JP6763687B2 - 芽胞形成菌の芽胞発芽増殖抑制剤及び芽胞発芽増殖抑制方法 - Google Patents
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Description
また、本発明の芽胞発芽増殖抑制剤は、浸漬、塗布、噴霧あるいは類似の手段による散布、または布、不織布等に含浸させて拭き取る等の方法で対象物に接触させて使用することができる。または、対象物を芽胞発芽増殖抑制剤に浸漬した状態で保存してもよい。対象物に接触させる際の液体組成物におけるメチルグリオキサールの濃度は、100ppm以上が好ましく、2500ppm以上がより好ましく、5000ppm以上がさらに好ましく、また、メチルグリオキサールは黄色または黄褐色を呈し、特有の臭いを有するため、それらが対象物に影響しないよう、500000ppm以下で使用するのが好ましい。液体組成物におけるメチルグリオキサールは、例えば、250000ppm以下、100000ppm以下、または50000ppm以下で使用することができる。
[試験例]
最小殺菌濃度試験
(試験方法)
メチルグリオキサール(SIGMA ALDRICH社製試薬)およびプロタミン(株式会社ウエノフードテクノ製しらこたん白)について、最小殺菌濃度(以下、「MBC」とも称する)の測定を行った。メチルグリオキサールにおいては薬剤濃度4重量%、プロタミンにおいては薬剤濃度2.36重量%の薬液を調製し、マイクロプレート(96ウェル)の端に調製した薬剤を180μL/ウェル入れ、その隣以降に滅菌水を90μL/ウェルずつ入れ、薬剤の入ったウェルから90μLを抜き取り隣のウェルに入れ1/2になるように希釈した。この操作をそれぞれ隣のウェルへ順に行い、段階的な希釈を行った。指定濃度の2.25倍濃度に調整したミューラーヒントン培地(ベクトン・ディッキンソン社製)を滅菌後、マイクロプレート(96ウェル)に80μl/ウェルずつ分注した。次に、下記供試菌を105cfu/mLとなるように滅菌水で希釈した後、上記で作製した培地注入済みのマイクロプレート(96ウェル)に10μl/ウェルずつ接種した。これを37℃の恒温器内で24時間培養し、目視にて菌の生育の有無を確認後、菌の生育が認められなかったウェルの培養液全量(180μL)を10mLのSCDLP液体培地(日本製薬株式会社製)に接種した。これを37℃の恒温器内で4日間培養した後、菌の発育が肉眼で認められない最小薬剤濃度をMBCとした。
供試菌:Bacillus cereus NBRC15305(芽胞)
メチルグリオキサールは、芽胞形成菌に対して抗菌効果を示し、MBCは5000ppmであった。また、芽胞形成菌に対して効果が知られているプロタミンについても効果が確認された。結果を表1に示す。
抗芽胞試験
(試験方法)
メチルグリオキサール(SIGMA ALDRICH社製試薬)およびプロタミン(株式会社ウエノフードテクノ製しらこたん白)を、滅菌水で終濃度が100、500、1000、2500、および5000ppm(プロタミンは5000ppmのみ)になるように調製し、各試験液900μlに、1.0×106cfu/mlの下記供試菌液100μlを添加した。37℃で24時間静置培養後、この培養液を100μl取り、薬剤影響を無視できる濃度までSCDLP液体培地(和光純薬工業株式会社製)にて希釈後、SCDLP寒天培地(和光純薬工業株式会社製)に100μlずつ塗沫し、37℃で一晩培養した後、コロニー数のカウントを行い生菌数の測定を行った。SCDLP寒天培地での生菌数が、コントロールよりも10分の1以下に抑えられた場合に、芽胞形成菌の芽胞に対する発芽増殖抑制効果があると判断した。なお、本試験において、作用時間中(培地成分等の発芽誘導物質を含まない試験液での培養中)に芽胞が発芽しないことは事前に確認を行っている。
供試菌:Bacillus cereus NBRC15305(芽胞)
メチルグリオキサールを添加した試験区は、コントロールに比べて生菌数が抑えられており、2500ppm以上の濃度においては検出限界以下に抑えられた。一方、プロタミンを添加した試験区は、MBC以上の量を添加したのにも関わらず、約3.0×105cfu/mlの生菌が確認された。メチルグリオキサールは芽胞形成菌の芽胞に対し、強い発芽増殖抑制効果を有することが示された。結果を表2に示す。
(試験方法)
メチルグリオキサール(SIGMA ALDRICH社製試薬)を、pH2.5、pH7.0およびpH9.5の100mMリン酸緩衝液を用いて終濃度が5000ppmになるように調製した以外は、実施例1〜5と同様の方法で芽胞形成菌に対する芽胞発芽増殖効果を調べた。
メチルグリオキサールは、酸性域(pH2.5)、中性域(pH7.0)およびアルカリ性域(pH9.5)のいずれにおいても芽胞形成菌の芽胞発芽増殖を抑制したことから、幅広いpH範囲で使用可能な薬剤であることが示された。結果を表3に示す。
Claims (6)
- メチルグリオキサールを有効成分とする、バチルス属である芽胞形成菌の芽胞に対する芽胞発芽増殖抑制剤であって、芽胞発芽増殖抑制剤を対象物に接触させる際のメチルグリオキサールの濃度が100ppm以上である、芽胞発芽増殖抑制剤。
- 芽胞発芽増殖抑制剤を対象物に接触させる際のメチルグリオキサールの濃度が2500ppm以上である、請求項1に記載の芽胞発芽増殖抑制剤。
- 工業用品、繊維製品、または硬質表面を有する物品に使用するための、請求項1または2に記載の芽胞発芽増殖抑制剤。
- 食品、化粧品、医薬部外品、または医薬品に使用するための、請求項1または2に記載の芽胞発芽増殖抑制剤。
- 請求項1に記載の芽胞発芽増殖抑制剤を対象物と接触させることを特徴とする、バチルス属である芽胞形成菌の芽胞に対する芽胞発芽増殖抑制方法であって、芽胞発芽増殖抑制剤を対象物に接触させる際のメチルグリオキサールの濃度が100ppm以上である芽胞発芽増殖抑制方法。
- 請求項2に記載の芽胞発芽増殖抑制剤を対象物と接触させることを特徴とする、バチルス属である芽胞形成菌の芽胞に対する芽胞発芽増殖抑制方法であって、芽胞発芽増殖抑制剤を対象物に接触させる際のメチルグリオキサールの濃度が2500ppm以上である芽胞発芽増殖抑制方法。
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