JP2007143461A - テアフラビン類の合成方法 - Google Patents
テアフラビン類の合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007143461A JP2007143461A JP2005341473A JP2005341473A JP2007143461A JP 2007143461 A JP2007143461 A JP 2007143461A JP 2005341473 A JP2005341473 A JP 2005341473A JP 2005341473 A JP2005341473 A JP 2005341473A JP 2007143461 A JP2007143461 A JP 2007143461A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- theaflavins
- cell culture
- plant cell
- reaction
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000014620 theaflavin Nutrition 0.000 title claims abstract description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 68
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 59
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 39
- 235000012734 epicatechin Nutrition 0.000 claims abstract description 39
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 35
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 claims abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N epi-Gallocatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-IUODEOHRSA-N 0.000 abstract description 40
- IPMYMEWFZKHGAX-UHFFFAOYSA-N Isotheaflavin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(C1=C2)=CC(O)=C(O)C1=C(O)C(=O)C=C2C1C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IPMYMEWFZKHGAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 34
- UXRMWRBWCAGDQB-UHFFFAOYSA-N Theaflavin Natural products C1=CC(C2C(CC3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C(O)C(=O)C2=C1C(C1OC3=CC(O)=CC(O)=C3CC1O)=CC(O)=C2O UXRMWRBWCAGDQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 34
- IPMYMEWFZKHGAX-ZKSIBHASSA-N theaflavin Chemical compound C1=C2C([C@H]3OC4=CC(O)=CC(O)=C4C[C@H]3O)=CC(O)=C(O)C2=C(O)C(=O)C=C1[C@@H]1[C@H](O)CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IPMYMEWFZKHGAX-ZKSIBHASSA-N 0.000 abstract description 34
- 229940026509 theaflavin Drugs 0.000 abstract description 34
- PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N (+)-epicatechin Natural products C1([C@@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-ZFWWWQNUSA-N 0.000 abstract description 26
- PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N (-)-epicatechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-UKRRQHHQSA-N 0.000 abstract description 26
- LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N epicatechin Natural products Cc1cc(O)cc2OC(C(O)Cc12)c1ccc(O)c(O)c1 LPTRNLNOHUVQMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 26
- XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N L-Epigallocatechin Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XMOCLSLCDHWDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 20
- DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N epigallocatechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3cc(O)c(O)c(O)c3 DZYNKLUGCOSVKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 20
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 abstract 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 39
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 26
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- ZEASWHWETFMWCV-ISBUVJFSSA-N Theaflavin 3,3'-digallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C2=CC(=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=1)[C@@H]1[C@@H](CC2=C(O)C=C(O)C=C2O1)OC(=O)C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZEASWHWETFMWCV-ISBUVJFSSA-N 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- GPLOTACQBREROW-UHFFFAOYSA-N Phlegmanol A-acetat Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(=CC1=2)C=C(O)C(=O)C1=C(O)C(O)=CC=2C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 GPLOTACQBREROW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KMJPKUVSXFVQGZ-UHFFFAOYSA-N TF2B Natural products OC1CC2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C(C1=C2)=CC(O)=C(O)C1=C(O)C(=O)C=C2C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KMJPKUVSXFVQGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 description 9
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 8
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- ZEASWHWETFMWCV-UHFFFAOYSA-N 7-O-(2-O-Acetyl-6-O-Methyl-beta-D-glucuronoside)-4',5,7-Trihydroxyflavone Natural products C=1C(O)=C(O)C2=C(O)C(=O)C=C(C3C(CC4=C(O)C=C(O)C=C4O3)OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C=C2C=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZEASWHWETFMWCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 7
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 7
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 7
- KMJPKUVSXFVQGZ-WQLSNUALSA-N [(2r,3r)-5,7-dihydroxy-2-[3,4,5-trihydroxy-6-oxo-1-[(2r,3r)-3,5,7-trihydroxy-3,4-dihydro-2h-chromen-2-yl]benzo[7]annulen-8-yl]-3,4-dihydro-2h-chromen-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(O)C=C2O[C@@H]1C1=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=C(C2=C1)[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@H]1O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KMJPKUVSXFVQGZ-WQLSNUALSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- YLQIFALAJQXJLU-UHFFFAOYSA-N theaflavin 3,3'-di-O-gallate Natural products OC1=C(C=Cc2c(cc(O)c(O)c2C1=O)C3Oc4cc(O)cc(O)c4CC3OC(=O)c5cc(O)c(O)c(O)c5)C6Oc7cc(O)cc(O)c7CC6OC(=O)c8cc(O)c(O)c(O)c8 YLQIFALAJQXJLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LYDDTLMHZWWJST-UHFFFAOYSA-N theaflavin 3-O-gallate Natural products OC1Cc2c(O)cc(O)cc2OC1c3cc(O)c(O)c4C(=O)C(=C(C=Cc34)C5Oc6cc(O)cc(O)c6CC5OC(=O)c7cc(O)c(O)c(O)c7)O LYDDTLMHZWWJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- LSHVYAFMTMFKBA-TZIWHRDSSA-N (-)-epicatechin-3-O-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=CC=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-TZIWHRDSSA-N 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N ECG Natural products C=1C=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LSHVYAFMTMFKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 5
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 5
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 4
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 4
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 4
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- VFSWRBJYBQXUTE-UHFFFAOYSA-N epi-Gallocatechin 3-O-gallate Natural products Oc1ccc2C(=O)C(OC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3)C(Oc2c1)c4cc(O)c(O)c(O)c4 VFSWRBJYBQXUTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 4
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GPLOTACQBREROW-KLRQSTNJSA-N Theaflavin 3'-O-gallate Natural products O=C(O[C@@H]1[C@@H](c2c3c(c(O)c(O)c2)C(=O)C(O)=CC([C@@H]2[C@H](O)Cc4c(O)cc(O)cc4O2)=C3)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1)c1cc(O)c(O)c(O)c1 GPLOTACQBREROW-KLRQSTNJSA-N 0.000 description 3
- GPLOTACQBREROW-WQLSNUALSA-N Theaflavin-3-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(O)C=C2O[C@@H]1C=1C2=CC(=CC(=O)C(O)=C2C(O)=C(O)C=1)[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C[C@H]1O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 GPLOTACQBREROW-WQLSNUALSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229940094952 green tea extract Drugs 0.000 description 3
- 235000020688 green tea extract Nutrition 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- -1 potassium ferricyanide Chemical compound 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- XITMOAPLXFZPNE-UHFFFAOYSA-N theaflavin 3'-O-gallate Natural products OC1Cc2c(O)cc(O)cc2OC1C3=C(O)C(=O)c4c(O)c(O)cc(C5Oc6cc(O)cc(O)c6CC5OC(=O)c7cc(O)c(O)c(O)c7)c4C=C3 XITMOAPLXFZPNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 2
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 description 2
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L calcium;(2s,3s,4s,5s,6r)-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxy-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxylato-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Ca+2].O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H](C([O-])=O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)[C@H](C(O)=O)O1 OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 2
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001829 Catharanthus roseus Species 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229930183912 Cytidylic acid Natural products 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006845 Michael addition reaction Methods 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000104677 Peltiphyllum peltatum Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005733 Raphanus sativus var niger Nutrition 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 240000001970 Raphanus sativus var. sativus Species 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 241000592344 Spermatophyta Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000195452 Wasabia japonica Species 0.000 description 1
- 235000000760 Wasabia japonica Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZNOZWUKQPJXOIG-XSBHQQIPSA-L [(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[[(1r,3s,4r,5r,8s)-3,4-dihydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]oxy]-4-[[(1r,3r,4r,5r,8s)-8-[(2s,3r,4r,5r,6r)-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-sulfonatooxyoxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl]oxy]-5-hydroxy-2-( Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H]2OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H]4OC[C@H]3O[C@H](O)[C@@H]4O)[C@@H]1O)OS([O-])(=O)=O)[C@@H]2O ZNOZWUKQPJXOIG-XSBHQQIPSA-L 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N azanium;azane;2,3,4-trihydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N cytidine 5'-monophosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- IERHLVCPSMICTF-UHFFFAOYSA-N cytidine monophosphate Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N dTMP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 GYOZYWVXFNDGLU-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N guanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 239000004226 guanylic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013928 guanylic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- QOSATHPSBFQAML-UHFFFAOYSA-N hydrogen peroxide;hydrate Chemical compound O.OO QOSATHPSBFQAML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 description 1
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000001054 red pigment Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 description 1
- CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N strontium atom Chemical compound [Sr] CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940092665 tea leaf extract Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Abstract
【解決手段】エピカテキン類とエピガロカテキン類とを反応させてテアフラビン類を合成する方法において、前記反応を、ペルオキシダーゼ活性を有する植物細胞培養物(細胞及び/または培養液を含む)、好ましくは茶培養細胞の培養物であって、より好ましくは0.5unit/mL以上のペルオキシダーゼ活性を有するものと、必要に応じて過酸化水素との存在下に行う。
【選択図】図3
Description
テアフラビン(Theaflavin)類は、もともと紅茶の赤色色素として知られた化合物であるが、近年あらたに、抗酸化作用、血糖降下作用、抗菌作用などさまざまな生理作用をも有することが知られるようになり、天然着色料としてだけではなく、生理活性物質としての有用性も注目され、その研究の展開が期待されている。
テアフラビン類は、紅茶の製造工程中で茶葉中の酵素により生成されることが知られており、紅茶からの抽出操作によって取得するのが一般的であった。しかし、紅茶中の含有量は極めて少なく、例えば紅茶中には全量でも約1重量%しか含まれていない。よって、茶葉からの抽出のみで十分に利用できるほどの量を得ることは容易ではなかった。
近年、テアフラビン類を生合成する方法が知られるようになっている。その生合成経路としては、エピカテキン(EC)とエピガロカテキン(EGC)とからのテアフラビン(TF)の生合成経路を例示すると、以下の化学反応式(I)及び(II)に示す通りである。
非特許文献1には、触媒としてフェリシアン化カリウム(Potassium ferricyanide)を用いたテアフラビンの合成が報告されている。
非特許文献2には、茶生葉から抽出した酵素試料(やぶきた若葉の水不溶画分)によるエピカテキンとエピガロカテキンの酵素酸化に関する研究が報告されている。
非特許文献4には、エピカテキンとエピガロカテキンとから茶葉抽出物又はバナナ果実等の各種果実ホモジネート体を用いてテアフラビン類を合成したことが報告されている。
例えば、非特許文献1に記載されたフェリシアン化カリウムを用いる方法では、エピカテキン20gとエピガロカテキン10gとからテアフラビン1.6gを得ており、収率は5%程度である。
(1)エピカテキン類とエピガロカテキン類とを反応させてテアフラビン類を合成する方法において、前記反応を、ペルオキシダーゼ活性を有する植物細胞培養物の存在下に行うことを特徴とする、テアフラビン類の合成方法。
(2)前記植物細胞培養物が、植物培養細胞を含むことを特徴とする、(1)記載のテアフラビン類の合成方法。
(4)前記植物細胞培養物が、植物細胞培養液を含むことを特徴とする、(1)〜(3)のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
(6)前記テアフラビン類が、下記化学式a〜dで表される化合物群から選択される、(1)〜(5)のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
(8)前記植物細胞培養物が固定化されていることを特徴とする、(1)〜(7)のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
(1)本発明で用いる植物細胞培養物は、植物培養細胞を継体して用いるため、いつでも供給することができて機動性に優れている。しかも、少量の培養物で合成が可能なため、市販の酵素を加える方法に比べて極めて安価にテアフラビン類を製造することができ、且つ抽出溶媒の使用量を少量に抑えることもできる。
(2)原料を溶解した緩衝液中に植物細胞培養物と必要に応じて過酸化水素を添加するだけであるから、操作が容易である。
(4)エピカテキン類とエピガロカテキン類とからのテアフラビン類への転換率に優れ、従来技術に比べて格段に収率が高い。
(5)副生物の生成が少なく、ほとんどテアフラビン類しか生成しないため、反応液を溶媒抽出した場合、高純度で目的物を得ることができる。
(1)テアフラビン類
本発明の方法で得られるテアフラビン類は、下記一般式(III)で表されるベンゾトロポロン環を有する化合物群であり、具体的には上記化学式a〜dで表したTheaflavin(TF)、Theaflavin 3-O-gallate(TF3−G)、Theaflavin 3'-O-gallate(TF3’−G)、及びTheaflavin 3,3'-di-O-gallate(TFDG)を主な成分とする。なお、式(III)中、R1、R2は水素原子又はガロイル基を表す。
本発明のテアフラビン類の合成は、エピカテキン類とエピガロカテキン類とを反応させることによって行われる。原料のエピカテキン類としては、エピカテキン(EC)、及びエピカテキン−3−O−ガレート(Epicatechin-3-O-gallate;ECG)が挙げられる。エピガロカテキン類としては、エピガロカテキン(EGC)、及びエピガロカテキン−3−O−ガレート(Epigallocatechin-3-O-gallate;EGCG)が挙げられる。
本発明の合成方法は、上記合成反応を、ペルオキシダーゼ活性を有する植物細胞培養物の存在下に行うことを特徴とする。ここでいう植物細胞培養物は、種植物成体から人工的に誘導される不均一な未分化増殖性細胞塊(カルス)を液体培養系に移し、安定に且つ迅速に増殖する懸濁培養細胞の培養物(細胞及び/又は培養液)としたものである。
本発明で用いる植物細胞培養物は、植物培養細胞を継体して用いるため、反応系にいつでも供給することができて機動性に優れており、しかも安価であるという利点を有する。
一般に、植物細胞には、ペルオキシダーゼが含まれており、ペルオキシダーゼ活性を有する植物細胞であればいずれも本発明の合成方法に使用することができるが、本発明で用いる植物細胞培養物において好ましい植物としては、タバコ(N. tabacum)、にんじん(D. carota)、日日草(C. roseus)、茶(C. sinensis)、ポドフィルム(P. peltatum)などが挙げられる。その他に、ダイコン、キュウリ、ナス、ワサビ、大豆などを用いることもできる。
これらのうち、特にペルオキシダーゼ活性が高く本発明の方法に適しているのは茶(C. sinensis)由来の細胞である。
本発明で用いられる植物細胞培養物は、上記植物細胞の生組織を含む切片を用いて、従来から知られる一般的なカルス作成方法に基づいてカルスを誘導し、それを培地に移植して培養することにより、調製される。本発明の細胞培養物としては、固体培地でカルスを培養して得られる細胞培養物、及び液体培地を用いて得られる懸濁培養細胞の培養物のいずれも使用可能である。
さらに、必要に応じて寒天などを添加して構成したものを用いることもできる。
本発明では、培養細胞を固定化して用いるもできる。固定化培養細胞の培養物は、一般的な試薬と同様に適宜使用量を調整して反応系に添加し、且つ簡便な操作で回収し、再利用することができるという利点がある。また、固定化培養細胞の培養物を用いると、一般的には反応が遅くなる傾向にあるが、再利用するたびに酵素活性が向上し、転換率も上昇するため、最終的には収率及び選択率が向上し、純度の高いテアフラビン類が得られる。
本発明で用いる植物細胞培養物のペルオキシダーゼ活性の強さに特に制限はないが、好ましくは0.5unit/mL以上、より好ましくは6〜20unit/mLである。ペルオキシダーゼ活性が低いと反応が進行せず、高いとテアフラビンの収率が低くなり副生成物の収率が高くなる場合がある。
本発明で用いる方法は、ペルオキシダーゼによる酸化反応であるから、反応系に過酸化水素(H2O2)を同時に存在させるのが好ましい。ただし、必ずしも過酸化水素を存在させなくてもよい場合もある。植物細胞のなかには、過酸化水素を自ら産生しているものもあるため、本発明の培養細胞としてそのような植物細胞を用いる場合は、過酸化水素を添加しなくてもテアフラビン類の合成が可能となる。
(i)溶媒
本発明では、原料のエピカテキン類とエピガロカテキン類とを、アセトンと緩衝液の混液中において、好ましくはpH5.4〜7.8程度に保持した状態で、植物細胞培養物(細胞及び/または培養液)と混合し、必要に応じて過酸化水素を加えて反応させる。
本発明の方法によれば、原料を溶解した緩衝液中に植物細胞培養物と必要に応じて過酸化水素を添加するだけであり、操作が簡便且つ容易であるという利点を有する。
緩衝液としては、通常の合成反応に用いられるものであれば制限はなく、例えばリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等が挙げられる。緩衝液の濃度は0.1M〜1/15M程度である。
また、アセトンについては、その代わりにエタノール等を用いることもできる。
本発明の反応系における植物細胞培養液の濃度は特に限定されないが、濃度が高すぎるとペルオキシダーゼ活性が強すぎて、テアフラビン類が十分な収率で得られない場合がある。その場合、テアフラビン類の代わりにTheasinesinn(テアシネシン;構造不明)等の二量体が得られるのではないかと推測される。
またこの場合、反応系中の好ましい過酸化水素の総量が1〜30mg/EC20mg、より好ましくは3〜10mg/EC20mgとなるようにするのがよい。
本発明の植物細胞培養物の存在下におけるエピカテキン類とエピガロカテキン類の反応は、好ましくは15〜70℃、より好ましくは25〜40℃の温度で、好ましくは0.15〜2時間、より好ましくは0.3〜0.5時間程度行うのが望ましいが、これらの反応温度及び反応時間は、他の反応条件を考慮して適宜選択することができる。
本発明の方法によれば、合成反応が極めて迅速に進むため、従来方法に比べて反応時間を短縮することができ、生産効率を向上させることができるという利点を有する。
上記合成反応が終了したのち、反応混合物から目的とするテアフラビン類を分離・精製する。分離は、抽出操作により行うことができる。抽出には、酢酸エチル等のエステル類、ジエチルエーテル等のエーテル類等の一般的に用いられる抽出溶媒を用いることができる。なお、これらの抽出溶媒には反応液に残る未反応のエピカテキン類及びエピガロカテキン類は溶解しない。
本実験では、植物細胞として茶の成体細胞(茶の品種;さやまかおり、茶の使用部位;実生)を用い、以下のように茶細胞培養物を調製した。すなわち、寒天培地上で作成した茶培養細胞のカルスを、2,4−ジクロロフェノキシ酢酸及び蔗糖を含むGamborg's B5(B5)培地(フラスコ1個あたりに100mL)に移植した。次いで、培養細胞が均一になるまで25℃、暗条件下において約10日間、110rpmでふりまぜながら培養し、茶細胞培養物(C. sinensis cell culture)を調製した。B5培地の組成を表1に示す。
なお、この茶細胞培養物のペルオキシダーゼ活性は15.5unit/mLである。
EC(エピカテキン;6mg、0.02mmol;三井農林(株)製)と、EGC(エピガロカテキン;6mg、0.02mmol;三井農林(株)製)とを、アセトン1mL、0.1Mリン酸(H3PO4)緩衝液(pH6)10mLの混液に溶解し、茶葉(C. Sinensis)細胞培養液2.5mL(細胞;0.6g、ブロス;1.9g)、B5培地2.5mL、0.1MH3PO4緩衝液(pH6)5mLの混液に加え、3%H2O20.03mLを滴下した。
実施例1において、茶の代わりに、タバコ(N. tabacum)、及び、にんじん(D. carota)の成体細胞を用い、それぞれ表1に示す組成の培地で培養した他は、実施例1と同様にして該培養細胞を含む植物細胞培養物を調製した。
なお、これら細胞培養物のペルオキシダーゼ活性はタバコ(N. tabacum)=9.6unit/mL、にんじん(D. carota)=8.0unit/mLである。
B5培地を添加しなかったこと、及び0.1MH3PO4緩衝液の使用量をペルオキシダーゼ活性に応じて表2に示すように適宜変更したこと以外は、実施例1と同様にテアフラビンの合成を行った。結果を表2に示す。表2中、実施例2(a)はタバコ(N. tabacum)の植物細胞培養物を、実施例2(b)はにんじん(D. carota)の植物細胞培養物を用いた実験の結果である。
EC(200mg、0.690mmol)とEGC(211mg、0.690mmol)とを、300mL三角フラスコに入れ、0.1MH3PO4緩衝液(pH6)89mLに溶かした後、PPO(ポリフェノールオキシダーゼ;800unit/mg)を58mg加え、振とう機(110rpm)にて18分間反応させた。なお、ここで用いたPPOはTyrosinase mushroomで、フナコシ製;商品名「115A2000」である。
次に、イオン交換樹脂(商品名;ダイヤイオン、三菱化学(株)製)を用いてカラム(2.5cm×25.5cm)にて分離精製を行った。
しかし、このものは副生物が多く、純度の高いテアフラビン類を分離・生成するのが容易でなかった。また、高価な市販の酵素(ポリフェノールオキシダーゼ)を用いたため、コストがかかった。結果を表2に示す。
5%アルギン酸ナトリウム水溶液26mL、0.6%塩化カルシウム水溶液500mL、および蒸留水500mLは、あらかじめオートクレーブにて滅菌操作を行った。実施例1で調製した茶細胞培養物26mL(細胞;6.2g、ブロス;19.8g)を5%アルギン酸ナトリウム水溶液26mL中に加えてよく混合した液を、1滴ずつ0.6%塩化カルシウム水溶液500mL中に滴下した。滴下終了後、2時間穏やかに撹拌して、固定化茶培養細胞を得た。この固定化茶培養細胞を取り出し、滅菌蒸留水にてよく洗浄した。
固定化細胞培養物を用いる場合、再利用が可能であるという利点がある。また、再利用するたびに酵素活性が向上し、転換率も上昇する傾向にある。
Claims (8)
- エピカテキン類とエピガロカテキン類とを反応させてテアフラビン類を合成する方法において、前記反応を、ペルオキシダーゼ活性を有する植物細胞培養物の存在下に行うことを特徴とする、テアフラビン類の合成方法。
- 前記植物細胞培養物が、植物培養細胞を含むことを特徴とする、請求項1記載のテアフラビン類の合成方法。
- 前記植物培養細胞が、茶培養細胞であることを特徴とする、請求項2記載のテアフラビン類の合成方法。
- 前記植物細胞培養物が、植物細胞培養液を含むことを特徴とする、請求項1〜3のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
- 前記植物細胞培養物が、0.5unit/mL以上のペルオキシダーゼ活性を有することを特徴とする、請求項1〜4のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
- 前記反応を、前記植物細胞培養液及び過酸化水素の存在下に行うことを特徴とする、請求項1〜6のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
- 前記植物細胞培養物が固定化されていることを特徴とする、請求項1〜7のいずれかに記載のテアフラビン類の合成方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005341473A JP4696302B2 (ja) | 2005-11-28 | 2005-11-28 | テアフラビン類の合成方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005341473A JP4696302B2 (ja) | 2005-11-28 | 2005-11-28 | テアフラビン類の合成方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007143461A true JP2007143461A (ja) | 2007-06-14 |
JP4696302B2 JP4696302B2 (ja) | 2011-06-08 |
Family
ID=38205623
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005341473A Active JP4696302B2 (ja) | 2005-11-28 | 2005-11-28 | テアフラビン類の合成方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4696302B2 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009008503A1 (ja) * | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Hamamatsu Foundation For Science And Technology Promotion | テアフラビンの選択的製造方法 |
WO2009119111A1 (ja) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | 静岡県公立大学法人 | 生茶葉を用いたテアフラビン類の製造方法 |
WO2009119109A1 (ja) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | 静岡県公立大学法人 | テアフラビン類を豊富に含む発酵茶飲料の製造方法 |
CN110452941A (zh) * | 2019-08-24 | 2019-11-15 | 西南大学 | 一种提高茶黄素类物质合成产率的方法 |
CN114015733A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-08 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 聚酯型儿茶素的酶盐偶联催化合成方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002095415A (ja) * | 2000-09-21 | 2002-04-02 | Usaien Seiyaku Kk | テアフラビン類の製造方法 |
-
2005
- 2005-11-28 JP JP2005341473A patent/JP4696302B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002095415A (ja) * | 2000-09-21 | 2002-04-02 | Usaien Seiyaku Kk | テアフラビン類の製造方法 |
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009008503A1 (ja) * | 2007-07-11 | 2009-01-15 | Hamamatsu Foundation For Science And Technology Promotion | テアフラビンの選択的製造方法 |
JP5260516B2 (ja) * | 2007-07-11 | 2013-08-14 | 磐田化学工業株式会社 | テアフラビンの選択的製造方法 |
WO2009119111A1 (ja) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | 静岡県公立大学法人 | 生茶葉を用いたテアフラビン類の製造方法 |
WO2009119109A1 (ja) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | 静岡県公立大学法人 | テアフラビン類を豊富に含む発酵茶飲料の製造方法 |
GB2471055A (en) * | 2008-03-28 | 2010-12-15 | Shizuoka Prefectural University Corp | Manufacturing method for theaflavins, using raw tea leaves |
GB2471250A (en) * | 2008-03-28 | 2010-12-22 | Shizuoka Prefectural University Corp | Method of producing fermented tea drink rich in theaflavins |
US20110059215A1 (en) * | 2008-03-28 | 2011-03-10 | Shizuoka Prefectural University Corporation | Manufacturing method for theaflavins using raw tea leaves |
GB2471250B (en) * | 2008-03-28 | 2013-01-30 | Shizuoka Prefectural University Corp | Method of producing fermented tea drink rich in theaflavins |
CN110452941A (zh) * | 2019-08-24 | 2019-11-15 | 西南大学 | 一种提高茶黄素类物质合成产率的方法 |
CN110452941B (zh) * | 2019-08-24 | 2022-10-14 | 西南大学 | 一种提高茶黄素类物质合成产率的方法 |
CN114015733A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-08 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 聚酯型儿茶素的酶盐偶联催化合成方法 |
CN114015733B (zh) * | 2021-11-12 | 2023-08-08 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 聚酯型儿茶素的酶盐偶联催化合成方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4696302B2 (ja) | 2011-06-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5260516B2 (ja) | テアフラビンの選択的製造方法 | |
JP2001504474A (ja) | エポチロンc,d,e及びf、製造と薬剤 | |
JP4696302B2 (ja) | テアフラビン類の合成方法 | |
JP4394647B2 (ja) | 光学活性テトラヒドロチオフェン誘導体の製造方法、および、光学活性テトラヒドロチオフェン−3−オールの晶析方法 | |
CA2930767A1 (en) | Production of thapsigargins by thapsia cell suspension culture | |
CN114381441B (zh) | 酶催化合成手性氨基醇化合物 | |
CN110819665B (zh) | 一种6,7,8-三羟基香豆素的制备方法 | |
Hernández-Vázquez et al. | Screening of plant cell cultures for their capacity to dimerize eugenol and isoeugenol: Preparation of dehydrodieugenol | |
Seigle-Murandi et al. | Biphenyl oxide hydroxylation by Cunninghamella echinulata | |
JP3815919B2 (ja) | タキサン型ジテルペンの製造方法 | |
JP2967532B2 (ja) | タキサン類化合物の製造方法 | |
KR101093415B1 (ko) | 식물세포주를 이용한 비스유제놀 합성 방법 | |
KR101040099B1 (ko) | 스테롤의 5-엔-3-온체 또는 3,6-디온체의 제조방법, 및 분석방법 | |
CA2331471C (en) | Compounds with an antioxidant activity, compositions useful as food integrators containing them and process for their preparation | |
JPH1052296A (ja) | タキサン類化合物の製造方法(iii) | |
CN114621986B (zh) | 一种生物合成紫杉醇侧链的方法 | |
JP3434892B2 (ja) | タキサン型ジテルペンの製造方法 | |
JP2006314248A (ja) | トリテルペン誘導体の製造方法 | |
CN107164423A (zh) | 一种全细胞催化制备曲克芦丁酯的方法 | |
JP2005137201A (ja) | ソヤサポゲノールbの製造法 | |
JPH01218600A (ja) | 7−ヒドロキシテストステロンの製造方法 | |
JP2005278525A (ja) | 芳香族化合物の製造方法 | |
JPH02295969A (ja) | 光学活性なアミノアルコール誘導体の製造法 | |
JPH04139193A (ja) | 6β―ヒドロキシテストステロンの製造方法 | |
MUROOKA | XI Cucumis sativus L.(Cucumber): In Vitro Culture and the Production of Ascorbate Oxidase Y. MUROOKA and H.-J. CHO¹ |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080201 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101006 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20101206 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110201 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110209 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4696302 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140311 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140311 Year of fee payment: 3 |
|
R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140311 Year of fee payment: 3 |
|
R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140311 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140311 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |