JP2009102392A

JP2009102392A - プロテインキナーゼｃのペプチドインヒビター

Info

Publication number: JP2009102392A
Application number: JP2009011456A
Authority: JP
Inventors: Daria Mochly-Rosen; モックリー−ローゼンダリア
Original assignee: Leland Stanford Junior University
Current assignee: Leland Stanford Junior University
Priority date: 2002-04-22
Filing date: 2009-01-21
Publication date: 2009-05-14
Also published as: AU2009201593A1; CA2481512C; CA2785889A1; EP1501532A4; WO2003089456A2; EP1501533A4; AU2003234185B2; AU2009201760A1; US7833984B2; WO2003089457A3; US20090192091A1; AU2009201760B2; JP2012176978A; EP1501532A2; AU2003234185A1; US20050215483A1; CA2482598C; EP1501533A2; WO2003089457B1; US7939493B2

Abstract

【課題】ＰＫＣＶ５アイソザイム特異的ペプチドを提供すること。
【解決手段】配列およびこの配列を含む組成物は、それぞれ由来する、ＰＫＣアイソザイムに関連した疾患状態を処置するために有用である。処置方法、薬学的処方物およびこのペプチドの活性を模倣する化合物を同定する方法もまた記載される。好ましい実施形態では、このペプチドは、ポリ−Ａｒｇ、Ｔａｔ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメインから選択されるキャリアペプチドにＣｙｓ−Ｃｙｓ結合している。
【選択図】なし

Description

（関連出願の引用）
本願は、同時係属中の仮出願第６０／３７４，５３０号（２００２年４月２２日出願）
の利益を主張する。仮出願第６０／３７４，５３０号は、本明細書中に参考として援用さ
れる。

（政府の利益に関する言及）
本研究は、ＴｈｅＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ
ＧｒａｎｔｓＮＳ１３１０８およびＤＡ０８２５６によって部分的に支持された。従っ
て、米国政府は、本発明において一定の権利を有し得る。

（発明の分野）
本発明は、プロテインキナーゼＣのアイソザイム特異的調節に有用なペプチドに関する
。

（発明の背景）
プロテインキナーゼＣ（「ＰＫＣ」）は、種々の細胞機能（細胞の増殖、遺伝子発現の
調節、イオンチャネル活性を含む）に関与するシグナル伝達における重要な酵素である。
アイソザイムのＰＫＣファミリーとしては、それらの相同性およびアクチベーターに対す
る感度に基づいて少なくとも３つのサブファミリーに分けられ得る、少なくとも１１個の
異なるプロテインキナーゼが挙げられる。各アイソザイムは、アイソザイムに特有の（「
可変」または「Ｖ」）ドメインが分散した、多数の相同な（「保存された」すなわち「Ｃ
」）ドメインを含む。「古典的」すなわち「ｃＰＫＣ」サブファミリーのメンバー（αＰ
ＫＣ、β_ＩＰＫＣ、β_ＩＩＰＫＣおよびγＰＫＣ）は、４つの相同ドメイン（Ｃ１、Ｃ２
、Ｃ３およびＣ４）を含み、そしてカルシウム、ホスファチジルセリン、およびジアシル
グリセロールエステルまたはホルボールエステルを活性化のために必要とする。「新たな
」すなわち「ｎＰＫＣ」サブファミリー（δＰＫＣ、εＰＫＣ、ηＰＫＣおよびθＰＫＣ
）のメンバーは、Ｃ２相同ドメインを欠き、そしてカルシウムを活性化のために必要とし
ない。最後に、「異常な」すなわち「αＰＫＣ」サブファミリーのメンバー（ζＰＫＣお
よびλ／_ｌＰＫＣ）は、Ｃ２相同ドメインおよびＣ１相同ドメインの半分の両方を欠き、
そしてジアシルグリセロール、ホルボールエステルおよびカルシウムに非感受性である。

ＰＫＣアイソザイムの細胞下分布に対する研究は、ＰＫＣの活性化が、その細胞内での
その再分布（トランスロケーションとも呼ばれる）をもたらし、その結果、活性化ＰＫＣ
アイソザイムが、原形質膜、細胞骨格要素、核、および他の細胞下区画と会合することを
実証する（Ｓａｉｔｏ，Ｎ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６
：３４０９−３４１３（１９８９）；Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ，Ｖ．およびＨａｌｌ，
Ｐ．Ｆ．Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１０８：５５３−５６７（１９８９）；Ｍｏｃｈｌｙ
−Ｒｏｓｅｎ，Ｄ．ら，Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ（以前はＣｅｌｌＲｅｇ．）
１：６９３−７０６，（１９９０））。異なるＰＫＣアイソザイムの独特の細胞機能は、
それらの細胞下位置によって決定される。例えば、活性化β_ＩＰＫＣは、核の内側に見出
され、一方、活性化β_ＩＩＰＫＣは、心筋細胞の核周辺および細胞周辺に見出される（Ｄ
ｉｓａｔｎｉｋ，Ｍ．Ｈ．ら，Ｅｘｐ．ＣｅｌｌＲｅｓ．２１０：２８７−２９７（１
９９４））。カルシウムからは独立しているが、リン脂質を活性化のために必要とする新
たなＰＫＣファミリーのメンバーであるεＰＫＣは、後根神経節ならびに背側脊髄の浅層
の両方の一次求心性ニューロンに見出されている。

細胞の異なる領域への異なるＰＫＣアイソザイムの局在は、次いで、活性化Ｃ−キナー
ゼについてのレセプター（ＲｅｃｅｐｔｏｒｓｆｏｒＡｃｔｉｖａｔｅｄＣ−Ｋｉ
ｎａｓｅ；「ＲＡＣＫ」）と称される特異的係留分子への活性化アイソザイムの結合に起
因するようである。ＲＡＣＫは、活性化ＰＫＣアイソザイムをそれらのそれぞれの細胞下
部位へと選択的に係留することによって機能すると考えられている。ＲＡＣＫは、完全に
活性化されたＰＫＣのみを結合し、そして必ずしも、この酵素の基質ではない。Ｎｏｒは
、このキナーゼの触媒ドメインによって媒介されるＲＡＣＫへの結合である（Ｍｏｃｈｌ
ｙ−Ｒｏｓｅｎ，Ｄ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：３９
９７−４０００（１９９１））。ＰＫＣのトランスロケーションは、細胞粒状画分へと固
定されたＲＡＣＫへの活性化酵素の結合を反映し、そしてＲＡＣＫへの結合は、ＰＫＣが
その細胞応答を生じるのに必要とされる（Ｍｏｃｈｌｙ−Ｒｏｓｅｎ，Ｄ．ら，Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ２６８：２４７−２５１（１９９５））。インビボでのＲＡＣＫへのＰＫＣ結合
の阻害は、ＰＫＣトランスロケーションおよびＰＫＣ媒介機能を阻害する（Ｊｏｈｎｓｏ
ｎ，Ｊ．Ａ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：２４９６２−２４９６６（１９９
６ａ）；Ｒｏｎ，Ｄ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：４９
２−４９６（１９９５）；Ｓｍｉｔｈ，Ｂ．Ｌ．およびＭｏｃｈｌｙ−Ｒｏｓｅｎ，Ｄ．
，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１８８：１２３５−１２
４０（１９９２））。

一般に、ＰＫＣのトランスロケーションは、ＰＫＣアイソザイムの適切な機能に必要と
される。ＲＡＣＫ上のＰＫＣ結合部位（Ｍｏｃｈｌｙ−Ｒｏｓｅｎ，Ｄ．ら，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，２２６：１４６６−１４６８（１９９１ａ）；Ｍｏｃｈｌｙ−Ｒｏｓｅ
ｎ，Ｄ．ら，１９９５）またはＰＫＣ上のＲＡＣＫ結合部位（Ｒｏｎら，１９９５；Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ，Ｊ．Ａ．ら，１９９６ａ）のいずれかを模倣するペプチドは、インビボでこ
の酵素の機能を選択的に阻害するＰＫＣのアイソザイム特異的トランスロケーションイン
ヒビターである。

ＰＫＣの個々のアイソザイムは、以下を含む種々の疾患状態の機構に関与している：癌
（αＰＫＣおよびδＰＫＣ）；心肥大および心不全（βＩＰＫＣおよびβＩＩＰＫＣ
）侵害受容（γＰＫＣおよびεＰＫＣ）；心筋梗塞を含む虚血（δＰＫＣ）；免疫応答（
特に、Ｔ細胞媒介性）（θＰＫＣ）；および線維芽細胞（ｆｉｂｒａｂｌａｓｔ）増殖お
よび記憶（ζＰＫＣ）。種々のＰＫＣアイソザイム特異的ペプチドおよび改変領域特異的
ペプチドは、以前に記載されている（例えば、米国特許第５，７８３，４０５号を参照の
こと）。疼痛知覚におけるεＰＫＣの役割は、εＶ１−２ペプチド（上記の’４０５特許
に最初に記載されたεＰＫＣの選択的インヒビター）の治療用途を含め、近年報告されて
いる（ＷＯ００／０１４１５；米国特許第６，３７６，４６７号）。ＲＡＣＫ１（β_Ｉ
_ＩＰＫＣについての選択的係留タンパク質）の結合特異性は、特定のＮ−末端ペプチド、
中間ペプチド、およびＣ末端ペプチドの単独、組み合わせおよびβＣ２ドメイン由来の３
つのペプチドの混合物と一緒での試験を含めて、β_ＩＩＰＫＣのＶ５領域に存在すると近
年報告されている（Ｓｔｅｂｂｉｎｓ，Ｅ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２９
６４４−２９６５０（２００１））。

このような報告の進展にもかかわらず、疾患の処置のための新たな選択的薬剤および方
法（既知のＰＫＣアイソザイム特異的ペプチドおよび可変領域特異的ペプチドに対する代
替物を含む）が所望されており、現在も所望され続けている。したがって、本発明は以下をも提供する。
（１）
ＰＫＣアイソザイムによって調節される疾患状態についての処置方法であって、治療有
効量の対応するＰＫＣＶ５アイソザイム特異的ペプチドを、該処置を必要とする哺乳動
物へと投与する工程を包含し、ただし、該ペプチドは、配列番号１１、配列番号１２、配
列番号１３、配列番号１９、配列番号２０、または配列番号２１のいずれでもない、方法
。
（２）
前記ペプチドが、Ｖ５ドメイン、または所望の活性を保持する、その改変体、誘導体、
フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッドの、Ｎ末端１５アミノ酸の６〜１２から
選択される、項目１に記載の方法。
（３）
前記ペプチドが、前記Ｖ５ドメインのＮ末端の２アミノ酸を含まない、項目２に記載
の方法。
（４）
前記ペプチドが、６〜８アミノ酸を有する、項目３に記載の方法。
（５）
項目４に記載の方法であって、ただし、前記ペプチドが、配列番号５、配列番号１１
、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号
３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４８、配列番号５７、配列番号６３または
配列番号６４のいずれでもない、方法。
（６）
前記ペプチドが、キャリアペプチドに結合体化される、項目４に記載の方法。
（７）
前記ペプチドが、ポリ−Ａｒｇ、Ｔａｔ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＡｎｔｅｎｎ
ａｐｅｄｉａホメオドメインから選択されるキャリアペプチドにＣｙｓ−Ｃｙｓ結合して
いる、項目６に記載の方法。
（８）
前記ペプチドが、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配
列番号９、配列番号１０、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、
配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２
９、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番
号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４５、配列番号４６、配
列番号４７、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５
、配列番号５６、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１および配列番号６２、また
は所望の活性を保持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくは
ハイブリッドの群から選択される、項目１に記載の方法。
（９）
前記ペプチドが、配列番号２、配列番号７、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６
、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２７、配列番号２８、配列番号
３３、配列番号３４、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４５、配列番号４６、配列
番号５０、配列番号５１、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５９および配列番号６
０、または所望の活性を保持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせ
もしくはハイブリッドの群から選択される、項目８に記載の方法。
（１０）
前記ペプチドが、配列番号２、配列番号７、配列番号１５、配列番号２３、配列番号２
７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５０、配列番号５４および配
列番号５９、または所望の活性を保持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組
み合わせもしくはハイブリッドの群から選択される、項目９に記載の方法。
（１１）
前記ペプチドが、配列番号２、配列番号２３、配列番号２７、配列番号３３、配列番号
３９、配列番号４５、配列番号５０、配列番号５４および配列番号５９、または所望の活
性を保持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッ
ドの群から選択される、項目１０に記載の方法。
（１２）
前記ペプチドが、配列番号２、配列番号２３、配列番号２７、配列番号３３、配列番号
３９、配列番号４５、配列番号５０、配列番号５４および配列番号５９の群から選択され
る、項目１１に記載の方法。
（１３）
ＰＫＣＶ５アイソザイム特異的ペプチド、または所望の活性を保有する、それらの改
変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッドであり、ただし、該ペプ
チドは、配列番号５、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１９、配列
番号２０、配列番号２１、配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４８、
配列番号５７、配列番号６３または配列番号６４のいずれでもない、ペプチド、または所
望の活性を保有する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイ
ブリッド。
（１４）
前記ペプチドが、前記Ｖ５ドメイン、または所望の活性を保持する、その改変体、誘導
体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッドの、Ｎ末端１５アミノ酸の６〜１２
から選択される、項目１３に記載のペプチド。
（１５）
前記ペプチドが、前記Ｖ５ドメインのＮ末端の２アミノ酸を含まない、項目１４に記
載のペプチド。
（１６）
前記ペプチドが、６〜８アミノ酸を有する、項目１５に記載のペプチド。
（１７）
前記ペプチドが、キャリアペプチドに結合体化される、項目１３に記載のペプチド。
（１８）
前記ペプチドが、ポリ−Ａｒｇ、Ｔａｔ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＡｎｔｅｎｎ
ａｐｅｄｉａホメオドメインから選択されるキャリアペプチドにＣｙｓ−Ｃｙｓ結合して
いる、項目１７に記載のペプチド。
（１９）
配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番
号１０、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２３、配
列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０
、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３９、配列番号
４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列
番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、
配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１および配列番号６２、または所望の活性を保
持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッドの群
から選択される、項目１３に記載のペプチド。
（２０）
配列番号２、配列番号７、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、
配列番号２３、配列番号２４、配列番号２７、配列番号２８、配列番号３３、配列番号３
４、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４５、配列番号４６、配列番号５０、配列番
号５１、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５９および配列番号６０、または所望の
活性を保持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリ
ッドの群から選択される、項目１９に記載のペプチド。
（２１）
配列番号２、配列番号７、配列番号１５、配列番号２３、配列番号２７、配列番号３３
、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５０、配列番号５４および配列番号５９、また
は所望の活性を保持する、それらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくは
ハイブリッドの群から選択される、項目１９に記載のペプチド。
（２２）
配列番号２、配列番号２３、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４
５、配列番号５０、配列番号５４および配列番号５９、または所望の活性を保持する、そ
れらの改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッドの群から選択さ
れる、項目２１に記載のペプチド。
（２３）
配列番号２、配列番号２３、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４
５、配列番号５０、配列番号５４および配列番号５９の群から選択される、項目２２に
記載のペプチド。
（２４）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１３に記載のペプチド
を含む、処方物。
（２５）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１４に記載のペプチド
を含む、処方物。
（２６）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１５に記載のペプチド
を含む、処方物。
（２７）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１６に記載のペプチド
を含む、処方物。
（２８）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１７に記載のペプチド
／キャリア結合体を含む、処方物。
（２９）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１８に記載のペプチド
／キャリア結合体を含む、処方物。
（３０）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目１９に記載のペプチド
を含む、処方物。
（３１）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目２０に記載のペプチド
を含む、処方物。
（３２）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目２１に記載のペプチド
を含む、処方物。
（３３）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目２２に記載のペプチド
を含む、処方物。
（３４）
薬学的処方物であって、薬学的に受容可能な賦形剤および項目２３に記載のペプチド
を含む、処方物。

（発明の要旨）
本発明は、ＰＫＣアイソザイムによって媒介される疾患を処置するための、ＰＫＣＶ
５アイソザイム特異的ペプチド、薬学的組成物および方法を提供する。これらのペプチド
は、対応するＰＫＣアイソザイムの選択的モジュレータである。

１つの局面では、本発明は、ＰＫＣＶ５アイソザイム特異的ペプチドに関する。

本発明の別の局面では、このペプチドは、Ｖ５ドメインのＮ末端１５アミノ酸の６〜１
２から選択される。

なお別の局面では、このペプチドは、Ｖ５ドメインのＮ末端２アミノ酸を含まない。

なお別の局面では、このペプチドは、６〜８アミノ酸を有する。

本発明のなお別の局面は、キャリアペプチドに結合体化された（好ましくは、ポリ−Ａ
ｒｇ、Ｔａｔ、またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン
から選択されるキャリアペプチドにＣｙｓ−Ｃｙｓ結合された）上記のペプチドに関する
。

本発明は、薬学的に受容可能な賦形剤および上記のペプチドまたはペプチド／キャリア
結合体を含む薬学的処方物をさらに提供する。

上記のペプチド、ペプチド結合体および薬学的処方物は、所望の活性を保持する、それ
らの全ての改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせ、またはハイブリッドを含む。本
発明のペプチドから排除されるのは、以下である：配列番号５、配列番号１１、配列番号
１２、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３１、配列
番号３７、配列番号４３、配列番号４８、配列番号５７、配列番号６３および配列番号６
４。

本発明においてまた提供されるのは、ＰＫＣアイソザイムによって調節される疾患状態
についての処置方法であり、この方法は、治療有効量の上記ＰＫＣＶ５アイソザイム特
異的ペプチド、ペプチド／キャリア結合体（または所望の活性を保持する、それらの改変
体、誘導体、フラグメント、組み合わせもしくはハイブリッド）、またはそれらの薬学的
処方物を、この処置を必要とする哺乳動物へと投与する工程を包含する。１つの実施形態
では、本発明の処置方法から排除されるのは、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１
３、配列番号１９、配列番号２０、または配列番号２１のペプチドを用いる方法である。
別のこのような実施形態では、本発明の処置方法から排除されるのは、配列番号５、配列
番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、
配列番号３１、配列番号３７、配列番号４３、配列番号４８、配列番号５７、配列番号６
３または配列番号６４のペプチドを用いる方法である。

別の局面では、本発明は、疾患を処置する化合物を同定するための、本明細書中に記載
されるペプチドの使用を包含する。

さらなる局面は、疾患の処置において使用するための医薬の調製における、ペプチドま
たはペプチド／キャリア結合体の使用を含む。

本発明のこれらおよび他の目的および特徴は、本発明の以下の詳細な説明が添付の図面
と関連して読まれる場合、より充分に認識される。

（配列の簡単な説明）
配列番号１は、ヒトαＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号２は、配列番号１由来のフラグメントである。

配列番号３は、配列番号１由来の改変フラグメントである。

配列番号４は、配列番号１由来の改変フラグメントである。

配列番号５は、配列番号１由来のフラグメントである。

配列番号６は、ヒトβ_ＩＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号７は、配列番号６由来のフラグメントである。

配列番号８は、配列番号６由来のフラグメントである。

配列番号９は、配列番号６由来の改変フラグメントである。

配列番号１０は、配列番号６由来の改変フラグメントである。

配列番号１１は、配列番号６由来のフラグメントである。

配列番号１２は、配列番号６由来のフラグメントである。

配列番号１３は、配列番号６由来のフラグメントである。

配列番号１４は、ヒトβ_ＩＩＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号１５は、配列番号１４由来のフラグメントである。

配列番号１６は、配列番号１４由来のフラグメントである。

配列番号１７は、配列番号１４由来のフラグメントである。

配列番号１８は、配列番号１４由来の改変フラグメントである。

配列番号１９は、配列番号１４由来のフラグメントである。

配列番号２０は、配列番号１４由来のフラグメントである。

配列番号２１は、配列番号１４由来のフラグメントである。

配列番号２２は、ヒトγＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号２３は、配列番号２２由来のフラグメントである。

配列番号２４は、配列番号２２由来のフラグメントである。

配列番号２５は、配列番号２２由来の改変フラグメントである。

配列番号２６は、ヒトδＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号２７は、配列番号２６由来のフラグメントである。

配列番号２８は、配列番号２６由来のフラグメントである。

配列番号２９は、配列番号２６由来の改変フラグメントである。

配列番号３０は、配列番号２６由来の改変フラグメントである。

配列番号３１は、配列番号２６由来のフラグメントである。

配列番号３２は、ヒトεＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号３３は、配列番号３２由来のフラグメントである。

配列番号３４は、配列番号３２由来のフラグメントである。

配列番号３５は、配列番号３２由来の改変フラグメントである。

配列番号３６は、配列番号３２由来の改変フラグメントである。

配列番号３７は、配列番号３２由来のフラグメントである。

配列番号３８は、ヒトηＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号３９は、配列番号３８由来のフラグメントである。

配列番号４０は、配列番号３８由来のフラグメントである。

配列番号４１は、配列番号３８由来の改変フラグメントである。

配列番号４２は、配列番号３８由来の改変フラグメントである。

配列番号４３は、配列番号３８由来のフラグメントである。

配列番号４４は、ヒトηＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号４５は、配列番号４４由来のフラグメントである。

配列番号４６は、配列番号４４由来のフラグメントである。

配列番号４７は、配列番号４４由来の改変フラグメントである。

配列番号４８は、配列番号４４由来のフラグメントである。

配列番号４９は、ヒトμＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号５０は、配列番号４９由来のフラグメントである。

配列番号５１は、配列番号４９由来のフラグメントである。

配列番号５２は、配列番号４９由来の改変フラグメントである。

配列番号５３は、ヒトθＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号５４は、配列番号５３由来のフラグメントである。

配列番号５５は、配列番号５３由来のフラグメントである。

配列番号５６は、配列番号５３由来の改変フラグメントである。

配列番号５７は、配列番号５３由来のフラグメントである。

配列番号５８は、ヒトξＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインを表す。

配列番号５９は、配列番号５８由来のフラグメントである。

配列番号６０は、配列番号５８由来のフラグメントである。

配列番号６１は、配列番号５８由来の改変フラグメントである。

配列番号６２は、配列番号５８由来の改変フラグメントである。

配列番号６３は、配列番号５８由来のフラグメントである。

配列番号６４は、ヒトμＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメイン由来のフラグメントを表す
。

配列番号６５は、Ｔａｔ由来キャリアペプチド（Ｔａｔ４７−５７）：ＴｙｒＧｌ
ｙＬｙｓＬｙｓＡｒｇＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇＡｒｇである。

配列番号６６は、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン由
来キャリアペプチド：ＣｙｓＡｒｇＧｌｎＩｌｅＬｙｓＩｌｅＴｒｐＰｈ
ｅＧｌｎＡｓｎＡｒｇＡｒｇＭｅｔＬｙｓＴｒｐＬｙｓＬｙｓである
。

（発明の詳細な説明）
（定義）
他に示さない限り、本明細書中に記載される全ての用語は、本発明の分野の当業者にと
っての用語と同じ意味を有する。実施者は、特に、当該分野の定義および用語に関してＣ
ｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（Ａｕ
ｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｄ
ｉａＰａ．）が示される。

アミノ酸残基に関する略語は、２０種の一般的Ｌ−アミノ酸のうちの１つを言及するた
めに当該分野において用いられる標準的な３文字コードおよび／または１文字コードであ
る。

「保存されたセット」のアミノ酸とは、一群のタンパク質のメンバー間で同一であるか
または非常に相同である、（例えば、保存的アミノ酸置換のみを有する）アミノ酸連続配
列をいう。保存されたセットは、２〜５０を超えるアミノ酸残基長のどれかであり得る。
代表的に、保存されたセットは、２と１０との間の個数連続する残基長である。例えば、
２つのペプチドＣＧＲＮＡＥ（配列番号１５）およびＡＣＧＲＮＡＥ（配列番号１９）に
関して、これらの２つの配列に関して保存されたセットのアミノ酸を形成する、６つの同
一位置（ＣＧＲＮＡＥ）が存在する。

「保存的アミノ酸置換」は、選択されたポリペプチドまたはタンパク質の活性にも三次
構造にも顕著な変化をもたらさない置換である。このような置換は代表的に、選択された
アミノ酸残基を、類似の物理化学的特性を有する異なる残基で置換することを含む。
例えば、ＧｌｕによるＡｓｐの置換は、保存的置換と考えられる。なぜなら、両方とも、
同様のサイズの負に荷電したアミノ酸であるからである。物理化学的性質によるアミノ酸
のグループ分けは、当業者に公知である。

「ドメイン」および「領域」は、本明細書中で交換可能に用いられ、そして（代表的に
は保存されているかまたは可変性であるかのいずれかによって特徴付けられる）ＰＫＣア
イソザイム内のアミノ酸の連続配列をいう。

「ペプチド」および「ポリペプチド」は、本明細書中で交換可能に用いられ、そしてペ
プチド結合によって連結されたアミノ酸残基鎖から構成される化合物をいう。他に示され
ない限り、ペプチドについての配列は、「Ｎ」（すなわちアミノ）末端から「Ｃ」（すな
わちカルボキシル）末端への順番で与えられる。

２つのアミノ酸配列または２つのヌクレオチド配列は、これらが、プログラムＡＬＩＧ
Ｎを変異ギャップマトリクスおよび６以上のギャップペナルティ（Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．
Ｏ．，ＡＴＬＡＳＯＦＰＲＯＴＥＩＮＳＥＱＵＥＮＣＥＡＮＤＳＴＲＵＣＴＵ
ＲＥ（１９７２）第５巻，ＮａｔｉｏｎａｌＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ
Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，１０１−１１０頁、およびこの巻に対する補遺２，１−１０頁
）で用いて５より高いアライメントスコア（標準偏差単位において）を有するならば、（
この用語は、好ましくは本明細書中で用いられる場合）「相同」と考えられる。これらの
２つの配列（またはそれらの部分）は、それらのアミノ酸が、上記のＡＬＩＧＮプログラ
ムを用いて最適にアライメントした場合に５０％以上（より好ましくは７０％以上、なお
より好ましくは８０％以上）同一であるならば、より好ましくは相同である。

ペプチドまたはペプチドフラグメントは、親ペプチドまたは親ポリペプチドのアミノ酸
配列に対して相同であるアミノ酸配列を有するか、または親ペプチドまたは親ポリペプチ
ドからの保存されたフラグメントであるならば、親ペプチドまたは親ポリペプチド「由来
」である。

「調節する」とは、ＰＫＣ活性化の低下、増大、またはＰＫＣ活性化における何らかの
他の測定可能な変化を意図する。

「管理」とは、例えば、疼痛を処置する状況では、疼痛の低下および／または痛覚脱失
の誘導の両方を意図する。

用語「処置」または「処置する」は、以下を包含する、哺乳動物における疾患の任意の
処置を意味する：（ａ）この疾患を予防するかもしくはこの疾患に対して保護する、すな
わち、臨床的徴候を発症させないこと；（ｂ）この疾患を阻害する、すなわち、臨床的徴
候の発症を阻止もしくは抑制する；および／または（ｃ）この疾患を軽減する、すなわち
、臨床的徴候の後退を引き起こす。ヒトの医薬において、「予防すること」と「抑制する
こと」との間を区別することが常に可能なわけではないことが当業者によって理解される
。なぜなら、最終的な誘導性事象が未知であり得るか、潜伏性であり得るか、またはその
患者はその事象の発生のずっと後まで確認しないからである。それゆえ、本明細書中で用
いられる場合、用語「予防」は、本明細書中で定義される、「予防する」および「抑制す
る」の両方を包含する、「処置」の１要素であると意図される。用語「保護」は、本明細
書中で用いられる場合、「予防」を包含することを意図する。

用語「有効量」は、処置されるべき障害または疾患状態についての処置を提供するに充
分な投薬量を意味する。これは、患者、疾患およびもたらされる処置に依存して変動する
。

用語「薬学的に受容可能なキャリア」または「薬学的に受容可能な賦形剤」は、任意の
そして全ての溶媒和物、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および
吸収遅延剤などを包含する。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使
用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合性である
場合を除いて、治療組成物におけるその使用が意図される。補助的な活性成分もまた、組
成物中に組み込まれ得る。

（本発明のＰＫＣペプチド）
先行技術の報告は、Ｖ１ドメイン、Ｖ３ドメインおよびＶ５ドメイン由来のＰＫＣアイ
ソザイム特異的ペプチドおよび可変領域特異的ペプチドに焦点を合わせているが、Ｖ５ド
メイン由来のペプチドの治療可能性および関連の可能性が大部分同定されていないままで
ある。さらに、Ｖ５ドメイン由来のペプチドが記載される程度まで、このようなペプチド
は、Ｖ５ドメインのＮ末端由来の約２５アミノ酸から始まって、Ｖ５ドメインのほぼ中心
から優先的に選択されている。

一般に、本発明は、疾患を処置および／または管理する際に使用するための、任意のプ
ロテインキナーゼＣアイソザイムのＶ５領域由来のペプチドの使用を意図する。本発明は
、このようなＰＫＣアイソザイム特異的Ｖ５ペプチド（使用方法および処置方法、組成物
、およびその薬学的処方物を含む）に関する。特に、好ましいのは、Ｖ５ドメインのＮ末
端１５アミノ酸、またはそれらの保存的改変物および並列物の約６〜１２から選択される
ペプチドである。さらに好ましいのは、Ｖ５ドメインのＮ末端２アミノ酸を含まないペプ
チド（特に、６〜８アミノ酸を有するペプチド）である。これらのペプチドは、ネイティ
ブな形態で用いられ得るか、または（例えば、キャリア上のＣｙｓとこのペプチド（例え
ば、以下に記載されるもの）内のＣｙｓもしくはこのペプチドに付加されたＣｙｓとの間
でのジスルフィド結合を介して）キャリアに結合体化されることにより改変され得る。

ネイティブ配列に相同なペプチドおよび保存的アミノ酸置換および／または並列を有す
るペプチド、ならびに活性を保持するフラグメントが、意図されるペプチドの範囲内にあ
ることが認識される。例えば、ＲとＫとの間；Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＲおよびＤの間；ならびに／
またはＧ、Ａ、ＰおよびＮの間で１以上のアミノ酸（好ましくは、２以下）を交換し得る
。従って、用語「ＰＫＣＶ５ペプチド」は、ネイティブ配列、ならびに所望の活性を保
持する、それらの全ての改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせ、およびハイブリッ
ドを意図する。

以下の配列は、種々のＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインおよびそれら由来の例示的な
フラグメントに対応する。例示的な改変ペプチドもまた以下に記載され、ここで、置換が
小文字で示される。全ての場合において、本明細書中に明示される配列に由来する配列お
よび明示される配列と相同な配列（例えば、他種由来の極めて相同な配列）が意図される
ことが認識される。本明細書中に記載される全てのペプチドは、当該分野で公知の、自動
または手動のいずれかの固相合成技術を用いる化学合成によって調製され得る。これらの
ペプチドはまた、当該分野で公知の技術を用いて組換え調製され得る。

αＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、αＰＫＣの配列のアミノ酸残基６１６から得
られたアミノ酸配列：「ＰＫＶＣＧＫＧＡＥＮＦＤＫＦＦＴＲＧＱＰＶＬＴＰＰＤ
ＱＬＶＩＡＮＩＤＱＳＤＦＥＧＦＳＹＶＮＰＱＦＶＨＰＩＬＱＳＡＶ」（配列番号１
）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸残基６２０〜６２５に対応するＧＫＧ
ＡＥＮ（配列番号２）、ならびに改変ペプチド「ａｒＧＡＥＮ」（配列番号３）およびｃ
ＧＫＧＡＥＮ（配列番号４）が挙げられる。除かれるのは、ペプチドＱＬＶＩＡＮ（配列
番号５）である。

β_ＩＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＫＡＲＤＫＲＤＴＳ
ＮＦＤＫＥＦＴＲＱＰＶＥＬＴＰＴＤＫＬＦＩＭＮＬＤＱＮＥＦＡＧＦＳＹＴＮ
ＰＥＦＶＩＮＶ」（配列番号６）を有する。例示的なペプチドとしては、ＲＤＫＲＤＴ
Ｓ（配列番号７）およびＡＲＤＫＲＤＴＳＮＦＤＫ（配列番号８）、ならびに改変ペプ
チドｃＡＲＤＫＲＤＴＳ（配列番号９）およびｇＲＤＫＲＤＴＳ（配列番号１０）が挙げ
られる。除かれるのは、ペプチドＡＲＤＫＲＤＴＳ（配列番号１１）、ＫＬＦＩＭＮ（配
列番号１２）およびＡＧＦＳＹＴＮＰＥＦＶＩＮＶ（配列番号１３）である。

β_ＩＩ−ＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＫＡＣＧＲＮＡ
ＥＮＦＤＲＦＦＴＲＨＰＰＶＬＴＰＰＤＱＥＶＩＲＮＩＤＱＳＥＦＥＧＦＳＦＶＮ
ＳＥＦＬＫＰＥＶＫＳ」（配列番号１４）を有する。例示的なペプチドとしては、ＣＧ
ＲＮＡＥ（配列番号１５）、ＫＡＣＧＲＮＡＥ（配列番号１６）およびＣＧＲＮＡＥＮ（
配列番号１７）ならびに改変ペプチドＡＣＧｋＮＡＥ（配列番号１８）が挙げられる。除
かれるのは、ペプチドＡＣＧＲＮＡＥ（配列番号１９）、ＱＥＶＩＲＮ（配列番号２０）
およびＳＦＶＮＳＥＦＬＫＰＥＶＫＳ（配列番号２１）である。

γＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、γＰＫＣの配列のアミノ酸残基６３３から選
んだアミノ酸配列：「ＰＲＰＣＧＲＳＧＥＮＦＤＫＦＦＴＲＡＡＰＡＬＴＰＰＤＲＬ
ＶＬＡＳＩＤＱＡＤＦＱＧＦＴＹＶＮＰＤＦＶＨＰＤＡＲＳＰＴＳＰＶＰＶＰＶＭ
」（配列番号２２）を有する。例示は、ペプチドＧＲＳＧＥＮ（配列番号２３）およびＰ
ＣＧＲＳＧＥＮ（配列番号２４）、ならびに改変ペプチドＧｋＳＧＥＮ（配列番号２５）
である。

δＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＫＶＫＳＰＲＤＹＳＮ
ＦＤＱＥＦＬＮＥＫＡＲＬＳＹＳＤＫＮＬＩＤＳＭＤＱＳＡＦＡＧＦＳＦＶＮＰＫＦ
ＥＨＬＬＥＤ」（配列番号２６）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸残基
６２４〜６３１から得られたＶＫＳＰＲＤＹＳ（配列番号２７）、ＰＫＶＫＳＰＲＤＹ
ＳＮ（配列番号２８）、ならびに改変ペプチドＶＫＳＰｃＲＤＹＳ（配列番号２９）およ
びｉＫＳＰＲｌＹＳ（配列番号３０）が挙げられる。除かれるのは、ペプチドＫＮＬＩＤ
Ｓ（配列番号３１）である。

εＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＲＩＫＴＫＲＤＶＮＮＦ
ＤＱＤＦＴＲＥＥＰＶＬＴＬＶＤＥＡＩＶＫＱＩＮＱＥＥＦＫＧＦＳＹＦＧＥＤＬＭＰ
」（配列番号３２）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸残基６８９〜６９５
から得られたＩＫＴＫＲＤＶ（配列番号３３）およびＴＫＲＤＶＮＮＦＤＱ（配列番号３
４）、ならびに改変ペプチドｃＥＡＩＶＫＱ（配列番号３５）およびＩＫＴＫＲｌｉ（配
列番号３６）。除かれるのは、ペプチドＥＡＩＶＫＱ（配列番号３７）である。

ηＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＲＩＫＳＲＥＤＶＳＮ
ＦＤＰＤＦＩＫＥＥＰＶＬＴＰＩＤＥＧＨＬＰＭＩＮＱＤＥＦＲＮＦＳＹＶＳＰＥＬ
ＱＰ」（配列番号３８）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸残基６３４〜
６４１から得られたＩＫＳＲＥＤＶＳ（配列番号３９）、およびＰＲＩＫＳＲＥＤＶ（配
列番号４０）、ならびに改変ペプチドｖｒＳＲＥＤＶＳ（配列番号４１）およびＥＧＨｄ
ＰＭ（配列番号４２）が挙げられる。除かれるのは、ペプチドＥＧＨＬＰＭ（配列番号４
３）である。

ιＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＮＩＳＧＥＦＧＬＤＮ
ＦＤＳＱＦＴＮＥＰＶＱＬＴＰＤＤＤＤＩＶＲＫＩＤＱＳＥＦＥＧＦＥＹＩＮＰＬＬ
ＭＳＡＥＥＣＶ」（配列番号４４）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸残
基５３４〜５４１から得たＩＳＧＥＦＧＬＤ（配列番号４５）およびＤＤＤＩＶＲＫ（配
列番号４６）、ならびに改変ペプチドｃＳＧＥＦＧＬＤ（配列番号４７）が挙げられる。
除かれるのは、ペプチドＤＤＩＶＲＫ（配列番号４８）である。

μＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、以下のアミノ酸配列を有する：

例示的なペプチドとしては、アミノ酸残基７２３〜７３０から得たＶＫＬＣＤＦＧＦ（配
列番号５０）、およびＱＶＫＬＣＤＦＧＦＡ（配列番号５１）、ならびに改変ペプチドｉ
ｒＬＣＤＦａＦ（配列番号５２）が挙げられる。

θＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＫＶＫＳＰＦＤＣＳＮ
ＦＤＫＥＦＬＮＥＫＰＲＬＳＦＡＤＲＡＬＩＮＳＭＤＱＮＭＦＲＮＦＳＦＭＮＰＧ
ＭＥＲＬＩＳ」（配列番号５３）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸残基６
５５〜６６２から得たＶＫＳＰＦＤＣＳ（配列番号５４）、およびＤＲＡＬＩＮＳ（配列
番号５５）、ならびに改変ペプチドＶｒＳＰＦＤＣＳ（配列番号５６）が挙げられる。除
かれるのは、ペプチドＲＡＬＩＮＳ（配列番号５７）である。

ξＰＫＣアイソザイムのＶ５ドメインは、アミノ酸配列：「ＰＱＩＴＤＤＹＧＬＤＮ
ＦＤＴＱＦＴＳＥＰＶＱＬＴＰＤＤＥＤＡＩＫＲＩＤＱＳＥＦＥＧＦＥＹＩＮＰＬ
ＬＬＳＴＥＥＳＶ」（配列番号５８）を有する。例示的なペプチドとしては、アミノ酸
残基５３９〜５４６から得たＩＴＤＤＹＧＬＤ（配列番号５９）、およびＤＤＹＧＬＤＮ
（配列番号６０）、ならびに改変ペプチドＩＴＤＤＹＧｄｌ（配列番号６１）およびＥＤ
ＡＩＲ（配列番号６２）が挙げられる。除かれるのは、ペプチドＥＤＡＩＫＲ（配列番号
６３）である。

また除かれるのは、米国特許第５，７８３，４０５号においてμＰＫＣＶ５ペプチド
「μＶ５−１」と同定されるペプチドＳＤＳＰＥＡ（配列番号６４）である。

上記に記載した例示的なフラグメントの全てにおいて、認められるほどには活性を改変
しない、保存的改変体および他の改変体が作製され得、そして意図されるペプチド内に入
る。

好ましいのは、以下の群のペプチドである：配列番号２、配列番号３、配列番号４、配
列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１５、配列番号１６、配列
番号１７、配列番号１８、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２７、
配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３
５、配列番号３６、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番
号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配
列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１
および配列番号６２（必要に応じて、所望の活性を保持する、それらの全ての改変体、誘
導体、フラグメント、組み合わせおよびハイブリッドを包含する）。

より好ましいのは、以下の群のペプチドである：配列番号２、配列番号７、配列番号８
、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２４、配列番号
２７、配列番号２８、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３９、配列番号４０、配列
番号４５、配列番号４６、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５４、配列番号５５、
配列番号５９および配列番号６０（必要に応じて、所望の活性を保持する、それらの全て
の改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせおよびハイブリッドを包含する。

なおより好ましいのは、以下の群のペプチドである：配列番号２、配列番号７、配列番
号１５、配列番号２３、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配
列番号５０、配列番号５４および配列番号５９（必要に応じて、所望の活性を保持する、
それらの全ての改変体、誘導体、フラグメント、組み合わせおよびハイブリッドを包含す
る）。

同様に好ましいのは、以下の群のペプチドである：配列番号２、配列番号２３、配列番
号２７、配列番号３３、配列番号３９、配列番号４５、配列番号５０、配列番号５４およ
び配列番号５９（必要に応じて、所望の活性を保持する、それらの全ての改変体、誘導体
、フラグメント、組み合わせおよびハイブリッドを包含する）。

（有用性）
（治療適応症）
本発明のＰＫＣアイソザイム特異的Ｖ５ペプチドは、それらが由来するアイソザイムに
対して選択的であるＰＫＣのモジュレータとして有用である。その点について、これらの
ペプチドは、以下を含む、特定のＰＫＣアイソザイムに関連した、哺乳動物（特に、ヒト
）の疾患状態の処置において用いられ得る：αＰＫＣ（過剰増殖性細胞疾患（例えば、癌
）；β_ＩＰＫＣおよびβ_ＩＩＰＫＣ（心肥大および心不全）；γＰＫＣ（疼痛管理）；δ
ＰＫＣ（組織を虚血事象または低酸素性事象（例えば、心筋梗塞および発作）に起因した
損傷、またはＵＶ照射によって誘導されるアポトーシスから保護し、そして瘢痕のない創
傷治癒を促進するために線維芽細胞増殖を阻害する）；εＰＫＣ（疼痛管理、心筋機能不
全）；θＰＫＣ（免疫系の調節（特に、Ｔ細胞媒介応答を含む））；およびζＰＫＣ（記
憶および刺激線維芽細胞増殖）。

例として、疼痛は、医師によって認められる基本的臨床症状であり、しばしば、軽度、
中程度または重度に分類される。本明細書中に記載されるγＰＫＣペプチドおよびεＰＫ
Ｃペプチドは、これらの任意のカテゴリーにおいて、疼痛の処置に適切である。例えば、
癌および手術後外科的疼痛は、中程度から重度の分類であるとしばしば記載される。骨、
神経、軟組織、または内臓の腫瘍浸潤は、癌疼痛の一般的原因である。種々の因子（例え
ば、腫瘍の型、状態、および部位、ならびに患者の変動要因）は、患者における癌疼痛の
有病率に影響を与える。手術後疼痛に関して、疼痛の重篤度はしばしば、介入の位置およ
び程度に依存する。

より詳細には、γＰＫＣペプチドおよびεＰＫＣペプチドは、例えば、神経障害状態ま
たは炎症状態によって引き起こされる、急性または慢性の疼痛の処置に適している。処置
が意図される例示的な炎症状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：日
焼け、変形性関節症、大腸炎、心臓炎、皮膚炎、筋炎（ｍｙｏｓｔｉｓ）、神経炎、およ
び慢性関節リウマチ、狼瘡および他のコラーゲン血管疾患、ならびに手術後外科的疼痛。
神経障害疼痛に関連した状態としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：外傷
、外科手術、切断、膿瘍、脱髄疾患、三叉神経痛、癌、慢性アルコール症、発作、視床疼
痛症候群、糖尿病、ヘルペス感染など。

炎症および神経損傷は、痛覚過敏を誘導し得、ここで、有害刺激が、疼痛の閾値の低下
に起因して、激しく有痛であると知覚される。従って、疼痛の処置に取り組む実施形態で
は、本発明は、患者における痛覚過敏を処置するための組成物および方法を意図する。さ
らに、本発明は、被験体における異痛症を処置する（すなわち、通常無害の刺激に関連し
た疼痛を処置する）ための組成物および方法を意図する。

（同定方法における使用）
本発明の有用性の別の局面は、（例えば、本明細書中に記載されるペプチドを、これら
のペプチドの活性を模倣する化合物の同定のための調査ツールとして用いることにより）
疼痛を調節する化合物を同定する方法である。本発明はまた、これらのペプチドの作用部
位を検出するためのアッセイにおける、またはこれらのペプチドの作用機構についての研
究における、ペプチドの使用を意図する。これらのペプチドの活性を模倣する化合物を同
定する際に、これらのペプチドが結合する細胞レセプターに結合し得るかさもなければこ
れらのペプチドと同様の生理学的様式で作用し得る化合物は、いくつかの技術によって同
定され得る。例えば、１つの方法は、本発明のＰＫＣペプチドの活性を決定する生物学的
アッセイに試験化合物を添加し、そして試験化合物の活性を検出することを包含する。あ
るいは、ＰＫＣアイソザイムの活性を調節する試験化合物は、アッセイを用いて決定され
得、次いで対応する治療活性について試験され得る。

例えば、競合的結合スクリーニングアッセイは、試験化合物および検出可能に標識され
た本発明のペプチドを、このペプチドの結合を可能にする条件下で、哺乳動物の細胞、組
織または適切なＲＡＣＫへと添加し、そして結果を細胞、組織またはＲＡＣＫに対する（
試験化合物なしの）標識ペプチドの結合に対して比較することにより、ＰＫＣアイソザイ
ムの活性を模倣する化合物を同定するために用いられ得る。ペプチドの活性を模倣する化
合物は、細胞、組織またはＲＡＣＫへの結合について、このペプチドと競合し得る。その
結果、レセプターに結合することによって試験化合物がこのペプチドの活性を模倣する場
合、（試験化合物がペプチドの活性を模倣せず、レセプターに結合せず、しかも親和性が
より低い場合の遊離およびＲＡＣＫ結合標識ペプチドの量と比較して）より少量のＲＡＣ
Ｋに結合した標識ペプチド（またはより多量のＲＡＣＫ未結合標識ペプチド）が測定され
る。

一般に、ＰＫＣアイソザイムの活性を模倣する化合物の同定は、試験化合物が、対応す
るＰＫＣアイソザイムの活性を阻害、増強または調節する能力を測定することにより、同
定される。選択されたアッセイにおけるＰＫＣアイソザイムの活性は、試験化合物の存在
下および不存在下において測定される。このアッセイは、競合的結合アッセイ（例えば、
上記の通り）または第２メッセンジャーの産生調節、細胞代謝の変化、もしくは酵素活性
に対する影響をモニタリングする細胞アッセイであり得る。次いで、ＰＫＣアイソザイム
の活性を模倣または調節すると同定される化合物は、対応するインビボ疾患モデルを用い
て、治療活性について試験される。

（試験）
本発明のペプチドの活性は、上記の適応症の処置における効力の、確立されたインビト
ロアッセイおよびインビボアッセイのいずれかを用いて決定され得る。もちろん、最終的
には、安全性および効力が、制御されたヒト臨床研究において決定される。

代表的試験プロトコルは、疼痛の処置についての活性および虚血の処置についての活性
を決定する状況について以下にまとめられる。他のＰＫＣＶ５ペプチド適応症について
の試験プロトコルは、当業者に周知である。

（疼痛管理についてＰＫＣペプチドによって例示されるＶ５ドメイン活性）
ＰＫＣペプチドが侵害受容を調節する効果は、カプサイシンまたはホルマリンによって
誘導される急性炎症性疼痛のモデルを用いて調査される。これらのモデルおよび有害刺激
に対する感受性の長期上昇を有する他のモデルは、特定のヒト病理学的疼痛をモデル化す
る際に有用であり得る。炎症のカプサイシンモデルは、低速熱試験とともに、慢性疼痛か
ら生じる主な感作および痛覚過敏を模倣する。皮膚へのカプサイシンの塗布は、低加熱速
度熱試験の間の足引っ込め潜在時間の顕著な低下によって示される、頑強な、何時間にも
わたる、Ｃ線維選択的痛覚過敏を生じる。カプサイシンは、香辛料の利いた「辛い」食品
における活性成分である。カプサイシンについてのレセプター（Ｃ線維上に見出されるＶ
Ｒ−１バニロイド（ｖａｎｉｌｌｏｉｄ）レセプター）は、近年クローニングされた。こ
れは、リガンドゲートの非選択的カチオンチャネルである。カプサイシンに応答すること
に加えて、ＶＲ−１はまた、熱刺激（約４３℃）（ＫｉｄｄＢ．Ｌ．ら，Ｂｒ．Ｊ．Ａ
ｎａｅｓｔｈ．，８７（１）：３−１１（２００１））およびプロトンにも応答する。こ
のことは、その活性が炎症の間に増強されることを示唆する。カプサイシンは、Ｃ線維に
対して選択的に活性化および感作し、Ａδに対してはそうでないことが示されている。そ
れゆえ、Ａδ潜伏時間の測定値は、研究の間の動物の幸福についてのコントロールとして
用いられる。

齧歯動物におけるホルマリンモデルは、ヒトにおける損傷誘導性疼痛を処置する際の予
測試験として確認されている（Ｄｅｎｎｉｓ，Ｓ．Ｇ．およびＭｅｌｚａｃｋ，Ｒ．，Ａ
ｄｖａｎｃｅｓｉｎＰａｉｎＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＴｈｅｒａｐｙ，第３巻
，７４７，Ｊ．Ｊ．Ｂｏｎｉｃａら編，ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１
９７９；Ｔｊｏｌｓｅｎ，Ａ．ら，Ｐａｉｎ，５１：５−１７（１９９２））。このモデ
ルは、二期応答を生じ、ここで、第１期は、化学的侵害受容器がメディエータであること
以外は、急性期試験について記載されている特徴と特徴が類似して、一次求心性バレッジ
によって誘発される。第２期は、初期組織損傷から生じる痛覚過敏自然活性であると考え
られ、侵害受容閾値の低下および対応する脊髄回路の起動または「興奮」を反映する。従
って、末梢ニューロン回路および中枢ニューロン回路ならびにメディエータの両方とも、
この有痛性組織損傷状態を誘導して維持するために必要とされる。

上記の通りに試験された場合、γＰＫＣＶ５ペプチドおよびεＰＫＣＶ５ペプチド
は、疼痛における実質的低減を付与する。

（虚血についてＰＫＣペプチドによって例示されるＶ５ドメイン活性）
単離されたラット心筋細胞への投与は、虚血からの保護におけるδＰＫＣペプチドの活
性を決定するために用いられ得る。ペプチドまたはキャリア−ペプチド結合体は、単離さ
れた成体ラット心筋細胞へと、長期虚血の１０分前に導入される。細胞損傷は、トリパン
ブルーの取り込みを測定することによる、浸透圧脆弱性試験を用いて評価される。

エクスビボでの心臓全体への投与は、器官全体へと細胞外導入された場合、ペプチドが
活性を有するか否かを決定するために用いられ得る。キャリアペプチドであるＴａｔ由来
ペプチドへと必要に応じて結合体化されたペプチドは、虚血期間の誘導の前に、ランゲル
ドルフ灌流ラット心臓へと送達される。これらのペプチドを用いた灌流の後、全体的虚血
が３０分間もたらされる。３０分間の虚血後、放出されたクレアチンホスホキナーゼ（Ｃ
ＰＫ）の量が、３０分間の再灌流期間の間、モニタリングされる。

別の研究は、これらのペプチドがインタクトな器官へと送達されて、虚血傷害後に防御
を提供し得るか否かを決定する。この研究において、上記のラット心臓モデルが用いられ
、そして血流力学パラメーターが、２０分間の全体的虚血および２０分間の再灌流の間に
測定される。試験ペプチドは、再灌流期間の間のみ、５００ｎＭの濃度にて送達される。

組織を、虚血性事象または低酸素自称に起因する損傷から保護することは、ペプチドを
成体雌性ブタに（好ましくは、３０分間の虚血性損傷の最後の１０分間の間に）インビボ
で投与することにより、評価され得る。５日後、心臓が組織損傷に関して分析される。

別の研究では、左心室図（ｖｅｎｔｒｉｃｕｒｏｇｒａｍ）を、ブタ（ｎ＝５）におい
て、３つの時点で行う：（１）バルーンカテーテルによる左前室間動脈の閉塞前（虚血前
）；（２）２．５μＭ／１０ｍＬのδＶ１−１を用いた再灌流直後（虚血後）；および（
３）６Ｆｒ．のピッグテイルカテーテルを用いた５日後の屠殺前（虚血後５日後）。ＬＶ
Ｇは、２視野（右前斜めおよび左前斜め）によって記録される。左心室に存在する総最大
量値に対する最大収縮の間の駆出率（ＥＦ）（１拍動において駆出された血液のパーセン
ト）は、ソフトウェアＰｌｕｓＰｌｕｓ（ＳａｎｄｅｒｓＤａｔａＳｙｓｔｅｍｓ
）によって分析され、そして２視野の平均が評価される。駆出率は、左心室の寸法に基づ
いて計算される。駆出率は、心臓がどれくらい良好に機能しているかの尺度であり、より
高い駆出率は、より良好に機能する心臓の指標である。短期間における５０％未満の駆出
率は、心不全の状態への進行を示唆し得る。

発作の結果としての脳に対する損傷の阻害は、ラットの大脳虚血モデルにおいて調べら
れ得る。虚血は、管内縫合を用いて中脳動脈の口を閉塞させることで誘導される。Ｔａｔ
ペプチドへ必要に応じて結合体化された試験ペプチドまたはＴａｔペプチド単独は、２時
間の閉塞期間の前および後に頸動脈へと注射される。各動物からの脳は、２４時間後に収
集され、染色され、そして調べられる。

上記の通りに試験された場合、δＰＫＣＶ５ペプチドは、虚血の前、間または後に送
達された場合、虚血によって誘導される心臓および脳に対する損傷の実質的低減を付与す
る。

（投与）
これらのペプチドは、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と合わせることにより
、投与のために調製される。従って、本発明のさらなる局面は、本発明のペプチドを含む
薬学的組成物を、被験体への投与のための投薬形態で提供する。このような投薬形態とし
ては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：経口投与のための、錠剤、カプセル剤
、懸濁剤、シロップ剤（ここで、適切な薬学的キャリアとしては、デンプン、ラクトース
、タルク、ステアリン酸マグネシウム、水溶液、油−水乳濁剤などが挙げられる）。他の
投薬形態としては、髄腔内、静脈内、筋肉内、皮下が挙げられ、ここで、適切な薬学的キ
ャリアとしては、緩衝化水性媒体または非水性媒体が挙げられる。これらのペプチドは、
（例えば、炎症部位付近または末梢神経損傷部位付近に）（例えば、局所適用、皮内注射
または薬物送達カテーテルによって）局所投与され得る。

組成物中のこれらのペプチドの量は、適切な用量が得られて治療効果が達成されるよう
に変化され得る。投薬量は、多数の因子（例えば、投与経路、処置の持続時間、患者のサ
イズおよび身体状態、このペプチドの効力および患者の応答）に依存する。このペプチド
の有効量は、このペプチドを、本明細書中に記載されるモデルを含め、当該分野で公知の
１以上のモデルにおいて試験することにより、決定され得る。

これらのペプチドは、毎時間、１日あたり数回、毎日、または疼痛を経験している人ま
たはその人の医師が適切とみなす頻度で、必要に応じて投与され得る。これらのペプチド
は、慢性適応症の継続中の管理に基づいて投与され得るか、または急性適応症の後の前に
短時間に基づいて投与され得る。

本発明のペプチドは、単独で、またはキャリアペプチド（例えば、Ｔａｔキャリアペプ
チド（このうち、配列番号６５と同定される配列を有するこのペプチドが例示的である）
）に連結されて、投与され得る。他の適切なキャリアペプチド（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈ
ｉｌａＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン（配列番号６６；Ｔｈｅｏｄｏｒｅ，
Ｌ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１５：７１５８（１９９５）；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｊ．Ａ
．ら，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７９：１０８６（１９９６ｂ））は、公知であり、そして意図
され、ここで、ＰＫＣペプチドは、Ｎ末端Ｃｙｓ−Ｃｙｓ結合を介してＡｎｔｅｎｎａｐ
ｅｄｉａキャリアへと架橋される。ポリアルギニンは、別の例示的なキャリアペプチドで
ある（Ｍｉｔｃｈｅｌｌら，Ｊ．ＰｅｐｔｉｄｅＲｅｓ．，５６：３１８−３２５（２
０００）；Ｒｏｌｈｂａｒｄら，ＮａｔｕｒｅＭｅｄ．，６：１２５３−１２５７（２
０００））。

以下の実施例は、本明細書中に記載される発明をさらに例示し、そして本発明の範囲を
限定することを決して意図しない。

（実施例１：カプサイシン誘発性侵害受容に対するＰＫＣペプチドの影響）
成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２００ｇ〜２５０ｇの間の体重）に、
ウレタン（８００ｍｇ．ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いて軽く麻酔する。各動物の背表面に、墨
を塗布して、背表面に熱が均質的に適用されることを確実にする。全ての動物（ｎ＝１０
／試験群）のベースライン測定値を、Ｃ線維（０．９℃／秒加熱速度）およびＡδ線維（
６．５℃／秒加熱速度）の両方に関して４５分間採取する。投与されたこれらのペプチド
は、このアッセイにおいて以前に活性であると同定された、アミノ酸配列ＥＡＩＶＫＱ（
配列番号３７）を有するポジティブコントロールのεＰＫＣアンタゴニスト、配列番号２
３、配列番号２４および配列番号２５として同定されるγＰＫＣペプチド、ならびに配列
番号３３、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６として同定さ
れるεＰＫＣペプチドである。全てのペプチドは、Ｔａｔキャリアペプチドへと連結され
、このうち、配列番号６５と同定される配列は、例示的である。第２のシリーズのこれら
のペプチドは、キャリアなしで試験される。コントロールペプチドおよび試験ペプチドは
、左後肢でのカプサイシン（１００μＬの３％カプサイシン）の局所投与の１５分前に、
直接腰椎穿刺（２０μＬ中の１０μＭペプチド）を介して髄腔内送達される。ネガティブ
コントロールとして、生理食塩水およびＴａｔ−キャリアペプチドもまた、２つの別の群
の試験動物へと投与する。潜伏時間測定は、直接的なペプチド効果についてのコントロー
ルのために、ペプチド後だがカプサイシン適用前に行われる。カプサイシンの適用の２０
分後、このインクが再度適用され、そして後足の背側表面は、低速加熱に最大２０秒間供
される。足引っ込め潜伏時間を、１５分間の間隔で測定する。εＰＫＣ試験ペプチドおよ
びγＰＫＣ試験ペプチドは、ネガティブコントロールパップ（ｐｕｐ）と比較して、疼痛
スコアの低下をもたらす。

（実施例２：既存のカプサイシン誘発性侵害受容に対するＰＫＣペプチドの影響）
既存の慢性疼痛の処置のためのγＰＫＣペプチドおよびεＰＫＣペプチドの試験を以下
の通りに行う。このペプチドが、確立されたカプサイシン誘発性熱痛覚過敏を逆転させる
能力を、試験ペプチドを、試験ペプチドの種々の濃度（１μＭ、５０μＭ、および１００
μＭ）で、２５分間のカプサイシン後処置に開始する１０分間の期間にわたって投与する
（すなわち、カプサイシンは、ベースライン測定の後に投与される）こと以外は、実施例
１に記載の手順を用いて決定する。次いで、熱試験を、実施例１に記載の通りに行う。カ
プサイシン適用の３０分後、足引っ込め潜伏時間を、定期的間隔で７５分間測定した。ε
ＰＫＣ試験ペプチドおよびγＰＫＣ試験ペプチドは、ネガティブコントロールパップ（ｐ
ｕｐ）と比較して、疼痛スコアの低下をもたらす。

（実施例３：δＰＫＣトランスロケーションの阻害）
（Ａ．ペプチド調製）
δＶ５ＰＫＣペプチド（配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９および配列番号
３０）を合成し、そして精製する。これらのペプチドを、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＡｎｔ
ｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン（Ｔｈｅｏｄｏｒｅ，Ｌ．ら；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｊ．
Ａ．ら，１９９６ｂ）またはＴａｔ由来ペプチドへのＮ末端Ｃｙｓ−Ｃｙｓ結合を介した
架橋により、キャリアペプチドを用いて改変する。

（Ｂ．細胞へのペプチド送達）
初代心筋細胞培養物（９０％〜９５％純粋）を、新生仔ラットから調製する（Ｇｒａｙ
，Ｍ．Ｏ．ら；ＤｉｓａｔｎｉｋＭ．−Ｈ．ら）。これらのペプチドを、１０〜２０分
間にわたる、それぞれ、３ｎｍおよび１０ｎｍの濃度のホルボール１２−ミリステート１
３−アセテート（ＰＭＡ）の存在下および不存在下にて５００ｎＭの適用濃度で、細胞へ
と導入する。第３セットの細胞では、これらのペプチドを、５００ｎＭ ψδＲＡＣＫの
存在下および不存在下にて、５００ｎＭの濃度で適用する。

δＰＫＣアイソザイムのトランスロケーションを、ウェスタンブロット分析（Ｓａｎｔ
ａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）においてδＰＫＣアイソザイム特異的抗体
を用いることにより評価する。処理した細胞の細胞質ゾル画分および粒状画分のウェスタ
ンブロット分析を、Ｊｏｈｎｓｏｎら，１９９５によって記載される通りに実施する。δ
ＰＫＣアイソザイムの細胞下局在を、抗δＰＫＣ抗体、抗αＰＫＣ抗体および抗εＰＫＣ
抗体を用いてプローブしたブロットの化学発光によって評価する。各画分におけるＰＫＣ
アイソザイムの量を、スキャナを用いて定量し、そしてトランスロケーションを、非処理
細胞におけるアイソザイムの量に対する粒状画分におけるアイソザイムの量として表す。
δＰＫＣアイソザイムのトランスロケーションにおける変化をまた、処理して固定した細
胞の細胞免疫蛍光研究（Ｇｒａｙら，１９９７）によって決定する。トランスロケーショ
ンを、盲検様式で、１００細胞／処置について計数することによって決定する。

上記の通りに試験した場合、δＶ５ＰＫＣペプチドは、δＰＫＣトランスロケーショ
ンの活性なインヒビターである。

（実施例４：単離された心筋細胞に対するペプチド投与）
これらのペプチドを、実施例３に記載の通りに調製する。

成体雄性Ｗｉｓｔａｒラットの心筋細胞を、コラゲナーゼ処理（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，
Ｓ．ら）により、ランゲルドルフ装置（ｖａｎｄｅｒＨｅｉｄｅ，Ｒ．Ｓ．ら）上に
調製する。これらの細胞を、１μＭのψδＲＡＣＫの存在下または不存在下において１０
ｎＭ、１００ｎＭ、５００ｎＭ、および１μＭの濃度でペプチドを用いて処理する。βＰ
ＫＣ選択的アクチベータをまた、コントロールとして用いた。

刺激された虚血に関して、キャリアに対して結合体化されたδＶ１−１ペプチドおよび
／またはψδＲＡＣＫペプチドを用いて微量遠心管中で処理した成体筋細胞を、脱気した
無グルコースインキュベーション緩衝液で２回洗浄し、そしてペレット化させる。最少量
の緩衝液の頂部に、マイクロバルーン（ＳｉｇＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｍｏｎｔ
ｅｚｕｍａ，ＩＡ）または脱気して窒素で飽和した緩衝液のいずれかを用いて、細胞ペレ
ットを重層し、そして気密トップを用いてシールする。次いで、チューブを、３７℃にて
１８０分間または９０分間のいずれかでインキュベートする。

細胞損傷を、低張性（８５ｍｏｓＭ）溶液中に添加したトリパンブルーの取り込みを測
定することにより、浸透圧脆弱性試験によって評価する。同様の結果をまた、生死キット
（ｌｉｖｅ−ｄｅａｄｋｉｔ）（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ）を用いることに
より、または以前（Ｃｈｅｎら，１９９９；Ｇｒａｙら，１９９７；Ｍａｃｋａｙら，１
９９９）に記載された通りにキット（Ｓｉｇｍａ）を用いて培地中へのラクトースデヒド
ロゲナーゼの放出を測定することにより、得る。

δＶ５ＰＫＣペプチドは、上記の通りに試験した場合、虚血損傷を阻害する。

（実施例５：心臓全体へのエキソビボペプチド投与および細胞損傷に対する影響）
成体雄性ラットにｉ．ｐ．アベルチン（ａｖｅｒｔｉｎ）で麻酔をかけ、そしてそれら
の心臓を迅速に取り出し、そしてランゲルドルフセットアップを用いて、当該分野（Ｃｏ
ｌｂｅｒｔ，Ｍ．Ｃ．ら）で記載される通りの灌流のために大動脈を介してカニューレ挿
入する。心臓を、取り出して９０秒以内に灌流するように注意する。これらの心臓に、Ｎ
ａＣｌ１２０；ＫＣｌ５．８；ＮａＨＣＯ_３２５；ＮａＨ_２Ｏ_４１．２；ＭｇＳ
Ｏ_４１．２；ＣａＣｌ_２１．０；およびデキストロース１０（３７℃にてｐＨ７．４
）（ｎｍｏｌ／Ｌ）を含む酸素化Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ溶液を灌流する。

１０〜２０分間の平衡化期間の後、心臓を、Ｔａｔ誘導体化ペプチドに結合体化された
こと以外は実施例１に記載された通りに調製したδＶ５ＰＫＣペプチドで２０分間灌流
する。灌流を、０．５μＭの適切なペプチドを含むＫｒｅｂｓ−Ｈａｎｓｅｌｅｉｔ溶液
を用いて１０ｍＬ／分の一定の流れで維持する。用いたランゲルドルフ法は、心室から大
動脈へと入り、そして肺動脈を迂回して、冠状動脈へと入る逆向性の流れを用いる。

全体的虚血を誘導するために、流れを３０分間中断させる。虚血事象の後、これらの心
臓を３０〜６０分間再灌流する。再灌流の間、虚血誘発性細胞損傷を、Ｓｉｇｍａキット
を用いて灌流液においてクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）（５２０ｎｍでの吸光度）
の活性を測定することにより決定する。コントロールとして、いくつかのエキソビボ心臓
を未処置のままにするか、または酸素正常状態条件下で維持するか、またはＴａｔ−キャ
リアペプチド単独を用いて処置するか、または以前に同定された不活性ペプチドへと結合
体化されたＴａｔ−キャリアペプチドを用いて処置する。

これらのδＶ５ＰＫＣペプチドは、上記の通りに試験した場合、虚血損傷を阻害する
。

（実施例６：虚血後のδＶ１−１のインビボ投与）
成体雌性ブタ（体重３５〜４０ｋｇ）に麻酔をかけ、そしてカテーテルを、頸動脈を通
して心臓へと導入する。従来の介入心臓学技術を用いて、ワイアをカテーテルを介して、
そして左前室間動脈内に配置する。バルーンをこのワイヤ上を閉塞部位へと走らせ、次い
で、閉塞部位において膨張させて、血流を３０分間ブロックする。この３０分間の閉塞の
うちの最後の１０分間の間に、キャリアペプチド単独を含むコントロールまたは試験ペプ
チド（必要に応じて、上記のキャリアＴａｔペプチドへと結合体化される）のいずれかを
、ゆっくりとして拡散（１ｍＬ／分）によって、閉塞の下流に直接的に送達する。約２０
μｇの試験ペプチド（体重１ｋｇあたり約４００ｎｇ）を投与する。

３０分間の閉塞後、このバルーンを除去し、そしてブタを、手術から回復させる。５日
後、ブタを安楽死させ、そして心臓を収集する。心臓除去後、ＬＡＤを閉塞させる。適所
での閉塞を用いて、ＥｖａｎｓＢｌｕｅ色素（これは、梗塞の危険性がない全ての領域
を青色に染色し、一方、血流と接近しない全ての領域を赤色のままにする）を灌流する。
次いで、心臓をスライスに切断し、そしてテトラゾリウム赤色色素（これは、全ての生存
領域を赤色に染色し、梗塞を起こした死んだ組織を白色に染色する）で染色する。各心臓
は、複数の組織スライスを有し、独特の領域が、虚血についての危険性のある領域および
梗塞を起こした領域と一致する。このことから、各スライスおよび心臓全体についての危
険性のある領域あたりの梗塞のパーセントを決定する。

（実施例７：発作損傷保護についての、ラットへのインビボ投与）
（Ａ．大脳虚血モデル）
成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２８０〜３２０ｇの間の体重）を用い
る。動物を、全ての手術手順の間、イソフルラン麻酔下で維持する。生理学的パラメータ
をモニタリングし、そして正常範囲内に維持する。直腸温度もまた測定する。この実験の
完了時、これらの動物を過用量のバルビツレートで安楽死させ、そして組織学的分析のた
めに調製する。

（Ｂ．病巣モデル）
虚血を、管内閉塞縫合を用いて誘導する。炎によって先端を丸めた、３−０ナイロンモ
ノフィラメント縫合のコーティングしていない３０ｍｍの長さのセグメントを、総頸動脈
の断端へと挿入し、そして中大脳動脈の口を閉塞させるために、分岐から約１９〜２０ｍ
ｍの内部頸動脈へと前進させる。偽コントロール動物は、類似の麻酔および外科的操作を
経るが、虚血を経験しない。２時間の虚血期間の最後に、この縫合を除去し、そして動物
を回復させる。脳を再灌流の２４時間後に収集する。

（Ｃ．ペプチド送達）
Ｔａｔペプチドへと必要に応じて結合体化された試験ペプチド、またはＴａｔキャリア
コントロールペプチド（５０μＬ生理食塩水中１０μＭ溶液）を、２時間の閉塞の直前に
、または２時間の閉塞の前および後のいずれかにおいて、頸動脈中に注射する。試験ペプ
チドの最終血液濃度は、１μＭである。

（Ｄ．組織学）
動物を、ヘパリン処理生理食塩水で灌流し、そして脳を取り出し、そして２ｍｍの厚さ
のスライスに切片化する。虚血傷害を評価するために、脳切片を、クレシルバイオレット
またはトリフェニルテトラゾリウムクロリド（梗塞の領域を示すための生組織染料）で染
色する。次いで、梗塞（白色）の領域を、以前（Ｙｅｎａｒｉ，Ｍ．Ａ．ら，１９９８；
Ｍａｉｅｒ，Ｃ．ら，１９９８）に記載された画像解析システムを用いて測定する。

本発明を、本発明の特定の実施形態を参照して記載してきたが、種々の変更が行われ得
、そして等価物が、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく置換され得ること
が当業者によって理解されるべきである。さらに、特定の状況、材料、組成物、プロセス
、プロセスの工程を、本発明の目的、趣旨および範囲に適応させるために、多くの改変が
なされ得る。このような全ての改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図
される。上記に引用した全ての特許および刊行物は、本明細書中に参考として援用される
。
（配列表）

Claims

明細書に記載の発明。