JP2006512928A - 炭疽菌(Bacillusanthracis)核酸を検出するためのアッセイおよび組成物 - Google Patents
炭疽菌(Bacillusanthracis)核酸を検出するためのアッセイおよび組成物 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本発明は、炭疽の原因病原体である炭疽菌(Bacillus anthracis)の検出に関し、そしてより具体的には、他のバチルス属(Bacillus)種から、炭疽菌を区別する、プラスミドが所持する核酸配列を検出するための組成物および方法に関する。
炭疽菌は、炭疽の原因病原体である芽胞形成細菌であり、炭疽はしばしば肺または結合組織を攻撃する疾患である。皮膚炭疽がこの疾患の最も一般的な型であり、炭疽菌芽胞が損傷を受けた皮膚または膜に感染し、そして発芽し栄養細胞になって炭疽毒を産生した後、皮膚炭疽が皮膚発赤、炎症性の腫れ物または潰瘍を引き起こす。菌血症が発展すると、高熱および死につながりうる。吸入型は、芽胞を吸い込んだ後に生じ、これが肺マクロファージに感染し、そしてリンパ節において発芽して、浮腫、出血、リンパ節壊死および胸水を引き起こす。吸入炭疽は、通常、感染1週間以内で致死であり、敗血症および髄膜炎を導きうる。口腔咽頭炭疽および胃腸炭疽は、疾患の最も一般的でない型であり、通常、十分に調理されていない汚染肉を摂取した結果生じる。一般的でなく、そして非特異的な症状(のどの痛み、発熱、吐き気、嘔吐)で始まるが、これらの炭疽の型は、約50%の死亡率を有する。炭疽は、通常、草食動物を攻撃するが、汚染した動物の体毛、羊毛、皮膚、肉、または廃棄物に接触したヒトは、該疾患に接触しうる。炭疽菌芽胞の意図的な放出によって引き起こされるヒト感染は、皮膚炭疽および/または吸入炭疽を生じ、生物戦争またはバイオテロリズムの1つの型である。感染したヒトは、抗生物質、例えばペニシリンを用いることによって、炭疽に関して治療することも可能である。この疾患の致死率が高く、そして感染した個人または汚染物質に曝露されうる他者にリスクが生じるため、炭疽菌の存在を正確に検出し、そして感染を診断することは重要である。
本発明の1つの側面は、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号34、標的配列いずれか1つの相補配列、またはRNA均等物の炭疽菌標的配列に含有される配列に特異的にハイブリダイズする、約20〜40ヌクレオチドのオリゴヌクレオチドである。こうしたオリゴヌクレオチドの態様には、配列番号21、配列番号22、配列番号23、または配列番号24、pagA標的配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物の配列に含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする、オリゴヌクレオチドが含まれる。これらのpagA標的配列に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの例には、配列番号21に特異的にハイブリダイズする、配列番号1または配列番号2のオリゴヌクレオチド、配列番号22に特異的にハイブリダイズする、配列番号3または配列番号4のオリゴヌクレオチド、配列番号23に特異的にハイブリダイズする、配列番号5または配列番号6のオリゴヌクレオチド、および配列番号24に特異的にハイブリダイズする、配列番号7または配列番号8のオリゴヌクレオチドが含まれる。本発明の他の態様には、配列番号25または配列番号26、capB標的配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物の配列に含有されるcapB標的配列に特異的にハイブリダイズする、オリゴヌクレオチドが含まれる。配列番号25に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの例は、配列番号9、配列番号10、配列番号11または配列番号12のオリゴヌクレオチドである。配列番号26に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドの例は、配列番号13または配列番号14のオリゴヌクレオチドである。本発明のさらなる態様は、配列番号31、その相補配列、またはRNA均等物の標的配列に含有されるバチルス属種の16S rRNAまたは16S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする、約18〜40塩基のオリゴヌクレオチドである。こうしたオリゴヌクレオチドの例には、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号37、配列番号38、または配列番号39のものが含まれる。本発明の別の態様は、配列番号32、その相補配列、またはRNA均等物の標的配列に含有されるバチルス属種の23S rRNAまたは23S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする、約20〜50塩基のオリゴヌクレオチドである。こうしたオリゴヌクレオチドの例には、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号35、または配列番号36のものが含まれる。これらのオリゴヌクレオチドのいずれも、DNA主鎖もしくはRNA主鎖、または混合DNAおよびRNA主鎖を有するか、あるいは塩基を連結する少なくとも1つの2’−メトキシRNA基を含有することも可能である。これらのオリゴヌクレオチドのいずれも、オリゴヌクレオチドに直接または間接的に連結されたシグナル産生標識を含むことも可能である。好ましい標識は、化学発光化合物である。
本発明は、炭疽菌核酸を含有する試料を提供し、炭疽菌のpXO1プラスミドおよびpXO2プラスミドに含有される遺伝子配列に特異的にそして独立に結合する少なくとも2つの検出プローブにハイブリダイズさせ、そしてpXO1遺伝物質に結合したプローブおよび/またはpXO2遺伝物質に結合したプローブの存在を検出して、試料中の炭疽菌の存在を示すことによって、試料中の炭疽菌核酸を検出する方法を提供する。該方法は、in vitroで、生物学的試料中の生物を増殖させ、そして試料中の生物を溶解して炭疽菌核酸を放出させることを含むことも可能である。該方法はまた、バチルス属16Sまたは23S rRNAに特異的なrRNA配列に、少なくとも1つの標識プローブを結合させる工程を含むことも可能であり、ここで、プローブに結合される配列は、セレウス菌複合種(すなわち炭疽菌、B.チューリンゲンシス、およびセレウス菌)のなかで保存されており、そしてrRNAまたはrRNA配列をコードするDNAに結合したプローブの存在を検出して、試料中のセレウス菌複合生物の存在を示す工程を含むこともまた可能である。例えば、該方法は、炭疽菌、B.チューリンゲンシスおよびセレウス菌の間で完全に保存されているが、炭疽菌およびB.ミコイデス間では完全には保存されていないバチルス属16S rRNA配列に特異的な、少なくとも1つの標識プローブを結合させる工程を含むことも可能であり、すなわち結合配列は、炭疽菌およびB.ミコイデス間の少なくとも1つのヌクレオチド相違を含有する。16S rRNA配列に結合したプローブの存在が検出されることは、試料中に炭疽菌またはセレウス菌複合種の別の種が存在することを示す。また、例えば、該方法は、少なくとも1つの検出プローブ、および場合によって検出プローブとともに1以上のヘルパーオリゴマーを用いて、23S rRNA配列にハイブリダイズさせ、そして該配列の存在を検出して、炭疽菌および/または緊密に関連するバチルス属種の存在を示すことも可能である。該方法の別の態様は、真性細菌rRNAまたはrRNA配列をコードするDNAに特異的に結合するプローブをハイブリダイズさせて、アッセイにおいて、別のプローブを用いて、バチルス属または炭疽菌の配列が検出されなかった場合であっても、アッセイ工程が適切に行われたことを示すシグナルを産生する。こうした工程は、アッセイの内部対照として働いた。
本発明は、プラスミドpXO1およびpXO2に、そして場合によって16Sおよび/または23S rRNAまたはrRNAをコードする遺伝子に含有される炭疽菌遺伝物質に特異的に結合するオリゴヌクレオチドの核酸配列を含む。一般的に、オリゴヌクレオチドは、59℃〜75℃の範囲のTm、20〜50ヌクレオチドの範囲の長さ、そして40〜64%の範囲のG+Cパーセンテージを持つ、最小限の自己アニーリング二次構造を示す配列を選択するように設計された。
本発明の検出法で使用するため、炭疽菌生物(生存可能芽胞、生存細菌、またはその混合物を含む)を含有しうる試料を提供する。試料は、生物学的標本または環境試料を含むいかなる供給源由来であることも可能であるし、そして炭疽菌生物に加えて、他の生物学的(生存または生存不能)物質または不活性物質を含有することも可能である。例えば、生物学的試料または生物学的標本には、炭疽菌生物を含有しうる、生存または死亡生物由来のいかなる組織も含まれる。こうした試料には、例えば、ヒトまたは動物起源の出血液、末梢血、骨髄、血漿、皮膚損傷由来のものを含む生検試料、リンパ節、口腔咽頭組織、呼吸組織または滲出物または洗浄液、胃腸組織、神経系組織(例えば脳組織、髄膜、脳脊髄液)、尿、糞便、精液、または他の体液または組織が含まれる。表面および/または作業員が生きた細胞または芽胞で汚染されないように、炭疽菌を含有しうる試料の扱いには注意を払わなければならない。一般的に、試料を適切な微生物培地内にまたは培地上に接種し、そして周知の微生物学的技術を用いてインキュベーションして、バチルス属生物を増殖させる(例えば血液寒天プレート上にストリークして、そして18〜24時間増殖させる)。培養物を用いて、試料中に存在する生物に関する表現型情報を提供することも可能である(例えばコロニー形態、溶血活性)。次いで、炭疽菌核酸、特にpXO1およびpXO2プラスミドに所持される配列の存在に関して試験するため、培養した試料を用いて、生物の溶解物を作成して核酸を放出させる。
本発明はまた、pagA遺伝子配列に含有される標的配列に特異的にハイブリダイズする少なくとも1つの核酸オリゴマー、およびcapB遺伝子配列に含有される標的配列に特異的にハイブリダイズする少なくとも1つの核酸オリゴマーを用いることによって、炭疽菌の存在を検出するアッセイを行うためのキットも含む。こうしたキットの態様は、標的配列への特異的ハイブリダイゼーションを可能にする、配列番号21、配列番号22、配列番号23または配列番号24のいずれか1つに含有される標的配列に十分に相補的な少なくとも1つの核酸オリゴマー、および標的配列への特異的ハイブリダイゼーションを可能にする、配列番号25または配列番号26に含有される標的配列に十分に相補的な少なくとも1つの核酸オリゴマーを含有する。特定の好ましいキットは、セレウス菌複合群の16Sまたは23S rRNA配列あるいはrRNAをコードする遺伝子に特異的にハイブリダイズする、少なくとも1つの核酸オリゴマーをさらに含有する。こうしたキットの態様は、配列番号31に含有される16S rRNAまたはそのコード配列に特異的な標的配列への特異的なハイブリダイゼーションを可能にするのに十分に相補的である核酸オリゴマー、その相補配列、またはRNA均等物、および/または配列番号32に含有される23S rRNAまたはそのコード配列の標的配列への特異的なハイブリダイゼーションを可能にするのに十分に相補的である核酸オリゴマー、その相補配列、またはRNA均等物を含有する。キットの他の態様には、バチルス属種が存在しなくても、真性細菌標的配列にハイブリダイズし、そして該配列を検出するため、内部対照として働く、少なくとも1つの核酸プローブが含まれる。真性細菌プローブの好ましい態様は、rRNAまたはrRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする。
pagAおよびcapB標的配列の調製
pagAおよびcapB遺伝子配列由来の2つの合成遺伝子標的配列を合成して、毒性炭疽菌の取り扱いを必要とすることなく、プラスミドpXO1およびpXO2に所持される遺伝子を検出する、オリゴヌクレオチド試験の既知の標準を提供した。
プラスミドpXO1およびプラスミドpXO2に対するプローブ
二次構造が最小限であり、そしてTmが約59〜75℃の範囲である、pagA(配列番号33)配列およびcapB(配列番号34)配列内の領域を選択することによって、プローブを設計した。本実施例は、各標的配列に対する2つのプローブを用いて得た結果を示す。
細菌溶解物の試験
実施例2に実質的に記載するようにプローブ混合物を用いて、一晩コロニーから調製した細菌細胞の溶解物を同様にアッセイした。これらの試験のため、血液寒天プレートに細菌を接種して、一晩(18〜24時間)増殖させた。接種したプレートからコロニーを選択し、そして2つの1μlループ分の細菌を0.3mlの溶解試薬(0.1%LLS、20mMコハク酸リチウム、1mM EDTA、pH5.5)に添加し、そして混合物を100〜105℃で15分間加熱し、そして次いで水槽超音波処理装置中で15分間超音波処理した。ハイブリダイゼーション反応のため、配列番号4(塩基9および10の間でリンカーを用いて標識)、配列番号7(塩基13および14の間でリンカーを用いて標識)、配列番号9(塩基12および13の間でリンカーを用いて標識)、および配列番号11(塩基12および13の間でリンカーを用いて標識)のAE標識プローブを含有する、50μlの2Xハイブリダイゼーション試薬(20mM EGTA、20mM EDTA、2%LLS、100mMコハク酸、1.2M塩化リチウム、230mM水酸化リチウム、pH4.7)に、50μlの超音波処理した溶解物を添加して、理論的にはプローブあたり最大4x106RLUを達成し、そして混合物を60℃で20〜30分間インキュベーションして、ハイブリダイゼーションを可能にした。加水分解(pH8.5で塩基試薬を添加した後、60℃で10分間)によって、未結合プローブ上の標識を不活性化し、そして照度計を用いることによって、結合プローブについて検出されたRLUを測定した。40,000より高いRLUが検出されたらアッセイを「陽性」とスコア付けし、20,000より低いRLUが検出されたらアッセイを「陰性」とスコア付けし、そして20,001〜39,999の間のRLUが検出されたら「疑わしい」とスコア付けした。大部分の場合、元来の溶解物の1以上のさらなるアリコットに対して試験を反復することによって、疑わしいアッセイを陰性または陽性いずれかに決定した。試験は「盲検」様式で行われ、すなわち1人の人が試料を調製し、そして含有される試料が何であるかを知らず、そして結果が得られた後に試料の内容物を知る、第二の人によって、アッセイを行った。各試料溶解物に関して、二つ組以上のアッセイを行った。陰性対照は、セレウス菌の溶解物であり、1つの陽性対照は、pXO1およびpXO2両方を含有する炭疽菌(pXO1+/pXO2+、パスツール株)の溶解物であり、そして別の陽性対照は、pXO1プラスミドのみを含有する炭疽菌(pXO1+/pXO2−、スターン株)であった。セレウス菌溶解物は、常に陰性結果を提供し、炭疽菌pXO1+/pXO2+溶解物は、常に陽性結果を提供し、そして炭疽菌pXO1+/pXO2−溶解物は、陽性または疑わしい結果を提供した。セレウス菌および炭疽菌pXO1+/pXO2+の2:1混合物から作成した溶解物は、疑わしい結果を提供した(平均31,925RLU)。実験試料(すなわち対照試料を含まない)に対して行った試験の累積結果を表2に示す。
セレウス菌複合群種における23S rRNA配列の検出
本実施例は、23S rRNA配列およびrRNAをコードするDNAが、配列番号32の標的配列に特異的な配列番号35のオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって、セレウス菌複合群のメンバーを検出可能であることを示す。本実施例はまた、20分間インキュベーションした後のプローブおよび標的配列のハイブリダイゼーションが、ハイブリダイゼーション複合体の検出を可能にするのに十分であったことを示す。これらの試験のため、オリゴヌクレオチドに対してリンカーを用いて、配列番号35のプローブオリゴヌクレオチドを、残基10および11間で、AEで標識した。
capB標的配列の検出
これらの実験において、標的核酸としてプラスミドにクローニングされたcapB配列(配列番号34)を用いて、capB標的配列に特異的なプローブを試験した。標準法を用いることによって、配列番号34を含有するプラスミドDNAをトランスフェクション大腸菌から単離し、標準的分光光度法を用いることによって定量化し、そして損なわれていない環状プラスミドまたは直鎖プラスミドDNA(すなわち制限エンドヌクレアーゼで切断することによって直鎖にしたもの)いずれかとしてハイブリダイゼーション試験に用いた。標的DNAをハイブリダイゼーション反応あたり、2x107〜2x109コピーでアッセイした(環状DNAでは2x107および2x108、そして直鎖DNAでは2x108および2x109)。標識プローブは配列番号9または配列番号11のオリゴマーであり、これらオリゴマーを、さらなる非標識オリゴヌクレオチド(配列番号10、配列番号11、配列番号12)を伴い、または伴わず、ハイブリダイゼーション反応に用いた。非標識オリゴヌクレオチドは、あらかじめリンカーアームを介してAE標識されていたが、オリゴヌクレオチドをこれらの反応に用いる前に、AE標識を加水分解した。
(実施例6)
ハイブリダイゼーションによる、capBおよびpagA配列の検出
本実施例は、配列番号9および配列番号11の標識capB特異的プローブ、並びに配列番号4および配列番号7の標識pagA特異的プローブを、ヘルパーとして働きうる非標識オリゴマーを伴いまたは伴わずに用いることによって、実施例5に記載するのと類似の方法を用いて、調製した試料中のプラスミドが所持するcapBおよびPagA配列を検出した。capB特異的非標識オリゴマーは、配列番号10および配列番号12のものであり、そしてpagA特異的非標識オリゴマーは、配列番号3および配列番号8のものであった。capBおよびpagA標的配列(実施例1に記載するように、それぞれ配列番号34および配列番号33)を含有する環状プラスミドDNAを、ハイブリダイゼーション反応あたり、2x108および2x109コピー用いた。
(実施例7)
炭疽菌における、ハイブリダイゼーションによるcapBおよびpagA配列の検出
これらの試験において、実施例4に実質的に記載するように、試料をプロセシングした。用いた細胞は、炭疽菌(スターン株)またはセレウス菌であった。簡潔には、血液寒天プレート上で細胞を一晩増殖させ、そして1μlループ分の細胞を各試験試料に関して収集し、0.15mlの溶解試薬に懸濁し、混合し、そして100℃で15分間加熱して、細胞を溶解させた。真性細菌配列を検出するのに、配列番号40の標識プローブ(配列番号41、42および43の非標識ヘルパーオリゴマーを伴う)を用いて試験するため、5μlの溶解物を実施例4に記載するように、1ml溶液に希釈し、ここから0.1mlを取って、セレウス菌および炭疽菌両方に存在するrRNAおよび/またはrRNA配列をコードするDNAに対するハイブリダイゼーション試験に用いた。各生物に対して、塩基プロセシングを伴わずにハイブリダイゼーションに溶解物を用いるか、または実施例4に記載するように、塩基プロセシングされた溶解物を作成するために、処理した。二つ組試料を調製し、そして炭疽菌溶解物に関して試験した。0.1mlの希釈溶解物または塩基プロセシングした溶解物をAE標識プローブ(各々約0.08〜0.1pmol)と混合して用い、反応あたりプローブあたり約1x107RLUを提供して、実施例4に実質的に記載するように、ハイブリダイゼーション反応を行った。標識プローブは、実施例6に記載するようにpagAおよびcapB配列を検出する配列番号4、配列番号7、配列番号9、および配列番号11の混合物、あるいは真性細菌種に一般的なrRNAまたはrRNA配列をコードするDNA(Hoganら、米国特許第5,679,520号)を検出する配列番号40(配列番号41、42および43の非標識ヘルパーオリゴマーを伴う)の混合物いずれかであった。ハイブリダイゼーション反応を60℃で45分間インキュベーションし、そして次いで0.3mlの選択試薬を添加し、そして混合物を60℃で10分間インキュベーションして、その後、照度計(LEADER(登録商標)450)で発光シグナル(RLU)を検出した。陰性対照は、標的核酸を含有しないが、実験試料に存在する実質的に同一の試薬で構成された。陽性対照は、それぞれのプローブに特異的にハイブリダイズする標的核酸、すなわち相補的pagAおよびcapB配列を含有する合成ssDNA、または真性細菌プローブに相補的な配列を含有する大腸菌rRNAを含有した。表8に示す結果は、配列番号4、7、9および11のプローブを用いて行うアッセイの試料あたり4回の試験の平均RLU、並びに陰性対照の試料あたり2回の試験の平均RLU、並びに配列番号40のプローブ(配列番号41、42および43の非標識オリゴマーを伴う)を用いて行う試験である。
Claims (33)
- 配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号34、標的配列いずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなる炭疽菌(B.anthracis)標的配列に含有される配列に特異的にハイブリダイズする、約20〜約40ヌクレオチドのオリゴヌクレオチド。
- 配列番号21、配列番号22、配列番号23、または配列番号24、pagA標的配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなる配列に含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項1のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号1または配列番号2からなる配列を有し、配列番号21に含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項2のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号3または配列番号4からなる配列を有し、配列番号22に含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項2のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号5または配列番号6からなる配列を有し、配列番号23に含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項2のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号7または配列番号8からなる配列を有し、配列番号24に含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項2のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号25または配列番号26、capB標的配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなる配列に含有されるcapB標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項1のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号9、配列番号10、配列番号11、または配列番号12からなる配列を有し、配列番号25に含有されるcapB標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項7のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号13または配列番号14からなる配列を有し、配列番号26に含有されるcapB標的配列に特異的にハイブリダイズする、請求項7のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号31、その相補配列、またはRNA均等物からなる標的配列に含有されるバチルス属(Bacillus)種の16S rRNAまたは16S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする、約18〜40塩基のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号37、配列番号38、または配列番号39からなる配列を有する、請求項10のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号32、その相補配列、またはRNA均等物からなる標的配列に含有されるバチルス属種の23S rRNAまたは23S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする、約20〜50塩基のオリゴヌクレオチド。
- 配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号35、または配列番号36からなる配列を有する、請求項12のオリゴヌクレオチド。
- DNA主鎖もしくはRNA主鎖、または混合DNAおよびRNA主鎖を有するか、あるいは塩基を連結する少なくとも1つの2’−メトキシRNA基を含有する、請求項1のオリゴヌクレオチド。
- DNA主鎖もしくはRNA主鎖、または混合DNAおよびRNA主鎖を有するか、あるいは塩基を連結する少なくとも1つの2’−メトキシRNA基を含有する、請求項10のオリゴヌクレオチド。
- DNA主鎖もしくはRNA主鎖、または混合DNAおよびRNA主鎖を有するか、あるいは塩基を連結する少なくとも1つの2’−メトキシRNA基を含有する、請求項12のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドに直接または間接的に連結されたシグナル産生標識を有する、請求項1のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドに直接または間接的に連結されたシグナル産生標識を有する、請求項10のオリゴヌクレオチド。
- オリゴヌクレオチドに直接または間接的に連結されたシグナル産生標識を有する、請求項12のオリゴヌクレオチド。
- 試料中の炭疽菌核酸を検出する方法であって:
炭疽菌核酸を含有する試料を提供し;
pXO1プラスミドに含有されるpagA標的配列に特異的にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブ、およびpXO2プラスミドに含有されるcapB標的配列に特異的にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブを提供し;
少なくとも1つのプローブをpagA標的配列に、または少なくとも1つのプローブをcapB標的配列に、あるいは少なくとも1つのプローブをpagA標的配列にそして少なくとも1つのプローブをcapB標的配列に、特異的にハイブリダイズさせ;そして
pagA標的配列またはcapB標的配列にハイブリダイズした少なくとも1つのプローブの存在を検出して、試料中の炭疽菌の存在を示す
工程を含んでなる、前記方法。 - pagA標的配列が、配列番号33、またはその相補配列、またはRNA均等物の配列に含有され、そしてcapB標的配列が、配列番号34、またはその相補配列、またはRNA均等物の配列に含有される、請求項20の方法。
- pagA標的配列が、配列番号21、配列番号22、配列番号23、または配列番号24、これらの配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなる配列に含有され、そしてcapB標的配列が、配列番号25または配列番号26、これらの配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなる配列に含有される、請求項20の方法。
- ハイブリダイズ工程が、pagA標的配列に特異的な少なくとも1つのプローブであって、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、または配列番号8の配列を有するオリゴヌクレオチドである、前記プローブを含む、請求項20の方法。
- ハイブリダイズ工程が、capB標的配列に特異的な少なくとも1つのプローブであって、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、または配列番号14からなる配列を有するオリゴヌクレオチドである、前記プローブを含む、請求項20の方法。
- セレウス菌(B.cereus)複合種のなかで保存されている16Sまたは23S rRNA配列あるいは16Sまたは23S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブを提供し、少なくとも1つのプローブを、セレウス菌複合種のなかで保存されている16Sまたは23S rRNA配列あるいは16Sまたは23S rRNA配列をコードするDNAにハイブリダイズさせ、そしてセレウス菌複合種のなかで保存されている16Sまたは23S rRNA配列あるいは16Sまたは23S rRNA配列をコードするDNAにハイブリダイズした少なくとも1つのプローブの存在を検出し、それによって、試料中のセレウス菌複合生物の存在を示す工程をさらに含んでなる、請求項20の方法。
- 16S rRNAまたは16S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブが、配列番号31、その相補配列、またはRNA均等物からなる配列に含有される配列に特異的にハイブリダイズする、18〜40塩基のオリゴヌクレオチドである、請求項25の方法。
- オリゴヌクレオチドが、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号37、配列番号38、または配列番号39からなる配列を有する、請求項26の方法。
- 23S rRNAまたは23S rRNA配列をコードするDNAに特異的にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブが、配列番号32、その相補配列、またはRNA均等物からなる配列に含有される配列に特異的にハイブリダイズする、20〜50塩基のオリゴヌクレオチドである、請求項25の方法。
- オリゴヌクレオチドが、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号35、または配列番号36からなる配列を有する、請求項28の方法。
- 提供工程が、真性細菌種に存在する遺伝子配列に特異的にハイブリダイズするプローブを提供することをさらに含み、ハイブリダイズ工程が、プローブを、真性細菌種に存在する遺伝子配列に特異的にハイブリダイズさせることをさらに含み、そして検出工程が、真性細菌種に存在する遺伝子配列にハイブリダイズしたプローブを検出し、それによって、バチルス属配列がアッセイ中でまったく検出されなかった際も、方法工程が適切に行われたことを示す工程をさらに含む、請求項25の方法。
- プローブが配列番号40からなる配列を有し、そして配列番号40のプローブが検出されることが、試料中に真性細菌が存在することを示す、請求項30の方法。
- 配列番号21、配列番号22、配列番号23、または配列番号24、これらの配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなるpagA標的配列に含有される配列にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブ、および配列番号25または配列番号26、これらの配列のいずれか1つの相補配列、またはRNA均等物からなるcapB標的配列に含有される配列に特異的にハイブリダイズする少なくとも1つのプローブを含んでなる、請求項20の方法を実施するためのキット。
- 配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、または配列番号8の配列を有するオリゴヌクレオチドである、pagA標的配列に特異的な少なくとも1つのプローブ、および配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、または配列番号14からなる配列を有するオリゴヌクレオチドである、capB標的配列に特異的な少なくとも1つのプローブを含んでなる、請求項32のキット。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102200925B1 (ko) * | 2019-07-30 | 2021-01-13 | 대한민국(질병관리청장) | 보툴리눔균 (독소 a형)을 포함하는 생물테러 병원체 또는 그의 아형 병원체 15종을 신속하게 검출하기 위한 실시간 유전자 시험방법 |
Families Citing this family (37)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7666588B2 (en) | 2001-03-02 | 2010-02-23 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy |
US7226739B2 (en) | 2001-03-02 | 2007-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc | Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations |
US20030027135A1 (en) | 2001-03-02 | 2003-02-06 | Ecker David J. | Method for rapid detection and identification of bioagents |
WO2004060278A2 (en) | 2002-12-06 | 2004-07-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals |
US20040121309A1 (en) | 2002-12-06 | 2004-06-24 | Ecker David J. | Methods for rapid detection and identification of bioagents in blood, bodily fluids, and bodily tissues |
US8073627B2 (en) | 2001-06-26 | 2011-12-06 | Ibis Biosciences, Inc. | System for indentification of pathogens |
US7217510B2 (en) | 2001-06-26 | 2007-05-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for providing bacterial bioagent characterizing information |
WO2004070001A2 (en) | 2002-11-15 | 2004-08-19 | Gen-Probe Incorporated | Assay and compositions for detection of bacillus anthracis nucleic acid |
US8057993B2 (en) | 2003-04-26 | 2011-11-15 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of coronaviruses |
US8158354B2 (en) | 2003-05-13 | 2012-04-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture |
US7964343B2 (en) | 2003-05-13 | 2011-06-21 | Ibis Biosciences, Inc. | Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture |
US8242254B2 (en) | 2003-09-11 | 2012-08-14 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of bacteria |
US8097416B2 (en) | 2003-09-11 | 2012-01-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of sepsis-causing bacteria |
US8546082B2 (en) | 2003-09-11 | 2013-10-01 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for identification of sepsis-causing bacteria |
US8163895B2 (en) | 2003-12-05 | 2012-04-24 | Ibis Biosciences, Inc. | Compositions for use in identification of orthopoxviruses |
US7666592B2 (en) | 2004-02-18 | 2010-02-23 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent |
JP4810533B2 (ja) | 2004-05-24 | 2011-11-09 | アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド | ディジタルスレショルド化による選択的イオン濾過作用を用いた質量分光測定法 |
US20050266411A1 (en) | 2004-05-25 | 2005-12-01 | Hofstadler Steven A | Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA |
US7811753B2 (en) | 2004-07-14 | 2010-10-12 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for repairing degraded DNA |
CA2600184A1 (en) | 2005-03-03 | 2006-09-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for use in identification of adventitious viruses |
US8084207B2 (en) | 2005-03-03 | 2011-12-27 | Ibis Bioscience, Inc. | Compositions for use in identification of papillomavirus |
US7601499B2 (en) | 2005-06-06 | 2009-10-13 | 454 Life Sciences Corporation | Paired end sequencing |
US8026084B2 (en) | 2005-07-21 | 2011-09-27 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid identification and quantitation of nucleic acid variants |
FI118690B (fi) * | 2005-12-08 | 2008-02-15 | Simo Nikkari | Diagnostinen menetelmä ja siinä käyttökelpoisia tuotteita |
EP2064332B1 (en) | 2006-09-14 | 2012-07-18 | Ibis Biosciences, Inc. | Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens |
WO2008104002A2 (en) | 2007-02-23 | 2008-08-28 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods for rapid forensic dna analysis |
WO2008151023A2 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-11 | Ibis Biosciences, Inc. | Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids |
WO2010033627A2 (en) | 2008-09-16 | 2010-03-25 | Ibis Biosciences, Inc. | Sample processing units, systems, and related methods |
WO2010033599A2 (en) | 2008-09-16 | 2010-03-25 | Ibis Biosciences, Inc. | Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods |
US8534447B2 (en) | 2008-09-16 | 2013-09-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Microplate handling systems and related computer program products and methods |
US8158936B2 (en) | 2009-02-12 | 2012-04-17 | Ibis Biosciences, Inc. | Ionization probe assemblies |
US8950604B2 (en) | 2009-07-17 | 2015-02-10 | Ibis Biosciences, Inc. | Lift and mount apparatus |
WO2011008972A1 (en) | 2009-07-17 | 2011-01-20 | Ibis Biosciences, Inc. | Systems for bioagent identification |
US9890408B2 (en) | 2009-10-15 | 2018-02-13 | Ibis Biosciences, Inc. | Multiple displacement amplification |
RU2486524C1 (ru) * | 2011-11-09 | 2013-06-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Способ определения летального фактора сибирской язвы на основе иммунодетекции, сопряженной с полимеразной цепной реакцией |
CN113444816B (zh) * | 2021-05-12 | 2022-08-02 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种基于CRISPR-Cas系统可视化检测炭疽芽胞杆菌及其耐药性的方法 |
CN113462799B (zh) * | 2021-08-05 | 2023-06-20 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种基于染色体特异探针的炭疽芽胞杆菌鉴定方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001021656A2 (en) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | The Government Of The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Mutated anthrax toxin protective antigen proteins that specifically target cells containing high amounts of cell-surface metalloproteinases or plasminogen activator receptors |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5614361A (en) | 1981-09-25 | 1997-03-25 | Webster, Jr.; John A. | Method for identifying and characterizing organisms |
CA2009200A1 (en) | 1989-02-02 | 1990-08-02 | Barbara C. Gebbia | Air freshener |
US5840312A (en) | 1991-05-02 | 1998-11-24 | Institut Pasteur | Recombinant Bacillus anthracis strains unable to produce the lethal factor protein or edema factor protein |
US5677274A (en) | 1993-02-12 | 1997-10-14 | The Government Of The United States As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Anthrax toxin fusion proteins and related methods |
US5591631A (en) | 1993-02-12 | 1997-01-07 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Anthrax toxin fusion proteins, nucleic acid encoding same |
JPH06253847A (ja) | 1993-03-04 | 1994-09-13 | Chisso Corp | 炭疽菌検出のためのオリゴヌクレオチドおよびそれを用いた検出方法 |
JPH06253846A (ja) | 1993-03-04 | 1994-09-13 | Chisso Corp | 炭疽菌検出のためのポリヌクレオチドおよびそれを用いた炭疽菌の検出方法 |
JPH06261760A (ja) | 1993-03-10 | 1994-09-20 | Chisso Corp | 炭疽菌検出のためのポリヌクレオチドおよびそれを用いた炭疽菌の検出方法 |
JPH06261759A (ja) | 1993-03-10 | 1994-09-20 | Chisso Corp | 炭疽菌検出のためのオリゴヌクレオチドおよびそれを用いた検出方法 |
US6156501A (en) | 1993-10-26 | 2000-12-05 | Affymetrix, Inc. | Arrays of modified nucleic acid probes and methods of use |
US5874046A (en) | 1996-10-30 | 1999-02-23 | Raytheon Company | Biological warfare agent sensor system employing ruthenium-terminated oligonucleotides complementary to target live agent DNA sequences |
JPH114692A (ja) | 1997-03-24 | 1999-01-12 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | バチラスチュウリンジェンシス検出のためのオリゴヌクレオチドおよびそれを用いた検出法 |
US6087104A (en) | 1997-03-24 | 2000-07-11 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Oligonucleotides for detection of Bacillus cereus group bacteria harmful to mammals, and method of detection with the oligonucleotides |
JPH114693A (ja) | 1997-03-24 | 1999-01-12 | Nippon Suisan Kaisha Ltd | 炭疽菌検出のためのオリゴヌクレオチドおよびそれを用いた検出法 |
EP1840220A3 (en) | 1998-04-01 | 2007-10-24 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Anthrax lethal factor is a MAPK kinase protease |
US6770479B1 (en) | 1998-07-10 | 2004-08-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Anthrax vaccine |
DE19915141C2 (de) | 1999-03-26 | 2002-11-21 | Artus Ges Fuer Molekularbiolog | Detektion von Nucleinsäure-Amplifikaten |
US6387621B1 (en) | 1999-04-27 | 2002-05-14 | University Of Utah Research Foundation | Automated analysis of real-time nucleic acid amplification |
US20020051791A1 (en) | 1999-12-22 | 2002-05-02 | Galloway Darrel R. | Methods for protection against lethal infection with bacillus anthracis |
US6828110B2 (en) | 2000-01-06 | 2004-12-07 | Biosite Incorporated | Assays for detection of Bacillus anthracis |
US20020055628A1 (en) | 2000-04-26 | 2002-05-09 | Keim Paul S. | Multilocus repetitive DNA sequences for genotyping bacillus anthracis and related bacteria |
GB0016702D0 (en) * | 2000-07-08 | 2000-08-23 | Secr Defence Brit | Expression system |
US6448016B1 (en) | 2001-06-12 | 2002-09-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Nucleotide sequences for detection of Bacillus anthracis |
DE60324395D1 (de) * | 2002-03-04 | 2008-12-11 | Us Army Med Res Mat Command | Interne positive kontrolle für auf sonden basierende nukleinsäuremolekül-assays und verfahren zur herstellung und verwendung davon |
US7052848B2 (en) * | 2002-03-04 | 2006-05-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Internal positive control for probe-based nucleic acid molecule assays and methods of making and using thereof |
EP1487858A4 (en) | 2002-03-21 | 2006-01-04 | Boston Probes Inc | PNA OLIGOMERS, OLIGOMER SETS, PROCESSES AND KITS FOR DETECTION OF BACILLUS ANTHRACIS |
WO2004070001A2 (en) | 2002-11-15 | 2004-08-19 | Gen-Probe Incorporated | Assay and compositions for detection of bacillus anthracis nucleic acid |
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2007
- 2007-10-31 US US11/931,469 patent/US8293885B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001021656A2 (en) * | 1999-09-24 | 2001-03-29 | The Government Of The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Mutated anthrax toxin protective antigen proteins that specifically target cells containing high amounts of cell-surface metalloproteinases or plasminogen activator receptors |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6009020279, Biosen.Bioelectron.,Vol.15(2000)p.549−578 * |
JPN6009020280, J.Clin.Microbiol.,Vol.40,No.8(Aug.2002)p.2897−2902 * |
JPN6009020281, FEMS Microbiol.Lett.,Vol.145(1996)p.9−16 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102200925B1 (ko) * | 2019-07-30 | 2021-01-13 | 대한민국(질병관리청장) | 보툴리눔균 (독소 a형)을 포함하는 생물테러 병원체 또는 그의 아형 병원체 15종을 신속하게 검출하기 위한 실시간 유전자 시험방법 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2506151C (en) | 2010-08-03 |
US20120171669A1 (en) | 2012-07-05 |
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