JP2005331244A - 染色体染色方法およびその装置 - Google Patents

Abstract

【課題】 標本スライドの染色体の染色を均質、且つ、短時間で、しかも、作業者の経験や技量に頼ることなく得ることのできる染色体染色方法その装置を提供する。
【解決手段】 サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドに対する染色の初期工程において、染色を不安定にする染色阻害物質を超純水で溶出除去し、あるいは、減圧脱気して除去する。
【選択図】 図１

Description

本発明は、特に、検体標本の染色体分析におけるトリプシン・ギムザ染色に有用な染色体染色方法およびその装置に関する。

現在、染色体検査に用いられる染色体Ｇバンド染色（トリプシン・ギムザ染色法。以下、ギムザ染色法という）では、用手法により有核細胞浮遊液をスライドグラス上に滴下展開した標本スライドに、未だ作用が明確に解明されていないエージングと称される操作が経験的に行われている。

標本スライドのエージングは、染色体を良好に染色することを目的として行われるものであり、標本スライドの作製方法によって異なるが、サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドを、室温の環境下に於いては７〜１０日、６０℃恒温器内の環境下に於いては１〜３日放置する操作をさす（実施例１参照）。しかしながら、その放置時間や放置する環境設定は確立されていない。

また、標本スライドを作製した当日に染色するときには、標本スライドを過酸化水素（３１％）に３０〜６０秒間浸漬してから、十分に洗浄することで前記エージングの効果を得ることができる（実施例２参照）。

さらに、標本スライドはエージング効果によって後に作用させるトリプシン処理の最適時間が短くなるといった特徴があり、トリプシン処理の時間が１秒異なっただけでも結果が大きく変化する。そして、そのトリプシン処理に用いるトリプシンの濃度に関しても、バンド染色を行う研究室毎あるいは施設毎に異なり、その数値は０．０１２５％〜０．１％程度まで様々であって、基準は確立されていない（実施例１乃至３参照）。

また、染色効果は、トリプシン処理が不十分であると、染色体のバンドパターンが現れずに染色体全体がギムザ液によって濃く染色されてしまい、標本としては不適なものとなる。逆に、トリプシン処理時間が長すぎ、過剰なトリプシン処理を行った染色体は、染色体の周辺部が毛羽立つような様を呈し、ギムザ液で染色することができない。

ここで、ギムザ染色法の評価方法として、一般に知られている吸光度法による数値評価を行った結果を示す。

図１０の染色体と染色評価位置に示すように、染色体外の明るいところの平均値（Ｉｓ）、白バンド（Ｉｗ）、黒バンド（Ｉｂ）とするとき、それぞれの吸光度（ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）Ａｗ， Ａｂと評価数値Ｅｎは、次の式で求めることができる。
Ａｗ ＝ ｌｏｇ（Ｉｓ／Ｉｗ）
Ａｂ ＝ ｌｏｇ（Ｉｓ／Ｉｂ）
Ｅｎ ＝ Ａｂ − Ａｗ
＝ ｌｏｇ（Ｉｓ／Ｉｂ） − ｌｏｇ（Ｉｓ／Ｉｗ）
＝ ｌｏｇ（Ｉｗ／Ｉｂ）

また、図１１乃至図１３は、トリプシン処理時間をそれぞれ５秒、１０秒、２０秒として異ならせた場合におけるＧバンド画像を示している。このようにトリプシン処理時間を変化させた場合の染色濃度（吸光度）値ＯＤをグラフにすると図１４に示すような関係が得られる。ただし、グラフはトリプシン濃度０．１％液を用いて処理した場合であって、トリプシン濃度が低くなると評価値Ｅｎの最大点はトリプシン処理時間が長い方に移動する。

画像とグラフの関係を説明すると、トリプシン処理を５秒とした時はバンドの白及び黒がともに濃く染まっており、トリプシン処理を２０秒とした時はこれに比べてバンドの白及び黒がともに明るい方にシフトしている。このため、トリプシン５秒及び２０秒の画像は評価値がともに低く０．２程度を示している。これに比較して、トリプシン処理を１０秒とした時はバンドの白いところが明るく、バンドの黒いところが濃く染まっているのがみられ、評価値は０．５以上となり、よいコントラストを呈している。

また、以下には、ギムザ染色法で所望のバンド展開を得るためのプロトコルの３つの従来例を示す。なお、図１５乃至図１７は、各従来例のフローチャートである。

従来例１（図１５参照）：
まず、標本スライドを、室温の環境下で７〜１０日放置し、あるいは、６０℃恒温器で１〜３日放置して、エージング処理を行う（ステップＳＴ１０１）。

続いて、１０〜６０秒間、エージング処理済みの標本スライドに０．０５％トリプシン溶液をマウントし（ステップＳＴ１０２）、リン酸緩衝液で軽く洗浄した後（ステップＳＴ１０３）、さらに７０％のアルコールに浸漬した状態で２〜３回上下動させ、振り洗いする（ステップＳＴ１０４）。

次に、９５％アルコールに浸漬し、軽く馴染ませてから標本スライドを取り出し（ステップＳＴ１０５）、アルコールを十分に蒸発させる（ステップＳＴ１０６）。

続いて、５〜１０分間、標本スライドにギムザ液をマウントし（ステップＳＴ１０７）、続いて蒸留水で十分に洗浄し（ステップＳＴ１０８）、乾燥させて（ステップＳＴ１０９）、染色体染色を完了させる。

従来例２（図１６参照）：
まず、標本スライドを、室温の環境下で１日放置し（ステップＳＴ２０１）、前記標本スライドに３１％過酸化水素を５〜７分マウントして静置し（ステップＳＴ２０２）、その後、水道水で洗浄してエージング処理を行う（ステップＳＴ２０３）。

続いて、１時間、４０℃恒温器で放置して乾燥させる（ステップＳＴ２０４）。

そして、７〜１０数秒、エージング処理済みの標本スライドに０．０２５〜０．０５％トリプシン溶液をマウントし（ステップＳＴ２０５）、蒸留水に瞬間浸漬した後（ステップＳＴ２０６）、数十秒、７０％アルコールに浸漬して放置した後（ステップＳＴ２０７）、取り出してアルコール滴を除去する（ステップＳＴ２０８）。

その後、５〜１０分間、標本スライドをギムザ液に浸漬し（ステップＳＴ２０９）、続いて水道水で十分に洗浄し（ステップＳＴ２１０）、乾燥させて（ステップＳＴ２１１）、染色体染色を完了させる。

従来例３（図１７参照）：
まず、標本スライドを、３７℃恒温器で６〜１０日放置してエージング処理を行う（ステップＳＴ３０１）。

続いて、７〜９秒、エージング処理済みの標本スライドに０．１％トリプシン溶液をマウントし（ステップＳＴ３０２）、８．５％生理食塩水で軽く洗浄した後（ステップＳＴ３０３）、さらに、蒸留水で十分に洗浄する（ステップＳＴ３０４）。

その後、５〜１０分間、標本スライドを５％ギムザ液に浸漬し（ステップＳＴ３０５）、続いて蒸留水で十分に洗浄し（ステップＳＴ３０６）、乾燥させて（ステップＳＴ３０７）、染色体染色を完了させる。

古床敏，吉田廸弘，阿部達生，福嶋義光，近藤郁子 著，「臨床染色体診断法」，第１版，金原出版，１９９６年１０月３１日，Ｐ．１０５ 奈良信雄 著，「遺伝子・染色体検査学」，第１版，医歯薬出版，２００２年２月，Ｐ．８７ 日本臨床衛生技師会 編，「臨床検査 遺伝子・染色体検査教本」，第１版，近代出版，１９９８年８月，Ｐ．１３７

このように、従来における染色体染色の方法は、処理や作用時間などが異なるのが現実であり、当然、染色結果も同様に一様ではない。このため、経験豊富な作業者であっても、展開不良を見込んで、予め同じサンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドを複数枚準備し、各スライド毎の染色体の状態を見ながら、トリプシンの処理時間等の諸条件を変えて染色処理を進め、用意した複数枚の標本スライドのうちの少なくとも１枚がバンド分析に適するものとなるように努めて、標本スライドを作製しているのが現状である。

また、従来の染色体の染色方法では染色時間や染色液濃度を試料により異ならせており、その加減も前述のように決まった基準がなく、作業者の経験や試行錯誤に頼っているため、１回の染色作業で安定した染色が得られるとは限られないのが現実である。

さらに、有核細胞浮遊液を展開して標本スライドができてから染色体の染色が完了するまでに最長１０日もかかっているのが現実であり、この時間の短縮は改善課題の１つであるといえる。

そこで、本発明は、標本スライドの染色体の染色を均質、且つ、短時間で、しかも、作業者の経験や技量に頼ることなく得ることのできる染色体染色方法およびその装置を提供することを目的とするものである。

前述した目的を達成するため、本発明の染色体染色方法においては、サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドに対する染色の初期工程において、染色を不安定にする染色阻害物質を超純水で溶出除去し、あるいは、減圧脱気して除去する。

また、本発明の染色体染色装置においては、サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドに付着した前記染色阻害物質を、超純水で洗浄除去するための構成、あるいは、減圧脱気した環境下で脱離除去するための構成を備える。

本発明の染色体染色方法によれば、標本スライドの染色体染色のトリプシン処理を短時間とするとともに、染色を均質にすることができ、複数の標本スライドを用意しなくても、１００％に近い確率で所望の染色体の染色展開スライドを得ることができるので、作業効率を向上させることができる。

また、本発明の染色体染色装置によれば、作業者の経験や技量に頼ることなく、染色体の染色作業を一元化、機械化することができ、作業効率を向上させることができる。

まず、本発明の染色体染色方法の実施形態を説明する。

図１は、標本スライドの染色体染色におけるトリプシンによる処理前に、染色体の染色を不安定にする染色阻害物質を超純水で溶出除去する工程を有する、本発明の第１実施形態を示すフローチャートである。

なお、超純水は、純水よりもさらに純度が高く、純度を導電率で表した場合に純水が１００μＳ／ｍ以下とされるのに対し、６μＳ／ｍ以下とされている、一般的なものを意味する。

本実施形態においては、まず、１０分間、標本スライドを超純水を用いて洗浄し（ステップＳＴ１）、染色を不安定にする染色阻害物質を溶出除去する。その後、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ２）。

続いて、５〜７分間、前記標本スライドに３１％過酸化水素をマウントして静置し（ステップＳＴ３）、その後、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ４）。

次に、２分間、７０％エタノール液をマウントし（ステップＳＴ５）、その後、洗浄空気でエタノール滴を除去する（ステップＳＴ６）。なお、このステップＳＴ５およびステップＳＴ６の工程は省略可能である。

そして、３０秒間、蒸留水で洗浄し（ステップＳＴ７）、その後、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ８）。

続いて、１０秒間、エージング処理済みの標本スライドに０．１％トリプシン溶液をマウントして静置する（ステップＳＴ９）。

その後、２秒間、８．５％生理食塩水で洗浄し（ステップＳＴ１０）、続けて、３０秒間、蒸留水で洗浄した後（ステップＳＴ１１）、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ１２）。

その後、１０分間、前記標本スライドにギムザ液をマウントして静置する（ステップＳＴ１３）。

そして、３０秒間、蒸留水で洗浄した後（ステップＳＴ１４）、洗浄空気で水滴を除去し（ステップＳＴ１５）、染色体染色の工程を完了させる。

また、図２は、標本スライドの染色体染色におけるトリプシンによる処理前に、染色体の染色を不安定にする染色阻害物質を減圧脱気により除去する工程を有する、本発明の第２実施形態を示すフローチャートである。

本実施形態においては、まず、０．５ＫＰａに減圧し、脱気した環境下に、２０分間、標本スライドを放置し（ステップＳＴ２１）、染色を不安定にする染色阻害物質を脱離させて除去する。

続いて、５分間、前記標本スライドに３１％過酸化水素をマウントして静置し（ステップＳＴ２２）、その後、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ２３）。

次に、２分間、７０％エタノール液をマウントし（ステップＳＴ２４）、その後、洗浄空気でエタノール滴を除去する（ステップＳＴ２５）。

そして、３０秒間、蒸留水で洗浄し（ステップＳＴ２６）、その後、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ２７）。

続いて、１０秒間、エージング処理済みの標本スライドに０．１％トリプシン溶液をマウントして静置する（ステップＳＴ２８）。

その後、２秒間、８．５％生理食塩水で洗浄し（ステップＳＴ２９）、続けて、３０秒間、蒸留水で洗浄した後（ステップＳＴ３０）、洗浄空気で水滴を除去する（ステップＳＴ３１）。

その後、１０分間、前記標本スライドにギムザ液をマウントして静置し（ステップＳＴ３２）、３０秒間、蒸留水で洗浄した後（ステップＳＴ３３）、洗浄空気で水滴を除去し（ステップＳＴ３４）、染色体染色の工程を完了させる。

このいずれの方法によっても、標本スライドのＧバンドの染色状態は、一様に均質なものとなり、従来のように複数の標本スライドを用意しなくても、１００％に近い確率で所望の染色体の染色展開スライドを得ることができた。

また、これらの染色体の染色方法は、時には１０日間にも及んでいた従来のエージング処理に相当する処理を、前記第１実施形態に示した超純洗浄浄による染色プロトコルにおいては、ステップＳＴ１乃至ステップＳＴ８の工程で２０分弱、第２実施形態に示した減圧脱気による染色プロトコルにおいては、ステップＳＴ２１乃至ステップＳＴ２７の工程で２５分弱と極めて短時間で行い、さらに、標本スライドの染色体染色のトリプシン処理も細かな調整を要することなく、一律に１０秒とする短時間で行うことができ、作業効率を向上させることができた。

なお、ここでトリプシン処理の時間について、経験による調整等を不要として一律に１０秒間としたのは、図１４に示した、前述の吸光度法による数値評価を行った結果に基づくものである。よって、そのトリプシン処理の時間としては、０．５程度の評価値を確保することのできる８〜１２秒程度で一律に設定すれば、バンド染色の良好なコントラストを得ることができる。

また、図３には、前記第１実施形態の染色体染色方法のステップＳＴ１において使用することができるスライド洗浄装置１の一例を示す。

このスライド洗浄装置１は、スライド上下機構を構成する板状の円盤２を有している。前記円盤２は、略鉛直状に配置されるようにして図示しない駆動源の回転軸３に軸支され、前記駆動源の駆動により往復回動自在とされている。そして、前記円盤２の外周辺の一部には、１本のロープ４の一端部が取付けられている。

また、前記ロープ４の他端部には複数枚の標本スライド５を吊持可能とされたスライド支持体６が連結されている。そして、前記ロープ４の中間部は、前記回転軸３と略同じ高さで、前記回転軸３と平行に位置するようにして配設された支点軸７に対して前記円盤２の回動に伴って移動可能に係支されており、前記スライド支持体６は、前記支点軸７から下方へ前記ロープ４で吊下されて保持されている。

前記支点軸７の配置位置における下方には、一定量の超純水８を貯留可能とされた貯留槽９が配置されており、前記ロープ４は、前記スライド支持体６に吊持された標本スライド５を、前記貯留槽９に貯留された超純水８に浸漬した状態で上下動可能な長さに調整されている。例えば、前記ロープ４の長さは、円盤２に取付けられた一端部が最も前記支点軸７に近接する時に、前記スライド支持体６に吊持された標本スライド５が前記貯留槽９内における最下点位置に達し、前記円盤２の回動動作において、前記一端部が前記支点軸７から最も離間する時に、前記スライド支持体６に吊持された標本スライド５が前記貯留槽９内における最上点位置に達するように調整する。

このような構成のスライド洗浄装置１においては、前記スライド支持部に１乃至複数の標本スライド５の一端部を把持させた状態で吊下させ（吊持状態）、前記貯留槽９に貯留されている超純水８に前記標本スライド５の他端部側を浸す。

そして、前記円盤２の駆動源を駆動させて前記円盤２を往復回動させることにより、ロープ４の一端部を、前記支点軸７から略水平方向に離間させたり近接させたりする。そのとき、梃子（テコ）の原理により、前記ロープ４の他端部に連結されたスライド支持体６とそれに吊持されている標本スライド５は、前記支点軸７から鉛直方向（上下方向）に移動し、標本スライド５の表面が前記超純水８によって濯がれ、洗浄されることとなる。

前述の第１実施形態においては、このスライド洗浄装置１を１０分間駆動させ、標本スライド５を超純水で洗浄すればよい。

また、図４には、前記第２実施形態の染色体染色方法のステップＳＴ２１において使用することができる減圧脱気装置の一例を示す。

この減圧脱気装置１１は、標本スライド５を収納可能とされており、密閉可能な真空チャンバ１２を有している。前記真空チャンバ１２には、吸気用バルブＶ１１を備え、前記吸気用バルブＶ１１の開閉により吸気の流通を制御可能とされた吸気パイプ１３の端部が連接されている。また、前記真空チャンバ１２には、真空ポンプ１４と排気用バルブ１５を備え、前記排気用バルブ１５の開閉により排気の流通を制御可能とされた排気パイプＶ１２の端部が連接されている。

このような構成の減圧脱気装置１１においては、前記真空チャンバ１２内に標本スライド５を収納した状態で、前記排気用バルブＶ１２を開状態とし、真空ポンプ１４を駆動させて、前記真空チャンバ１２内の気圧を所望の値とするまで、その空気を真空チャンバ１２外へ排気（脱気）する。そして、前記真空チャンバ１２内が所望の気圧状態に減圧されたところで、再び前記排気用バルブＶ１２を閉状態とするとともに真空ポンプ１４の駆動を停止する。この減圧状態を解除する際には、前記吸気用バルブＶ１１を開状態とし、外部空気を前記真空チャンバ１２内へ吸気するようにする。

前述の第２実施形態においては、この減圧脱気装置１１の真空チャンバ１２内を０．５ＫＰａとし、その中で標本スライド５を２０分間放置すればよい。

このように構成された前記第１実施形態、第２実施形態のいずれの染色体染色方法によっても、サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドに対する染色の初期工程において、染色を不安定にする染色阻害物質を超純水で溶出除去するか、あるいは、減圧脱気して除去することで、標本スライドの染色体染色のトリプシン処理を短時間とするとともに、染色を均質にすることができ、複数の標本スライドを用意しなくても、１００％に近い確率で所望の染色体の染色展開スライドを得ることができる。

また、図５は、前述した本発明の染色体染色方法の第１実施形態を全自動で実施可能な構成を有する、染色体染色装置の第１実施形態を示す要部平面図であり、図６はその要部正面図である。

この第１実施形態の染色体染色装置２１は、図６に示すように、本体２２ａと蓋体２２ｂとからなるチャンバ２２と、回転軸２４の先端を前記チャンバ２２内に位置させるテーブル回転装置としての駆動モータ２３と、前記回転軸２４の開放端部に固定され、チャンバ２２内に配設される回転テーブル２５と、前記チャンバ２２内の所定位置にニードル２６の開放先端部を位置させるようにして配設された複数の試薬ボトル２７と、同じくノズル２９の開放先端部を位置させるようにして配設されたエアフィルタ装置２８を有している。

前記チャンバ２２の本体２２ａは、平面形状が円形で略凹状とされており、その底部には、円形の底部と同心とするドーナツ状の溝部３０が形成されている。この溝部３０には、染色体の染色に用いられた廃液が回収される。そして、前記底部の中心には、前記チャンバ２２の下方に配設された前記駆動モータ２３の断面鍵穴形状とされた回転軸２４が防水軸受け３２を介して前記チャンバ２２内に突出し、回転自在に配設されている。また、前記溝部３０を構成する底部には、前記染色体の染色に用いられた廃液を当該チャンバ２２外に配設された廃液タンク３３へ排出する排水パイプ３１が連接されている。

前記回転テーブル２５は、図６および図７に示すように、その中心点から放射状に８つの標本スライド載置部３４が等間隔で配設された略星型の外形状とされている。このような形状とされた回転テーブル２５は、滴下された試液等を、隣位の標本スライド載置部３４間に形成された扇形の間隙から、チャンバ２２の本体２２ａの底部に形成された溝部３０内に回収することができる。また、前記中心点には鍵穴型の軸孔３５が形成されており、前記駆動モータ２３の回転軸２４に対し、常に前記標本スライド載置部３４の位置を一定にし嵌合させ得るように構成されている。

また、前記回転テーブル２５を回転させるテーブル回転装置としての駆動モータ２３は、本実施形態においては回転角４５°を最小単位として、制御部からの制御信号に基づいて、その整数倍の回転角で正逆双方向に回転可能とされている。すなわち、本実施形態においては、前記駆動モータ２３の回転制御により、前記回転テーブル２５に形成された標本スライド載置部３４は前記チャンバ２２内における、４５°づつ相互に角度を隔てた８カ所の停止位置（ＳＰ１乃至ＳＰ８）に停止するように構成されている。そして、前記標本スライド載置部３４の８つの停止位置のうちの７つの停止位置には、チャンバ２２外に配設された７つの試薬ボトル２７にそれぞれ接続され、前記チャンバ２２の本体２２aの側壁を貫通して当該チャンバ２２内に臨むニードル２６の解放先端部が、前記標本スライド載置部３４の中央部に位置するようにして配設されている。前記各ニードル２６の中間部には、所定量の薬液等を注入するためのポンプＰがそれぞれ配設されている。

また、前記標本スライド載置部３４の８つの停止位置のうちの残りの１つの停止位置には、前記チャンバ２２の本体側壁を貫通して当該チャンバ２２内に臨み、エアフィルタ装置２８を通過した洗浄空気をチャンバ２２内に供給するためのノズル２９の開放先端部が、前記標本スライド載置部３４の中央部に位置するようにして配設されている。このノズル２９の中間部にも、所定量の洗浄空気を吹入するためのポンプＰが配設されている。

本実施形態においては、前記チャンバ２２内の図５における１２時方向位置、３時方向位置、６時方向位置、および９時方向位置と、それぞれの中間位置の８箇所が前記停止位置とされている。そして、図５における６時方向の停止位置（以下、停止位置ＳＰ１）には、洗浄用蒸留水の試薬ボトル２７のニードル２６が配置され、停止位置ＳＰ１から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ２）には、超純水の試薬ボトル２７のニードル２６が配置されている。また、前記停止位置ＳＰ２から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ３）には、過酸化水素の試薬ボトル２７のニードル２６が配置されており、停止位置ＳＰ３から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ4）には、エタノール液の試薬ボトル２７のニードル２６が配置されている。そして、図５における１２時方向の停止位置で、前記停止位置ＳＰ４から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ５）には、エアフィルタ装置２８のノズル２９が配置されている。また、停止位置ＳＰ５から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ６）には、生理食塩水の試薬ボトル２７のニードル２６が配置されており、停止位置ＳＰ６から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ７）には、トリプシン液の試薬ボトル２７のニードル２６が配置され、さらに、停止位置ＳＰ７から時計回りに４５°回転した停止位置（以下、停止位置ＳＰ８）には、ギムザ液の試薬ボトル２７のニードル２６が配置されている。

そして、前記駆動モータ２３、前記各ニードル２６に配設されたポンプＰおよびノズル２９に配設されたポンプＰは、それぞれ当該染色体染色装置２１の駆動制御を行う制御部３９と接続されており、前記制御部３９において前記駆動モータ２３の正逆双方向における回転量（回転角）の制御と、各試液や洗浄空気の供給量の制御が前記制御部３９によって行われる構成とされている。

前記制御部３９は、前述の第１実施形態の染色体染色方法を当該染色体染色装置において実行する場合、次のように前記駆動モータ２３の正逆双方向における回転と、各試薬ボトル２７やエアフィルタ装置２８のポンプＰの駆動とその時間を制御する。前記ポンプＰの駆動時間とニードル２６の管径を管理することにより、試薬の供給量を調整することができる。また、前記制御部３９は、処理中の標本スライド５を静置させる時間をも管理制御するようになっている。

以下には、前記制御部３９の制御について説明するが、その際、前記チャンバ２２内には、前記回転テーブル２５が前記駆動モータ２３の回転軸２４に対して係合されており、前記回転テーブル２５の各標本スライド載置部３４にはそれぞれ標本スライド５が載置されていることを前提とする。また、前記回転テーブル２５を、４５°ずつ時計回り又は反時計回りに回転させて、各標本スライド５に順次同じ工程処理を施したのち、次工程に移るように制御するものとし、以下の説明においては、同一の工程を施すために、前記回転テーブル２５を４５°ずつ８回に亘って回転駆動させる制御については説明を省略する。なお、１枚の標本スライド５に対し、染色体染色の全工程を施した後、次の１枚の標本スライド５に対する染色を行うように制御することも可能であるし、さらには、前記回転テーブル２５の標本スライド載置部３４のうち選択した特定の標本スライド載置部３４に載置された標本スライド５のみに対し、染色体染色を行うように制御することも可能である。

本実施形態においては、まず、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ２に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ２に臨む超純水のニードル２６のポンプＰ２の駆動を制御し、所定時間（例えば、１０分間）、超純水を前記停止位置ＳＰ２に配置された標本スライド５の上面に注入する。これにより、前記標本スライド５を超純水を用いて洗浄することができる。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズル２９のポンプＰ５の駆動を制御し、洗浄空気に前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

次に、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ３に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ３に臨む３１％過酸化水素のニードル２６のポンプＰ３の駆動を制御し、所定量の３１％過酸化水素を前記標本スライド５上に滴下し、その状態で、所定時間（例えば、５〜７分間）放置する制御を行う。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのポンプＰ５の駆動を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する過酸化水素を除去することができる。

続いて、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ４に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ４に臨むエタノール液のニードル２６のポンプＰ４の駆動を制御し、所定量のエタノールを前記標本スライド５上に滴下し、その状態で、所定時間（例えば、２分間）放置する制御を行う。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズル２９のポンプＰ５の駆動を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留するエタノール液（アルコール）を除去することができる。

その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ１に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ１に臨む蒸留水のニードル２６のポンプＰ１の駆動を制御し、所定時間（例えば、３０秒間）、前記標本スライド５を蒸留水で洗浄する。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのポンプＰ５の駆動を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

続いて、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ７に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ７に臨むトリプシン溶液のニードル２６のポンプＰ７の駆動を制御し、エージング処理済みの標本スライド５にトリプシン溶液を滴下してマウントし、その状態で所定時間（例えば、１０秒間）放置する制御を行う。

その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ６に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ６に臨む生理食塩水のニードル２６のポンプＰ６の駆動を制御し、前記標本スライド５を所定時間（例えば、２秒間）、生理食塩水で洗浄する。

続けて、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ１に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ１に臨む蒸留水のニードル２６のポンプＰ１の駆動を制御し、前記標本スライド５を所定時間（例えば、３０秒間）、蒸留水で洗浄する。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのポンプＰ５の駆動を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ８に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ８に臨むギムザ液のニードル２６のポンプＰ８の駆動を制御し、標本スライド５にギムザ液を滴下してマウントし、その状態で所定時間（例えば、１０分間）放置する制御を行う。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ１に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ１に臨む蒸留水のニードル２６のポンプＰ１の駆動を制御し、前記標本スライド５を所定時間（例えば、３０秒間）、蒸留水で洗浄する。

そして、その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記駆動モータ２３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのポンプＰ５の駆動を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

このような前記制御部３９による駆動制御により、例えば、前述した染色体染色の工程を完了させることができる。

また、図８は、前述した本発明の染色体染色方法の第２実施形態を実施可能な構成を有する、染色体染色装置の第２実施形態を示す要部平面図であり、図９はその要部正面図である。そして、図８は、前述の染色体染色装置の第１実施形態を示す図５に対応し、図９は、同じく図６に対応する。

この第２実施形態の染色体染色装置は、前述した第１実施形態の染色体染色装置２１の構成と略同様の構成とされている。以下では、共通点については詳しい説明を省略し、その相違点について説明する

本実施形態の染色体染色装置２１は、減圧脱気の環境下でエージング処理の一部を行う染色体染色方法を実行するための装置である。よって、本実施形態の染色体染色装置２１においては、前記チャンバ２２の蓋体２２ｂを閉じた状態における本体２２ａと蓋体２２ｂとの間隙がシーリング材４１によりシールされるように構成されている。また、本実施形態においてはテーブル回転装置として、チャンバ２２の内外に対向させるようにしてそれぞれ配設された磁気４２の磁力を利用して前記回転テーブル２５を所定角度で回転駆動させる公知の磁気モータ４３が利用されている。そして、前記第１実施形態において前記チャンバ２２内の標本スライド５の各停止位置ＳＰ１乃至ＳＰ８に臨む各試薬ボトル２７のニードル２６とエアフィルタ装置２８のノズル２９に配設されたポンプＰに代えてバルブＶが配設されており、さらに、前記廃液タンク３３に接続されるパイプＰにも、廃液の流通を制御するバルブＶ１０が配設されている。また、本実施形態においては、前記チャンバ２２の本体２２ａには、当該チャンバ２２内のエアを吸引するための真空ポンプ４４と接続された真空用パイプ４５が連接されており、前記真空用パイプ４５には負圧を除去するためのバルブＶ９を備える枝管４６が連接されている。また、前記チャンバ２２には、前記チャンバ２２内の圧力を測定する圧力計４７が配設されている。

そして、前記テーブル回転装置、前記各ニードル２６、ノズル、パイプに配設された各バルブ、真空ポンプ、および圧力計は、それぞれ当該染色体染色装置の駆動制御を行う制御部３９と接続されており、前記制御部３９において、チャンバ２２内の減圧と減圧解除、前記テーブル回転装置としての磁気モータ４３の正逆双方向における回転量（回転角）の制御、および、各試薬や洗浄空気の供給量の制御が前記制御部３９によって行われる構成とされている。

以下には、本第２実施形態における前記制御部３９の制御について説明する。

本実施形態において前記制御部３９は、チャンバ２２内に回転テーブル２５を配設し、回転テーブル２５の標本スライド載置部３４に標本スライド５を載置し、チャンバ２２内の密閉した状態で、前記真空ポンプ４５の駆動を制御し、圧力計を観察しながら、チャンバ２２内を０．５ＫＰａに減圧する制御を行い、所定時間（例えば、２０分間）、前記標本スライド５をその脱気した環境下に放置する制御を行う。

その後、前記制御部３９は、前記減圧解除バルブＶ９の開閉を制御し、後工程においてバルブＶが開放された試液ボトルから良好に試液をチャンバ２２内に吸引するため、０．０５ＭＰａ程度にまで減圧状態を解除する。

次に、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ３に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ３に臨む３１％過酸化水素のニードル２６のバルブＶ３の開閉を制御し、所定量の３１％過酸化水素を前記標本スライド５上に滴下し、その状態で、所定時間（例えば、５分間）放置する制御を行う。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのバルブＶ５の開閉を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する過酸化水素を除去することができる。

続いて、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ４に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ４に臨むエタノール液のニードル２６のバルブＶ４の開閉を制御し、所定量のエタノールを前記標本スライド５上に滴下し、その状態で、所定時間（例えば、２分間）放置する制御を行う。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのバルブＶ５の開閉を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留するエタノールを除去することができる。

その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ１に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ１に臨む蒸留水のニードル２６のバルブＶ１の開閉を制御し、所定時間（例えば、３０秒間）、前記標本スライド５を蒸留水で洗浄する。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのバルブＶ５の開閉を制御し、洗浄空気を
前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

続いて、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ７に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ７に臨むトリプシン溶液のニードル２６のバルブＶ７の開閉を制御し、エージング処理済みの標本スライド５にトリプシン溶液を滴下してマウントし、その状態で所定時間（例えば、１０秒間）放置する制御を行う。

その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ６に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ６に臨む生理食塩水のニードル２６のバルブＶ６の開閉を制御し、前記標本スライド５を所定時間（例えば、２秒間）、生理食塩水で洗浄する。

続けて、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ１に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ１に臨む蒸留水のニードル２６のバルブＶ１の開閉を制御し、前記標本スライド５を所定時間（例えば、３０秒間）、蒸留水で洗浄する。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのバルブＶ５の開閉を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を停止位置ＳＰ８に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ８に臨むギムザ液のニードル２６のバルブＶ８の開閉を制御し、標本スライド５にギムザ液を滴下してマウントし、その状態で所定時間（例えば、１０分間）放置する制御を行う。

そして、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ１に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ１に臨む蒸留水のニードル２６のバルブＶ１の開閉を制御し、前記標本スライド５を所定時間（例えば、３０秒間）、蒸留水で洗浄する。

そして、その後、前記制御部３９は、目的の標本スライド５を再び停止位置ＳＰ５に停止させるように、前記磁気モータ４３の駆動を制御し、続いて、前記停止位置ＳＰ５に臨むエアフィルタ装置２８のノズルのバルブＶ５の開閉を制御し、洗浄空気を前記標本スライド５の上面に吹き付ける。このときの洗浄空気により、残留する水滴を除去することができる。

このような前記制御部３９による駆動制御により、例えば、前述した染色体染色の工程を完了させることができる。

なお、本実施形態においては、前述の染色体染色方法を実行する場合を想定した前記制御部３９の制御を例示したため、図８に示す停止位置ＳＰ２には超純水を配置する必要がないが、超純水を用いるプロトコルとすれば、前記制御部３９は、この停止位置ＳＰ２において超純水を用いる制御を行うことができることは云うまでもない。

このように構成された前記第１実施形態、第２実施形態のいずれの染色体染色装置によっても、標本スライドの染色体染色のトリプシン処理を短時間とするとともに、染色を均質にすることができ、複数の標本スライドを用意しなくても、１００％に近い確立で所望の染色体の染色展開スライドを得ることができるので、作業効率を向上させることができる。

また、両実施形態の染色体染色装置によれば、作業者の経験や技量に頼ることなく、染色体の染色作業を一元化、機械化することができ、作業効率を向上させることができる。

なお、本発明は、前述した実施の形態に限定されるものではなく、必要に応じて種々の変更が可能である。例えば、前記試薬とその配設する停止位置ＳＰとの関係は、前記実施形態に限るものではなく、自由に設定可能であるし、前記試薬の種類や濃度等も、自由に変更することが可能である。

また、前述の実施形態においては、ギムザ染色法における染色体染色の場合を以て説明したが、本願発明の染色方法は、これに限るものではなく、ＦＩＳＨ用検体標本あるいはＣＧＨ用検体標本の染色体染色に於いても有用である。

本発明の染色体染色方法の第１実施形態を示すフローチャート 本発明の染色体染色方法の第２実施形態を示すフローチャート スライド洗浄装置の一実施形態の構成を示す説明図 減圧脱気装置の一実施形態の構成を示す説明図 本発明の染色体染色装置の第１実施形態を示す要部平面図 図５の染色体染色装置の要部正面図 回転テーブルの要図平面図 本発明の染色体染色装置の第２実施形態を示す要部平面図 図８の染色体染色装置の要部正面図 染色体とその染色評価位置を示す説明図 トリプシン処理時間を５秒とした場合におけるＧバンドの状態を示す図 トリプシン処理時間を１０秒とした場合におけるＧバンドの状態を示す図 トリプシン処理時間を２０秒とした場合におけるＧバンドの状態を示す図 トリプシン処理時間を変化させた場合の染色濃度（吸光度）値ＯＤを示すグラフ ギムザ染色法の第１従来例を示すフローチャート ギムザ染色法の第２従来例を示すフローチャート ギムザ染色法の第３従来例を示すフローチャート

符号の説明

１ スライド洗浄装置
２ 円盤
３ 回転軸
４ ロープ
５ 標本スライド
６ スライド支持体
７ 支点軸
８ 超純水
９ 貯留槽
１１ 減圧脱気装置
１２ 真空チャンバ
１３ 吸気パイプ
１４ 真空ポンプ
１５ 排気用パイプ
２１ 染色体染色装置
２２ チャンバ
２２ａ 本体
２２ｂ 蓋体
２３ 駆動モータ
２４ 回転軸
２５ 回転テーブル
２６ ニードル
２７ 試薬ボトル
２８ エアフィルタ装置
２９ ノズル
３０ 溝部
３１ 排水パイプ
３２ 防水軸受
３３ 廃液タンク
３４ 標本スライド載置部
３５ 軸孔
３９ 制御部
４１ シーリング材
４２ 磁気
４３ 磁気モータ
４４ 真空ポンプ
４５ 真空用パイプ
４６ 枝管
４７ 圧力計
Ｐ ポンプ
Ｖ バルブ
ＳＰ 停止位置

Claims (4)

1. 染色体の染色を不安定にする染色阻害物質を超純水で溶出除去する工程を経た後に、標本スライドの染色体染色におけるトリプシンによる処理を行うことを特徴とする染色体染色方法。
2. 染色体の染色を不安定にする染色阻害物質を減圧環境下において脱気除去する工程を経た後に、標本スライドの染色体染色におけるトリプシンによる処理を行うことを特徴とする染色体染色方法。
3. 検体標本の染色体染色の工程を全自動で実行可能とする染色体染色装置であって、標本スライドの染色体染色におけるトリプシンによる処理工程前に、サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドに付着した染色体の染色を不安定にする染色阻害物質を超純水で洗浄除去するための構成を備えたことを特徴とする染色体染色装置。
4. 検体標本の染色体染色の工程を全自動で実行可能とする染色体染色装置であって、標本スライドの染色体染色におけるトリプシンによる処理工程前に、サンプルの有核細胞浮遊液を展開した標本スライドに付着した染色体の染色を不安定にする染色阻害物質を減圧脱気した環境下で脱離除去するための構成を備えたことを特徴とする染色体染色装置。