JP2004067538A - 経口線溶酵素剤 - Google Patents

Abstract

【課題】新規な経口線溶酵素剤を提供すること。
【解決手段】納豆菌の生菌を経口線溶酵素剤として使用する。

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、経口線溶酵素剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
我々は１９８０年、世界で初めてそれまで静注薬であったウロキナーゼをヒトに経口投与しても血中線溶発現が可能であることを認めて以降（Ｈ．　Ｓｕｍｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｒｏｍｂ．　Ｒｅｓ，　２０：　７１１，　１９８０）、その線溶発現の機序を検討（Ｈ．　Ｓｕｍｉ　ｅｔａｌ．，　Ｅｎｚｙｍｅ，　３３：　１２１，　１９８５；　Ｊ．　Ｃｌｉｎ．　Ｉｎｖｅｎｔ．，　７５：　１２１２，　１９８５；　Ｂｌｏｏｄ，　６６：　６９，　１９８５）、あるいは経口化により適した線溶酵素の検索を行い、漢方薬である地竜（ミミズ）（Ｈ．　Ｓｕｍｉ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｏｍｐ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｐｈｙｓｉｏｌ，　１０６Ｂ：　７６３，　１９９３；　Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ，　５７：　１７２６，　１９９３）、カツオの塩辛（Ｈ．　Ｓｕｍｉ　ｅｔ　ａｌ．：　Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｐｈｙｓｉｏｌ，　１１２Ｂ：　５４３，　１９９５）、インドネシアの伝統食品であるテンペ（須見ら，生化学，６１：　８３４，　１９８９；　月刊フードケミカル、１２：　７２，　１９９０；　日農化誌、７１：　２３４，　１９９７）、あるいは我が国の伝統食品である納豆中に新しい酵素を発見した（Ｈ．　Ｓｕｍｉ　ｅｔ　ａｌ．：　Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ，　３：　１１１０，　１９８７）。
【０００３】
特に納豆から分離されたナットウキナーゼは分子当りの線溶活性が最も高く、また食品由来で安全性も高いと考えられ経口投与で長時間血液中の線溶活性を高め血栓溶解に働くことから（Ｈ．　Ｓｕｍｉ　ｅｔ　ａｌ．：　Ａｃｔａ　Ｈａｅｍａｔｏｌ，　８４：　１３９，　１９９０；　須見、植物資源の生理活性物質ハンドブック４、納豆キナーゼ、ｐ．５７９、谷村監修、サイエンスフォーラム、１９９８；　Ｈ．　Ｓｕｍｉ．：　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｎ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈｙ　Ｎａｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ，　ｐ．９８，　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，　２０００；須見、日本微生物資源学会、第８回大会講演要旨集、ｐ．１５（東京農業大学）、２００１）、最近は「血の巡り」改善目的の健康食品としても実用化されつつある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、新規な経口線溶酵素剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
納豆菌の生菌を経口線溶酵素剤として使用する。
【０００６】
【発明の実施の形態】
目黒研究所（大阪）より提供された納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ｎａｔｔｏ　ＢＮ−１）を用いて納豆菌の経口投与実験を行った。即ち、この菌の乾燥粉末　生菌数４×１０^１１ｃｅｌｌｓ　／ｇ　ｄｒｙ　ｗｅｉｇｈｔ　の経口投与による血中線溶発現を血栓モデルのラットおよび健常人で検討した。
【０００７】
なお、ヒトへの納豆菌の投与実験はヘルシンキ条約に従い、血液学的に異常のない健常ボランティアーで行った。その際の血漿Ｅｕｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｌｙｓｉｓ　Ｔｉｍｅ（ＥＬＴ）は既報^{２ ）}の如く、また血中ｔ−ＰＡ活性はＳｔｅｐｈｅｎらの方法^{１５ ）}でプラスミノーゲンの活性化で生じたプラスミンのＨ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ｐＮＡ分解能を国際単位（ＩＵ）に換算して表示した^{１５ ）}。
【０００８】
（１）血栓症動物への投与実験
ラットへ乳酸１．５ｇ／ｋｇを２時間持続点滴することによって正常動物には見られない血栓数の増加が確認された（８３．１±５．５／５葉）。しかし、この時点で前もって納豆菌を経口投与しておくと血栓数は有意に減少することが分かった（表３）。その他、本実験動物での血液検査も調べてみたが、血漿ＥＬＴの延長傾向は、未投与ラットで　２３０±１８ｍｉｎ　であるのに対して　５０ｍｇ／ｋｇ　の納豆菌投与で　３８０±２３ｍｉｎ、２００ｍｇ／ｋｇ　の納豆菌投与群では　２６８±２１ｍｉｎ　が見られた。
【０００９】
表１：実験的肺塞栓症及びラットへの納豆菌の経口投与

【００１０】
表１中の数字は、平均±標準偏差値（雄、ｎ＝５−８）、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１：コントロール群との有意差を示す。
【００１１】
（２）健常ヒトでの摂取実験
成人ボランティアが同じ納豆菌を１００ｍｇ／ｋｇ摂取して１−４時間目には血漿ＥＬＴの短縮、およびｔ−ＰＡ活性の上昇が見られることが分かった（表２）。
【００１２】
表２：納豆菌の経口投与によって生じる血中線溶活性の変化

ＥＬＴ：ユーグロブリン溶解時間
ｔ−ＰＡ：組織プラスミノーゲンアクチベーター
【００１３】
表２に示す実験においては、健常成人に体重ｋｇ当り１００ｍｇの納豆菌を摂取させた。また、表中の数値は、平均±標準偏差値。＊ｐ＜０．０５：コントロール群との有意差を示す。
【００１４】
その他、実験動物及びヒトでの血液中の凝固活性をカルシウム再加時間及びプロトロンビン時間で調べてみたが、共に投与前後で有意の変化は見られなかった。ここで、血液凝固系としては、クロットデジタムＴＥ−２０（エルマ光学）を用い、血漿０．２ｍｌと５０ｍＭＣａＣｌ_２０．１ｍｌをセル内に添加してカルシウム再加凝固時間を、またセル内に血漿０．１ｍｌとリオプラスチン（持田製薬５ｍｇ／ｍｌ）０．２ｍｌをセル内に添加してプロトロンビン時間を測定した。
【００１５】
以上のように、納豆菌（生菌）を肺血栓モデルのラットに対して経口投与すると血栓数の減少が認められること、またヒトボランティアーにおいてもＥＬＴの短縮及びｔ−ＰＡ活性の上昇が見られることなど、納豆菌にはｉｎ−ｖｉｖｏで血中線溶亢進を高める作用のあることが示された。
【００１６】
以下、本発明について考察する。古くから我が国では納豆の効能が知られているが、血中線溶系への影響に関しては全てナットウキナーゼ発見以降のことである。さらに最近は納豆中にｐｒｏ−ＵＫ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ^{１７ ）}、あるいはＦＡＳ^{１８ ）}など他の線溶関連因子が存在することも証明されているが、いずれにせよ生きた納豆菌そのものによる血液線溶系の亢進は初めてである。今回の成績は、納豆菌に関するこれまでの小沢らの消化管モデルでの実験^{１９ ）}、ブタでの投与実験^{２０ ）}、あるいは最近の我々の血中ビタミンＫ濃度に及ぼす影響実験^{２１ ）}などを考え合わせると、納豆菌が消化管内で作り出すナットウキナーゼも生理的に血中線溶発現に働き得ると言える。
【００１７】
以上、本発明の実施例（実施形態、実施態様）について説明したが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではなく、特許請求の範囲に示された技術的思想の範疇において変更可能なものである。例えば、納豆菌の生菌に他の物質を混合することによって経口線溶剤を構成することも可能である。
【００１８】
引用文献
１）　Ｓｕｍｉ，　Ｈ．，　Ｈａｍａｄａ，　Ｈ．，　Ｔｓｕｓｈｉｍａ，　Ｈ．，　Ｍｉｈａｒａ，　Ｈ．，　Ｍｕｒａｋｉ，　Ｈ．：　Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ　ｅｎｘｙｍｅ　（ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ）　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　ｃｈｅｅｓｅ　ｎａｔｔｏ，　ａ　ｔｙｐｉｃａｌ　ａｎｄ　ｐｏｐｕｌａｒ　ｆｏｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｊａｐａｎｅｓｅ　ｄｅｉｔ．　Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ，　４３：　１１１０−１１１１，　１９８７．
２）　Ｓｕｍｉ，　Ｈ．，　Ｈａｍａｄａ，　Ｈ．，　Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，　Ｋ．，　Ｈｉｒａｔａｎｉ，　Ｈ．：　Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ｏｒａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ．　Ａｃｔａ　Ｈａｅｍａｔｏｌ，　８４：　１３９−１４３，　１９９０．
３）　須見洋行、中島伸佳、田谷直俊、：　血栓溶解酵素ナットウキナーゼの活性測定法、日本醸協誌、８８：　４８２−４８６，１９９３．
４）　須見洋行、納豆キナーゼ、植物資源の生理活性物質ハンドブック、谷村顕雄監修、ｐ．５７９−５８３、サイエンスフォーラム、東京、１９９８．
５）　須見洋行、納豆の機能成分と応用商品、Ｆｏｏｄ　Ｓｔｙｌｅ　２１，　３：　３７−４０，１９９９．
６）　須見洋行、納豆由来の機能成分の研究、デイリーフード、２９６：　２５−３０，　２０００．
７）　西村慶子、浜本順次、安達和彦、山崎厚志、高木茂、玉井嗣彦、納豆食が奏効したと思われる切迫期網膜中心静脈閉塞症、眼科臨床医報、８８：１３８１−１３８５，　１９９４．
８）　フーズパイオニア編集、納豆沿革史、全国納豆協同組合連合会、東京１９７５．
９）　折茂肇、骨粗鬆症についての最近の知見、日本医事新報、３９６７：　１−１１，　１９９６．
１０）　須見洋行、納豆菌発酵、及び納豆摂取時の被験者の血液中のビタミンＫ（メナキノン−７）濃度、日本家政誌、５０：　３０９−３１２，　１９９９．
１１）　Ｈｏｓｏｉ，　Ｔ．，　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，　１７：　３１５−３２１，　２００１．
１２）　Ｓｕｍｉ，　Ｈ．：　Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｋ　（ｍｅｎａｑｕｉｎｏｎｅ−７）　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎａｔｔｏ　ａｎｄ　ｎａｔｔｏ　ｂａｃｉｌｌｕｓ　（Ｂ．　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ｎａｔｔｏ）．　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ．　Ｔｅｃｈｎｏｌ．　Ｒｅｓ．，　５：　４８−５０，１９９９．
１３）　Ｓｕｍｍａｒｉａ，　Ｌ．；　Ａｒｚａｄａｎ，　Ｌ．；　Ｂｅｒｎａｂｅ，　Ｐ．；　Ｒｏｂｂｉｎｓ，　Ｋ．Ｃ．：　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ　ｔｏ　ｐｌａｓｍｉｎ　ｂｙ　ｕｒｏｋｉｎａｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｌａｓｍｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｔｒａｓｙｌｏｌ．　Ｊ．　ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２５０：　３９８８−３９９５，　１９７５．
１４）　Ｔｏｍｉｋａｗａ，　Ｍ．，　Ｏｇａｗ，　Ｈ．　ａｎｄ　Ａｂｉｋｏ，　Ｙ．：　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　ｉｎ　ｒａｔ．　Ｔｈｒｏｍｂ．　Ｄｉａｔｈ．　Ｈａｅｍｏｒｒｈ，　３１：　８６−１０２，　１９７４．
１５）　Ｋｏｈ　Ｓｔｅｐｈｅｎ　ＣＬ，　Ｙｕｅｎ　Ｒ，　Ｖｉｅｇａｓ　ＯＡＣ，　Ｃｈｕａ　ＳＥ，　ＮｇＢＬ，　Ｓｅｎ　ＤＫ，　Ｒａｔｎａｍ　ＳＳ．：　Ａ　ｐｌａｓｍｉｎ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅ　ａｃｔｉｖａｔｅｒ　（ｔ−ＰＡ）　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，　６７：　１９７−２０３，　１９８９．
１６）　須崎兼孝、納豆菌に関する実験的研究、目黒研究所報告，５：　２４１−３０７，１９６０．
１７）　須見洋行、馬場健史、岸本憲明、納豆中のプロウロキナーゼ活性酵素と血栓溶解能、食科工、４３：１１２４−１１２７，　１９９６．
１８）　須見洋行、佐々木智広、矢田貝智恵子、小崎泰宣、納豆中に含まれる線溶賦活物質とその性質、日本農化誌、７４：１２５９−１２６４，　２０００．
１９）　Ｏｚａｗａ，　Ｋ．，　Ｙａｂｕｕｃｈｉ，　Ｋ．，　Ｙａｍａｎａｋａ，　Ｋ．，　Ｙａｍａｓｈｉｔａ，　Ｙ．，　Ｕｅｂａ，　Ｋ　ａｎｄ　Ｍｉｗａｔａｎｉ，　Ｔ．：　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｎａｔｔｏ　ａｎｄ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　Ｆａｅｃａｌｉｓ　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ，　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　２３：　１１４７−１１５６，　１９７９．
２０）　木村誠、小沢恭輔、横田弘、光岡知足、離乳豚の腸内菌に及ぼす納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　）　　ＢＮ株投与の影響，獣医畜産新報、７３３：　１２−１８，　１９８２．
２１）　Ｓｕｍｉ，　Ｈ．，　Ｏｈｓｕｇｉ，　Ｔ．，　Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，　Ｙ．，　Ｓａｉｔｏ，　Ｊ．：　Ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｋ　（ｍｅｎａｑｕｉｎｏｎｅ−７）　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｎａｔｔｏ　ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ，Ａｎｎ　Ｎｕｔｒ　　Ｍｅｔａｂ，　４５（ｓｕｐｐｌ　１）：　１１３，　２００１．

Claims (2)

1. 納豆菌の生菌を含有することを特徴とする経口線溶酵素剤。
2. 前記納豆菌を主成分として含有することを特徴とする経口線溶酵素剤。