JP2006342172A - グルカゴン様ペプチド−2、ならびにその治療への使用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】脊椎動物のGLP-2および少なくとも1個のアミノ酸の付加、欠失、置換またはN末端もしくはC末端アミノ酸ブロッキング基を有するアミノ酸が組み込まれているという点で脊椎動物のGLP-2と異なっている腸管栄養性の脊椎動物GLP-2類似体から選択されるGLP-2ペプチド、および製剤学的に許容される担体を含んでなり、ただしGLP-2ペプチドがヒトGLP-2である場合、該担体は0.9%食塩水それ自体でない、医薬組成物。
【選択図】なし
Description
1) 少なくとも1個のアミノ酸の置換、欠失、付加、またはブロッキンング基をもつアミノ酸を有する腸管栄養性GLP−2類似体を得、
2) ラットGLP−2のために利用したとき腸管栄養効果を引き出すことができるレジメを用いて、哺乳動物を上記類似体で治療し、そして
3) 偽治療した対照の哺乳動物と比べて、小腸の重さ、および/または陰窩+絨毛の高さおよび/または膵島の大きさに及ぼす上記類自体の効果を判定し、その結果として上記重さおよび/または上記高さおよび/または上記大きさの増加を引き出す類似体として上記腸管栄養性ペプチドを同定する、
工程を含むものである。
His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp を基本とし、配列中の1個以上のアミノ酸残基の別のアミノ酸残基への保存的な置換が、類似体がなおも腸管栄養活性(たとえば、小腸の成長、膵島の成長、および/または陰窩/絨毛の高さ)を保持するようなかたちで生じているものである。
I. Ala, Ser, Thr (Pro, Gly)
II. Asn, Asp, Glu, Gln
III. His, Arg, Lys
IV. Met, Leu, Ile, Val (Cys)
V. Phe, Tyr, Trp
式中、aaは任意のアミノ酸残基を表し、aa1からaa6は、異なった種から得られたGLP−2配列同士での変異が公知の残基位置であり、そして
Xは、グループIIIから選ばれる1又は2個のアミノ酸、たとえば、Arg、Lys又はArg-Argであり、
Yは、グループIIIから選ばれる1又は2個のアミノ酸、たとえば、Arg、Lys又はArg-Argであり、
mは、0又は1であり、
nは、0又は1であり、
R1は、H又はN末端ブロッキング基であり、
R2は、OH又はC末端ブロッキング基である。
aa1は、グループIVから選ばれ、
aa2は、グループI又はIIから選ばれ、
aa3は、グループIから選ばれ、
aa4は、グループIIIから選ばれ、
aa5は、グループIVから選ばれ、
aa6は、グループII又はIIIから選ばれる
ものとして定義される。
aa1は、Ile又はValであり、
aa2は、Asn又はSerであり、
aa3は、Ala又はThrであり、
aa4は、Lys又はArgであり、
aa5は、Ile又はLeuであり、
aa6は、Gln又はHisである
として選ばれるものである。
式中、aa3、Y、m、X、n、R1およびR2は、上記定義のとおりである。
His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Thr-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp、
2)Thr19 がAla19 となっているラットGLP−2の均等配列である下記のヒトGLP−2:
His-Ala-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-Ile-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Asn-Trp-Leu-Ile-Gln-Thr-Lys-Ile-Thr-Asp、
3)[Ile13 がVal13 に、Asn16 がHis16 に、Lys20 がArg20 となっている]ラットGLP−2の均等配列であるデグーGLP−2、ならびに
4)N末端ブロッキング基を有するおよび/または、N末端が、たとえばArg又はArg-Argによって伸長しているおよび/または、C末端ブロッキング基を有するおよび/または、C末端が、たとえばArg又はArg-Argによって伸長しているGLP−2ならびにGLP−2類似体。
C18、15−20μm幅孔、2インチx12インチ、逆相シリカカラムで、アセトニトリル修飾した水中の0.1%TFAのグラジエント溶出を用いて精製した。溶出は220ナノメーター(nm)でモニターした。回収した各分画を、分析用HPLCにより、Vydac C18、5μm、4.6x254ミリメーター(mm)、逆相シリカカラムで、アセトニトリル修飾した水中の0.1%TFAのグラジエント溶出を用いて、215nmでモニターしながら純度を分析した。95%以上の純度を示す分画を集めて凍結乾燥した。必要な場合にはアセトニトリルを添加して溶解を助けることにより、凍結乾燥した粉末を水中に溶解し、TFA塩からペプチドの酢酸塩を調製した。溶液をプロトン化Bio-Rex 70カチオン交換樹脂を通した。樹脂を5ベッド容量の水で洗浄し、樹脂結合ペプチドを水中の50%酢酸で溶出した。溶出物を水で希釈し凍結乾燥した。
a)配列番号3のラットGLP−2;
b)N−アセチルラットGLP−2、これはラットGLP−2のアミノ末端がアセチル基でブロックされている;
c)[Arg+1]ラットGLP−2、これはアミノ末端にArg残基が1個付加することによって修飾されたラットGLP−2である;
d)C−アミドラットGLP−2、これはカルボキシル末端にアミド基が付加したラットGLP−2である(1mgの溶解は1%酢酸(110μL)中で達成でき、5N NaOHを450μLで中和する);
e)[Arg+1,+2]ラットGLP−2、これはアミノ末端にArg残基が2個付加することによって修飾されたラットGLP−2である;
f)[Arg+34]ヒトGLP−2、これは残基33の後にArg残基が付加されたヒトGLP−2である;及び
g)degu GLP−2。
これらのペプチドは特記しない限り、室温で水によく溶解する。
上述の明細書は当業者が本発明を実施するのに十分である。実際、分子生物学、医学又は関連分野の当業者にとって自明な、本発明を実施するための上述の手段を様々に修飾したものは、以下の請求の範囲内に入ることを意図するものである。
Claims (35)
- 脊椎動物のGLP-2および少なくとも1個のアミノ酸の付加、欠失、置換またはN末端もしくはC末端アミノ酸ブロッキング基を有するアミノ酸が組み込まれているという点で脊椎動物のGLP-2と異なっている腸管栄養性の脊椎動物GLP-2類似体から選択されるGLP-2ペプチド、および製剤学的に許容される担体を含んでなり、ただしGLP-2ペプチドがヒトGLP-2である場合、該担体は0.9%食塩水それ自体でない、医薬組成物。
- 脊椎動物のGLP-2および少なくとも1個のアミノ酸の付加、欠失、置換またはN末端もしくはC末端アミノ酸ブロッキング基を有するアミノ酸が組み込まれているという点で脊椎動物のGLP-2と異なっている腸管栄養性の脊椎動物GLP-2類似体から選択されるGLP-2ペプチド、および製剤学的に許容される担体を含んでなる、発熱性物質の存在しない医薬組成物。
- 脊椎動物のGLP-2および少なくとも1個のアミノ酸の付加、欠失、置換またはN末端もしくはC末端アミノ酸ブロッキング基を有するアミノ酸が組み込まれているという点で脊椎動物のGLP-2と異なっている腸管栄養性の脊椎動物GLP-2類似体から選択されるGLP-2ペプチド、および製剤学的に許容される担体を含んでなる、濾過滅菌されている医薬組成物。
- aa1がMet、Leu、lle、Va1およびCysから選択され、
aa2がA1a、Ser、Thr、Pro、Gly、Asn、Asp、GluおよびGlnから選択され、
aa3がA1a、Ser、Thr、ProおよびGlyから選択され、
aa4がHis、ArgおよびLysから選択され、
aa5がMet、Leu、lle、ValおよびCysから選択され、
aa6がAsn、Asp、Glu、G1n、His、ArgおよびLysから選択される、
請求項4に記載の医薬組成物。 - GLP-2ペプチドが脊椎動物のGLP-2である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- GLP-2ペプチドが哺乳動物のGLP-2である、請求項7に記載の医薬組成物。
- GLP-2ペプチドがラットGLP-2である、請求項8に記載の医薬組成物.
- GLP-2がヒトGLP-2または、ヒトGLP-2に対して、少なくとも1個のアミノ酸の付加、欠失、置換またはN末端もしくはC末端ブロッキング基が組み込まれている腸管栄養性のヒトGLP-2類似体である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- GLP-2ペプチドがヒトGLP-2である、請求項10に記載の医薬組成物.
- 脊椎動物のGLP-2ペプチドに対して、少なくとも1個のアミノ酸の置換、欠失、付加、またはN末端もしくはC末端ブロッキング基が組み込まれている腸管栄養性の脊椎動物GLP-2ペプチド類似体、および製剤学的に許容される担体を含んでなる医薬組成物。
- 注射または注入により投与するのに適した液体形態にある、請求項1〜12のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 医薬組成物の投与後に該GLP-2ペプチドの遅延放出を引き起こすために製剤化された、請求項1〜13のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 経口送達用に製剤化された、諸求項1〜14のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- GLP-2が胃腸組織の成長を促進させるのに有効な量で存在する、請求項I〜15のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- GLP-2ペプチドが膵島の成長を促進させるのに有効な量で存在する、請求項1〜15のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 製剤学的に許容されるGLP-2ペプチドの酸付加塩。
- GLP-2ペプチドが哺乳動物のGLP-2ペプチドである、請求項18に記載の製剤学的に許容されるGLP-2ペプチドの酸付加塩。
- GLP-2ペプチドがヒトGLP-2である、請求項19に記載の製剤学的に許容されるGLP-2ペプチドの酸付加塩。
- 新規な腸管栄養性ペプチドを同定する方法であって、
a) 少なくとも1個のアミノ酸の置換、欠失、付加、またはブロッキング基をもつアミノ酸を有する、腸管栄養性の脊椎動物GLP-2ペプチドの類似体を取得し、
b) ラットGLP-2のために利用したとき腸管栄養効果を引き出すことができるレジメを用いて、哺乳動物を上記類似体で治療し、そして
c) 偽治療した対照の哺乳動物と比べて、小腸の重さおよび/または陰窩+絨毛の高さおよび/または膵島の大きさに及ぼす上記類似体の効果を判定し、その結果として上記重さおよび/または上記高さおよび/または上記大きさの増加を引き出す類似体として上記腸管栄養性ペプチドを同定する、
ことを含んでなる方法。 - 胃腸組織の成長および/または機能を促進させる、請求項1〜16のいずれか1項に記載の医薬組成物を製造するためのGLP-2ペプチドの使用。
- 前記医薬組成物が小腸組織の成長および/または機能を促進させるためのものである、請求項22に記載のGLP-2ペプチドの使用。
- 前記医薬組成物が胃腸の症状、障害または疾病を予防または治療するためのものである、請求項22に記載のGLP-2ペプチドの使用。
- 前記医薬組成物が潰瘍、消化障害、吸収不良症候群、短胃腸症候群、盲腸症候群、炎症性腸疾患、セリアックスプルー、熱帯性スプルー、低ガンマグロブリン血症スプルー、腸炎、限局性腸炎(クローン病)、毒性の薬剤または他の化学療法剤による小腸損傷、および短腸症候群よリ成る群がら選ばれる胃腸の疾病、障害、または症状を治療するためのものである、請求項24に記載のGLP-2ペプチドの使用。
- 前記医薬組成物が短腸症候群を治療するためのものである、請求項25に記載のGLP-2ペプチドの使用。
- 前記医薬組成物が潰瘍、消化障害、吸収不良症候群、短胃腸症候群、盲腸症候群、炎症性腸疾患、セリアックスプルー、熱帯性スプルー、低ガンマグロブリン血症スプルー、腸炎、限局性腸炎(クローン病)、毒性の薬剤または他の化学療法剤による小腸損傷、および短腸症候群より成る群がら選ばれる胃腸の疾病、障害、または症状を予防するためのものである、請求項24に記載のGLP-2ペプチドの使用。
- 前記医薬組成物が化学療法剤による小腸損傷を予防するためのものである、請求項27に記載のGLP-2ペプチドの使用。
- 膵島の成長を促進する、請求項1〜15および17のいずれか1項に記載の医薬組成物を製造するためのGLP-2ペプチドの使用。
- 糖尿病治療用の、請求項17に記載の医薬組成物を製造するためのGLP-2ペプチドの使用。
- 哺乳動物のGLP-2に対して、少なくとも1個のアミノ酸の付加、欠失、置換またはN末端もしくはC末端にブロッキング基が組み込まれており、かつ腸管栄養活性を有するGLP-2ペプチド類似体。
- ヒトGLP-2類似体である、請求項33に記載のGLP-2ペプチド類似体。
- 胃腸組織のアポトーシスを抑制する、請求項1〜16のいずれか1項に記載の医薬組成物を製造するためのGLP-2ペプチドの使用。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の医薬組成物を含有するバイアルまたはアンプル、および胃腸障害または疾病を治療するためにその内容物を投与するための説明書を含んでなる包装品。
- 請求項18〜20のいずれか1項に記載の製剤学的に許容されるGLP-2の塩および製剤学的に許容される担体を含んでなる医薬組成物。
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