JP2007129967A - 刈芝及びサッチの分解促進剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】セルロースを分解する能力を有するバチルス属細菌にさらにセルラーゼを添加・混合し、刈芝やサッチに施用する。
【選択図】なし
Description
すなわち、本発明は以下のとおりである。
(1) セルロースを分解する能力を有するバチルス属細菌及びセルラーゼを含む刈芝及びサッチの分解促進剤。
(2) 前記バチルス属細菌が、バチルス・ズブチルス BSTH−1(FERM AP−20663)及び/又はこの変異株である(1)に記載の刈芝及びサッチの分解促進剤。
ズブチルス(IFO13719)菌株又はこれらの変異株を好ましく用いることができる。バチルス・ズブチルス BSTH−1菌株は、平成17年9月13日より、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(茨城県つくば市東1丁目1番地1中央第6)に受領番号 AP−20663で寄託されている。バチルス・ズブチルス(IFO13719)は、財団法人発酵研究所(Institute for fermentation, Osaka; IFO)に登録された株であるが、現在はその移管先である独立行政法人製品評価技術基盤機構の生物遺伝資源部門(NBRC)(千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8)より入手可能である。
BSTH−1の16S rRNA遺伝子のDNA塩基配列を配列番号1に示す。BLASTを用いた細菌基準株データベースに対する相同性検索の結果、BSTH−1の16S
rRNAの全塩基配列は相同率99.8%でバチルス・ズブチルス(Bacillus subtilis)基準株の16S rRNAに対し最も高い相同性を示した。
上記のことから、BSTH−1は、バチルス・ズブチルスに帰属すると推定された。
培養に用いる培地成分も特に制限されず、動物性又は植物性の何れを用いてもよく、例えば、ふすま、コメヌカ、麦、乳製品等を含む資材を用いることができる。さらに、炭素源としてグルコース、スクロース、糖蜜などの糖類、クエン酸などの有機酸類、グリセリンなどのアルコール類、また窒素源としてアンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩や硝酸塩等を添加することができる。
この場合のセルラーゼは、β−1,4グルコシド結合を加水分解する酵素であれば、エンドグルカナーゼ及びセロビオヒドロラーゼの何れか一方でもよいし、これらの両方でもよい。また、セルラーゼの由来は特に制限されず、高等植物、細菌、糸状菌、木材腐朽菌、軟体動物などに由来する天然のセルラーゼを用いてもよいし、遺伝子工学的方法や化学
的方法で人工的に産生したものを用いてもよい。また、製剤化された市販のものなどを用いることもできる。本発明の刈芝及びサッチの分解促進剤に用いるセルラーゼとして、例えば、糸状菌であるトリコデルマ菌やアスペルギルス菌由来のセルラーゼなどが好ましく例示できる。
栄養源の種類は、本発明の効果を損なわない限り特に制限されず、通常バチルス属細菌の増殖に用いられるものを選択することができる。
また、バチルス属細菌の菌体とセルラーゼを別々に配置し、使用時に混合する形態の刈芝及びサッチの分解促進剤のキットとすることもできる。
また、本発明の刈芝及びサッチの分解剤は、上記バチルス属細菌及びセルラーゼに、製
剤化のための担体や増量剤などの任意の物質をさらに加えて加工することもできる。
本発明の刈芝及びサッチ分解促進剤の投与量も、バチルス属細菌が死滅せず増殖可能な菌体数を有している限りにおいて特に制限されないが、粉剤であれば、通常は0.1〜100g/m2、好ましくは20〜50g/m2とすることができる。また、本発明の刈芝及びサッチの分解促進剤を、水和剤として水で1000倍に希釈した場合は、500〜1000ml/m2とすることができる。
また、本発明の刈芝及びサッチの分解促進剤は、通常芝の生育において用いられる無機肥料、有機肥料、除草剤などと共に用いることができる。
千葉県内の畑土壌及び腐葉土を界面活性剤を含む水でけん濁し、遠心分離して得た上清を70℃で20分間過熱した後、これを、カルボキシメチルセルロース(CMC)を栄養源として加えた寒天培地に添加して、26℃で7日間培養した。培養後、最も大きいコロニーを形成した菌を分離した。このようにして得られた菌株をBSTH−1とし、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに受領番号 FERM AP−20663として寄託した。この菌株の性質は前述したとおりである。
上記で得られたバチルス・ズブチルス BSTH−1をブイヨン培地(肉エキス、ペプトン、KH2PO4、MgSO4を含む液体培地)を用いて30℃で2日間培養した。
本発明の刈芝及びサッチの分解促進剤の刈芝及びサッチの分解能力を、ゴルフ場刈芝の分解試験法を用いて評価した。すなわち、ゴルフ場ベントグラスの刈芝を10mm前後に切断したものを、天日で10日間十分に乾燥させ、1gずつフラスコにとった。それぞれのフラスコに水20mlを添加し、オートクレーブにて滅菌した。
それぞれのフラスコに、その内容物に対して下記に示す組成に従ってセルラーゼ及び/又はバチルス・ズブチルスの菌体を添加し、比較例1〜3及び実施例1、2とした。また、刈芝に上記の水20mlを加えたのみで、他に何も加えないものを対照とした。
セルラーゼ製剤(エンチロン剤:洛東化成工業社製、トリコデルマ菌由来、セルラーゼ活性 7000U/g)
0.1%(W/V)
<比較例2>
バチルス・ズブチルス BSTH−1 1.0×108CFU/ml
<比較例3>
バチルス・ズブチルス(IFO13719) 1.0×108CFU/ml
<実施例1>
セルラーゼ製剤 0.1%(W/V)
バチルス・ズブチルス BSTH−1 1.0×108CFU/ml
<実施例2>
セルラーゼ製剤 0.1%(W/V)
バチルス・ズブチルス(IFO13719) 1.0×108CFU/ml
以上の結果から、セルラーゼを産生する能力を有するバチルス属細菌及びセルラーゼを組み合わせて刈芝に添加することにより効率的、かつ安定的に刈芝を分解・減容化することができることが分かった。
Claims (2)
- セルロースを分解する能力を有するバチルス属細菌及びセルラーゼを含む刈芝及びサッチの分解促進剤。
- 前記バチルス属細菌が、バチルス・ズブチルス BSTH−1(FERM AP−20663)及び/又はこの変異株である請求項1に記載の刈芝及びサッチの分解促進剤。
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2005
- 2005-11-11 JP JP2005327308A patent/JP2007129967A/ja active Pending
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