JP2007117705A - 単球選択捕捉材料 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 単球を含有する原料細胞液を、平均孔径が60μmを超える多孔質体からなる単球選択分離材、および該単球選択分離材を用いたデバイスにて処理することにより、原料細胞液中から選択的に単球を分離することが可能となった。
【選択図】 なし
Description
よって、本発明が提供するのは以下の通りである:
[1] 単球を含有する原料細胞液から単球を選択的に捕捉する多孔質体であって、平均孔径が60μmを超えることを特徴とする多孔質体。
/(原料細胞液中単球数)]
リンパ球通過率(%)=100×(濾液中リンパ球数/原料細胞液中リンパ球数)
本発明はまた、上記細胞分離デバイスに、単球を含む原料細胞液を通液させて単球を捕捉させる工程、非捕捉細胞を洗浄液で洗浄する工程、捕捉された単球を回収する工程、をこの順に実施する、単球採取方法も提供する。
以下、ブタ末梢全血から単球を分離する場合の細胞分離回収デバイスおよび細胞分離方法を示す。
高さ62mm×内径9.5mmφの外筒を有する2.5mlシリンジ(TERUMO製「テルモシリンジ」)の内筒を抜き、中空状の外筒に、高さ7mm×外径10mm(内径7mm)の中空状シリコンチューブをシリンジ内にぴったりはまるように入れ、さらに厚さ1.5mm×直径9mm、平均孔径74μmの円筒状のポリウレタン多孔質体を12枚積層し、その後、高さ7mm×外径10mm(内径7mm)の中空状シリコンチューブをシリンジ内にぴったりはまるように入れた。要するに、シリンジ外筒内に積層した多孔質体の上下をシリコンチューブで押さえ、動かないように固定した(以下、回収用シリンジという)。この場合、シリコンチューブの内径部分が、デバイスの液体入口および出口となる。また、原料細胞液の通過性を高める目的で2mlの生理食塩水にてプライミングを行った。回収用シリンジの先端に長さ15mm、外径5mm(内径3mm)のポリプロピレン製チューブを連結し、チューブのもう一端に、ヘパリン加ブタ末梢血2.5mlを充填した2.5mlシリンジ(以下、血液充填シリンジという)を連結した。連結の際、一定流速を保つ目的で、多孔質体と血液充填シリンジの間に空気層が入らないようにその間のチューブにもブタ末梢血を充填した。
シリンジポンプを用いて血液充填シリンジから回収用シリンジへ通液(流速0.5ml/分)して単球を捕捉し、濾液は回収用シリンジのもう一端から排出した。血液充填シリンジを外し、生理食塩水1.0mlが充填された2.5mlシリンジ(洗浄用シリンジ)を回収用シリンジに連結し、血液と同方向に通液(流速0.5ml/分)して、残存する赤血球、血小板を洗い流した。さらに洗浄用シリンジを外した後、回収用シリンジの針先部分を下にしてから、市販の10%デキストラン生理食塩水溶液(ミドリ十字社製「デキストラン40注」)20等量に対してヒト血清アルブミン(ICN Biomedicals製 「Human Albumin Fraction V」)3等量の割合で混合して調製した溶液(回収液)2.5mlを回収用シリンジ内に上部から充填し、その後、ピストンを用いて手動で回収液を押し出し、すなわち、血液や洗浄液とは逆方向に洗浄(逆洗浄)して、回収用シリンジの先端から細胞を回収し、これを回収細胞液とした。
単球捕捉率、単球回収率、リンパ球通過率、単球選択捕捉率は以下の式により算出した。
100×[(原料細胞液中単球数−濾液中単球数)/(原料細胞液中単球数)]
単球回収率(%)=100×(回収細胞液中単球数/原料細胞液中単球数)
リンパ球通過率(%)=100×(濾液中リンパ球数/原料細胞液中リンパ球数)
単球選択捕捉率(%)=100×[(原料細胞液中単球数−濾液中単球数)/
[(原料細胞液中単球数−濾液中単球数)
+(原料細胞液中リンパ球数−濾液中リンパ球数)] ]
またこのとき、単球またはリンパ球の数は以下の式により算出した。
リンパ球数=細胞浮遊液中白血球数×リンパ球画分比率(%)/100
ここでいう細胞浮遊液とは、原料細胞液、濾液、回収細胞液を指し、これらにおける白血球数は自動血液細胞数カウンター(シスメックスK4500)にて測定した。また、単球またはリンパ球の画分比率は、フローサイトメーター(FACSCanto ベクトンディッキンソン)にて測定した。
1.細胞分離回収デバイスの調製
原料細胞液をブタ骨髄液に変えたほかは、実施例1と同様に行った。
実施例1と同様に実施した。
単球回収率3.4%であり、単球捕捉率32.5%、リンパ球通過率100%、単球選択捕捉率100%であった。
1.細胞分離回収デバイスの調製
平均孔径が15μmのポリウレタン多孔質体を使用し、積層枚数を6枚に、原料細胞液をブタ骨髄液に変えたほかは、実施例1と同様に行った。
実施例1と同様に実施した。
白血球数測定はビュルケルチュルク血球計算盤、単球またはリンパ球の画分比率は、フローサイトメーター(FACSCaliber ベクトンディッキンソン)にて測定した。
Claims (8)
- 単球を含有する原料細胞液から単球を選択的に捕捉する多孔質体であって、平均孔径が60μmを超えることを特徴とする多孔質体。
- さらに、平均孔径が100μm以下であることを特徴とする請求項1記載の多孔質体。
- 多孔質体が単球接着性素材で構成されることを特徴とする請求項1または2記載の多孔質体。
- 単球接着性素材がポリウレタンであることを特徴とする請求項3記載の多孔質体。
- 請求項1〜4のいずれか1項に記載の多孔質体が、液体入口と液体出口を有する容器に充填された、単球を選択的に捕捉する細胞分離デバイス。
- 請求項5に記載の細胞分離デバイスに単球を含む原料細胞液を通液させて単球を捕捉させる工程、非捕捉細胞を洗浄液で洗浄する工程、捕捉された単球を回収する工程を、この順に実施することを特徴とする単球採取方法。
- 請求項6に記載の方法で得られた単球を、分化誘導することを特徴とする樹状細胞の製造方法。
- 請求項5に記載の細胞分離デバイスに単球を含む原料細胞液を通液させて単球を捕捉させる工程、非捕捉細胞を洗浄液で洗浄する工程、デバイス内に分化誘導培養液を流入して単球の分化誘導を行う工程、分化誘導された樹状細胞を回収する工程を、この順に実施することを特徴とする樹状細胞の製造方法。
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---|---|---|---|---|
JPS55138458A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Asahi Chemical Ind | Filter for catching and collecting single sphere and granular sphere |
JPH0780062A (ja) * | 1993-09-17 | 1995-03-28 | Asahi Medical Co Ltd | エンドトキシン除去器および浄化血液の製造方法 |
JP2004129550A (ja) * | 2002-10-09 | 2004-04-30 | Asahi Medical Co Ltd | 単球の分離回収方法 |
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