JP2005306890A

JP2005306890A - 歯周病細菌の内毒素中和方法および付着抑制方法

Info

Publication number: JP2005306890A
Application number: JP2005213904A
Authority: JP
Inventors: Shuji Sasaki; 修二佐々木
Original assignee: Lion Corp
Current assignee: Lion Corp
Priority date: 2005-07-25
Filing date: 2005-07-25
Publication date: 2005-11-04

Abstract

【解決手段】アクチノバシルス・アクチノマイセテムコミタンス、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレエータムから選ばれる歯周病細菌に、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と、（ＩＩ）グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、ヒスチジンおよびプロリンから選ばれる１種又は２種以上のアミノ酸からなり、構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを作用させる上記細菌の内毒素中和方法、及び、アクチノマイセス・ナエスランデイの歯周病原因菌に、上記（Ｉ）成分と（ＩＩ）成分とを作用させる上記細菌の付着抑制方法。
【効果】本発明によれば、優れた細菌内毒素活性抑制、細菌付着抑制効果を有し、しかも長期間使用しても安全であり、歯周疾患の予防や治療に好適に利用することができる。
【選択図】なし

Description

本発明は、歯周病細菌内毒素中和剤、歯周病原因菌付着抑制剤、更には歯周病細菌内毒素を中和し、また歯周病原因菌の付着を抑制することにより歯周疾患の予防や治療用に有効な口腔組成物に関する。

歯周疾患の病原性因子として、付着因子（線毛、レクチン様リガンド）、内毒素、組織破壊性酵素（コラゲナーゼ、トリプシン様酵素）、白血球抵抗因子（莢膜、スーパーオキサイドデスムターゼ、ロイコトリエン）及び細胞毒性代謝物（硫化水素、脂肪酸）などがある。なかでも細菌内毒素は、直接あるいは間接的に歯周組織に対して炎症を惹起したり、歯槽骨吸収を促進したりすることが確認されている。

そこで内毒素の関与する歯周疾患の予防、治療の従来技術として、マクロライド系抗生物質による歯周組織再生の前処置剤（特許文献１；特開平７−２６７８６７号公報）、オクタデシルプロピルジメチルアンモニウム固定の水不溶性固体による内毒素吸着除去剤（特許文献２：特開平８−２６９５４号公報）が提案されている。

しかしながら、これらの技術を歯周疾患の予防、治療に応用するには、耐性菌の出現、副作用および歯牙へのステイン付着等の問題があった。従って、細菌内毒素を中和し得るより有効な技術の開発が望まれていた。

一方、歯周病原因菌の付着を抑制、防止する代表薬剤としてクロルヘキシジンがあるが、歯牙への着色問題や味覚への影響があった（縁下プラークの抑制法、クインテッセンス出版株式会社発行、１９９１年９月３０日）。

特開平７−２６７８６７号公報特開平８−２６９５４号公報縁下プラークの抑制法、クインテッセンス出版株式会社発行、１９９１年９月３０日

このように本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、優れた細菌内毒素活性抑制作用を有し、また、細菌の歯牙、粘膜に対する付着抑制効果も期待でき、しかも長期間使用しても安全な歯周病細菌内毒素中和剤、歯周病原因菌付着抑制剤及び口腔用組成物を提供することを目的とする。

本発明者は上記目的を達成するため鋭意検討を重ねた結果、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と（ＩＩ）構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを組み合わせた場合、後述する実験例から認められるように、アクチノバシルス・アクチノマイセテムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、フゾバクテリウム・ヌクレエータム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｎｕｃｌｅａｔｕｍ）等の歯周病細菌の内毒素を効果的に中和し得ること、また、アクチノマイセス・ナエスランデイ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ）等の歯周病原因菌の付着を抑制し得ることから、歯周疾患の予防及び治療に応用できる口腔用組成物が得られることを知見し、本発明をなすに至った。

従って、本発明は、
（Ｉ）アクチノバシルス・アクチノマイセテムコミタンス、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレエータムから選ばれる歯周病細菌に、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と、（ＩＩ）グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、ヒスチジンおよびプロリンから選ばれる１種又は２種以上のアミノ酸からなり、構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを作用させる上記細菌の内毒素中和方法、
（ＩＩ）アクチノマイセス・ナエスランデイの歯周病原因菌に、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と、（ＩＩ）グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、ヒスチジンおよびプロリンから選ばれる１種又は２種以上のアミノ酸からなり、構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを作用させる上記細菌の付着抑制方法
を提供する。

本発明によれば、優れた細菌内毒素活性抑制、細菌付着抑制効果を有し、しかも長期間使用しても安全であり、歯周疾患の予防や治療に好適に利用することができる。

以下、本発明を具体的に説明する。本発明で用いられるラクトフェリンは動物の体内に広く分布しているものであり、ラクトフェリンの生物学的機能としては、抗菌作用、抗ウイルス作用、生体防御作用および内毒素中和作用を有し、ムチン産生促進剤（特開平９−１２４７３号公報）、新規医薬組成物（特開平８−２１７６９３号公報）等が特許出願されている。

本発明に提供されるラクトフェリン関連成分の資源としては、哺乳動物の乳牛からの生産物、植物（トマト、イネ、タバコ）からの生産物、麹カビからの生産物、牛乳中で産生したヒト型ラクトフェリンおよび合成品のいずれであっても良い。本発明に提供するラクトフェリンは、特にウシ由来のものが好ましい。

本発明に提供するラクトフェリン分解物とは、酸分解物、ペプシン分解物を指し、ラクトフェリンと同様の生物学的機能を有している。ラクトフェリン酸加水分解物を有効成分とする抗菌剤およびそれを配合した化粧料（特開平６−２７９３１０号公報）、抗菌剤とこの抗菌剤を用いて物品を処理する方法（特開平５−３２００６７号公報）等が特許出願されている。本発明に用いるラクトフェリン分解物は、特に酸分解物が好ましい。

本発明に提供されるラクトフェリン関連ペプチドとは、１５個から５０個のアミノ酸で構成されたラクトフェリンおよびその分解物由来のペプチドを指す。これらペプチドの生物学的機能としては、強い抗菌作用、生体防御作用および内毒素中和作用があげられ、抗菌剤とこの抗菌剤を用いて物品を処理する方法（特開平５−３２００６７）が特許出願されている。ラクトフェリン関連ペプチドは、特に２５個のアミノ酸からなるウシ・ラクトフェリンのＮ−末端から調製したラクトフェリシンＢが良い。

ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチド（Ｉ）の配合量は、口腔用組成物全体の０．００１〜３％（固形分重量、以下同様）、特に０．０１〜１．５％とすることが好ましい。０．００１％未満であると、アミノ酸、又は２〜３個のアミノ酸からなるペプチドと組み合わせた場合、口腔唾液中および歯肉溝滲出液中の内毒素を十分に抑制できないし、又、歯周病原因菌の歯牙、粘膜への付着抑制も十分でない。３％を超えると、効果が定常に達し、又、製剤中での溶解性、安定性に問題が生ずる。

本発明で提供される（ＩＩ）構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分はグルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、ヒスチジンおよびプロリンから選ばれる１種又は２種以上のアミノ酸からなり、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−プロリン、Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニン、ＤＬ−アラニル−ＤＬ−アラニン、グリシル−Ｌ−ロイシン、グリシル−Ｌ−プロリン、グリシル−グリシン、ＤＬ−アラニル−ＤＬ−ノルバリン、Ｌ−ロイシル−グリシル−グリシン、グリシル−グリシル−Ｌ−ヒスチジン、グリシル−グリシル−グリシン等があり、特にＬ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニン、ＤＬ−アラニル−ＤＬ−アラニンおよびＬ−ロイシル−グリシル−グリシンが配合成分として好ましい。

これらの成分の配合量（ＩＩ）は、口腔用組成物全体の０．００１〜５％、特に０．０１〜３％とすることが好ましい。０．００１％未満であると、ラクトフェリン類と組み合わせた場合、口腔唾液中および歯肉溝滲出液中の内毒素を十分に抑制できず、又、歯周病原因菌の歯牙、粘膜への付着抑制も期待できない。５％を超えると、効果が定常に達し、又、製剤中での溶解性、安定性に問題が生ずる。

（Ｉ）／（ＩＩ）の配合比率（モル比）は１０^-5〜１０００、特に０．０００１〜１０とすることが好ましい。１０^-5未満であると、期待以上の相乗効果が出にくく、１０００を超えると相乗効果が定常に達する。

本発明の口腔用組成物には、上記以外の成分とし通常の口腔用組成物に使用されている成分を用いることができ、これらの成分の添加量は、本発明の効果を妨げない範囲で通常量とすることができる。

歯磨類の場合は、例えば、研磨剤、粘結剤、粘稠剤、界面活性剤、甘味剤、防腐剤、香料、着色剤、上記以外の各種有効成分などを常用量配合し得、これら成分を水と混合して製造することができる。

本発明の口腔用組成物は、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と（ＩＩ）構成アミノ酸数が１〜３個である成分とを組み合わせたものを有効成分として含有するもので、練歯磨、液状歯磨などの歯磨剤、口腔用軟膏、洗口剤、うがい用錠剤、トローチ、チュウインガムなどとして調製される。

以下、調製例、実験例、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。

［調製例１］ウシ・ラクトフェリンの調製
新鮮なウシ・ホエーの硫安沈殿物を水に溶解して、セファデックスＧ−２５のカラムを通し脱塩を行った。脱塩蛋白をｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水に溶解し、抗ウシ・ラクトフェリンモノクローナル抗体アフィニテイカラムに通し、さらにリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。その後、０．１５Ｍの食塩を含むｐＨ３．７の０．２５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液でカラムよりウシ・ラクトフェリンを溶出し、凍結乾燥により目的物を得た。

［調製例２］ウシ・ラクトフェリン酸分解物の調製
ラクトフェリン酸分解物は、凍結乾燥前のカラム溶出物を５０％クエン酸にてｐＨを３以下に調製後、加水分解処理を行った（９５℃まで加熱後、１時間放置）。分解物を冷却後、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液にてｐＨを中性付近に調整し、精製水で３日間透析し、透析物を凍結乾燥してラクトフェリン酸加水分解物を得た。

［調製例３］ラクトフェリンペプチドの調製
目的のラクトフェリンペプチドは、上記の調製例１、２で得られたラクトフェリン加水分解物を通常の液体クロマトグラフィー法を用いて単離することができる。例えば、ＴＳＫゲルＯＤＳ１２０Ｔ（東ソー社製）を用いた高速液体クロマトグラフィー法で、アセトニトリルのグラジエントで分画溶出させて単離することができる（特開平５−３２００６７号公報参考）。
その他の方法としては、上記のようにして得たペプチドのアミノ酸配列を公知の方法（気相シークエンサーを用いる方法など）によって決定し、それらのアミノ酸配列を有するペプチドを公知の方法（ペプチド自動合成装置など）で合成して目的のペプチドを調製することができる（例：配列番号１、２）。

〔実験例１〕インビトロ内毒素活性抑制試験
エンドスペーシー法（生化学工業（株）製）を変法して、下記方法でインビトロ内毒素活性抑制試験を行った。
歯周病の原因菌であるアクチノバシルス・アクチノマイセテムコミタンスＹ４、ポルフィロモナス・ジンジバリス３８１及びフゾバクテリウム・ヌクレエータムの内毒素（以下、それぞれＡａＬＰＳ、ＰｇＬＰＳ、ＦｎＬＰＳと略す）各１μｇ／ｍｌと表１〜４に示すような各種薬剤（１×１０^-4Ｍ）１ｍｌとを３７℃、３０分インキュベーション後、各ＬＰＳが１００ｐｇ／ｍｌになるように希釈して、エンドスペシー法による内毒素活性抑制率を測定した。結果を表１〜４に示す。なお、表中の内毒素活性抑制率は下記式により算出した。

内毒素活性抑制率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ＝（内毒素単独のＡＢＳ）−（注射用蒸留水のＡＢＳ）
Ｂ＝（（薬剤＋内毒素）のＡＢＳ）−（注射用蒸留水のＡＢＳ）
ＡＢＳ：５４５ｎｍの吸光度

表１〜表４の結果より、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と（ＩＩ）構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを組み合わせたものが、インビトロ内毒素活性抑制効果に優れていることが確認された。

〔実験例２〕家兎皮内毒性試験による細菌内毒素活性抑制試験
内毒素活性抑制（Ｐｒｉｍａｒｙｓｋｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）試験
家兎腹部をバリカンで除毛後、皮内に表５に示すように内毒素又は内毒素と薬剤の混合液（注射前に３７℃、３０分間反応）をそれぞれ家兎腹部に０．１ｍｌ注射した。４８時間後に注射部位の発赤、腫脹の大きさ（縦×横）を測定して内毒素活性抑制を評価した。なお、抑制率は下記式により算出した。
抑制率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ＝内毒素注射部位の面積
Ｂ＝（内毒素＋検体）注射部位の面積

〔実験例３〕局所シュワルツマン反応（ＬｏｃａｌＳｃｈｗａｒｚｍａｎｒｅａｃｔｉｏｎ）
Ｐｒｉｍａｒｙｓｋｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ判定後、家兎耳静脈に表６に示すように細菌内毒素を１００μｇ／ｋｇ（体重）注射し、２４時間後に皮内注射部位の紅斑、出血性壊死の大きさ（縦×横）や程度を測定して内毒素活性抑制を評価した。結果を表６に示す。なお、抑制率は下記式により算出した。
抑制率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ＝内毒素注射部位の面積
Ｂ＝（内毒素＋検体）注射部位の面積

〔実験例４〕アクチノマイセス・ナエスランディ付着阻止実験
ハイドロオキシアパタイト粉末（ＢＨＤケミカル社製）（以下、ＨＡと略す）５ｍｇをポリスチレン製マルチプレート（住友ベークライト社製）の各ウエルに入れ、ＫＣｌ緩衝液（５０ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄、１ｍＭＣａＣｌ₂、０．１ｍＭＭｇＣｌ₂、ｐＨ６．０）で洗浄後、ヒト全唾液の遠心上清（１２，０００ｒｐｍ、２０分間）１２５μｌを加えて、室温で６０分間反応させた。次に、ＨＡをＫＣｌ緩衝液で洗浄し、表７、８に示す０．１％の各薬剤１２５μｌを加えて３０分間反応させた。

ＨＡを緩衝液で洗浄した後、³Ｈ−チミジンを含む培地で培養して放射ラベルしたアクチノマイセス・ナエスランディＴ１４Ｖ（１×１０⁸／ｍｌ）１２５μｌを加えて、室温で６０分間反応させた。ＨＡをＫＣｌ緩衝液で洗浄し、ＨＡに付着した細菌の放射活性を液体シンチュレーションカウンターで測定した。結果を表７、８に示す。なお、付着抑制率は下記式より算出した。
付着抑制率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
Ａ：検体無添加時の細菌付着数
Ｂ：検体添加時の細菌付着数

以下、実施例を示す。
〔実施例１〕練歯磨
無水ケイ酸（平均粒径＝１０μｍ）２０．０重量％
ポリアクリル酸ナトリウム（重合度＝１５０００）０．５
キサンタンガム（Ｍｗ＝１００〜１５０万）０．５
プロピレングリコール５．０
７０％ソルビット液２０．０
サッカリンナトリウム０．１
安息香酸ナトリウム０．３
ラウリル硫酸ナトリウム１．５
ウシ・ラクトフェリン（調製例１）０．４
Ｌ−グルタミン酸０．２
香料１．０
精製水残
計１００．０

〔実施例２〕練歯磨
リン酸水素カルシウム・２水和物（平均粒径＝１０μｍ）４５．０重量％
無水ケイ酸（平均粒径＝１０μｍ）２．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム
（置換度：０．７、Ｍｗ＝３０万）０．３
カルボキシメチルセルロースナトリウム
（置換度：１．０、Ｍｗ＝３０万）０．７
カラギーナン（Ｍｗ＝５０万）０．１
プロピレングリコール３．０
６０％ソルビット液２５．０
パラオキシ安息香酸メチル０．２
安息香酸ナトリウム０．５
サッカリンナトリウム０．２
モノフルオロリン酸ナトリウム０．７３
トラネキサム酸０．０５
イソプロピルメチルフェノール０．１
ラウリル硫酸ナトリウム１．２
ラウロイルサルコシンナトリウム０．３
ヒト・ラクトフェリン（調製例１に準拠）０．４
Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニン０．２
香料１．０
精製水残
計１００．０

〔実施例３〕練歯磨
炭酸カルシウム（平均粒径＝０．５μｍ）４０．０重量％
火成性シリカ（平均粒径＝１０μｍ）２．０
ポリアクリル酸ナトリウム（重合度＝１５０００）０．５
カラギーナン（Ｍｗ＝５０万）０．５
プロピレングリコール３．０
グリセリン３０．０
パラオキシ安息香酸エチル０．１
パラオキシ安息香酸プロピル０．１
サッカリンナトリウム０．２
モノフルオロリン酸ナトリウム０．７６
ラウリル硫酸ナトリウム１．４
ラウロイルサルコシンナトリウム０．１
ウシ・ラクトフェリン酸分解物（調製例２）０．６
Ｌ−アスパラギン酸０．２
香料１．０
精製水残
計１００．０

〔実施例４〕液状歯磨
沈降性シリカ（平均粒径＝１０μｍ）２０．０重量％
パラオキシ安息香酸ブチル０．０１
キサンタンガム（Ｍｗ＝１００〜１５０万）０．２
ポリアクリル酸ナトリウム（Ｍｗ＝１５０００）０．１５
プロピレングリコール２．０
ソルビット３５．０
グリセリン２５．０
サッカリンナトリウム０．１
色素（ブリリアントブルー）０．００１
ラウリル硫酸ナトリウム１．５
モノラウリン酸デカグリセリル２．０
モノラウリン酸デカグリセリル２．０
ラクトフェリシンＢ（調製例３）０．３
Ｌ−グルタミン酸０．３
香料１．０
精製水残
計１００．０

〔実施例５〕液状歯磨
水酸化アルミニウム２５．０重量％
ポリアクリル酸ナトリウム（重合度＝１５０００）０．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｍｗ＝３０万）０．２
プロピレングリコール２．０
ソルビット１５．０
グリセリン４０．０
サッカリンナトリウム０．１
ラウリル硫酸ナトリウム１．５
モノラウリン酸デカグリセリル１．０
ラクトフェリシンＢ（調製例３）０．５
ＤＬ−アラニル−ＤＬ−アラニン１．０
香料１．０
精製水残
計１００．０

〔実施例６〕マウスウォッシュ
エタノール１０．０重量％
グリセリン１０．０
Ｐ．Ｏ．Ｅ（６０）硬化ヒマシ油５．０
サッカリンナトリウム０．７
安息香酸ナトリウム０．１
ウシ・ラクトフェリン（調製例１）０．３
Ｌ−ヒスチジン０．５
香料１．０
精製水残
計１００．０

〔実施例７〕口中清涼剤
エタノール５０．０重量％
グリセリン１５．０
Ｐ．Ｏ．Ｅ（６０）硬化ヒマシ油３．０
ｌ−メントール１．０
ラクトフェリシンＢ（調製例３）０．３
Ｌ−ロイシル−グリシル−グリシン０．２
香料０．３
精製水残
計１００．０

〔実施例８〕口腔用パスタ
セタノール１０．０重量％
スクワラン２０．０
沈降性シリカ５．０
Ｐ．Ｏ．Ｅ（４０）硬化ヒマシ油０．１
ソルビタンモノオレイン酸エステル１．０
ラウリル硫酸ナトリウム０．２
グリチルレチン酸０．１
サッカリンナトリウム０．６
ε−アミノカプロン酸０．５
サリチル酸エチル０．２
イソオイゲノール０．１
メントン０．０５
ヒト・ラクトフェリン（調製例１に準拠）０．６
Ｌ−アラニン０．２
香料０．６
精製水残
計１００．０

〔実施例９〕口腔用トローチ
乳糖９７．０重量％
Ｐ．Ｏ．Ｅ（６０）モノステアレート０．２
ラウリル硫酸ナトリウム０．０５
クロルヘキシジングルコン酸塩０．０２
サリチル酸メチル０．２
イソオイゲノール０．０５
ウシ・ラクトフェリン酸分解物（調製例２）０．３
Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニン０．５
香料０．０２
ヒドロキシエチルセルロース（Ｍｗ＝１００万）残
計１００．０

〔実施例１０〕うがい用錠剤
炭酸水素ナトリウム５０．５重量％
クエン酸１５．０
無水硫酸ナトリウム１２．８
第２リン酸ナトリウム１０．０
ポリエチレングリコール３．０
モノフルオルリン酸ナトリウム０．１
トマト・ラクトフェリン（調製例１に準拠）１．０
Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニン０．５
香料２．０
オレイン酸０．１
水残
計１００．０

〔実施例１１〕チュウインガム
砂糖４５．０重量％
ガムベース２０．０
グルコース１０．０
水飴１６．０
ヒト・ラクトフェリン由来ペプチド（調製例３に準拠）１．０
ＤＬ−アラニル−ＤＬ−アラニン０．５
香料０．５
水残
計１００．０

Claims

アクチノバシルス・アクチノマイセテムコミタンス、ポルフィロモナス・ジンジバリス、フゾバクテリウム・ヌクレエータムから選ばれる歯周病細菌に、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と、（ＩＩ）グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、ヒスチジンおよびプロリンから選ばれる１種又は２種以上のアミノ酸からなり、構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを作用させる上記細菌の内毒素中和方法。
アクチノマイセス・ナエスランデイの歯周病原因菌に、（Ｉ）ラクトフェリン、ラクトフェリン分解物およびラクトフェリン関連ペプチドから選ばれる１種以上と、（ＩＩ）グルタミン酸、アスパラギン酸、グリシン、アラニン、ロイシン、ヒスチジンおよびプロリンから選ばれる１種又は２種以上のアミノ酸からなり、構成アミノ酸数が１〜３個であるアミノ酸又はペプチド成分とを作用させる上記細菌の付着抑制方法。