JP2007047154A - 粒子分析装置用標準物質 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
【解決手段】本発明は、生体試料中に含まれる測定対象粒子に対して蛍光染色処理を行い、蛍光染色された測定対象粒子を分析する粒子分析装置に用いられる標準物質であって、前記蛍光染色処理によって蛍光染色される第1標準粒子と、予め所定の蛍光色素を含む第2標準粒子と、からなる粒子分析装置用標準物質を提供する。また、本発明は、上記標準物質を用いて粒子分析装置の異常箇所を判定することができる方法及び装置を提供する。
【選択図】 図6
Description
細菌用標準粒子として、平均粒径1μm蛍光ラテックス粒子(Duke社製、DUKE4010A+蛍光1.0%)を用いた。また、白血球用標準粒子として、平均粒径7μmの酢酸ビニルポリマー粒子を用いた。
精製水1 Lに、塩化ナトリウムが0.3%、防腐剤が0.08%、酢酸が0.035%となるように添加して緩衝液1を調製した。また、この緩衝液1に、最終濃度が1.65%となるよう塩化ナトリウムを添加し、更に、最終濃度が9.0 %となるようグリセリンを添加して、緩衝液2を調製した。
蛍光ラテックス粒子(500個/μl)250μlに6%ポリビニルアルコール溶液を1ml添加し、ボルテックスで攪拌して、蛍光ラテックス粒子を懸濁させた。ホーン系8mmのソニケーターを50mW、30secに設定し、懸濁液中の蛍光ラテックス粒子をポリビニルアルコールでコーティングした。この懸濁液に上記緩衝液1を適量加えて洗浄し、12000rpmで遠心して上清を除去した。この洗浄工程を2回繰り返した後、上記緩衝液2を2ml添加して、細菌用標準粒子懸濁液を調製した。
酢酸ビニルポリマー粒子(200個/μl)250μlに緩衝液1を適量加えて洗浄し、3000rpmで遠心して上清を除去した。この洗浄工程を2回繰り返した後、上記緩衝液2を2ml添加して、白血球用標準粒子懸濁液を調製した。
HEPESを50 mM 、EDTA−3Kを0.40 %、2−フェノキシエタノールを0.75 %、プロピオン酸ナトリウムを0.6 %、水酸化ナトリウムを0.052 %、トミサイドSを350 ppm、プロキセルGX-Lを350 ppm、精製水を1 L添加して第1希釈液を調製した。
クエン酸を100mM、硫酸ナトリウムを90mM、アミド硫酸を100mM、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイドを0.1%、水酸化ナトリウムをpH2.5となる量添加して第2希釈液を調製した。
以下の化学式1で表される蛍光色素であるNK-529(日本感光色素研究所(株)製)を240ppm、化学式2で表される蛍光色素であるNK-136(日本感光色素研究所(株)製)を25.2ppmとなるようエチレングリコールに溶解させたものを第1染色液とした。
以下の化学式3で表される蛍光色素を、40ppmとなるようエチレングリコールに溶解させたものを第2染色液とした。
まず、試験管14に収容された標準物質が、シリンジポンプ15の動作により吸引ピペット16から吸引される。吸引された標準物質は、サンプリングバルブ17によって定量され、反応チャンバ18及び19に分注される。容器20に収容された第2希釈液は、シリンジポンプ22により、チューブを介して反応チャンバ18に所定量供給される。容器21に収容された第2染色液は、シリンジポンプ23により、チューブを介して反応チャンバ18に所定量供給される。このようにして、測定用試料Bが調製される。また、容器24に収容された第1希釈液は、シリンジポンプ26により、チューブを介して反応チャンバ19に所定量供給される。容器25に収容された第1染色液は、シリンジポンプ27により、チューブを介して反応チャンバ19に所定量供給される。このようにして、測定用試料Aが調製される。
Claims (19)
- 生体試料中に含まれる測定対象粒子に対して蛍光染色処理を行い、蛍光染色された測定対象粒子を分析する粒子分析装置に用いられる標準物質であって、前記蛍光染色処理によって蛍光染色される第1標準粒子と、予め所定の蛍光色素を含む第2標準粒子と、からなる粒子分析装置用標準物質。
- 前記第2標準粒子が、前記蛍光染色処理によっては実質的に染色されない粒子である請求項1記載の標準物質。
- 測定対象粒子が第1測定対象粒子及び第2測定対象粒子であり、前記第1標準粒子が、蛍光染色された第1測定対象粒子と略同等の蛍光強度を示すように前記蛍光染色処理によって染色され、前記第2標準粒子が、蛍光染色された第2測定対象粒子と略同等の蛍光強度を示す請求項1または請求項2記載の標準物質。
- 前記第1標準粒子が、前記第1測定対象粒子と略同等の散乱光強度を示し、前記第2標準粒子が前記第2測定対象粒子と略同等の散乱光強度を示す請求項1〜3の何れか1項に記載の標準粒子。
- 前記生体試料が尿であり、前記第1第測定対象粒子が、白血球、赤血球、上皮細胞及び円柱からなる群から選択され、前記第2測定対象粒子が微生物である請求項3または4に記載の標準物質。
- 前記第1標準粒子が、酢酸ビニルポリマー粒子、ポリアクリルアミド粒子、親水性ビニルポリマー粒子、ラテックス粒子、およびシリカ粒子からなる群から選択される少なくとも1種の粒子であり、前記第2標準粒子が蛍光ラテックス粒子である、請求項1〜5の何れか1項に記載の標準物質。
- 前記粒子分析装置が、生体試料と色素を混合して測定用試料を調製する測定用試料調製部と、この測定用試料に光を照射する光源と、測定用試料からの蛍光を検出する蛍光検出器と、を備えた請求項1〜6の何れか1項に記載の標準物質。
- 前記粒子分析装置が、前記測定用試料からの散乱光を検出する散乱光検出器を備えた請求項7記載の標準物質。
- 生体試料と第1の蛍光色素とを混合して測定用試料を調製するための測定用試料調製部、測定用試料に光を照射するための光源及び測定用試料からの蛍光を検出するための蛍光検出器を含む粒子分析装置の異常箇所を判定する方法であって、
前記粒子分析装置を用いて第1標準粒子及び第2標準粒子を測定して、第1標準粒子に関する第1の蛍光及び第2標準粒子に関する第2の蛍光を検出する検出工程、及び前記蛍光検出工程により得られる第1の蛍光の検出結果及び第2の蛍光の検出結果に基づいて、粒子分析装置の異常箇所を判定する異常箇所判定工程を含み、
前記第1標準粒子が前記第1の蛍光色素によって蛍光染色され、前記第2標準粒子が予め第2の蛍光色素を含有する粒子である、粒子分析装置の異常箇所を判定する方法。 - さらに、前記第1標準粒子及び前記第2標準粒子を含有する標準物質と前記第1の蛍光色素とを混合して測定用試料を調製する測定用試料調製工程を含み、
前記検出工程において、前記測定用試料から第1標準粒子に関する第1の蛍光及び第2標準粒子に関する第2の蛍光を検出する、請求項9記載の方法。 - さらに、前記第1標準粒子を含有する第1の標準物質と前記第1の蛍光色素とを混合して第1の測定用試料を調製する第1の調製測定用試料調製工程及び前記第2標準粒子を含有する第2の標準物質から測定用試料を調製する第2の調製測定用試料調製工程を含み、
前記検出工程において、前記第1の測定用試料から第1標準粒子に関する第1の蛍光が検出され、前記第2の測定用試料から第2標準粒子に関する第2の蛍光が検出される、請求項9記載の方法。 - さらに、前記第1の蛍光の検出結果と第1の条件とを比較して第1の比較結果を取得する第1の比較工程、及び前記第2の蛍光の検出結果と第2の条件とを比較して第2の比較結果を取得する第2の比較工程を含み、
前記異常箇所判定工程において、前記第2の比較結果に基づいて蛍光検出器の異常が判定され、前記第1の比較結果及び前記第2の比較結果に基づいて試料調製部の異常が判定される、請求項9〜11の何れか1項に記載の方法。 - 前記粒子分析装置が、前記測定用試料からの散乱光を受光するための散乱光検出器を含み、
前記検出工程において、第1標準粒子に関する第1の散乱光及び第2標準粒子に関する第2の散乱光が検出され、前記異常箇所判定工程において、前記第1の散乱光の検出結果及び第2の散乱光の検出結果に基づいて散乱光検出器の異常が判定される、請求項9〜12の何れか1項に記載の方法。 - 前記第2標準粒子が、前記第1の蛍光色素によっては実質的に染色されない粒子である、請求項9〜13の何れか1項に記載の方法。
- 第1標準粒子及び第2標準粒子を含む標準物質と第1の蛍光色素とを混合して測定用試料を調製するための測定用試料調製部、前記測定用試料に光を照射するための光源、前記測定用試料に含まれる第1標準粒子に関する第1の蛍光及び第2標準粒子に関する第2の蛍光を検出するための蛍光検出器、第1の蛍光の検出結果及び第2の蛍光の検出結果に基づいて粒子分析装置の異常箇所を判定するための解析部を含み、
前記試料調調製部において、前記第1標準粒子が前記第1の蛍光色素によって蛍光染色され、前記第2標準粒子が予め第2の蛍光色素を含有する粒子される、粒子分析装置。 - 第1標準粒子を含有する第1の標準物質と第1の蛍光色素とを混合して第1の測定用試料を調製し、第2標準粒子を含有する第2の標準物質から第2の測定用試料を調製するための測定用試料調製部、前記第1及び第2の測定用試料に光を照射するための光源、前記第1の測定用試料に含まれる第1標準粒子に関する第1の蛍光を検出し、前記第2の測定用試料に含まれる第2標準粒子に関する第2の蛍光を検出するための蛍光検出器、第1の蛍光の検出結果及び第2の蛍光の検出結果に基づいて、粒子分析装置の異常箇所を判定するための解析部を含み、
前記試料調調製部において、前記第1標準粒子が前記第1の蛍光色素によって蛍光染色され、前記第2標準粒子が予め第2の蛍光色素を含有する粒子される、粒子分析装置。 - 前記解析部が、前記第1の蛍光の検出結果と第1の条件とを比較して第1の比較結果を取得し、前記第2の蛍光の検出結果と第2の条件とを比較して第2の比較結果を取得し、前記第2の比較結果に基づいて蛍光検出器の異常を判定し、前記第1の比較結果及び前記第2の比較結果に基づいて試料調製部の異常を判定する、請求項15又は請求項16記載の粒子分析装置。
- さらに、前記測定用試料からの散乱光を受光するための散乱光検出器を含み、前記散乱光検出器が、第1標準粒子に関する第1の散乱光及び第2標準粒子に関する第2の散乱光を検出し、前記解析部が、第1の散乱光の検出結果及び第2の散乱光の検出結果に基づいて散乱光検出器の異常を判定する、請求項15又は請求項16記載の粒子分析装置。
- 前記第2標準粒子が、前記第1の蛍光色素によっては実質的に染色されない粒子である、請求項15又は請求項16記載の粒子分析装置。
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