JP2004143144A - ＰｒＲＰおよびその受容体の新規用途 - Google Patents

ＰｒＲＰおよびその受容体の新規用途 Download PDF

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井上　金治
Hirokazu Matsumoto
松本　寛和
Chieko Kitada
北田　千恵子
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Abstract

【課題】水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤等の提供。
【解決手段】配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
【選択図】なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、公知のレセプター蛋白質ＰｒＲＰ受容体（１９Ｐ２）およびそのリガンドの新規用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
下垂体機能調節作用、中枢神経機能調節作用、膵臓機能調節作用を有するヒト、ウシおよびラット由来のリガンドポリペプチド（ＰｒＲＰ）とそれに対するヒトおよびマウス由来のレセプター蛋白質（ＰｒＲＰ受容体）が報告されている（特許文献１）。
マウス由来のＰｒＲＰが知られている（特許文献２）。
ヒトおよびマウス由来ＰｒＲＰ受容体と高い相同性を有するラット由来オーファン受容体（ＵＨＲ−１）が報告されている（非特許文献１）。
ＰｒＲＰがプロラクチン分泌調節作用、胎盤機能調節作用を有することが報告されている（特許文献３）。
ＰｒＲＰがオキシトシン分泌調節作用を有することが報告されている（特許文献４）。
ＰｒＲＰに対するモノクローナル抗体（Ｐ２Ｌ−１Ｃａ、Ｐ２Ｌ−２Ｃａ、Ｐ２Ｌ−１Ｔａ）が知られている（特許文献５）。
ＰｒＲＰが副腎皮質刺激ホルモン放出分泌調節作用を有することが報告されている（特許文献６）。
【０００３】
【特許文献１】
ＷＯ９７／２４４３６号
【特許文献２】
ＷＯ９８／４９２９５号
【特許文献３】
ＷＯ９８／５８９６２号
【特許文献４】
ＷＯ００／３８７０４号
【特許文献５】
ＷＯ９９／６０１１２号
【特許文献６】
ＷＯ００／３８７０４号
【非特許文献１】
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，　Ｖｏｌ．２０９，　Ｎｏ．２，　ｐｐ．６０６−６１３，　１９９５
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＰｒＲＰおよびＰｒＲＰ受容体のさらなる機能を解明し、新たな医薬を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、ＰｒＲＰが予想外にも体内の水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用を有することを見出し、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖などの疾患に対して予防・治療効果を有することがわかった。本発明者らは、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、
（１）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（２）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（３）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（４）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（５）ペプチドが（ｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、（ｉｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、（ｉｉｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、（ｉｖ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、（ｖ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または（ｖｉ）上記（ｉｉ）〜（ｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドである上記（１）〜（４）記載の剤、
（６）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤、
（７）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（８）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（９）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤、
（１０）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（１１）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（１２）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（１３）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（１４）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（１５）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（１６）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（１７）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（１８）レセプター蛋白質が配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である上記（１６）または（１７）記載の剤、
（１９）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（２０）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（２１）ＤＮＡが配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡである上記（１９）または（２０）記載の剤、
（２２）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤、
（２３）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（２４）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（２５）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤、
（２６）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（２７）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（２８）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニストを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（２９）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニストを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（３０）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（３１）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（３２）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（３３）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤、
（３４）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤、
（３５）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤、
（３６）哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節方法、
（３７）哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療方法、
（３８）哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節方法、
（３９）哺乳動物に対して、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療方法、
（４０）水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２または配列番号：２３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用、
（４１）低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２または配列番号：２３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用、
（４２）水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用、
（４３）高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤を製造するための
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
（ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
（ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
（ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
（ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用、
（４４）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬のスクリーニング方法、および
（４５）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬のスクリーニング用キットを提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられるペプチドは、ＷＯ９７／２４４３６号およびＷＯ９８／４９２９５号に記載されている公知のペプチドであり、具体的には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチド（以下、ＰｒＲＰと略記する）である。
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列などがあげられる。
アミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；フィルタリング＝ＯＦＦ）にて計算することができる。
【０００８】
前記の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドとしては、前記した配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列からなるペプチドと実質的に同質の活性を有するペプチドである。
実質的に同質とは、レセプター結合活性、シグナル伝達活性などが性質的に（例、生理化学的に、または薬理学的に）同質であることを示す。従って、レセプター結合活性、シグナル伝達活性や、水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用などが同等（例、約０．１〜１００倍、好ましくは約０．５〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度、ペプチドの分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドとしては、具体的には、
（ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列に１〜８０個（好ましくは１〜５０個、さらに好ましく１〜１５個、より好ましくは１〜１０個、特に好ましくは１〜５個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列に１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）これら欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からペプチドなどが用いられ、より具体的には、
（ｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｉｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列に１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｉｖ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列に１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列中の１〜１５個（好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個）が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、
（ｖｉ）これら欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からペプチドなどが用いられる。
アミノ酸配列が欠失、付加、挿入または置換されている場合、その欠失、付加、挿入または置換の位は特に限定されない。
また、配列番号：１で表されるアミノ酸配列のＮ末端に、配列番号：２８で表されるアミノ酸配列が付加したアミノ酸配列を含有するペプチドなども好ましく用いられる。
【０００９】
本明細書におけるペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：６１で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＰｒＲＰをはじめとするＰｒＲＰは、Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであってもよいが、Ｃ末端がアミドである場合が好ましい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ１−６アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−８シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ１−２アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ１−２アルキル基などのＣ７−１４アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
ＰｒＲＰがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものも本発明でいうＰｒＲＰの範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＰｒＲＰには、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１−６アルカノイルなどのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ１−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。以下、これらのペプチドを含めてＰｒＲＰと略称することもある。
ＰｒＲＰの塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
ＰｒＲＰまたはその塩は、ＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号などに記載の方法に従って製造することができる。
【００１０】
ＰｒＲＰをコードするＤＮＡとしては、前述したＰｒＲＰをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよく、例えばＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号などに記載のＤＮＡが用いられる。
ＰｒＲＰをコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２９〜５３および配列番号：６８のいずれかの配列番号で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：２〜配列番号：２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰと実質的に同質の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡなどであれば何れのものでもよい。
配列番号：２９〜配列番号：５３および配列番号：６８のいずれかの配列番号で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２９〜配列番号：５３および配列番号：６８のいずれかの配列番号で表される塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；フィルタリング＝ＯＮ；マッチスコア＝１；ミスマッチスコア＝−３）にて計算することができる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）２ｎｄ（Ｊ．　Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ．　Ｐｒｅｓｓ，　１９８９）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、配列番号：２〜配列番号：２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２９〜配列番号：５３および配列番号：６８のいずれかの配列番号で表される塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
配列番号：２９において、第１２番目のＲはＧまたはＡを、第１７９番目および２４０番目のＹはＣまたはＴを示す。第１７９番目のＹがＣの時、配列番号：２で表されるアミノ酸配列をコードし、第１７９番目のＹがＴの時、配列番号：３で表されるアミノ酸配列をコードする。
アミノ酸配列とそれをコードする塩基配列との関係は、後述のとおりである。
【００１１】
ＰｒＲＰを完全にコードするＤＮＡのクローニングは、ＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号に記載の方法に従って行うことができる。
また、ＰｒＲＰをコードするＤＮＡからＰｒＲＰを製造する場合、ＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号に記載の方法を用いることができる。
ＰｒＲＰおよび後述するＰｒＲＰ受容体またはその部分ペプチド、およびこれらをコードするＤＮＡは、自体公知の方法で標識化されていてもよく、具体的にはアイソトープラベル化されたもの、蛍光標識されたもの（例えば、フルオレセインなどによる蛍光標識）、ビオチン化されたものまたは酵素標識されたものなどがあげられる。
【００１２】
上記したＰｒＲＰに対するレセプター蛋白質としては、ＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，　Ｖｏｌ．２０９，　Ｎｏ．２，　ｐｐ．６０６−６１３，　１９９５などに記載されている公知の蛋白質が用いられ、具体的には、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質（以下、ＰｒＲＰ受容体と略記する）が用いられる。
配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列と約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。
配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有する蛋白質としては、例えば、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰ受容体と実質的に同質の活性を有するレセプター蛋白質などがあげられる。
【００１３】
アミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；フィルタリング＝ＯＦＦ）にて計算することができる。実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などが挙げられる。実質的に同質とは、それらの活性が性質的に同質であることを示す。したがって、リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活性が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．５〜２０倍、より好ましくは約０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の程度や蛋白質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。
リガンド結合活性またはシグナル情報伝達作用などの活性の測定は、自体公知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、後述するリガンドの決定方法やスクリーニング方法に従って測定することができる。
また、ＰｒＲＰ受容体としては、▲１▼配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、▲２▼配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、▲３▼配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または▲４▼それら欠失・付加・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質なども用いられる。
【００１４】
本明細書におけるＰｒＲＰ受容体は、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：５４で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰ受容体をはじめとするＰｒＲＰ受容体は、Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）のいずれであってもよい。
ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ１−６アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ３−８シクロアルキル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ６−１２アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ１−２アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ１−２アルキル基などのＣ７−１４アラルキル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基などが用いられる。
【００１５】
ＰｒＲＰ受容体がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものもＰｒＲＰ受容体の範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＰｒＲＰ受容体には、上記したＰｒＲＰ受容体において、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチルなどのＣ２−６アルカノイル基などのＣ１−６アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖蛋白質などの複合蛋白質なども含まれる。
ＰｒＲＰ受容体の具体例としては、例えば、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰ受容体などが用いられる。
【００１６】
ＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドとしては、前記したＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドであれば何れのものであってもよいが、例えば、ＰｒＲＰ受容体蛋白質分子のうち、細胞膜の外に露出している部位であって、レセプター結合活性を有するものなどが用いられる。
具体的には、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドとしては、疎水性プロット解析において細胞外領域（親水性（Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ）部位）であると分析された部分を含むペプチドである。また、疎水性（Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ）部位を一部に含むペプチドも同様に用いることができる。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得るが、複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでも良い。
【００１７】
ＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドのアミノ酸の数は、前記したＰｒＲＰ受容体の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列からなるペプチドなどが好ましい。
また、ＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは数個（１または２個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
また、ＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドはＣ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−ＣＯＯ−）、アミド（−ＣＯＮＨ２）またはエステル（−ＣＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）のいずれであってもよい。
ＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されているものもＰｒＲＰ受容体の範囲に含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられる。
さらに、ＰｒＲＰ受容体の部分ペプチドには、前記したＰｒＲＰ受容体と同様に、Ｎ末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したＮ末端のグルタミル基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。
ＰｒＲＰ受容体またはその部分ペプチドの塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。
ＰｒＲＰ受容体またはその塩、およびＰｒＲＰ受容体を発現する細胞またはその細胞膜画分は、ＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号などに記載の方法に従って製造することができる。
【００１８】
ＰｒＲＰ受容体をコードするポリヌクレオチドとしては、ＰｒＲＰ受容体をコードする塩基配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ、好ましくはＤＮＡ）を含有するものであればいかなるものであってもよい。該ポリヌクレオチドとしては、ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ等のＲＮＡであり、二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖（即ち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（即ち、非コード鎖）であってもよい。
ＰｒＲＰ受容体をコードするポリヌクレオチドを用いて、例えば、公知の実験医学増刊「新ＰＣＲとその応用」１５（７）、１９９７記載の方法またはそれに準じた方法により、ＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡを定量することができる。
ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡとしては、前述したＰｒＲＰをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよく、例えばＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号などに記載のＤＮＡが用いられる。
【００１９】
具体的には、ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３または配列番号：６４または配列番号：６５で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４または配列番号：６５で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰ受容体と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有するレセプター蛋白質をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。
配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４または配列番号：６５で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４または配列番号：６５で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
塩基配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ　ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；フィルタリング＝ＯＮ；マッチスコア＝１；ミスマッチスコア＝−３）にて計算することができる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）２ｎｄ（Ｊ．　Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ．　Ｐｒｅｓｓ，　１９８９）に記載の方法などに従って行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことができる。
該ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。
より具体的には、配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡとしては、それぞれ配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３、配列番号：６４または配列番号：６５で表わされる塩基配列からなるＤＮＡなどが用いられる。
【００２０】
ＰｒＲＰもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体は、自体公知の方法、例えばＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号、ＷＯ９９／６０１１２号などに記載の方法に従って製造し、使用することができる。具体的には、ＷＯ９９／６０１１２号に記載されているＰ２Ｌ−１Ｃａ、Ｐ２Ｌ−２Ｃａ、Ｐ２Ｌ−１Ｔａなどのモノクローナル抗体が用いられる。
ＰｒＲＰ受容体、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、自体公知の方法、例えばＷＯ９７／２４４３６号、ＷＯ９８／４９２９５号などに記載の方法に従って製造し、使用することができる。
ＰｒＲＰをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡは、自体公知の方法に従って製造し、使用することができる。ＰｒＲＰ受容体またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡは、自体公知の方法に従って製造し、使用することができる。
ＰｒＲＰをコードするポリヌクレオチドまたはＰｒＲＰ受容体またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対するｓｉＲＮＡは、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体もしくはその部分ペプチドをコードするＲＮＡの一部とそれに相補的なＲＮＡを含有する二重鎖ＲＮＡである。
ｓｉＲＮＡは、公知の方法（例、Ｎａｔｕｒｅ，　４１１巻，　４９４頁，　２００１年）に準じて、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体もしくはその部分ペプチドの配列を基に設計して製造することができる。
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体もしくはその部分ペプチドをコードするＲＮＡの一部を含有するリボザイムは、公知の方法（例、ＴＲＥＮＤＳ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　７巻，　２２１頁，　２００１年）に準じて、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体もしくはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができる。例えば、公知のリボザイムの配列の一部をＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体もしくはその部分ペプチドをコードするＲＮＡの一部に置換することによって製造することができる。ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体もしくはその部分ペプチドをコードするＲＮＡの一部としては、公知のリボザイムによって切断され得るコンセンサス配列ＮＵＸ（式中、Ｎはすべての塩基を、ＸはＧ以外の塩基を示す）の近傍の配列などが挙げられる。
【００２１】
ＰｒＲＰの主な産生部位は、ｄｏｒｓｏｍｅｄｉａｌ　ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ　ｎｕｃｌｅｕｓ（視床下部背内側核）、ｖｅｎｔｒｏｌａｔｅｒａｌ　ｒｅｔｉｃｕｌａｒ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ（外側腹側網様核）、ｎｕｃｌｅｕｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｃｔｕｓ　ｓｏｌｉｔａｒｉｕｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｕｌｌａ　ｏｂｌｏｎｇａｔａ　（延髄弧束核）の３箇所である。本発明者らは、ＰｒＲＰの　ｍＲＮＡおよび免疫活性を検出することにより、副腎摘出一週間後にａｒｅａ　ｐｏｓｔｒｅｍａ（ＡＰ，最後野）にＰｒＲＰ産生細胞が出現してくることを明らかにした。このことから、副腎摘出により、ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ（糖質コルチコイド）およびｍｉｎｅｒａｌｃｏｒｔｉｃｏｉｄｅ（鉱質コルチコイド）が生体内から消失するために、ＰｒＲＰがこれらの機能を代用すると考えられた。Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄは免疫系の抑制、糖新生、グリコーゲン貯蔵の促進作用で、ｍｉｎｅｒａｌｃｏｒｔｉｃｏｉｄｅはナトリウムイオンの再吸収の増加による体内貯留作用とカリウムイオンの腎臓を介する排泄の促進作用で、水代謝に影響を与える。また、本発明者らは、ＡＰでのＰｒＲＰ発現は生後１４〜１７日まで見られるが、１８日目以降に消失することを見出した。一方、ＡＰは浸透圧の感知、血圧調節、摂餌量や体重、体液のｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓなどに調節する部位として知られている。また、ＡＰは脳周囲器官でありＢｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ−ｂａｒｒｉｅｒが薄く末梢血の影響を受けやすい部位である。こうした事実より、ＰｒＲＰは体内の水分および浸透圧調節に関与していると考えられた。すなわち、ＰｒＲＰは、副腎摘出によりおこる水分および浸透圧の異常を回復させるため、ｍｉｎｅｒａｌｃｏｒｔｉｃｏｉｄｅの作用を代替し水分排出を促進させる作用を持つことものと考えられる。そのメカニズムとしては、ＰｒＲＰ受容体は、ＡＰや視床下部などに広く存在することから、ＰｒＲＰはＡＰに直接作用しているか、あるいはバソプッレシンなどの抗利尿ホルモンの分泌を調節していると考えられる。
さらに、本発明者らは、ＰｒＲＰが副腎のアドレナリン産生細胞に存在することを明らかにした。１）ＰｒＲＰはストレスで産生が上昇すること、２）アドレナリン産生細胞に共存するということから、ＰｒＲＰはアドレナリン分泌の調節に関与し、さらには血圧、血糖値などの調節に関与していると考えられる。
したがって、▲１▼ＰｒＲＰ、その部分ペプチド、もしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩（以下、ＰｒＲＰと略記する）、▲２▼ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、▲３▼ＰｒＲＰに対する抗体、▲４▼ＰｒＲＰをコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡ、▲５▼ＰｒＲＰ受容体、その部分ペプチドまたはその塩（ＰｒＲＰ受容体と略記する）、▲６▼ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡ、▲７▼ＰｒＲＰ受容体に対する抗体、▲８▼ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡは、以下のような用途を有している。
【００２２】
（１）ＰｒＲＰの機能不全に関連する疾患の予防・治療剤
ａ）ＰｒＲＰ、ｂ）ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＰｒＲＰ受容体またはｄ）ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の機能不全に関連する疾患の予防・治療剤などの医薬として使用することができる。例えば、生体内においてＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体が減少しているために、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の機能が期待できない患者がいる場合に、ａ）ＰｒＲＰを該患者に投与し該ＰｒＲＰの量を補充したり、ｂ）（イ）ＰｒＲＰをコードするＤＮＡまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを該患者に投与し発現させることによって、あるいは（ロ）対象となる細胞にＰｒＲＰをコードするＤＮＡまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを挿入し発現させた後に、該細胞を該患者に移植することなどによって、患者の体内におけるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の量を増加させ、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の機能を充分に発揮させることができる。すなわち、ＰｒＲＰをコードするＤＮＡまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡは、安全で低毒性なＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の機能不全に関連する疾患の予防・治療剤として有用である。
具体的には、ａ）ＰｒＲＰ、ｂ）ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＰｒＲＰ受容体またはｄ）ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡは、例えば、体内の水分または浸透圧の調節剤として、さらにはアジソン病、低ナトリウム血症または抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）の予防・治療剤として使用することができる。
さらに、ａ）ＰｒＲＰ、ｂ）ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＰｒＲＰ受容体またはｄ）ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡは、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌促進剤、血圧上昇剤、血糖上昇剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、低血圧、低血糖）などの予防・治療剤として使用することができる。
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体を上記予防・治療剤として使用する場合は、常套手段に従って製剤化することができる。
一方、ＰｒＲＰをコードするＤＮＡまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを上記予防・治療剤として使用する場合は、これらＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。ＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
例えば、ａ）ＰｒＲＰ、ｂ）ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＰｒＲＰ受容体またはｄ）ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡは、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、ａ）ＰｒＲＰ、ｂ）ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、ｃ）ＰｒＲＰ受容体またはｄ）ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。
【００２３】
錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。
【００２４】
また、上記予防・治療剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。
このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
ＰｒＲＰの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
ＤＮＡの投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００２５】
（２）遺伝子診断剤
ＰｒＲＰをコードするＤＮＡ、ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡ、またはこれらＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡは、プローブとして使用することにより、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）におけるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤として有用である。
ＤＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９年））などにより実施することができる。
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションによりＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現低下が検出された場合は、例えば、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の機能不全に関連する疾患、例えば、アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖）である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
例えば、ノーザンハイブリダイゼーションによりＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現過剰が検出された場合は、例えば、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の過剰発現に関連する疾患、例えば、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧、糖尿病）である可能性が高いまたは将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
【００２６】
（３）ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡは、プローブとして用いることにより、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、例えば、（ｉ）非ヒト哺乳動物のａ）血液、ｂ）特定の臓器、ｃ）臓器から単離した組織もしくは細胞、または（ｉｉ）形質転換体等に含まれるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡ量を測定することによる、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡ量の測定は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には免疫不全モデルラット、マウス、ウサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。
得られた細胞に含まれるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡは、例えば、通常の方法により細胞等からｍＲＮＡを抽出し、例えば、ＴａｑＭａｎ　ＰＣＲなどの手法を用いることにより定量することができ、自体公知の手段によりノーザンブロットを行うことにより解析することもできる。
（ｉｉ）ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体を発現する形質転換体をＷＯ９７／２４４３６号またはＷＯ９８／４９２９５号に記載の方法に従い作製し、該形質転換体に含まれるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡを同様にして定量、解析することができる。
【００２７】
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングは、
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、細胞に含まれるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行なうことができ、
（ｉｉ）形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、該形質転換体に含まれるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のｍＲＮＡ量を定量、解析することにより行なうことができる。
試験化合物としては、例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
試験化合物は塩を形成していてもよく、試験化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【００２８】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、具体的には、（イ）ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を増加させることにより、ＰｒＲＰ受容体を介する細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＡＭＰ生成抑制、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）や水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用を増強させる化合物またはその塩、（ロ）ＰｒＲＰの発現量を減少させることにより、該細胞刺激活性または調節作用を減弱させる化合物またはその塩である。
上記スクリーニング方法で得られる化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
上記スクリーニング方法で得られる化合物の塩としては、前記したＰｒＲＰと同様の塩を用いることができる。
上記スクリーニング方法で得られるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を変化させる化合物またはその塩は、体内の水分または浸透圧の調節剤として用いることができる。
上記スクリーニング方法で得られるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を増加させる化合物またはその塩は水分または浸透圧の調節剤として、例えば、アジソン病、低ナトリウム血症または抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）に対する安全で低毒性なの予防・治療剤として用いることができる。
さらに、上記スクリーニング方法で得られるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を増加させる化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌促進剤、血圧上昇剤、血糖上昇剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（好ましくは、低血圧、低血糖）などの予防・治療剤として使用することができる。
上記スクリーニング方法で得られるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を減少させる化合物またはその塩は水分または浸透圧の調節剤として、例えば、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症またはクッシング症候群に対する安全で低毒性なの予防・治療剤として用いることができる。
さらに、上記スクリーニング方法で得られるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を減少させる化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌抑制剤、血圧低下剤、血糖低下剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（好ましくは、高血圧、糖尿病）などの予防・治療剤として使用することができる。
【００２９】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記したＰｒＲＰを含有する予防・治療剤と同様に製造することができる。
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を増加させる化合物またはその塩を約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の発現量を増加させる化合物またはその塩を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００３０】
（４）抗体を用いる診断方法
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記する）は、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体を特異的に認識することができるので、被検液中のＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の検出や中和に使用することができる。
すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化されたＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化されたＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の割合を測定することを特徴とする被検液中のＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の定量法、および
（ｉｉ）被検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中のＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の定量法を提供する。
上記（ｉｉ）の定量法においては、一方の抗体がＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体がＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。
また、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体に対するモノクローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体）を用いてＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の定量を行うことができるほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。
本発明の抗体を用いるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の定量法は、特に制限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例えば、ＰｒＲＰ量またはＰｒＲＰ受容体量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。
【００３１】
標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例えば、〔１２５Ｉ〕、〔１３１Ｉ〕、〔３Ｈ〕、〔１４Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。
抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物理吸着を用いてもよく、また通常酵素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あるいはガラス等があげられる。
サンドイッチ法においては不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中のＰｒＲＰ量を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。
【００３２】
本発明のサンドイッチ法によるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の測定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明のモノクローナル抗体は、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。
本発明のモノクローナル抗体をサンドイッチ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるいはネフロメトリーなどに用いることができる。
競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原（Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法とが用いられる。
イムノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。
また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
これら個々の免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えてＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の測定系を構築すればよい。これらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参照することができる。
例えば、入江　寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江　寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年発行）、「Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ」Ｖｏｌ．　７０（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ａ））、　同書　Ｖｏｌ．　７３（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｂ））、　同書　Ｖｏｌ．　７４（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｃ））、　同書　Ｖｏｌ．　８４（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｄ　：　Ｓｅｌｅｃｔｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ））、　同書　Ｖｏｌ．　９２（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｅ　：　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　Ｍｅｔｈｏｄｓ））、　同書　Ｖｏｌ．　１２１（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｐａｒｔ　Ｉ　：　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））（以上、アカデミックプレス社発行）などを参照することができる。
以上のようにして、本発明の抗体を用いることによって、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体を感度良く定量することができる。
【００３３】
さらには、本発明の抗体を用いてＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の濃度を定量することによって、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の濃度の減少が検出された場合、例えば、アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖）などの疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
また、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体の濃度の増加が検出された場合には、例えば、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧、糖尿病）などの疾患である、または将来罹患する可能性が高いと診断することができる。
【００３４】
（５）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物（アゴニスト、アンタゴニストなど）のスクリーニング方法、およびＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物を含有する医薬
ＰｒＲＰ受容体を用いるか、または組換え型ＰｒＲＰ受容体の発現系を構築し、該発現系を用いたレセプター結合アッセイ系を用いることによって、ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩を効率よくスクリーニングすることができる。
このような化合物には、（イ）ＰｒＲＰ受容体を介して細胞刺激活性（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＡＭＰ生成抑制、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性など）や水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用を有する化合物またはその塩（いわゆる、ＰｒＲＰ受容体アゴニスト）、（ロ）ＰｒＲＰ受容体を介する細胞刺激活性や該調節作用を阻害する化合物またはその塩（いわゆる、ＰｒＲＰ受容体アンタゴニスト）、（ハ）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を増強する化合物またはその塩、あるいは（ニ）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を減少させる化合物またはその塩などが含まれる。
すなわち、本発明は、ＰｒＲＰおよび（または）ＰｒＲＰ受容体を用いることを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬のスクリーニング方法を提供する。
より具体的には、本発明は、（ｉ）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体とを接触させた場合と（ｉｉ）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体および試験化合物とを接触させた場合との比較を行なうことを特徴とするＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩（水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬）のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法においては、（ｉ）と（ｉｉ）の場合における、例えば、ＰｒＲＰ受容体に対するＰｒＲＰの結合量、細胞刺激活性などを測定して、比較することを特徴とする。
【００３５】
より具体的には、本発明は、
ａ）標識したＰｒＲＰを、ＰｒＲＰ受容体に接触させた場合と、標識したＰｒＲＰおよび試験化合物をＰｒＲＰ受容体に接触させた場合における、標識したＰｒＲＰのＰｒＲＰ受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
ｂ）標識したＰｒＲＰを、ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、標識したＰｒＲＰおよび試験化合物をＰｒＲＰ受容体を含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識したＰｒＲＰの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
ｃ）標識したＰｒＲＰを、ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＰｒＲＰ受容体に接触させた場合と、標識したＰｒＲＰおよび試験化合物をＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＰｒＲＰ受容体に接触させた場合における、標識したＰｒＲＰのＰｒＲＰ受容体に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
【００３６】
ｄ）ＰｒＲＰを活性化する化合物（例えば、ＰｒＲＰなど）をＰｒＲＰ受容体を含有する細胞に接触させた場合と、ＰｒＲＰを活性化する化合物および試験化合物をＰｒＲＰ受容体を含有する細胞に接触させた場合における、ＰｒＲＰ受容体を介した細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、および
ｅ）ＰｒＲＰを活性化する化合物（例えば、ＰｒＲＰなど）をＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＰｒＲＰ受容体に接触させた場合と、ＰｒＲＰを活性化する化合物および試験化合物をＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現したＰｒＲＰ受容体に接触させた場合における、レセプターを介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴とするＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法では、ＰｒＲＰの代わりに、ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩（例、合成アゴニストなど）を用いることもできる。このＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩は、ＰｒＲＰを用いて本発明のスクーニング方法を実施することによって得ることができる。
【００３７】
本発明のスクリーニング方法の具体的な説明を以下にする。
まず、本発明のスクリーニング方法に用いるＰｒＲＰ受容体としては、ＰｒＲＰ受容体を含有する哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好適である。しかし、特にヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて大量発現させたヒト由来のＰｒＲＰ受容体などが適している。
ＰｒＲＰ受容体を製造するには、ＷＯ９４／２４４３６号またはＷＯ９８／４９２９５号に記載の方法が用いられるが、ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡを哺乳細胞や昆虫細胞で発現することにより行なうことが好ましい。目的とする蛋白質部分をコードするＤＮＡ断片には相補ＤＮＡが用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではない。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導入し、それらを効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿主とするバキュロウイルスに属する核多角体病ウイルス（ｎｕｃｌｅａｒ　ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモーター、ＳＶ４０由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモーター、ヒトヒートショックプロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むのが好ましい。発現したレセプターの量と質の検査はそれ自体公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Ｎａｍｂｉ，Ｐ．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．），２６７巻，１９５５５〜１９５５９頁，１９９２年〕に記載の方法に従って行なうことができる。
したがって、本発明のスクリーニング方法において、ＰｒＲＰ受容体を含有するものとしては、それ自体公知の方法に従って精製したＰｒＲＰ受容体であってもよいし、ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞を用いてもよく、またＰｒＲＰ受容体を含有する細胞の膜画分を用いてもよい。
【００３８】
本発明のスクリーニング方法において、ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行なうことができる。
ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞としては、ＰｒＲＰ受容体を発現した宿主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。
細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍ型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１〜１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００〜３００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したＰｒＲＰ受容体と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞や膜画分中のＰｒＲＰ受容体の量は、１細胞当たり１０３〜１０８分子であるのが好ましく、１０５〜１０７分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのＰｒＲＰ受容体結合活性（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで大量の試料を測定できるようになる。
【００３９】
ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物をスクリーニングする上記のａ）〜ｃ）を実施するためには、例えば、適当なＰｒＲＰ受容体画分と、標識したＰｒＲＰが必要である。
ＰｒＲＰ受容体画分としては、天然型のＰｒＲＰ受容体画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型ＰｒＲＰ受容体画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド結合活性、シグナル情報伝達作用などを示す。
標識したＰｒＲＰとしては、標識したＰｒＲＰ、標識したＰｒＲＰアナログ化合物などが用いられる。例えば〔３Ｈ〕、〔１２５Ｉ〕、〔１４Ｃ〕、〔３５Ｓ〕などで標識されたＰｒＲＰなどが用いられる。
具体的には、ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物のスクリーニングを行なうには、まずＰｒＲＰ受容体を含有する細胞または細胞の膜画分を、スクリーニングに適したバッファーに懸濁することによりＰｒＲＰ受容体標品を調製する。バッファーには、ｐＨ４〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合を阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０ＴＭ（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファーに加えることもできる。さらに、プロテアーゼによるＰｒＲＰ受容体やＰｒＲＰの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。０．０１〜１０ｍｌの該レセプター溶液に、一定量（５０００〜５０００００ｃｐｍ）の標識したＰｒＲＰを添加し、同時に１０−４Ｍ〜１０−１０Ｍの試験化合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の未標識のＰｒＲＰを加えた反応チューブも用意する。反応は約０〜５０℃、望ましくは約４〜３７℃で、約２０分〜２４時間、望ましくは約３０分〜３時間行う。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する物質がない場合のカウント（Ｂ０）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ０−ＮＳＢ）を１００％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が、例えば、５０％以下になる試験化合物を拮抗阻害能力のある候補物質として選択することができる。
【００４０】
ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物スクリーニングする上記のｄ）〜ｅ）の方法を実施するためには、例えば、ＰｒＲＰ受容体を介する細胞刺激活性を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測定することができる。
具体的には、まず、ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリーニングを行なうにあたっては前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸、ｃＡＭＰなど）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行なってもよい。また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞の基礎的産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。
細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なうには、適当なＰｒＲＰ受容体を発現した細胞が必要である。ＰｒＲＰ受容体を発現した細胞としては、天然型のＰｒＲＰ受容体を有する細胞株、上記の組換え型ＰｒＲＰ受容体を発現した細胞株などが望ましい。
試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。
また、試験化合物としては、ＰｒＲＰ受容体の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置に基づいて、リガンド結合ポケットに結合するように設計された化合物が好ましく用いられる。ＰｒＲＰ受容体の活性部位の原子座標およびリガンド結合ポケットの位置の測定は、公知の方法あるいはそれに準じる方法を用いて行うことができる。
【００４１】
ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング用キットは、ＰｒＲＰ、ＰｒＲＰ受容体を含有する細胞またはその細胞膜画分を含有するものなどである。
本発明のスクリーニング用キットの例としては、次のものが挙げられる。
１．スクリーニング用試薬
ａ）測定用緩衝液および洗浄用緩衝液
Ｈａｎｋｓ’　Ｂａｌａｎｃｅｄ　Ｓａｌｔ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ギブコ社製）に、０．０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたもの。
孔径０．４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃で保存するか、あるいは用時調製しても良い。
ｂ）ＰｒＲＰ受容体標品
ＰｒＲＰ受容体を発現させたＣＨＯ細胞を、１２穴プレートに５×１０５個／穴で継代し、３７℃、５％ＣＯ２、９５％ａｉｒで２日間培養したもの。
ｃ）標識ＰｒＲＰ
市販の〔３Ｈ〕、〔１２５Ｉ〕、〔１４Ｃ〕、〔３５Ｓ〕などで標識したＰｒＲＰ
水溶液の状態のものを４℃あるいは−２０℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。
ｄ）ＰｒＲＰ標準液
ＰｒＲＰを０．１％ウシ血清アルブミン（シグマ社製）を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、−２０℃で保存する。
【００４２】
２．測定法
ａ）１２穴組織培養用プレートにて培養したＰｒＲＰ受容体発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加える。
ｂ）１０−３〜１０−１０Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた後、標識ＰｒＲＰを５μｌ加え、室温にて１時間反応させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代わりに１０−３ＭのＰｒＲＰを５μｌ加えておく。
ｃ）反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄する。細胞に結合した標識ＰｒＲＰを０．２Ｎ　ＮａＯＨ−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ（和光純薬製）と混合する。
ｄ）液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）を用いて放射活性を測定し、Ｐｅｒｃｅｎｔ　Ｍａｘｉｍｕｍ　Ｂｉｎｄｉｎｇ（ＰＭＢ）を次の式で求める。
ＰＭＢ＝［（Ｂ−ＮＳＢ）／（Ｂ０−ＮＳＢ）］×１００
ＰＭＢ：Ｐｅｒｃｅｎｔ　Ｍａｘｉｍｕｍ　Ｂｉｎｄｉｎｇ
Ｂ　　：検体を加えた時の値
ＮＳＢ：Ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　Ｂｉｎｄｉｎｇ（非特異的結合量）
Ｂ０　　：最大結合量
【００４３】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物としては、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。
上記スクリーニング方法で得られる化合物の塩としては、前記したＰｒＲＰの塩と同様のものが用いられる。
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩は、ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる作用を有する化合物またはその塩であり、具体的には、（イ）ＰｒＲＰ受容体を介して細胞刺激活性や水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用を有する化合物またはその塩（いわゆる、ＰｒＲＰ受容体アゴニスト）、（ロ）該細胞刺激活性を有しない化合物またはその塩（いわゆる、ＰｒＲＰ受容体アンタゴニスト）、（ハ）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を増強する化合物またはその塩、あるいは（ニ）ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を減少させる化合物またはその塩である。
【００４４】
ＰｒＲＰ受容体アゴニストであるか、アンタゴニストであるかの具体的な評価方法は以下の（ｉ）および（ｉｉ）に従えばよい。
（ｉ）例えば、前記ａ）〜ｃ）のスクリーニング方法で示されるバインディング・アッセイを行い、ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩を得た後、該化合物またはその塩が上記したＰｒＲＰ受容体を介する細胞刺激活性や水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用（好ましくは、アドレナリン分泌促進作用、血圧上昇作用または血糖上昇作用）を有しているか否かを測定する。細胞刺激活性または作用を有する化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アゴニストであり、該活性または作用を有しない化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アンタゴニストである。
（ｉｉ）（ａ）試験化合物をＰｒＲＰ受容体を含有する細胞（例、ＣＨＯ細胞、アドレナリン産生細胞）に接触させ、上記ＰｒＲＰ受容体を介した細胞刺激活性やアドレナリン分泌調節作用（好ましくは、アドレナリン分泌促進作用）を測定する。該細胞刺激活性または作用を有する化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アゴニストである。
（ｂ）ＰｒＲＰ受容体を活性化する化合物（例えば、ＰｒＲＰＰなど）をＰｒＲＰ受容体を含有する細胞（例、ＣＨＯ細胞、アドレナリン産生細胞）に接触させた場合と、ＰｒＲＰ受容体を活性化する化合物および試験化合物をＰｒＲＰ受容体を含有する細胞に接触させた場合における、ＰｒＲＰ受容体を介した該細胞刺激活性または作用を測定し、比較する。ＰｒＲＰ受容体を活性化する化合物による細胞刺激活性または作用を減少させ得る化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アンタゴニストである。
（ｉｉｉ）（ａ）試験化合物を非ヒト哺乳動物に投与し、体内の水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖を測定する。体内の水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用（特に、アドレナリン分泌促進作用、血圧上昇作用または血糖上昇作用）を有する化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アゴニストである。一方、該調節作用を有しない化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アンタゴニストである。
（ｂ）ＰｒＲＰ受容体を活性化する化合物（例えば、ＰｒＲＰＰなど）を非ヒト哺乳動物に投与した場合と、ＰｒＲＰ受容体を活性化する化合物および試験化合物を非ヒト哺乳動物に接触させた場合における、体内の水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖を測定する。体内の水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用（特に、アドレナリン分泌促進作用、血圧上昇作用または血糖上昇作用）を減少させる化合物またはその塩はＰｒＲＰ受容体アンタゴニストである。
ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる作用を有する化合物またはその塩は、体内の水分または浸透圧の調節剤として有用である。
ＰｒＲＰ受容体アゴニストは、ＰｒＲＰが有する生理活性と同様の作用を有しており安全で低毒性な医薬として有用である。
ＰｒＲＰ受容体アンタゴニストは、ＰｒＲＰが有する生理活性を抑制することができるので、ＰｒＲＰの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を増強する化合物は、ＰｒＲＰが有する生理活性を増強することができるので、安全で低毒性な医薬として有用である。ＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を減少させる化合物は、ＰｒＲＰが有する生理活性を減少させることができるので、ＰｒＲＰの生理活性を抑制するための安全で低毒性な医薬として有用である。
具体的には、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＰｒＲＰ受容体アゴニストおよびＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を増強する化合物またはその塩は水分または浸透圧の調節剤として、例えば、アジソン病、低ナトリウム血症または抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）に対する予防・治療剤として有用である。
さらに、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＰｒＲＰ受容体アゴニストおよびＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を増強する化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌促進剤、血圧上昇剤、血糖上昇剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、低血圧、低血糖）などの予防・治療剤として使用することができる。
一方、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＰｒＲＰ受容体アンタゴニストおよびＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を減少させる化合物またはその塩は水分または浸透圧の調節剤として、例えば、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症またはクッシング症候群に対する予防・治療剤として有用である。
さらに、本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られるＰｒＲＰ受容体アンタゴニストおよびＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合力を減少させる化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌抑制剤、血圧低下剤、血糖低下剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高血圧、糖尿病）などの予防・治療剤として使用することができる。
【００４５】
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩を上記の医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記したＰｒＲＰを含有する予防・治療剤と同様に製造することができる。
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＰｒＲＰ受容体アゴニストを約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につきＰｒＲＰ受容体アゴニストを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００４６】
（６）細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬
ＰｒＲＰ受容体に対する抗体は、ＰｒＲＰ受容体を特異的に認識することができるので、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、例えば、
（ｉ）非ヒト哺乳動物のａ）血液、ｂ）特定の臓器、ｃ）臓器から単離した組織もしくは細胞等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれるＰｒＲＰ受容体を定量することによる、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（ｉｉ）ＰｒＲＰ受容体を発現する形質転換体等を破壊した後、細胞膜画分を単離し、細胞膜画分に含まれるＰｒＲＰ受容体を定量することによる、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（ｉｉｉ）非ヒト哺乳動物のａ）血液、ｂ）特定の臓器、ｃ）臓器から単離した組織もしくは細胞等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
（ｉｖ）ＰｒＲＰ受容体を発現する形質転換体等を切片とした後、免疫染色法を用いることにより、細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することによる、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
【００４７】
細胞膜画分に含まれるＰｒＲＰ受容体の定量は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には免疫不全ラット、マウス、化ウサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、例えば、適当な緩衝液（例えば、トリス塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヘペス緩衝液など）等に懸濁し、臓器、組織あるいは細胞を破壊し、界面活性剤（例えば、トリトンＸ１００ＴＭ、ツイーン２０ＴＭなど）などを用い、さらに遠心分離や濾過、カラム分画などの手法を用いて細胞膜画分を得る。
細胞膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Ｐｏｔｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍ型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ社製）のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（５００〜３０００ｒｐｍ）で短時間（通常、約１〜１０分）遠心し、上清をさらに高速（１５０００〜３００００ｒｐｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。該膜画分中には、発現したＰｒＲＰ受容体と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
細胞膜画分に含まれるＰｒＲＰ受容体は、例えば、本発明の抗体を用いたサンドイッチ免疫測定法、ウエスタンブロット解析などにより定量することができる。
かかるサンドイッチ免疫測定法は上記の方法と同様にして行なうことができ、ウエスタンブロットは自体公知の手段により行なうことができる。
（ｉｉ）ＰｒＲＰ受容体を発現する形質転換体を上記の方法に従い作製し、細胞膜画分に含まれるＰｒＲＰ受容体を定量することができる。
【００４８】
細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩のスクリーニングは、
（ｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物に対して、薬剤あるいは物理的ストレスなどを与える一定時間前（３０分前〜２４時間前、好ましくは３０分前〜１２時間前、より好ましくは１時間前〜６時間前）もしくは一定時間後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、または薬剤あるいは物理的ストレスと同時に試験化合物を投与し、投与後一定時間経過後（３０分後〜３日後、好ましくは１時間後〜２日後、より好ましくは１時間後〜２４時間後）、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を定量することにより行なうことができ、
（ｉｉ）形質転換体を常法に従い培養する際に試験化合物を培地中に混合させ、一定時間培養後（１日後〜７日後、好ましくは１日後〜３日後、より好ましくは２日後〜３日後）、細胞膜におけるＰｒＲＰの量を定量することにより行なうことができる。
細胞膜画分に含まれるＰｒＲＰ受容体の確認は具体的には以下のようにして行なう。
（ｉｉｉ）正常あるいは疾患モデル非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど、より具体的には免疫不全モデルラット、マウス、ウサギなど）に対して、薬剤（例えば、免疫調節薬など）あるいは物理的ストレス（例えば、浸水ストレス、電気ショック、明暗、低温など）などを与え、一定時間経過した後に、血液、あるいは特定の臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓など）、または臓器から単離した組織、あるいは細胞を得る。得られた臓器、組織または細胞等を、常法に従い組織切片とし、本発明の抗体を用いて免疫染色を行う。細胞表層での該受容体蛋白質の染色度合いを定量化することにより、細胞膜上の該蛋白質を確認することにより、定量的または定性的に、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を確認することができる。
（ｉｖ）ＰｒＲＰ受容体を発現する形質転換体等を用いて同様の手段をとることにより確認することもできる。
試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。
【００４９】
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物は、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる作用を有する化合物であり、具体的には、（イ）細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を増加させることにより、ＰｒＲＰ受容体を介する細胞刺激活性や水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用を増強させる化合物、（ロ）細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を減少させることにより、該細胞刺激活性または調節作用を減弱させる化合物である。
上記スクリーニング方法で得られる化合物の塩としては、前記したＰｒＲＰの塩と同様のものが用いられる。
細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を変化させる化合物またはその塩は、体内の水分または浸透圧の調節剤として有用である。
細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を増加させることにより、該細胞刺激活性または調節作用を増強させる化合物またはその塩は水分または浸透圧の調節剤として、例えば、アジソン病、低ナトリウム血症または抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）に対する安全で低毒性な予防・治療剤として有用である。
さらに、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を増加させることにより、該細胞刺激活性または調節作用を増強させる化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌促進剤、血圧上昇剤、血糖上昇剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、低血圧、低血糖）などの予防・治療剤として使用することができる。
細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を減少させることにより、該細胞刺激活性または調節作用を減弱させる化合物またはその塩は水分または浸透圧の調節剤として、例えば、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症またはクッシング症候群に対する安全で低毒性な予防・治療剤として有用である。
さらに、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を減少させることにより、該細胞刺激活性または調節作用を減弱させる化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌抑制剤、血圧低下剤、血糖低下剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高血圧、糖尿病）などの予防・治療剤として使用することができる。
本発明のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を医薬組成物として使用する場合、常套手段に従って製剤化することができる。具体的には、上記したＰｒＲＰを含有する予防・治療剤と同様に製造することができる。
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を増加させる化合物またはその塩を一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常例えば、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、細胞膜におけるＰｒＲＰ受容体の量を増加させる化合物またはその塩を一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００５０】
（７）ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体に対する抗体を含有してなる医薬
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体に対する抗体（特に、中和抗体）は、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体が関与するシグナル伝達、例えば、ＰｒＲＰ受容体を介する細胞刺激活性を不活性化することができる。
したがって、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体に対する抗体（特に、中和抗体）は体内の水分または浸透圧の調節剤として、さらには高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症またはクッシング症候群に対する安全で低毒性な予防・治療剤として用いることができる。
さらに、ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体に対する抗体（特に、中和抗体）は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌抑制剤、血圧低下剤、血糖低下剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高血圧、糖尿病）などの予防・治療剤として使用することができる。
上記予防・治療剤は、前記したＰｒＲＰを含有する医薬と同様にして製造し、使用することができる。
【００５１】
（８）アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを含有してなる医薬
ＰｒＲＰをコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡもしくはｓｉＲＮＡまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡに対するアンチセンスＤＮＡもしくはｓｉＲＮＡ（以下、アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡと略記する）は体内の水分または浸透圧の調節剤として、さらには高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症またはクッシング症候群に対する安全で低毒性な予防・治療剤として用いることができる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡは、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌抑制剤、血圧低下剤、血糖低下剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高血圧、糖尿病）などの予防・治療剤として使用することができる。
例えば、該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを用いる場合、該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って実施することができる。該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与できる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡは、組織や細胞におけるＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもできる。
【００５２】
（９）ＤＮＡ導入動物の作製
本発明は、ＰｒＲＰ受容体をコードする外来性のＤＮＡまたはＰｒＲＰをコードする外来性のＤＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）またはその変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
〔１〕本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、
〔２〕非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第〔１〕記載の動物、
〔３〕ゲッ歯動物がマウスまたはラットである第〔２〕記載の動物、および
〔４〕本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベクターを提供するものである。
本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本発明のＤＮＡ転移動物と略記する）は、未受精卵、受精卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイクロインジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキストラン法などにより目的とするＤＮＡを転移することによって作出することができる。また、該ＤＮＡ転移方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを転移し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これら細胞を上述の胚芽細胞と自体公知の細胞融合法により融合させることにより本発明のＤＮＡ転移動物を作出することもできる。
非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。なかでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６Ｃ３Ｆ１系統，ＢＤＦ１系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ１系統，ＢＡＬＢ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。
哺乳動物において発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。
【００５３】
本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。
本発明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれる。
該異常ＤＮＡとしては、異常なＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰを発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常なＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能を抑制するＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰを発現させるＤＮＡなどが用いられる。
本発明の外来性ＤＮＡは、対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明のヒトＤＮＡを転移させる場合、これと相同性が高い本発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンストラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ転移哺乳動物を作出することができる。
【００５４】
ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの発現ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリオファージ、モロニー白血病ウイルスなどのレトロウイルス、ワクシニアウイルスまたはバキュロウイルスなどの動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好ましく用いられる。
上記のＤＮＡ発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、▲１▼ウイルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモーター、▲２▼各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来のプロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸性蛋白質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭＰ依存蛋白質キナーゼβＩサブユニット、ジストロフィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナーゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウムアデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩおよびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビター、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、ペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシン軽鎖１および２、ミエリン基礎蛋白質、チログロブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（ＶＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサイトメガロウイルスプロモーター、ヒトペプチド鎖延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよびニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
上記ベクターは、ＤＮＡ転移哺乳動物において目的とするメッセンジャーＲＮＡの転写を終結する配列（一般にターミネーターと呼ばれる）を有していることが好ましく、例えば、ウイルス由来および各種哺乳動物由来の各ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミアンウイルスのＳＶ４０ターミネーターなどが用いられる。
【００５５】
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモーター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域の３’下流　に連結することも目的により可能である。
正常なＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの翻訳領域は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡおよび市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノムＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法により調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または組織より得られた正常なＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することができる。
該翻訳領域は転移動物において発現しうるＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常のＤＮＡ工学的手法により作製することができる。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを有する。
本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。
受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡを過剰に有する。
導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するように繁殖継代することができる。
【００５６】
本発明の正常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進することにより最終的に本発明のＰｒＲＰ受容体の機能亢進症を発症することがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ転移動物を用いて、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能亢進症や、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰが関連する疾患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの増加症状を有することから、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰに関連する疾患に対する治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とする外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科として用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンストラク卜は、通常のＤＮＡ工学的手法によって作製することができる。受精卵細胞段階における本発明の異常ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在することは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができる。
【００５７】
本発明の異常ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害することにより最終的にＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能不活性型不応症となることがあり、その病態モデル動物として利用することができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物を用いて、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能不活性型不応症の病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行なうことが可能である。
また、具体的な利用可能性としては、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能不活性型不応症における異常ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰによる正常ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能阻害（ｄｏｍｉｎａｎｔ　ｎｅｇａｔｉｖｅ作用）を解明するモデルとなる。
また、本発明の外来異常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの増加症状を有することから、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰまたはの機能不活性型不応症に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。また、上記２種類の本発明のＤＮＡ転移動物のその他の利用可能性として、例えば、
▲１▼組織培養のための細胞源としての使用、
▲２▼本発明のＤＮＡ転移動物の組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現されたＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰ組織を分析することによる、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰにより特異的に発現あるいは活性化するＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰとの関連性についての解析、
▲３▼ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、
▲４▼上記▲３▼記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬剤のスクリーニング、および
▲５▼変異ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰを単離精製およびその抗体作製などが考えられる。
さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能不活性型不応症などを含む、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰに関連する疾患の臨床症状を調べることができ、また、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰに関連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。
また、本発明のＤＮＡ転移動物から各臓器を取り出し、細切後、トリプシンなどの蛋白質分解酵素により、遊離したＤＮＡ転移細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。さらに、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰ産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰおよびその作用解明のための有効な研究材料となる。
さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能不活性型不応症を含む、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰに関連する疾患の治療薬の開発を行なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニング法を提供することが可能となる。また、本発明のＤＮＡ転移動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを用いて、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰが関連する疾患のＤＮＡ治療法を検討、開発することが可能である。
【００５８】
（１０）ノックアウト動物
本発明は、ＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡまたはＰｒＲＰをコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略記する）が不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を提供する。
すなわち、本発明は、
〔１〕本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
〔２〕該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化された第〔１〕項記載の胚幹細胞、
〔３〕ネオマイシン耐性である第〔１〕項記載の胚幹細胞、
〔４〕非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第〔１〕項記載の胚幹細胞、
〔５〕ゲッ歯動物がマウスである第〔４〕項記載の胚幹細胞、
〔６〕本発明のＤＮＡが不活性化された該ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、
〔７〕該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる第〔６〕項記載の非ヒト哺乳動物、
〔８〕非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第〔６〕項記載の非ヒト哺乳動物、
〔９〕ゲッ歯動物がマウスである第〔８〕項記載の非ヒト哺乳動物、および
〔１０〕第〔７〕項記載の動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしているＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの活性を実質的に喪失させることにより、ＤＮＡが実質的にＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの発現能を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称することがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ細胞と略記する）をいう。
非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
本発明のＤＮＡに人為的に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡを挿入または置換させることによって行なうことができる。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製すればよい。
【００５９】
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、ｐｏｌｙＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なメッセンジャーＲＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列とターゲッティングベクター作製に使用した本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を選別することにより得ることができる。
また、相同組換え法等により本発明のＤＮＡを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知　ＥｖａｎｓとＫａｕｆｍａの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなどの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善したＢＤＦ１マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２とのＦ１）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。ＢＤＦ１マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫であるという利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバッククロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウスに代えることが可能である点で有利に用い得る。
また、ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３．５日目の胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期胚を取得することができる。
また、雌雄いずれのＥＳ細胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。
【００６０】
ＥＳ細胞の雌雄の判定方法としては、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげることができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析をするのに約１０６個の細胞数を要していたのに対して、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むので、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減できる。
また、第二次セレクションとしては、例えば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウトした後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ましい。
このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすいので、注意深く継代培養することが必要である。例えば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上でＬＩＦ（１〜１００００Ｕ／ｍｌ）存在下に炭酸ガス培養器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気または５％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液（通常０．００１〜０．５％トリプシン／０．１〜５ｍＭ　ＥＤＴＡ、好ましくは約０．１％トリプシン／１ｍＭ　ＥＤＴＡ）処理により単細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などがとられる。このような継代は、通常１〜３日毎に行なうが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望まれる。
ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔Ｍ．　Ｊ．　Ｅｖａｎｓ及びＭ．　Ｈ．　Ｋａｕｆｍａｎ，　ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）第２９２巻、１５４頁、１９８１年；Ｇ．　Ｒ．　Ｍａｒｔｉｎ　プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・ユーエスエー（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．Ｓ．Ａ．）第７８巻、７６３４頁、１９８１年；Ｔ．　Ｃ．　Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎ　ら、ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第８７巻、２７頁、１９８５年〕、本発明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発現不全細胞は、インビトロにおけるＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの細胞生物学的検討において有用である。
【００６１】
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられる。
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えにより、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることにより、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができる。
本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティングベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法による解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、その細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コートカラーの判定等により選別することにより得られる。このようにして得られた個体は、通常、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰのヘテロ発現不全個体であり、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰのヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔からＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰのホモ発現不全個体を得ることができる。
【００６２】
卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマイクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入することによりターゲッティングベクターを染色体内に導入したトランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のあるものを選択することにより得られる。
このようにして本発明のＤＮＡがノックアウトされている個体は、交配により得られた動物個体も該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。
さらに、生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することにより効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代する。
本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作出する上で、非常に有用である。
また、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰにより誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの生物活性の不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療法の検討に有用である。
【００６３】
（１０ａ）本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法
本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のスクリーニングに用いることができる。
すなわち、本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とする、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
該スクリーニング方法において用いられる本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものがあげられる。
試験化合物としては、前記と同様のものが用いられる。
具体的には、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化合物の治療・予防効果を試験することができる。
試験動物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜選択することができる。
【００６４】
該スクリーニング方法において、試験動物に試験化合物を投与した場合、該試験動物の水分または浸透圧調節作用が約１０％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５０％以上改善された場合、該試験化合物を上記の疾患に対して治療・予防効果を有する化合物として選択することができる。
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物またはその塩であり、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの欠損や損傷などによって引き起こされる疾患（例えば、アジソン病、低ナトリウム血症または抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）など）に対する安全で低毒性な治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、該スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌促進剤、血圧上昇剤、血糖上昇剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、低血圧、低血糖）などの予防・治療剤として使用することができる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
該スクリーニング方法で得られた化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸など）や塩基（例、アルカリ金属など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記したＰｒＲＰ受容体とリガンドとＰｒＲＰ受容体との結合性またはシグナル伝達を変化させる化合物を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、該化合物またはその塩を経口投与する場合、一般的に低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物を約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、該化合物またはその塩を注射剤の形で通常、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００６５】
（１０ｂ）本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニング方法
本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。
上記スクリーニング方法において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられる。
試験化合物としては、前記と同様のものがあげられる。
レポーター遺伝子としては、前記と同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。
本発明のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在するので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレースすることにより、プロモーターの活性を検出することができる。
例えば、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰをコードするＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの発現する組織で、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰ受容体の代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラクトシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することにより、簡便にＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの動物生体内における発現状態を観察することができる。具体的には、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰ欠損マウスまたはその組織切片をグルタルアルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組織標本を１ｍＭ　ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄することによって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコードするｍＲＮＡを検出してもよい。
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれた化合物またはその塩であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩である。
該スクリーニング方法で得られた化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸など）や塩基（例、有機酸など）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸など）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸など）との塩などが用いられる。
【００６６】
本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化合物またはその塩は、体内の水分または浸透圧の調節剤として有用である。
本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの発現を促進し、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能を促進することができるので、例えば、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能不全に関連する疾患（例えば、アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）など）の予防・治療剤などの医薬として有用である。
さらに、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌促進剤、血圧上昇剤、血糖上昇剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、低血圧、低血糖）などの予防・治療剤として使用することができる。
本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの発現を阻害し、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能を阻害することができるので、例えば、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰの機能過多に関連する疾患（高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群）などの予防・治療剤などの医薬として有用である。
さらに、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、例えば、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤（好ましくは、アドレナリン分泌抑制剤、血圧低下剤、血糖低下剤）として、例えば、低血圧、低血糖、高血圧、糖尿病（特に、高血圧、糖尿病）などの予防・治療剤として使用することができる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。
【００６７】
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、前記したＰｒＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩を含有する医薬と同様にして製造することができる。
このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩を経口投与する場合、一般的に低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該化合物またはその塩を約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩を注射剤の形で通常、低ナトリウム血症患者（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合物またはその塩を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
このように、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用であり、本発明のＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献することができる。
また、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰのプロモーター領域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々の蛋白質をコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子移入動物）を作成すれば、特異的にそのＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰを合成させ、その生体での作用を検討することも可能となる。さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれば、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰそのものの体内での産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系として使用できる。
【００６８】
（１１）各種薬物の作用メカニズムの解明方法
ＰｒＲＰ受容体を用いることによって、各種薬物がＰｒＲＰ受容体を介して薬理効果を発揮しているか否かを確認することができる。
すなわち、本発明は、
（１）ＰｒＲＰ受容体を用いることを特徴とする、（ｉ）水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬または（ｉｉ）アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の予防・治療薬がＰｒＲＰ受容体に結合することを確認する方法、
（２）ＰｒＲＰ受容体を用いることを特徴とする、（ｉ）水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬（特に、アドレナリン分泌促進薬、血圧上昇薬または血糖上昇薬）または（ｉｉ）アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病（特に、アジソン病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖）の予防・治療薬がＰｒＲＰ受容体に対するアゴニストであることを確認する方法、
（３）ＰｒＲＰ受容体を用いることを特徴とする、（ｉ）水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬（特に、アドレナリン分泌抑制薬、血圧低下薬または血糖低下薬）または（ｉｉ）高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病（特に、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病）の予防・治療薬がＰｒＲＰ受容体に対するアンタゴニストであることを確認する方法、
（４）各薬をＰｒＲＰ受容体に接触させた場合における、各薬とＰｒＲＰ受容体との結合量を測定することを特徴とする上記（１）〜（３）記載のスクリーニング方法を提供する。
この確認方法は、前記したＲＦＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法において、試験化合物に代えて、上記の薬物を使用することによって実施することができる。
また、本発明の確認方法用キットは、前記したＲＦＲＰとＰｒＲＰ受容体との結合性を変化させる化合物のスクリーニング用キットにおいて、試験化合物に代えて、上記の薬物を含有するものである。
このように、本発明の確認方法を用いることによって、市販または開発途中の各種薬物がＰｒＲＰ受容体を介して薬理効果を発揮していることを確認することができる。
【００６９】
本明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによる略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。
ＤＮＡ　　　　　：デオキシリボ核酸
ｃＤＮＡ　　　　：相補的デオキシリボ核酸
Ａ　　　　　　：アデニン
Ｔ　　　　　　：チミン
Ｇ　　　　　　：グアニン
Ｃ　　　　　　：シトシン
Ｉ　　　　　　　　　　　　：イノシン
Ｒ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）
Ｙ　　　　　　　　　　　　：チミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）
Ｍ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）またはシトシン（Ｃ）
Ｋ　　　　　　　　　　　　：グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｓ　　　　　　　　　　　　：グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｗ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）
Ｂ　　　　　　　　　　　　：グアニン（Ｇ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｄ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはチミン（Ｔ）
Ｖ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）
Ｎ　　　　　　　　　　　　：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）もしくはチミン（Ｔ）または不明もしくは他の塩基
ＲＮＡ　　　　　：リボ核酸
ｍＲＮＡ　　　　：メッセンジャーリボ核酸
ｄＡＴＰ　　　　：デオキシアデノシン三リン酸
ｄＴＴＰ　　　　：デオキシチミジン三リン酸
ｄＧＴＰ　　　　：デオキシグアノシン三リン酸
ｄＣＴＰ　　　　：デオキシシチジン三リン酸
ＡＴＰ　　　　　：アデノシン三リン酸
ＥＤＴＡ　　　　：エチレンジアミン四酢酸
ＳＤＳ　　　　　：ドデシル硫酸ナトリウム
ＢＨＡ　　　　　：ベンズヒドリルアミン
ｐＭＢＨＡ　　　：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン
Ｔｏｓ　　　　　：ｐ−トルエンスルフォニル
Ｂｚｌ　　　　　：ベンジル
Ｂｏｍ　　　　　：ベンジルオキシメチル
Ｂｏｃ　　　　　：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ　　　　　：ジクロロメタン
ＨＯＢｔ　　　　：１−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＤＣＣ　　　　　：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＴＦＡ　　　　　：トリフルオロ酢酸
ＤＩＥＡ　　　　：ジイソプロピルエチルアミン
Ｇｌｙ　　　　　　：グリシン
ＡｌａまたはＡ　：アラニン
ＶａｌまたはＶ　　：バリン
ＬｅｕまたはＬ　：ロイシン
ＩｌｅまたはＩ　　：イソロイシン
ＳｅｒまたはＳ　　：セリン
ＴｈｒまたはＴ　　：スレオニン
ＣｙｓまたはＣ　　：システイン
ＭｅｔまたはＭ　　：メチオニン
ＧｌｕまたはＥ　　：グルタミン酸
ＡｓｐまたはＤ　　：アスパラギン酸
ＬｙｓまたはＫ　　：リジン
ＡｒｇまたはＲ　　：アルギニン
ＨｉｓまたはＨ　　：ヒスチジン
ＰｈｅまたはＦ　　：フェニルアラニン
ＴｙｒまたはＹ　　：チロシン
ＴｒｐまたはＷ　　：トリプトファン
ＰｒｏまたはＰ　　：プロリン
ＡｓｎまたはＮ　　：アスパラギン
ＧｌｎまたはＱ　　：グルタミン
ｐＧｌｕ　　　　：ピログルタミン酸
【００７０】
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕
ＰｒＲＰのアミノ酸配列の一般式を示す。
〔配列番号：２〕
ウシＰｒＲＰの全長アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：３〕
ウシＰｒＲＰの全長アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：４〕
ラットＰｒＲＰの全長アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５〕
ヒトＰｒＲＰの全長アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：６〕
マウスＰｒＲＰの全長アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：７〕
ウシＰｒＲＰ（２０）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：８〕
ウシＰｒＲＰ（２１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：９〕
ウシＰｒＲＰ（２２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１０〕
ラットＰｒＲＰ（２０）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１１〕
ラットＰｒＲＰ（２１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１２〕
ラットＰｒＲＰ（２２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１３〕
ヒトＰｒＲＰ（２０）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１４〕
ヒトＰｒＲＰ（２１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１５〕
ヒトＰｒＲＰ（２２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１６〕
ウシＰｒＲＰ（２９）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１７〕
ウシＰｒＲＰ（１９）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１８〕
ウシＰｒＲＰ（３１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：１９〕
ウシＰｒＲＰ（３２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２０〕
ウシＰｒＲＰ（３３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２１〕
ラットＰｒＲＰ（３１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２２〕
ラットＰｒＲＰ（３２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２３〕
ラットＰｒＲＰ（３３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２４〕
ヒトＰｒＲＰ（３１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２５〕
ヒトＰｒＲＰ（３２）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２６〕
ヒトＰｒＲＰ（３３）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２７〕
マウスＰｒＲＰ（３１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２８〕
ＰｒＲＰの部分アミノ酸配列の一般式を示す。
〔配列番号：２９〕
配列番号：２で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３０〕
配列番号：１６で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３１〕
配列番号：１７で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３２〕
配列番号：１８で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３３〕
配列番号：１９で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３４〕
配列番号：２０で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３５〕
配列番号：７で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３６〕
配列番号：８で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３７〕
配列番号：９で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３８〕
配列番号：４で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：３９〕
配列番号：２１で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４０〕
配列番号：２２で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４１〕
配列番号：２３で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４２〕
配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４３〕
配列番号：１１で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４４〕
配列番号：１２で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４５〕
配列番号：５で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４６〕
配列番号：２４で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４７〕
配列番号：２５で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４８〕
配列番号：２６で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：４９〕
配列番号：１３で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：５０〕
配列番号：１４で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：５１〕
配列番号：１５で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：５２〕
配列番号：６で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：５３〕
配列番号：６で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするゲノムＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：５４〕
ヒトＰｒＲＰ受容体の部分アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５５〕
ヒトＰｒＲＰ受容体の部分アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５６〕
ヒトＰｒＲＰ受容体の全長アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５７〕
マウスＰｒＲＰ受容体の部分アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５８〕
マウスＰｒＲＰ受容体の部分アミノ酸配列を示す。
〔配列番号：５９〕
ラットＰｒＲＰ受容体（ＵＨＲ−１）のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：６０〕
配列番号：５４で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６１〕
配列番号：５５で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６２〕
配列番号：５６で表わされるアミノ酸配列からなるヒトＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６３〕
配列番号：５７で表わされるアミノ酸配列からなるマウスＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６４〕
配列番号：５８で表わされるアミノ酸配列からなるマウスＰｒＲＰ受容体をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６５〕
配列番号：５９で表わされるアミノ酸配列からなるラットＰｒＲＰ受容体（ＵＨＲ−１）をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
〔配列番号：６６〕
実施例１で用いたセンスプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：６７〕
実施例１で用いたアンチセンスプライマーの塩基配列を示す。
〔配列番号：６８〕
配列番号：２７で表わされるアミノ酸配列からなるＰｒＲＰをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
【００７１】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ）に記載されている方法に従った。
【００７２】
実施例１　正常ラットおよび副腎摘出ラットでの延髄最後野におけるＰｒＲＰ　ｍＲＮＡの検出
Ｗｉｓｔａｒ系成熟雄ラットをｓｏｄｉｕｍ　ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ　（５０ｍｇ／ｋｇ，　ｉｐ，　大日本製薬）にて十分に麻酔し、左右の副腎を摘出した。副腎摘出後、一週間０．９％塩化ナトリウム溶液を与え飼育し、再びｓｏｄｉｕｍ　ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ　（５０ｍｇ／ｋｇ，　ｉｐ，　大日本製薬）にて麻酔し、脳を摘出した。また、無処置の同系ラットも同様に脳を摘出した。摘出した脳は、４％パラホルムアルデヒド（ナカライテスク）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液　（ｐＨ　７．４）で２４時間浸漬固定した後、３０％ショ糖を含むＰＢＳに２日以上浸漬し、ｉｎｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ用の試料とした。
まず、ｒａｔ　ＰｒＲＰ　ｍＲＮＡに対するｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（ＤＩＧ）標識ｃＲＮＡ　ｐｒｏｂｅの作製は以下のように行った。
Ｗｉｓｔａｒ系成熟雄ラットの延髄からＩＳＯＧＥＮ　（Ｎｉｐｐｏｎ　Ｇｅｎｅ社）を用いてｔｏｔａｌ　ＲＮＡを抽出した。ＤＮＡの混入を防ぐためＤＮａｓｅで消化した後、Ｒｅａｄｙ　ｔｏ　Ｇｏ　Ｔ−ｐｒｉｍｅｄ　Ｆｉｒｓｔ−ｓｔｒａｎｄ　Ｋｉｔ　（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）を用いて５μｇのｔｏｔａｌ　ＲＮＡから逆転写　（ＲＴ）反応を行いｃＤＮＡを合成した。ＲＴ反応後、Ａｍｐｌｉ　Ｔａｑ−Ｇｏｌｄ　（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ社）を用いてｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　（ＰＣＲ）を行った。ＰｒＲＰ　ｍＲＮＡ　（１１−４７３）に相当する４６１ｂｐの断片を得るため、ｓｅｎｓｅ　ｐｒｉｍｅｒにｔｔａｔｃａｃｃａｃｔｃａａｇｇｇａｃａｇａ（配列番号：６６）を、ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ｐｒｉｍｅｒにａｇａｇｔａａａｃａａａｇｃｃａａｃａｃｔｔｔｔ（配列番号：６７）をそれぞれ２ｐｍｏｌ／１０μｌ用いた。ＰＣＲにおいては９５℃・１０分のｐｒｅ−ＰＣＲ　ｈｅａｔサイクルの後、９４℃・　１分、５８℃・１分で４５サイクル増幅し、その後６０℃・１０分の最終サイクルを行った。２％アガロースゲルで増幅産物を泳動し、予想された４６１ｂｐの位置に単一バンドを確認した後、このＰＣＲ産物をＴＡ−ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｋｉｔ　（ｐｒｏｍｅｇａ社）を用いてｐＧＥＭ−Ｔ　Ｅａｓｙ　Ｖｅｃｔｏｒに組み込んだ。このプラスミドをＸＬ２　Ｂｌｕｅ　（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社）に導入し、ｗｈｉｔｅ−ｂｌｕｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎを行い、ｒａｔ　ＰｒＲＰ　ｃＤＮＡ断片をクローニングした。この正方向もしくは逆方向に組み込まれたｒａｔ　ＰｒＲＰ　ｃＤＮＡ断片　（４６１ｂｐ）を含むプラスミドをＳｐｅＩを用いて直鎖化し、ＤＩＧ−ＲＮＡラベリングキット（Ｒｏｃｈｅ社）のプロトコールに従ってＴ７　ＲＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅにてａｎｔｉｓｅｎｓｅもしくはｓｅｎｓｅのＤＩＧ標識ｃＲＮＡ　ｐｒｏｂｅを作製した。
Ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎにはフリーフローティング法を使用した。まずｃｒｙｏｍｉｃｒｏｔｏｍｅを用いて４０ｍｍの厚さの前頭断凍結切片を作製した。つぎに切片を４×ＳＳＣ　（ＳＳＣ；　１×ＳＳＣ　＝　１５０ｍＭ　ＮａＣｌ，　１５ｍＭクエン酸ナトリウム，　ｐＨ７．０）で洗浄した後、１μｇ／ｍｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　Ｋを含む１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　／　１ｍＭ　ＥＤＴＡ　（ｐＨ　８．０）処理　（３７度・１５分）にてプロテアーゼ処理を行った。さらに、０．２５％無水酢酸を含む０．１Ｍトリエタノールアミン　（ｐＨ　８．０）による処理　（室温・１０分）にてアセチル化を行った後、ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒ　（５０％ホルムアミド，　３×ＳＳＣ，　０．１２Ｍリン酸緩衝液　（ｐＨ　７．４），　１×Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，　０．１２５ｍｇ／ｍｌ酵母ｔＲＮＡ，　０．１ｍｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ，　１０％デキストラン硫酸）による処理　（６０℃・２０分）にてｐｒｅ−ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ反応を行った。Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ反応には、１−１００ｎｇ／μｌのａｎｔｉｓｅｎｓｅもしくはｓｅｎｓｅ　ｐｒｏｂｅをｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｂｕｆｆｅｒに希釈し、８５度で３分変性した後、切片に加え６０度で１２時間以上反応させた。引き続き、非特異的にｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎしたｐｒｏｂｅを洗浄するため以下の操作を行った。１）　２×ＳＳＣ／５０％ホルムアミド処理　（６０℃・１５分　２回）、　２）　ＴＮＥ　（０．５Ｍ　ＮａＣｌ，　１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　（ｐＨ７．６），　１ｍＭ　ＥＤＴＡ）処理　（３７℃・１０分）、　３）　２０μｇ／ｍｌ　ＲＮａｓｅ　Ａ　ｉｎ　ＴＮＥ処理　（３７℃・３０分）、　４）　ＴＮＥ処理（３７℃・１０分）、　５）　２×ＳＳＣ処理　（６０℃・１５分　２回）、　６）　０．５×ＳＳＣ処理　（６０℃・１５分　２回）。以上の操作を行った後、ＤＩＧ標識ｐｒｏｂｅを検出するための免疫組織化学を行った。まず、ＤＩＧ−１　（１００ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　ｐＨ　７．５，　１５０ｍＭ　ＮａＣｌ，　０．１％　Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した後、１．５％　Ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｒｅａｇｅｎｔ　（Ｒｏｃｈｅ社）を含む　ＤＩＧ−１による処理（１時間）にて非特異反応のブロッキングを行い、ａｎｔｉ−ＤＩＧ　ｆａｂ−ｆｒａｇｍｅｎｔ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ａｌｋａｌｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　（Ｒｏｃｈｅ社）を含む　ＤＩＧ−１　（１：１０００）を３７度で２時間反応させた。ＤＩＧ−１で十分洗浄した後、ＤＩＧ−３　（１００ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　ｐＨ　９．５，　１００ｍＭ　ＮａＣｌ，　５０ｍＭ　ＭｇＣｌ２）でリンスし、３３７μｇ／ｍｌ　４−ｎｉｔｒｏｂｌｕｅ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　（ＮＢＴ）および１７５　ｍｇ／ｍｌ　　５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　（ＢＣＩＰ）を含むＤＩＧ−３　１ｍｌによって、室温にて発色反応を行った。適時に発色をＰＢＳ洗浄により止めた後、切片をスライドガラスに載せ、９０％グリセロールを含むＰＢＳで封入し、光学顕微鏡で観察した。
無処置ラットでは延髄の最後野にＰｒＲＰのｍＲＮＡ発現は認められなかったが、副腎処理ラットではＰｒＲＰのｍＲＮＡ発現が検出された。
【００７３】
実施例２　正常ラットのＰｒＲＰ受容体（ＵＨＲ−１）のｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
Ｗｉｓｔａｒ系成熟雄ラットをｓｏｄｉｕｍ　ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ　（５０ｍｇ／ｋｇ，　ｉｐ，　大日本製薬）にて十分に麻酔し、速やかに脳を摘出後、４％パラホルムアルデヒド（ナカライテスク）を含む０．１Ｍリン酸緩衝液　（ｐＨ　７．４）で２４時間浸漬固定した後、３０％ショ糖を含むＰＢＳに２日以上浸漬し、ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ用の試料とした。ＵＨＲ−１　（ラットＰｒＲＰ受容体）　ｍＲＮＡに対するＤＩＧ標識ｃＲＮＡ　ｐｒｏｂｅの作製は、以下の様に行った。Ｆｕｌｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ＵＨＲ−１　ｃＤＮＡ　（１−１１１６）をｐＣＲ　ＩＩ　ＴＯＰＯ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）にサブクローニングした。このＵＨＲ−１　ｃＤＮＡを含むプラスミドをＢａｍＨＩもしくはＸｈｏＩを用いて直鎖化し、ＤＩＧ−ＲＮＡラベリングキット　（Ｒｏｃｈｅ社）のプロトコールに従ってＴ７もしくはＳｐ６ＲＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅにてそれぞれａｎｔｉｓｅｎｓｅ、ｓｅｎｓｅのＤＩＧ標識ｃＲＮＡ　ｐｒｏｂｅを作製した。これらのｐｒｏｂｅを４０ｍＭ　ＮａＨＣＯ３　／　６０ｍＭ　Ｎａ２ＨＣＯ３（ｐＨ　１０．２）でそれぞれ６０℃・５３分アルカリ加水分解し、１５０ｂｐに断片化した。Ｉｎ　ｓｉｔｕ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎは実施例１と同様の方法で行った。
ＵＨＲ−１　ｍＲＮＡシグナルは、延髄の最後野に検出されたことから、延髄最後野は、ＵＨＲ−１が存在し、ＰｒＲＰが生理的に作用していると考えられる。
【００７４】
実施例３　正常ラットおよび副腎摘出ラットでの延髄最後野における免疫組織染色によるＰｒＲＰ免疫活性の検出
実施例１と同様に無処置ラットおよび副腎摘出ラットの脳を摘出後、５％アクロレイン（東京化成工業）を含む０．０７Ｍリン酸緩衝液　（ｐＨ　７．４）で浸漬固定した。次に３０％ショ糖を含むリン酸緩衝食塩水　（ＰＢＳ）に２日以上浸漬した。免疫組織化学にはフリーフローティング法を使用した。まずｃｒｙｏｍｉｃｒｏｔｏｍｅを用いて６０ｍｍの厚さの前頭断凍結切片を作製した。次に切片をＰＢＳに浸して洗浄および浸水化させた後、内因性のペルオキシターゼ活性を０．５％メタ過ヨウ素酸ナトリウムを含むＰＢＳによる処理　（２０分）にて失活させ、アルデヒド基を１％水素化ホウ素ナトリウムを含むＰＢＳによる処理　（２０分）にて還元した。さらに１％正常ウマ血清および０．４％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００　を含むＰＢＳ　（ＴＮＢＳ）による処理　（１時間）にて非特異反応のブロッキングを行った。ＰｒＲＰの局在はａｖｉｄｉｎ　ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ−ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ−ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　（ＨＲＰ）　ｃｏｍｐｌｅｘ　（ＡＢＣ）法　（Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社）で可視化した。すなわち、切片をＰｒＲＰの部位特異的モノクローナル抗体であるＰ２Ｌ−１Ｃａ（４０μｇ／ｍｌ）もしくはＰ２Ｌ−１Ｔａ（８０μｇ／ｍｌ）（いずれもＷＯ９９／６０１１２参照）を含むＴＮＢＳと室温で１２時間以上反応させ、ＰＢＳで十分洗浄した後、ｂｉｏｔｉｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ｄｏｎｋｅｙ　ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅＩｇＧ　（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社）　を含むＴＮＢＳ　（１：３００）と室温で２時間反応させた。　ＰＢＳで十分洗浄後、ＡＢＣと室温で３０分間反応させ、その後基質として０．０２％　３，３−ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ　（同仁化学研究所）および０．００６％　Ｈ２Ｏ２を含む５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　（ｐＨ　７．６）で発色反応を行った。発色をＰＢＳ洗浄により止めた後、切片をスライドガラスに載せ、脱水・キシレンによる透徹を行いエンテラン　（Ｍｅｌｃｋ社）に封入し、光学顕微鏡で観察した。
無処置ラットでは、延髄最後野ではＵＨＲ−１のｍＲＮＡ発現部位にＰｒＲＰ陽性繊維の投射は見られるが産生細胞体は検出されなかった。しかし、副腎摘出ラットでは、ＰｒＲＰ産生細胞体が２３．４±１３．１（平均値±標準誤差）個出現した（図１）。以上のように、副腎摘出により延髄最後野においてＰｒＲＰ細胞体の出現が見られることから、延髄最後野においてＰｒＲＰが副腎機能の一端を担っていることが示唆された。
【００７５】
実施例４　新生仔ラットの延髄最後野における免疫組織染色によるＰｒＲＰ免疫活性の検出
Ｗｉｓｔａｒ系成獣ラットを交配することにより生まれた新生仔ラットの延髄最後野でのＰｒＲＰ陽性細胞体を実施例３と同様の方法で免疫染色を行った。その結果、生後１４日目より１０　±４．７個（ｎ＝４）細胞体が検出され、１５日目で５８　±３１個　（ｎ＝３）、１６日目で７２　±７．５個（ｎ＝３）、１７日目で７５　±３８個（ｎ＝３）が検出された。しかし、１８日目以降はＰｒＲＰ細胞体は検出されなかった（図２）。値は、平均値±標準誤差を示す。
以上のように、母乳を主たる栄養分としている新生仔ラットでも延髄最後野においてＰｒＲＰ細胞体の出現が認められたことから、ＰｒＲＰは体内の水分調節に関与していることが示唆された。
【００７６】
実施例５　ラット副腎初代培養細胞系でのアドレナリン産生細胞における免疫組織染色によるＰｒＲＰ免疫活性の検出
ラット副腎初代培養細胞を以下の方法で作製した。Ｗｉｓｔａｒ系成熟雄ラットより副腎を摘出し、ハンクス溶液（１２３　ｍＭ　ＮａＣｌ，　５　ｍＭ　ＫＣｌ，　０．４　ｍＭ　Ｎａ２ＨＰＯ４，　４　ｍＭ　ＮａＨＯ３，　５ｍＭ　ｇｌｕｃｏｓｅより構成）に浸し、０．２５％　コラゲナーゼタイプＩ（シグマ社）で３７℃、２０分間処理後、０．２５％トリプシンおよび０．１　Ｕ／ｍｌ　ＤＮａｓｅ　Ｉでさらに３７℃、２０分間処理した。酵素処理後、細胞にウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加し、ポアサイズ１００　μｍのフィルターにより組織片を除去後、細胞懸濁液を２００ｇ、５分間遠心分離して酵素液を分離し細胞と分離した。得られた細胞群を１０％ウマ血清（Ｇｉｂｃｏ社）と２．５％ウシ胎児血清を含むＨａｍ’ｓ　Ｆ−１２倍地（Ｇｉｂｃｏ社）とＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　ＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ　培地（Ｇｉｂｃｏ社）の等量混和培地に懸濁し副腎初代培養細胞とした。５％ＣＯ２存在下で４日間培養後、培養液を除去しＰＢＳにて洗浄後１０％ホルマリンを含むＰＢＳにて３０分間固定を行った。細胞をＰＢＳで洗浄後、１％正常ウマ血清と０．４％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘを含むＰＢＳ（ＴＮＢＳ）にて１時間反応させた。抗ＰｒＲＰモノクローナル抗体Ｐ２Ｌ−１（２　μｇ／ｍｌ）、抗ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ（ＴＨ）抗体（２０００倍希釈、シグマ社）、抗ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ　Ｎ−ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＰＮＭＴ）抗体（１０００倍希釈、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社）を一次抗体として室温で２４時間反応させた。二次抗体としてＡｌｅｘａ４８８標識化ヒツジ抗マウスＩｇＧ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅ社）とＡｌｅｘａ５９４標識化ヒツジ抗ウサギＩｇＧ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅ社）を反応後、共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。その結果、全てのＰｒＲＰ陽性細胞はＴＨ陽性細胞およびＰＮＭＴ陽性細胞と一致して存在した。これらの結果から、ＰｒＲＰは副腎のアドレナリン産生細胞と共存して存在することが明らかとなり、ＰｒＲＰは副腎においてアドレナリン分泌を制御し血圧および血糖値をコントロールすることが示唆された。
【００７７】
【発明の効果】
ＰｒＲＰまたはＰｒＲＰ受容体、およびそれらをコードするＤＮＡは水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節作用を有しており、高血圧、糖尿病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖などの予防・治療剤として有用である。
また、ＰｒＲＰ受容体またはＰｒＲＰは、高血圧、糖尿病、低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧、低血糖などに対して予防・治療効果のあるＰｒＲＰ受容体アゴニストや高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧、糖尿病に対して予防・治療効果のあるＰｒＲＰ受容体アンタゴニストのスクリーニングに有用である。
【００７８】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】副腎摘出ラットにおける延髄最終野でのＰｒＲＰ産生細胞体の数を示す。縦軸のＰｒＲＰ−ｉｒ　ｃｅｌｌ　ｎｕｍｂｅｒ（ｃｅｌｌｓ／ＡＰ）は延髄最後野当たりのＰｒＲＰ産生細胞体の数を示す。横軸のｃｏｎｔは無処理ラットを、ＡＤＸ（１Ｗ）は副腎摘出１週間後のラットを示す。
【図２】新生仔ラットにおける延髄最終野でのＰｒＲＰ産生細胞体の数を示す。縦軸は細胞数を示す。横軸は生後の日数を示す。

Claims (45)

  1. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  2. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  3. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  4. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  5. ペプチドが（ｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、（ｉｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列からなるペプチド、（ｉｉｉ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が付加したアミノ酸配列からなるペプチド、（ｉｖ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列に１〜５個のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列からなるペプチド、（ｖ）配列番号：２〜２７のいずれかの配列番号で表されるアミノ酸配列中の１〜５個のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列からなるペプチド、または（ｖｉ）上記（ｉｉ）〜（ｖ）の欠失・付加・挿入・置換を組み合わせたアミノ酸配列からなるペプチドである請求項１〜４記載の剤。
  6. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤。
  7. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  8. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  9. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤。
  10. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  11. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  12. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  13. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  14. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  15. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  16. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  17. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  18. レセプター蛋白質が配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質である請求項１６または１７記載の剤。
  19. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  20. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  21. ＤＮＡが配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列からなるレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡである請求項１９または２０記載の剤。
  22. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤。
  23. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  24. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  25. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、低血圧、低血糖、高血圧または糖尿病の診断剤。
  26. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  27. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  28. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニストを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  29. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニストを含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  30. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  31. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニストを含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  32. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  33. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩を含有してなる低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤。
  34. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤。
  35. 配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩を含有してなる高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤。
  36. 哺乳動物に対して、
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節方法。
  37. 哺乳動物に対して、
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療方法。
  38. 哺乳動物に対して、
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節方法。
  39. 哺乳動物に対して、
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の有効量を投与することを特徴とする高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療方法。
  40. 水分または浸透圧の調節剤を製造するための
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２または配列番号：２３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用。
  41. 低ナトリウム血症、抗利尿ホルモン分泌不適症候群（ＳＩＡＤＨ）、低血圧または低血糖の予防・治療剤を製造するための
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２または配列番号：２３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を増加させる化合物またはその塩の使用。
  42. 水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節剤を製造するための
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用。
  43. 高ナトリウム血症、中枢性尿崩症、多尿、代謝性アルカリローシス、低カリウム血症、クッシング症候群、高血圧または糖尿病の予防・治療剤を製造するための
    （ｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する抗体、
    （ｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｉｉｉ）配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩、
    （ｉｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、
    （ｖ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的な塩基配列またはその一部を含有するアンチセンスＤＮＡ、
    （ｖｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩に対するアンタゴニスト、または
    （ｖｉｉ）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質またはその部分ペプチドの発現量を減少させる化合物またはその塩の使用。
  44. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬のスクリーニング方法。
  45. 配列番号：１で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、および（または）配列番号：５４、配列番号：５５、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：５９で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するレセプター蛋白質、その部分ペプチドまたはその塩を含有してなる水分、浸透圧、アドレナリン分泌、血圧または血糖の調節薬のスクリーニング用キット。
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