JP2004189669A

JP2004189669A - 抗アレルギー剤

Info

Publication number: JP2004189669A
Application number: JP2002359342A
Authority: JP
Inventors: Masayuki Yoshikawa; 雅之吉川; Hisashi Matsuda; 久司松田; Toshio Morikawa; 敏生森川
Original assignee: Sakamoto Yakuhin Kogyo Co Ltd
Current assignee: Sakamoto Yakuhin Kogyo Co Ltd
Priority date: 2002-12-11
Filing date: 2002-12-11
Publication date: 2004-07-08

Abstract

【課題】アルピニアガランガの根茎およびアルピニアガランガの根茎より抽出された成分から抗アレルギー剤および優れた健康食品を得る。
【解決手段】アルピニアガランガの根茎、または当該アルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有する抗アレルギー剤である。アルピニアガランガの根茎、または当該アルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有する健康食品である。アルピニアガランガの根茎に含まれる特定のフェニルプロパノイド化合物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤および健康食品である。
【選択図】なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アルピニアガランガ（Ａｌｐｉｎｉａｇａｌａｎｇａ）の根茎を用いて得られる抗アレルギー剤、健康食品、およびそれらの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アルピニアガランガは、別名をナンキョーといい、タイではカーと呼ばれているショウガ科の植物である。アルピニアガランガは、広く東南アジアから中国まで分布しており、その根茎は、健胃や駆風、皮膚疾患の治療などに用いられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者は、種々のショウガ科植物や天然薬物について、その生理作用、特に抗アレルギー作用の検討を鋭意行った。その結果、アルピニアガランガの根茎およびアルピニアガランガの根茎より抽出された成分が、抗アレルギー作用を有することを見出した。さらに本発明者は、アルピニアガランガの根茎から抽出された成分につき、その活性成分の分離、分析を行った結果、当該抽出された成分に含まれる特定の化合物が抗アレルギー作用を有することを見出した。
また、上述のようにアルピニアガランガは、健胃や駆風、皮膚疾患の治療などにすでに用いられており、その安全性はすでに知られている。本発明者は、アルピニアガランガの安全性と、その抗アレルギー作用などの活性に着目し鋭意検討した結果、アルピニアガランガの根茎およびアルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することにより優れた健康食品が得られることを見出した。
本発明は、これらの知見に基づき完成されたものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明は、アルピニアガランガの根茎、または当該アルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することを特徴とする抗アレルギー剤を提供する。
本発明はまた、アルピニアガランガの根茎、または当該アルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することを特徴とする健康食品を提供する。
本発明はさらに、下記構造式（１）で表わされるフェニルプロパノイド化合物
【化２】

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４及びＲ^５は、アルキル基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基を表わし、Ｒ^６は、アルキルカルボニル基を表わす。）を含有することを特徴とする抗アレルギー剤および健康食品を提供するものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明の抗アレルギー剤および健康食品は、アルピニアガランガの根茎を含有することを特徴とする。あるいは、本発明の抗アレルギー剤および健康食品は、アルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することを特徴とする。
本発明に用いられるアルピニアガランガは、特に限定されない。通常、東南アジアや中国などで天然に得られるものが使用され、例えばタイにおいてカー（Ｋａａ）と呼ばれる天然品を使用することができる。
【０００６】
本発明の抗アレルギー剤または健康食品が、アルピニアガランガの根茎を含有する場合は、アルピニアガランガの根茎をそのまま、または粉砕、破砕、切断、すりつぶしなどによる形状の変化のみを行ったものを、抗アレルギー剤または健康食品の成分として用いる。
【０００７】
本発明の抗アレルギー剤および健康食品が、アルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有する場合は、アルピニアガランガの根茎をそのまま、またはアルピニアガランガの根茎に粉末化、破砕、切断、すりつぶしなどの形状変化を加えたものを、抽出のための溶媒と一定時間接触する（抽出工程）ことにより、該溶媒中に溶出されたアルピニアガランガ中の成分を、抗アレルギー剤または健康食品の成分として用いる。
アルピニアガランガの根茎をそのまま用いて抽出を行うことも可能であるが、通常は、抽出の効率を上げるため、アルピニアガランガの根茎に粉末化、破砕、切断、すりつぶしなどの形状変化を加えた後、抽出のための溶媒との接触を行う。
【０００８】
抽出のための溶媒との接触は、好ましくは、該溶媒にアルピニアガランガの根茎またはそれに形状変化を加えたものを浸漬することにより行われる。
抽出のための溶媒としては、有機溶媒または有機溶媒と水との混合溶媒が用いられる。
有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどの低級アルコール、アセトンなどのケトン類、ヘキサンなどの炭化水素類、酢酸エチル等のエステル類、これらの混合溶媒（混合比率は任意）が例示される。
これらの有機溶媒と水との混合溶媒を用いることも可能であるが、水の混合割合（含水率）は５０重量％以下が好ましく、より好ましくは３０重量％以下である。
【０００９】
抽出のための溶媒は、好ましくは、アルピニアガランガの約５〜１０重量倍用いられる。
抽出の温度は特に限定されず、室温冷浸下、加熱還流下いずれでもよく、また両者の間の温度で抽出を行うこともできる。
抽出時間は、室温冷浸下で浸漬により抽出する場合は、一昼夜から一週間程度を２〜３回繰り返すのが好ましい。加熱還流下の場合は、２〜３時間程度が好ましい。
【００１０】
上記の抽出工程により得られた液（抽出液）には、アルピニアガランガ中の成分が溶出されている。本発明の抗アレルギー剤または健康食品には、このようにして得られた抽出液をそのまま加えてもよいし、得られた抽出液を濃縮したもの、または溶媒を蒸発などにより除去して溶出された成分のみをとりだしたものを加えてもよい。
【００１１】
本発明者は、アルピニアガランガから上記のようにして抽出される成分に含まれる化合物ついて鋭意検討した結果、該成分に含まれるある特定化合物が抗アレルギー作用を有することを見出し、該化合物およびそれと類似構造の化合物、すなわち構造式（１）のフェニルプロパノイド化合物、を用いることにより優れた抗アレルギー剤および健康食品が得られるとの知見を得た。本発明の抗アレルギー剤および健康食品は、この化合物を含有するものも含む。
【００１２】
構造式（１）中のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４及びＲ^５で表されるアルキル基、アルコキシ基としては、炭素数１から６程度の低級のものが好ましい。また、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５及びＲ^６で表わされるアルキルカルボニル基としては、炭素数２から６程度の低級のものが好ましい。
構造式（１）のフェニルプロパノイド化合物の中でも、式中のＲ^１、Ｒ^４およびＲ^５が水素、Ｒ^２が水素またはメトキシ基、Ｒ^３およびＲ^６がアセチル基である場合がより好ましい。特に、１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテート（１’Ｓ−１’−ａｃｅｔｏｘｙｃｈａｖｉｃｏｌａｃｅｔａｔｅ）、１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテート（１’Ｓ−１’−ａｃｅｔｏｘｙｅｕｇｅｎｏｌａｃｅｔａｔｅ）がすぐれた抗アレルギー作用を示し好ましい。１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテート（１’Ｓ−１’−ａｃｅｔｏｘｙｃｈａｖｉｃｏｌａｃｅｔａｔｅ）、１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテート（１’Ｓ−１’−ａｃｅｔｏｘｙｅｕｇｅｎｏｌａｃｅｔａｔｅ）は、上記のようにして得られたアルピニアガランガの根茎から抽出された成分から、分離することにより得られる。分離には、クロマトグラフィーなどが用いられる
【００１３】
ここで用いられるクロマトグラフィーとしては、順層シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆層シリカゲルカラムクロマトグラフィー、順層オクタデシルシリルカラムクロマトグラフィー、逆層オクタデシルシリルカラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどが例示される。
【００１４】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００１５】
（１）アルピニアガランガの８０％含水アセトンエキスの製法。
アルピニアガランガとしては、タイ産の天然品を用いた。このアルピニアガランガの根茎２．１ｋｇを粉砕したものを、約１０重量倍（２０Ｌ）の８０％含水アセトン（ナカライテスク社製の特級アセトンと蒸留水との８０：２０重量比の混合液）に加え、室温冷浸下一昼夜（２４時間）抽出した。抽出後、ろ紙（アドバンテック社製Ｎｏ．２ろ紙）にてろ過後、抽出残渣にさらに８０％含水アセトン（２０Ｌ）を加え、室温冷浸下一昼夜（２４時間）抽出し、同様にろ過を行った。このような抽出を合計３回行い、その抽出液を合わせた後、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下溶媒を留去し、アルピニアガランガの８０％含水アセトン抽出エキス１３８ｇ（使用したアルピニアガランガに対して６．６重量％）を得た。
【００１６】
（２）アルピニアガランガの８０％含水アセトンエキスのクロマト分離
上記（１）で得た抽出エキス１３８ｇを、順層シリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア社製、ＢＷ−２００、１５０−３５０ｍｅｓｈ、３．０ｋｇ、移動層：ナカライテスク社製特級ｎ−ヘキサン／ナカライテスク社製特級酢酸エチル（１０／１→５／１）→メタノール）にて順次溶出し、フラクション１（０．７ｇ）、フラクション２（２．２ｇ）、フラクション３（０．５ｇ）、フラクション４（２．７ｇ）、フラクション５（２３．０ｇ）、フラクション６（１．６ｇ）、フラクション７（２．５ｇ）、フラクション８（３．６ｇ）、フラクション９（１．９ｇ）、フラクション１０（５．８ｇ）、フラクション１１（５．０ｇ）、フラクション１２（６．３ｇ）およびフラクション１３（８２．２ｇ）を得た。
【００１７】
この内、フラクション５（２３．０ｇ）は、１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテートであり、使用したアルピニアガランガに対して１．１０重量％である。
また、フラクション６の中の３２５ｍｇについて、高速液体クロマトグラフィー（検出器：島津示唆屈折型検出器ＲＩＤ−６Ａ、ポンプ：島津ＬＣ−１０Ａ、カラム：ＹＭＣ社製ＹＭＣＰａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２０ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ、移動相：アセトニトリル（関東化学社製ＨＰＬＣ大量分取用特級試薬）／水（４０／６０））を用いて分離精製し、１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテート（０．１４ｇ）およびトランス−ｐ−クマリルジアセテート（ｔｒａｎｓ−ｐ−ｃｏｕｍａｒｙｌｄｉａｃｅｔａｔｅ）を得た。
他にも、クロマトグラフィー分離により、フラクション３からメチルオイゲノール（ｍｅｔｈｙｌｅｕｇｅｎｏｌ）が、フラクション７から１‘Ｓ−１’−ヒドロキシキャビコールアセテート（１’Ｓ−１’−ｈｙｄｒｏｘｙｃｈａｖｉｃｏｌａｃｅｔａｔｅ）、トランス−４−ヒドロキシシンナミルアセテート（ｔｒａｎｓ−４−ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍｙｌａｃｅｔａｔｅ）およびｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドが、フラクション８からトランス−４−ヒドロキシシンナムアルデヒド（ｔｒａｎｓ−４−ｈｙｄｒｏｘｙｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ）が、およびフラクション９からトランス−ｐ−クマリルアルコール（ｔｒａｎｓ−ｐ−ｃｏｕｍａｒｙｌａｌｃｏｈｏｌ）が得られた。
【００１８】
このうち、１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテートおよび１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテートについて、^１Ｈおよび^１３Ｃ−ＮＭＲ、質量分析（ＭＳ）および赤外スペクトル（ＩＲ）の測定を行ったところ、ＮｏｒｏＴ．，ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３６，２４４−２４８（１９８８）に記載されたデータと、ほぼ一致し、それぞれの化合物であることが確認された。
以下に、それぞれについての^１Ｈ−ＮＭＲの測定値（化学シフト：ｐｐｍ）を示す。
［１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテート］
２．１１、２．２９（３Ｈ，ｓ）、３．８２（３Ｈ，ｓ）、５．２５（ｄ，Ｊ＝１１．２１）、５．３１（ｄ，Ｊ＝１７．５１）、６．００（１Ｈ，ｍ）、６．２４（ｄ，Ｊ＝５．３）、６．９５（２Ｈ，ｂｒｓ）、７．０１（ｄ，Ｊ＝８．８）
［１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテート］
１．９９、２．１５（ｓ）、５．１６（ｄ，Ｊ＝１０．３）、５．２４（ｄ，Ｊ＝１７．６）、５．９３（１Ｈ，ｍ）、６．２４（ｄ，Ｊ＝５．６）、７．０４、７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６）
また、それぞれについての^１３Ｃ−ＮＭＲの測定値（化学シフト：ｐｐｍ）を以下に示す。
［１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテート］
２０．６、２１．２、５５．８、７５．６、１１１．３、１１６．８、１１９．４、１２２．６、１３５．７、１３７．４、１３９．３、１５０．８、１６８．６、１６９．５
［１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテート］
２０．２、２０．３、７４．７、１１６．１、１２１．６、１２７．５、１３５．５、１３５．７、１４９．８、１６８．１、１６８．６
【００１９】
（３）抗アレルギー性の検討
得られた９の化合物について、下記ようにして抗アレルギー性を検討した。
肥満細胞のモデル細胞であるラット好塩基性白血病（ＲＢＬ−２Ｈ３）細胞を用い、脱顆粒の際にヒスタミンなどと共に放出されるβ−ｈｅｘｏｓａｍｉｍｉｄａｓｅ遊離量を測定することで脱顆粒の指標とし、抗アレルギー作用を検討した。
ヒューマンサイエンス研究資源バンクより購入したラット好塩基性白血病（ＲＢＬ−２Ｈ３）細胞を培養後（５％ＣＯ_２、３７℃）、２４ウェルマイクロプレートに２．０×１０^５ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌずつ播種し、１時間培養した後、ラットモノクロナール抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（０．４５μｇ／ｍｌ）を加え２４時間培養することにより細胞を感作させた。感作後ｓｉｒａｇａｎｉａｎｂｕｆｆｅｒを加え１０分間予備加温（５％ＣＯ_２、３７℃）し、上記９の化合物それぞれのＤＭＳＯ溶液（終濃度０．１％）を加え、その１０分後に抗原（ＤＮＰ−ＢＳＡ、終濃度１０μｇ／ｍｌ）を添加した。１０分後に氷冷して反応を停止させ、その上清に０．１Ｍｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒに溶解したｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅを加えて３７℃で１時間反応させた。反応液にｓｔｏｐｂｕｆｆｅｒを加えて混和し、吸光度（測定波長４０５ｎｍ、参照波長６５５ｎｍ）を測定し遊離率を求めた。
下表１に示すように、９の化合物の中で、１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテートおよび１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテートのみに遊離抑制活性が見出され、抗アレルギー性があることが示された。
【００２０】
【表１】

【００２１】
また、１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテートおよび１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテートについて、ＴＮＦ−αおおびＩＬ−４の培養液中の濃度を、抗原刺激の４時間後にＥＬＩＳＡ法で測定した。そのＩＣ_５０（μＭ）の測定値を下表２に示す。この結果は、これらの化合物は遅発相においても抗アレルギー性があることを示している。
【００２２】
【表２】

【００２３】
Ｉｎｖｉｖｏ試験として、雄性ラット（体重１８０ｇ）の背部の皮内にＰＢＳで希釈した抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体を０．１ｍｌ注射して感作を行った。４６時間後に被検薬物を経口投与し、その２時間後に１％Ｅｖａｎｓｂｌｕｅに溶解させたＤＮＰ−ＢＳＡ（０．７５ｍｇ／ｂｏｄｙ）を尾静脈より０．５ｍｌ投与しＰＣＡを惹起させた。３０分後に安楽死させ背部皮内に漏出した色素の面積を測定した。その結果、下記表３に示すように、１‘Ｓ−１’−アセトキシキャビコールアセテートおよび１‘Ｓ−１’−アセトキシオイゲノールアセテートは、５０または１００ｍｇ／Ｋｇの投与量でＰＣＡ反応を抑制することがわかった。
【００２４】
【表３】

【００２５】
【発明の効果】
本発明の、アルピニアガランガの根茎、またはアルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することを特徴とする抗アレルギー剤は、優れた抗アレルギー作用を示す。また、アルピニアガランガの根茎、またはアルピニアガランガの根茎より抽出された成分から優れた健康食品を得ることができる。

Claims

アルピニアガランガ（Ａｌｐｉｎｉａｇａｌａｎｇａ）の根茎、またはアルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
アルピニアガランガの根茎を、有機溶媒または有機溶媒と水との混合溶媒であって含水率が５０重量％以下の溶媒に浸漬し、該根茎中の成分を抽出する工程を有することを特徴とする抗アレルギー剤の製造方法。
アルピニアガランガの根茎、またはアルピニアガランガの根茎より抽出された成分を含有することを特徴とする健康食品。
アルピニアガランガの根茎を、有機溶媒または有機溶媒と水との混合溶媒であって含水率が５０重量％以下の溶媒に浸漬し、該根茎中の成分を抽出する工程を有することを特徴とする健康食品の製造方法。
下記構造式（１）で表わされるフェニルプロパノイド化合物

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４及びＲ^５は、アルキル基、アルコキシ基、アルキルカルボニル基を表わし、Ｒ^６は、アルキルカルボニル基を表わす。）を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
Ｒ^１、Ｒ^４およびＲ^５が水素、Ｒ^２が水素またはメトキシ基、Ｒ^３およびＲ^６がアセチル基であることを特徴とする請求項５の抗アレルギー剤。