JP2006029921A - フローサイトメーター - Google Patents
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Abstract
【課題】元素を直接に測定することを可能にして、細胞や血球などの粒子における様々な元素間の相関を得ることができるようにする。
【解決手段】測定対象物を含む試料液を所定の流速で流して試料液流を生成する試料液流生成手段と、上記試料液流生成手段により生成された試料液流中の測定対象物に単色Ｘ線を照射する単色Ｘ線照射手段と、上記単色Ｘ線照射手段から照射された単色Ｘ線の測定対象物への照射に伴い該測定対象物を構成する元素から放出された蛍光Ｘ線を検出する蛍光Ｘ線検出手段とを有する。
【選択図】 図１
【解決手段】測定対象物を含む試料液を所定の流速で流して試料液流を生成する試料液流生成手段と、上記試料液流生成手段により生成された試料液流中の測定対象物に単色Ｘ線を照射する単色Ｘ線照射手段と、上記単色Ｘ線照射手段から照射された単色Ｘ線の測定対象物への照射に伴い該測定対象物を構成する元素から放出された蛍光Ｘ線を検出する蛍光Ｘ線検出手段とを有する。
【選択図】 図１
Description
本発明は、フローサイトメーターに関し、さらに詳細には、元素分析に用いて好適なフローサイトメーターに関する。
従来より、細胞、細胞内外構造体（細胞内小器官、膜表面抗原、細菌、ウィルス等）（本願においては、これらの「細胞、細胞内外構造体（細胞内小器官、膜表面抗原、細菌、ウィルス等）」を総称して、単に「粒子」と適宜に称する。）を蛍光で標識して、定量と分離とをする技術たる「フローサイトメトリー」という手法が知られている。
即ち、フローサイトメトリーとは、具体的には、標識した物質の懸濁液を高速の水流にし、当該高速の水流にレーザー光や水銀光を照射することにより発生する散乱光や蛍光を定量することによって、目的とする物質の量や大きさを精度よく測定したり、測定対象の細胞などの粒子を分取したりする手法である。
そして、こうしたフローサイトメトリーを実施する機器を「フローサイトメーター」と称している。
ここで、従来のフローサイトメーターにより実現されているフローサイトメトリーの効果について説明する。
即ち、上記したようにフローサイトメトリーは、例えば、細胞浮遊液を高速で流し測定することにより、細胞一個一個を解析研究するという手法であるが、従来のフローサイトメーターにおいては、まず細胞などの粒子を含む溶液をフローし、そこにレーザー光を照射して、散乱強度から細胞などの粒子の一個一個のサイズ、内部構造を測定するようになされている。その際に、細胞などの粒子の各々の相対的大きさおよび内部構造の違いを測定するのみならず、細胞などの粒子の蛍光標識からの蛍光を同時カウントしてその強度、色の違いを測定することによって、細胞などの粒子の一個一個について細胞種の同定や、溶液内の様々な細胞の存在比を分析することができるものである。
そして、上記のようにして取得された複数の情報を組み合わせることにより、一群の細胞について系統だった詳細な解析、例えば、細胞サイズと核蛍光などの解析を行うことができるものであり、こうした詳細な解析を行うことの意味合いは極めて大きいものであった。
つまり、ＤＮＡや蛋白質を定量的に染色する蛍光色素を使用すれば、それぞれの蛋白などの量を蛍光強度に置き換え、１つの細胞群における「生体物質の増減の相関」を測定することができることになるからである。
しかしながら、こうした従来のフローサイトメーターによるフローサイトメトリーにおいては、測定対象について「元素」という基本的な概念が欠如しているという大きな問題点があった。
即ち、通常は蛍光色素では元素自体の含有量を特定することができないため、従来のフローサイトメーターでは元素を直接測定してパラメータとして扱うことができないものであった。
一方、亜鉛や鉄の増減が知られる各種の腫瘍や、銅の著減で知られるウィルソン病などのように、特性元素の増減が関る数多くの疾患の存在が知られている。
さらに、薬剤耐性やアポトーシス、神経伝達、エネルギー代謝あるいは細胞周期など、特定元素と深くかかわるとされる代謝や生体反応は極めて多い。
ところが、従来のフローサイトメーターを用いたフローサイトメトリーでは元素の情報が得られず、また、他の方法では組織レベルで含有量の増減を指摘することができるのみであり、主因となる各元素の働きや現象のメカニズム解明までには至っていないという問題点があった。
なお、本願出願人が特許出願時に知っている先行技術は、上記において説明したようなものであって文献公知発明に係る発明ではないため、記載すべき先行技術情報はない。
本発明は、従来の技術に対する上記したような問題点に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、元素を直接に測定することを可能にして、細胞などの粒子における様々な元素間の相関を得ることができるようにしたフローサイトメーターを提供しようとするものである。
上記目的を達成するために、本発明は、細胞などの粒子の分析で現在広く使われているフローサイトメーターを改良してその性能を大幅に向上させ、元素を測定することを可能にして、細胞などの粒子における様々な元素間の相関を得ることができるようにしたものである。
即ち、従来のフローサイトメーターは、細胞などの粒子を含む溶液をフローし、そこにレーザー光を照射して、散乱強度から細胞などの粒子の一個一個のサイズ、内部構造を測定すると同時に、色素標識からの光を測定することで、細胞などの粒子に含まれる特定のタンパクやＤＮＡの量について相関分布を解析している。
一方、本発明によるフローサイトメーターは、色素ではなく元素の量を直接測定することにより、細胞などの粒子における様々な元素間の相関を解析可能としたものである。
本発明によるフローサイトメーターにおいては、励起用の光源に従来のようなレーザーを用いるのではなく、単色Ｘ線、例えば、高輝度の硬Ｘ線を用い、細胞などの粒子に含まれる様々な元素からの蛍光Ｘ線を同時測定することにより、色素ではなく元素の量を直接測定して細胞などの粒子における様々な元素間の相関を解析可能とした。
即ち、本発明のうち請求項１に記載の発明は、測定対象物を含む試料液を所定の流速で流して試料液流を生成する試料液流生成手段と、上記試料液流生成手段により生成された試料液流中の測定対象物に単色Ｘ線を照射する単色Ｘ線照射手段と、上記単色Ｘ線照射手段から照射された単色Ｘ線の測定対象物への照射に伴い該測定対象物を構成する元素から放出された蛍光Ｘ線を検出する蛍光Ｘ線検出手段とを有するようにしたものである。
また、本発明のうち請求項２に記載の発明は、本発明のうち請求項１に記載の発明において、上記単色Ｘ線照射手段から測定対象物へ照射される単色Ｘ線のビーム径を０．１μｍ以上５００μｍ以下としたものである。
また、本発明のうち請求項３に記載の発明は、本発明のうち請求項１また２のいずれか１項に記載の発明において、上記単色Ｘ線照射手段から測定対象物へ照射される単色Ｘ線のビームの入射エネルギーを０．１ＫｅＶ以上１６ＫｅＶ以下としたものである。
また、本発明のうち請求項４に記載の発明は、本発明のうち請求項１、２また３のいずれか１項に記載の発明において、上記試料液流生成手段はチューブ内に試料液流を流し、上記単色Ｘ線照射手段は上記チューブ内の測定対象物に単色Ｘ線を照射するものであり、上記チューブの径を２０〜５００μｍとしたものである。
本発明は、以上説明したように構成されているので、元素を直接に測定することが可能になり、細胞などの粒子における様々な元素間の相関を得ることができるようになるという優れた効果を奏する。
以下、添付の図面を参照しながら、本発明によるフローサイトメーターの実施の形態の一例を詳細に説明するものとする。
図１には、本発明の実施の形態の一例によるフローサイトメーターの概念構成説明図が示されている。
このフローサイトメーター１０は、測定対象の細胞などの粒子（以下、「検体」と称する。）を含む試料液を所定の流速で流して試料液流を生成する試料液流生成手段としてのフローシステム１２と、フローシステム１２により生成された所定の流速の試料液流中の検体に単色Ｘ線を照射する単色Ｘ線照射手段としての単色Ｘ線照射システム１４と、単色Ｘ線照射システム１４から照射された透過および散乱Ｘ線を検出するＸ線検出手段としてのＸ線検出器１６と、単色Ｘ線照射システム１４から照射された単色Ｘ線の検体への照射に伴い当該検体を構成する各元素から放出された蛍光Ｘ線を検出する蛍光Ｘ線検出手段としての蛍光Ｘ線検出システム１８と、フローシステム１２により生成された所定の流速の試料液流中の検体にレーザー光を照射するレーザー光照射手段としてのレーザー光照射システム２０と、レーザー光照射システム２０から照射されたレーザー光の検体への照射に伴う当該レーザー光の前方散乱光を検出する前方散乱光検出手段としての前方散乱光検出システム２２と、レーザー光照射システム２０から照射されたレーザー光の検体への照射に伴う当該レーザー光の側方散乱光を検出する側方散乱光検出手段としての側方散乱光検出システム２４と、レーザー光照射システム２０から照射されたレーザー光の検体への照射に伴う当該検体の標識色素の発光を検出する光検出システム２６と、フローシステム１２により生成された所定の流速の試料液流中の所定の検体を分取するための分取システム２８とを有して構成されている。
ここで、フローシステム１２は、後述するチューブ１２ｄの構成を除いて、従来より公知のシステムを用いることができ、試料液を収容した試料液収容容器１２ａ、フローセル１２ｂ、試料液収容容器１２ａに収容された試料液をフローセル１２ｂへ移送するためのパイプ１２ｃならびにフローセル１２ｂから流出される試料液流が通過するチューブ１２ｄなどにより構成することができる。
チューブ１２ｄは、単色Ｘ線照射システム１４から照射された単色Ｘ線ならびに検体を構成する各元素から放出された蛍光Ｘ線を吸収することがないように、例えば、カプトン（ポリイミド）、マイラーあるいはポリエチレンなどの薄い樹脂により構成することができる。なお、カプトン（ポリイミド）、マイラーあるいはポリエチレンなどの薄い樹脂によりチューブ１２ｄを構成しない場合には、チューブ１２ｄの単色Ｘ線照射システム１４から照射された単色Ｘ線が照射される部分のみ、例えば、薄いベリリウムや窒化ケイ素などで構成するようにしてもよい。
また、チューブ１２ｄは、蛍光Ｘ線ノイズを生じる不純物を含まない材料により構成することが好ましい。
さらに、チューブ１２ｄの径については、検体となる細胞のサイズが２０〜５０μｍであるため、これら検体となる細胞が１個ずつ通過可能なように、例えば、２０〜５０μｍ程度とすることが好ましい。
ここで、蛍光Ｘ線収量を能率的に取得するために、公知のフローサイトメーターのように一度に複数の細胞を流し、検出された信号を流した細胞数で割って１個の細胞データを取ることも可能である。この場合には、チューブ１２ｄの径は、例えば、５００μｍでもよく、２０〜５００μｍの間の任意の径とすることができる。
なお、チューブ１２ｄの径が５００μｍを超えるような場合には、Ｘ線ビーム径がチューブ１２ｄの径をカバーすることができず、細胞がＸ線ビームから外れてしまう場合があるのであまり好ましくはない。
次に、単色Ｘ線照射システム１４としては、例えば、放射光施設（例えば、独立行政法人理化学研究所に所属するＳＰｒｉｎｇ−８など。）のアンジュレータ（高輝度）ビームラインを用いることができる。即ち、このアンジュレータ（高輝度）ビームラインから出射される単色Ｘ線たる高輝度硬Ｘ線をチューブ１２ｄ内の検体に照射すればよい。
ここで、検体に照射する際の単色Ｘ線のビーム径は、例えば、５００μｍ以下、より詳細には、例えば、０．１〜５００μｍの範囲で適宜設定すればよい。なお、検体に照射する際の単色Ｘ線のビーム径を、例えば、５００μｍ以下するのは、検体に照射する際の単色Ｘ線のビーム径が大きすぎると不要な散乱を生じてしまい、ノイズを生じる原因となるからである。
また、高い蛍光Ｘ線収量を得るためには、ビームの光子密度が高い必要がある。従って、必然的に単色Ｘ線のビーム径は小さい方が好ましいものであるが、検体となる細胞のサイズが２０〜５０μｍ程度であり、その大きさをカバーすることができる大きさがあることが好ましいとともに、検体となる細胞はチューブ１２ｄ内を流れてゆくのでチューブ１２ｄ内で位置のブレが生じることになり、そのブレの領域をカバーすることができる大きさがあることが好ましいことから、例えば、５００μｍ以下の範囲で適宜選択する。
なお、細胞ではなく核のような細胞内小器官を検体とする場合には、検体に照射する際の単色Ｘ線のビーム径は、例えば、０．１μｍにしてもよい。それ以下の集光ビームは、現在は作製に非常に手間がかかるため、実用上はあまり好ましいものとはいえない。
一方、単色Ｘ線のビームの検体への入射エネルギーは、例えば、１６ＫｅＶ以下、より詳細には、例えば、０．１〜１６ＫｅＶの範囲で適宜設定すればよい。
なお、単色Ｘ線ビームの検体への入射エネルギーが１６ＫｅＶあれば、元素の周期律表においてＭｇからＰｂまでのほぼ全ての元素の内殻を励起することができる。ただし、常に１６ＫｅＶならばよいわけではなく、励起効率の高いエネルギーは元素により異なるため、特にある元素に注目する場合には、その元素の吸収端に応じて入射エネルギーを調整することが望ましい。
また、０．１〜５ＫｅＶでは軟Ｘ線領域となり、５〜１６ＫｅＶの場合とは異なった効果を生じる。具体的には、励起効率が上がる利点がある。一方で、試料周りの吸収が大きいため、環境を真空槽にするなど、フロー方式を変えるなどの変更が必要となる。例えば、溶媒によるフロー方式は溶媒による軟Ｘ線の吸収が深刻であるため、薄いプラスチックフィルムを回転ドラムに巻き、そこから展開したプラスチックフィルムに瞬間冷却などにより検体を固定し、そのプラスチックフィルム上の検体に軟Ｘ線を照射するなどの手法を用いることができる。ただし、Ｘ線による内殻励起を用いた特定元素の判別、という手法の本質は変わらない。
次に、蛍光Ｘ線検出システム１８について説明すると、蛍光Ｘ線検出システム１８は、例えば、エネルギー分散型の蛍光Ｘ線検出器たるシリコンドリフトＸ線検出器（ＳＤＤ：シリコンドリフトディテクター）により構成することができる。
なお、Ｘ線検出器１６、レーザー光照射システム２０、前方散乱光検出システム２２、側方散乱光検出システム２４、光検出システム２６および分取システム２８については、従来より公知の技術を適用することができるので、従来より公知の技術を援用することによりそれらの構成ならびに作用に関する詳細な説明を省略する。
なお、前方散乱光検出システム２２ならびに側方散乱光検出システム２４は、例えば、フォトダイオードなどを用いて構成することができ、また、光検出システム２６は、例えば、集光レンズ２６ａ、ダイクロイックミラー２６ｂ、２６ｃ、２６ｄ、２６ｅ、フォトマルチプライヤー２６ｆ、２６ｇ、２６ｈ、２６ｉなどを用いて構成することができる。
以上の構成において、このフローサイトメーター１０においては、従来より公知のフローサイトメーターと同様に、前方散乱光検出システム２２により前方散乱光を検出することができ、側方散乱光検出システム２４により側方散乱光を検出することができ、光検出システム２６により検体の標識色素からの発光を検出することができ、分取システム２８により所定の検体を分取することができる。
さらに、このフローサイトメーター１０においては、本発明の特徴として、以下のように検体を構成する各元素の測定を行うことができる。なお、以下の説明においては、細胞を検体とした場合について示す。
即ち、フローシステム１２のチューブ１２ｄ内に検体（細胞）の入った溶液たる試料液を適正な条件でゆっくり流し、単色Ｘ線照射システム１４によりチューブ１２ｄ内の検体（細胞）に高輝度な単色Ｘ線を照射する。それと同時に、この単色Ｘ線の照射に伴い検体（細胞）内の各元素から放出された蛍光Ｘ線を、蛍光Ｘ線検出システム１８で一括して検出できる。
上記した処理を多数の検体（細胞）について繰り返すことよって、検体を構成する元素間の相関を得ることができる。
ここで、単色Ｘ線照射システム１４による単色Ｘ線の１回の照射により、蛍光Ｘ線検出システム１８として用いるＳＤＤでは、例えば、図２に示すように、Ｍｇ、Ｐ、Ｓ、Ｃｌ、Ｋ、Ｃａ、Ｖ、Ｃｒ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｐｔ、Ｈｇ、Ｐｂなどのような、元素の周期律表でＭｇからＰｂまでのほとんどの元素の信号（ＳＤＤスペクトル）が得られるものである。
そして、図２に示すようなＳＤＤスペクトルから、例えば、図３に示すように、元素Ａと元素Ｂとの相関関係を示すヒストグラムを得ることができ、様々な元素やタンパクあるいはＤＮＡなどに関する相互関係を判定することが可能となる。
なお、測定時間は、測定対象の元素の密度に依存して幅があるが、例えば、細胞１個当り０．０１〜１０秒程度である。この細胞１個当り０．０１〜１０秒程度という時間は、細胞１個について蛍光Ｘ線検出システム１８として用いるＳＤＤでＳＤＤスペクトルをとるのに十分な時間であり、かつ、１日で統計的に意味のある数百個の細胞が測れる時間である。
また、フローシステム１２のチューブ１２ｄ内に検体（細胞）の入った溶液たる試料液を流す適正な条件としては、測定時間を細胞１個当り０．０１〜１０秒程度とするならば、例えば、秒速１００〜０．１個の検体（細胞）を流すようにすればよい。
なお、単色Ｘ線照射システム１４により照射される単色Ｘ線は、電子線とは異なり物質との相互作用が弱いため細胞の損傷が小さいため、検体を損傷することなく極めて正確な検体の情報を得ることができる。
このフローサイトメーター１０が従来より公知のフローサイトメーターと大きく異なる点は、まず、蛍光Ｘ線を検出することにより、数多くの細胞１個１個につき「複数元素の含有量」を測定するフローサイトメトリーを実現することができる点にある。
また、従来の検体への標識色素の添加という人工的な条件かつ間接的な量に頼らざるを得なかったフローサイトメトリーとは異なり、フローサイトメーター１０を用いたフローサイトメトリーにより得られる蛍光Ｘ線の元素情報は他の要素を添加していない無添加な情報であり、かつ、直接的に測定した情報である点で極めて優れている。
さらに、フローサイトメーター１０を用いたフローサイトメトリーは、蛍光Ｘ線分析という点で定量性がすでに保証されている測定技術を用いるものであり、また、微量でも測定可能である点でも極めて優れている。
なお、フローサイトメーター１０においては、検体への標識色素の添加を行うことによって、従来のフローサイトメトリーにより得られるデータにそのまま元素という大きな情報を加えるということも可能である。
こうしたフローサイトメーター１０を用いたフローサイトメトリーは、例えば、以下のようにして利用される。
例えば、各種抗癌剤に対する癌細胞の耐性メカニズムには特定の元素が関る可能性が示唆されているが、組織レベルで観察しても細胞メカニズムは不明である。そこで、抗癌剤の耐性をもつ癌細胞ともたない癌細胞の２群を準備し、１個１個の細胞について特定元素と抗癌剤の量の相関をとることにより、その特定元素の役割を明確に解明することができるようになる。
即ち、耐性の有無や薬剤投与の有無などに応じて、フローサイトメーター１０を用いたフローサイトメトリーによって作成した図４に示すようなヒストグラムのパターンの差を検討することにより、例えば、制癌剤シスプラチン（プラチナ製剤）に対する癌細胞の薬剤耐性機構を検証することができるようになる。つまり、Ｐｔとメタロチオネイン（解毒に関与する金属結合タンパク）の金属元素の相関をとる、などである。
上記したように、フローサイトメーター１０を用いたフローサイトメトリーでは、高い客観性のもとに「細胞群における元素量の相関分布」という、これまで得ることができなかった情報を得ることができるようになる。
また、フローサイトメーター１０においては「細胞群における元素量の相関分布」に基づいて、分取システム２８により目的の検体（細胞）を分離して分取することができる。
なお、上記した実施の形態は、以下の（１）乃至（５）に示すように変形することができるものである。
（１）上記した実施の形態においては、検体に照射する単色Ｘ線を放射光施設のアンジュレータ（高輝度）ビームラインから得るようにしたが、これに限られるものではないことは勿論であり、例えば、卓上に設置可能な単色Ｘ線光源を用いるようにしてもよい。実験室型（封入または回転陽極）Ｘ線源の場合には、Ｘ線強度をかせぐ必要があるが、それにはキャピラリーで広い領域のビームを集光することにより輝度（光子密度）を高めること、また、測定時間を長くすることで対処することができる。
（２）上記した実施の形態においては、チューブ１２ｄ内に検体を通過させるようにしたが、これに限られるものではないことは勿論であり、チューブ１２ｄを用いることなく検体を滴下させるようにしてもよい。また、上記した実施の形態においては、チューブ１２ｄ内の圧力調整により任意の検体に所定時間だけ単色Ｘ線を照射することができるようにすることが可能であるが、チューブを１２ｄ用いずに検体を滴下させる場合には、フローセル１２ｂのオリフィスに液滴を形成し、この液滴に単色Ｘ線を照射するようにすればよい。
特に、軟Ｘ線領域の場合には、溶媒の吸収によるＸ線強度の激減を防ぐため、薄いプラスチックフィルムを回転ドラムに巻き、そこから展開したプラスチックフィルムに瞬間冷却などにより検体を固定し、そのプラスチックフィルム上の検体に軟Ｘ線を照射するといった手法が可能である。
（３）上記した実施の形態においては、測定時間を、例えば、細胞１個当り０．０１〜１０秒程度とした場合について説明したが、これに限られるものではないことは勿論である。特に、上記（１）で説明した実験室型Ｘ線源の場合には、例えば、細胞１個当り３００秒としてもよく、この場合には１日２００個の細胞の測定を行うことができる。
（４）上記した実施の形態においては、秒速１００〜０．１個の検体（細胞）を流すようにした場合について説明したが、これに限られるものではないことは勿論であり、例えば、上記（３）において示すように測定時間を細胞１個当り３００秒とした場合には、例えば、０．００３個以上の速度で流すようにしてもよい。
（５）上記した実施の形態ならびに上記した（１）乃至（４）に示す変形例は、適宜に組み合わせるようにしてもよい。
本発明は、生物学、基礎医学の各分野（免疫学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、細胞生物学など。）あるいは病理診断に関する臨床医学あるいは創薬などの技術分野での利用が期待され、血液分析、細胞マーカー、細胞実験あるいは病理分析などに利用することができるものである。
１０ フローサイトメーター
１２ フローシステム
１２ａ 試料液収容容器
１２ｂ フローセル
１２ｃ パイプ
１２ｄ チューブ
１４ 単色Ｘ線照射システム
１６ Ｘ線検出器
１８ 蛍光Ｘ線検出システム
２０ レーザー光照射システム
２２ 前方散乱光検出システム
２４ 側方散乱光検出システム
２６ 光検出システム
２６ａ 集光レンズ
２６ｂ、２６ｃ、２６ｄ、２６ｅ ダイクロイックミラー
２６ｆ、２６ｇ、２６ｈ、２６ｉ フォトマルチプライヤー
２８ 分取システム
１２ フローシステム
１２ａ 試料液収容容器
１２ｂ フローセル
１２ｃ パイプ
１２ｄ チューブ
１４ 単色Ｘ線照射システム
１６ Ｘ線検出器
１８ 蛍光Ｘ線検出システム
２０ レーザー光照射システム
２２ 前方散乱光検出システム
２４ 側方散乱光検出システム
２６ 光検出システム
２６ａ 集光レンズ
２６ｂ、２６ｃ、２６ｄ、２６ｅ ダイクロイックミラー
２６ｆ、２６ｇ、２６ｈ、２６ｉ フォトマルチプライヤー
２８ 分取システム
Claims (4)
- 測定対象物を含む試料液を所定の流速で流して試料液流を生成する試料液流生成手段と、
前記試料液流生成手段により生成された試料液流中の測定対象物に単色Ｘ線を照射する単色Ｘ線照射手段と、
前記単色Ｘ線照射手段から照射された単色Ｘ線の測定対象物への照射に伴い該測定対象物を構成する元素から放出された蛍光Ｘ線を検出する蛍光Ｘ線検出手段と
を有することを特徴とするフローサイトメーター。 - 請求項１に記載のフローサイトメーターにおいて、
前記単色Ｘ線照射手段から測定対象物へ照射される単色Ｘ線のビーム径は、０．１μｍ以上５００μｍ以下である
ことを特徴とするフローサイトメーター。 - 請求項１また２のいずれか１項に記載のフローサイトメーターにおいて、
前記単色Ｘ線照射手段から測定対象物へ照射される単色Ｘ線のビームの入射エネルギーは、０．１ＫｅＶ以上１６ＫｅＶ以下である
ことを特徴とするフローサイトメーター。 - 請求項１、２また３のいずれか１項に記載のフローサイトメーターにおいて、
前記試料液流生成手段は、チューブ内に試料液流を流し、
前記単色Ｘ線照射手段は、前記チューブ内の測定対象物に単色Ｘ線を照射するものであり、
前記チューブの径は、２０〜５００μｍである
ことを特徴とするフローサイトメーター。
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