JP2005512979A - 生物学的活性ペプチドおよびそれを用いた損傷神経の修復 - Google Patents
生物学的活性ペプチドおよびそれを用いた損傷神経の修復 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005512979A JP2005512979A JP2003538188A JP2003538188A JP2005512979A JP 2005512979 A JP2005512979 A JP 2005512979A JP 2003538188 A JP2003538188 A JP 2003538188A JP 2003538188 A JP2003538188 A JP 2003538188A JP 2005512979 A JP2005512979 A JP 2005512979A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- kdi
- peptide
- spinal cord
- biologically active
- tripeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/06—Tripeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
初期小脳ニューロンについて、ラミニン1のγ1鎖の神経突起伸長デカペプチド(RDIAEIIKDI; P1543)の作用機構を研究する一方で、このデカペプチドの生物学的機能(即ち、接着および神経突起の伸長)に寄与するトリペプチド(KDI)配列を同定した。本発明者は、P1543およびトリペプチド配列KDIはいずれもヒト胚性CNSニューロンの接着および神経突起伸長を促進することを見出した。これらのペプチドは、ラット小脳ニューロンにおいて電流も誘導する。しかしながら、トリペプチドモチーフKDIは、脊髄損傷の治療においてP1543よりも優れた特性を有することが判明した。
本発明は、医療用途のための生物学的活性ペプチドを提供する。可溶性の形態または支持体に結合した形態のペプチドは、損傷した神経、例えば末梢神経、あるいは損傷または変性した中枢神経系を修復するのに有用である。本発明のペプチドは、特に脊髄損傷の治療に有用である。
患者のインフォームドコンセントを得た後、且つ合法的な妊娠中絶によって得た6〜12週齢の胎児からヒト胎児CNS組織を調製した。組織はヘルシンキ大学中央病院(Helsinki University Central Hospital)の倫理学委員会の許可を得て回収した。実体顕微鏡下で同定したCNS組織は、はじめに冷生理食塩水に入れ、組織培養実験用に調製した。正常な成体脊髄組織は、神経標本バンク(Neurological Specimen Bank)(米国、ボルティモア)から入手した。
CNS組織をはじめに冷生理食塩水に入れた。脊髄組織を実体顕微鏡下で同定し、髄膜を慎重に取り去った。ヒト脊髄グリア細胞の単層培養物を得るために、パスツールピペットを用いた機械的粉砕により細胞を分離し、得られた細胞をLiesi et al. (2001)の記載と同様に、ペニシリンおよびストレプトマイシンを添加した、10%ウシ胎児血清(ユタ州、ローガン、Hyclone社製)含有DMEM−F12培地(英国、Gibco社製)の入ったペトリ皿(米国、ニューヨーク州、Corning社製)に入れた。このようにして100%TUJ1陽性グリア細胞を含む培養物が得られ、このことはグリア細胞が星状細胞の前駆体であることを示した。
細胞を、ペニシリン(100U/ml)、ストレプトマイシン(100μg/ml)および200μMのL−グルタミンを含有する滅菌培地(RPMI 1640)中で粉砕により分離した。分離した細胞を、公知の方法(Matsuzawa et al., 1996b)で、マウス ラミニン1(ドイツ国、Boehringer-Mannheim社製)またはKDI−gcペプチドとRDIAEIIKDI−gcペプチドであらかじめ被覆してあるカバーグラスに植えた。ペプチドはMultiple Peptide Systems社(カリフォルニア州、ラ ホーヤ)から入手した。培養細胞は24時間保持し、その後2%パラホルムアルデヒドで固定して免疫細胞化学分析用に処理した。
ニューロン特異的チューブリンアイソフォームTUJ1の免疫細胞化学分析を公知の方法(Liesi et al., 2001)で行った。簡単に説明すると、細胞を−20℃においてメタノールで5分間処理して浸透化し、PBSで洗浄してからTUJ1−モノクローナル抗体と共に室温で1時間インキュベートした。抗体は高い特異性があり、1:500の希釈倍率で用いた。上記の免疫細胞化学処理後、PBS:グリセロール(1:1)で細胞を植えたカバーグラスを覆い、適切なフィルターを組み合わせてOlympus Provis 蛍光顕微鏡で観察した。
妊娠16日目のSprague-Dawley雌ラットをTaconic Farms社から購入し、国立アルコール乱用・依存症研究所(National Institute of Alcohol Abuse and Alcoholism)(NIH)の動物室で、オートクレーブ処理したビタミンA(20,000IU/kg)含有NIH−31飼料を与えて飼育した。ラットを出産させ、3日齢雌子ラットの小脳組織を公知の方法(Matsuzawa et al.,1996a)で無菌的に単離した。公知の方法(Liesi and Wright, 1996)で小脳をトリプシン処理して単一細胞の懸濁液を得、105個の細胞をラミニン1をあらかじめ塗布した22mmのカバーグラス上に植えた。細胞をペニシリン、ストレプトマイシンおよび200μMのL−グルタミンを添加したRPMI 1640培地中で、空気95%、二酸化炭素5%の雰囲気下、37℃でインキュベートした。24時間後、細胞を電気生理化学分析に用いた。
分析値の記録は、公知の方法(Liesi and Wright, 1996)で、室温で、電圧固定したホールセルパッチ配置(whole-cell patch configuration)でList EPC-7 パッチクランプ用増幅器を用いた。ピペットはホウ珪酸ガラス管を引いて作製し、火炎で軽く磨いた。実験は室温で行った。ホールセル電流をGould 2400S ストリップチャートレコーダー(Gould 2400S strip chart recorder)で記録した。細胞膜電位は特に記載しない限り−40mVでクランプした。全ての槽溶液は、溶融シリカの入った内径200μmのバレルへの流入を調節するためのピンチバルブを介して多数のリザーバーから導入した。標準槽溶液は、10mM HEPES(pH7.4)緩衝化RPMI 1640であった。標準ピペット溶液は、100mMのCsMeSO4、15mMのCsCl、5mMのBAPTAおよび10mMのHEPES(KOHでpH7.2に調整)を含有していた。逆転電位試験は、150mMのNaCl、5mMのKCl、1mMのCaCl2および10mMのHEPES(NaOHでpH7.2に調整)を含有する低K+槽溶液ならびに115mMのNaCl、40mMのKCl、1mMのCaCl2および10mMのHEPES(NaOHでpH7.2に調整)を含有する高K+槽溶液で行った。全ての槽溶液は300nMのTTXを含有していた。逆転電位試験用ピペット溶液は、110mMのK−アスパラギン酸、10mMのNaCl、2mMのMgCl2、5mMのBAPTAおよび10mMのHEPES(NaOHでpH7.2に調整)を含有していた。ネルンスト逆転電位をHille (1992)の方法にしたがって計算した。ペプチドおよび融合タンパク質は試験の直前に等分した標準槽溶液に加えた。記録と記録の間には、細胞を含むペトリ皿を標準槽溶液(10mM HEPES緩衝化RPMI 1640、pH7.4)で灌流した。実験システムの品質検査は、標準槽溶液を含有する2つのリザーバーの間で切り換えることで、灌流による人為信号を検出し、活性ペプチドの管への付着の有無を判断した。RDIAEIIKDIペプチド、EIIKDIペプチドおよびKDIペプチドはいずれもMultiple Peptide Systems社(カリフォルニア州、サンディエゴ)から入手した。融合タンパク質(B2-3、B2-4およびB2-5)と対照ペプチドであるラミニン α1鎖(AG10、AJ5およびAI12)は、国立歯科衛生研究所(National Institute of Dental Research、NIH)のYoshi Yamada博士とAtsusi Utani博士によって寄贈されたものであり、公知の方法(Utani et al., 1994 and Nomizu et al., 1995)で精製した。
ヒト胚性脊髄グリア細胞をLiesi et al. (2001)の記載と同様に10%ウシ胎児血清中でコンフルエントになるまで培養した。コンフルエントになった培養グリア細胞をトリプシン処理し、処理後の細胞を22mmのカバーグラス当たりに100,000個細胞を再度植えつけ、コンフルエントになるまで培養した。コンフルエントになった培養グリア細胞の培地を正常なヒト成体の血清に交換し、ゲージが18Gの滅菌針を用いて傷つけた。1μg/ml(3μM)または10μg/ml(30μM)のKDIペプチドと1μMのP1543ペプチド(p20)、さらに50〜100,000個の新鮮な単離ヒト胚性大脳新皮質ニューロンをグリア細胞上に添加した。対照となる培養細胞にはニューロンを添加したが、ペプチドまたは損傷のいずれかを加えなかった。細胞を空気95%、二酸化炭素5%の雰囲気下、37℃で72時間培養し、ニューロンの定量および神経突起の長さの測定のために固定した。グリア細胞単層上のニューロンを、ニューロン特異的チューブリンアイソフォーム(TUJ1)に対するマウスモノクローナル抗体を用いて免疫学的染色により視覚化した。各実験あたり3個のカバーグラス上から任意に選択した6個の領域中のニューロン数を計測することで結果を評価した。こうすることで、一回の実験あたり300個を超えるニューロンを計測した。結果の統計学的分析を、Instat(v2.03)プログラム(カリフォルニア州、サンディエゴ、GraphPad社製)を用い、一変量分散分析(ANOVA)およびStudent-Newman-Keuls法による多重比較法で行った。
ヒト胚性脊髄(8〜10週齢のもの)から単離したばかりの組織を機械的に分離し、分離した細胞の50,000個を、ヒト胚性脊髄グリア細胞がコンフルエントになっている22mmのカバーグラスに植えた。ニューロンを植える前に、グリア細胞の単層を18Gの針を用いて傷つけた。細胞を正常なヒト成体の血清中で72時間培養した。KDI(0.0355〜1.0μg/ml)の存在下または存在しない条件におけるグリア細胞の単層上の脊髄ニューロンの数を、TUJ1標識培養細胞に基づいて推定した。統計学的分析は、一変量分散分析(ANOVA)およびStudent-Newman-Keuls法による多重比較法で行った。
脊髄または大脳新皮質に由来する未熟幹細胞を含有する胚体は、機械的に分離したCNS細胞をB27サプリメント(英国、Gibco社製)、抗体および500μMのL−グルタミン酸を含有する神経細胞培養用基礎培地(英国、Gibco社製)を入れた10cmのペトリ皿(Corning社製)に加えることで調製した。胚体はプラスチック製のペトリ皿に接着することはできずに集合体を形成し、その集合体は大きくなって新たな胚体を培地中に放出した。
コンフルエントな状態の培養脊髄グリア細胞をトリプシン−EDTAを用いてトリプシン処理し、得られた細胞を22mmのカバーグラス上に5×104個の密度で再度植えつけた。細胞はコンフルエントな単層を形成するまで培養した。この時点で細胞の培地を10%正常ヒト成体血清含有DMEM−F12培地に交換し、グリア細胞の単層を18Gの針を用いて傷つけた。損傷後、KDIペプチド(米国、カリフォルニア州、ラ ホーヤ、Multiple Peptide Systems社製)を培地に加え、その後、脊髄または大脳新皮質から分離したばかりの新鮮な細胞の懸濁液を、細胞数が2×104個になるようにカバーグラスに加えた。24〜48時間後、培養物を2%パラホルムアルデヒドのPBS溶液(pH7.4)中で15分間固定し、公知の方法(Liesi et al., 2001)でTUJ1を用いた免疫学的染色に付した。
正常なヒト成体の脊髄の凍結切片(厚さ:10μm)を、スライドグラス(SuperFrost Plus slide)(ドイツ国、Menzel社製)に載せて冠状面で切断した。各スライドグラスには3つの切片を載せた。新鮮な切片を載せたスライドグラスを、滅菌した培養用プレート(Quadriperm-plate)(ドイツ国、In Vitro Systems & Services社製)に即座に入れて10mlの培地を加えた。培地は、ペニシリンおよびストレプトマイシンを添加した10%正常ヒト成体血清含有DMEM−F12であった。2個の胚体を各切片の白質領域に載せ、培養物を空気95%、二酸化炭素5%の雰囲気下、湿度98%、37℃のインキュベーターに入れた。KDIペプチド(米国、カリフォルニア州、ラ ホーヤ、Multiple Peptide Systems社製)を1〜10μg/mlの濃度で培地に加え、10個のアミノ酸からなる前駆体(RDIAEIIKDI)を等モル濃度加えた。対照培養物にはペプチドを加えなかった。10日後、培養物を固定し、神経フィラメントタンパク質と追加のニューロンマーカーおよびグリア細胞マーカーを免疫学的染色に付し、胚体中の神経突起および細胞を同定した。接着した胚体および成体白質組織に直接伸びている神経突起の数を各スライドグラスごとに数え、結果を一変量分散分析(ANOVA)を用いて分析した。対照培養物および培地に5〜10μg/mlのKDIペプチドを添加した培養物においては、胚体から伸びる(100μmを超える)長い神経突起の数を数え、結果の分析にはノンパラメトリックなWhitney-Mann検定を用いた。
方法と実験計画:
強いペントバルビタール麻酔下における腰椎の完全な横断を40匹の雄Sprague-Dawleyラット成体に行った。浸透圧ミニポンプ(Osmotic mini pump)を皮下に埋め込み、一群(KDI−グループ)においては予備試験によって決定した濃度(10〜100μg/ml)でKDIペプチドを連続流入し、もう一つの群(プラシーボ−グループ)ではプラシーボを連続流入した。術後の痛みを軽減するために双方のグループにモルヒネを与えた。動物は運動機能試験を週に1回、3ヶ月間行った。運動スコアテストを標準的な運動評価試験(歩行、牽引による伸張(tow-spread)、台乗せ反射(placing)および回避行動(withdrawal))を用いて行った。ミニポンプによりはじめに薬剤が30日間投与され、可能であれば更に実験を(最大3ヶ月まで)延長して行った。3ヵ月後、各グループの動物を安楽死させ、脊髄を免疫細胞化学、生化学およびRNA分析に用いるために急速冷凍するか、in situハイブリダイゼーションおよび回復についての組織学的分析のために4%パラホルムアルデヒドで固定した。固定した脊髄の損傷部位の遥か上方にDiIを注入し、損傷部位を横切る軸索の成長をモニターした。動物の脳および坐骨神経も急速冷凍または固定し、後の分析に用いるために保存した。
ラミニン1誘導ペプチドの電気生理学的影響
ラミニン1のγ1鎖由来の合成ペプチドおよび融合タンパク質の、ラット小脳ニューロンに対する電気生理学的影響について検証した(図1および図2)。
大脳新皮質ニューロンの中には、脊髄グリア細胞(SC+n)、損傷脊髄グリア細胞(SC+LE+n)または10μg/mlのKDIペプチド存在下の脊髄グリア細胞(LE+KDI10+n)に接着し神経突起を伸ばすものがあった(図3)。しかしながら、このような種々の条件間におけるニューロンの生存率に統計的な差異は見られなかった。1μg/mlのP1543ペプチド(p20)の添加は、大脳新皮質ニューロンの接着および神経突起伸長に有意(p<0.001)な改善をもたらした(p201+LE+n)。しかしながら、次にKDIペプチドを1μg/ml添加したところ、大脳新皮質ニューロンの接着と神経突起伸長はいずれも有意(p<0.001)に改善された(KDI1+LE+n)。KDI(1μg/ml)によりもたらされる改善は、p20(1μg/ml)により誘導される改善に比べて統計的に有意であった。
*p<0.001は、Student-Newman-Keuls多重比較検定(ANOVA)による。
図4Aは、in vitroにおいてヒト脊髄グリア細胞単層上で72時間培養した後に長い神経突起(>100μm)を伸ばしているヒト脊髄ニューロンの数を示している。KDIペプチドが存在しない場合は、長い神経突起を持つニューロンはほとんど見られなかった(SC+LE+n)。0.1μg/mlのKDIペプチドの添加は、長い神経突起を有する細胞の数を有意に増加させた(p<0.001)。この濃度が脊髄ニューロンの生存を支持するのに最も適していることにも注目されたい。1.0μg/mlのKDIペプチドの添加も損傷を与えた対照に比べて長い神経突起を有する細胞の数を有意に増加させた。
KDIトリペプチド(0.1〜10μg/ml)およびデカペプチドP1543(1μg/ml;RDIAEIIKDI)は、ヒトCNSニューロンの接着および神経突起伸長を支持した。ガラスに共有的に架橋しているKDIペプチド(0.1μg/ml)は、ヒト中枢ニューロンの接着および神経突起伸長を促進する(図5A)。KDIペプチド(10μg/ml)上のヒト中枢ニューロンの神経突起伸長の2つの例においては、ニューロンはトリペプチド上に接着し、長い神経突起を伸ばすことを示した(図5Bおよび図5C)。ガラスにカップリングしているP1543(1μg/ml)は、KDIペプチドと同様にヒト中枢ニューロンの神経突起伸長を促進する(図5D)。縮尺を示す横線の長さは10μmである。これら2種の支持体におけるニューロンの接着特性と神経突起伸長特性に差異は見られなかった(データは示さない)。
図7は、ヒト成体脊髄凍結切片中の白質の上の胚体(EBS;白抜きのカラム)および長い神経突起を伸ばしているEBS(黒いカラム)の平均数を示す。KDIペプチド(5〜10μg/ml)の存在下では、胚体は白質によく接着し、白質のミエリンと直接接触している部分から胚体は長い神経突起(>100μm)を伸ばした。接着し神経突起を出した胚体の数は、対照(CtR;p<0.01)または10アミノ酸からなる前駆体ペプチドP1543(p20;p<0.01)の存在下と比較して、KDIの存在下で有意に多かった。これらの結果は、KDIペプチドがP1543デカペプチドよりも有利な効果をもたらすことを示している。
(図9のA) KDIペプチドを添加していない対照培養においては、胚体はヒト成体脊髄の白質に接着することができた。白質への神経突起伸長は見られないが、神経フィラメント陽性繊維(矢印)が胚体の外周を囲んだ。
(図9のB) 図9のAと同じ胚体の高倍率写真であり、胚体から伸びたわずかな小さく短い神経突起を示す。
(図9のC) 5〜10μg/mlのKDIペプチドの存在下では、長い神経フィラメント陽性神経線維が胚体から伸びている。
(図9のD) 高倍率で撮影することによって、神経フィラメント陽性神経突起がヒト成体脊髄の白質上に直接伸びたことが明らかになった。ヒト成体脊髄の断面図も神経フィラメント陽性であることに注目されたい。
図10は、損傷から3ヶ月後のラット成体の、プラシーボ処理脊髄(図10のAとB)およびKDIペプチド処理脊髄(図10のCとD)の実体顕微鏡画像である。脊髄の腹側(AとC)は損傷部位を示す(白い矢印)。プラシーボ処理脊髄(B)の背側(黒い矢印)では、KDI処理脊髄の背側(D)よりも瘢痕がずっと大きい。
Bronfman FC, Garrido J, Alvarez A, Morgan C, Inestrosa NC. 1996. Laminin inhibits amyloid-β-peptide fibrillation. Neurosci Lett 218:201-203.
Corset V, Nguyen-Ba-Charvet KT, Forcet C, Moyse E, Chedotal A, Mehlen P. 2000. Netrin-1-mediated axon outgrowth and cAMP production requires interaction with adenosine A2b receptor. Nature 407:747-750.
Drouet B, Pincon-Raymond M, Chambaz J, Pillot T. 1999. Laminin-1 attenuates beta-amyloid peptide (1-40) neurotoxicity of cultured fetal rat cortical neurons. J. Neurochem. 73:742-749.
Hager G, Pawelzik H, Kreutzberg GW and Zieglgansberger W. 1998. A peptide derived from a neurite outgrowth-promoting domain of the γ1 chain of laminin modulates the electrical properties of neocortical neurons. Neuroscience 86:1145-1154.
Hille B. 1992. Ionic channels of excitable membranes. Sunderland, MA: Sinauer Associates, Inc. p. 1-607.
Liesi P, Narvanen A, Soos J, Sariola H, Snounou G. 1989. Identification of a neurite outgrowth-promoting domain of laminin using synthetic peptides. FEBS Lett 224:141-148.
Liesi P. 1990. Extracellular matrix and neuronal movement. Experientia 46:900-907.
Liesi P, Hager G, Dodt H-U, Seppala IJ, Zieglgansberger W. 1995. Domain specific antibodies against a neurite outgrowth domain of the B2 chain of laminin inhibit neuronal migration in neonatal rat cerebellum. J. Neurosci Res 40:199-206.
Liesi P, Wright JM. 1996. Weaver granule neurons are rescued by calcium channel antagonists and antibodies against a neurite outgrowth domain of B2 chain of laminin. J. Cell Biol 134:447-486.
Liesi P, Fried G, Stewart R. 2001. Neurons and glial cells of the embryonic human brain and spinal cord express multiple and distinct isoforms of laminin. J. Neurosci Res 64:144-167.
Matsuzawa M, Weight F, Potember R, Liesi P. 1996a. Directional neurite outgrowth and axonal differentiation of embryonic hippocampal neurons are induced by a neurite outgrowth domain of the B2 chain of laminin. Int J. Dev Neurosci 14:283-295.
Matsuzawa M, Liesi P, Knoll W. 1996b. Chemically modifying glass surfaces to study substratum-guided neurite outgrowth in culture. J. Neurosci Meth 69:189-196.
Matsuzawa, M., Tokomitsu, S., Knoll, W. and Liesi, P. 1998. A molecular gradient along the axon pathway is not required for axon guidance. J. Neurosci. Res. 53:114-124.
Meyerhardt JA, Caca K, Eckstrand BC, Hu G, Lengauer C, Banavali S, Look AT, Fearon ER. 1999. Netrin-1: interaction with deleted in colorectal cancer (DCC) and alterations in brain tumors and neuroblastomas. Cell Growth Differ 10:35-42.
Murtomaki S, Risteli L, Risteli J, Johansson S, Koivisto U-M, Liesi P. 1992. Laminin and its neurite outgrowth promoting domain associate with the Alzheimer and Down syndrome brains. J. Neurosci Res 32:261-273.
Murtomaki S, Trenkner E, Wright JM, Saksela O, Liesi P. 1995. Increased proteolytic activity of the weaver granule neurons may participate in neuronal death in cerebellum of the weaver mutant mouse. Dev Biol 168:635-648.
Nakagami Y, Abe K, Nishiyama N, Matsuki N. 2000. Laminin degradation by plasmin regulates long-term potentiation. J. Neurosci 20:2003-2010.
Nomizu M, Kim WH, Yamamura K, Utani A, Song S-Y, Otaka A, Roller PP, Kleinman H and Yamada Y. 1995. Identification of cell binding sites in the laminin □1 chain carboxyl-terminal globular domain by systematic screening of synthetic peptides. J. Biol. Chem. 270:20583-20590.
Seil F. 1998. The extracellular matrix molecule, laminin, induces Purkinje cell dendritic spine proliferation in granule cell depleted cerebellar cultures. Brain Res 795:112-120.
Serafini T, Kennedy TE, Galko MJ, Mirzayan C, Jessell TM, Tessier-Lavigne M. 1994. The netrins define a family of axon outgrowth-promoting proteins homologous to C. elegans UNC-6. Cell 78:409-424.
Utani A, Nomizu M, Timpl R, Roller PP and Yamada Y. 1994. Laminin chain assembly. Specific sequences at the C-terminus of the long arm are required for the formation of specific double- and triple-stranded coiled-coil structures. J. Biol. Chem. 269:19167-19175.
Claims (18)
- 薬剤用のトリペプチド配列KDI(リジン−アスパラギン酸−イソロイシン)。
- 損傷または変性した神経の修復用のトリペプチド配列KDI。
- 中枢神経または末梢神経の損傷の治療用のトリペプチド配列KDI。
- 脊髄損傷の治療用のトリペプチド配列KDI。
- 脊髄損傷の治療用の、トリペプチドモチーフKDI(リジン−アスパラギン酸−イソロイシン)を包含する生物学的活性ペプチド。
- トリペプチドモチーフKDIを包含する生物学的活性ペプチドを用いた、脊髄損傷治療剤の製造方法。
- トリペプチドモチーフKDIを用いた、脊髄損傷治療剤の製造方法。
- 有効成分としてトリペプチドモチーフKDIを包含し、医薬的に許容可能な担体および希釈剤からなる群より選ばれる少なくとも一種をさらに包含する医薬組成物。
- 注射可能な液体であることを特徴とする、請求項8に記載の医薬組成物。
- 有効成分であるペプチドの濃度が0.01〜100μg/mlであることを特徴とする、請求項8または9に記載の医薬組成物。
- 損傷神経の修復を必要とする動物の損傷神経を修復する方法であって、トリペプチドモチーフKDIを包含する生物学的活性ペプチドを、動物に有効量投与することを包含する、修復方法。
- 該生物学的活性ペプチドがトリペプチド配列KDIであることを特徴とする、請求項11に記載の修復方法。
- 該生物学的活性ペプチドが可溶性の形態であることを特徴とする、請求項12に記載の修復方法。
- 該生物学的活性ペプチドが支持体に結合した形態であることを特徴とする、請求項12に記載の修復方法。
- 脊髄損傷の治療を必要とする動物の脊髄損傷を治療する方法であって、トリペプチドモチーフKDIを包含する生物学的活性ペプチドを、動物に有効量投与することを包含する治療方法。
- 該生物学的活性ペプチドがトリペプチド配列KDIであることを特徴とする、請求項15に記載の治療方法。
- ミニポンプ システムを用いて脊髄の外傷領域に直接該ペプチドを投与することを特徴とする、請求項15または16に記載の治療方法。
- 硬膜外腔注射によって該ペプチドを投与することを特徴とする、請求項15または16に記載の治療方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI20012082A FI20012082A0 (fi) | 2001-10-26 | 2001-10-26 | Biologisesti aktiiviset peptidit hermovauroiden korjaamiseksi |
PCT/FI2002/000831 WO2003035675A1 (en) | 2001-10-26 | 2002-10-25 | Biologically active peptides and their use for repairing injured nerves |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005512979A true JP2005512979A (ja) | 2005-05-12 |
JP2005512979A5 JP2005512979A5 (ja) | 2006-01-05 |
JP4312054B2 JP4312054B2 (ja) | 2009-08-12 |
Family
ID=8562134
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2003538188A Expired - Fee Related JP4312054B2 (ja) | 2001-10-26 | 2002-10-25 | 生物学的活性ペプチドおよびそれを用いた損傷神経の修復 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20040266991A1 (ja) |
EP (1) | EP1438329B1 (ja) |
JP (1) | JP4312054B2 (ja) |
AT (1) | ATE490972T1 (ja) |
AU (1) | AU2002336124B2 (ja) |
CA (1) | CA2465245C (ja) |
DE (1) | DE60238551D1 (ja) |
DK (1) | DK1438329T3 (ja) |
FI (1) | FI20012082A0 (ja) |
WO (1) | WO2003035675A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE102005029468A1 (de) * | 2005-06-24 | 2006-12-28 | Plt Patent & Licence Trading Ltd. | Verwendung von Inhibitoren der N-Methyltransferasen in der Therapie des Parkinson-Syndroms |
RU2301678C1 (ru) * | 2006-05-30 | 2007-06-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" | Пептид, стимулирующий регенерацию нейронов центральной нервной системы, фармацевтическая композиция на его основе и способ ее применения |
BRPI0812357A2 (pt) * | 2007-05-31 | 2015-01-27 | Hertz Corp | Sistema e método para gerar automaticamente um passe de embarque em avião para um viajante retornando um automóvel de aluguel |
US8008253B2 (en) | 2007-07-03 | 2011-08-30 | Andrew Tasker | Treatment for anxiety |
WO2009114539A2 (en) * | 2008-03-10 | 2009-09-17 | University Of Louisville Research Foundation | Neuroprotective integrin-binding peptide and angiopoietin-1 treatments |
GB201700529D0 (en) | 2017-01-12 | 2017-03-01 | Rogers April | Laminin receptor peptide |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AT276041B (de) * | 1968-08-16 | 1969-11-10 | Dragoco Gerberding Co Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines konzentrierten, praktisch sterilen Rohzwiebelaromas |
US3590722A (en) * | 1969-06-09 | 1971-07-06 | Samuel Leptrone | Flavor injector device |
HU185263B (en) | 1981-06-12 | 1984-12-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing peptides effective on the immuncontroll analogous with the tp5 |
FI922517A (fi) * | 1992-05-29 | 1993-11-30 | Paeivi Liesi | Nervrepareringsmedel och dess anvaendning |
GB9217316D0 (en) | 1992-08-14 | 1992-09-30 | Ludwig Inst Cancer Res | Schwann cell mitogenic factor,its preparation and use |
GB9324473D0 (en) | 1993-11-29 | 1994-01-12 | Oxford Res Support Co Ltd | Isolation of streptokinase by affinity chromatography |
JPH10507086A (ja) * | 1995-07-26 | 1998-07-14 | フイルメニツヒ ソシエテ アノニム | フレーバー付けられた製品及びその製法 |
US5721256A (en) * | 1997-02-12 | 1998-02-24 | Gpi Nil Holdings, Inc. | Method of using neurotrophic sulfonamide compounds |
WO1998043686A1 (en) | 1997-04-03 | 1998-10-08 | California Institute Of Technology | Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering |
US20020168718A1 (en) * | 1997-04-03 | 2002-11-14 | California Institute Of Technology | Enzyme-mediated modification of fibrin for tissue engineering |
US6075119A (en) * | 1997-04-07 | 2000-06-13 | The Rockefeller University | Peptides useful for reducing symptoms of toxic shock syndrome |
IL121191A0 (en) * | 1997-06-29 | 1997-11-20 | Yeda Res & Dev | Synthetic peptides and pharmaceutical compositions comprising them |
JP2003525916A (ja) | 1999-04-22 | 2003-09-02 | エイドゲントシッシュ テクニーシェ ホッシュール チューリッヒ | モディファイドタンパク質マトリクス |
DE20010297U1 (de) | 2000-06-08 | 2000-08-31 | Eth Zuerich Zuerich | Enzymvermittelte Modifizierung von Fibrin zur Gewebemanipulation: Fibrin-Formulierungen mit Peptiden |
-
2001
- 2001-10-26 FI FI20012082A patent/FI20012082A0/fi unknown
-
2002
- 2002-10-25 DK DK02770017.8T patent/DK1438329T3/da active
- 2002-10-25 AU AU2002336124A patent/AU2002336124B2/en not_active Ceased
- 2002-10-25 EP EP02770017A patent/EP1438329B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-10-25 JP JP2003538188A patent/JP4312054B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-25 US US10/492,850 patent/US20040266991A1/en not_active Abandoned
- 2002-10-25 CA CA2465245A patent/CA2465245C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-25 AT AT02770017T patent/ATE490972T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-10-25 DE DE60238551T patent/DE60238551D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-10-25 WO PCT/FI2002/000831 patent/WO2003035675A1/en active Application Filing
-
2005
- 2005-05-12 US US11/127,206 patent/US7659255B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-06-18 US US12/141,129 patent/US7741436B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP4312054B2 (ja) | 2009-08-12 |
ATE490972T1 (de) | 2010-12-15 |
US20040266991A1 (en) | 2004-12-30 |
WO2003035675A1 (en) | 2003-05-01 |
AU2002336124B2 (en) | 2008-07-03 |
US20050288231A1 (en) | 2005-12-29 |
CA2465245A1 (en) | 2003-05-01 |
DE60238551D1 (de) | 2011-01-20 |
US7659255B2 (en) | 2010-02-09 |
EP1438329A1 (en) | 2004-07-21 |
US7741436B2 (en) | 2010-06-22 |
CA2465245C (en) | 2012-09-11 |
DK1438329T3 (da) | 2011-03-28 |
FI20012082A0 (fi) | 2001-10-26 |
US20080249021A1 (en) | 2008-10-09 |
EP1438329B1 (en) | 2010-12-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2409988B1 (en) | Peptide fragments for inducing synthesis of extracellular matrix proteins | |
US7563862B2 (en) | Neural regeneration peptides and methods for their use in treatment of brain damage | |
US7563596B2 (en) | Method of modulating tissue growth using Frzb protein | |
US8759300B2 (en) | Polypeptides and methods of use | |
JP2009102392A (ja) | プロテインキナーゼcのペプチドインヒビター | |
JPH0768138B2 (ja) | インシュリン様成長因子及び類似体を用いる障害治療方法 | |
US20110306557A1 (en) | Neural regeneration peptides and methods for their use in treatment of brain damage | |
US7741436B2 (en) | Biologically active peptides and their use for repairing injured nerves | |
US20060149050A1 (en) | Isolation and method of using tissue growth-inducing Frzb | |
Volpina et al. | A fragment of the receptor for advanced glycation end products restores the spatial memory of animals in a model of Alzheimer’s disease | |
KR20120134100A (ko) | 벡터적 이온 채널의 조절을 위한 유기화합물 | |
JP5026083B2 (ja) | 神経再生ペプチド及び脳損傷治療におけるそれらの使用方法 | |
AU2002336124A1 (en) | Biologically active peptides and their use for repairing injured nerves | |
Smith et al. | Enhanced Neuron Growth and Electrical Activity by a Supramolecular Netrin-1 Mimetic Nanofiber | |
US7388076B2 (en) | Human immunosuppressive protein | |
WO1999019477A1 (de) | Cadherin derived growth factor und seine verwendung | |
US20100035820A1 (en) | Amidated dopamine neuron stimulating peptides for cns dopaminergic upregulation | |
JP2023049978A (ja) | 神経突起伸長促進剤及び神経再生誘導用医薬組成物 | |
Deng | Approaching the convergent point: Downstream effectors of cyclic AMP and MAG on cytoskeleton reorganization in rat primary neurons | |
Murtomäki-Repo | The Role of Laminin in Development, Regeneration and Injuries of the Nervous System | |
EDGAR | 11. LAMININS DURING NEURITE GROWTH AND NERVE REGENERATION | |
MXPA98007245A (en) | Methods to alleviate neuropathic pain using peptides derived from prosapos | |
JP2001512449A (ja) | 細胞増殖を阻害するペプチド及びその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050914 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050914 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081028 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081219 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090401 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090428 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090512 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120522 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4312054 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120522 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130522 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130522 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |