応じて不要であるか又は有害にあることもある。特定のヒトＩｇＧアイソタイプ、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑへの結合を介してＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な要素である。別の実施形態において、抗体のエフェクター機能が変化するように、抗体の定常領域、例えば抗体のＦｃ領域において少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されている。

一実施形態は、本開示の抗体又は抗体部分が他の機能的分子（例えば、他のペプチド又はタンパク質）に誘導体化又は連結されている標識結合タンパク質を提供する。例えば、本開示の標識結合タンパク質は、本開示の抗体又は抗体部分を他の抗体などの１つ又は複数の他の分子実体（化学結合、遺伝子融合、非共有結合又はほかの方式より）に機能的に連結することによって得られ、前記１つ又は複数の他の分子実体は、例えば、別の抗体（例えば二重特異性抗体又はダイアボディ）、検出可能薬剤、細胞傷害剤、医薬及び／又は抗体もしくは抗体部分と他の分子（ストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグなど）との結合を媒介し得るタンパク質又はペプチドである。

本開示の抗体又は抗体部分を誘導体化しうる有用な検出可能薬剤には、蛍光化合物が含まれる。例示的な蛍光検出可能薬剤には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、塩化５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニル、フィコエリトリンなどが含まれる。抗体はまた、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素で誘導体化されてもよい。抗体が検出可能な酵素で誘導体化されている場合、酵素が検出可能な反応生成物を生成するために使用される別の薬剤を添加することによって検出され得る。例えば、検出可能な薬剤として西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素及びジアミノベンジジンを添加することによって、検出可能な着色反応生成物を生成する。抗体をビオチンで誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジンの結合を間接的に測定することでに検出することもできる。

本開示の別の実施形態は、結晶化結合タンパク質を提供する。別の実施形態において、本開示は、本明細書に開示されている全抗４−１ＢＢ抗体及びその断片の結晶、ならびにそのような結晶を含む製剤及び組成物に関する。別の実施形態において、結晶化結合タンパク質は、インビボでは、結合タンパク質の可溶性対応物よりも長い半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、結晶化後に生物学的活性を保持している。

本開示の結晶化結合タンパク質は、当技術分野で公知の方法及びＷＯ ０２０７２６３６（参照により本明細書に組み入れられる）に開示されている方法に従って製造することができる。

本開示の別の実施形態は、抗体又はその抗原結合部分が１つ又は複数の炭水化物残基を含むグリコシル化結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質の産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセシングを受け得る。具体的には、糖（グリコシル）残基を酵素的に付加することができ、このプロセスは、グリコシル化として知られる。共有結合したオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化タンパク質又は糖タンパク質として知られている。抗体は、Ｆｃドメイン及び可変ドメインに１つ以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、Ｆｃドメインのエフェクター機能に重要な影響を及ぼし、抗体の抗原結合又は半減期にはほとんど影響を及ぼさない（Ｒ． Ｊｅｆｆｅｒｉｓ, Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｐｒｏｇ． ２１ （２００５）, ｐｐ． １１−１６）。それに対して、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に影響を及ぼし得る。可変ドメインにおけるグリコシル化は、抗体結合親和性に悪影響を及ぼし得るか（おそらく立体障害のために）（Ｃｏ, Ｍ． Ｓ．,ら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９９３） ３０：１３６１−１３６７）、その結果として抗原に対する親和性が増大させる（Ｗａｌｌｉｃｋ, Ｓ． Ｃ．ら、Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． （１９８８） １６８：１０９９−１１０９と、Ｗｒｉｇｈｔ, Ａ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ． （１９９１） １０：２７１７ ２７２３を参照）。

本開示の一態様は、結合タンパク質のＯ−又はＮ−結合グリコシル化部位が変異しているグリコシル化部位変異体を生成することに関する。当業者は、標準的な周知の技術を用いてそのような変異体を産生することができる。生物学的活性を保持しているが増加又は減少した結合活性を有するグリコシル化部位突然変異体は、本開示の別の目的である。

別の実施形態において、本開示の抗体又は抗原結合部分のグリコシル化は修飾されている。例えば、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｌａｔｅｄ）抗体（すなわち、抗体はグリコシル化を欠く）を調製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるために改変することができる。そのような炭水化物修飾は、例えば抗体配列内の１つ又は複数のグリコシル化部位を変えることによって達成できる。例えば、１つ以上の可変領域グリコシル化部位の排除をもたらし、それによりその部位でのグリコシル化を排除する１つ以上のアミノ酸置換がなされ得る。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させる可能性がある。そのような手法は、ＰＣＴ国際公開ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２、及び米国特許第５,７１４,３５０号と第６,３５０,８６１号にさらに詳細に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

それに加えて又はその代わりに、フコシル残基の量が少ない低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体、又は二分枝ＧｌｃＮＡｃ構造が多い抗体など、グリコシル化の種類が変更された本開示の修飾抗体を調製することができる。そのような改変グリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増大させることが実証されている。そのような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構が改変された宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成できる。グリコシル化機構が改変された細胞は、当技術分野において記載されており、本開示の組換え抗体を発現させてグリコシル化が改変された抗体を産生するための宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ, Ｒ． Ｌ．ら、 （２００２） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７７：２６７３３−２６７４０と、Ｕｍａｎａら、（１９９９） Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． １７：１７６−１と、ヨーロッパ特許第ＥＰ １,１７６,１９５号と、ＰＣＴ国際公開ＷＯ ０３／０３５８３５と、ＷＯ ９９／５４３４２ ８０などを参照することができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

タンパク質のグリコシル化は、標的タンパク質のアミノ酸配列、及びそのタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシルトランスフェラーゼ及びグリコシダーゼ）を産生し得、そして利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有する。そのような要因により、タンパク質グリコシル化パターン、及びグリコシル残基の組成は、特定のタンパク質が発現される宿主細胞によって異なり得る。本開示において使用され得るグリコシル残基は、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸を含み得るが、これらに限定されない。別の実施形態において、グリコシル化結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトになるように、グリコシル残基を含む。

異なるタンパク質グリコシル化が異なるタンパク質特性をもたらし得ることは、当業者に知られている。例えば、酵母などの微生物宿主において産生され酵母内因性経路を利用してグリコシル化された治療用タンパク質の効力は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳動物細胞において発現される同じタンパク質の効力と比較して低下する可能性がある。そのような糖タンパク質はまた、ヒトにおいて免疫原性を有し得、そして投与後にインビボで減少した半減期を示す。ヒトや他の動物における特定の受容体は、特定のグリコシル残基を認識し、血流からのタンパク質の急速な除去を促進し得る。他の有害作用は、タンパク質の折り畳み、可溶性、プロテアーゼに対する感受性、トラフィッキング、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質又は因子による認識、抗原性又はアレルゲン性の変化を含み得る。したがって、当業者は、特定のグリコシル化組成及びパターンを有する治療用タンパク質、例えば、ヒト細胞又は標的動物の種特異的細胞において産生されるこれらと同一又は少なくとも類似したグリコシル化組成及びパターンを有する治療用タンパク質を好ましく利用できる。

異種グリコシル化酵素を発現するように宿主細胞を遺伝子改変することによって、宿主細胞とは異なるグリコシル化タンパク質を発現させることができる。当技術分野において公知の技術を使用して、当業者は、ヒトタンパク質グリコシル化を示す抗体又はその抗原結合部分を調製することができる。例えば、酵母株で産生されるグリコシル化タンパク質（糖タンパク質）が動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を示すように、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するように酵母株を遺伝子改変する（米国特許出願第２００４００１８５９０号、第２００２０１３７１３４号及びＰＣＴ国際公開ＷＯ２００５１００５８４ Ａ２）。

結合タンパク質に加えて、本開示はまた、本開示のそのような結合タンパク質に特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体に関する。抗Ｉｄ抗体は、他の抗体の抗原結合領域に一般的に関連する独特の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質又はそのＣＤ含有領域で動物を免疫することによって調製することができる。免疫された動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識しそれに応答して抗Ｉｄ抗体を産生する。抗Ｉｄ抗体はまた、別の動物において免疫応答を誘導するための「免疫原」としても使用されて、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生することもできる。

さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞が変異型グリコシル化パータンを有する標的タンパク質を産生するように、様々なグリコシル化酵素を発現するように遺伝子操作された宿主細胞のライブラリーを用いて、標的タンパク質を発現できることは、当業者によって理解できる。その後、当業者は、特定の新規グリコシル化パターンを有する標的タンパク質を選択して単離することができる。他の実施形態において、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善又は変化した生物学的特性を示す。

本開示はまた、本開示の結合タンパク質、抗体、又はその抗原結合部分、及び製薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本開示の抗体を含む医薬組成物は、障害の診断、検出、又は監視、障害又はその１つ以上の症状の予防、治療、管理又は改善、及び／又は研究に使用されるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、本開示の１つ又は複数の抗体を含む。別の実施形態において、医薬組成物は、本開示の１つ以上の抗体、及び４−１ＢＢ活性の過不足による障害を治療するための、本開示の抗体以外の１つ以上の予防薬又は治療薬を含む。一実施形態において、予防薬又は治療薬は、障害又はその１つもしくは複数の症状の予防、治療、管理、もしくは改善に有用であるか、現在使用されたか、又は現在使用されていることが知られている。これらの実施形態によれば、組成物はさらに担体、希釈剤又は賦形剤を含み得る。

本開示の抗体及び抗体部分は、対象への投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。通常、医薬組成物は、本開示の抗体又は抗体部分と薬学的に許容される担体とを含む。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性のあるありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体の例には、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びそれらの組み合わせのうちの１つ又は複数が含まれる。多くの場合、組成物には、等張剤、例えば糖、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトールなど）、又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される担体はさらに、抗体又は抗体部分の有効期間又は有効性を高める、湿潤剤又は乳化剤、防腐剤又は緩衝剤などの補助物質を少量で含んでもよい。

様々な送達システムが知られており、本開示の１つ以上の抗体、又は本開示の１つ以上の抗体と障害又はその１つもしくは複数の症状の予防、治療、管理、もしくは改善に有用な予防薬又は治療薬との組み合わせを投与するために使用でき、例えばリポソーム、微粒子、マイクロカプセル、抗体又は抗体断片を発現できる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ及びＷｕ, Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６２：４４２９−４４３２ （１９８７）を参照）への封入、逆転写ウイルス又はその他の担体の一部としての核酸の構築などが挙げられる。本開示の予防薬又は治療薬を投与する方法には、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外（ｅｐｉｄｕｒａｌａ）投与、腫瘍内投与、及び粘膜投与（例えば、経鼻腔内及び経口）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、例えば吸入器又は噴霧器、及びエアロゾル剤を含む製剤を使用して肺内投与することができる。例えば、米国特許第６,０１９,９６８号、第５,９８５,３２０号、第５,９８５,３０９号、第５,９３４,２７２号、第５,８７４,０６４号、第５,８５５,９１３号、第５,２９０,５４０号及び第４,８８０,０７８号と、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ９２／１９２４４号、第ＷＯ ９７／３２５７２号、第ＷＯ ９７／４４０１３号、第ＷＯ ９８／３１３４６号及び第ＷＯ ９９／６６９０３号などを参照することができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。一実施形態において、本開示の抗体、併用療法、又は本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ．ＲＴＭ．肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ．Ｉｎｃ．,Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ,Ｍａｓｓ）を使用して投与される。特定の実施形態において、本開示の予防薬又は治療薬は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺内、又は皮下に投与される。予防薬又は治療薬は、任意の好都合な経路、例えば注入又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜表層（ｍｕｃｏｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌｉｎｉｎｇ）（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通した吸収にを介して投与でき、そして他の生理活性剤と同時投与することができる。投与は全身的又は局所的であり得る。

特定の実施形態において、本開示の予防薬又は治療薬を治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい。これは、限定ではなく例として、局所注入、注射、又はインプラントを用いて達成することができ、前記インプラントは、膜及びマトリックスを含む多孔質又は非多孔質材料であり、前記膜及びマトリックスは、シアラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）、ポリマー、繊維状マトリックス、又はコラーゲンマトリックスを含む。一実施形態において、本開示の拮抗薬の１つ又は複数の抗体を対象の患部に有効量で局所投与して、障害もしくはその症状を予防、治療、管理、及び／又は改善する。別の実施形態において、本開示の抗体以外の有効量の１つ以上の治療法（例えば、１つ以上の予防薬又は治療薬）と組み合わせた有効量の本開示の１つ以上の抗体を患部に局所投与して、障害もしくはその１つもしくは複数の症状を予防、治療、管理及び／又は改善する。

別の実施形態において、本開示の予防薬又は治療薬は、放出制御又は持続放出システムで送達することができる。一実施形態において、ポンプを使用して放出制御又は持続放出を達成できる（以上のＬａｎｇｅｒ；Ｓｅｆｔｏｎ, １９８７, ＣＲＣ Ｃｒｉｔ． Ｒｅｆ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｅｎｇ． １４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０, Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら、１９８９, Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３２１：５７４を参照）。別の実施形態において、ポリマー材料を本開示の治療薬の放出制御又は持続放出に利用できる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ, Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ （ｅｄｓ．）, ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．, Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ, Ｆｌａ． （１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ, Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ, Ｓｍｏｌｅｎ及びＢａｌｌ （ｅｄｓ．）, Ｗｉｌｅｙ, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ及びＰｅｐｐａｓ, １９８３, Ｊ．, Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｓｃｉ． Ｒｅｖ． Ｍａｃｒｏｍｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２３：６１；さらにＬｅｖｙら、１９８５, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら、１９８９, Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら、１９８９, Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ． ７ １：１０５；米国特許第５,６７９,３７７号,第５,９１６,５９７号,第５,９１２,０１５号,第５,９８９,４６３号,第５,１２８,３２６号；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９９／１５１５４；及びＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９９／２０２５３を参照）。徐放性製剤に使用されるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態におい
て、徐放性製剤に使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物がなく、貯蔵安定性に優れて、無菌性、及び生分解性を有する。別の実施形態において、制御又は持続放出系を予防又は治療標的の近くに配置することができ、したがって全身投与量のほんの一部しか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ, ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ,同 ｖｏｌ． ２, ｐｐ． １１５−１３８ （１９８４）を参照）。

放出制御システムは、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３）による総説で検討されている。当業者に公知の任意の技術を用いて、本開示の１つ以上の治療薬を含む持続放出製剤を製造することができる。例えば、米国特許第４,５２６,９３８号,ＰＣＴ国際公開ＷＯ ９１／０５５４８,ＰＣＴ国際公開ＷＯ ９６／２０６９８, Ｎｉｎｇら、１９９６, “Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ ｏｆ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ Ｇｅｌ,” Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９−１８９, Ｓｏｎｇら、１９９５, “Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｌｕｎｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ,” ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２−３９７, Ｃｌｅｅｋら、１９９７, “Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ａ ｂＦＧＦ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ,” Ｐｒｏ． Ｉｎｔ’ｌ． Ｓｙｍｐ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌ． Ｂｉｏａｃｔ． Ｍａｔｅｒ． ２４：８５３−８５４,及びＬａｍら、１９９７, “Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ Ｌｏｃａｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ,” Ｐｒｏｃ． Ｉｎｔ’ｌ． Ｓｙｍｐ． Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ． Ｂｉｏａｃｔ． Ｍａｔｅｒ． ２４：７５９−７６０を参照することができ、これらの各々は、その全体が参考として本明細書中に援用される。

特定の実施形態において、本開示の組成物が予防薬又は治療薬をコードする核酸である場合、前記核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築して以下の方式で投与することにより、前記核酸をインビボ投与してそのコードされる予防薬又は治療薬の発現を促進することができる。前記方式は、例えば、レトロウイルスベクターを使用すること（米国特許第４,９８０,２８６号を参照）、直接注射、又は微粒子衝撃（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ, Ｄｕｐｏｎｔ）、脂質又は細胞表面受容体又はトランスフェクト剤でコーティングすること、又はそれを核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結して投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、１９９１, Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８を参照）。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えにより発現させるために、宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。

本開示の医薬組成物は、その意図された投与経路と適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口、例えば静脈内、皮内、皮下、経口、鼻腔内（例えば吸入）、経皮（例えば局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内又は局所投与に適した医薬組成物として、日常的な手順に従って製剤化される。通常、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液溶液である。必要に応じて、組成物はまた、可溶化剤及び注射部位の痛みを緩和するための局所麻酔薬（ｌｉｇｎｏｃａｍｎｅなど）を含んでもよい。

本開示の組成物を局所投与する場合、組成物は、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ剤、ローション剤、ゲル剤、シャンプー剤、スプレー剤、エアロゾル剤、液剤、乳剤の形態、又は当業者が周知のほかの形態で製剤化できる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ,第１９版,Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ．, Ｅａｓｔｏｎ, Ｐａ． （１９９５）を参照できる。噴霧不可能な局所剤形については、高粘度から半固体又は固体の形態に調製されて、担体又は局所適用に適合して水よりも大きい動的粘度を有する１以上の賦形剤を含むのが一般的である。適切な製剤としては、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏、粉末剤、リニメント剤、膏薬などが挙げられるが、これらに限定されず、これらは、必要に応じて滅菌されるか、又は様々な特性（例えば浸透圧）に影響を与える補助剤（例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤又は塩）と混合される。他の適切な局所剤形には、固体又は液体の不活性担体と組み合わせた活性成分が圧縮揮発剤（例えばフレオンなどの気体推進剤）との混合物又は絞り出し瓶に包装されている噴霧可能なエアロゾル製剤が含まれる。必要に応じて、保湿剤又は湿潤剤も医薬組成物及び剤形に添加することができる。そのような追加の成分の例は、当技術分野において周知である。

本開示の方法が組成物の鼻腔内投与を含む場合、組成物はエアロゾル形態、スプレー、ミスト、又は滴剤の形態で製剤化できる。具体的には、本開示において使用する予防薬又は治療薬は、適切な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又はほかの適切な気体）を使用して、加圧パック又はネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で都合よく送達され得る。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、定量を送達するための弁を提供することによって決定され得る。吸入器又は吹送器で使用するカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる）は、化合物と適切な粉末基剤（ラクトース又はデンプンなど）との粉末混合物を含有するように処方することができる。

本開示の方法が経口投与を含む場合、組成物は、錠剤、カプセル剤、カシェ剤、ジェルキャップ剤、液剤、懸濁剤などの経口的形態に製剤化することができる。錠剤又はカプセル剤は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）などの薬学的に許容される賦形剤、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース、又はリン酸水素カルシウム）、滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ポテトスターチ又はスターチグリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）を用いて従来の手段によって調製することができる。錠剤は当技術分野で周知の方法でコーティングすることができる。経口投与用の液体製剤は、溶液、シロップ又は懸濁液の形態をとり得るが、それらに限定されず、又は、使用前に水又は他の適切な媒体で回復する乾燥製品として提供され得る。このような液体製剤は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、又は水素添加食用脂肪）、乳化剤（例えば、レシチン又はアラビアゴム）、非水性媒体（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、又は分留植物油）、及び防腐剤（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエート又はソルビン酸）のような薬学的に許容される添加剤を用いて従来の手段によって調製することができる。場合によって、製剤はまた、緩衝塩、香味剤、着色剤、及び甘味剤を含んでもよい。経口投与用製剤は、予防薬又は治療薬の徐放、放出制御、又は徐放用に適切に製剤化することができる。

本開示の方法は、エアロゾル化剤と共に製剤化された組成物の、例えば吸入器又はネブライザーの使用による肺投与を含み得る。例えば、米国特許第６,０１９,９６８号、第５,９８５,３２０号、第５,９８５,３０９号、第５,９３４,２７２号、第５,８７４,０６４号、第５,８５５,９１３号、第５,２９０,５４０号及び第４,８８０,０７８号と、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ ９２／１９２４４号、ＷＯ ９７／３２５７２、ＷＯ ９７／４４０１３、ＷＯ ９８／３１３４６及びＷＯ ９９／６６９０３などを参照することができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態において、本開示の抗体、併用療法、及び／又は本開示の組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ．ＲＴＭ．肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ, Ｉｎｃ．, Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ, Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。

本開示の方法は、注射による（例えば、ボーラス注射又は持続注入による）非経口投与用に調製された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、防腐剤を添加した単位剤形（例えば、アンプル又は複数回投与用容器）で提供することができる。組成物は、油性又は水性媒体中の懸濁液、溶液又はエマルジョンのような形態をとり得、そして懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤のような処方剤を含み得る。 あるいは、活性成分は、使用前に適切な媒体（例えば、無菌パイロジェンフリー水）で回復する粉末形態であり得る。

本開示の方法は、デポー製剤として調製された組成物の投与をさらに含み得る。そのような長時間作用型製剤は、移植（例えば皮下又は筋肉内）又は筋肉内注射により投与できる。したがって、例えば、組成物は、適切なポリマー材料又は疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂を用いて調製され、又は微溶性誘導体（例えば、微溶性塩）として調製され得る。

本開示の方法は、中性又は塩形態として調製された組成物の投与を包含する。薬学的に許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するのアニオンと形成されるもの、及びナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するカチオンと形成されるものが含まれる。

一般に、組成物の成分は、別々に又は混合して単位剤形（例えば、活性凍結剤の量を示すアンプル又はサシェなどの密閉容器中の乾燥させた凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として）で供給され得る。投与方法が注入である場合、組成物は、医薬グレードの無菌水又は食塩水を含む輸液ボトルで分散させることができる。投与方法が注射である場合、成分を投与前に混合できるように、注射用滅菌水又は食塩水のアンプルを提供することができる。

具体的には、本開示はまた、薬剤の量を示すアンプルもしくはサシェなどの密封容器に包装される本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうち１種又は複数種ことを提供する。一実施形態において、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうち１種又は複数種は、密封容器内の無菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として供給され、且つ（例えば水又は食塩水で）対象への投与に適切な濃度に再溶解回復させる。別の実施形態において、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうち１種又は複数種は、密封無菌容器中の無菌凍結乾燥粉末として、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、又は少なくとも１００ｍｇの単位用量で供給される。本開示の凍結乾燥予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物は、２℃−８℃の間で元の容器に保存されるべきであり、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物は、再溶解してから１週間以内、５日以内、７２時間以内、４８時間以内、２４時間以内、１２時間以内、６時間以内、５時間以内、３時間以内、又は１時間以内に投与されるべきである。代替の実施形態において、本開示の予防薬もしくは治療薬、又は医薬組成物のうちの１種又は複数種は、薬剤の量及び濃度を示す密閉容器内における液体形態で供給される。別の実施形態において、液体形態の投与対象の組成物は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７５ｍｇ／ｍＬ、又は少なくとも１００ｍｇ／ｍＬで密閉容器に供給される。液体の形態は２℃−８℃間で元の容易に保存されるべきである。

本開示の抗体及び抗体部分は、非経口投与に適した医薬組成物に混合することができる。別の実施形態において、抗体又は抗体部分は、０．１〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含有する注射用溶液として調製される。注射用溶液は、フリントバイアル（ｆｌｉｎｔ ｖｉａｌ）又はアンバーバイアル、アンプル又はプレフィルドシリンジ中の液体又は凍結乾燥剤形で構成することができる。緩衝液は、ｐＨ５．０〜７．０（最適にはｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１〜５０ｍＭ）、最適には５〜１０ｍＭであり得る。他の適切な緩衝剤としては、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムを含むが、これらに限定されない。塩化ナトリウムを使用して、０〜３００ｍＭ（液体剤形の場合、最適には１５０ｍＭ）の濃度での溶液の毒性を調整することができる。凍結乾燥剤形は、主に０〜１０％スクロース（最適には０．５〜１．０％）である凍結保護剤を含み得る。他の適切な凍結保護剤には、トレハロース及びラクトースが含まれる。凍結乾燥剤形には、主に１〜１０％のマンニトール（最適には２４％）を含む増量剤を含み得る。液体剤形及び凍結乾燥剤形の両方は、主に１〜５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には５〜１０ｍＭ）である安定剤を使用できる。他の適切な増量剤としては、グリシン、アルギニンを含み、０〜０．０５％のポリソルベート−８０（最適には０．００５〜０．０１％）を含み得る。別の界面活性剤としては、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤を含むが、これらに限定されない。非経口投与用の注射用溶液として調製された本開示の抗体及び抗体部分を含む医薬組成物は、治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収又は分散を増加させるために使用される薬剤のようなアジュバントとして有用な薬剤をさらに含み得る。特に有用なアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ（登録商標）（組換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼである。注射用溶液にヒアルロニダーゼを添加すると、非経口投与、特に皮下投与後のヒトのバイオアベイラビリティが改善される。それはまた、より少ない痛み及び不快感、ならびに注射部位反応の最小の発生率を有するより大きい注射部位体積（すなわち、１ｍＬを超える）を可能にする（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２００４０７８１４０、ＵＳ２００６１０４９６８を参照）。

本開示の組成物は、様々な形態であり得る。これら形態には、例えば、液剤（例えば、注射用及び注入用液剤（ｉｎｆｕｓｉｂｌｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ））、分散剤又は懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、リポソーム及び坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与方式及び治療使用に依存する。別の実施形態において、典型的な組成物は、他の抗体を含むヒトの受動免疫用の組成物と類似した組成物などの注射用溶液又は注入用溶液の形態である。別の実施形態において、投与方式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。別の実施形態において、抗体は、静脈内注入又は注射によって投与される。別の実施形態において、抗体は、筋肉内注射又は皮下注射によって投与される。

治療用組成物は、通常、製造及び貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の規則的な構造として製剤化することができる。無菌注射用溶液は、所望量の活性化合物（すなわち、抗体又は抗体部分）を、上記に列挙した成分の１つ又は組み合わせを含む適切な溶媒中に混合して、続いて、必要に応じて濾過滅菌をすることによって調製できる。一般に、分散液の場合は、活性化合物を、アルカリ性分散媒及び上記に列挙した所望のほかの成分成分を含有する滅菌媒体に混合することによって調製される。別の実施形態において、無菌注射用溶液を調製するための無菌凍結乾燥粉末の場合、調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から活性成分及び任意の別の所望の成分の粉末を得る真空乾燥及び噴霧乾燥である。例えばレシチンのようなコーティングを使用すること、分散液の場合には必要な粒径を維持すること、及び界面活性剤を使用することによって、溶液を適切な流動性に維持することができる。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅らせる薬剤（例えばモノステアリン酸塩及びゼラチン）を含めることによって達成できる。

本開示の抗体及び抗体部分は、当技術分野において公知の様々な方法によって投与することができるが、多くの治療使用にとって好ましい投与経路／方式は、皮下注射、静脈内注射又は注入である。当業者が理解されるように、投与経路及び／又は方式は、所望の結果に応じて変わる。特定の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを含む放出制御製剤など、化合物の高速放出を防止する担体と共に調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための多くの方法が特許を取得しているか、又は一般に当業者に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ, Ｊ． Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ, ｅｄ．, Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ, Ｉｎｃ．, Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, １９７８を参照できる。

特定の実施形態において、本開示の抗体又は抗体部分は、例えば、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体と共に経口投与することができる。 化合物（及び必要に応じて他の成分）はまた、ハード又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入するか、錠剤に圧縮されるか、又は対象の食べ物に直接混入してもよい。経口治療投与の場合、化合物を賦形剤と混合し、吸収可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤（ｗａｆｅｒ）などの形態で使用することができる。非経口投与以外の方式によって本開示の化合物を投与するためには、その不活性化を防止するための材料で化合物をコーティングするか、又はそれと共に化合物を同時投与することが必要であり得る。

補助的な活性化合物もまた組成物に混入することができる。特定の実施形態において、本開示の抗体又は抗体部分は、４−１ＢＢ活性が低すぎる障害を治療するのに有用である１つ又は複数の別の治療薬と同時処方及び／又は同時投与され得る。例えば、本開示の抗４−１ＢＢ抗体又は抗体部分は、他の標的に結合する１つ以上の別の抗体（例えば、他のサイトカインに結合するか又は細胞表面分子に結合する抗体）と同時処方及び／又は同時投与され得る。

さらに、本開示の１つ以上の抗体は、２つ以上の前述の治療薬と組み合わせて使用することができる。そのような併用療法は、投与量が低い治療薬を有利に利用でき、それにより様々な単独療法に関連して起こり得る毒性又は合併症を回避する。

特定の実施形態において、４−１ＢＢの抗体又はその断片は、当技術分野において公知の半減期延長媒体に連結されている。そのような媒体としては、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、及びデキストランを含むが、これらに限定されない。そのような媒体は、例えば、米国特許出願第０９／４２８,０８２号、ＰＣＴ出願第ＷＯ９９／２５０４４号に記載されており、これらは、あらゆる目的のために、参照により本明細書に組み入れられる。

特定の実施形態において、本開示の抗体又は本開示の別の予防薬もしくは治療薬をコードするヌクレオチド配列を有する核酸配列は、遺伝子治療によって障害又はその１つもしくは複数の症状を治療、予防、管理又は改善するために投与される。遺伝子治療とは、発現された又は発現可能な核酸を対象へ投与することによって行われる治療を指す。本開示の該実施形態において、核酸は、予防又は治療効果を媒介するそれらのコードされた本開示の抗体、又は予防薬もしくは治療薬を産生する。

当技術分野で利用可能な遺伝子治療のための方法のいずれも本開示に従って使用することができる。遺伝子治療方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３, Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ １２：４８８−５０５；Ｗｕ及びＷｕ, １９９１, Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ, １９９３, Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ． ３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６−９３２ （１９９３）；及びＭｏｒｇａｎとＡｎｄｅｒｓｏｎ, １９９３, Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６２：１９１−２１７；Ｍａｙ, １９９３, ＴＩＢＴＥＣＨ １１（５）：１５５−２１５を参照できる。分野で一般に知られている使用可能な組換えＤＮＡ技術の方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（ｅｄｓ．）, Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ, Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆Ｓｏｎｓ, ＮＹ （１９９３）と、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ, Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ, Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ, Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ, ＮＹ （１９９０）とに記載されている。様々な遺伝子治療方法の詳細な説明は、参照により本明細書に組み入れられるＵＳ２００５００４２６６４ Ａ１に開示されている。

本開示の抗体、又はその抗原結合部分は、そのような疾患を治療するために単独で又は組み合わせて使用することができる。なお、本開示の抗体又はその抗原結合部分は、単独で又は別の薬剤（例えば治療薬）と組み合わせて使用することができ、前記別の薬剤は、その意図する目的に応じて当業者によって選択される。例えば、別の薬剤は、本開示の抗体で治療されている疾患又は病症を治療するのに有用であると当技術分野で認められている治療薬としてもよい。別の薬剤はまた、治療用組成物に有益な特性を付与する薬剤、例えば組成物の粘度に影響を及ぼす薬剤であり得る。

また、本開示内に含まれる組み合わせは、それらの意図する目的のための組み合わせであることを理解されたい。以下の薬剤は、説明のためのものであり、限定的なものではない。本開示の一部の組み合わせは、本開示の抗体及び以下のリストから選択される少なくとも１つの別の薬剤の組み合わせであり得る。組み合わせは、２つ以上の別の薬剤、例えば２つ又は３つの別の薬剤を含み得、このような組み合わせであれば、形成された組成物がその意図された機能を果たすことができる。

本明細書において詳細に説明したとおり、併用療法は、例えば１種以上のサイトカイン、成長因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤（例えば、全身性抗炎症剤）、抗線維化剤、代謝阻害剤、酵素抑制剤及び／又は細胞傷害剤もしくは細胞増殖抑制剤のような１種以上の別の治療薬と同時処方され及び／又は同時投与される１種以上の４−１ＢＢアゴニスト又は拮抗薬、例えば抗４−１ＢＢ抗体又はその断片を含み得る。本明細書中により詳細に記載される通りである。

本開示の医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の本開示の抗体又は抗体部分を含み得る。「治療有効量」とは、所望の投与量及び期間で所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。抗体又は抗体部分の治療有効量は、当業者によって決定され得、そして個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに抗体又は抗体部分の個人に望ましい反応を引き出す能力などの要因によって変わる。治療有効量はまた、抗体又は抗体部分の治療上有益な効果があらゆる毒性又は有害な効果よりも大きい量である。「予防有効量」とは、所望の投与量及び期間で所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。通常、予防的投与量が疾患の発症前又は初期段階で対象に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量よりも少ない。

薬剤投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療的又は予防的応答）を提供するように調整することができる。例えば、単回ボーラス（ｓｉｎｇｌｅ ｂｏｌｕｓ）を投与してもよく、数回に分割した用量を経時的に投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に減少又は増加させてもよい。投与の容易さ及び投薬量の均一性から、非経口組成物を投与単位形態で調製することが特に有利である。本明細書で使用される投与単位形態は、治療対象の哺乳動物対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を指す。各単位は、所望の薬学的担体と共に所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本開示の投与単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の独特の特徴及び達成されるべき特定の治療的又は予防的効果、及び（ｂ）個人における感受性の治療のためのそのような活性化合物を調合する技術分野に固有の制限によって決まり、そしてこれらに直接依存する。

本開示の抗体又は抗体部分の治療的又は予防的有効量の例示的で非限定的な範囲は、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇである。なお、投与量の値は、軽減されるべき病症の種類及び重症度によって変わる。また、なお、任意の特定の対象について、個々のニーズ及び組成物を投与し又はその投与を管理する人の専門的判断に従って具体的な投与計画を経時的に調整すべきであり、本明細書に記載の投与量範囲は、例示的なものに過ぎず、特許請求された組成物の範囲又は実施を限定することを意図していない。

当業者にとって自明なように、本明細書に記載された本開示の方法の他の適切な修正及び変化が明らかであり、本開示の範囲又は本明細書に開示された実施形態から逸脱することなく適切な均等物を用いて他の適切な修正及び変化がなされ得る。

これまでは、本開示を詳細に説明してきたが、以下の実施例を参照することによって本開示ことがより明確になり、これらの実施例は説明のみを目的として含まれ、本開示を限定することを意図しない。

（実施例１） 抗ヒト４−１ＢＢモノクローナル抗体の調製

ヒト抗原を選択しそして産生して、動物を免疫した。ヒト４−１ＢＢ（ａ．ｋ．ａ． ＣＤ１３７） （ＮＰ＿００１５５２．２）細胞外ドメインのＮ末端断片（Ｍｅｔ １−Ｇｉｎ １８６）をコードするＤＮＡ配列を、Ｃ末端で、ヒトＩｇＧ１のＣ末端ポリヒスチジンタグ付きＦｃ領域と融合させた。構築物を宿主細胞（例えば、ＮＳＯ由来のマウス骨髄腫細胞株）に導入し、宿主細胞中で組換えタンパク質として発現させた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって測定したところ、組換えタンパク質を９５％を超える純度まで精製した。

タンパク質のドメイン構造は、Ｎ末端｛｛ヒト４−１ＢＢ（Ｌｅｕ２４−Ｇｌｎ１８６）−ＤＩＥＧＲＭＤ−ヒトＩｇＧ１（Ｐｒｏ１００−Ｌｙｓ３３０）−６−Ｈｉｓタグ｝｝Ｃ末端である。予測された分子量（ＭＷ）は４４．８ｋＤａ（単量体）であり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで測定したＭＷは５０〜６５ＫＤであった。

機能的ＥＬＩＳＡにおいて組換えタンパク質の結合能力によって測定されるように、組換えタンパク質は、４−１ＢＢのいくつかの機能的特性を有することが示された。組換えヒト４−１ＢＢ Ｆｃキメラを１０ｎｇ／ｍＬ（１００μＬ／ウェル）で固定化したところ、５０％の最適結合応答を発生させた組換えヒト４−１ＢＢリガンド（カタログ番号２２９５−４Ｌ）の濃度は、約０．５〜２．５ｎｇ／ｍＬである。２０μｇ／ｍＬ（１００μＬ／ウェル）の固定化組換えマウス４−１ＢＢリガンドは、１５．６〜５００ｎｇ／ｍＬの線形範囲でヒト４−１ＢＢに結合できた。

マウスハイブリドーマスクリーニングをＥＬＩＳＡで行い、ウエスタンブロットにより確認した。選択されたクローンの結合親和性を細胞表面結合アッセイにより確認した。４−１ＢＢ ｍＡｂ上清について染色する前に、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を対照又はヒト／サル４−１ＢＢプラスミドで一晩トランスフェクトした。選択されたクローンの大多数は、ヒト及びサルの４−１ＢＢタンパク質と交差反応性を示した。

（実施例２） 抗ヒト４−１ＢＢモノクローナル抗体の特徴付け

プレートコートＣＤ３ ｍＡｂ共刺激

９６ウェル培養プレートを１×ＰＢＳの異なる濃度のＣＤ３ ｍＡｂ（ＯＫＴ３）で一晩コーティングした。１×ＰＢＳで３回洗浄した後、培養開始時に、プレートをさらに１０μｇ／ｍＬのｈ４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照マウスＩｇＧ１でコーティングした。ヒトＴ細胞をヒト末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離し、抗体コートプレートに添加する前にＣＦＳＥ（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）で標識した。４〜６日培養後、Ｔ細胞の分裂（又は増殖）をフローサイトメトリーを用いて、ＣＦＳＥ希釈によって調べた。

Ｔ細胞増殖を刺激する能力によっていくつかのクローンを選択した。これらクローンは、４−１ＢＢの共刺激アゴニストとして利用できる。これらのクローンの一つはＺＷ１０３でした。ＺＷ１０３は、１つ又は複数の共刺激物と共にＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させることができた（図１）。他のクローンは、ＺＷ１０４、ＺＷ１０６、及びＺＷ１０７などを含む。

選択されたクローンがヒト及びサル４−ＩＢＢに結合することができることを確認するために、ヒト又はサル４−１ＢＢを発現させた２９３Ｔ細胞を使用して、ＺＷ１０３及びＺＷ１０４のヒト及びサル４−１ＢＢへの結合を試験した。ＺＷ１０３及びＺＷ１０４は両方ともヒト及びサル４−１ＢＢに結合することができた（図２）。ＺＷ１０６及びＺＷ１０７もヒト及びサル４−１ＢＢに結合することができた。表８は、ＺＷ１０６と組換えヒト４−１ＢＢ ＥＣＤタンパク質との結合親和性を示す。

選択されたクローンが共刺激物ＣＤ３ ｍＡＢの存在下でＴ細胞増殖を刺激できることを確認するために、共刺激アッセイをコードプレート中で実施した。ＺＷ１０３及びＺＷ１０４は両方ともＴ細胞増殖を刺激することができた（図３）。精製ヒトＴ細胞をＣＦＳＥ標識し、ＯＫＴ３、及びコード４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質で刺激した。５日間培養した後に、細胞を回収して、ＣＤ４及びＣＤ８について染色して、フローサイトメトリー分析に供した。示されたＣＦＳＥ希釈細胞を分裂Ｔ細胞として計数した（図３）。

図４は、精製ヒトＴ細胞を、ＯＫＴ３、及びコード４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質で刺激したことを示すグラフである。Ｔ細胞応答を促進するために、組換えヒトインターロイキン−２（６０ＩＵ／ｍＬ）を一部の培養物に添加した。５日目に上清を回収してサイトカインＩＦＮ−γを測定した（図４）。これらの結果は、選択されたクローンがヒトＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化し、ヒトＴ細胞によるＩＦＮ−γの産生を刺激できることを確認した。

図５Ａは、移植片対宿主（ＧＶＨ）疾患モデルの手順を示す。０日目に、１０００万個のＣＦＳＥ標識ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＮＯＤ ｓｃｉｄ γ（ＮＳＧ）マウスに注射した。０日目及び２日目に、４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質でマウスを処理した。６日目に脾細胞を採取して、フローサイトメトリー分析に供した。図５Ｂに示すように、４−１ＢＢ ｍＡｂ処理は、異種−ＧＶＨＤマウスモデルにおいて、Ｔ細胞増殖を促進した。６日目に脾細胞を採取し、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ３及びｈＣＤ８について染色した。示されているデータは、ＣＦＳＥ希釈によって測定した、分裂したヒトＴ細胞の平均パーセンテージ（Ｎ＝４）であった。ＧＶＨＤモデルにおいてＴ細胞増殖から確認したとおり、ＺＷ１０３は免疫を増強した（図５Ｂ）。

開示された４−１ＢＢ Ａｂの、ヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスのＧＶＨＤに対する影響を試験するために、５、８、１２、１５日目に、１５００万のヒトＰＢＭＣを注射したＮＳＧを、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂ又はＰＢＳ対照３００μｇで処理した。ｈＰＢＭＣ移植時に体重をモニターした。その結果、開示されたヒト化４−１ＢＢ ＡｂがヒトＰＢＭＣを移植したＮＳＧマウスのＧＶＨＤを促進したことを示す（図６Ａ）。

図６Ｂは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが、異種−ＧＶＨＤモデルにおいて血清ＩＦＮ−γを増加させたことを示す。上方図は、８日目に測定した血清中のＩＦＮ−γ濃度を示し、下方図は、２１日目に測定した血清中のＩＦＮ−γ濃度を示す（左側の２本のバーは、それぞれＺＷ１０３−２及びＺＷ１０３−４である。右側のバーはＰＢＳである）。

図６Ｃは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが、異種−ＧＶＨＤモデルにおいて脾臓サイズを増大させたことを示す。図４Ａのように、２１日目に脾臓を採取して秤量した。

図６Ｄは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが末梢血中のヒトＴ細胞を増加させ、そしてその作用が用量依存的であることを示す。図６Ａのように、ｈＰＢＭＣ移植の２８日後、ヒトＣＤ４５染色についてヒトＰＢＭＣの生着をＦＡＣＳにより分析した。

図６Ｅは、開示されたヒト化４−１ＢＢ Ａｂが肝臓におけるヒトＴ細胞浸潤を増加させたことを示す。図６Ａのように、ｈＰＢＭＣ移植の２８日後、肝臓組織切片を抗ヒトＣＤ３抗体で染色した。

表９は、開示されたヒト化４−１ＢＢ ＡｂがＧＶＨＤによって引き起こされる組織損傷を増強したことを示す。図６Ａのように、２８日目にマウスを屠殺し、組織を４％パラホルムアルデヒドに浸して、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。２人の独立した病理学者によって組織損傷について採点した。

図７は、インビボでのヒト４−１ＢＢ ｍＡｂの抗腫瘍効果を示す。 キメラヒト４−１ＢＢ細胞外遺伝子を有する４−１ＢＢノックインマウスへＭＣ３８癌細胞（０．５×１０^６）を皮下注射することにより腫瘍モデルを作成した。５、８、１２日目に、マウスを４−１ＢＢ ｍＡｂ又は対照タンパク質で静脈内処置した。１８日目に腫瘍を分離して測定した。対照群（マウス３及びマウス４）と比較して、ＺＷ１０６で処置した群（マウス１及びマウス２）では、腫瘍サイズが有意に小さかった。

（実施例３）エピトープのマッピング

精製抗体ＺＷ１０６によって認識される４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）リガンドのエピトープを同定するために、抗体により、４−１ＢＢ組換えタンパク質のトリプシン及びキモトリプシン消化物のを沈殿させた。Ｔｈｅｒｍｏ Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計を用いて、ナノ液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）分析によって、沈殿物をさらに検出した。その結果、４−１ＢＢ組換えタンパク質由来のペプチド領域Ｔ９０ＫＫＧＣＫＤＣＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳＬＤＧＫＳＶＬ１２４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ． ４１）が、抗体ＺＷ１０６によって認識される主なエピトープであることを示した。

Claims (27)

1. ヒト４−１ＢＢに特異的に結合可能な結合タンパク質であって、
   ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３の６種類のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを含み、
   ＣＤＲ−Ｈ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５からなる群より選ばれ、
   ＣＤＲ−Ｈ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６からなる群より選ばれ、
   ＣＤＲ−Ｈ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７からなる群より選ばれ、
   ＣＤＲ−Ｌ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８からなる群より選ばれ、
   ＣＤＲ−Ｌ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９からなる群より選ばれ、かつ
   ＣＤＲ−Ｌ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０からなる群より選ばれる、結合タンパク質。
2. 請求項１に記載の結合タンパク質であって、前記６種類のＣＤＲのうち、３種類は、下記可変ドメインＣＤＲセットからなる群より選ばれる、結合タンパク質。
   ＶＨ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１
   ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
   ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３
   ＶＬ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４
   ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５
   ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６
   ＶＨ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７
   ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８
   ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９
   ＶＬ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０
   ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１
   ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２
   ＶＨ ＺＷ１０５ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３
   ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４
   ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５
   ＶＬ ＺＷ１０５ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６
   ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７
   ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８
   ＶＨ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９
   ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０
   ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１
   ＶＬ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２
   ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３
   ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４
   ＶＨ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｈ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５
   ＣＤＲ−Ｈ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６
   ＣＤＲ−Ｈ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７
   ＶＬ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット
   ＣＤＲ−Ｌ１： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８
   ＣＤＲ−Ｌ２： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９
   ＣＤＲ−Ｌ３： ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０。
3. 請求項２に記載の結合タンパク質であって、少なくとも２種の可変ドメインＣＤＲセットを含む、結合タンパク質。
4. 請求項３に記載の結合タンパク質であって、前記少なくとも２種の可変ドメインＣＤＲセットは、下記のものからなる群より選ばれる、結合タンパク質。
   ＶＨ ＺＷ１０３ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０３ ＣＤＲセット、
   ＶＨ ＺＷ１０４ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０４ ＣＤＲセット、
   ＶＨ ＺＷ１０５ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０５ ＣＤＲセット、
   ＶＨ ＺＷ１０６ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０６ ＣＤＲセット、及び
   ＶＨ ＺＷ１０７ ＣＤＲセットとＶＬ ＺＷ１０７ ＣＤＲセット。
5. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、ヒト受容体フレームワークをさらに含む、結合タンパク質。
6. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記結合タンパク質は、少なくとも１種の可変ドメインを含み、かつ、前記可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１〜１０からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、結合タンパク質。
7. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記結合タンパク質は、少なくとも１種の重鎖可変ドメイン及び少なくとも１種の軽鎖可変ドメインを含み、かつ、前記重鎖可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、３、５、７、９、５２及び５６からなる群より選ばれるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変ドメインがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、４、６、８、１０、５３及び５７からなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、結合タンパク質。
8. 請求項７に記載の結合タンパク質であって、前記結合タンパク質は、２種の可変ドメインを含み、前記２種の可変ドメインは、下記のものからなる群より選ばれるアミノ酸配列を有する、結合タンパク質。
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と２、
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と４、
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５と６、
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７と８、
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９と１０、
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２と５３、及び
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６と５７。
9. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群より選ばれる重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む、結合タンパク質。
10. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記重鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインである、結合タンパク質。
11. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記軽鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇ κ定常ドメインである、結合タンパク質。
12. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含み、前記軽鎖免疫グロブリン定常ドメインは、ヒトＩｇ λ定常ドメインである、結合タンパク質。
13. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記結合タンパク質は、免疫グロブリン分子、ｓｃＦｖ、モノクローナル抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）及び二重特異抗体（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）からなる群より選ばれる、結合タンパク質。
14. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記結合タンパク質は、ヒト抗体である、結合タンパク質。
15. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記結合タンパク質は、４−１ＢＢの生物学的機能又はレベルを調整できる、結合タンパク質。
16. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記４−１ＢＢは、ヒト４−１ＢＢである、結合タンパク質。
17. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質を含むとともに、リンカーポリペプチド又は免疫グロブリン定常ドメインを含む、抗体構築物。
18. 請求項１７に記載の抗体構築物であって、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異抗体（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、及び二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）からなる群より選ばれる、抗体構築物。
19. 請求項１８に記載の抗体構築物であって、前記抗体構築物は、
    ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、ヒトＩｇＡ定常ドメイン、及び
    Ｆｃ新生児受容体、Ｆｃ γ受容体又はＣ１ｑとの結合強度を変える１種又は複数種の突然変異を含むＩｇＧ定常ドメイン変異体
    からなる群より選ばれる重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む、抗体構築物。
20. 前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質と薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
21. ヒト４−１ＢＢの活性を向上させる方法であって、
    ヒト４−１ＢＢと、ヒト４−１ＢＢ活性を効果的に向上させる用量の前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質とを接触させるステップを含む、方法。
22. 障害に罹患しているヒト対象におけるヒト４−１ＢＢ活性を変化させる方法であって、
    前記ヒト対象に前記請求項のいずれか１項に記載の結合タンパク質を投与することで、前記ヒト対象におけるヒト４−１ＢＢの活性を向上させるステップを含む、方法。
23. 請求項２２に記載の方法であって、前記障害が癌である方法。
24. 請求項１〜１６のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５４及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５８からなる群より選ばれる配列を有するポリペプチドを含む、結合タンパク質。
25. 請求項１〜１６のいずれか１項に記載の結合タンパク質であって、前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５５及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５９からなる群より選ばれる配列を有するポリペプチドを含む、結合タンパク質。
26. ヒト４−１ＢＢに特異的に結合可能な結合タンパク質であって、
    前記結合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５２の配列を有するポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５３の配列を有するポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５４の配列を有するポリペプチド、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５５の配列を有するポリペプチドを含む、結合タンパク質。
27. ヒト４−１ＢＢに特異的に結合可能な結合タンパク質であって、
    前記結合タンパク質は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５６の配列を有するポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５７の配列を有するポリペプチド、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５８の配列を有するポリペプチド、及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ． ５９の配列を有するポリペプチドを含む、結合タンパク質。