JP2022516301A - Cd137アゴニスト性抗体とその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
(配列表の援用)
この出願はEFS-Web経由でASCIIフォーマットで提出されている配列表を含み、その名は「QLSF001PCT_ST25.txt」、サイズが73.8 KBで、2020年1月2日に作成されている。配列表の内容はその全体を参照により本明細書に引用する。
本発明の一つの態様において、単離モノクローナル抗CD137アゴニスト性抗体、もしくはその抗原結合部位は配列番号配列番号8から構成される重鎖可変領域CDR3から構成される。ある実施形態では、モノクローナル抗CD137アゴニスト性抗体、もしくはその抗原結合部位はさらに配列番号6から構成される重鎖可変領域CDR1および配列番号配列番号7から構成される重鎖可変領域CDR2より構成される。最良の実施形態においては、モノクローナル抗CD137アゴニスト性抗体もしくはその抗原結合部位は、(a)配列番号3を構成する軽鎖可変領域、(b) 配列番号4を構成する軽鎖可変領域CDR2、および(c)配列番号5を構成する軽鎖可変領域CDR3から構成される。一つの実施形態においては、抗体もしくはその一部は、配列番号1と少なくとも95%の同一性を持つ軽鎖可変領域アミノ酸配列から構成される。またもう一つの実施形態では、抗体もしくはその一部は配列番号2に示されている配列と少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%の同一性を持つアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域から構成される。
本発明のもう一つの態様においては、単離モノクローナル抗CD137アゴニスト性抗体、もしくはその抗原結合部位は、配列番号13-17からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号9-12からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域から構成される。
本発明のもう一つの態様においては、単離抗CD137アゴニスト性モノクローナル抗体、もしくはその抗原結合部位から構成される組成物も提供される。
本発明のもう一つの態様においては、抗体、もしくはその抗原結合部位をコードする単離核酸分子から構成されるベクター、および上述の核酸分子から構成される発現ベクターから構成される宿主細胞も提供される。
もう一つの態様においては、開示された発明は、ヒトにおける感染症を治療する方法を提供し、開示された発明のヒト抗CD137アゴニスト性抗体もしくは抗原結合部位を上述の感染症の治療のための効果的な量、ヒトに投与するステップから構成されている。
図1Aおよび1Bは本開示の抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体がNF-KBレセプター活性化を誘導することを示す。
図2Aおよび2Bは本開示の抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体が1次CD3+CD8+T細胞増殖を刺激することを示す。図2Cおよび2Dは抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体が1次CD3+CD8+T細胞増殖を刺激することを示す。
図3Aおよび3Bは本開示の抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体がインターフェロンγ分泌を刺激することを示す。
図4A および4Bは本開示の抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体がhu4-1BBノックインマウスの癌を抑制することを示す。
以下の実施形態とその態様はシステム、組成物および方法とともに説明および例証されているが、これらは例示かつ例証することを意図するものであり、範囲を限定するものではない。
本明細書で使用されている「から構成されている」もしくは「から構成される」という用語は組成物、方法、およびそれらの各要素に関連して使用され、実施形態に対して有用であり、しかし、有用であると否とに関わらず特定されていない要素も含まれる。当業者は、一般に、本明細書で使用されている用語は一般的に「非限定」用語(例えば、「~を含めて」という用語は「~を含めるが限定されない」、「を有する」という用語は「少なくとも~を有して」、「含める」という用語は「~を含むが限定されない」などと解釈されるべきである)として使用されていると理解する。
本明細書で使用されている用語「エピトープ」は免疫グロブリンもしくはT細胞レセプターに特異的に結合できるタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、アミノ酸もしくは糖側鎖のような分子の化学的に活性のある表面集合体からなっており、通常、特異的な3次元的構造特性ならびに特異的電荷特性を有する。抗体は、平衡解離定数が≦1μM、好ましくは≦100nM、最も好ましくは≦10nMの場合に抗原と特異的に結合すると言われる。
「KD」という用語は特定の抗原-抗体相互作用の平衡解離定数を指す。
本明細書で使用されている「抗体」という用語は、インタクト免疫グロブリンもしくはFc(結晶化可能フラグメント)領域もしくはFc領域のFcRn結合フラグメント(本明細書で「Fcフラグメント」あるいは「Fc領域」と呼ばれる)を持つモノクローナルあるいはポリクローナル抗原結合フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは組み換えDNA技術もしくはインタクト抗体の酵素的あるいは化学的開裂により作り出される場合がある。抗原結合フラグメントには、inter alia、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、dAb、および相補性決定領域(CDR)フラグメント、単鎖抗体(scFv)、単領域抗体、キメラ抗体、ダイアボディおよびポリペプチドに対する特異的抗原結合を起こさせるのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチドが含まれる。Fc領域は2もしくは3クラスの抗体に寄与する2つの重鎖の一部を含む。Fc領域は組み換えDNA技術もしくはインタクト抗体の酵素的(例、パパイン開裂)あるいは化学的開裂を介して作り出される場合がある。
「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によりコードされている抗体クラス(例えば、IgMもしくはIgG1)を指す。抗体は、免疫グロブリンG分子(IgG)のこともあれば、IgM、IgE、IgAもしくはIgD分子のこともあり、あるいはこれらから由来するものであることもある。
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的である抗体」という語句は本明細書では「抗原と特異的に結合する抗体」と同じ意味で使用されている。
「製剤処方」という用語は、中に含まれている活性成分の生物活性が有効に働くような形状に調製され、この調製物が投与される被験者に容認できないほど有毒である追加成分を含まないものを言う。
(a) 配列番号13のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号9のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域、
(b) 配列番号14のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号10のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域、
(c) 配列番号15のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号11のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域、
(d) 配列番号16のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号12のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域。
(a) 配列番号22のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号18のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域、
(b) 配列番号23のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号19のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域、
(c) 配列番号24のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号20のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域、
(d) 配列番号:25のアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域および配列番号21のアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域。
ベクターpcDNA3.4TOPO (Invitrogen)はEcoRI、XhoI、および NotIを含む短いポリリンカーとライゲーションされた。その結果生じたプラスミドはEcoRI および NotI制限酵素で消化され、ゲル電気泳動で精製された。重鎖クローニングについて、調製されたベクターが、ギブソンアセンブリを使用して、調製されたベクターと、VH領域(IDT)をコードするgblockと、J鎖およびCH1領域の接合部にあるXhoIサイトをコードするヒトIgG2gblockとを使用して組み立てられました。。プラスミドは調製され、IgG2アイソタイプを持つすべてのヒト化可変重鎖領域(VH)を組み込むためEcoRI および XhoIで消化された。全てのアセンブリはGibson法(NEB)で行われた。可変単鎖領域はgblocksを使う同様の方法で作成され、定常領域kappa (Ck)をコードするgblock フラグメントでVkappa領域をアセンブルした。
プラスミドを調製し、一過性発現系(ThermoFisher)を用い、Expi293 もしくは ExpiCHO細胞に導入された。簡単に述べると、プラスミドは1 μg プラスミドDNA合計/ml培養で3e6 細胞/ml細胞に導入された。重鎖および軽鎖プラスミドは1:1の比率で混合された。培養液は37℃で振とうをかけてインキュベーションした。16時間後、Transfection Enhancer 1および2が培養液に添加され、インキュベーションは6日間継続した。上清はろ過し、Octet Red96 (Pall)を用いてIgG定量プロトコルによりタンパク質タイターを決定した。(表1)IgGはACTA PUREシステムでMab Select Sure Protein-Aカラム精製により精製し、PBSで一晩透析した。
ヒト/カニクイザル/マウス4-1BBトランスフェクトHEK293細胞もしくはPHA-P 刺激PBMCを、FACS緩衝液(DPBS+2% FBS+0.05%アジ化ナトリウム)内で段階希釈された抗4-1BB抗体と、次いでAF647標識F(ab’)2ヤギ抗ヒトIgG および7-AADとインキュベーションした。さらに、PBMCをFITCマウス抗ヒトCD3とインキュベーションした。染色された4-1BB発現HEK293検体はFSC/SSCでゲーティング、次いで生/死細胞ゲーティングすることによりFlowJoを用いて分析され、またヒト/カニクイザル/マウス4-1BB+ 細胞 (MFI相乗平均表示)が分析された。染色されたリンパ球検体はFSC/SSCでゲーティング、次いで生/死細胞ゲーティングすることによりFlowJoを用いて分析され、また4-1BB陽性CD3+細胞が分析された。(表2および表3)
NF-κB Hu 4-1BB 293トランスフェクト細胞はHEK-DualTM TNF-α細胞(Invivogen)に4-1BBでトランスフェクションを行い作成し、TNF-a誘導NF-kB活性化を測定するために使用した。hFcgRIIA/CHOK1トランスフェクト細胞は抗4-1BB IgGへの架橋形成を提供するために使用した。細胞はAccutaseで採取、洗浄してフェノールレッドのないDMEM+10%加熱不活性化したウシ胎仔血清に1x106細胞/mlで再度浮遊させた。5x104NF-κB4-1BB293トランスフェクト細胞は、Costar3799U底96ウェルプレートで同数のhFcgRIIA/CHOK1トランスフェクト細胞もしくはCHOK1親細胞と共培養した。テスト抗体、陽性対照抗体(C1&C2)、および陰性対照(アイソタイプ)を培養基で段階希釈され、細胞に加えた。37oCで18-22時間インキュベーション後、20μlの細胞浮遊液がウェルから採取され、50μlの発光アッセイ試薬(Quanti-Luc、Invivo-Gen #rep-qlc)と不透明96平底プレート内で混合された。発光(RLUs)はFlexstation3プレートリーダー上で積分時間100 msにて測定した。(図1Aおよび1B)(表4).
T細胞は末梢血単核細胞(PBMCs)からPan T細胞単離キット (Miltenyi Biotec product #130-096-535)で調整し、冷PBS、0.5%ウシ血清アルブミン(BSA)および2mM EDTA、pH7.2に再浮遊し、キットの指示に従いCell Trace Violetで標識した(ThermoFisher、cat# C34557)。最後に、標識されたPan T細胞はAdvanced RPMI-1640、10% 加熱不活性化FBS、2-メルカプトエタノール(1:1000)に2x106細胞/mlで再浮遊した。CHOK1.mFcgRIIB-mCherry細胞はF12 Ham、10%FBS、5μg/mlピューロマイシンで培養し、Accutaseで採取し、Advanced RPMI-1640、10% 加熱不活性化FBS、2-メルカプトエタノール(1:1000)に2x105細胞/mlで再浮遊した。CHOK1親細胞は、同様に培養基にピューロマイシンを加えずに調製した。100,000標識PanT細胞/ウェルの96ウェルU底培養プレートへ、CHOK1mFcgRIIB-mCherryもしくはCHOK1を10,000細胞/ウェル、割合が10:1となるよう混合した。10ng/ml NA/LEマウス抗ヒトCD3(クローンUCHT-1)が全てのウェルに加えられ、次いで段階希釈した4-1BBテスト抗原、陽性対照抗体(C1もしくはC2)、および陰性対照抗体(アイソタイプ)が開始濃度1μg/mlで添加された。対照ウェルはCHOK1mFcgRIIB-mCherry、Pan T細胞+ CHOK1mFcgRIIB、Pan T細胞+CHOK1mFcgRIIB+抗ヒトCD3、Pan T細胞+抗ヒトCD3、およびPan T細胞のみ、を含んでいた。プレートは37oC CO2インキュベーターで5日間インキュベーションした。細胞はさらにFITC抗huCD3、PE抗huCD8、および7-AADでフローサイトメトリー用に染色した。検体はFSC/SSCゲーティングにより、次いで生/死細胞ゲーティングによりFlowJoを用いて分析し、その後CD3+/CD8+T細胞およびCD3+/CD8-T細胞の増殖(CellTrace Violet)を分析した。図2Aおよび2Bは抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体が1次CD3+CD8+T細胞増殖を刺激することを示す。図2Cおよび2Dは抗4-1BB(抗CD137)アゴニスト性抗体が1次CD3+CD8-T細胞増殖を刺激することを示す。
マウス大腸癌MC38細胞は、37℃、5%CO2インキュベーターで10%ウシ胎仔血清、1%ペニシリンおよび1%ストレプトマイシンおよび2mMグルタミンを含むDMEM培養基で拡大培養した。5E5 MC38細胞を右腋窩に皮下注射し、腫瘍は被検物質投与前にto 50-100mm3に成長した。集団当たり、8匹のh4-1BBノックイン雌マウスに抗1BB抗体を0.1、0.3、1、もしくは3mg/kgあるいはhIgG2を3mg/kg、週2回、合計5回、腹腔内投与した。図4Aは、抗4-1BB抗体投与後、全ての被検遺伝子組換えhu4-1BBノックインマウスの体重が徐々に増加していくことを示す。さらに、薬剤関連毒性は認められなかった。QL1806は抗4-1BB抗体を表す。図4Bは抗4-1BB抗体がマウス大腸癌細胞MC38の成長を阻害することを示す。21日目には有意の抑制が観察され、1mg/kgおよび3mg/kg用量群はそれぞれ2匹の無腫瘍マウスを含んでいた(表5)。
配列番号1 マウス
QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPPTFGSGTKLEIK
下線とボールド体:それぞれCDR1、2および3、(以下同じ)、Kabat番号付けスキームにより定義されている
配列番号2マウス
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVNQRPEQGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDKATLTVDTSSNTAYLHIIGLTSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTSVTVSS
軽鎖 CDRs
CDR1
TASSSVSSSYLH 配列番号3マウス
CDR2
STSNLA 配列番号4マウス
CDR3
HQYHRSPPT 配列番号5マウス
重鎖 CDRs
CDR1
DYYIH 配列番号6マウス
CDR2
RIDPEDGDIAYAPKFQD 配列番号7マウス
CDR3
GNYYAMDF 配列番号8マウス
ヒト化軽鎖可変領域
配列番号9ヒト化マウス
eIVLTQSPAtlSlSpGERVTlsCTASSSVSSSYLHWYQQKPGqSPrLWIYSTSNLASGVPARFSGSGpGTSftLTISSlEpEDfAvYYCHQYHRSPPTFGqGTKLEIK
配列番号10ヒト化マウス
eIVLTQSPAtlSlSpGERVTlsCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGpGTSftLTISSlEpEDfAvYYCHQYHRSPPTFGqGTKLEIK
配列番号11ヒト化マウス
eIVLTQSPAtlSlSpGERVTlsCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGpGTSYtLTISSMEpEDfAvYYCHQYHRSPPTFGqGTKLEIK
配列番号12ヒト化マウス
QIVLTQSPATLSASPGERVTLSCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGPGTSYTLTISSMEPEDAATYYCHQYHRSPPTFGQGTKLEIK
ヒト化重鎖可変領域
配列番号13ヒト化マウス
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDYYIHWVNQAPGKGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDRVTLTVDTSTDTAYLELSSLRSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTTVTVSS
配列番号14ヒト化マウス
EVQLvQSGAEvkkPGAtVKLSCkASGFNIKDYYIHWVNQaPgkGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDrATLTVDTStNTAYLeLssLTSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTtVTVSS
配列番号15ヒト化マウス
EVQLQQSGAEvkkPGAtVKLSCkASGFNIKDYYIHWVNQaPgkGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDrATLTVDTStNTAYLeLssLrSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTtVTVSS
配列番号16ヒト化マウス
EVQLQQSGAEVKKPGATVKLSCKASGFNIKDYYIHWVNQRPGQGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDRATLTVDTSTNTAYLELSSLRSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTTVTVSS
配列番号17ヒト化マウス
EVQLQQSGAEvkkPGAtVKLSCkASGFNIKDYYIHWVNQRPgQGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDrATLTVDTStNTAYLeLssLTSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTtVTVSS
ヒト化軽鎖可変領域
配列番号18ヒト化マウス
eIVLtQSPdfqSvtPkEKVTiTCRASSSVSYIHWYQQKPdSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTdftLTInslEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIK
配列番号19ヒト化マウス
eIVLtQSPdfqSAtPkEKVTiTCRASSSVSYIHWYQQKPdSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTSftLTInslEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIK
配列番号20ヒト化マウス
eIVLtQSPdfqSAtPkEKVTMTCRASSSVSYIHWYQQKPdSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTSYtLTInsVEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIK
配列番号21ヒト化マウス
eIVLtQSPdfqSAtPkEKVTiTCRASSSVSYIHWYQQKPGSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTSYtLTInRVEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIK
ヒト化重鎖可変領域
配列番号22ヒト化マウス
QVQLvQSGAEvkkPGASVKvSCKASGYTFTFYTMHWvrQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrvTLTADtStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSS
配列番号23ヒト化マウス
QVQLvQSGAEvkkPGASVKvSCKASGYTFTFYTMHWLrQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrATLTADtStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSS
配列番号24ヒト化マウス
QVQLvQSGAEvkkPGASVKMSCKASGYTFTFYTMHWLKQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrATLTADtStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSS
配列番号25配列番号:25ヒト化マウス
QVQLvQSGAEvkkPGASVKMSCKASGYTFTFYTMHWLKQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrATLTADKStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSS
軽鎖 CDRs
CDR1
RASSSVSYIH 配列番号26配列番号:26マウス
CDR2
ATSNLAS 配列番号27配列番号:27 マウス
CDR3
QQWSSNPFT 配列番号28 マウス
重鎖 CDRs
CDR1
FYTMH 配列番号29マウス
CDR2
YINPSSGYTNYNQKFTD 配列番号30マウス
CDR3
SDGSSSKWYFDV 配列番号31マウス
配列番号32ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDYYIHWVNQAPGKGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDRVTLTVDTSTDTAYLELSSLRSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号33ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
QIVLTQSPATLSASPGERVTLSCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGPGTSYTLTISSMEPEDAATYYCHQYHRSPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号34ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
EVQLQQSGAEVKKPGATVKLSCKASGFNIKDYYIHWVNQRPGQGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDRATLTVDTSTNTAYLELSSLRSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号35 マウス
QIVLSQSPTILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWYQQKPGSSPKAWISATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEIK
配列番号36マウス
QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTFYTMHWLKQRPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGTGTTVTVSS
配列番号37ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
eIVLTQSPAtlSlSpGERVTlsCTASSSVSSSYLHWYQQKPGqSPrLWIYSTSNLASGVPARFSGSGpGTSftLTISSlEpEDfAvYYCHQYHRSPPTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号38ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
eIVLTQSPAtlSlSpGERVTlsCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGpGTSftLTISSlEpEDfAvYYCHQYHRSPPTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号39ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
eIVLTQSPAtlSlSpGERVTlsCTASSSVSSSYLHWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGpGTSYtLTISSMEpEDfAvYYCHQYHRSPPTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号40ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
EVQLvQSGAEvkkPGAtVKLSCkASGFNIKDYYIHWVNQaPgkGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDrATLTVDTStNTAYLeLssLTSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTtVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号41ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
EVQLQQSGAEvkkPGAtVKLSCkASGFNIKDYYIHWVNQaPgkGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDrATLTVDTStNTAYLeLssLrSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTtVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号42ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
EVQLQQSGAEvkkPGAtVKLSCkASGFNIKDYYIHWVNQRPgQGLEWIGRIDPEDGDIAYAPKFQDrATLTVDTStNTAYLeLssLTSEDTAVYYCTTGNYYAMDFWGQGTtVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号43ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
eIVLtQSPdfqSvtPkEKVTiTCRASSSVSYIHWYQQKPdSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTdftLTInslEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号44ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
eIVLtQSPdfqSAtPkEKVTiTCRASSSVSYIHWYQQKPdSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTSftLTInslEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号45ヒト化マウス Fv、ヒト定常 (Ckappa)
eIVLtQSPdfqSAtPkEKVTMTCRASSSVSYIHWYQQKPdSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTSYtLTInsVEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号46ヒト化マウス Fv、ヒト定常(Ckappa)
eIVLtQSPdfqSAtPkEKVTiTCRASSSVSYIHWYQQKPGSSPKAWISATSNLASGVPsRFSGSGSGTSYtLTInRVEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGqGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号47ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
QVQLvQSGAEvkkPGASVKvSCKASGYTFTFYTMHWvrQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrvTLTADtStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号48ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
QVQLvQSGAEvkkPGASVKvSCKASGYTFTFYTMHWLrQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrATLTADtStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号49ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
QVQLvQSGAEvkkPGASVKMSCKASGYTFTFYTMHWLKQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrATLTADtStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号50ヒト化マウス Fv、ヒト Fc
QVQLvQSGAEvkkPGASVKMSCKASGYTFTFYTMHWLKQaPGQGLEWIGYINPSSGYTNYNQKFTDrATLTADKStSTAYMeLSSLrSEDtAVYYCARSDGSSSKWYFDVWGqGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Claims (27)
- 配列番号8から構成される重鎖可変領域CDR3を有する単離抗CD137アゴニスト性抗体もしくはその抗原結合部。
- 配列番号31から構成される重鎖可変領域CDR3を有する単離抗CD137アゴニスト性抗体もしくはその抗原結合部。
- 配列番号6から構成される重鎖可変領域CDR1と、配列番号7から構成される重鎖可変領域CDR2とを、さらに有することを特徴とする請求項1に記載の単離抗体もしくはその抗原結合部。
- 配列番号29から構成される重鎖可変領域CDR1と、配列番号30から構成される重鎖可変領域CDR2とを、さらに有することを特徴とする請求項2に記載の、単離抗体もしくはその抗原結合部。
- 上記抗体もしくはその一部が特異的にヒトCD137に結合し、さらに
(a) 配列番号3から構成される軽鎖可変領域CDR1と、
(b) 配列番号4から構成される軽鎖可変領域CDR2と、
(c) 配列番号5から構成される軽鎖可変領域CDR3とから構成されることを特徴とする、請求項3に記載の単離抗体もしくはその抗原結合部。 - 上記抗体もしくはその一部が特異的にヒトCD137に結合し、さらに
(a) 配列番号26から構成される軽鎖可変領域CDR1と、
(b) 配列番号27から構成される軽鎖可変領域CDR2と、
(c) 配列番号28から構成される軽鎖可変領域CDR3とから構成されることを特徴とする、請求項4に記載の単離抗体もしくはその抗原結合部。 - 配列番号1と最低95%の同一性を持つ軽鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号2と最低95%の同一性を持つ重鎖可変領域アミノ酸配列とから構成されることを特徴とする、請求項1に記載の単離抗体もしくはその抗原結合部。
- 配列番号2に示されている配列と最低95%、最低96%、最低97%、最低98%、もしくは最低99%の同一性をもつアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域から構成されることを特徴とする、請求項1に記載の単離抗体もしくはその抗原結合部。
- 配列番号35と最低95%の同一性をもつ軽鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号36と最低95%の同一性をもつ重鎖可変領域アミノ酸配列とから構成されることを特徴とする、請求項2に記載の単離抗体、もしくはその抗原結合部。
- 配列番号36に示されている配列と最低95%、最低96%、最低97%、最低98%、もしくは最低99%の同一性をもつアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域から構成されることを特徴とする、請求項2に記載の単離抗体、もしくはその抗原結合部。
- Fab フラグメント、F(ab')2 フラグメント、Fv フラグメント、単鎖抗体、もしくは二重特異性抗体であることを特徴とする請求項1ないし10に記載の単離抗体、もしくはその抗原結合部。
- キメラ抗体もしくはヒト化抗体であることを特徴とする請求項1ないし10に記載の単離抗体。
- 免疫グロブリンG(IgG)、IgM、IgE、IgA もしくはIgD 分子であることを特徴とする請求項1ないし10に記載の単離抗体。
- IgG1、IgG2、IgG3、もしくはIgG4であることを特徴とする、請求項13に記載の単離抗体。
- 配列番号13-17からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域と、配列番号9-12からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域とからなることを特徴とする請求項1に記載の単離抗体、もしくはその抗原結合部。
- 配列番号22-25からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される重鎖可変領域と、配列番号18-21からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される軽鎖可変領域とからなることを特徴とする請求項2に記載の単離抗体、もしくはその抗原結合部。
- キメラ抗体もしくはヒト化抗体であることを特徴とする請求項15および17に記載の単離抗体。
- 免疫グロブリンG(IgG)、IgM、IgE、IgA もしくはIgDであることを特徴とする請求項15および16に記載の単離抗体。
- IgG1、IgG2、IgG3、もしくはIgG4であることを特徴とする請求項18に記載の単離抗体。
- 抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項1ないし19に記載の単離抗体。
- 配列番号33、37-39からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される軽鎖と、配列番号32、34、40-42からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される重鎖とからなる単離モノクローナル抗体もしくはその結合部。
- 配列番号43-46からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される軽鎖と、配列番号47-50からなるグループから選択されたアミノ酸配列から構成される重鎖とから構成される単離モノクローナル抗体もしくはその結合部。
- 請求項1ないし10、15、16、21 および 22のいずれか1つに記載の抗体もしくはその抗原結合部から構成される免疫抱合体であって、治療薬とリンクしている免疫抱合体。
- 請求項1ないし10、15、16、21 および 22のいずれか1つに記載の抗体、もしくはその抗原結合部および医薬として許容される担体から構成される医薬組成物。
- 免疫応答を刺激するため、請求項24に記載の医薬組成物の治療効果のある量を被験者に投与するステップから構成される、免疫応答刺激方法。
- 感染症を治療するため、請求項24に記載の医薬組成物の治療効果のある量を被験者に投与するステップから構成される、感染症治療方法。
- 癌を治療するため、請求項24に記載の医薬組成物の治療効果のある量を被験者に、投与するステップから構成される、癌治療方法。
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