JP2007525982A5 - - Google Patents
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Claims (28)
- 原核生物ＤＮＡの分離または濃縮のうち少なくともいずれか一方を行う方法であって、
（ａ）溶液中に存在する少なくとも１つの原核生物ＤＮＡを、原核生物ＤＮＡに特異的に結合し、野生型のＣＧＰＢタンパク質と２５％〜３５％の相同性を有するタンパク質と接触させることによって、タンパク質‐ＤＮＡ複合体を形成する工程と、
（ｂ）前記複合体を分離する工程と
からなる方法。 - 前記タンパク質が配列番号２のアミノ酸配列を含んでなる、請求項１に記載の方法。
- 前記タンパク質が非メチル化ＣｐＧモチーフを認識可能であることを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
- 前記分離工程の後に複合体のタンパク質からＤＮＡを分離する工程が続くことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記タンパク質が担体に結合していることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記タンパク質が担体に直接結合していることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
- 前記タンパク質が同タンパク質に対する抗体を介して担体に結合していることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
- 前記タンパク質がスペーサーを介して担体に結合していることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
- スペーサーとしてジアミノヘキサン残基が使用されることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
- 担体が、マトリクス、微小粒子、またはメンブレンとして提供される、請求項５〜８のいずれか１項に記載の方法。
- マトリクスとしてセファロースが用いられる、請求項１０に記載の方法。
- 分離工程が前記タンパク質に対する抗体または抗血清を用いて実施される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
- 分離が電気泳動によって実施される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記タンパク質が非メチル化ＣｐＧモチーフに対する抗体または抗血清である、請求項６〜１３のいずれか１項に記載の方法。
- 溶液が真核生物ＤＮＡおよび原核生物ＤＮＡの混合物を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
- 原核生物ＤＮＡは細菌ＤＮＡである、請求項１５に記載の方法。
- 溶液が体液または体液に由来する溶液であり、特に全血、血清、血漿、全血からの細胞調製物、尿、髄液、胸膜液、心嚢液、腹膜液、滑液ならびに気管支肺洗浄物である、請求項１５または１６に記載の方法。
- 分離工程が前記ＤＮＡ‐タンパク質複合体をろ過するフィルタを用いて実施される、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
- タンパク質がフィルタのマトリクスに固定化されている、請求項１８に記載の方法。
- 環境技術、水管理および廃水管理ならびに空調技術において使用するための請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
- 工程（ｂ）の後で工程（ｃ）において原核生物ＤＮＡが増幅される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
- （ａ）タンパク質‐ＤＮＡ複合体から原核生物ＤＮＡを単離する工程と、
（ｂ）該二本鎖ＤＮＡを変性させる工程と、
（ｃ）個々のＤＮＡ鎖を相補的プライマーとハイブリダイズさせる工程と、
（ｄ）ポリメラーゼ反応により二本鎖の断片を生成させる工程と、
（ｅ）上記工程を所望の程度に増幅されるまで繰り返す工程と
からなる請求項２１に記載の方法。 - （ａ）単離した原核生物ＤＮＡ配列をベクターにクローニングする工程と、
（ｂ）上記ベクターで適当な宿主細胞を形質転換する工程と、
（ｃ）上記形質転換細胞を培養する工程と、
（ｄ）上記細胞からベクターを単離する工程と、
（ｅ）ＤＮＡを単離する工程と
からなる請求項２２に記載の方法。 - 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法を用いて原核生物ＤＮＡの分離または濃縮のうち少なくともいずれか一方を行うためのキット。
- 請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法を用いて、１組または数組の特異的プライマーを使用して原核生物ＤＮＡを検出するための試験キット。
- 非メチル化状態のゲノムＤＮＡとメチル化状態のゲノムＤＮＡとの混合物から非メチル化状態のゲノムＤＮＡの分離または濃縮のうち少なくともいずれか一方を行う方法であって、
（ａ）溶液中に存在する少なくとも一つの非メチル化状態のゲノムＤＮＡを、該非メチル化状態のゲノムＤＮＡと特異的に結合し、野生型ＣＰＧＢタンパク質と２５％〜３５％の相同性を有するタンパク質と接触させることによって、タンパク質−ＤＮＡ複合体を形成する工程と、
（ｂ）前記複合体を分離する工程と
からなる方法。 - 非メチル化状態のＤＮＡとメチル化状態のＤＮＡとの混合物から非メチル化状態のＤＮＡの分離または濃縮のうち少なくともいずれか一方を行う方法であって、
（ａ）溶液中に存在する少なくとも一つの非メチル化状態のＤＮＡを、該非メチル化状態のＤＮＡと特異的に結合し、野生型ＣＰＧＢタンパク質と２５％〜３５％の相同性を有するタンパク質と接触させることによって、タンパク質−ＤＮＡ複合体を形成する工程と、
（ｂ）前記複合体を分離する工程と
からなる方法。 - 特定のメチル化パターンを有する疾患、とくにがんを診断するための請求項２６または請求項２７に記載の方法。
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