KR102676128B1 - 소독용 조성물 - Google Patents

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모토야 키쿠치
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Abstract

안전성이 높은 외피용 살균 소독제로 이용되어 온 올라넥시딘 글루콘산염의 효력을 한층 더 높이는 한편 항균 스펙트럼을 확대함으로써, 보다 적용 범위를 확대시킨 소독용 조성물을 제공한다.
올라넥시딘 글루콘산염을 함유하고, 염기성인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물을 이용함으로써, 종래보다 살균 스펙트럼이 확대된 올라넥시딘 글루콘산염 함유 소독제를 제작할 수 있다.

Description

소독용 조성물
본 발명은, 올라넥시딘 글루콘산염(Olanexidine Gluconate)을 함유하는, 광범위한 살균 스펙트럼을 갖는 소독용 조성물에 관한 것이다.
올라넥시딘은, 화학명 1-(3, 4-디클로로벤질)-5-옥틸비구아니드라는 높은 살균 활성을 갖는 화합물이다. 올라넥시딘 글루콘산염은, 물에 대한 충분한 용해성이 있고, 넓은 살균 스펙트럼을 갖고, 살균 효과가 단시간에 나타나고, 또 그 활성이 장시간 지속되는 데다가 안전성도 높기 때문에, 의료용 소독제로 유용하다(특허문헌 1). 올라넥시딘 글루콘산염을 함유하는 외피용 살균 소독제는, 피부 상재균으로 여겨지는 각종 세균이나, 엔벨로프 바이러스(envelope virus)에 대해서는 뛰어난 효력을 갖는 한편, 엔벨로프가 없는 고양이 칼리시 바이러스에 대해서는 거의 효력을 갖지 않는다(비특허문헌 1). 그러므로, 의료나 간호, 음식품 산업 등의 분야에 있어서, 보다 효력이 높고, 광범위한 살균 스펙트럼을 갖는 올라넥시딘 글루콘산염 함유 소독제가 요구되고 있다.
올라넥시딘은, 비구아니드 구조를 1개 갖는 모노비구아니드계 화합물에 속한다. 동일한 비구아니드 구조를 갖는 소독제로는, 비스비구아니드계 화합물인 클로르헥시딘, 폴리비구아니드계 화합물인 폴리헥사메틸렌 비구아니드를 대표종으로 들 수 있다.
클로르헥시딘은, 1분자 중에 비구아니드 구조를 2개 갖는 비스비구아니드계 화합물이다. 올라넥시딘과 마찬가지로 난용성이고, 글루콘산염으로 함으로써 가용성이 되므로, 의약품으로는 주로 클로르헥시딘 글루콘산염으로 이용된다(비특허문헌 2). 클로르헥시딘 글루콘산염은, 올라넥시딘 글루콘산염과 마찬가지로, 엔벨로프 바이러스에 대해서는 살(殺)바이러스 작용을 나타내는 한편, 논엔벨로프 바이러스에 대해서는 효력을 갖지 않는다(비특허문헌 3). 또한, 클로르헥시딘 글루콘산염은, pH 4~6.5에서 안정적이고, 희석 수용액을 pH 8 이상의 염기성으로 하면 침전을 일으키는 것, pH를 상승시켜도 살균 효력에 차이가 발생하지 않는 것이 알려져 있다(특허문헌 2, 비특허문헌 2, 비특허문헌 4).
한편, 폴리헥사메틸렌 비구아니드는, 폴리비구아니드계 화합물로 분류되는, 1단위 중에 비구아니드 구조를 1개 갖는 헥사메틸렌 비구아니드의 폴리머이다. 폴리헥사메틸렌 비구아니드는, 물에 매우 잘 녹고, 폭넓은 살균 스펙트럼을 가지므로, 그 약산성 용액은, 저독성 제균제로 널리 시판되고 있다(비특허문헌 5, 6 등). 또한, 시판되는 폴리헥사메틸렌 비구아니드 소독제는, 논엔벨로프 바이러스에 대해서도 살바이러스 활성을 갖는 것이 보고되어 있고(비특허문헌 7), 또 pH를 상승시키면 살균 효력 및 살바이러스 효력이 상승된다는 보고가 있다(비특허문헌 4, 특허문헌 3, 4).
특허문헌 1: 일본 공개특허공보 제2005-289959호 특허문헌 2: 일본 공개특허공보 제2007-217394호 특허문헌 3: 일본 공개특허공보 제2007-045732호 특허문헌 4: 일본 공개특허공보 제2017-171606호
비특허문헌 1: 첨부 문서 「올라네딘액 1.5% 소독용 어플리케이터 10 mL/25 mL」(2015년 8월 개정) 비특허문헌 2: 의약품 인터뷰 폼 「클로르헥시딘 글루콘산염액」(2010년 7월 개정) 비특허문헌 3: Clin Microbiol Rev.; 12(1): 147-179(1999년 1월) 비특허문헌 4: Skin Pharmacol Physiol.; 28(3): 147-158(2015년) 비특허문헌 5: Scientific Committee on Consumer Safety "Opinion on the safety of poly(hexamethylene) biguanide hydrochloride (PHMB)" (2015년 7월) 비특허문헌 6: VANTOCIL IB Antimicrobial 기술 정보 자료 비특허문헌 7: 웹 사이트 「Arch Chemicals Reports that Studies Confirm that Vantocil(TM) Product Controls Norovirus, a Leading Cause of Acute Gastroenteritis」(https://www.businesswire.com/news/home/20060113005294/en/Arch-Chemicals-Reports-Studies-Confirm-Vantocil-TM)
본 발명의 과제는, 안전성이 높은 외피용 살균 소독제로 이용되어 온 올라넥시딘 글루콘산염의 효력을 한층 더 높이면서, 살균 스펙트럼을 확대함으로써, 보다 적용 범위를 확대시킨 소독용 조성물을 제공하는 것에 있다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해 열심히 연구를 계속했다. 피부에 적용하는 조성물은, 피부의 pH(pH4~7)에 맞추어 약산성인 것이 일반적이었던 것이나, 올라넥시딘이, 알칼리 수용액에 의해 중화됨으로써 유리체로 석출되는 점에서(특허문헌 1), 종래 올라넥시딘 글루콘산염을 함유하는 살균제는 pH 5에서 제제화되어 있었지만(비특허문헌 1), 본 발명자들은, 일부러 올라넥시딘 글루콘산염의 염기성 용액을 조제하여, 그 활성을 시험한 결과, 예상에 반해 살균 효력이 높아진 것뿐 아니라, 약산성 제제에서는 거의 효력을 갖지 않았던 논엔벨로프 바이러스에 대해서도 효력이 나타나는 것을 발견했다. 또한, 본 발명자들은, 올라넥시딘 글루콘산염을 함유하는 염기성 용액에, 추가로 계면활성제를 가함으로써 안정성이 높아지는 것을 확인했다. 본 발명은, 이상의 지견(知見)을 바탕으로 하는 것이다.
즉, 본 발명은, 아래와 같다.
(1) 올라넥시딘 글루콘산염을 함유하고, 염기성인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
(2) pH 8~11의 범위 내인 것을 특징으로 하는 상기 (1)에 기재된 소독용 조성물.
(3) 올라넥시딘 글루콘산염의 농도가, 0.01~20%(W/V)인 것을 특징으로 하는 상기 (1) 또는 (2)에 기재된 소독용 조성물.
(4) 물 및/또는 소독용 알코올을 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 (1)~(3) 중 어느 하나에 기재된 소독용 조성물.
(5) 소독용 알코올 농도가, 10~85%(V/V)인 것을 특징으로 하는 상기 (4)에 기재된 소독용 조성물.
(6) 소독용 알코올이, 에탄올 및 이소프로필알코올로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 상기 (4) 또는 (5)에 기재된 소독용 조성물.
(7) 상기 (1)~(6) 중 어느 하나에 기재된 소독용 조성물을 포함하는 러빙제.
본 발명의 조성물에 의하면, 의료나 간호, 음식품 산업 등의 분야에 있어서 이용 가능한, 보다 효력이 높고, 광범위한 살균 스펙트럼을 갖는 소독제를 제작할 수 있다.
도 1은 실시예 1의, 올라넥시딘 글루콘산염 함유 조성물(pH 5, 8~10)의 마이코박테리움·포르투이툼(Mycobacterium fortuitum) JCM6387에 대한 살균력을 나타내는 도면이다.
도 2는 실시예 1의, 올라넥시딘 글루콘산염 함유 조성물(pH 5, 8~10)의 마이코박테리움·첼로네이(Mycobacterium chelonae) JCM6388에 대한 살균력을 나타내는 도면이다.
도 3은 실시예 1의, 올라넥시딘 글루콘산염 함유 조성물(pH 5, 8~10)의 마이크로스포럼·캐니스(Microsporum canis) NBRC32464에 대한 살균력을 나타내는 도면이다.
도 4는 실시예 2의, 올라넥시딘 글루콘산염 함유 조성물(pH 5, 7~12)의 파지에 대한 살바이러스(파지) 활성을 나타내는 도면이다.
도 5는 실시예 3의, 에탄올 함유 올라넥시딘 제제의 파지에 대한 살바이러스(파지) 활성을 나타내는 도면이다.
본 발명은, 올라넥시딘 글루콘산염을 함유하고, 염기성인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물에 관한 것이다. 여기서, 염기성이란, 조성물의 pH가 7을 초과하는 것이면 되지만, 피부에 대한 독성 및 살균 활성을 감안하여, 예를 들어 pH 7 초과~12, pH 7 초과~11.5, pH 7 초과~11, pH 7 초과~10.5, pH 7 초과~10, 바람직하게는 pH 7.5~12, pH 7.5~11.5, pH 7.5~11, pH 7.5~10.5, pH 7.5~10, 보다 바람직하게는 pH 8~11.5, pH 8~11, pH 8~10.5, pH 8~10, 보다 바람직하게는 pH 8.5~11.5, pH 8.5~11, pH 8.5~10.5, pH 8.5~10, 보다 더 바람직하게는 pH 9~12, pH 9~11.5, pH 9~11, pH 9~10.5, pH 9~10을 들 수 있다. 그리고, 본 발명의 조성물은 수용액이다. 또한, 본 명세서에 있어서, 「소독」이나 「살균」이란, 세균, 진균 및/또는 바이러스를 살멸하는 것을 의미한다.
pH의 조정에는, 공지된 어떤 pH 조절제를 사용할 수 있지만, 예를 들어 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 탄산암모늄, 탄산칼륨 등의 염기성 용액을 들 수 있고, 그 중에서도 수산화나트륨을 바람직하게 예시할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물을, 염기성 완충액을 이용하여 조제할 수도 있고, 이용되는 완충액으로는, 붕산-탄산나트륨 완충액, CAPS-NaOH 완충액, Bicine-NaOH 완충액, Gricine-NaOH 완충액, Tricine-NaOH 완충액, HEPPS-NaOH 완충액, TAPS-NaOH 완충액, Bicine-NaOH 완충액, HEPES-NaOH 완충액 등을 예시할 수 있다.
올라넥시딘 글루콘산염의 농도로는, 충분한 살균 효력을 갖는 농도이면 특별히 제한되는 것은 아니지만, 예를 들어 0.01~20%(W/V), 바람직하게는 0.1~10%(W/V), 보다 바람직하게는 0.5~5%(W/V)를 들 수 있다. 후술하는 소독용 알코올과 병용하는 경우는, 예를 들어 0.01~10%(W/V), 바람직하게는 0.1~7%(W/V), 보다 바람직하게는 0.5~5%(W/V), 보다 더 바람직하게는 0.5~3%(W/V)를 들 수 있다.
본 발명의 조성물은, 사상균이나 항산균, 특히 마이크로스포럼속균, 마이코박테리움속균에 대하여 향상된 살균 활성을 갖는다. 또한, 종래의 올라넥시딘 글루콘산염 함유 소독제로는 비활성화가 불가능했던 논엔벨로프 바이러스, 특히 칼리시 바이러스과에 속하는 바이러스(노로 바이러스속에 속하는 바이러스 등)에 대해서도, 뛰어난 살바이러스 활성을 갖는다.
본 발명의 조성물은, 살균 활성을 증강하기 위해서나, 속건성(速乾性)을 부여하기 위해, 추가로 소독용 알코올을 포함하고 있을 수도 있다. 여기서, 소독용 알코올로는, 바람직하게는 에탄올 또는 이소프로필알코올을 들 수 있고, 소독용 알코올 농도로는, 예를 들어 10~85%(V/V), 20~85%(V/V), 30~85%(V/V), 40~85%(V/V), 50~85%(V/V), 10~80%(V/V), 20~80%(V/V), 30~80%(V/V), 40~80%(V/V), 50~80%(V/V), 10~70%(V/V), 20~70%(V/V), 30~70%(V/V), 40~70%(V/V), 50~70%(V/V), 를 들 수 있다. 본 발명의 조성물은, 소독용 알코올을 실질적으로 포함하지 않아도 된다. 소독용 알코올을 포함함으로써, 소독용 알코올에 의한 살균 활성의 증강 효과와, 올라넥시딘 글루콘산염에 의한 살균 활성의 지속 효과를 겸비하는 속건성 소독제로 할 수도 있다. 또한, 소독용 알코올에 의해 살균 활성이 증강되므로, 올라넥시딘 글루콘산염의 농도를 낮게 하는 것도 가능하다. 올라넥시딘 글루콘산염과 소독용 알코올의 농도비로는, 예를 들어 1:400~1:20, 바람직하게는 1:300~1:30, 보다 바람직하게는 1:200~1:40을 들 수 있다.
본 발명의 조성물에는, 추가로 공지된 살균제를 배합할 수 있다. 살균제로는, 예를 들어, 염화벤잘코늄, 알킬인산벤잘코늄 등의 벤잘코늄염, 염화벤제토늄, 트리클로산, 이소프로필메틸페놀, 염화세틸피리디늄, 레조르신, 트리클로로카바나이드, 클로르헥시딘 염산염, 클로르헥시딘 글루콘산염, 폴리헥사메틸렌 비구아니드, 차아염소산 나트륨, 과산화수소, 포비돈요오드, 요오드팅크 등을 들 수 있다. 이들 살균제는, 단독으로 배합할 수도 2 종류 이상을 조합하여 이용할 수도 있다.
본 발명의 조성물은, 추가로 공지된 용해 보조제를 배합할 수 있다. 용해 보조제로는, 예를 들어 비이온성 계면활성제, 이온성 계면활성제, 에틸렌 디아민, 안식향산 나트륨, 니코틴산 아미드, 시클로 덱스트린, 에탄올, 벤질 알코올, 프로필렌 글리콜 등을 들 수 있다. 이온성 계면활성제로는, 올레일디메틸아민 옥사이드, 스테아릴디메틸아민 옥사이드, 팔미틸디메틸아민 옥사이드, 미리스틸디메틸아민 옥사이드, 라우릴디메틸아민 옥사이드, 야자유 알킬디메틸아민 옥사이드 등의 알킬디메틸아민 옥사이드를 바람직하게 들 수 있고, 그 중에서도 라우릴디메틸아민 옥사이드가 바람직하다. 비이온성 계면활성제로는, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜, 폴리글리세린 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 자당 지방산 에스테르 등을 들 수 있고, 그 중에서도 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌알킬에테르가 바람직하다. 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌글리콜로는, 폴리옥시에틸렌(42)폴리옥시프로필렌(67)글리콜(Pluronic(등록상표) P-123), 폴리옥시에틸렌(54)폴리옥시프로필렌(39)글리콜(Pluronic(등록상표) P-85), 폴리옥시에틸렌(196)폴리옥시프로필렌(67)글리콜(Pluronic(등록상표) F-127), 폴리옥시에틸렌(3)폴리옥시프로필렌(17)글리콜(Pluronic(등록상표) L-31), 폴리옥시에틸렌(20)폴리옥시프로필렌(20)글리콜(Pluronic(등록상표) L-44), 폴리옥시에틸렌(120)폴리옥시프로필렌(40)글리콜(Pluronic(등록상표) F-87), 폴리옥시에틸렌(160)폴리옥시프로필렌(30)글리콜(Pluronic(등록상표) F-68)을 예시할 수 있고, 그 중에서도 폴리옥시에틸렌(20)폴리옥시프로필렌(20)글리콜(Pluronic(등록상표) L-44)이 바람직하다. 폴리옥시에틸렌알킬에테르로는, 폴리옥시에틸렌세틸에테르, 폴리옥시에틸렌올레일에테르, 폴리옥시에틸렌라우릴에테르(라우로마크로골) 등을 들 수 있지만, 특히 폴리옥시에틸렌라우릴에테르(라우로마크로골)가 바람직하다. 또한, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌알킬에테르로는, 폴리옥시에틸렌(20)폴리옥시프로필렌(4)세틸에테르, 폴리옥시에틸렌(30)폴리옥시프로필렌(6)데실테트라데실에테르, 폴리옥시에틸렌(25)폴리옥시프로필렌(25)라우릴에테르 등을 들 수 있지만, 특히 폴리옥시에틸렌(20)폴리옥시프로필렌(4)세틸에테르가 바람직하다. 용해 보조제의 농도는, 올라넥시딘 글루콘산염의 침전을 막으면서, 살균 활성을 저하시키지 않는 농도이면 되고, 통상적으로 0.1~30%(W/V)의 농도 범위에서, 올라넥시딘 글루콘산염의 농도에 따라 설정된다.
본 발명의 조성물은, 임의로 항염증제, 보습제, 에몰리언트제, 감촉 개선제, 증점제 등을 포함할 수도 있다.
항염증제로는, 예를 들어, 감초 추출물, 글리시레틴산, 글리시리진산디칼륨, 글리시레틴산스테아릴, 아세트산토코페롤, 알란토인, 및 알로에 추출물 등을 들 수 있다.
보습제로는, 예를 들어, 아미노산, 지방산 에스테르, 피롤리돈카복실산, 피롤리돈카복실산나트륨, 젖산나트륨, 히알루론산, 히알루론산나트륨, N-코코일-L-아르기닌에틸에스테르 DL-피롤리돈카복실산염, 요소, 소르비톨, 트레할로스, 1, 3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴록사머(Pluronic(등록상표) F-68 등), 및 글리세린 등을 들 수 있다.
에몰리언트제로는, 예를 들어, 미리스트산이소프로필, 팔미트산이소프로필, 스테아르산이소프로필, 올레산이소부틸, 및 말레산이소부틸 등의 지방산 에스테르를 들 수 있고, 이들 1종 단독으로 또는 2종 이상 포함할 수 있다.
감촉 개선제로는, 예를 들어, 디메틸폴리실록산, 및 환상 실리콘 등의 실리콘계 화합물을 들 수 있다.
증점제로는, 예를 들어 하이드록시에틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 소수화하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스 및 카복시메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스 유도체, (메타)아크릴산계 공중합체, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 메틸비닐에테르 무수 말레산 공중합체, 폴리아크릴아미드, 알긴산, 알긴산나트륨, 알긴산프로필렌글리콜에스테르, 젤라틴, 아라비아검, 트래거캔스검, 로커스트빈검, 구아검, 타마린드검, 잔탄검, 젤란검, 및 카라기난 등을 들 수 있다.
본 발명의 조성물은, 바람직하게는 의료 기구, 조리 기구, 간호 기구 등의 물품 표면이나, 손가락 등의 피부 외표면의 소독을 위한 용도로 이용할 수 있다. 본 발명의 조성물은, 종이, 천, 부직포, 면봉, 탈지면 등의 기재에 포함시켜 이용할 수도, 도포용 어플리케이터에 충전하여 이용할 수도, 러빙(rubbing)제나 스크럽제로 이용할 수도 있지만, 바람직하게는 본 발명의 조성물은 러빙제로 이용된다. 여기서, 러빙제란, 속건성 찰식(擦式) 제제를 의미하고, 스크럽제란, 살균·소독제와 세정 능력을 갖는 계면활성제를 혼합한 제제를 의미한다. 그리고, 본 발명의 조성물을 양손의 손가락 소독에 이용하는 경우, 1회당 사용량은 1~5 ml, 바람직하게는 1.5~4.5 ml, 보다 바람직하게는 2~4 ml, 보다 더 바람직하게는 2.5~3.5 ml로 통상적으로 이용되고, 1일 사용 회수는, 피부 독성을 감안하여 100회 이내, 바람직하게는 80회 이내, 보다 바람직하게는 60회 이내, 보다 더 바람직하게는 40회 이내를 들 수 있다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명의 기술적 범위는 이들 예시에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
1. 진균 및 비결핵성 항산균에 대한 살균력
올라넥시딘 글루콘산염 함유 조성물(pH 5, 8~10)의, 감염증을 야기하는 것이 알려져 있는 사상 진균 및 비결핵성 항산균에 대한 살균력을 Time-kill 시험에 의해 평가했다.
1-1 시험 재료 및 방법
1-1-1 시험 물질
(1) 피험물질 1
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 5
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 1.08%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 5
(2) 피험물질 2
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 8
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 1.08%(W/V)
HEPES 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 8
(3) 피험물질 3
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 9
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 4.08%(W/V)
글리신 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 9
(4) 피험물질 4
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 10
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 16.08%(W/V)
글리신 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 10
(5) 대조 물질
명칭: 기제 pH 10
조성: Pluronic L-44 1.08%(W/V)
글리신 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 10
1-1-2 배지
(1) 7H10 평판
Difco Middlebrook 7H10 Agar(제품 번호: 262710, Becton, Dickinson and Company사 제품) 19 g에, 글리세롤(제품 번호: 070-04941, 와코준야쿠코교 가부시키가이샤 제품) 5 mL 및 순수 900 mL를 가하여 교반했다. 이것을 고압 증기 멸균(121℃, 20분)했다. 멸균 후, 고압 증기 멸균기에서 꺼내, 교반하면서 50~55℃가 될 때까지 냉각한 후, BBL Middlebrook OADC Enrichment(제품 번호: 212240, Becton, Dickinson and Company사 제품) 100 mL를 가하여 교반했다. 한천이 굳어지기 전에, 샬레에 약 20 mL씩 분주하여, 고체화시켰다.
(2) SAB 평판
사부로 한천 배지 「닛스이」(제품 번호: 05701, 닛스이세이야쿠 가부시키가이샤 제품) 65 g에 순수 1000 mL를 가하여 교반했다. 이것을 고압 증기 멸균(121℃, 20분)했다. 한천이 굳어지기 전에, 샬레에 약 20 mL씩 분주하여, 고체화시켰다.
(3) SABLP 평판
사부로·포도당 LP 한천 배지 「다이고」(제품 코드: 392-01875, 니혼세이야쿠 가부시키가이샤 제품) 73 g에 순수 1000 mL를 가하여 교반했다. 이것을 고압 증기 멸균(121℃, 20분)했다. 한천이 굳어지기 전에, 샬레에 약 20 mL씩 분주하여, 고체화시켰다.
1-1-3 중화제
증류수 약 800 mL에, 폴리소르베이트 80 100 g, 티오황산나트륨 수화물 5.0 g, 인산이수소칼륨 0.4 g, Triton X-100 1 mL, 무수 인산일수소나트륨 10.1 g 및 대두 레시틴 11.7 g을 가하여 교반했다. 또한, Tamol(등록상표) NN8906 10.0 g을 가하여 용해될 때까지 가열 및 교반을 수행했다. 용해 후, 1 mol/L 수산화나트륨 용액을 가하여 pH 7.8~7.9로 조정했다. 전량이 1000 mL가 될 때까지 증류수를 가한 후, 고압 증기 멸균을 수행했다.
1-1-4 시험균
시험균으로 사상균 마이크로스포럼·캐니스(Microsporum canis) NBRC32464, 및 항산균 마이코박테리움·첼로네이(Mycobacterium chelonae) JCM6388 및 마이코박테리움·포르투이툼(Mycobacterium fortuitum) JCM6387을 이용했다. 각각의 시험균은, 7H10 평판(마이코박테리움·첼로네이 및 마이코박테리움·포르투이툼) 또는 SAB 평판(마이크로스포럼·캐니스)에서의 배양 후에 증류수에 현탁하여, McFarland No.1(마이코박테리움·첼로네이 및 마이코박테리움·포르투이툼) 또는 McFarland No.5(마이크로스포럼·캐니스)의 시험균액을 조제했다.
1-2 살균력 평가 시험
1-2-1 초기 생균수의 측정(마이코박테리움·첼로네이 및 마이코박테리움·포르투이툼)
(1) 증류수 3 mL에 시험균액 150 μL를 가하여 혼합했다.
(2) 즉시, 균 혼합액 50 μL를 중화제 4.95 mL에 가하여 혼합했다. 이것을 102배 희석액으로 했다.
(3) 102배 희석액 0.3 mL를 중화제 2.7 mL에 가하여 10배 희석했다. 추가로 동일한 조작에 의해 희석을 반복하여 10배 희석 계열(102~104배 희석액까지의 총 3 단계)을 제작했다.
(4) 102~104배 희석액을 100 μL씩 7H10 평판에 분주하여, 도말했다. (2) 내지 (4)의 공정은, 30분 이내에 수행했다.
(5) 도말 평판을 도치하여, 콜로니 계수가 가능해질 때까지 배양했다.
(6) 도말 평판에서 증식한 콜로니를 목시로 계수하고, 콜로니 수에 희석 배수를 곱하여 생균수(CFU/mL)를 산출했다. 단, 콜로니 수가 너무 많아서 콜로니간의 구별이 불가능한 도말 평판은, TNTC(too numerous to count)로 하여 계수하지 않았다.
1-2-2 시험 물질 작용 후의 생균수의 측정(마이코박테리움·첼로네이 및 마이코박테리움·포르투이툼)
(1) 시험 물질 3 mL에 시험균액 150 μL를 가하여 혼합했다. 이것을 반응액으로 하여, 반응은 실온에서 수행했다.
(2) 소정 시간 반응시킨 후, 반응액 50 μL를 추출하여, 중화제 4.95 mL에 가하여 혼합했다. 이것을 102배 희석액으로 했다.
(3) 102배 희석액 0.3 mL를 중화제 2.7 mL에 가하여 10배 희석했다. 추가로 동일한 조작에 의해 희석을 반복하여 10배 희석 계열(102~104배 희석액까지의 총 3 단계)을 제작했다.
(4) 102~104배 희석액을 100 μL씩 7H10 평판에 분주하여, 도말했다.
(5) 도말 평판을 도치하여, 콜로니 계수가 가능해질 때까지 배양했다.
(6) 도말 평판에서 증식한 콜로니를 목시로 계수하고, 콜로니 수에 희석 배수를 곱하여 생균수(CFU/mL)를 산출했다.
1-2-3 초기 생균수의 측정(마이크로스포럼·캐니스)
(1) 증류수 3 mL에 시험균액 150 μL를 가하여 혼합했다.
(2) 즉시, 균혼합액 500 μL를 중화제 4.5 mL에 가하여 혼합했다. 이것을 101배 희석액으로 했다.
(3) 101배 희석액 0.3 mL를 중화제 2.7 mL에 가하여 10배 희석했다. 추가로 동일한 조작에 의해 희석을 반복하여 10배 희석 계열(101~103배 희석액까지의 총 3 단계)을 제작했다.
(4) 101~103배 희석액을 100 μL씩 SABLP 평판에 분주하여, 도말했다. (2) 내지 (4)의 공정은, 30분 이내에 수행했다.
(5) 도말 평판을 도치하여, 콜로니 계수가 가능해질 때까지 배양했다.
(6) 도말 평판에서 증식한 콜로니를 목시로 계수하고, 콜로니 수에 희석 배수를 곱하여 생균수(CFU/mL)를 산출했다. 단, 콜로니 수가 너무 많아서 콜로니간의 구별이 불가능한 도말 평판은, TNTC로 하여 계수하지 않았다.
1-2-4 시험 물질 작용 후의 생균수의 측정(마이크로스포럼·캐니스)
(1) 시험 물질 3 mL에 시험균액 150 μL를 가하여 혼합했다. 이것을 반응액으로 하고, 반응은 실온에서 수행했다.
(2) 소정 시간 반응시킨 후, 반응액 500 μL를 추출하여, 중화제 4.5 mL에 가하여 혼합했다. 이것을 101배 희석액으로 했다.
(3) 101배 희석액 0.3 mL를 중화제 2.7 mL에 가하여 10배 희석했다. 추가로 동일한 조작에 의해 희석을 반복하여 10배 희석 계열(101~103배 희석액까지의 총 3 단계)을 제작했다.
(4) 101~103배 희석액을 100 μL씩 SABLP 평판에 분주하여, 도말했다.
(5) 도말 평판을 도치하여, 콜로니 계수가 가능해질 때까지 배양했다.
(6) 도말 평판에서 증식한 콜로니를 목시로 계수하고, 콜로니 수에 희석 배수를 곱하여 생균수(CFU/mL)를 산출했다.
1-2-5 Log10 reduction(LR)의 계산식
LR=A-B
A: 초기 생균수(상용 대수값(常用對數値)의 평균값
B: 각 시험 물질 작용 후의 생균수(상용 대수값)
마이코박테리움·첼로네이 및 마이코박테리움·포르투이툼에서는, 반응액과 중화제의 혼합 비율이 1:99이며, 도말량이 100 μL이므로, 생균수의 검출 하한값은 1000 CFU/mL(상용 대수값에서는 3)가 된다. 또한, 마이크로스포럼·캐니스에서는, 반응액과 중화제의 혼합 비율이 1:9이며, 도말량이 100 μL이므로, 생균수의 검출 하한값은 100 CFU/mL(상용 대수값에서는 2)가 된다. 콜로니가 검출되지 않았던 경우, 검출 하한값을 채용하고, LR은 부등호 「>」를 붙여 표시했다.
1-3 결과
결과를 하기 표 1~3 및 도 1~3에 나타낸다.
[표 1]
[표 2]
[표 3]
이상의 결과로부터, 모든 시험균에서, 올라넥시딘 제제 pH 5보다 올라넥시딘 제제 pH 8~10의 살균력이 강한 것이 밝혀졌다. 그리고, 올라넥시딘 제제 pH 8보다 올라넥시딘 제제 pH 10에서 살균력이 저하되었지만, 용해 보조제로 첨가한 Pluronic L-44에 의해 활성이 저해되었기 때문이라고 생각된다.
실시예 2
2. 올라넥시딘 제제의 박테리오 파지 MS2에 대한 작용
박테리오 파지 MS2는 소독제로 대한 감수성이 낮은 것이 알려져 있어, 소독제의 살노로 바이러스 작용 등의 대체 시험에 사용되고 있다. 따라서, pH를 변화시켜 조제한 올라넥시딘 제제 및 시판 중인 소독제 바이러스에 대한 살바이러스 효과를, 박테리오 파지 MS2를 이용한 시험에 의해 평가했다.
2-1 시험 재료 및 방법
2-1-1 시험 물질
(1) 피험물질 1
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 5
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 1.08%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 5
(2) 피험물질 2
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 7
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 1.08%(W/V)
HEPES 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 7
(3) 피험물질 3
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 8
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 1.08%(W/V)
HEPES 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 8
(4) 피험물질 4
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 8. 5
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 1.08%(W/V)
L-히스티딘 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 8.5
(5) 피험물질 5
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 9
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 4.08%(W/V)
글리신 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 9
(6) 피험물질 6
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 9. 5
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 10.08%(W/V)
글리신 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 9.5
(7) 피험물질 7
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 10
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 16.08%(W/V)
글리신 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 10
(8) 피험물질 8
명칭: 올라넥시딘 제제 pH 12
조성: 올라넥시딘 글루콘산염 1.5%(W/V)
Pluronic L-44 26.08%(W/V)
L-아르기닌 0.1%(W/V)
pH 조정제(수산화나트륨, 글루코노-δ-락톤) 적정량
순수 적정량
pH 12
(9) 대조 물질
명칭/약칭: 소독용 에탄올 「켄에이」/70% EtOH
제조 판매원: 켄에이세이야쿠 가부시키가이샤
조성: 에탄올(C2H6O)을 76.9~81.4%(V/V) 함유한다.
2-1-2 배지
(1) 702 액체 배지
순수 1 L에 Polypepton 10 g, Yeast extract 2 g, MgSO4·7H2O 1 g을 가하여 고압 증기 멸균(121℃, 20분)했다.
(2) 연한천 배지
순수 0.5 L에 Polypepton 5 g, Yeast extract 1 g, MgSO4·7H2O 0.5 g, 배지용 한천 3.5 g을 가하여 고압 증기 멸균(121℃, 20분)했다.
(3) 한천 평판
트립토소야 한천 배지(SCD 한천 배지) 「닛스이」64 g에 순수 1.6 L를 가하여 교반했다. 이것을 고압 증기 멸균(121℃, 20분)했다. 한천이 굳어지기 전에, 샬레에 약 20 mL씩 분주하여, 고체화시켰다.
2-1-3 중화제
증류수 약 800 mL에, 폴리소르베이트 80 100 g, 티오황산나트륨 수화물 5.0 g, 인산이수소칼륨 0.4 g, Triton X-100 1 mL, 무수 인산일수소나트륨 10.1 g 및 대두 레시틴 11.7 g을 가하여 교반했다. 또, Tamol(등록상표) NN8906 10.0 g을 가하여 용해될 때까지 가열 및 교반을 수행했다. 용해 후, 1 mol/L 수산화나트륨 용액을 가하여 pH 7.8~7.9로 조정했다. 전량이 1000 mL가 될 때까지 증류수를 가한 후, 고압 증기 멸균을 수행했다.
2-1-4 박테리오 파지 및 숙주
(1) 박테리오 파지
명칭/약칭: Escherichia coli phage MS2/MS2 파지
입수처: 도쿠리쯔교세이호우징세이힝효우카기쥬츠키반키코우 바이오테크놀로지 센터(National Institute of Technology and Evaluation Biotechnology Center;NBRC)
NBRC 번호: 102619
(2) 숙주
명칭/약칭: Escherichia coli (Migula 1895) Castellani and Chalmers 1919/E. coli NBRC13965
입수처: NBRC
NBRC 번호: 13965
2-2 시험 방법
2-2-1 숙주
카지톤(casitone) 배지에 보존한 E.coli NBRC13965를 702 액체 배지 5 mL×4개에 접종 하고, 35℃에서 하룻밤 진탕 배양했다. 이것을 702 액체 배지 180 mL에 가하여 추가로, 3시간, 진탕 배양한 것을 숙주 배양액으로 했다.
2-2-2 파지액
파지액은, 상법에 따라, 약 6×1012 PFU/mL로 조제한 것을 사용했다.
2-2-3 살바이러스(파지) 시험
(1) 시험 물질 475 μL에 파지액 25 μL를 가했다. 또한, 대조 작용액으로 증류수 475 μL에 파지액 25 μL 가했다.
(2) 실온에서 30초, 1분 및 3분간 작용시켰다. 대조 작용액의 작용 시간은 약 3분만으로 했다.
(3) 작용 후, 작용액 50 μL를 채취하고, 중화제 450 μL에 가하여 교반했다. 이것을 101배 희석액으로 했다.
(4) 각 101배 희석액 20 μL를 중화제 180 μL에 가하여 교반했다. 이것을 102배 희석액으로 했다. 동일한 희석 조작을 반복하여, 109배까지의 10배 단계 희석액을 제작했다.
(5) 102~109배 단계 희석액 100 μL에, 숙주 배양액 0.2 mL를 가하여 교반했다. 약 47℃에서 보존한 연한천 배지 약 5 mL를 가하여 침착하게 교반 후, 한천 평판 상에 쌓아올렸다.
(6) 연한천 배지가 고체화된 후, 35℃에서 하룻밤 배양했다.
(7) 발생한 플라크 수를 계수했다.
(8) 가중평균법[하기 (식 1)]에 의해 역가(log10 PFU/mL)를 산출했다. 또한, Log10 reduction을 산출했다.
2-2-5 데이터 해석
(1) 파지 역가
파지 역가는, 다음 식(식 1)으로 계산했다.
PFU/t=(Σc1+c2+...+cn)÷((n1+n2+υ2+...+nn×υn)×d) ................(식 1)
t: 평판에 가한 희석액량(본 시험에서는 0.1 mL)
c1: 계수 가능하고 가장 작은 희석 배수의 모두 평판의 플라크 수의 합계
c2: c1의 다음의 희석 배수의 모두 평판의 플라크 수의 합계
cn: 가장 큰 희석 배수의 모두 평판의 플라크 수의 합계
n1: c1의 평판 수
n2: c2의 평판 수
υ2: c1과 c2의 희석 배수의 비(본 시험에서는 10-1)
nn: cn의 평판 수
υn: c1과 cn의 희석 배수의 비
d: c1의 희석 배수
역가(PFU/mL)를 상용 대수 변환(log10 PFU/mL)하여, 반올림에 의해 소수점 첫째자리까지 표시했다. 역가(PFU/mL)가 1 이하인 경우, 그 상용 대수값를 0으로 했다.
(2) Log10 reduction(LR)
살바이러스(파지) 작용은, Log10 reduction값에 의해 평가했다.
LR=A-B
A: 대조 작용액 파지 역가(상용 대수값)의 평균값
B: 각 시험 물질 작용 후의 파지 역가(상용 대수값)
LR은, 반올림에 의해 소수점 첫째자리까지 표시했다. 그리고, 시험 물질 작용 후의 역가(상용 대수값)가 0인 경우, 파지 역가의 검출 하한값이 3-log10인 점에서, LR을 「>(A-3)」으로 나타냈다.
2-3 결과
시험 물질의 살바이러스 작용의 평가 결과를 표 4 및 도 4에 나타냈다.
[표 4]
pH 5의 올라넥시딘 제제는, 거의 살바이러스 작용을 나타내지 않고, pH 7의 올라넥시딘제의 살바이러스 작용은 대조 물질로 이용한 70% 에탄올과 동등했는데 반해, pH를 염기성에 변화시킨 올라넥시딘 제제에서는 pH가 높을수록 LR이 큰 경향이 보였다. pH 8 이상의 제제에서는, 60초에서의 LR이 3이상, pH 8.5 이상의 제제에서는, 30초에서의 LR이 3 이상이 되어, 이상적인 소독제의 살바이러스 작용의 요건인 LR 3 이상을 만족시켰다. 따라서, 올라넥시딘 글루콘산염의 염기성 용액은 실용성이 있는 살바이러스 활성을 갖고, pH가 높을수록, 그 살바이러스 활성은 강해지는 것이 밝혀졌다.
실시예 3
3. 에탄올 함유 염기성 올라넥시딘 제제의 박테리오 파지 MS2에 대한 작용
본 실시예에서는, 염기성 올라넥시딘 제제에 대한, 소독용 알코올에 의한 속건성 부여 효과 및 살균 활성의 증강 효과를 확인하는 것을 목적으로, pH 9.5의 염기성 올라넥시딘 제제에 에탄올을 첨가하고, 박테리오 파지 MS2를 이용한 시험에 의해 살바이러스 효과를 평가했다.
3-1 시험 물질
아래의 표 5의 조성에 의해, 피험물질 1~3, 비교예 1, 및 기제(대조 물질)를 조제했다.
[표 5]
또한, 아래의 소독용 에탄올을, 대조로 이용했다.
명칭: 소독용 에탄올 「켄에이」
제조 판매원: 켄에이세이야쿠 가부시키가이샤
조성: 에탄올(C2H6O)을 76.9~81.4%(V/V) 함유한다.
3-2 시험 방법
살바이러스 효과는, 상기 실시예 2의 2-1 및 2-2에 기재된 박테리오 파지 MS2를 이용한 방법에 의해 평가했다. 그리고, 파지액은, 약 4×1012 PFU/mL로 조제한 것을 사용했다.
3-3 결과
시험 물질의 살바이러스 작용의 평가 결과를 표 6 및 도 5에 나타냈다.
[표 6]
상기 결과로부터, 에탄올을 함유하는 염기성 올라넥시딘 제제에 있어서도, 올라넥시딘 글루콘산염의 농도 의존적으로 살바이러스 작용이 상승하는 것이 나타나, 속건성 부여를 위해 에탄올을 첨가해도, 올라넥시딘 글루콘산염에 의한 살바이러스 작용을 방해할 수 없는 것이 나타났다. 또한, 에탄올을 함유하는 염기성 올라넥시딘 제제는, 에탄올을 함유하지 않는 염기성 올라넥시딘 제제와 비교하여 살바이러스 작용이 높기 때문에, 올라넥시딘 글루콘산염농도를 저하시켰을 경우에도, 실용성이 있는 살바이러스 작용을 나타내는 것이 나타났다. 또한, pH가 7 미만인 에탄올 함유 올라넥시딘 제제(비교예 1)에서는 실용성이 있는 살바이러스 활성(LR 3 이상)을 볼 수 없었던 점에서, 에탄올을 함유하는 염기성 올라넥시딘 제제에서는, 올라넥시딘 글루콘산염, 에탄올, 염기성이 상승적으로 살바이러스 작용에 기여하고 있는 것이 시사되었다. 그리고, 본 실시예에 있어서, Pluronic F-68은 피부 트러블 저감이나 보습 등을 위해 첨가한 것으로, Pluronic F-68을 0.5g/100 mL로 했을 경우에도 효력에 차이는 볼 수 없었다.
산업상 이용 가능성
본 발명의 조성물을 이용함으로써, 개선된 살균 스펙트럼을 갖는 한편 논엔벨로프 바이러스에 대해서도 효력을 갖는 올라넥시딘 글루콘산염 함유 소독제를 제작할 수 있으므로, 의료나 간호, 음식품 산업 등의 분야에서의 산업상 유용성은 높다.

Claims (8)

  1. 올라넥시딘 글루콘산염을 함유하고, 염기성인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    pH 8~11의 범위 내인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    올라넥시딘 글루콘산염의 농도가, 0.01~20%(W/V)인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  4. 제 2항에 있어서,
    올라넥시딘 글루콘산염의 농도가, 0.01~20%(W/V)인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서,
    물 및/또는 소독용 알코올을 포함하는 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  6. 제 5항에 있어서,
    소독용 알코올 농도가, 10~85%(V/V)인 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  7. 제 5항에 있어서,
    소독용 알코올이, 에탄올 및 이소프로필알코올로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 소독용 조성물.
  8. 제 1항에 따른 소독용 조성물을 포함하는 러빙제.
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