JP2004506656A

JP2004506656A - クラミジア感染の処置および予防において効果的な植物由来のおよび合成のフェノール化合物および植物抽出物

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Publication number: JP2004506656A
Application number: JP2002519592A
Authority: JP
Inventors: ヴォレラ，ヘイッキ; ヴォレラ，ピア; ヒルトゥネン，ライモ; レイノネン，マイヤ; サイック，ペッカ
Original assignee: コントロール−オックス　オサケ　ユキテュア
Priority date: 2000-08-17
Filing date: 2001-08-16
Publication date: 2004-03-04
Also published as: ATE441424T1; AU8220101A; CA2419716A1; EP1309333B1; KR100851357B1; NO20030728L; SG90259A1; WO2002014464B1; CN1454093A; WO2002014464A3; EE200300064A; ES2330306T3; MXPA03001435A; PT1309333E; HUP0300732A2; HUP0300732A3; EP1309333A2; WO2002014464A2; NZ524128A; AR034141A1

Abstract

本発明は、クラミジア感染の処置および／または予防における、天然のおよび合成の化合物、植物抽出物、およびそれらを含有する組成物およびこれらの混合物に関する。医薬調製物、食品添加組成物、および機能性食糧が、植物由来のフェノール化合物および合成化合物および植物抽出物から調製され得る。

Description

【０００１】
本発明は、クラミジア感染の処置および予防において有用な、効果的な植物由来のフェノール化合物に、および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物、ならびにそれらを含有する組成物に、そしてクラミジア感染の処置および予防における植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物およびそれらを含有する組成物の使用に関する。植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物は、薬学的組成物、食品添加組成物、および健康に有益である機能性食糧において使用され得る。
【０００２】
クラミジアは、グラム陰性細菌である。それらの独特な細胞内複製サイクルに起因して、それらはＣｈｌａｍｙｄｉａ属を含む別個のＣｈｌａｍｙｄｉａｌｅｓ目として分類されてきた。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ属は既に最初に２つの種、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓおよびＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉに分けられた。分類は生化学的な特性に基づかれた：
Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ　Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ
クラミジア感染におけるグリコーゲンの蓄積
（ヨウ素染色＋）　　　　　　　　　　　　　　　＋　　　　　　−
イオウ薬物に対する感受性　　　　　　　　　　　＋　　　　　　−
【０００３】
当初から、「Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ」は、同種性の群であり、および「Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ」は非常に異種性の群であると考えられた。トリ接触を伴わないで呼吸感染を引き起こすクラミジア株（後のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が発見され、これは「Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ」の群に属すると疑う余地も無く考えられた。なぜならこれは生化学に基づく上記の条件を満たしたからである。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓおよびＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅはそれらの表面構造に関して異なる。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの細胞構造の主な成分は４つの異なる部位で変化する主要な外膜タンパク質（ＭＯＭＰ）であり、および現在、およそ２０個の異なる免疫型へのＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの分類の基準を与える。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅにおいて、ＭＯＭＰは非常に保存的であり、および１つの免疫型のみが見出される。さらに、組織中の標的細胞が異なる：Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの場合、生殖器および結膜の上皮、およびＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの場合、呼吸官の上皮。前者は、稀なリンパ肉芽腫ｖｅｎｅｒｅｕｍ株（ＬＧＶ）の例外を伴うが、後者の標的細胞を特異的に構成する食細胞およびマクロファージにおいて増殖し得ない。細胞中に提示される場合、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅはＬＧＶの例外を伴うが、生殖クラミジアによって使用されないヘパリン受容体を使用する。さらに、伝達経路および得られる臨床的な像は異なる：Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは呼吸管を介して伝達され、および循環系へと単球の内側に伝播し得るのに対して、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは性接触において主に伝達される。さらに、処置が異なる：Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは通常単回用量で処置されるのに対して、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、さらに３週間の抗生物質過程が推奨される。
【０００４】
これらのクラミジア種によって引き起こされる、またはこれらと関連される疾患の列挙が以下に示される：
Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ：
−結膜炎
−子宮頸炎
−尿道炎
−骨盤炎症性疾患（ＰＩＤ）
−新生児の感染、例えば乳幼児間質性肺炎
−腹膜炎
−肝周囲炎
−反応性関節炎
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
−上気道管感染
−気管支炎
−肺炎
−慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
−喘息
−血管炎
−その合併症を伴うアテローム性動脈硬化症
−脳炎
−多発性動脈硬化症のあるタイプ
−アルツハイマー病の遅発性の部分
【０００５】
トリ接触を伴わないで呼吸感染を引き起こすクラミジア株は、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓおよび記載されるＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉの両方と遺伝的に異なること、従って明らかにこれはそれ自身の種、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに分類されたことが早くも１９８９年に示された。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓとのその核酸相同性は、１０％を下回る。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓはヒトＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株において見出されない染色体外プラスミドを有する。両方の種のゲノムが配列決定され、そして遺伝子の数は、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓにおけるよりもＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅにおいてかなり高い（約２００個）。クラミジアの近年の再分類において、これは既に、全く異なる属の、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａに移された。従って、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓから知られることすべてが、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに適応され得ないと考える適切な理由がある。
【０００６】
ヒトにおける最も共通のクラミジア種は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓであり、これは共通の重要な疾患を引き起こす。Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉは動物界において非常に広範であるが、また非常に稀にしかヒトにおける感染を引き起こし得ない。さらに、Ｃ．ｐｅｃｏｒｕｍは、反芻動物における感染を引き起こすことが知られる。Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌｅｓ目における新規な属および種の分類は進行中である。
【０００７】
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、ヒトの最も一般的なクラミジアであり、およびほとんど全員が、一生の間に２〜３回、これで感染される。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは容易に肺組織を侵襲し、そしてマクロファージおよび血管の内皮において増殖する。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる呼吸感染の臨床的な像は、通常、子供における穏やかな上気道感染から、成人の重篤な肺炎まで大きく変化する。全ての肺炎のうちの５〜１０％が、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、ヒト間の気道感染として伝播される。明らかにいくつかの個体は、効果的な伝達体である。なぜなら感染は、わずか就学年齢にてより一般的になるからである。ノルウェー国において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのによって引き起こされる感染は、約６年間の間隔を伴って２〜３年長の流行病として生じる。
【０００８】
クラミジア感染は、沈黙のおよび潜在性の性質であり、そしてそれらの慢性の遅発性の合併症は明らかに特に最も重要である。疫学的な研究は、慢性的なＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染とアテローム性動脈硬化症との間の重要な関連を示す：多くの研究はまた、クラミジア感染と急性心筋梗塞（ＡＭＩ）の発生率との間の関係を示した。さらに、慢性のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は明らかに、喘息および慢性的な閉塞性肺疾患の発生における役割を果たす。
【０００９】
アテローム性動脈硬化症は、慢性の炎症状態であり、およびＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ粒子が、半分を超えるアテローム硬化型プラークの泡沫細胞および平滑筋細胞において実証された。ＡＭＩ患者において、クラミジアリポ多糖（ＬＰＳ）に対する免疫応答がしばしば生じ、感染の悪化を示す。障害された心臓弁においてクラミジア感染を検出することが可能であり、それらは特に、腹大動脈動脈瘤において豊富である。さらに、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、脳梗塞および一過性の脳虚血発作において役割を果たすことが発見された。障害された部位において見出されるクラミジアが、障害自体の発生において何の役割を果たすのかは最終的に未だ明らかではないが、これらの疾患の遅延された進行における１つの因子は、ともかく慢性のクラミジア感染であるようである。しかし、動物モデルにおいて、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、アテローム性動脈硬化症の発症を開始および加速することが示された。疫学的なおよび臨床的な研究は、慢性的なＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染と、アテローム性動脈硬化症およびＡＭＩとの間に明らかな相関があることを示した。最近の研究において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは心臓事象の危険因子であることがまた結論付けられた。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅはまた、慢性のクラミジア感染に対して明らかに素因化しやすいタバコ喫煙に関連される。
【００１０】
抗生物質処置が、心臓発作の危険性を減少するために観察され、抗生物質処置で共通の炎症性マーカーＣＲＰおよび血清フィブリノーゲンレベルを影響することが可能であった。先進国の大部分において、クラミジアに対して非常に効果的な抗生物質の使用が、他の感染処置においても一般的になった場合、心臓疾患の罹患率は減少し始めた。
【００１１】
Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは女性の生殖器感染の最も重要な原因である。さらに、妊娠年齢の女性の細菌培養ネガティブな尿管感染の一部分は、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓによって引き起こされる。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは、慢性的な子宮内膜症の一般的な原因であり、およびＰＩＤは女性におけるＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ感染の最も一般的な合併症である。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ感染はほとんど無徴候性であり得、子宮外妊娠および不妊症であっても、沈黙のサイレントな感染によって引き起こされる閉塞性の瘢痕形成の合併症の原因として知られる。クラミジア保菌者に生まれた約半分の子供が、出生によって感染され、および約半分の感染された新生児は、合併症としてＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ肺炎を伴う封入体結膜炎を発症する。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓはまた、男性において生殖器感染を引き起こす。
【００１２】
クラミジアは、テトラサイクリンおよびエリトロマイシンに感受性であり；リファンピシンおよびいくつかの新規なフルオロキノリン類がまた有効である。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓはまた、例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅとは対照的にイオウ薬物に感受性である。処置に対する応答にもかかわらず、クラミジア感染はしばしば、再発し、およびまた、慢性になる危険性がある。クラミジア増殖は細胞の内側のみであり、従って細胞中に効果的に濃縮する新規なマクロライド抗生物質およびアザリド類が今日、主要な薬物としてテトラサイクリンおよびエリトロマイシンを代替する。複雑なクラミジア感染において、処置はおそらく、長期間継続されなくてはならず、および例えばクラミジアによって引き起こされるＲｅｉｔｅｒ病において、３ヶ月間の処置が推奨される。
【００１３】
これまでのところ、クラミジア感染の予防のためのワクチンはない。免疫応答の性質は、充分には知られておらず、および超過敏性に対する傾向がこれに関連される。
【００１４】
欧州特許第３７７７２２号明細書（特許文献１）は、心筋梗塞の危険性を評価するための方法において、心臓および血管疾患を診断する方法、ならびにクラミジアに対して効果的な薬物の使用が記載される。この特許公報において、テトラサイクリン、エリトロマイシン、リファンピシリン、およびフルオロキノロンが、クラミジアによって引き起こされる慢性的な心臓疾患の処置または予防に適切である薬物として記載される。
【００１５】
国際公開第９８／５００７４号パンフレット（特許文献２）は、特にＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる感染の処置のための、抗クラミジア薬剤の組み合わせを記載し、ここでは有効成分はそれぞれ、クラミジア感染の生活環のある段階で効果的である。
【００１６】
米国特許第５，８３０，８７４号明細書（特許文献３）において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる動脈クラミジア肉芽腫を診断するための方法、および動脈クラミジア肉芽腫症を処置するための治療組成物が記載される。適切な治療的に作用する化合物として、クラミジアに対して効果的な、エリトロマイシン、クラリトロマイシン、アジトロマイシン、およびキノロンなどが言及される。
【００１７】
日本国特開平１０−１３９６８６号公報（特許文献４）は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされるアテローム性動脈硬化症の処置のために、２−（３，４−ジメトキシシナモイル）−アミノ安息香酸を、１００〜１，０００ｍｇの毎日の投薬量にて、治療学的に活性な化合物として記載する。
【００１８】
上述の情報によれば、クラミジア感染の処置および予防において使用され得る新規な化合物および組成物についての明白な必要性がある。
【００１９】
シキミ酸または生合成経路を介してシキミ酸から形成される化合物、酢酸−マロン酸生合成経路を介して形成される化合物、および両方の経路の組み合わせを介して形成される化合物は、植物由来のフェノール化合物の群に属する。単純な芳香族、フェノール、クマリン、リグナン、リグニン、ならびにフラボノイド、およびそれらの誘導体は、当該化合物に属する。単純な芳香族は主に、フェニルプロパン誘導体およびフェニルメタン誘導体を包含する。本来フラボノイドは、構造的にフェノール化合物であり、広範な植物色素群を形成する。フラボノイドは、植物界において、コケ植物類において、マンネングサ科において、および他の下等植物においてどこにでも生じる。ほとんど、これらは高等植物および維管束植物から見出され、そしてこれらは全ての果物、野菜に、および特に紅茶およびワイン、特に赤ワインに存在する。フラボノイドは主に、グリコシド形態において天然に存在するが、これらはまた、いわゆるアグリコン形態における遊離フェノールおよび硫酸であり得るか、または多糖およびタンパク質に結合され得る。大部分の場合において、フラボノイドはそれらの化学構造のポリフェノール化合物である。８０００個を超えるフラボノイドが、植物から同定されており、およびそれらは無数の機能を有する。それらは、それらの苦味に起因して有毒な昆虫に対して植物を防御し、ならびにそれらの抗生物質特性に起因して、ウイルスおよび細菌に対して植物を防御する。現在の見解に従って、フラボノイドは栄養的に重要な化合物ではないが、これらは健康に対して有益な効果を有するようである。この効果は明らかに、植物中に含まれるビタミンおよび鉱物から独立する。フラボノイドを摂取することはほとんど回避できないが、効果に対するそれらの可能性は、とにかく、吸収特性および生体利用能に、そしてさらに同時に得られるフラボノイドの相互作用に依存する。
【００２０】
天然のフェノール化合物の抗酸化効果は既に、極めて長い間公知であり、および抗酸化効果および遊離ラジカルの捕獲は、いくつかの研究においてとり扱われた。本研究の情報によれば、ＬＤＬコレステロールの酸化を防止するためのフラボノイドの能力は、それらの最も重要な特性の１つとして考慮される。血管の内皮下層におけるＬＤＬコレステロールの酸化は、アテローム性動脈硬化症の最初の因子である。多くの研究は、栄養素からの不十分なフラボノイドの取り込みが、心臓および血管疾患によって引き起こされる罹患における重要な因子であることを示唆する。フラボノイドに関するヒト研究において、数個の最も重要なフラボノイドが観察されたのみであり、そのうちのケルセチンは、ＬＤＬコレステロールの酸化を防止すること、および従って、酸化されたＬＤＬコレステロールは明らかにアテローム性動脈硬化症段階に関連されたので、冠状動脈疾患の危険性を減少することが示された。
【００２１】
栄養物からのフラボノイドの毎日の取り込みは、例えば、オランダの研究によると、０〜３０ｍｇの間である。フィンランドにおいて行われた研究において、フラボノイドは心臓および血管疾患の罹患に対する適度な予防効果を示すことが注記されたが、他方、フラボノイドの取り込みにおける差異はむしろ小さく、総量は約２〜６ｍｇ／日であった。オランダにおいて行われた研究において、栄養物から獲得可能なフラボノールと、心臓および血管疾患によって引き起こされる死亡症例との間の逆の関係が注記された。フラボノールとフラボノンの取り込みと、心筋梗塞の危険性との間の逆の関係がまた注記された。フラボノイドはさらに、炎症および免疫応答に対して、ならびに細胞の多くの他の機能に対して効果を有することが示された。いくつかのフラボノイドおよび多くの他のフェノールの天然の化合物は、以下に示される表１においてまた実証される細胞に対するカルシウム取り込みを防止または増強し得る。
【００２２】
カルシウムチャネルブロック剤は、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、および高血圧の、心臓無酸素症によって引き起こされる胸痛のような、心臓および血管疾患の処置において重要な役割を有する。これらの薬物は、細胞へのカルシウムの流入を防止することによってカルシウムチャネルに対して作用し、従って冠動脈を拡張し、および血管の抹消耐性を低下し、ここでは心臓負荷が減少される。カルシウムブロッカーの大規模での使用は、例えば天然から単離された化合物のカルシウムチャンネルブロック効果を見出すためのスクリーニングプログラムの開発を導いた。研究におけるスクリーニング媒体として、例えば、ラット（ＧＨ_４Ｃ_１）の下垂体腺の後葉の腫瘍に起源する連続的な細胞株が使用され、およびパッチクランプ技術が使用され、ここでは１つの細胞の別個のカルシウムチャンネルが、同時に試験され得る。研究の結果として、天然に存在する化合物および抽出物が見出され、これらはカルシウムチャンネルをブロックするまたは活性化する効果を有することが見出された。これらの化合物は植物由来の、単純なフェノール、クマリン、フラボノイド、および当該化合物が豊富な抽出物の間で見出された。これらのいくつかは、それらのブロック効果において、ベラパミルと匹敵し、および化合物のいくつかは細胞へのカルシウム流入を増強する傾向を有する。
【００２３】
【特許文献１】
欧州特許第３７７７２２号明細書
【特許文献２】
国際公開第９８／５００７４号パンフレット
【特許文献３】
米国特許第５，８３０，８７４号明細書
【特許文献４】
特開平１０−１３９６８６号公報
【００２４】
本発明は、クラミジア感染の処置および予防において有用な効果的な植物由来のフェノールの化合物に、および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物およびそれらを含有する組成物に、ならびにクラミジア感染の処置および予防における、植物由来のフェノールの化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物の、およびそれらを含有する組成物の使用に関する。
【００２５】
本発明の植物由来のフェノールの化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物、およびそれらを含有する本発明の組成物の特徴的な特性、ならびにクラミジア感染の処置および予防におけるそれらの使用、そしてクラミジア感染の処置および予防において有用である、医薬および健康に有益な食糧の製造におけるそれらの使用は、特許請求の範囲において示される。
【００２６】
驚くべきことに、ある植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体、および当該植物由来の化合物を含有する植物抽出物および画分および部分画分は、クラミジアに対して抗生物質様の、強力な効果を有することが見出された。本発明によれば、植物由来のフェノール化合物は、生合成経路を介してシキミ酸から形成されるフェノール化合物、酢酸−マロン酸経路を介して形成されるフェノール化合物、および両方の経路の組み合わせの結果として形成されるフェノール化合物である。これらの化合物、例えば、単純芳香族、フェノール、クマリン、リグナン、リグニン、およびフラボノイドは、果物および野菜、特に柑橘系果物、野菜、液果、タマネギ、紅茶、赤ワインなどのような植物界の産物から得られる。
【００２７】
植物由来のフェノール化合物、および対応する合成化合物およびそれらの誘導体、ならびにそれらを含有する植物抽出物および画分および部分画分は、必要に応じてアリシンまたはアリシンの誘導体のようなニンニクにおいて含まれるイオウ化合物と組み合わせて、それ自体で、またはそれらの混合物として使用される。
【００２８】
好ましい植物由来の天然のフェノール化合物はフラボノイド、ならびにフェニルメタンおよびフェニルプロパン誘導体、安息香酸、トリテルペン、クマリン、およびカテキン、そしてそれらを含有する植物抽出物および部分画分、ならびに単純なフェノール、フラボノイド、それらの誘導体、ポリフェノール、ジテルペンフェノール、およびジテルペンケトンを含有する画分、ならびにタンニンおよびジテルペン画分が除去された画分である。好ましいのはまた、対応する合成化合物およびそれらの誘導体、および上述で引用される化合物の薬学的に受容される塩、エステル、および誘導体である。
【００２９】
好ましい化合物およびその抽出物は、実施例において規定されるように、３０％以上の、および特に好ましくは９０％以上の抗クラミジア効果（封入体の形成の阻害）を有する化合物およびその抽出物である。以下において、好ましい化合物および抽出物の群が示される：
−アピゲニン、ルテオリン、フラボンのようなフラボノイド
−ケルセチン、ラムネチン、モリンのようなフラボノール
−ナリンギンのようなフラボノン
−ゲニステインのようなイソフラボン
−没食子酸メチル、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、没食子酸イソプロピルのようなフェニルメタン由来の化合物
−以下のようなフェニルプロパン由来の化合物：
−クマリン様のウンベリフェロン、スコポレチン、メトキシプソラレン、キサントトキシン、およびクマリン
−フラバン−３−オール様の、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−カテキン、および（−）−エピカテキン没食子酸
−フラボノイドおよびクマリン様のクマリン１０６、２’−メトキシ−α−ナフトフラボン、６，２’−ジメトキシフラボン、６−メチルクマリン、α−ナフトフラボン、ロタノン、および７−ジエチル−アミノ−３−テノイルクマリンのような、合成化合物
−Ｍｅｎｔｈａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｍｅｎｔｈａ　ａｒｖｅｎｓｉｓ、Ｇａｌｅｏｐｓｉｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ、Ｓａｌｖｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｔｈｙｍｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｒｕｍｅｘ　ａｃｅｔｏｃｅｌｌａ、Ｒｏｓａ　ｒｕｇｏｓａ、Ｖｅｒｏｎｉｃａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ　ａｓｐｅｒｕｍ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｍａｊａｌｉｓ、Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｒｏｂｕｒ、Ｄａｕｃｕｓ　ｃａｒｏｔａ、Ｆｒａｇａｒｉａ　ｉｉｎｕｍａｅ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｏｌｅｒａｃｅａ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｎａｐｕｓ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｓａｔｉｖａ、Ｃｉｔｒｕｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｌｏｅｍ　ｆｌｏｕｒ、またはＶａｃｃｉｎｕｍ　ｍｙｒｔｉｌｌｕｓの抽出物のような、天然の植物抽出物。
【００３０】
植物由来のフェノール化合物、それらを含有する抽出物および部分画分は、物質を抽出および単離するための任意の従来の技術を使用することによって天然の植物またはその部分から簡便に得られ得る。所望の抽出物を得るために、支柱、根、葉は適切に水蒸留され、そして軟化されるか、または抽出されるのみであり、これはさらに当業者に公知の任意の従来の精製技術を使用して精製され得る。対応する合成化合物またはそれらの誘導体は通常市販される物質であるか、またはそれらは公知の合成方法を使用して合成され得る。
【００３１】
以下の表１において、本発明の好ましい植物由来のフェノール化合物のいくつか、細胞へのカルシウム流入に対する化合物の効果、抗酸化剤効果、および化合物の化学構造が示される。
【００３２】
表１において示される化合物の化学構造は、以下のスキームＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥにおいて与えられる。スキームＡにおいて、フラボン、フラボノール、スキームＢにおいて、フラバノン、スキームＣにおいてイソフラボン、スキームＤにおいてフェニルメタン誘導体、およびスキームＥにおいてフェニルプロパン誘導体が与えられる。置換基Ｒ_１〜７は、表１において与えられるそれぞれの官能基に言及される。
【００３３】
【化１】

【００３４】
【表１】

【００３５】
【表２】

【００３６】
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する、植物由来のフェノール化合物のケルセチン、モリン、ラムネチン、および没食子酸オクチルの抗クラミジア効果が、実施例１〜４において研究された。これらの化合物の全てが、０．５〜５０μｇの濃度において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの増殖を阻害し、そしてケルセチン、モリン、およびラムネチンは、予め処理された宿主細胞が使用された場合、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対して特に効果的であることが示された。従って、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染の処置および予防のために好ましい化合物は、例えば、天然の材料から単離されたフェノール化合物のケルセチン、モリン、ラムネチン、および没食子酸オクチルであり、そして次いでＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの治療および予防のために好ましい化合物は、ケルセチン、モリンおよびラムネチン、ならびにそれらを含有する抽出物および部分画分である。
【００３７】
５０μｇの濃度を使用する、ニンニクと、他の植物由来のフェノール化合物、ある合成フラボノイド、およびクマリン、および植物由来のフェノール化合物との混合物の抗クラミジア効果はまた、実施例５において研究され、顕著な阻害効果を示す。従って、ニンニク中に含まれるアリシンの、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する抗クラミジア効果が、類似の結果を伴って研究された。
【００３８】
天然の植物抽出物および食用植物抽出物の抗クラミジア効果が実施例６において研究され、優れた阻害効果を示す。
【００３９】
好ましい化合物および抽出物および画分は、実施例において規定されるように、３０％以上の、および特に好ましくは９０％以上の抗クラミジア効果（封入体の形成の阻害）を有する化合物および抽出物および画分である。
【００４０】
典型的にクラミジアに対して効果的である、本発明に従う化合物は、さらに抗酸化剤であり、および細胞中のＣａ^２＋取り込みに対する効果を有する。
【００４１】
没食子酸オクチルはまた、食品添加物として一般に使用される化合物である。
【００４２】
有効成分として、植物由来のフェノール化合物、対応する合成化合物およびそれらの誘導体、および植物抽出物、画分、およびそれらの混合物は、アグリコンとして算定される毎日の供給が２５μｇ〜３０００ｍｇであるように投与され得る。植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物および画分およびそれらの混合物は、本発明に従って、カプセル、錠剤、軟膏、液体調製物の形態における、または当業者に公知の他の対応する形態における薬学的調製物として調製され得る。調製物は、アグリコンとして算定される毎日の供給が２５μｇ〜３０００ｍｇであるように、好ましくは２５μｇ〜５００ｍｇの単位用量として、有効成分を含む。
【００４３】
植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物および画分およびそれらの混合物はまた、それ自体食糧に添加され得るか、またはそれらは薬草調製物、香辛料、顆粒などのような食糧に適切な組成物として調製され得、これはそれ自体で使用され得るか、または製品と組み合わせて、調理済み食品、かゆ、サラダドレッシング、飲料、ミルクベースの食品、食用油、冷凍食品、フリーズドライ食糧、専門食糧、ポテトチップ、ディップソースなどのような毎日の滋養物または健康促進食品としてもまたいわゆる健康に有益な機能性食品に添加され得る。植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体は、アグリコンの形態においてまたはグリコシドの形態においてのいずれかで本発明に従う組成物中に存在し得る。
【００４４】
本発明に従う植物由来のフェノール化合物および対応する合成化合物およびそれらの誘導体、および植物抽出物および画分およびそれらの混合物は、化合物として安全である。本発明に従う組成物および組成物は、急性クラミジア感染の処置の過程として、またはクラミジア感染を予防するために、毎日の滋養物と共に継続的におよび定期的に組成物または調製物を投与することによっての両方で使用され得る。慢性冠動脈心疾患はかなり容易になるが、他方、国家経済にとって非常に高価になるので、本発明に従う植物由来のフェノール化合物および対応する合成の化合物およびそれらの誘導体および植物抽出物および画分およびそれらの混合物を用いて、およびそれらを含む新規な組成物を用いて、特に危険な群内の心臓および血管疾患の上昇および発生をかなり防止および遅延することが可能である。本発明の組成物および調製物はまた、急性Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ感染の処置および予防のために、ならびに不妊症、子宮外妊娠、および子宮ガンのような遅発性合併症の予防のために、およびまた、他のクラミジア関連性感染および合併症の処置および予防のために使用され得る。
【００４５】
本発明は、以下の実施例においてより詳細に実証されるが、本発明は、実施例にいかようにも制限されない。実施例において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する本発明の化合物および植物抽出物の直接的な抗クラミジア効果、ならびに使用された宿主細胞（ＨＬ細胞、ヒト肺組織、標準的な二倍体細胞株）に対する化合物および抽出物の毒性が記載される。
【００４６】
【実施例】
実施例１　植物由来のフェノール化合物の直接的な抗クラミジア効果（封入体の形成の阻害として）／Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＫ７株（臨床単離物）
結果／濃度５０μＭ：
化合物濃度　　　　　ＤＭＳＯコントロール　　ＤＭＳＯコントロール
５０μＭ　　　　　　の阻害％　　　　　　　　の阻害％（前処理） ^＊
ケルセチン　　　　　　９０　　　　　　　　　　９０
モリン　　　　　　　　９９　　　　　　　　　　９６
ラムネチン　　　　　　９９　　　　　　　　　　５９
没食子酸オクチル　　１００　　　　　　　　　１００
ＤＭＳＯ　　　　　　　　０　　　　　　　　　　　０
^＊宿主細胞は感染の前に研究する化合物と１日間、インキュベートされた。宿主細胞を含有する２４ウェルのプレートに、１ｍｌの維持培地中の試験する化合物が、試験手順自体におけるのと同じ濃度において添加された。この意図は、宿主細胞自体に対する化合物の潜在的な効果を研究するためであり、その効果は感染を阻害する因子であり得た。試験手順は、測定法において記載される方法によって継続された。
【００４７】
結果／濃度０．５μＭ：
化合物濃度　　　　　ＤＭＳＯコントロール　ＤＭＳＯコントロール
０．５μＭ　　　　　の阻害％　　　　　　　の阻害％（前処理） ^＊
ケルセチン　　　　　　６８　　　　　　　　　７７
モリン　　　　　　　　８０　　　　　　　　　６２
ラムネチン　　　　　　７３　　　　　　　　　５０
没食子酸オクチル　　　８２　　　　　　　　　６２
ＤＭＳＯ　　　　　　　　０　　　　　　　　　　０
^＊宿主細胞は感染の前に研究する化合物と１日間、インキュベートされた。宿主細胞を含有する２４ウェルのプレートに、１ｍｌの維持培地中の試験する化合物が、試験手順自体におけるのと同じ濃度において添加された。この意図は、宿主細胞自体に対する化合物の潜在的な効果を研究するためであり、その効果は感染を阻害する因子であり得た。試験手順は、測定法において記載される方法によって継続された。
【００４８】
実施例２
感染能の阻害／Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
結果／濃度５０μＭ：
化合物濃度　　　　　ＤＭＳＯコントロール　ＤＭＳＯコントロール
５０μＭ　　　　　　の阻害％　　　　　　　の阻害％（前処理） ^＊
ケルセチン　　　　　　７６　　　　　　　　　　０
モリン　　　　　　　　９４　　　　　　　　　７６
ラムネチン　　　　　１００　　　　　　　　　６７
没食子酸オクチル　　１００　　　　　　　　１００
ＤＭＳＯ　　　　　　　　０　　　　　　　　　　０
^＊宿主細胞は感染の前に研究する化合物と１日間、インキュベートされた。宿主細胞を含有する２４ウェルのプレートに、１ｍｌの維持培地中の試験する化合物が、試験手順自体におけるのと同じ濃度において添加された。この意図は、宿主細胞自体に対する化合物の潜在的な効果を研究するためであり、その効果は感染を阻害する因子であり得た。試験手順は、測定法において記載される方法によって継続された。
【００４９】
結果／濃度０．５μＭ：
化合物濃度　　　　　ＤＭＳＯコントロール　ＤＭＳＯコントロール
０．５μＭ　　　　　の阻害％　　　　　　　の阻害％（前処理） ^＊
ケルセチン　　　　　　５８　　　　　　　　　　０
モリン　　　　　　　　８１　　　　　　　　　５３
ラムネチン　　　　　１００　　　　　　　　　７５
没食子酸オクチル　　　５９　　　　　　　　　４２
ＤＭＳＯ　　　　　　　　０　　　　　　　　　　０
^＊宿主細胞は感染の前に研究する化合物と１日間、インキュベートされた。宿主細胞を含有する２４ウェルのプレートに、１ｍｌの維持培地中の試験する化合物が、試験手順自体におけるのと同じ濃度において添加された。この意図は、宿主細胞自体に対する化合物の潜在的な効果を研究するためであり、その効果は感染を阻害する因子であり得た。試験手順は、測定法において記載される方法によって継続された。
【００５０】
実施例３
Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する直接的な抗クラミジア効果
Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＭｃＣｏｙ細胞中の培養物。試験手順は他の点ではＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅと同じである。
【００５１】
結果／濃度５０μＭ：
化合物濃度　　　　　ＤＭＳＯコントロール　ＤＭＳＯコントロール
５０μＭ　　　　　　の阻害％　　　　　　　の阻害％（前処理） ^＊
ケルセチン　　　　　　　０　　　　　　　　１００
モリン　　　　　　　　　０　　　　　　　　１００
ラムネチン　　　　　　　０　　　　　　　　１００
没食子酸オクチル　　　１４　　　　　　　　　８８
^＊宿主細胞は感染の前に研究する化合物と１日間、インキュベートされた。宿主細胞を含有する２４ウェルのプレートに、１ｍｌの維持培地中の試験する化合物が、試験手順自体におけるのと同じ濃度において添加された。この意図は、宿主細胞自体に対する化合物の潜在的な効果を研究するためであり、その効果は感染を阻害する因子であり得た。試験手順は、測定法において記載される方法によって継続された。
【００５２】
結果／濃度０．５μＭ：
化合物濃度　　　　　ＤＭＳＯコントロール　ＤＭＳＯコントロール
０．５μＭ　　　　　の阻害％　　　　　　　の阻害％（前処理） ^＊
ケルセチン　　　　　　　０　　　　　　　　　２０
モリン　　　　　　　　　０　　　　　　　　１００
ラムネチン　　　　　　　０　　　　　　　　　１７
没食子酸オクチル　　　　０　　　　　　　　　　０
^＊宿主細胞は感染の前に研究する化合物と１日間、インキュベートされた。宿主細胞を含有する２４ウェルのプレートに、１ｍｌの維持培地中の試験する化合物が、試験手順自体におけるのと同じ濃度において添加された。この意図は、宿主細胞自体に対する化合物の潜在的な効果を研究するためであり、その効果は感染を阻害する因子であり得た。試験手順は、測定法において記載される方法によって継続された。
【００５３】
実施例４
宿主細胞に対する研究されたサンプルのいくつかの毒性の決定
【００５４】
測定は、以前の試験におけるように行われたが、感染は全く伴わなかった。生存能は、トリパンブルー染色で測定された。
サンプル：
Ｑ＝ケルセチン
Ｍ＝モリン
Ｒ＝ラムネチン
ＯＧ＝没食子酸オクチル
ＨＬ−Ｃ＝単独の栄養培地中のＨＬ細胞
ＨＬ−ＣＤ＝ＤＭＳＯ添加を伴うＨＬ細胞
【００５５】
【表３】

【００５６】
【表４】

【００５７】
実施例５
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する植物由来のフェノール化合物、ある合成化合物および混合物の直接的な抗クラミジア効果
【００５８】
使用された濃度は５０μＭであった。
【００５９】
化合物　　　　　　　　　　　　　　　阻害％
１．天然のフラボノイド
アピゲニン　　　　　　　　　　　　１００
ルテオリン　　　　　　　　　　　　１００
フラボン　　　　　　　　　　　　　　９０
ビテキシン　　　　　　　　　　　　　　３
ビテキシン−２’’−Ｏ−ラムノシド　　１１
ルテオリン−７−グルコシド　　　　　　２３
ルテオリン−３’−７−グルコシド　　　４５
ケルセチン　　　　　　　　　　　　　９０
ラムネチン　　　　　　　　　　　　１００
イソラムネチン　　　　　　　　　　　７０
モリン　　　　　　　　　　　　　　１００
ケルシトリン　　　　　　　　　　　　５０
ルチン　　　　　　　　　　　　　　　４６
ナリンゲニン　　　　　　　　　　　　１６
ナリンギン　　　　　　　　　　　　　６６
ダイゼイン　　　　　　　　　　　　　５１
ゲニステイン　　　　　　　　　　　　６０
ダイジン　　　　　　　　　　　　　　　０
ゲニスチン　　　　　　　　　　　　　３７
プロシアニジンＢ１　　　　　　　　　３０
プロシアニジンＢ２　　　　　　　　　　０
【００６０】
２．天然のフェノール化合物
安息香酸　　　　　　　　　　　　　　４４
没食子酸　　　　　　　　　　　　　　２７
シリンガ酸　　　　　　　　　　　　　３２
カフェー酸　　　　　　　　　　　　　７８
フェルラ酸　　　　　　　　　　　　　１４
没食子酸メチル　　　　　　　　　　１００
没食子酸プロピル　　　　　　　　　１００
没食子酸オクチル　　　　　　　　　１００
没食子酸ドデシル　　　　　　　　　１００
【００６１】
３．天然のトリテルペン
レスベラトロール　　　　　　　　　　５４
【００６２】
４．天然のクマリンおよびカテキン
スコポレチン　　　　　　　　　　　　９６
メトキシプソラレン　　　　　　　　１００
ウンベリフェロン　　　　　　　　　　７５
キサントトキシン　　　　　　　　　　９４
クマリン　　　　　　　　　　　　　　２８
（−）−エピカテキン没食子酸　　　　　　８５
（−）−エピガロカテキン　　　　　　　　５８
（−）−エピカテキン　　　　　　　　　　７５
（＋）−カテキン　　　　　　　　　　　　７６
【００６３】
５．合成フラボノイドおよびクマリン
３−（αアセトニルベンジル）−４−ヒドロキシクマリン
０
クマリン１０２　　　　　　　　　　　６３
クマリン１０６　　　　　　　　　　１００
２’−メトキシ−α−ナフトフラボン　１００
６，２’−ジメトキシフラボン　　　　　７３
６−メチルクマリン　　　　　　　　　７１
α−ナフトフラボン　　　　　　　　　９２
ロテノン　　　　　　　　　　　　　１００
７−ジエチルアミノ−３−テノイルクマリン
１００
３−（２−ベンゾキサゾイル）ウンベリフェロン
２８
クマリン３０　　　　　　　　　　　　５０
３−ベンゾイルベンゾ（Ｆ）クマリン　　６２
６，８−ジブロモクマリン−３−カルボン酸
０
４−メチル−３−フェニルクマリン　　　　０
【００６４】
６．混合物
没食子酸オクチル　　　　　　　　　１００
没食子酸オクチル　１／１０　　　　　５３
没食子酸オクチル　１／１００　　　　１７
ニンニク　　　　　　　　　　　　　　２６
ニンニク　１／１０　　　　　　　　　２５
ニンニク　１／１００　　　　　　　　１９
没食子酸オクチル５０％＋ニンニク５０％
１００
没食子酸オクチル＋ニンニク５０％　１／１０
４７
没食子酸オクチル５０％＋ニンニク５０％　１／１００
３４
没食子酸オクチル５０％＋ニンニク５０％　１／１０００
６
【００６５】
実施例６
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する植物抽出物の効果
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する６１個の天然のおよび食用植物材料から調製された１０１個の抽出物の最初のスクリーニングが行われた。使用された濃度は４０μｇ／ウェルであった。
【００６６】
以下において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する、選択された最も活性な天然の植物抽出物の結果が示され、４つの異なる評価から算定された。
【００６７】
【表５】

【００６８】
以下において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの１００％阻害を示した選択された最も活性な食用植物の結果が示され、４つの異なる評価から算定された。
【００６９】
【表６】

【００７０】
有意な活性の差異は、有機的に栽培された植物と通常に栽培された植物との間で何ら見られなかった。
【００７１】
本研究において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ封入体の１００％阻害（ｎ＝４）を示した植物の抽出物は、活性であると考えられた。Ｌａｂｉａｔｅａｅに属する５つの植物が特に活性であることが見出された。抽出の方法にかかわらず、Ｓａｌｖｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓの水蒸留されたおよび軟化された抽出物、または水蒸留されたのみの抽出物の両方が、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対し得活性であった。
【００７２】
以下において、微生物学的方法の記載が提供される。
【００７３】
１．ＨＬ細胞の培養および継代
ＨＬ細胞の継代培養物は、３日間の間隔を伴って作製される。宿主細胞は、感染の前日に接種される。細胞はＰＢＳ　１×１０ｍｌでリンスされ、そしてトリプシン処理によって採集される（１：１０、１．５〜２．０ｍｌ／ボトル；層流キャビネット中で約５分間または＋３７℃にてＣＯ_２中で２分間）。細胞懸濁物は栄養培地（ＲＮ）の約３５００００細胞／ｍｌのレベルに希釈される。ＲＮ培地中での、＋３７℃、ＣＯ_２（５．０％）での培養は、１週間に１〜２回交換される。ＨＬ細胞は液体窒素中で凍結され得る（１ｍｌ　７．５％　ＦＣＳ（ＲＮ）＋１ｍｌ　ＤＭＳＯ）。
【００７４】
２．クラミジアの精製
ＥＢ（基本小体）＝クラミジアの感染性の細胞外形態。前日に、クラミジアで感染された必要な量のＨＬ細胞懸濁物が溶解に供される。細胞は十分に懸濁され、そして全部で２分間、超音波台に置かれる［２０秒間の超音波処理（振幅は２４〜２５）および１０秒間の冷却×６］。細胞は破壊され、そしてクラミジアは未障害のままである。
【００７５】
懸濁物は１０分間、１６００ｒｐｍ（５５０×ｇ）にて遠心分離され、ここではクラミジア感染は上清中にある（ＨＬ細胞残遺物は廃棄される）。上清は吸引して除去され、そして５ｍＬのＰＢＳが添加され、懸濁され、そして１分間超音波処理される（１０秒間の超音波処理−５秒間の冷却×６）。
【００７６】
クラミジアは−７０℃にて凍結保存され得る。
【００７７】
３．クラミジア試験手順
培養されたＨＬ細胞は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ＥＢで感染される。細胞を侵襲したＥＢは代謝的に活性な網様体（ＲＢ）に変化され、これはエンドソーム液胞または封入体中に二成分分裂によって分割する。ある時間（約７２時間）の後、Ｃ．ｐｎｅｕｎｏｎｉａｅ　ＲＢは濃縮してＥＢに戻り、その後封入体は破壊され、宿主細胞は破壊され、そしてＥＢは遊離される。この方法における意図は、宿主細胞の破壊の前に封入体を検証することである。
【００７８】
インビトロ条件においてＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの宿主細胞として、ＨＬ細胞が使用される。インビトロ条件においてＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの宿主細胞として、ＭｃＣｏｙ細胞がしばしば使用される。
【００７９】
ＨＬ細胞およびＭｃＣｏｙ細胞の感染
感染の前日に、宿主細胞は２４ウェルプレート上で接種される：細胞はトリプシン処理によって採集され、これらは約５ｍｌの栄養液体中に懸濁され、そしてＢｕｒｋｅｒチャンバー中で計数される。培養のために２５００００〜４０００００細胞／ウェルの濃度を使用して各ウェルが播種される。ウェルへの細胞の添加の前に、必要であれば、染色のために円形カバーガラス（直径１３ｍｍ）が置かれる。栄養液体が、容量が１ｍｌ／ウェルであるように添加される。翌日、細胞は所望される細菌で感染される。
【００８０】
感染において使用され、およびクラミジア粒子を含有する溶液は、徹底的に混合される。古い栄養液体は吸引して除去される。感染によって、−７０℃にて保存されていた接種物が、溶液の容量が２４ウェルプレート上で少なくとも２００μｌ／ウェルであるように約１０^３のＩＦＵ濃度に希釈される。細胞は、１６００ｒｐｍ（５５０×ｇ）／１時間での遠心分離によって感染される。栄養培地は吸引して除去され、そしてシクロヘキサミドを含有し、およびまた研究される化合物（ＤＭＳＯ濃度０．２％）、１ｍｌ／ウェルを含有する、維持培地に交換される。細胞は、５％　ＣＯ_２大気中で＋３５℃にてインキュベートされる。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅで感染された細胞は３日間インキュベートされる。２〜３日後、維持培地は除去され、そして細胞は１×１ｍｌのＰＢＳで洗浄される。ウェルに２００μｌのＳＰＧがさらなる感染のために添加され、ピペットチップで採集され、そしてチューブ中に移される。これは、感染能の阻害（クラミジア殺傷効果）を試験するために上述と同じ方法において新規な細胞を感染するために使用される。
【００８１】
クラミジア染色
栄養培地は、染色のために残されたカバーガラス上にあり、吸引して除去される。感染された細胞はメタノールで１０分間、カバーガラス上に固定される。カバーガラスはウェルから除去され、そして湿潤チャンバー中のパラフィン上の適切なフルオレセイン結合モノクローナル抗体上に移され、細胞を含有する側を下に置く。カバーガラスは３０分間、＋３７℃にてインキュベートされ、そしてＰＢＳで２回、および水で１回洗浄される。最後にこれは乾燥される。カバーガラスは細胞を含有する側を下にして、固定液（例えば、マウント媒体）を含有する対物レンズ上に置かれる。蛍光顕微鏡下で観察される場合、クラミジアで感染された細胞培養物標本は、赤色に対比染色されたバックグラウンドに対して、封入体の特徴的な淡黄緑色の蛍光を示す。
【００８２】
化学薬品および試薬
ＲＮ＝ＦＣＳ栄養培地：３．５％　Ｌ−グルタミンおよび１０ｍｇ　ストレプトマイシン（最終濃度２０μｇ／ｍｌ）、７．５ｍｌ　ＦＣＳが添加された、１００ｍＬのＲＰＭＩ　１６４０（Ｓｉｇｍａ）。準備溶液は＋８℃にて保存される。
【００８３】
維持培地：５０μｇのシクロヘキサンの最終濃度、０．５μｇ／ｍｌの添加を伴う、１００ｍｌのＦＣＳ栄養培地。準備溶液は、＋８℃で保存される。
【００８４】
ＰＢＳ（ダルベッコ　リン酸緩衝化生理食塩水、Ｇｉｂｃｏ）、ｐＨ７．４
ＳＰＧ＝５００ｍｌのミリＱ水に混合されるように、ショ糖０．２Ｍ（３７．５ｇ）、ＫＨ_２ＰＯ_４　３．８ｍＭ（０．２６ｇ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４×２Ｈ_２Ｏ　６．７ｍＭ（０．６１ｇ）、グルタミン酸（Ｃ_５Ｈ_９ＮＯ_４）、５ｍＭ（０．３６）。滅菌後に−２０℃に保存される。
【００８５】
ＦＣＳ、胎児ウシ血清（Ｇｉｂｃｏ、Ｓｃｏｔｌａｎｄ）は、５６℃、３０分間、不活性化され、濾過され、そして−７０℃で保存される。

Claims

クラミジア感染の処置および／または予防のための薬学的組成物であって、組成物が、植物由来のフェノール化合物またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物またはそれらの合成誘導体、または該化合物の混合物を、必要に応じてニンニクに起源するイオウ化合物との混合物として含むことを特徴とする薬学的組成物。
請求項１に記載の組成物であって、植物由来のフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物もしくはそれらの合成誘導体の抗クラミジア効果が、実施例において規定されるように、封入体の形成の阻害として、３０％以上である、および好ましくは抗クラミジア効果が９０％以上であることを特徴とする組成物。
請求項１または２に記載の化合物であって、植物由来のフェノール化合物が、生合成経路を介してシキミ酸から形成されるフェノール化合物、生化学的な酢酸−マロン酸経路を介して形成されるフェノール化合物、または両方の経路の組み合わせの結果として形成されるフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物、画分、または部分画分、または単純なフェノール、フラボノイド、それらの誘導体、ポリフェノール、ジテルペンフェノール、およびジテルペンキノン、またはタンニンおよびジテルペン画分が画分から除去された後の画分であることを特徴とする組成物。
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物であって、植物由来のフェノール化合物がフラボン、フラボノール、ブラボノン、イソフラボノイド、フェニルメタン由来の化合物、またはフェニルプロパン由来の化合物であり、およびそれらの対応する合成化合物またはその誘導体が、合成フラボノイドまたは合成クマリンであることを特徴とする組成物。
請求項１〜４のいずれかに記載の組成物であって、抽出物または画分または部分画分が、天然の植物抽出物または食用植物抽出物であることを特徴とする組成物。
請求項１〜５のいずれかに記載の組成物であって、抽出物または画分または部分画分が、以下：Ｍｅｎｔｈａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｍｅｎｔｈａ　ａｒｖｅｎｓｉｓ、Ｇａｌｅｏｐｓｉｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ、Ｓａｌｖｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｔｈｙｍｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｒｕｍｅｘ　ａｃｅｔｏｃｅｌｌａ、Ｒｏｓａ　ｒｕｇｏｓａ、Ｖｅｒｏｎｉｃａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ　ａｓｐｅｒｕｍ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｍａｊａｌｉｓ、Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｒｏｂｕｒ、Ｄａｕｃｕｓ　ｃａｒｏｔａ、Ｆｒａｇａｒｉａ　ｉｉｎｕｍａｅ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｏｌｅｒａｃｅａ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｎａｐｕｓ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｓａｔｉｖａ、Ｃｉｔｒｕｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｌｏｅｍ　ｆｌｏｕｒ、またはＶａｃｃｉｎｕｍ　ｍｙｒｔｉｌｌｕｓの抽出物であることを特徴とする組成物。
請求項１〜６のいずれかに記載の組成物であって、組成物がアピゲニン、ルテオリン、フラボン、ケルセチン、ラムネチン、モリン、ゲニステイン、没食子酸メチル、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、没食子酸イソプロピル、ウンベリフェロン、スコポレチン、メトキシプソラレン、キサントトキシン、クマリン、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−カテキン、および（−）−エピカテキン没食子酸から選択される植物由来のフェノール化合物を、またはクマリン１０６、２’−メトキシ−α−ナフトフラボン、６，２’−ジメトキシフラボン、６−メチルクマリン、α−ナフトフラボン、ロタノン、および７−ジエチル−アミノ−３−テノイルクマリンから選択される対応する合成化合物またはそれらの誘導体を含むことを特徴とする組成物。
請求項１〜７のいずれかに記載の組成物であって、組成物が、感染の原因がＣ．ｐｎｅｕｍｏｍｉａｅである場合、ケルセチン、モリン、ラムネチン、没食子酸オクチルを含み、および感染の原因がＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓである場合、ケルセチン、モリン、ラムネチンを含むことを特徴とする組成物。
請求項１〜８のいずれかに記載の組成物であって、組成物が、アグリコンまたはグリコシド形態において、２５〜３０００ｎｇの、アグリコンとして算定される、植物由来のフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物またはそれらの合成誘導体を含むことを特徴とする組成物。
健康促進組成物であって、組成物が、植物由来のフェノール化合物またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物またはそれらの合成誘導体、または該化合物の混合物を、必要に応じてニンニクに起源するイオウ化合物との混合物として含むことを特徴とする健康促進組成物。
請求項１０に記載の健康促進組成物であって、植物由来のフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物またそれらの合成誘導体の抗クラミジア効果が、実施例において規定されるように、封入体の形成の阻害として、３０％以上である、および好ましくは抗クラミジア効果が９０％以上であることを特徴とする健康促進組成物。
請求項１０または１１に記載の健康促進組成物であって、植物由来のフェノール化合物が、生合成経路を介してシキミ酸から形成されるフェノール化合物、生化学的な酢酸−マロン酸経路を介して形成されるフェノール化合物、または両方の経路の組み合わせの結果として形成されるフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物、画分、または部分画分、または単純なフェノール、フラボノイド、それらの誘導体、ポリフェノール、ジテルペンフェノール、およびジテルペンキノン、またはタンニンおよびジテルペン画分が画分から除去された後の画分であることを特徴とする健康促進組成物。
請求項１０〜１２に記載の健康促進組成物であって、植物由来のフェノール化合物がフラボン、フラボノール、ブラボノン、イソフラボノイド、フェニルメタン由来の化合物、またはフェニルプロパン由来の化合物であり、および対応する合成化合物またはそれらの誘導体が、合成フラボノイドまたは合成クマリンであることを特徴とする健康促進組成物。
請求項１０〜１３のいずれかに記載の健康促進組成物であって、抽出物または画分または部分画分が、天然の植物抽出物または食用植物抽出物であることを特徴とする健康促進組成物。
請求項１０〜１４のいずれかに記載の健康促進組成物であって、抽出物または画分または部分画分が、以下：Ｍｅｎｔｈａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｍｅｎｔｈａ　ａｒｖｅｎｓｉｓ、Ｇａｌｅｏｐｓｉｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ、Ｓａｌｖｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｔｈｙｍｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｒｕｍｅｘ　ａｃｅｔｏｃｅｌｌａ、Ｒｏｓａ　ｒｕｇｏｓａ、Ｖｅｒｏｎｉｃａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ　ａｓｐｅｒｕｍ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｍａｊａｌｉｓ、Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｒｏｂｕｒ、Ｄａｕｃｕｓ　ｃａｒｏｔａ、Ｆｒａｇａｒｉａ　ｉｉｎｕｍａｅ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｏｌｅｒａｃｅａ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｎａｐｕｓ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｓａｔｉｖａ、Ｃｉｔｒｕｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｌｏｅｍ　ｆｌｏｕｒ、またはＶａｃｃｉｎｕｍ　ｍｙｒｔｉｌｌｕｓの抽出物であることを特徴とする健康促進組成物。
請求項１０〜１５のいずれかに記載の健康促進組成物であって、組成物がアピゲニン、ルテオリン、フラボン、ケルセチン、ラムネチン、モリン、ゲニステイン、没食子酸メチル、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、没食子酸イソプロピル、ウンベリフェロン、スコポレチン、メトキシプソラレン、キサントトキシン、クマリン、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−カテキン、および（−）−エピカテキン没食子酸から選択される植物由来のフェノール化合物を、またはクマリン１０６、２’−メトキシ−α−ナフトフラボン、６，２’−ジメトキシフラボン、６−メチルクマリン、α−ナフトフラボン、ロタノン、および７−ジエチル−アミノ−３−テノイルクマリンから選択される対応するそれらの合成化合物または誘導体を含むことを特徴とする組成物。
請求項１０〜１６のいずれかに記載の健康促進組成物であって、組成物が、感染の原因がＣ．ｐｎｅｕｍｏｍｉａｅである場合、ケルセチン、モリン、ラムネチン、没食子酸オクチルを含み、および感染の原因がＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓでである場合、ケルセチン、モリン、ラムネチンを含むことを特徴とする健康促進組成物。
食糧の調製における、またはそれ自体で毎日の滋養物に添加される請求項１０〜１７のいずれかに記載の健康促進組成物の使用。
クラミジア感染の処置および／または予防のための医薬の製造における、必要に応じてニンニクに起源するイオウ化合物との混合物としての、植物由来のフェノール化合物またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物またはそれらの合成誘導体、または該化合物の混合物の使用。
請求項１９に記載の使用であって、植物由来のフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物または画分またはは部分画分、または対応する合成化合物またはそれらの合成誘導体の抗クラミジア効果が、実施例において規定されるように、封入体の形成の阻害として、３０％以上である、および好ましくは抗クラミジア効果が９０％以上であることを特徴とする使用。
請求項１９または２０に記載の使用であって、植物由来のフェノール化合物が、生合成経路を介してシキミ酸から形成されるフェノール化合物、生化学的な酢酸−マロン酸経路を介して形成されるフェノール化合物、または両方の経路の組み合わせの結果として形成されるフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物、画分、または部分画分、または単純なフェノール、フラボノイド、それらの誘導体、ポリフェノール、ジテルペンフェノール、およびジテルペンキノン、またはタンニンおよびジテルペン画分が画分から除去された後の画分であることを特徴とする使用。
請求項１９〜２１のいずれかに記載の使用であって、植物由来のフェノール化合物がフラボン、フラボノール、ブラボノン、イソフラボノイド、フェニルメタン由来の化合物、またはフェニルプロパン由来の化合物であり、およびそれらの対応する合成化合物またはその誘導体が、合成フラボノイドまたは合成クマリンであることを特徴とする使用。
請求項１９〜２２のいずれかに記載の使用であって、抽出物または画分または部分画分が、天然の植物抽出物または食用植物抽出物であることを特徴とする使用。
請求項１９〜２３のいずれかに記載の使用であって、抽出物または画分または部分画分が、以下：Ｍｅｎｔｈａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｍｅｎｔｈａ　ａｒｖｅｎｓｉｓ、Ｇａｌｅｏｐｓｉｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ、Ｓａｌｖｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｔｈｙｍｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｒｕｍｅｘ　ａｃｅｔｏｃｅｌｌａ、Ｒｏｓａ　ｒｕｇｏｓａ、Ｖｅｒｏｎｉｃａ　ｌｏｎｇｉｆｏｌｉａ、Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ　ａｓｐｅｒｕｍ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｍａｊａｌｉｓ、Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｒｏｂｕｒ、Ｄａｕｃｕｓ　ｃａｒｏｔａ、Ｆｒａｇａｒｉａ　ｉｉｎｕｍａｅ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｏｌｅｒａｃｅａ、Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｎａｐｕｓ、Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｓａｔｉｖａ、Ｃｉｔｒｕｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐｈｌｏｅｍ　ｆｌｏｕｒ、またはＶａｃｃｉｎｕｍ　ｍｙｒｔｉｌｌｕｓの抽出物であることを特徴とする使用。
請求項１９〜２４のいずれかに記載の使用であって、組成物がアピゲニン、ルテオリン、フラボン、ケルセチン、ラムネチン、モリン、ゲニステイン、没食子酸メチル、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、没食子酸ドデシル、没食子酸イソプロピル、ウンベリフェロン、スコポレチン、メトキシプソラレン、キサントトキシン、クマリン、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−カテキン、および（−）−エピカテキン没食子酸から選択される植物由来のフェノール化合物を、またはクマリン１０６、２’−メトキシ−α−ナフトフラボン、６，２’−ジメトキシフラボン、６−メチルクマリン、α−ナフトフラボン、ロタノン、および７−ジエチル−アミノ−３−テノイルクマリンから選択される対応する合成化合物またはそれらの誘導体を含むことを特徴とする使用。
請求項１９〜２５のいずれかに記載の使用であって、組成物が、感染の原因がＣ．ｐｎｅｕｍｏｍｉａｅである場合、ケルセチン、モリン、ラムネチン、没食子酸オクチルを含み、および感染の原因がＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓである場合、ケルセチン、モリン、ラムネチンを含むことを特徴とする使用。
請求項１９〜２６のいずれかに記載の使用であって、２５μｇ〜３０００ｍｇの、アグリコンとして算定される、植物由来のフェノール化合物、またはそれを含有する抽出物または画分または部分画分、または対応する合成化合物またはそれらの合成誘導体が、アグリコンまたはグリコシド形態において使用されることを特徴とする使用。