JP2008189645A5

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Publication number: JP2008189645A5
Application number: JP2007053444A
Authority: JP
Filing date: 2007-02-01
Publication date: 2009-03-05

Description

親水性ウイルスの不活化に有効な組成物

食品衛生、医療、福祉などの分野において、日常行う衛生管理、とくに対象物表面に適用し、細菌や真菌だけでなく親水性ウイルスまで不活化し、表面の清浄化に使用する組成物。

従来、アルコールを主成分とする組成物は、細菌や真菌を殺菌するために日常の衛生管理に使用されてきたが、親水性ウイルスに対する作用は十分ではなかった。しかし、近年、ノロウイルスの感染症あるいは食中毒が多発しており、このような親水性ウイルスまで簡便かつ効果的に不活化できる組成物が求められている。親水性ウイルスの不活化には、次亜塩素酸ナトリウムや過酢酸などの高度消毒剤、あるいは強酸または強アルカリが有効であることは知られていたが、使用者の安全性や対象物への影響など、取り扱いが簡便ではなかった。
特表平７−５０４１７５号公報

ウイルスに起因する感染症あるいは食中毒を予防するためには、環境を清浄化することが重要であり、日常の衛生管理に簡便に使用できる組成物の利用が好ましい。例えばノロウイルスに対しては次亜塩素酸ナトリウム溶液の使用が推奨されているが、この溶液は酸化力が強く、金属や繊維に好ましくない影響を及ぼす。一方、従来のエタノール製剤やカチオン系界面活性剤配合消毒剤は金属や繊維に及ぼす影響は少ないものの、有効ではない。

発明者らは、これらの課題を解決するために、金属や繊維に及ぼす影響が小さく、かつ、ノロウイルスに対してより確実な不活化効果が期待できる組成物を新たに開発しようとした。

アルコールに何らかの添加物を加え、ウイルス不活化効果を測定し、有効な添加物およびその組み合わせを探索することにした。

試験対象とするウイルスとして、アルコールによって容易に不活化されないネコカリシウイルスを選んだ。このウイルスはノロウイルスの代替として世界的によく利用されているものである。さらに薬剤抵抗性が比較的強いとされている２種類のバクテリオファージも試験に加え、親水性ウイルス全体に有効かどうかを検討することにした。

本発明者らは、各種の酸、アルカリ性物質、界面活性剤、食品添加物および低レベルの殺菌剤などの組み合わせについて検討し、そのいくつかがアルコールのウイルスの不活化効果を高めることを認めたが、強酸性や強アルカリの条件下を除き、ウイルスを短時間内に完全に不活化するに至らなかった。

さらに、複数成分の組み合わせを検討し、液性が弱アルカリの条件下で低級アルコールとカチオン界面活性剤を組み合わせることにより、親水性ウイルス全体に有効であり、かつ、金属や繊維への影響が少ない、簡便で安全性の高い組成物を開発するに至った。

低級アルコールはエタノールまたはイソプロピルアルコールから選ばれる。４０ｗｔ％以上で十分な効果を発揮し、９５ｗｔ％以上ではタンパク変性効果が低くなり、結果としてウイルス不活化効果が劣るので、４０〜９５ｗｔ％であることが好ましい。

アルカリ性物質はアルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニア、有機アミン、炭酸塩、ケイ酸塩などから選ばれる。添加量の範囲は０．０１〜５ｗｔ％であるが、その量はアルコールへの溶解性および溶液のｐＨ８〜１１未満によって限定される。

カチオン界面活性剤は塩化ベンザルコニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジンなどから選ばれるが、第四アンモニウム塩については炭素数が８〜１８までのアルキル基を１本または２本有するものが好ましい。

また、５４．１ｗｔ％のエタノールと、０．２ｗｔ％の炭酸ナトリウムと、０．１ｗｔ％の塩化ジデシルジメチルアンモニウムとで構成し、ｐＨ調整剤でｐＨ１０．５〜１０．９に調整したものが好ましい。

なお、本発明組成物は金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、香料、色素などの添加物を含んでもよい。

本発明はエタノール、アルカリ性物質およびカチオン界面活性剤を必須成分とし、噴霧、塗布、浸漬あるいは清拭することによって、細菌や真菌を殺滅するだけでなく、従来、アルコール単独では短時間内に不活化することのできなかった親水性ウイルスの不活化にも有効に作用する組成物である。

以下、実施例に基づいて本発明を詳説する。また用いた方法については以下に示す。

ノロウイルスと同じ科に属するＦｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓＡＴＣＣＶＲ−７８２（以下ＦＣＶ）に対する不活化効果を調べた。試験には、宿主細胞ＣｒａｎｄｅｌｌＦｅｌｉｎｅＫｉｄｎｅｙ−ｃｅｌｌｌｉｎｅＡＴＣＣＣＣＬ−９４（以下ＣＲＦＫ）を５％ＦＢＳ、カナマイシン、Ｌ−グルタミンを含有したＤＭＥＭ培地（以下ＤＭＥＭ培地）で３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で３〜４日培養したものを用い、薬剤感受性試験を行う時は、ＣＲＦＫを９６ｗｅｌｌマイクロタイタープレートに１ｗｅｌｌあたり約１０^４ｃｅｌｌとなるようにまき、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で３日間培養した。

コンフルエントなＣＲＦＫ細胞にＦＣＶを１時間感染後、培地を吸い出し、新しい培地を入れ２４時間培養後、コンラージ棒でシャーレ底面を擦り、培養液を遠心分離（１５００ｒｐｍ，３ｍｉｎ）した。遠心後、上清を取り出し、沈殿を−８０℃のディープフリーザーで３回凍結融解を繰り返し、細胞を壊した後、先ほどの上清と混合し、ＦＣＶの培養液とした。ＦＣＶの培養液は−８０℃で保存した。

薬剤感受性試験は、試験液０．９ｍＬにＦＣＶ培養液０．１ｍＬを１分間室温で反応させた後、ＤＭＥＭ培地で段階希釈し、１時間細胞に感染させた。感染後、ＤＭＥＭ培地を吸い出し、新たにＤＭＥＭ培地を入れ、３日間培養し、ＴＣＩＤ_５０（培養細胞にウイルスを感染させ、その５０％が感染するウイルス量を１ＴＣＩＤ_５０と呼ぶ）を算出した。

その結果（表１）、エタノール、アルカリ性物質およびカチオン界面活性剤の必須３成分を含む本発明組成物はＦＣＶを効果的に不活化した。

ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＮＢＲＣ１３９６５（ＭＳ２）およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＮＢＲＣ１３８９８（φＸ１７４）を１０ｍＬＴＳＢ培地に植菌し、３７℃で一晩振とう培養し、培養液を遠心分離後、沈殿した菌体を滅菌した１０ｍＭＭｇＣｌ_２容液に懸濁し、試験に使用するまで室温に保管した。バクテリオファージＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｐｈａｇｅＭＳ２ＮＢＲＣ２００１５およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｐｈａｇｅφＸ１７４ＮＢＲＣ２０００９を滅菌蒸留水で１０^８〜１０^９ＰＦＵ／ｍＬとなるように希釈し、試験に使用するまで室温で保管した。

試験液０．９ｍＬにファージ溶液０．１ｍＬを１分間室温で反応させ、滅菌蒸留水で希釈後、その溶液０．１ｍＬと宿主菌０．１ｍＬを前もって３７℃に保温しておいた滅菌短試験管に分注し、混合した。その後、試験管を３７℃で２０分間保温し、宿主菌にファージを感染させた後、５０℃で保温しておいた軟寒天培地４ｍＬを添加し、泡立てないように攪拌した。あらかじめ作製しておいたＴＳＡ培地に重層し、固まったら３７℃で一晩培養し、プラークの数をカウントした。

その結果（表１）、ＭＳ２およびφＸ１７４に対して、本発明組成物は高い不活化効果が得られた。このように、現在のところ培養不可能なノロウイルスの代替ウイルスとして、ＦＣＶおよびバクテリオファージを用いて薬剤感受性試験を実施した結果、本発明組成物は複数（３種）の親水性ウイルス全てにおいて高い不活化効果が得られたことから、ノロウイルスに対してもより高い不活化効果が期待できることが明らかとなった。

実使用条件（スプレーした後、布で拭き取る）での効果について、ＡＯＡＣ公定法スプレー商品効力判定試験に準拠した方法を用いて試験した。ＡＯＡＣ公定法スプレー商品効力判定に用いられる方法に準じ、切断したスライドガラス（水縁磨，厚さ１．２〜１．５ｍｍ，２５×２５ｍｍ）を洗浄して乾燥した後、ろ紙を敷いたガラスシャーレに入れて１８０℃、２時間乾熱滅菌した。ＦＣＶ培養液（６．０ｌｏｇＴＣＩＤ_５０）１０μＬをスライドガラスに滴下して軽く塗り広げ、シャーレのフタをずらしてクリーンベンチ内で３０〜４０分間乾燥させた。乾燥後、スライドガラスから約１０ｃｍ離した場所から、スプレーノズルを用いて薬剤を噴霧し、１５秒後に滅菌綿棒を用いて拭き取り、培地に懸濁した。その後、希釈し、細胞に感染させ、３日培養後、ウイルスの検出の有無を測定した。

その結果（表２）、本発明組成物ではウイルスは検出されなかった。

本発明組成物の腸管出血性大腸菌Ｏ１５７および黄色ブドウ球菌に対する殺菌効果を調査した。

本発明組成物の原液および菌液を接種した時に３および５倍希釈液となるように滅菌水で調製した試験液９ｍＬを試験管に分注して２０℃に保持し、これに黄色ブドウ球菌：ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓＡＴＣＣ２５９２３あるいは腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７ＲＩＭＤＯ５０９８９４（１９９８年に堺市で発生した集団食中毒事例の臨床株）を液体ブイヨンで３７℃、２４時間振盪培養したもの１ｍｌを添加し、１５、３０および６０秒間作用させ、その２０μＬを二次培地（４％Ｔｗｅｅｎ８０および０．３％レシチンを添加した液体ブイヨン培地）に接種し、３７℃で２日間培養後の培地の濁りにより判定した。

その結果（表３）、本発明組成物は５倍希釈したものでも１５秒間作用させることで、菌は検出されなくなった。このように、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７および黄色ブドウ球菌に対し、本液体組成物は非常に有効であり、細菌に対する殺菌剤としても有効であることを確認した。

ステンレス（ＳＵＳ３０４、ＳＵＳ４３０）テストピース（５０×３０ｍｍ）の半分を製剤に浸漬し、５０℃で１週間静置し、試験前後のテストピースの外観を観察した。

その結果、ステンレステストピースの外観に変化はなく、腐食性はないと判断される。

ノロウイルスなどの親水性ウイルスに起因する食中毒や感染症を予防するため、対象物表面に簡便かつ安全に適用でき、より確実な不活化効果が得られる本発明組成物は実用性が高く、有効に利用できる。

Claims

４０ｗｔ％〜９５ｗｔ％の低級アルコール、０．０１ｗｔ％〜５ｗｔ％のアルカリ性物質、０．０１ｗｔ％〜１０ｗｔ％のカチオン界面活性剤を必須成分とする組成物。
ｐＨが８〜１１未満の範囲である
請求項１に記載の組成物。
上記低級アルコールは、
エタノールまたはイソプロピルアルコールから選ばれる
請求項１又は２に記載の組成物。
上記アルカリ性物質は、
アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物、アンモニア、有機アミン、炭酸塩、ケイ酸塩から選ばれる
請求項１乃至３のいずれかに記載の組成物。
上記カチオン界面活性剤は、塩化ベンザルコニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、グルコン酸クロルヘキシジンから選ばれる
請求項１乃至４のいずれかに記載の組成物。
５４．１ｗｔ％のエタノールと、０．２ｗｔ％の炭酸ナトリウムと、０．１ｗｔ％の塩化ジデシルジメチルアンモニウムとで構成するとともに、
ｐＨ調整剤でｐＨ１０．５〜１０．９に調整した
組成物。