JP2005255932A

JP2005255932A - 改質ポルフィラン

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Publication number: JP2005255932A
Application number: JP2004072426A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Hagino; 浩志萩野; Akiyoshi Kubota; 晃祥久保田; Masanobu Saito; 雅信斉藤
Original assignee: SHIRAKO KK; Shirako Co Ltd
Current assignee: SHIRAKO KK; Shirako Co Ltd
Priority date: 2004-03-15
Filing date: 2004-03-15
Publication date: 2005-09-22
Anticipated expiration: 2024-03-15
Also published as: JP5004409B2; KR100695920B1; US20050201962A1; KR20050092342A

Abstract

【課題】生理活性及び物性が改質されたポルフィラン、その製造、及び、用途を提供すること。
【解決手段】ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離させ、塩を除去し、ポルフィラン中の硫酸基の塩が解離して遊離の硫酸基となっているポルフィランとすることにより、生理活性及び物性の改質されたポルフィランを製造する。更に、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離して除去した後、その硫酸基を所定の塩類を用いて該塩類の硫酸塩とするか、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩をイオン交換により変換して、所定の塩類の硫酸塩とすることにより、ポルフィランの生理活性及び物性について改質されたポルフィランを製造する。本発明のポルフィランは、化粧品や飲食品に添加して、ヒアロニダーゼ活性阻害活性等を有する化粧品や飲食品として用いることができる。

Description

本発明は、生理活性及び物性が改質されたポルフィラン、その製造方法、及びその用途に関する。

ポルフィランは、わが国で古くから乾板海苔や佃煮として親しまれてきた紅藻類アマノリ属（スサビノリ、アサクサノリ、マルバアマノリ等）の藻体より抽出される硫酸基を含む高分子酸性多糖である。このポルフィランはＤ−ガラクトース、３,６-アンヒドロ−Ｌ−ガラクトース、６−Ｏ−メチル−Ｄ−ガラクトースを含み、構造上は寒天に類似しているが、ガラクトース−６−硫酸が多く、寒天のようなゲル化能は示さない。また、ＮＭＲ等を使った機器分析などにより、詳細な構造の解析が進み、ポルフィランは、アガロースのアガロビオースを基本単位として、一方が硫酸化された単位が部分的に２〜２．５単位隣接し、硫酸基を約６〜１１％含んでいることが報告されている。

一方、ポルフィランは、他の硫酸多糖と同様に、金属吸着能（石橋源次「アサクサノリポルフィランの加熱操作による物理化学的性質の変化」九州女子大学紀要１９９０，２６，１５−２１）、腸内フローラの改善（河津大輔等「スサビノリ多糖類の腸内フローラに及ぼす影響」日水誌１９９５，６１，５９−６９）、抗腫瘍活性（Noda等「Studies on the antitumour activity of marine algae」Nippon Suisan Gakkaishi １９８９，５５，１２５９−１２６４及びNoda等「Antitumour activity of polysaccharides and lipids from marine algae」Nippon Suisan Gakkaishi１９８９，５５，１２６５−１２７１）、免疫賦活作用（Yoshizawa等「Activation of marine macrophages by polysaccharide fractions from marine algae (Porphyra yezoensis)」BBB. １９９３，５７，１８６２−１８６６、吉沢康子等「紅藻類由来免疫賦活多糖類に関する研究」食品工業１９９４，３７，２５−３０及びYoshizawa等「Macrophage stimulation activity of the polysaccharide fraction from a marine Algae (Porphyra yezoensis): Structure-function relationships and improved solubility」B.B.B.．１９９５，５９，１９３３−１９３７）といった生理活性を有することが報告されている。

このように、ポルフィランは有効な生理活性物質として潜在的な利用価値が大いに期待され、飲食品や化粧品等への利用が考案されている。また、物性面では、ポルフィランは、ゲル形成能や著しい増粘性を示さないが、アルカリ処理することで脱硫酸して、ゲル形成能を誘発することが知られている。更に、ポルフィランの両親媒性の特性を活かして、油の乳化剤、エマルジョンの安定化剤としての利用も考案されている。

一方、ポルフィランの製造或いは精製法については、いくつかの方法が開示されている。例えば、アルカリ金属塩又はアルカリ土金属塩及び水溶性有機溶媒によりアマノリ属の熱水抽出物からポルフィランの沈澱を生成させる方法（特公平８−８４１号公報）、アマノリ属の熱水抽出液をアルコールで沈澱させ、サイズ排除クロマトグラフィーで処理する方法（特開平１１−３１０６０３号公報）、アマノリ属の熱水抽出液を水酸化ナトリウムでアルカリ性とした後、沈澱剤（逆性石鹸：アルキルトリメチルアンモニウム系化合物）を添加し、エタノールによる洗浄でポルフィランを精製する方法（特開平１０−６０００２号公報）、熱水で抽出し、得られた海苔熱水抽出液を酢酸及び／又は酢酸塩で処理した後、エタノールを加えてポルフィランを沈殿させ、洗浄してポルフィランを製造する方法（特開平１０−６０００３号公報）などが開示されている。

また、ポルフィランの製造或いは精製法について、アマノリの藻体乾燥物に含水エチルアルコールを加えて洗浄処理し、残留した固形分に水を加えて加熱沸騰させたのち、ろ過し、そのろ液を濃縮し、その濃縮液に塩酸又は乳酸のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を添加後、エチルアルコールによる分別沈殿を行い、アルコール濃度５０％（ｖ／ｖ）の画分の沈殿を回収するポルフィランの製造方法（特開２００４−２７１９２号公報）が開示されている。
特公平８−８４１号公報。特開平１０−６０００２号公報。特開平１０−６０００３号公報。特開平１１−３１０６０３号公報。特開２００４−２７１９２号公報。石橋源次「アサクサノリポルフィランの加熱操作による物理化学的性質の変化」九州女子大学紀要１９９０，２６，１５−２１。河津大輔等「スサビノリ多糖類の腸内フローラに及ぼす影響」日水誌１９９５，６１，５９−６９。 Noda等「Studies on the antitumour activity of marine algae」Nippon Suisan Gakkaishi １９８９，５５，１２５９−１２６４。 Noda等「Antitumour activity of polysaccharides and lipids from marine algae」Nippon Suisan Gakkaishi１９８９，５５，１２６５−１２７１。 Yoshizawa等「Activation of marine macrophages by polysaccharide fractions from marine algae (Porphyra yezoensis)」B.B.B., １９９３，５７，１８６２−１８６６。食品工業１９９４，３７，２５−３０。 Yoshizawa等「Macrophage stimulation activity of the polysaccharide fraction from a marine Algae (Porphyra yezoensis): Structure-function relationships and improved solubility」B.B.B.,１９９５，５９，１９３３−１９３７。

このように、アマノリ属海藻類からポルフィランを抽出し、利用する試みがなされ、１９８０年代にポルフィランは市販された経緯があるが、現在では販売されていない。ポルフィラン抽出の原料である海苔が高価であることがその理由に挙げられていたが、ポルフィランが下級品の海苔に多く含まれること、生海苔、乾海苔、焼海苔、さらに多少変色して食用に供し得ない海苔でもポルフィラン原料として利用できることから、原料コストについての問題は解決されている。しかしながら、原料コストの問題が解決された現在でもポルフィランが実用化されない理由として、公知の製造方法では精製工程に有機溶媒を用いるため防爆設備が必要になる、精製コストが高くなる、更に、それに見合った明確な用途が確立されていないことが指摘される。

そこで、本発明の課題は、簡便な方法で、生理活性及び物性が改質されたポルフィランを製造することにより、改質されたポルフィランを提供するとともに、該改質されたポルフィランを用いて実用上有用なその用途を提供することにある。

本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離させ、塩を除去し、ポルフィラン中の硫酸基の塩が解離して遊離の硫酸基となっているポルフィランとすることにより、ポルフィランの生理活性及び物性について改質されたポルフィランが製造できることを見い出した。更に、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離して除去した後、その硫酸基を所定の塩類を用いて該塩類の硫酸塩とするか、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩をイオン交換により変換して、所定の塩類の硫酸塩とすることにより、ポルフィラン中の硫酸基の塩が、所定の塩類に変換され、ポルフィランの生理活性及び物性について改質されたポルフィランが製造できることを見い出し、本発明を完成するに至った。本発明における、ポルフィラン中の硫酸基の塩の解離及び塩の除去、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩のイオン交換には、陽イオン交換樹脂を用いることができる。また、本発明において変換する所定の塩類の硫酸塩としては、硫酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルギニン塩、オルニチン塩、又はヒスチジン塩等が挙げられる。

すなわち詳述すると、本発明者は、アマノリ属海藻類から抽出して得られた粗ポルフィラン溶液を用い、硫酸基のイオンを交換する工程を経て製造することにより、種々の特性を有したポルフィランを得ることができることを見い出した。ポルフィランは、その硫酸基のイオンを交換することにより、ポルフィランの生理活性や物性が大きく変わり、ポルフィランの生理活性や物性はその硫酸基塩の種類により、大きく左右されることを見い出したのである。そして、硫酸基を所定のものに設定することにより、ヒアルロニダーゼ阻害活性がポルフィランの新たな特性として発現した。このことにより、ポルフィランの化粧品原料としての用途が、実用化可能な用途として開けた。

従来から、アマノリからのポルフィランの製造及び精製は、熱水抽出後、親水性有機溶媒等によるポルフィランを沈澱物として回収することが行われているが、この場合、アマノリ属の熱水抽出物に少なくとも、その等量に相当するエタノールなどの有機溶媒を添加しなければ、熱水抽出物中のポルフィランは沈澱しにくい。本発明者の行った実験では、比較的低分子のポルフィランは沈澱しにくいという結果も得られており、沈澱回収法は収率的にも問題があった。更に、ポルフィランの沈澱には低温下で長時間の静置条件が必要となるなど、煩雑な工程を踏まなければならないものであった。また、従来の方法で得られたポルフィランは、溶液とした場合の安定性に問題があるとともに、他の食物繊維などと比較して特徴的な生理活性なども少なく、その利用には実用的な観点から多くの問題が残されていた。

ポルフィランは、その硫酸基が塩になった状態が安定であり、アマノリ属海藻抽出物中ではナトリウム、カリウムあるいはその他の塩が混在した形態で存在している。そして、本発明者は、その塩の種類によって、物性及び生理活性が大きく影響されることを発見したが、公知例ではいずれも製造工程中、ポルフィランを如何にして沈澱させるかという観点から塩を用いており、ポルフィランの物性や生理活性が硫酸基に結合する塩基の種類によって左右されることを見い出した例は過去にはなく、また、その塩を変換してポルフィランの物性や生理活性についての改質を行った例もない。

そこで、本発明者は、ポルフィランを含むアマノリ属海藻類の熱水抽出物を陽イオン交換処理し、ポルフィランの硫酸基から塩を遊離にした後、任意の塩とすることにより、種々の性質を示すポルフィランを提供するに至った。すなわち、粗ポルフィラン溶液を陽イオン交換樹脂などで処理することによって遊離のポルフィランに導き、更に塩交換を行い、所望の種々の塩に交換して、目的とするポルフィランを得ることができる。粗ポルフィラン溶液を陽イオン交換樹脂などで処理する方法を採ることによって、簡易な方法で、生理活性及び物性が改質されたポルフィランを製造することができる。

一方、従来の化粧品分野におけるポルフィランの利用は、その粘性や保湿性に着目し、皮膚に使用した時のスベスベ感、しっとり感の賦与、余分な皮脂の除去など使用感の改善を目的としたものであった。近年、ポルフィランの化粧料としての生理作用に関する知見も見い出されつつあるが、具体的に皮膚に対する生理学的、生化学的な作用はほとんど解明されていない。

本発明によって、ポルフィランの特質として、ヒアルロニダーゼ阻害活性が新たに発見され、本発明の改質によってポルフィランが有するヒアルロニダーゼ阻害活性が増大することが確認された。ヒアルロン酸は哺乳動物の結合組織に広く存在するマトリックス成分の一つであり、細胞の保持、皮膚の保水、関節の潤滑など物理的なものから、近年では血管内皮細胞、多形核白血球、マクロファージなどの細胞機能の制御など、生化学的作用も注目されている。生体内のヒアルロン酸は比較的短期間で代謝回転していることが確認されており、通常の状態ではヒアルロン酸合成酵素と分解酵素の活性の平衡が保たれている。しかし、老化に伴いこの平衡が失われヒアルロン酸合成に対して分解酵素であるヒアルロニダーゼ活性が亢進すると、組織の柔軟性や潤滑性も失われ、皮膚のしわ等の老人性変化を引き起こす。皮膚老化、アレルギー性皮膚炎、リウマチ性関節炎、腫瘍の成長に際してヒアルロニダーゼ活性の亢進が認められるため、ヒアルロニダーゼを阻害する物質がこれらの老化に伴う変化や、疾患を抑制することが期待されている。

また、アレルギーの発症には、ヒスタミンが関与していることが知られており、ヒスタミンが肥満細胞から遊離される際にヒアルロニダーゼが関与している可能性が報告され、ヒアルロニダーゼ阻害作用は抗アレルギー効果の指標にされている。優れたヒアルロニダーゼ阻害活性を有し、かつ皮膚等の人体への使用に際し、高い安全性を持ったヒアルロニダーゼ阻害物質の開発が期待されていた。本発明において、ポルフィランにヒアルロニダーゼ阻害活性が新たに発見された。ヒアリロニダーゼ阻害活性は、従来までの製法により得られたポルフィランにも見いだすことができたが、本発明により製造されたポルフィランには顕著な生理活性が確認された。

また、食品分野におけるポルフィランの利用としは、コレステロール低減作用、免疫賦活作用などの生理活性を活かしたものが考案されている。しかしながら、本発明者らの行った実験では、ポルフィランを添加した食品の場合、その物性の安定性を確保することが最も重要であることが判明した。すなわち、従来までの製造方法にて調製されたポルフィランでは、溶解性、溶液時の粘度、安定性などの物性が不安定であり、実際の加工においては様々な問題を抱えていた。本発明では、それらポルフィランの物性が硫酸基の塩により左右されることを明らかにし、更に、種々の加工に適したポルフィランを塩交換反応にて簡便な方法を提供するこを可能とした。

上記するとおり、本発明者は、簡易な方法で、生理活性及び物性が改質されたポルフィランを製造することを可能とし、該改質されたポルフィランを用いて実用上有用なその用途を提供することを可能とした。該ポルフィランを添加した化粧料或いは飲食品は、物の品質としても好適な物性を示すと共に、本発明のポルフィランの改質によってその効果が増大した新規な生理活性が顕現されたポルフィラン化粧料或いは飲食品を提供する物である。

すなわち具体的には本発明は、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離させ、塩を除去する工程を包含することを特徴とする改質されたポルフィランの製造方法（請求項１）や、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離して除去した後、その硫酸基を所定の塩類を用いて該塩類の硫酸塩とするか、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩をイオン交換により変換して、所定の塩類の硫酸塩とする工程を包含することを特徴とする改質されたポルフィランの製造方法（請求項２）や、ポルフィラン中の硫酸基の塩の解離及び塩の除去、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩のイオン交換による変換を、陽イオン交換樹脂を用いて行うことを特徴とする請求項１又は２記載の改質されたポルフィランの製造方法（請求項３）や、所定の塩類の硫酸塩が、硫酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルギニン塩、オルニチン塩、又はヒスチジン塩であることを特徴とする請求項２又は３記載の改質されたポルフィランの製造方法（請求項４）からなる。

また本発明は、請求項１記載の製造方法によって製造され、ポルフィラン中の硫酸基の塩が解離して遊離の硫酸基となっていることを特徴とする改質されたポルフィラン（請求項５）や、請求項２〜４のいずれか記載の製造方法によって製造され、ポルフィラン中の硫酸基の塩が、所定の塩類に変換されていることを特徴とする改質されたポルフィラン（請求項６）や、所定の塩類がナトリウム塩であり、溶液にした場合に高い安定性を示し、皮膚に対する吸着性が増強されていることを特徴とする請求項６記載の改質されたポルフィラン（請求項７）や、所定の塩類がアルギニン塩であり、溶液にした場合に高い安定性を示し、皮膚に対する吸着性が増強されていることを特徴とする請求項６記載の改質されたポルフィラン（請求項８）や、請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを有効成分とするヒアルロニダーゼ活性阻害剤（請求項９）からなる。

更に、本発明は、請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを有効成分とするコレステロール低減剤（請求項１０）や、請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを有効成分とする免疫賦活剤（請求項１１）や、請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを添加したことを特徴とする化粧料、又は毛髪用或いはボディ用洗剤（請求項１２）や、請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを添加したことを特徴とするとする飲食品（請求項１３）からなる。

本発明は、簡便な方法で、生理活性及び物性において改質されたポルフィランの製造方法を提供する。該方法により、容易に、改質されたポルフィランの提供が可能となるとともに、該改質されたポルフィランを用いて実用上有用なその用途を提供することができる。ポルフィランの生理活性や物性はその硫酸基塩の種類により、大きく左右されることから、本発明により、該硫酸基の塩を所定のものに設定することにより、顕著なヒアルロニダーゼ阻害活性等を有する安定性のあるポルフィランを提供することができる。本発明の改質されたポルフィランは、化粧品や毛髪用或いはボディ用洗剤等に添加して、ヒアルロニダーゼ阻害活性等の機能を有する化粧品や毛髪用或いはボディ用洗剤等として用いることができ、また、もともと食用に供されているアマノリの主要成分であることから、飲食品に添加して機能性飲食品として、実用化することが可能である。

本発明は、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離させ、塩を除去し、ポルフィラン中の硫酸基の塩が解離して遊離の硫酸基となっているポルフィランとすることにより、ポルフィランの生理活性及び物性について改質されたポルフィランを製造することからなる。また、本発明は、ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離して除去した後、その硫酸基を所定の塩類を用いて該塩類の硫酸塩とするか、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩をイオン交換により変換して、所定の塩類の硫酸塩とすることにより、ポルフィラン中の硫酸基の塩が、所定の塩類に変換され、ポルフィランの生理活性及び物性について改質されたポルフィランを製造することからなる。

本発明における改質されたポルフィランの製造方法において、使用されるポルフィランの抽出原料は特に限定されるものではなく、例えば我国での主要養殖品種であるスサビノリやアサクサノリの他、すべてのアマノリ属海藻を使用することができる。また、それらは生海苔、乾燥海苔、焼海苔など、いずれの形態であっても差し支えない。

ポルフィランの製造にはまず、アマノリ属海藻の水系溶媒による抽出液を得る。アマノリ属海藻類からの抽出温度、時間としては０〜２００℃、１〜１４４０分の範囲から目的に応じ選択すれば良いが、通常５０〜１５０℃、５〜７２０分の範囲より選択して行うのが良い。さらに、抽出工程前に、６０〜１００％のアルコールやアセトン等で洗浄したり、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、グルタルアルデヒド、アンモニア等を含む水溶液に浸しておけばポルフィランへの着色性物質やタンパク質の混入が大幅に減少するため有利である。

次に、本発明の必須工程のポルフィラン硫酸基の塩交換処理であるが、アマノリ属熱水抽出物中のポルフィランは、ナトリウム、カリウムを始め種々の塩として存在しており、大半の硫酸基から塩を解離し、除去する工程としては、強酸性陽イオン交換樹脂処理が好ましい。さらに、電気透析、陰イオン交換樹脂処理などを併用することも可能である。塩の交換方法としては、対塩基型に調整した強酸性陽イオン交換樹脂を用いるか、あるいはＨ⁺型に調整した強酸性イオン交換樹脂処理後に塩基性物質で中和などして交換反応を行うことができる。

また、用いる塩基によりポルフィランの性質はが大きく変わるので、目的とする性質を有するポルフィランを得る為には、塩基を選択する必要がある。本発明において、用いられる硫酸塩としては、硫酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルギニン塩、オルニチン塩、又はヒスチジン塩等が挙げられる。そこで、ナトリウム塩、アルギニン塩のポルフィランの場合には、溶液とした場合の安定性、透明性が高く、保湿性が優れ、皮膚への高い吸着性を示すポルフィランが得られる。従って、水系の化粧品や飲料などへ利用することができる。

一方、ヒスチジン、オルニチン塩のポルフィランは、皮膚、頭髪などへの吸着性が低いが、官能的にはさっぱりとしたポルフィランが得られ、ヘアケア、ボディケア製品などへ利用することができる。カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土金属塩としたポルフィランは、溶液状態での安定性が低く、凝集などを起こし、沈澱などが発生し、飲料等の液体製品への利用は避けるべきである。なお、いずれにおいても、硫酸基塩を交換反応することによって、ヒアルロニダーゼ阻害活性は飛躍的に強くなることが本発明により明らかとなった。

本発明において、イオン交換反応を行って、硫酸塩の塩類を変換したポルフィラン精製物は、そのままで化粧品や飲食物に添加して用いることも可能であるが、さらに、多糖類の製造・精製方法として採用されている、分子量分画、脱色・脱臭処理、脱塩処理、濃縮、乾燥などの工程を必要に応じて、適時採用しても差し支えはない。本発明の改質したポルフィランは、固形剤や液剤のような形に製剤化して、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、コレステロール低減剤、或いは免疫賦活剤として用いることができる。また、本発明の改質したポルフィランを製剤化して、機能性飲食品として、用いることもできる。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。

（ポルフィラン溶液の調製）
九州有明海産スサビノリの乾海苔をポルフィラン原料として用いた。乾海苔１ｋｇを沸騰した１２ｋｇの精製水にて、９５℃、３時間抽出を行った。次いで、抽出残渣を５０メッシュのシフターで濾別後、抽出液に対して１％に相当する珪藻土と５％に相当する活性炭を添加して遠心分離（１４０００ｒｐｍ、１０分）を行い、抽出残物、着色物質及び臭いを完全に除去し、表１に示す精製工程をそれぞれ行った。各工程で得られたポルフィラン溶液は、固形分濃度（Ｂｘ．）が３％になるまで濃縮し、それぞれ５０ｍｌづつネジ栓付き容器に分注した。オートクレーブ（１２０℃、２０分）後、４０℃の環境下で１ヶ月間の保存試験を行った。その結果、工程例１及び２は保存期間中に澱の発生が確認された。工程例３については粘性の低下がみられた。また、工程例５及び６においても僅かな沈降が確認された。それ以外の工程例４、７，８、９においては澱や沈降は全く認められなかった。

試験例１）ヒアルロニダーゼ阻害活性の測定
実施例１で調製したポルフィラン溶液を固形分濃度（Ｂｘ．）から換算して、１．０２４、０．２５６、０．０６４、０．０１６、０．００４及び０．００１ｍｇ／ｍｌに調製して試験液とした。ヒアルロニダーゼ溶液（３３０ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）０．１ｍＬに試験液を０．２ｍＬ加え、３７℃で２０分間インキュベートした。さらに、酵素活性溶液（２．５ｍＭ塩化カルシウム・２Ｈ₂Ｏ）０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間インキュベートした後、０．０８％ヒアルロン酸溶液０．５ｍＬを加え引き続き４０分間インキュベートした。酵素活性はＭｏｒｇａｎ−Ｅｌｓｏｎ法にて測定した。

すなわち、反応試料に０．４ＮＮａＯＨを０．１ｍＬ加えて反応を停止させた後、ホウ酸カリウム溶液０．１ｍＬを加えて沸騰水浴中で３分間加熱した。流水で冷やした後ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液３ｍＬを加えてよく攪拌し、３７℃で２０分間反応させ、５８５ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。ヒアルロニダーゼ活性阻害率は次の式を用いて計算した。ヒアルロニダーゼ阻害活性率（％）＝Ａ−Ｃ／Ａ−Ｂ
ＯＤ［Ａ］：試験液の代わりに精製水を用いて同様に操作を行った溶液の吸光度
ＯＤ［Ｂ］：酵素溶液の代わりに緩衝液を用いて同様に操作を行った溶液の吸光度
ＯＤ［Ｃ］：試験液を用いて同様に操作を行った溶液の吸光度
結果を表２に示した。表２に示したようにポルフィランにヒアルロニダーゼ阻害活性が認められ、特に本発明である工程例４〜９に強い阻害活性が認められた。

（ポルフィラン溶液の製造）
瀬戸内海産スサビノリの乾海苔をポルフィラン原料として用いた。乾海苔１６５ｋｇを沸騰した１ｔの精製水にて、９５℃、３時間抽出を行った。次いで、抽出残渣を３０メッシュのシフターで濾別後、抽出物に対して１％に相当する珪藻土と５％に相当する活性炭を添加してフィルタープレスを行い、抽残物、着色物質及び臭いを完全に除去した。次に、Ｈ⁺型に置換した強酸性陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＳＫ−１０４を充填した１ｍ²の樹脂塔に抽出液を通液させた。その後、樹脂通過液はアルギニンを用いてｐＨ６．５に調整し、減圧濃縮によりＢｘ．５のポルフィラン溶液とした。

（ポルフィラン添加ボディソープの製造）
表３に示す各組成に基づき、液体ボディソープを調製した。得られた各液体ボディソープ（１回あたり約６ｇ)を用いて、アトピー性皮膚炎を有する２４人のパネルに、毎日、１ヶ月間ボディソープとして使用してもらい、肌の状態について評価してもらった。評価は、１つの液体ボディソープについて８人づつ試験してもらい、評価は下記の項目について５段階の評点評価を実施した。
（１）肌のしっとりさ：１．かさつく２．ややかさつく３．普通４．ややしっとりする５．しっとりする
（２）かゆみの程度：１．かゆみが増した２．変化なし３．明確ではないがかゆみが減った４．かゆみが減った５．かゆみがなくなった
パネラー２４名の評点の平均を表５に示した。

表４からも明らかなように、本発明のポルフィランを配合した処方例２の製品は、処方例１のポルフィラン無配合及び処方例３の従来のポルフィラン配合のものより、優れた皮膚改善作用を示した。

（ポルフィラン添加化粧水の製造）
表５の処方に従い化粧水を製造した。

得られた化粧水はそれぞれ１００ｍｌづつボトリングし、４０℃、ＲＨ７５％の条件下において３ヶ月間保存試験を行った。その結果、従来までのポルフィランを配合した処方例２の化粧水は、1ヶ月後には容器下部に澱の発生が確認され、化粧水としては不適なものであった。処方例1及び処方例３の化粧品に関しては３ヶ月間でも安定であった。次に専門パネラー１０名により処方例１及び３について官能試験を行った。評価は下記の項目について５段階の評点評価を実施した。
（１）肌のしっとりさ：１．かさつく２．ややかさつく３．普通４．ややしっとりする５．しっとりする
（２）肌の滑らかさ：１．ざらつく２．ややざらつく３．普通４．やや滑らか５．滑らか
（３）肌のべたつき：１．べたつく２．ややべたつく３．普通４．ややさっばり５．さっばり
パネラー１０名の評点の平均を表６に示した。
表３から明らかなように、本発明のポルフィランを配合した処方例１の製品は、ポルフィラン無配合の処方例３より優れた保湿性と皮膚平滑性を示した。

（ポルフィラン入り清涼飲料水の製造）
実施例１−工程例４のポルフィラン溶液５０mlに、天然水１５０ｍｌ、液糖２０ｍｌ、濃縮グレープフルーツ果汁５ｍｌ、香料０．１ｍｌを添加し、ポルフィラン入り清涼飲料水を製造した。

Claims

ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離させ、塩を除去する工程を包含することを特徴とする改質されたポルフィランの製造方法。
ポルフィラン中の硫酸基より塩を解離して除去した後、その硫酸基を所定の塩類を用いて該塩類の硫酸塩とするか、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩をイオン交換により変換して、所定の塩類の硫酸塩とする工程を包含することを特徴とする改質されたポルフィランの製造方法。
ポルフィラン中の硫酸基の塩の解離及び塩の除去、又は、ポルフィラン中の硫酸基の塩のイオン交換による変換を、陽イオン交換樹脂を用いて行うことを特徴とする請求項１又は２記載の改質されたポルフィランの製造方法。
所定の塩類の硫酸塩が、硫酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アルギニン塩、オルニチン塩、又はヒスチジン塩であることを特徴とする請求項２又は３記載の改質されたポルフィランの製造方法。
請求項１記載の製造方法によって製造され、ポルフィラン中の硫酸基の塩が解離して遊離の硫酸基となっていることを特徴とする改質されたポルフィラン。
請求項２〜４のいずれか記載の製造方法によって製造され、ポルフィラン中の硫酸基の塩が、所定の塩類に変換されていることを特徴とする改質されたポルフィラン。
所定の塩類がナトリウム塩であり、溶液にした場合に高い安定性を示し、皮膚に対する吸着性が増強されていることを特徴とする請求項６記載の改質されたポルフィラン。
所定の塩類がアルギニン塩であり、溶液にした場合に高い安定性を示し、皮膚に対する吸着性が増強されていることを特徴とする請求項６記載の改質されたポルフィラン。
請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを有効成分とするヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを有効成分とするコレステロール低減剤。
請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを有効成分とする免疫賦活剤。
請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを添加したことを特徴とする化粧料、又は毛髪用或いはボディ用洗剤。
請求項５〜８のいずれか記載の改質されたポルフィランを添加したことを特徴とするとする飲食品。