JP2005040756A

JP2005040756A - ウイルス除去及び洗浄、完全性試験のシステム

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Publication number: JP2005040756A
Application number: JP2003279871A
Authority: JP
Inventors: Fumihiko Yamaguchi; 文彦山口; Nobutsugu Fujita; 修嗣藤田
Original assignee: Asahi Kasei Pharma Corp
Current assignee: Asahi Kasei Pharma Corp
Priority date: 2003-07-25
Filing date: 2003-07-25
Publication date: 2005-02-17

Abstract

【課題】本発明は、低温でウイルス除去から完全性試験まで行う事ができるシステムを構築する事である。
【解決手段】本発明は、０〜１５度において、多孔性分離膜フィルターを用いてウイルス除去処理を行う工程及び界面活性剤とアルカリ性物質を含む洗浄液を用いて多孔性分離膜フィルターの洗浄を行う工程、多孔性分離膜フィルターの完全性試験（金コロイド法及び金コロイド法あるいはＬｉｑｕｉｄＦｏｒｗａｒｄＦｌｏｗＲａｔｅ法）を行う工程からなるシステムに関するものである。
【選択図】選択図なし

Description

本発明は、ウイルス除去及び洗浄、完全性試験のシステムに関するものである。さらに詳しくは、０〜１５度において、多孔性分離膜フィルターを用いてウイルス除去処理を行う工程及び界面活性剤とアルカリ性物質を含む洗浄液を用いて多孔性分離膜フィルターの洗浄を行う工程、多孔性分離膜フィルターの完全性試験（金コロイド法及び金コロイド法あるいはＬｉｑｕｉｄＦｏｒｗａｒｄＦｌｏｗＲａｔｅ法）を行う工程からなるシステムに関するものである。

血液製剤やバイオ製品を製造する場合、ＨＩＶやＨＢＶ、ＨＣＶ等の危険度の高いウイルスを除去する工程は必須である。ウイルス除去方法として、多孔性分離膜フィルターが利用されている。それを使用する際、濾過中に分離膜の構造が変化しなかったかを確認するため、完全性試験（特許文献１や特許文献２）の実施が必要とされている。さらに、完全性試験を行うには、濾過中に多孔性分離膜内に捕捉、又は、吸着されたウイルスや細菌、蛋白や脂質等の生体成分を洗浄する必要がある。

従来、血液製剤やバイオ製品のウイルス除去及び洗浄、完全性試験は常温で行われていた。しかしながら、生体成分の中には熱に不安定な物資、例えば、酵素、抗体、血液凝固因子、インターロイキンやエリトロポエチン等のサイトカインが存在し、常温で取り扱えない場合があった。

そこで、熱不安定な血液製剤やバイオ製品を低温で濾過した後、常温の別の設備で洗浄、完全性試験を行う方法が実施されていた。しかしながら、フィルターが危険度の高いウイルスに汚染されている可能性がある場合、フィルターを別室に移動させる事は、人体へのウイルス被液や設備の汚染等の問題が考えられるため、ウイルス除去処理を行った場所で完全性試験を行う事が推奨されている。

また、ＧＭＰ上においても、ウイルス除去設備と一般の設備と明確に区別する必要があり、ウイルスに汚染されている可能性のあるフィルターを一般の設備に持ち出す事ができない。そのため、常温で完全性試験を行う場合には、ＧＭＰに則った完全性試験のための設備を別に作る必要があった。しかしながら、これは製造現場としては大きな負担であり、ウイルス除去設備内で、低温で測定できる洗浄方法及び完全性試験が強く望まれていた。

一方、多孔性分離膜フィルターを洗浄法として、種々の方法が検討されてきたが、これらは物理的洗浄方法と、化学的洗浄方法とに大別できる。物理的物理的洗浄方法としては、スポンジボール、高圧水流などにより強制的に付着物質をかき取る方法、水、透過液などの液体を濾液側から原液側へ通過させる液体逆洗法、加圧気体を濾液側から原液側へ通過させる気体逆洗法（例えば、特許文献３や特許文献４）、多孔性分離膜の原液側から気体が放出される圧力よりも小さい圧力の気体を濾液側から導入する加圧操作、原液側に気泡を噴出させるバブリング法、超音波法、電気泳動法などをはじめ、多種多様の方法が提案されている。しかしながら、その洗浄効果は必ずしも満足できるレベルになく、多孔性分離膜の性能を低下させる場合もあった。さらに、これらの洗浄方法は、高価で、特殊な装置を必要とする欠点もあった。

化学的洗浄方法としては、酸、アルカリ水溶液、洗浄剤等からなる洗浄液、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム／水酸化ナトリウム洗浄液等が使用した方法が行われていた。しかしながら、従来の洗浄液は、低温にすると結晶が析出する等の問題点があった。
また、特許文献５に記載されているような方法も報告されているが、低温での洗浄効果については記載されておらず、低温での洗浄方法が強く望まれていた。

特開平７−１３２２１５号公報特開平１０−２３５１６９号公報特開昭５３−１０８８８２号公報特表平１−５００７３２号公報特開平９−１４１０６８号公報

本発明は、低温でウイルス除去から完全性試験まで行う事ができるシステムを構築する事である。

本発明者は、前記の問題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、低温においても洗浄可能な洗浄液を見出し、これを用いる事によって、ウイルス除去から、完全性試験までの一連の作業を低温で行う事ができるシステムを見出した。

すなわち、本発明は、
（１）以下の工程よりなるウイルス除去及び完全性試験のシステム。
（ａ）０〜１５度において、多孔性分離膜フィルターを用いてウイルス除去処理を行う工程
（ｂ）０〜１５度において、界面活性剤とアルカリ性物質を含む洗浄液を用いて、多孔性分離膜フィルターの洗浄を行う工程
（ｃ）０〜１５度において、多孔性分離膜フィルターの完全性試験を行う工程
（２）多孔性分離膜が、１０〜１００ｎｍの孔径を有するセルロース膜である事を特徴とする（１）に記載のシステム。
（３）界面活性剤が、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン（２）（Ｃ１２−１５）アルキルエーテル硫酸ナトリウム、あるいは、ポリオキシエチレン（２）ラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンのいずれかである事を特徴とする（１）〜（２）に記載のシステム。
（４）アルカリ性物質が、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液のいずれかである事を特徴とする（１）〜（３）に記載のシステム。
（５）完全性試験が金コロイド法あるいはＬｉｑｕｉｄＦｏｒｗａｒｄＦｌｏｗＲａｔｅ（ＬＦＲ）法である（１）〜（４）に記載のシステム。

本発明により、ウイルス除去から完全性試験までの一連の作業を低温で行う事ができる。その結果、熱不安定な物質を失活させる事なく製造する事ができ、かつ、ウイルス被液や設備汚染の可能性を減じることができる。

以下、本発明に係わる洗浄方法について具体的に説明する。
本発明に係る低温は、０℃〜１５℃であり、熱安定性が低い酵素、抗体、血液凝固因子、インターロイキンやエリトロポエチン等のサイトカインを取り扱う場合には、３℃〜１０℃が好ましい。

本発明に係る多孔性分離膜は、濾過に用いる事ができるならば特に制限されないが、例えば精密濾過膜（ミクロフィルター、ＭＦ）、限界濾過膜（ＵＦ）、ウイルス分離膜を挙げる事ができる。膜の素材は、セルロース、ポリフッ化ビニリデン、ポリスルホン等が挙げられるが、特にセルロース膜に適する。
本発明に係る多孔性分離膜の孔径は、例えば、１０ｎｍ〜１００ｎｍが例示されるが、目的とする蛋白の大きさや、除去したいウイルスの大きさによって、適宜選択することができる。例えばＨＩＶやＨＢＶの除去を目的とする場合には、１０ｎｍ〜４０ｎｍが好ましい。

本発明に係る多孔性分離膜の形状は、濾過に用いる事ができるならば特に制限されないが、例えば、中空糸、平膜等が挙げる事ができる。
本発明に係る界面活性剤は、低温でアルカリ性物質と接触させた時に結晶が析出しないものであれば特に制限されないが、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性イオン性界面、非イオン性界面活性剤のいずれでも使用する事ができるものであり、陰イオン性界面活性剤としては、脂肪酸塩、α−スルホ脂肪酸エステル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキル硫酸トリエタノールアミン、アルキルエーテル硫酸トリエタノールアミン等が挙げる事ができる。陽イオン性界面活性剤としては、アルキルアンモニウム塩、アルキルピリジニウムクロリド、アミドアミン等が挙げられる。両性イオン性界面としては、酢酸ベタイン型、アミノ酸型、イミダゾリン型等が挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、脂肪酸ジエタノールアミド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルが挙げられる。好ましくは陰イオン性界面活性剤と非イオン性界面活性剤の使用が有効であり、特に、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル及びポリオキシエチレン（２）（Ｃ１２−１５）アルキルエーテル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン（２）ラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンが有効である。

本発明に係る界面活性剤の濃度は、表面張力を低下させて洗浄効果を高める事ができる濃度であれば特に制限されないが、例えば、０．０１〜２ｗｔ％になるように設定する事ができる。好ましくは０．１〜１ｗｔ％、さらに好ましくは０．５〜１ｗｔ％での使用が有効である。２ｗｔ％より高濃度で使用する場合、膜内に界面活性剤が残存し、洗浄後の完全性試験に影響を与える場合がある。
本発明に係るアルカリ性物質は、濾過により膜に残留した生体成分を加水分解できるものであれば特に制限されないが、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸一水素二カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム等が挙げる事ができる。特に水酸化ナトリウムと水酸化カリウムが有効である。

本発明に係るアルカリ性物質の濃度は、生体成分の加水分解の効果を十分に得る事ができる濃度であれば特に制限されないが、例えば、０．０５〜１Ｍになるように設定する事ができる。好ましくは０．１〜０．７５Ｍ、さらに好ましくは０．２５〜０．５Ｍが有効である。高濃度での使用の場合、膜の性能に影響を与える可能性があるため、濾過洗浄時間を１時間以内、好ましくは２０分以内で使用する事が好ましい。

本発明に係る洗浄方法は、洗浄液を浸漬する洗浄方法、洗浄液を順洗する洗浄方法、洗浄液を逆洗する洗浄方法等が挙げられる。順洗とは、生体成分の濾過と同方向に洗浄液を流す洗浄方法であり、逆洗とは生体成分の濾過と逆方向に洗浄液を流す洗浄方法である。
洗浄効果の指標としては、例えば濾過・洗浄前後の透水量から求められる透水量回復率を用いる事ができる。透水量回復率は、下式（１）により求めた。

透水量とは１分間、１ｍ^２あたりに濾過される注射用水の量（ｍｌ／ｍｉｎ／ｍ^２）の事である。ＷＦＲ（Ｒ）が高いほど、濾過・洗浄前の状態に回復されたことを示す。洗浄効果は、ブランクフィルターのＷＦＲ（Ｒ）の平均±２×標準偏差内であれば洗浄できたと判断することができる。
ブランクフィルターとは、蛋白濾過及び洗浄を行っていない、未使用フィルターの事である。

本発明に係る完全性試験法は、多孔性分離膜の除去性能を確認できる方法であれば特に制限されないが、例えば粒子濾過法あるいはバブルポイント法、プレシャーホールド法、フォーワードフロー法等を挙げる事ができる。好ましくは、粒子濾過法である金コロイド法あるいはフォーワードフロー法であるＬｉｑｕｉｄＦｏｒｗａｒｄＦｌｏｗＲａｔｅ（ＬＦＲ）法が挙げられる。
金コロイド法とは、ウイルスと同程度の粒径である金コロイド粒子を利用し、膜が有する孔径分布の大きい孔の変化を測定する方法である（非特許文献１）。
すなわち、金コロイド粒子をフィルターで濾過し、濾過前の溶液に存在する金コロイド量と濾液に存在する金コロイド量から、フィルターの金コロイド除去性能を測定する方法である。

金コロイドの対数除去率は、下式（２）により求めた。

金コロイド測定の判断は、ブランクフィルターのΦの平均±２×標準偏差内であれば金コロイド測定が可能であると判断した。
金コロイド測定を行う時のフィルター内のｐＨは、金コロイド測定に影響しないｐＨであれば特に制限されないが、好ましくは、ｐＨ５〜ｐＨ１１が良い。
ＬＦＲ法とは、液体−液体の低い界面張力を利用し、膜が有する孔径分布の大きい孔の変化を測定する方法である（非特許文献２、非特許文献３）。すなわち、図１に示されるように、表面張力の近似した液体ＡとＢの界面張力γで、圧力Ｐを掛けると、

に相当する直径Ｄ以上の孔からＡの液が流出する。Ａの液の流出量変化は、直径Ｄ以上の孔の割合変化を反映する。ＬＦＲとは、１分間、１ｍ^２あたりに流出するＡの液の量（ｍｌ／ｍｉｎ／ｍ^２）の事である。
ＬＦＲ測定の判断は、ブランクフィルターのＬＦＲの平均±２×標準偏差内であればＬＦＲ測定が可能であると判断した。
ＬＦＲ測定を行う時のフィルター内のｐＨは、ＬＦＲ測定に影響しないｐＨであれば特に制限されないが、好ましくは、ｐＨ３〜ｐＨ１０が良い

濾過圧力は、多孔性分離膜の構造に影響しない圧力であれば特に制限されないが、セルロース膜の場合は１００ｋＰａ以下、ポリフッ化ビニリデン膜やポリスルホン膜の場合は３００ｋＰａ以下で使用する方が好ましい。
本発明に係る生体成分としては、蛋白、脂質、糖質、核酸を挙げる事ができる。蛋白としては、酵素、抗体、血液凝固因子、インターロイキンやエリトロポエチン等のサイトカイン等が挙げる事ができる。また、脂質としては、長鎖脂肪酸やリン脂質が挙げる事ができる。また、核酸としては、ＤＮＡやＲＮＡが挙げる事ができる。特に、グロブリンやアルブミン等の蛋白に対して有効である。
ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ＆ＡｐｐｌｉｅｄＡｓｐｅｃｔ、Ｖｏｌ．4、１５（１９９２）Ｊ．ＭｅｍｂｒａｎｅＳｃｉｅｎｃｅ、４０、２７７−２９５（１９８８）Ｊ．ＭｅｍｂｒａｎｅＳｃｉｅｎｃｅ、４１、６９−８６（１９８９）

本発明を次に実施例及び比較例によって説明するが、これらに限定されるものではない。

［実施例１］
ＷＯ０１／１４０４７公報に記載の方法で、平均孔径１８．５ｎｍを有する銅アンモニア法再生セルロース多孔性分離膜を製造し、膜面積０．０１ｍ^２のフィルター（フィルターＡ）に成型した。

使用する注射用水及び３ｗｔ％のウシグロブリン、洗浄液はあらかじめ４℃に冷却した。洗浄は全て４℃の恒温室で行った。フィルターＡを用いて、注射用水（大塚化学製）を濾過圧力１９．６ｋＰａで濾過し、透水量を求めた。次に、３ｗｔ％のウシグロブリン（インビトロジェン製）を濾過圧力４９ｋＰａで１０ｍｌ濾過した後、濾過圧力７８．４ｋＰａで０．２５Ｍの水酸化ナトリウムと０．５ｗｔ％のポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルからなる洗浄液を１０ｍｌ濾過した。その後、濾過圧力７８．４ｋＰａで注射用水を３０ｍｌ濾過してフィルター内部の洗浄液を除去し、濾過圧力１９．６ｋＰａで透水量を求めた。また５本のブランクフィルターはウシグロブリン濾過及び洗浄を行わず透水量測定のみ行った。フィルターＡのＷＦＲ（Ｒ）は９８．４％、ブランクフィルターのＷＦＲ（Ｒ）は９８．９±５．１％（ｍｅａｎ±２ＳＤ）であった。

［実施例２］
実施例１で濾過、洗浄を行った後のフィルターＡを用いて、ＬＦＲ測定を行った。
水６３０ｇに硫酸アンモニウム（和光純薬製）１９０ｇを溶解し、イソプロピルアルコール（和光純薬製）１８０ｇを加えて３０分間撹拌混合し、４℃で静置した。混合液が４℃になった時点で再び３０分間撹拌した後、３０分間静置して２相を分離させ、検査液を得た。
測定は全て４℃の恒温室で行った。初めに、検査溶液中の下層液を２９．４ｋＰａの圧力で濾過し、フィルターに充填されていた水を置換するとともに膜を充分に濡らした。その後、検査溶液中の上層液を膜の上流側から４４．１ｋＰａで押し込み、０．３ミリリットルの漏出に要する時間を測定し、１分間、膜面積１平方メートル当たりの漏出速度を算出した。同じＬＦＲの方法で５本のブランクフィルターを測定した。その結果、フィルターＡのＬＦＲは５．４６ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、ブランクフィルターのＬＦＲは５．５０±０．６８ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２（ｍｅａｎ±２ＳＤ）であった。

［実施例３］
実施例１で濾過、洗浄を行った後のフィルターＡを用いて、金コロイド測定を行った。金コロイドの調製は以下の通りに行った。
６．０ｍＭの塩化金酸水溶液８０ｇと注射用水３２０ｇ、４％のクエン酸ナトリウム水溶液１５．９ｇを混合し、７０℃±２℃で６０分間撹拌した。撹拌後、水浴で１５分間冷却し、３０％のポリビニルピロリドンＫ−１５（東京化成製）水溶液３９．８ｇを添加した。その混合液を十分に撹拌した後、５．４％のドデシル硫酸ナトリウム（和光純薬製）水溶液２４．０ｇを添加する。溶液のｐＨを４．７〜５．３に調整し、赤紫色の金コロイド水溶液（Ａ）を得た。金コロイドの平均粒径は２２．５ｎｍであった。さらに、金コロイド水溶液（Ａ）１０ｍｌと０．２７１％のドデシル硫酸ナトリウム水溶液９０ｍｌを混合し、４℃まで冷却して検査液を得た。

検査液を２６．７ｋＰａの圧力で濾過する。５ｍｌを流してフィルターに充填されていた水を置換した後、次の５ｍｌを分取した。その濾液の５２６ｎｍの吸光度を測定し、金コロイドの対数除去率（Φ）を算出した。同じ金コロイド測定方法で５本のブランクフィルターを測定した。その結果、フィルターＡのΦは２．４０、ブランクフィルターのΦは２．３７±０．１１（ｍｅａｎ±２ＳＤ）であった。

［実施例４］
特開平４−３７１２２１号公報に記載の方法で、平均孔径３５．４ｎｍを有する銅アンモニア法再生セルロース多孔性分離膜を製造し、膜面積０．０１ｍ^２のフィルター（フィルターＢ）に成型した。

使用する注射用水及び５ｗｔ％のウシグロブリン、洗浄液はあらかじめ４℃に冷却した。洗浄は全て４℃の恒温室で行った。フィルターＢを用いて、注射用水（大塚化学製）を濾過圧力１９．６ｋＰａで濾過し、透水量を求めた。次に、５ｗｔ％のウシグロブリン（インビトロジェン製）を濾過圧力４９ｋＰａで２００ｍｌ濾過した後、濾過圧力７８．４ｋＰａで０．２５Ｍの水酸化ナトリウムと０．５ｗｔ％のポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルからなる洗浄液を１０ｍｌ濾過した。その後、濾過圧力７８．４ｋＰａで注射用水を３０ｍｌ濾過してフィルター内部の洗浄液を除去し、濾過圧力１９．６ｋＰａで透水量を求めた。また、５本のブランクフィルターはウシグロブリン濾過及び洗浄を行わず透水量測定のみ行った。フィルターＢのＷＦＲ（Ｒ）は９６．４％、ブランクフィルターのＷＦＲ（Ｒ）は９８．０±６．９％（ｍｅａｎ±２ＳＤ）であった。

［実施例５］
実施例４で濾過、洗浄を行った後のフィルターＢを用いて、ＬＦＲ測定を行った。
水５８０ｇに硫酸アンモニウム（和光純薬製）２４０ｇ、溶解しイソプロピルアルコール（和光純薬製）１８０ｇを加えて３０分間撹拌混合し、４℃で静置した。混合液が４℃になった時点で再び３０分間撹拌した後、３０分間静置して２相を分離させ、検査液を得た。
測定は全て４℃の恒温室で行った。初めに、検査溶液中の下層液を２９．４ｋＰａの圧力で濾過し、フィルターに充填されていた水を置換するとともに膜を充分に濡らした。その後、検査溶液中の上層液を膜の上流側から６８．６ｋＰａで押し込み、０．３ミリリットルの漏出に要する時間を測定し、１分間、膜面積１平方メートル当たりの漏出速度を算出した。同じＬＦＲの方法で５本のブランクフィルターを測定した。その結果、フィルターＡのＬＦＲは１．１３ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、ブランクフィルターのＬＦＲは１．０２±０．２０ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２（ｍｅａｎ±２ＳＤ）であった。

［実施例６］
実施例４で濾過、洗浄を行った後のフィルターＢを用いて、金コロイド測定を行った。金コロイド検査液は、実施例３のクエン酸ナトリウム水溶液の量を１３．１ｇ、温度を７８℃±２℃とした以外は同様の方法で調製した。その結果、赤紫色の金コロイド水溶液（Ｂ）得られた。金コロイドの平均粒径は３２．７ｎｍであった。

検査液を２６．７ｋＰａの圧力で濾過する。５ｍｌを流してフィルターに充填されていた水を置換した後、次の５ｍｌを分取した。その濾液の５３４ｎｍの吸光度を測定し、金コロイドの対数除去率（Φ）を算出した。同じ金コロイド測定方法で５本のブランクフィルターを測定した。その結果、フィルターＡのΦは２．９３、ブランクフィルターのΦは３．１５±０．３０（ｍｅａｎ±２ＳＤ）であった。

［実施例７］
実施例１のポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルをポリオキシエチレン（２）（Ｃ１２−１５）アルキルエーテル硫酸ナトリウムに変えた以外、実施例１−３と同様の実験を行った。その結果、ＷＦＲ（Ｒ）は９８．４％、ＬＦＲは５．１１ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、Φは２．３３であった。

［実施例８］
実施例１のポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルをポリオキシエチレン（２）ラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンに変えた以外、実施例１−３と同様の実験を行った。その結果、ＷＦＲ（Ｒ）は９８．３％、ＬＦＲは５．０５ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、Φは２．４８であった。

［実施例９］
実施例１の水酸化ナトリウムを水酸化カリウムに変えた以外、実施例１−３と同様の実験を行った。その結果、ＷＦＲ（Ｒ）は９８．８％、ＬＦＲは５．２５ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、Φは２．４１であった。

［実施例１０］
実施例１−３の温度を４℃から１０℃に変えた以外、実施例１−３と同様の実験を行った。その結果、ＷＦＲ（Ｒ）は９８．６％、ＬＦＲは５．１３ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、Φは２．３０であった。

［比較例１］
使用する注射用水及び３ｗｔ％のウシグロブリンはあらかじめ４℃に冷却した。洗浄は全て４℃の恒温室で行った。フィルターＡを用いて、注射用水（大塚化学製）を濾過圧力１９．６ｋＰａで濾過し、透水量を求めた。次に、３ｗｔ％のウシグロブリン（インビトロジェン製）を濾過圧力４９ｋＰａで１０ｍｌ濾過した。次に、濾過圧力７８．４ｋＰａで注射用水を３０ｍｌ濾過し、その後、濾過圧力１９．６ｋＰａで透水量を求めた。ＷＦＲ（Ｒ）は７０．３％であった。

［比較例２］
比較例１の方法で濾過、注射用水のみで洗浄した後のフィルターＡを用いて、実施例２−３と同様の実験を行った。その結果、ＬＦＲは２．７８ｍｌ／ｍｉｎ．／ｍ^２、Φは３．４５であった。

［比較例３］
ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルの代わりにドデシル硫酸ナトリウムを使用した以外、実施例１と同様の洗浄を行った。その結果、洗浄液に沈殿が発生し、洗浄する事ができなかった。

本発明により、ウイルス除去から完全性試験までの一連の作業を低温で行う事ができる。その結果、熱不安定な物質（例えば、グロブリンやエリスロポエチン、インターロイキン等のバイオ製剤）を失活させる事なく製造する事ができ、かつ、ウイルス被液や設備汚染の可能性を減じることができる。

ＬＦＲ法の原理を説明する模式図。Ｄ＝４Ｋｃｏｓθ×γ／Ｐ（Ｄ：検出孔径、Ｋ：形状因子、θ：接触角、γ：界面張力、Ｐ：圧力）

Claims

以下の工程からなるウィルス除去および完全性試験のシステム。
（ａ）０〜１５度において、多孔性分離膜フィルターを用いてウィルス除去処理を行う工程
（ｂ）０〜１５度において、界面活性剤とアルカリ性物質を含む洗浄液を用いて、多孔性分離膜フィルターの洗浄を行う工程
（ｃ）０〜１５度において、多孔性分離膜フィルターの完全性試験を行う工程
多孔性分離膜が、１０〜１００ｎｍの孔径を有するセルロース膜であることを特徴とする請求項１に記載のシステム。
界面活性剤が、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン（２）（Ｃ１２−１５）アルキルエーテル硫酸ナトリウム、あるいは、ポリオキシエチレン（２）ラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンのいずれかであることを特徴とする請求項１〜２に記載のシステム。
アルカリ性物質が、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、水酸化カルシウム水溶液のいずれかであることを特徴とする請求項１〜３に記載のシステム。
完全性試験が金コロイド法あるいはＬｉｑｕｉｄＦｏｒｗａｒｄＦｌｏｗＲａｔｅ法である請求項１〜４に記載のシステム。