JP2003528851A - セラミド誘導体と使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 セラミド誘導体、セラミド誘導体を含有する製薬学的組成物、および疾患等の治療薬としてのセラミド誘導体の治療用途を提供する。 【解決手段】 式（Ｉ）、 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 ［技術分野］ 本発明は、セラミド誘導体と、セラミド誘導体を含有する製薬学的組成物と、
癌、糖尿病などの代謝性疾患、炎症状態およびウィルス感染症の治療薬としての
セラミド誘導体の治療用途とに関する。

【０００２】 ［背景技術］ セラミドは、スフィンゴミエリンの細胞内加水分解によって通常形成されるク
ラスの天然型スフィンゴ脂質であり、全ての動物細胞に見られる。スフィンゴ脂
質の代謝物は、おそらく第一または第二メッセンジャーとして信号伝達および細
胞調節に関与する。セラミドは、直接の標的だけでなく、作用機序も十分に理解
されていないが、セラミドが、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、Ｆａｓリガン
ド、電離放射線および化学療法剤によって誘発されるアポトーシスの通常の成分
として重要な役割を果たすことを示唆するいくつかの証拠がある。細胞内セラミ
ドは、多種多様の細胞系においてアポトーシスが誘発されている際に上昇してお
り、細胞透過性セラミド類似物を添加すると多数の細胞系統においてアポトーシ
スが誘発され、セラミド生成がアポトーシス反応において直接的な役割を果たし
ているという証拠となっている。

【０００３】 アポトーシスは、膜結合粒子への断片化により細胞死を生ずるプログラムされ
た事象をいい、これらの粒子は次いで他の細胞によって貪食される（例えば、Ｓ ｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（Ｉｌｌｕｓｔｒａ ｔｅｄ ）参照）。細胞は、典型的には、自己反応性Ｔ細胞の排除、半減期が短い
細胞（例えば、好中球）の死、成長因子枯渇細胞の退行、胚発生中の形態形成細
胞の死および細胞性細胞毒性の細胞標的の死などの生理的に決定された環境にお
いてアポトーシスを受ける（例えば、Ｊ．Ｃｏｈｅｎ， Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏ
ｄａｙ，１４（３）：１２６−１３０（１９９３）参照）。

【０００４】 アポトーシスを受ける細胞は、膜を保持し、浸透圧を調節することができる細
胞断片であるアポトーシス小体に細分化することができる。壊死細胞とは異なり
、細胞内容物は漏洩せず、炎症応答は発生しない。アポトーシス細胞は、典型的
には、分裂した細胞質膜と凝縮して分裂した核を有する。これらの細胞における
核染色質は、アポトーシス中のエンドヌクレアーゼ活性化の結果としてヌクレオ
ソーム間において無作為に断片化される。

【０００５】 アポトーシス細胞の転写は停止するが、転写のみの停止から予測されるより迅
速に細胞死は生ずる。これは、転写の停止以外の細胞過程がアポトーシスに関与
している可能性があることを示している。遺伝子発現自体は、実際にはアポトー
シスに関連する形態変化の発生に必要となる場合がある（Ｊ．Ｃｏｈｅｎ、上記
参照）。または、転写停止の阻止自体がアポトーシスを誘発することがある。さ
らに、いくつかの細胞のアポトーシスは、どのみち蛋白質合成の阻止によって影
響されるとは思われない。ｂｃｌ−２発癌遺伝子の発現は、例えば、別の刺激に
よって誘発されるアポトーシスを阻害することができ、癌発生に寄与する可能性
がある。従って、ｂｃｌ−２発現の阻害がアポトーシスを誘発するのに必要にな
ることがある（例えば、Ｊ．Ｍａｒｘ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：７６０−７６１
（１９９３）；Ｊ．Ｃｏｈｅｎ，上記；Ｇ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｃ．Ｓ
ｍｉｔｈ，Ｃｅｌｌ７４：７７７（１９９３）；Ｍ．Ｂａｒｉｎａｇａ，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ２５９：７６２（１９９３年２月５日）参照）。Ｃ−ｍｙｃ蛋白質は細
胞増殖を刺激することが知られているが、追加の増殖刺激が存在しない場合には
アポトーシスを刺激することもある。ｐ５３は腫瘍の増殖を抑制すると考えられ
ており、これもまたアポトーシスを刺激することがある。腫瘍壊死因子（ＴＮＦ
）に相同な膜貫通蛋白質であるＣ−ｆａｓも、ＴＮＦ自体と同様にアポトーシス
を誘発できる。

【０００６】 ＴＮＦは、単球およびマクロファージによって産生されるモノカイン蛋白質で
ある。ＴＮＦ蛋白質は、構造的および機能的に関連のある２つの周知の、ＴＮＦ
−αおよびＴＮＦ−βが存在し、共に同じ細胞表面受容体に結合する。ＴＮＦが
これらの受容体に結合すると、スフィンゴミエリナーゼの活性化を含む多数の信
号伝達経路が活性化される（例えば、Ｍ．Ｒａｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８（２０）：１４５７２（１９９３）；Ｌ．Ｏｂｅｉｄ
ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９：１７６９（１９９３年３月１２日）；
Ｈ．Ｍｏｒｉｓｈｉｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａ
ｃｔａ．１１５１：５９（１９９３）；Ｊ．Ｖｉｌｃｅｋ ａｎｄ Ｔ． Ｌｅ
ｅ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６（１２）：７３１３（１９９１）；Ｄｂａ
ｉｂｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８（２４）：１７７６２
（１９９３）；Ｒ．Ｋｏｌｅｎｓｎｉｋ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ． ２ ：２３２（１９９２）；Ｊ．Ｆｉｓｈｂｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２６８（１３）：９２５５（１９９３）参照）。

【０００７】 一般に、アポトーシスは、２段階、つまり最初の約束段階（ｃｏｍｍｉｔｍｅ
ｎｔ ｐｈａｓｅ）と次の核染色体の凝縮、DNAの断片化および細胞膜への変化
を生ずる執行段階で生じる。システインプロテアーゼの１ファミリーであるカス
パーゼは、アポトーシスの実行段階において重要な役割を果たし、前アポトーシ
スシグナルに応答して惹起されるカスケードおよび細胞を分解に導く細胞内基質
の切断に関与する。カスケード内の機能に基づいて、カスパーゼは２つのカテゴ
リー、イニシエーターとエフェクターに分類することができる。カスパーゼ８お
よび９などの異なるイニシエーターカスパーゼは別個のシグナルを仲介する。カ
スパーゼ８は、Ｆａｓ受容体のデスエフェクタードメインＤＥＤおよび補助因子
ＦＡＤＤ（Ｆａｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｄｅａ
ｔｈ ｄｏｍａｉｎ）に結合する。カスパーゼ９の活性化には、チトクロームc
、ｄＡＴＰおよびＡＰＡＦ−１などのいくつかの補助因子が必要であり、カスパ
ーゼリクルートメントドメイン（ｃａｓｐａｓｅ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｄ
ｏｍａｉｎ（ＣＡＲＤ）を介する。スフィンゴ脂質誘発性アポトーシスを防止す
るカスパーゼ阻害剤を使用したカスパーゼカスケード中のセラミドの役割に関す
るいくつかの証拠は、セラミド形成がアポトーシスの執行段階に関連することを
示唆している。セラミドの細胞レベルを調節することは、細胞調節およびアポト
ーシスを調節する有用な方法となるだろう。

【０００８】 セラミド濃度の増加がアポトーシスを刺激することができることは以前に報告
されている。セラミドは、スフィンゴシンのようなスフィンゴイド塩基の脂肪酸
誘導体を含有するクラスのスフィンゴ脂質である（例えば、Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ
Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ（Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ），２４ｔ
ｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊ．Ｖ．Ｂａｓｍａｊｉａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ），
Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８２）
，ｐ．９９参照）。異なるセラミド間の特徴は、異なる脂肪酸がスフィンゴイド
塩基に結合することによる。例えば、ステアリン酸はスフィンゴシンのアミド基
に結合して、セラミドＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ（ＣＨ₂Ｏ
Ｈ）−ＮＨ−ＣＯ−（ＣＨ₂）₁₆ＣＨ₃を生じる。これよりももっと短い脂肪酸や
長い脂肪酸がスフィンゴイド塩基に結合してもよい。このような化合物の類似物
を形成するために、スフィンゴ脂質およびセラミドにある種の化学基を結合する
とセラミドがスフィンゴミエリンに生物変換するのを阻止することができ、それ
によってアポトーシスを刺激するセラミド濃度の上昇を生じることができること
を出願人らは以前に報告している。

【０００９】 セラミドは全ての真核細胞の細胞膜に見られ、種々の重要な細胞過程に関与す
ることが知られている。さらに、ある種のスフィンゴ脂質化合物は細胞増殖を防
止する際に何らかの役割を果たすことが見出されている。しかし、本発明の特定
のハロゲン化セラミド並び悪性疾患、糖尿病などの代謝状態、炎症およびウィル
ス感染症を治療する際のそれらの用途は以前の技術では認識されていない。

【００１０】 細胞透過性短鎖（Ｃ₂−Ｃ₆）セラミドは、内因性セラミドレベルに直接影響を
与えることが知られており、これらの短鎖セラミドは、セラミド媒介性細胞機能
を検討するのに使用されている。さらに、ハロゲン化セラミドは、神経系の種々
の異常の治療薬として有用である可能性があることを示唆している報告もあるが
、Ｃ２およびＣ６セラミドなどの非ハロゲン化類似物と比較したとき、ハロゲン
化セラミド誘導体が大きな抗悪性腫瘍作用を示すと思われることは示されていな
い。

【００１１】 ［発明の開示］ 簡単に説明すると、本発明は、式Ｉ、

【化１７】 （式中、 ＲはＣ_nＨ_2n+1であり、ｎは１〜１８の整数であり、 ＡはＣＨ₂−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＣＨ（ＯＨ）またはｃｉｓ、ｔｒａｎｓもしくはｃ
ｉｓ＋ｔｒａｎｓＣＨ＝ＣＨであり、 ＭはＣ（Ｏ）またはＣＨ₂であり、 ＱはＣ、ＯＣまたはＳ（Ｏ₂）Ｎであり、 ＹはＨ、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、アリール、フェニル、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、Ｃ₆Ｈ₅、ハロゲン、ＮＨ−Ｐ₁、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨ、Ｃ₆Ｈ₅、アルキル、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｐ₁またはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが
（Ｏ）または（Ｓ）である場合には、Ｚは存在せず、Ｘ、ＹおよびＺが異なる部
分として存在する場合には、本発明の化合物はα−炭素に対してＲ配置、Ｓ配置
またはＲ配置とＳ配置の任意の組み合わせを有し、 ＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ₆Ｈ₅、Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ₃）₃、Ｏ−Ｓｉ（Ｃ₄Ｈ₉ ）₃、Ｏ−Ｓｉ（Ｃ₆Ｈ₅）₃、Ｃ₁−Ｃ₁₇アルキル、−ＣＨ₂−Ｏ−Ｘ₁または

【化１８】 であり、 ｋは０〜６の整数であり、 Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、各々独立に、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アル
ケニル、Ｃ₂−Ｃ₆シクロアルキルまたはアリールであり、 Ｘ₁はＨ、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−
アルキル、Ｃ₂−Ｃ₆シクロアルキル、アリール、フェニル、ハロゲン、ＮＯ₂、
ＣＮ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、
ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨＣＨ₃、ＣＯＮＨ₂、Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂）₂Ｃｌ₂、Ｂ（ＯＨ）₂、
フリルまたはアリールスルホネートであり、 Ｘ₂は−Ｏ−ＣＨ₂−であり、Ｘ₃は−Ｏ−ＣＨ₂−または−Ｏ−であり、Ｘ₂
およびＸ₃は一体として複素環を形成し、 Ｐ₁はＨまたはアミノ保護基である）の化合物に関係する。本発明のセラミド誘
導体は、Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ、Ｄ−ｔｈｒｅｏ、Ｌ−ｅｒｙｔｈｒｏおよびＬ−
ｔｈｒｅｏ配置の１つまたは任意の組み合わせであってもよく、（＋）および（
−）光学異性体の１つまたは任意の組み合わせであってもよい。

【００１２】 以下の置換基の組み合わせが式Ｉに好ましい： ＹおよびＺは各々独立にＨまたはＣ₆Ｈ₅である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、ＸはＢｒまたはＣ₁−Ｃ₁₇アルキル基であり、ＱはＣで
あり、ＺはＨ、Ｃ₆Ｈ₅基、アルキル基またはＣ（Ｏ）ＯＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化１９】 である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２０】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２１】 であり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２２】 であり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２３】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 Ｘ₄はＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂ −Ｃ₆シクロアルキルであり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２４】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨであり、 ＺはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２５】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨであり、 ＺはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２６】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨであり、 ＺはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２７】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２８】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは−ＣＨ₂−Ｏ−Ｘ₁であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化２９】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３０】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ O−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ S−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＺはＮＨ₂またはＮＨ−Ｐ₁である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは、

【化３１】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ O−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ S−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｐ₁、（Ｏ）または（Ｓ）である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３２】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ O−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆ S−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールである。 Ｐ₁は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｔｒｏｃ，シリル、スルホニル、アセチルおよ
びベンジルである。

【００１３】 本発明はまた、上記のセラミド誘導体を含有する製薬学的組成物と、脂質およ
び上記のセラミド誘導体を含有する脂質二重膜を有するリポソームとを含む。本
発明は、抗癌、抗炎症または抗ウィルスに有効な量のセラミド誘導体を癌、炎症
性疾患またはウィルス感染症に罹患した動物に投与することによって動物を治療
する方法を含む。

【００１４】 ［発明の詳細な説明］ 本発明は、著しい抗悪性腫瘍作用を示す新規セラミド誘導体を含む。本発明の
セラミド誘導体は、式Ｉ、

【化３３】 （式中、 ＲはＣ_nＨ_2n+1であり、ｎは１〜１８の整数であり、 ＡはＣＨ₂−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＣＨ（ＯＨ）またはｃｉｓ、ｔｒａｎｓもしくはｃ
ｉｓ＋ｔｒａｎｓＣＨ＝ＣＨであり、 ＭはＣ（Ｏ）またはＣＨ₂であり、 ＱはＣ、ＯＣまたはＳ（Ｏ₂）Ｎであり、 ＹはＨ、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、アリール、フェニル、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、Ｃ₆Ｈ₅、ハロゲン、ＮＨ−Ｐ₁、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨ、Ｃ₆Ｈ₅、アルキル、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｐ₁またはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが
（Ｏ）または（Ｓ）である場合には、Ｚは存在せず、Ｘ、ＹおよびＺが異なる部
分として存在する場合には、本発明の化合物はα−炭素に対してＲ配置、Ｓ配置
またはＲ配置とＳ配置の任意の組み合わせを有し、 ＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ₆Ｈ₅、Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ₃）₃、Ｏ−Ｓｉ（Ｃ₄Ｈ₉）₃
、Ｏ−Ｓｉ（Ｃ₆Ｈ₅）₃、Ｃ₁−Ｃ₁₇アルキル、−ＣＨ₂−Ｏ−Ｘ₁または

【化３４】 であり、 ｋは０〜６の整数であり、 Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、各々独立に、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アル
ケニル、Ｃ₂−Ｃ₆シクロアルキルまたはアリールであり、 Ｘ₁はＨ、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−
アルキル、Ｃ₂−Ｃ₆シクロアルキル、アリール、フェニル、ハロゲン、ＮＯ₂、
ＣＮ、Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、
ＮＨ₂、Ｎ₃、ＮＨＣＨ₃、ＣＯＮＨ₂、Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂）₂Ｃｌ₂、Ｂ（ＯＨ）₂、
フリルまたはアリールスルホネートであり、 Ｘ₂は−Ｏ−ＣＨ₂−であり、Ｘ₃は−Ｏ−ＣＨ₂−または−Ｏ−であり、Ｘ₂
およびＸ₃は一体として複素環を形成し、 Ｐ₁はＨまたはアミノ保護基である）のものである。本発明のセラミド誘導体は
、Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ、Ｄ−ｔｈｒｅｏ、Ｌ−ｅｒｙｔｈｒｏおよびＬ−ｔｈｒ
ｅｏ立体配座の１つまたは任意の組み合わせであってもよい。また、本発明のセ
ラミド誘導体は、主に（＋）光学異性体であっても、主に（−）光学異性体であ
ってもまたは（＋）および（−）光学異性体の任意の組み合わせであってもよい
。

【００１５】 以下の置換基の組み合わせが式Ｉに好ましい： ＹおよびＺは各々独立にＨまたはＣ₆Ｈ₅である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、ＸはＢｒまたはＣ₁−Ｃ₁₇アルキル基であり、ＱはＣで
あり、ＺはＨ、Ｃ₆Ｈ₅基、アルキル基またはＣ（Ｏ）ＯＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３５】 である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３６】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３７】 であり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３８】 であり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化３９】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 Ｘ₄はＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂ −Ｃ₆シクロアルキルであり、 ＹはＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺはＨである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４０】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨであり、 ＺはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４１】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨであり、 ＺはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４２】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨであり、 ＺはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４３】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４４】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは−ＣＨ₂−Ｏ−Ｘ₁であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４５】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＹはＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚは存在
しない。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４６】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＺはＮＨ₂またはＮＨ−Ｐ₁である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは、

【化４７】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｐ₁、（Ｏ）または（Ｓ）である。 ＭはＣ（Ｏ）であり、Ｘは

【化４８】 であり、 Ｘ₁はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールである。 Ｐ₁は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｔｒｏｃ，シリル、スルホニル、アセチルおよびベ
ンジルである。

【００１６】 本発明はまた、新規セラミド誘導体を含有する製薬学的組成物を含む。製薬学
的組成物は、製薬学的に許容されうる担体を含んでもよい。本発明はまた、抗癌
、抗炎症または抗ウィルス感染症に有効な量のセラミド誘導体を、癌、炎症性疾
患またはウィルス感染症に罹患している動物に投与することによって、動物を治
療する方法も含む。「抗癌に有効な量」は、癌細胞または異常に増殖している他
の細胞の増殖を遅くするかもしくは停止する、または癌細胞の細胞死を生ずる量
である。「抗炎症に有効な量」は、患者の炎症応答を遅くするまたは停止する量
である。「抗ウィルスに有効な量」は、ウィルスの増殖を遅くするかもしくは停
止する、またはウィルスの死を生ずる量である。

【００１７】 セラミド誘導体を合成するために使用する方法は特に限定されず、参照として
全体の内容が本明細書に組み入れられているＲ．Ｓｅｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｙ
．Ｌａｐｉｄｏｔ，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，７：１７４−１７５（１９６６
）に記載されているものなどの、当業者に周知の種々の技法を使用することがで
きる。溶液相合成の例示的な実施例が後に示されているが、固相およびコンビナ
トリアル技法を使用することもできる。実施例は、添付の請求の範囲に規定され
ている発明の範囲を限定する意図のものではない。

【００１８】 スフィンゴシンおよびセラミドは、パルミトイルＣｏＡ（ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₄−
ＣＯ−Ｓ−ＣｏＡ）とセリンを組み合わせて、デヒドロスフィンガニン（ＣＨ₃
（ＣＨ₂）₁₄Ｃｏ−ＣＨ（ＮＨ₃）−ＣＨ₂ＯＨおよびＣＯ₂を生ずることによって
動物細胞内に形成される（例えば、Ｌ．Ｓｔｒｙｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ（２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．４６１−４６２参照）。デヒドロスフィンガニンはジ
ヒドロスフィンゴシン（ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₄−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＮＨ₃）−Ｃ
Ｈ₂ＯＨ）に変換され、次いでスフィンゴシン（ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ＝ＣＨ−
ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＮＨ₂）−ＣＨ₂ＯＨ）に変換される。次いで、スフィンゴ
シンのアミド基に脂肪酸が結合して、セラミド（ＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ＝ＣＨ−
ＣＨＯＨ−ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ（ここで、Ｒは脂肪酸鎖である
）を生ずる。ホスホリルコリン基（ＰＯ₄ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｎ（ＣＨ₃）₃）がセラミ
ドのヒドロキシル基に結合してスフィンゴミエリンＣＨ₃（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ＝ＣＨ
−ＣＨＯＨ−ＣＨ（ＣＨ₂ＰＯ₄ＣＨ₂ＣＨ₂−Ｎ（ＣＨ₃）₃）−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ）
を生ずることができる。スフィンゴミエリナーゼは、スフィンゴミエリンからホ
スホリルコリンの加水分解除去を触媒して、セラミドを生ずることができる。セ
ラミドは逆に加水分解されるとスフィンゴミエリンを生ずることができる。

【００１９】 理論に結びつけるのではないが、本発明のセラミドおよび以下に示すセラミド
について収集した成長阻止データは、結合しているＸ、ＹおよびＺ基の性質に応
じて構造−活性相関があることを示唆している。効力の差は短鎖残基を変更する
ことによって見られるので（２−ブロモＣｘ、２または３−メチルＣｘ、２また
は３−フェニルＣｘセラミド系列の場合と同様である）、疎水性が細胞標的を識
別する際に主要な役割を果たしている可能性がある。そのような標的な、小さい
サイズの疎水性部分だけを収容していると思われる活性部位を有することがある
。親水性部分が疎水性部分に結合すると（Ｎ−チロシン（４−Ｏ−^tＢｕ）、Ｎ
−Ｂｏｃ−フェニルアラニン（４−Ｎ，Ｎ−ジクロロエチル）およびＮ−Ｂｏｃ
−フェニルアラニン（４−ＣＨ₂ＮＨ−ｉプロリルセラミド化合物の場合と同様
である）、細胞毒性を増加する助けとなることがある。

【００２０】 以下の説明は、生物活性を増強するために、標的結合を増加する理論的概念を
示唆している。

【化４９】

【００２１】 種々の鎖長のアルキル鎖を含有する本発明の化合物は、本発明の教示内容を考
慮すると、当業者に周知で容易に実施される数多くの方法によって合成される（
例えば、以下を参照。以下において、「ｒｆ」は以下の参照文献の１つをいう：
１：Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９４：６１９０（１９７２）；２：Ｊ．Ｏ
ｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９：６６８（１９９４）；３：Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎ
ｔｌ．Ｅｄ．（Ｅｎｇｌｉｓｈ），１７：５６９（１９７８）；４：Ｖｏｇｅｌ ’ｓ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅ ｍｉｓｔｒｙ （５ｔｈ ｅｄ．），ｐｐ．７６９−７８０）５：Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃ
ｈｅｍ．４０：５７４（２９７５）；６：Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５９：１８２
（１９９４）；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２５：２０９８（１９６０）；８：Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ（１９８５）：ｐｐ．２５３−２６８；９：Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．（１９５３）：ｐ．２５４８；１０：Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９０：
４４６２，４４６４（１９６８）；１１：Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｏｒｇ ａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏ
ｎ，Ｄ．Ｃ．（１９９０），ｐｐ．６０−６４；１２：Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ． ３０ １３２６（１９８７）；１３：Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．９：７５７（
１９７９）；１４：Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｄｅｓ（Ｊ．Ｗ
ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２９７０）），ｐｐ．７９５−８０１
；１５：Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２８９６（１９９４）；４：Ｊ．Ｍｅｄ
．Ｃｈｅｍ．３０：１３２６（１９８７）；１６：Ｒｅｃ．Ｃｈｅｍ．Ｐｒｏｇ
．２９：８５（１９６８）および１７：Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ Ｈａｎｄ ｂｏｏｋ （Ｍａｒｃｅｌｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９
９３），ｐ９７））。例えば、当業者は、出発材料としてスフィンゴシンまたは
セラミドを使用すると思われる。異なる鎖長のアルキル鎖は周知の手段によって
結合または除去することができる。

【００２２】 また、本発明の化合物および製薬学的に許容されうる担体を含有する製薬学的
組成物も本明細書に提供される。組成物はまた追加の生物活性剤を含有してもよ
い。本明細書において使用する「製薬学的に許容されうる担体」は、一般に、リ
ポソーム生物活性剤の製剤を含む脂質およびリポソームを、ヒトを含む動物に投
与することに関連して使用することが意図されている。製薬学的に許容されうる
担体は、一般に、使用する特定のリポソーム生物活性剤、その濃度、安定性およ
び目的のバイオアベイラビリティー、リポソーム組成物で治療する疾患、障害ま
たは状態、被験者、被験者の年齢、サイズおよび全身状態並びに例えば、鼻腔、
経口、眼、局所、経皮、膣、皮下、乳房内、腹腔内、静脈内または筋肉内のよう
な組成物の目的の投与経路を決定および説明するための当業者の認識範囲内の数
多くの因子により製剤化される（例えば、Ｎａｉｒｎ，Ｊ．Ｇ．，Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ
．（１９８５）参照）。生物活性剤の非経口投与に使用される製薬学的に許容さ
れうる典型的な担体には、例えば、Ｄ５Ｗ、５容量％のデキストロースを含有す
る水溶液および生理食塩液を含む。製薬学的に許容されうる担体は、例えば、含
有される活性成分の安定性を増強する保存剤および抗酸化剤などのもののような
追加の成分を含有してもよい。

【００２３】 ［実施例１： セラミド誘導体を合成する一般的手法］ この実施例および以下の実施例において、純度＞９８％のスフィンゴシン（合
成およびブタ脳）をＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔ
ｅｒ，ＡＬ）またはＭａｔｒｅｙａ，Ｉｎｃ．（Ｐｌｅａｓａｎｔ Ｇａｐ，Ｐ
Ａ）から入手した。合成に使用した全ての他の試薬はＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗ
ａｕｋｅｅ，ＷＩ）またはＦｌｕｋａ（Ｒｏｎｋｏｎｋｏｍａ，ＮＹ）から入手
した。特に記載しない限り、反応および生成に使用した溶媒はＡｌｄｒｉｃｈか
ら入手した。

【００２４】 以下のスキーム１に一般的に示すように、スフィンゴシンを室温においてジク
ロロメタン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）中でカルボン酸無水物または塩化物およびトリエチル
アミン（Ｅｔ₃Ｎ）と反応させた。ほとんどの反応の終了時間は５分以内であっ
た。反応は、標準としてセラミド（Ｃ₆、Ｓｉｇｍａ）を使用して薄層クロマト
グラフィー（ＴＬＣ）でモニターした。ほとんどの誘導体のＲ_f値はＣＨＣｌ₃／
ＭｅＯＨ（９０：１０）で０．４〜０．６以内であった。反応後、カルボン酸を
使用した場合には、ジシクロヘキシル尿素の白色沈殿をＣｅｌｉｔｅパッドでろ
過した。減圧下溶媒を留去し、溶出液としてＣＨＣｌ₃／ＭｅＯＨ（９３：７）
を使用してＴＬＣで残渣を精製した。

【化５０】 スキーム１ セラミド誘導体の一般的な合成経路を示す。

【００２５】 ［実施例２： Ｎ−２−ブロモアセチルスフィンゴシン（２−ＢｒＣ２セラミド
）の合成手法］ 以下のスキーム２に一般的に示すように、２−ブロモ酢酸（１１１ｍｇ、０．
８０ｍｍｏｌ；Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）および１，３−ジシクロ
ヘキシルカルボジイミド（１６５ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌｓ）を含有する１５ｍｌの無水ジクロロメタン溶液にスフィンゴシ
ン（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ
）を添加した。反応混合物を氷浴で０℃にし、次いでトリエチルアミン（７３ｍ
ｇ、１００μｌ、Ｆｌｕｋａ）を添加した。０℃において３０分反応させた後、
ジシクロヘキシル尿素の白色沈殿をＣｅｌｉｔｅベッドでろ過し、ろ液を減圧下
濃縮した。得られた残渣を、クロロホルム：メタノール（９：１）を使用して分
取ＴＬＣ（シリカゲル、２０００ミクロンプレート、Ａｎａｌｔｅｃｈ，Ｎｅｗ
ａｒｋ，ＤＥ）で精製して、Ｒ_f＝０．５（９：１、クロロホルム：メタノール
）の望ましい生成物を得た。最後に、生成物をシクロヘキサンで凍結乾燥して、
８０ｍｇの鱗片状粉末を得、これを１Ｈ ＮＭＲおよび質量分析計法（ＭＳ）で
特徴づけた。特徴的なプロトンシグナル（下線）をδ（ｐｐｍ、ＣＤＣｌ₃）で
得た：７．２（ｄ，１Ｈ，ＮＨ），５．８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），５．５（
ｄｄ，１Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ），４．３（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−ＯＨ），４．０（ｄｄ，
２Ｈ，ＣＨ ₂ＯＨ），３．９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ ₂Ｂｒ），３．７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ −ＮＨ），２．５（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ），２．４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），２．１（
ｍ，２Ｈ，アリルＣＨ ₂），１．６（ｓ，２Ｈ，ホモアリルＣＨ ₂），１．３（ｓ
，２０Ｈ，（ＣＨ ₂）₁₀），０．９（ａｐｐ．ｔ，３Ｈ，□−ＣＨ ₃）．ＥＳＩ−
ＭＳ：ｍ／ｚ４２０（Ｍ．Ｈ⁺），親ｍ／ｚ４０２（Ｍ−Ｈ₂Ｏ）．Ｈ⁺．

【化５１】 スキーム２

【００２６】 対応する２−ブロモカルボン酸を使用したことを除いて上記と同じ手法でアシ
ル鎖長がＣ₄〜Ｃ₂₀の他のセラミドを製造した。得られた生成物はＴＬＣおよび
１Ｈ ＮＭＲで特徴づけた。２−クロロ酢酸および２−ヨード酢酸をそれぞれ使
用したことを除いて上記と同じ手法で２−クロロおよび２−ヨードＣ₂セラミド
を製造し、ＴＬＣおよび¹Ｈ ＮＭＲで特徴づけた。

【００２７】 ［実施例３： 抗悪性腫瘍作用の評価］ 種々のセラミドを上記のように製造し、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイ
（以下に記載）を使用して樹立されているいくつかの腫瘍細胞系統に対する抗腫
瘍活性について評価した。特定の白血病系統に対するセラミドの抗腫瘍活性も以
下のように評価した。ＨＴ２９、ヒト結腸癌はＡｍｅｒｉｃａｎ ｔｙｐｅ ｃ
ｕｌｔｕｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手し
、以下の細胞系統はＤＣＤ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ（Ｆｒｅｄｅｒ
ｉｃｋ，ＭＤ）から入手した：ＭＣＦ７ヒト乳癌、ＭＣＦ／／ＡＤＲ（ＭＣＦ７
アドリアマイシン耐性サブライン）、Ａ５４９ヒト非小細胞肺癌、Ｐ３８８マウ
ス白血病、Ｐ３８８／ＡＤＲ（Ｐ３８８アドリアマイシン耐性サブライン）およ
びＵ９３７ヒト骨髄球細胞白血病。全ての系統は、１０％ウシ胎児血清（ＧＩＢ
ＣＯ）を含有する完全培地（ＲＰＭＩ １６４０培地中で３７℃において５％Ｃ
Ｏ₂雰囲気下において増殖させた。細胞種に応じて、３，０００〜１０，０００
個の接着細胞を、セラミドインキュベーションの１日前に、９６−ウェルプレー
トで１ウェルあたり１００μｌの容量で培養した。先ず、セラミドを、望ましい
最終最大試験濃度の４００倍である２０ｍＭのストック濃度のＤＭＳＯ（ジメチ
ルスルホキシド）に溶解した。次いで、ストック溶液を完全培地で望ましい最終
濃度の２倍に希釈した。各希釈の１００μｌ量を指定のウェルに添加した。３日
のインキュベーション後、実施例４に記載するように、細胞増殖をＳＲＢアッセ
イで測定した。アポトーシスのいくつかの検討では、２０μＭのプロテアーゼ阻
害剤（全てＥｎｚｙｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＣＡから購入した
）、ＣｂＺ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（Ｏ−メチル）−フルオロメチルケトン（ＺＶＡＤ
−ＦＭＫ）、Ｃｂｚ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（Ｏ−メチル）−フルオ
ロメチルケトン（ＺＤＥＶＤ−ＦＭＫ）、Ｃｂｚ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａ
ｓｐ（Ｏ−メチル）−フルオロメチルケトン（ＺＩＥＴＤ−ＦＭＫ）、Ｃｂｚ−
Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ（Ｏ−メチル）−フルオロメチルケトン（ＺＬ
ＥＨＤ−ＦＭＫ）またはＣｂｚ−Ｐｈｅ−Ａｌａ（Ｏ−メチル）−フルオロメチ
ルケトン（ＺＦＡ−ＦＭＫ）をセラミドインキュベーションの１時間前に細胞と
インキュベーションした（Ｃｂｚ＝保護基ベンジルカルボメトキシ）。

【００２８】 ［実施例４： 細胞増殖アッセイＩ］ スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイは、Ｍｏｎｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ
Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，８３：７５７−７６６（１９９１）、（
参照として本明細書に組み入れられている）に記載されている方法をわずかに改
良して実施した。実験用のセラミド誘導体または対照化合物（すなわち、薬物を
使用しない）と共にインキュベーションした後、細胞を冷却した５０％（ｗｔ／
ｖｏｌ）トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）５０μｌで４℃において６０分固定した。上
清を捨て、プレートを脱イオン水で６回洗浄し、空気乾燥した。沈殿物をＳＲＢ
溶液（０．４％ｗｔ／ｖｏｌの１％酢酸溶液）１００μｌで室温において１０分
固定し、１％酢酸で３回洗浄して遊離のＳＲＢを除去し、プレートを空気乾燥し
た。結合したＳＲＢはＴｒｉｓ緩衝液（１００ｍＭ）で溶解し、自動プレートリ
ーダー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｍｏｄｅｌ３５５０−ＵＶ）を使用して４９０ｎｍで
光学密度（ＯＤｓ）を読んだ。バックグラウンド値を試験データから引き、デー
タを対照の％として算出した。ＧＩ₅₀は、未処理の対照試料と比較したときの、
正味の増殖の５０％を生ずる試験薬物の濃度を示す。このアッセイでは、ＯＤｓ
は、余分に調製したプレートの０時（薬物を添加した時間）においても取った。
試験試料のＯＤｓが０時試料より小さい場合には、細胞死が生じている。増殖の
割合は、Ｐｅｔｅｒｓ，Ａ．Ｃ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｐｉｄｓ，３２：１０４５
−１０５４，１９９７（参照として本明細書に組み入れられている）に記載され
ているように算出した。簡単に説明すると、増殖率は以下のように算出した：（
Ｔ−Ｔ₀）／（Ｃ−Ｔ₀）×１００（ここで、Ｔ＝所定の薬物濃度において処理し
たウェルの平均光学密度、Ｔ₀＝０時のウェルの平均光学密度、およびＣ＝対照
ウェルの平均光学密度）。細胞死が生じたことを示すＴ＜Ｔ₀の場合には、細胞
死の割合は（Ｔ−Ｔ₀）／（Ｔ₀）×１００として算出した。

【００２９】 ［実施例５： 細胞増殖アッセイＩＩ］ 白血病系統（懸濁細胞）におけるＧＩ₅₀を測定するために、総細胞タンパク質
を測定するＳＲＢアッセイを使用する代わりに、細胞数を直接計測した。薬物処
理の１日前に、４０，０００／細胞ウェル、０．５ｍｌ容量を２４ウェルプレー
トに接種した。望ましい最終濃度の２倍にストック溶液を完全培地で希釈し、各
希釈液の０．５ｍｌ量を指定のウェルに添加した。３日のインキュベーション後
、Ｃｏｕｌｔｅｒカウンター（Ｚ−Ｍ，Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して細胞数を計
測することによって細胞増殖を測定した。細胞計測は０時にも実施し、試験結果
から引いて正味の増殖を得た。ＧＩ₅₀は、未処理の対照試料と比較した正味の増
殖の５０％を生ずる試験薬物の濃度を示す。

【００３０】 上記のように製造した種々のセラミドを、上記の材料と技法を使用して評価し
た。評価結果は以下の実施低に詳細に示す。

【００３１】 ［実施例６］ 以下の式のセラミドを以下のように製造した：

【化５２】 （式中、Ｒ＝（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ₃、Ｚ＝Ｈ、ＸおよびＹは以下の表１および２に規
定されるとおりである）。従って、ＸおよびＹがＨである場合には、Ｃ₂セラミ
ドの構造が描かれる。ＧＩ₅₀は、上記のＳＲＢアッセイによって測定した。細胞
は、示したセラミド誘導体で３日間処理し、次いで固定してアッセイした。結果
は表１および２に報告する。

【００３２】

【表１】

【００３３】

【表２】

【００３４】 ２−ＢｒＣ２セラミドとＣ２セラミド（細胞透過性合成セラミド）間の差とい
っても、セラミドの２位において水素が臭素に置換されているだけであるが、こ
の修飾は、親化合物と比較して増殖阻止をかなり増強した。本発明者らは、マウ
スおよびヒトのいくつかの癌細胞系統においてこの２つのセラミドのＧＩ₅₀を比
較し、驚くべきことに、２−ＢｒＣ２セラミドはＣ２親セラミドと比較して５〜
５０倍強力であることを見出した。Ｃ２セラミドのＧＩ₅₀は２０〜３０μＭであ
ったが、２−ＢｒＣ２セラミドのＧＩ₅₀は０．２〜６μＭであった。興味深いこ
とに、２−Ｂｒ−Ｃ２セラミドは固形腫瘍系統（１〜６μＭ）より白血病（＜１
μＭ）に対してより強力であり、薬物耐性系統にも活性を示した（ＭＣＦ７／Ａ
ＤＲ ｖｓ．ＭＣＦ７およびＰ３８８ ｖｓ．Ｐ３８８／ＡＤＲ）。理論に結び
つけるのではないが、Ｃ２セラミドと比較して２−Ｂｒ−Ｃ２セラミドの効力が
大きいのは、セラミドの構造および立体配座が変化したことによる細胞透過性の
変化、コンパートメント化および細胞代謝が変化したことによると思われると本
発明者らは考えている。２−Ｃｌ−および２−Ｉ−Ｃ２セラミドは腫瘍細胞増殖
に対して２−ＢｒＣ２セラミドより活性が低かったが、２−Ｉは、驚くべきこと
に、２−Ｃｌより活性がずっと良かった。

【００３５】 Ｃ２セラミドと同様に、２−Ｂｒ−Ｃ６セラミドは、驚くべきことに、Ｃ６セ
ラミドより効力が強かったが、その差は２−Ｂｒ−Ｃ２とＣ２セラミド間の差ほ
ど劇的ではなかった。２−Ｂｒ−Ｃ８セラミドでは効力は低下し、２−Ｂｒ−Ｃ
１０〜Ｃ１６セラミドはインビトロ試験においてどちらかと言えば無活性であっ
た。

【００３６】 ［実施例７］ スフィンゴイド塩基の炭化水素鎖の鎖長が２−Ｂｒ−Ｃ２セラミドの抗悪性腫
瘍作用に及ぼす影響を、以下の式、

【化５３】 （式中、Ｘ＝Ｂｒ、Ｙ＝Ｈ、Ｚ＝Ｈ、Ｒは以下の表３に規定するとおりである）
のセラミドを上記のように製造することによって検討した。ＧＩ₅₀は上記のＳＲ
Ｂアッセイによって測定した。細胞は、示したセラミド誘導体で３日処理し、固
定してアッセイした。結果は表３に報告する。

【００３７】

【表３】

【００３８】 ２−Ｂｒ−Ｃ２セラミド誘導体は全て抗悪性腫瘍作用を示したが、Ｃ１４およ
びＣ１６（スフィンゴイド塩基の炭化水素鎖）セラミドでは活性が低下した。Ｃ
１０、Ｃ１２およびＣ２０（スフィンゴイド塩基の炭化水素鎖）セラミドは、驚
くべきことに、ＭＣＦ−７細胞系統に対して「天然の」（Ｃ１８）セラミドより
大きい効力を示した。

【００３９】 ［実施例８］ ２−Ｂｒ−Ｃ２セラミド（Ｎ−２−ブロモアセチルスフィンゴシン）のＬ−ｔ
ｈｒｅｏおよびＤ−ｅｒｙｔｈｒｏ立体配座異性体のヒト腫瘍細胞に対する作用
を検討した。Ｌ−ｔｈｒｅｏおよびＤ−ｅｒｙｔｈｒｏ異性体（上記のように製
造した）のＧＩ₅₀は、上記のＳＲＢアッセイで測定し、結果を表４に報告する。

【００４０】

【表４】

【００４１】 表４が示すように、Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ異性体は、ＨＴ−２９およびＡ−５４
９細胞系統に対して、Ｌ−ｔｈｒｅｏ異性体より高い抗腫瘍作用を示した。両異
性体は、ＭＣＦ−７およびＭＣＦ−７／ＡＤＲ系統に対して有効性が類似してい
た。

【００４２】 ［実施例９： ＴＵＮＥＬアッセイ］ ２−ＢｒＣ２セラミドがアポトーシスを誘導したかどうかを判定するために、
Ｇｏｒｃｚｙｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５３：１９４５−
１９５１（１９９３）に記載されているように、ＴＵＮＥＬ（ターミナルトラン
スフェラーゼ媒介性ｄＵＴＰニックエンドラベリング）アッセイを実施した。簡
単に説明すると、薬物処理後、２×１０⁶細胞を１％ホルムアルデヒドと共にＰ
ＢＳ（ｐＨ７．４）中で室温において２０分インキュベーションし、次いで氷冷
した７０％エタノールで−２０℃において１〜３日固定した。試料をＰＢＳ（ｐ
Ｈ７．４）で再度水和してから、１×ＴｄＴ緩衝液（２５ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ
、２００ｍＭカコジル酸カリウム）、２．５ｍＭ塩化コバルト、０．５ｎ ｍｏ
ｌｅビオチン−１６−ｄＵＴＰおよび１０単位のターミナルトランスフェラーゼ
（上記の化合物は全てＲｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
ｌｓから入手した）を含有する溶液５０μｌ中に懸濁させて３７℃において３０
分おいた。次いで、試料を冷却したＰＢＳで洗浄し、染色溶液（フルオレセイン
化アビジン（１：５０）、４×クエン酸ナトリウム緩衝生理食塩液、０．１％Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００および５％脱脂粉乳）１００μｌ中に再度懸濁させ、室
温において暗所に３０分おいた。フローサイトメトリー検討では、細胞を、ＰＢ
Ｓ中でヨウ化プロピジウム（１０μｇ／ｍｌ）および０．１％ＲＮＡｓｅで４℃
において終夜二重染色した。蛍光顕微鏡を使用して試料を観察するために、薬物
処理前に接着細胞をチャンバー式スライド（Ｆａｌｃｏｎ，ＮＪ）で培養し、薬
物処理後にＣｙｔｏｓｐｉｎ（８００ｒｐｍ、４分）を使用して懸濁細胞をスラ
イドに遠心接着（ｓｐｉｎ ｄｏｗｎ）し、アッセイ後に封入液（Ｖｅｃｔｏｒ
，ＣＡ）をスライドに適用した。写真は、４０倍のレンズを用いた蛍光顕微鏡を
使用して撮影し、図１（Ａ）に示す（（Ａ）対照（未処理の）Ｕ９３７；（Ｂ）
２μＭの２−ＢｒＣ２セラミドで２時間処理したＵ９３７；（Ｃ）５μＭの２−
ＢｒＣ２セラミドで２時間処理したＵ９３７；（Ｄ）５μＭの２−ＢｒＣ２セラ
ミドで３時間処理したＵ９３７；（Ｅ）対照（未処理の）ＭＣＦ７；（Ｆ）２５
μＭの２−ＢｒＣ２セラミドで２０時間処理したＭＣＦ７；（Ｇ）対照（未処理
の）ＭＣＦ７／ＡＤＲ；（Ｈ）１μＭの２−ＢｒＣ２セラミドで２０時間処理し
たＭＣＦ７／ＡＤＲ）。

【００４３】 図１に示す結果は、２−ＢｒＣ２セラミドはＵ９３７細胞および他の固形腫瘍
系統においてアポトーシスを誘導することを明らかにしている。アポトーシス（
明るい）細胞および凝縮した染色質は、２μＭの２−ＢｒＣ２セラミド処理後２
時間程度でＵ９３７細胞に観察され（図１Ｂ）、アポトーシス細胞の数は用量依
存的および時間依存的に増加した（図１Ｂ−Ｄ）。アポトーシスの早期段階では
、染色質顆粒は核膜内に存在したが、薬物処理の３時間経過時までには、多数の
細胞が完全体ではなくなり、核が崩壊した。アポトーシスはまた、ＧＩ₅₀濃度（
１μＭ）の２−ＢｒＣ２セラミドで２０時間処理したＭＣＦ７／ＡＤＲ細胞にお
いても観察された（図１Ｈ）。ＭＣＦ７／ＡＤＲとは異なり、親のＭＣＦ７細胞
系統は、アポトーシスを誘導するのにずっと高い薬物濃度を必要とし（４×ＧＩ₅₀ ）（図１Ｆ）、本発明者らだけが、他の系統において観察されている凝縮した
染色質顆粒ではなく核全体の陽性染色を観察した。また、処理時間を長くするこ
とにより、細胞は脆弱になり、本発明者らはアッセイ中に細胞消失の増加を見た
。

【００４４】 ２−ＢｒＣ２セラミド誘導性アポトーシスを定量するために、同じ種類のＴＵ
ＮＥＬアッセイを実施し、結果をフローサイトメトリーによって定量した。Ｕ９
３７細胞を２または５μＭの２−ＢｒＣ２セラミドで２４時間処理し、アポトー
シス集団の割合％を求めた（図２Ａ）。２μＭ（ＧＩ₅₀濃度の２倍）の２−Ｂｒ
Ｃ２セラミドによる処理は、２４時間後にアポトーシス細胞のわずかな増加（対
照の５〜８％増）を誘導した。しかし、５μＭによる処理では、このアポトーシ
スの誘導は処理開始から２時間までに検出されており、１０％を超える細胞がア
ポトーシスを受けており、この数は６時間経過時には６０％を上回るまで増加し
た。図２Ａの結果に基づくと、細胞を１００μＭのＣ２セラミド（図２Ｃに代表
的なヒストグラムを示す）または５μＭの２−ＢｒＣ２セラミド（図２Ｄに代表
的なヒストグラムを示す）で５時間処理し、次いでアポトーシスの検討を実施し
、未処理の対照（図２Ｂに代表的なヒストグラムを示す）と比較した。これらの
細胞は、ＤＮＡ含有量のためのヨウ化プロピジウム（図２Ｂ−Ｃのｘ−軸）およ
びアポトーシス細胞のためのビオチン−ｄＵＴＰ（図２Ｂ−Ｃのｙ−軸）で二重
染色した。Ｃ２および２−ＢｒＣ２セラミドは共に細胞周期の全ての段階におい
てアポトーシスを誘導したが、２−ＢｒＣ２セラミドはアポトーシスを誘導する
際に少なくとも３倍有効であり（１２％ｖｓ．４３％）、はるかに低い濃度で有
効であった（図２Ｃ、Ｄ）。

【００４５】 ［実施例１０： ２−ＢｒＣ２セラミドが活性化するアポトーシスの信号伝達経
路］ アポトーシスの信号伝達経路が２−ＢｒＣ２セラミドによって活性化されるこ
とを解明するために、いくつかの細胞透過性カスパーゼ阻害剤を、薬物処理の１
時間前に最終濃度２０μＭでＵ９３７細胞に添加した。これらの阻害剤は、種々
のアポトーシス発生剤によって誘導されるプログラムされた細胞死を阻害するこ
とが以前に示されている（Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，５：Ｒ
９７−１０３（１９９８））。本発明者らは、いくつかの阻害剤、ＺＶＡＤ−Ｆ
ＭＫ：一般的な阻害剤、ＺＤＥＶＤ−ＦＭＫ：グループＩＩカスパーゼおよび程
度は少ないがカスパーゼ８の阻害剤、およびＺＩＥＴＤ−ＦＭＫ：カスパーゼ８
の特異的な阻害剤、ＺＬＥＨＤ−ＦＭＫ：カスパーゼ９の特異的な阻害剤、およ
びＺＦＡ−ＦＭＫ：陰性対象を使用し、ＴＵＮＥＬアッセイを使用して、２−Ｂ
ｒＣ２セラミド誘導性のアポトーシスに対するそれらの影響を検討した。これら
のペプチド阻害剤は分解の可能性があるので、本発明者らだけは、ＴＵＮＥＬア
ッセイのために細胞を採取する前に、阻害剤の添加後にさらに３時間Ｕ９３７細
胞をセラミドで処理した。ＺＶＡＤ−、ＺＤＥＶＤ−およびＺＩＥＴＤ−ＦＭＫ
は２−ＢｒＣ２セラミド誘導性アポトーシスを妨害するが、ＺＬＥＨＤ−ＦＭＫ
および陰性対照（ＺＦＡ−ＦＭＫ）はこのアポトーシスに影響を与えない（実際
にはわずかに増加した）ことを本発明者らは見出した（図３Ａ）。カスパーゼ８
を特異的に阻害する１つの薬物、ＺＩＥＴＤ−ＦＭＫは用量−依存的なアポトー
シスの阻害を生じた（図３Ｂ）。２−ＢｒＣ２セラミド誘導性アポトーシスの９
０％以上は５μＭ程度のＺＩＥＴＤ−ＦＭＫで阻害された。２−ＢｒＣ２セラミ
ドによるアポトーシスの誘導はカスパーゼ９カスケードではなくカスパーゼ８に
より仲介されることおよび経路の早期に作用することをこれらのデータは示唆し
ている。ＺＩＥＴＤ−ＦＭＫはＨＬ６０細胞においてＣ２−またはＣ６−セラミ
ド誘導性アポトーシスにほとんど阻害作用を示さなかったという以前の報告（Ｓ
ｗｅｅｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，４２５：６１−６５（１９
９８））とは異なり、２０μＭのＺＩＥＴＤ−ＦＭＫはＵ９３７細胞においてＣ
２セラミドによって誘導されるアポトーシスの９０％を阻害するのに十分である
ことを本発明者らは見出した（データは示していない）。セラミド類似物は、エ
フェクターカスパーゼの上流だけでなく、イニシエーターカスパーゼの上流にも
作用することができることを本発明者らのデータは示唆している。

【００４６】 ［実施例１１： ２−ＢｒＣ２セラミド処理した細胞質ゾル抽出物におけるカス
パーゼ活性化］ ２−ＢｒＣ２セラミドによって誘導されるカスパーゼ活性の特異性を検討する
ために、本発明者らはカスパーゼ特異的な基質、ＩＥＴＤ−およびＤＥＶＤ−Ａ
ＦＣを使用した。細胞の細胞質ゾル抽出物はＴａｍｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ，５８：５３１５−５３２０（１９９８）に従って調製し、反応は
、Ｃｕｖｉｌｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２７３：２９
１０−２９１６（１９９８）に記載されているように９６ウェルプレートで実施
した。１００μＭのＺ−ＤＥＶＥ−ＡＦＣまたはＺ−ＩＥＴＤ−ＡＦＣ（Ｅｎｚ
ｙｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＣＡ）、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐ
Ｈ ７．４）、２００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ ＣＨＡＰ
Ｓ、１０ｍＭ ＤＴＴおよび２０％スクロースを含有する１００μｌの反応緩衝
液（２×）を、５０μｇの総タンパク質を含有する等容量の緩衝液Ａ（２０ｍＭ
Ｈｅｐｅｓ、１０ｍＭ ＫＣｌ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１ｍＭ ＥＤＴＡ
および１ｍＭ ＤＴＴ）に添加した。基質の酵素的な加水分解は、Ｃｙｔｏｆｌ
ｕｏｒ４０００マルチプレートリーダー（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ，ＭＡ）（励起波長３９５ｎｍ、放射波長４９０ｎｍ）を使用して３０
分の間に放出されるＡＦＣ（アミノ−トリフルオロメチルクマリン）によって測
定した。カスパーゼ活性は任意の蛍光単位として測定し、未処理の（対照）試料
の基底レベルを上回る倍増値（ｆｏｌｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ）に変換した。各座
標の（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ）試料において、基質単独のバックグラウンド蛍
光を引いた。未処理および処理したＵ９３７細胞のＩＥＴＤ−およびＤＥＶＤ−
特異的プロテアーゼ活性の蓄積を測定した（図４Ａ＆Ｂ）。わかるように、ＩＥ
ＴＤａｓｅ作用の活性化はＤＥＶＤａｓｅより先に現れたが、後者は増加が大き
く、持続した。これは、カスパーゼ８は信号伝達経路の上流に作用し、その活性
化はエフェクターカスパーゼの活性化の前に生ずるという考え方に一致している
。このような薬物誘導性のカスパーゼ８の活性化は「遷移的な（ｔｒａｎｓｉｔ
）」応答であり、２時間でピークに達し（２倍）、その直後に基底レベル以下に
低下し、次いで徐々に基底レベルに戻る（図４Ａ）。ＤＥＶＤａｓｅ活性は、下
流のエフェクター、カスパーゼ３、６および７の活性を反映している。ＤＥＶＤ
ａｓｅ活性の増加はＩＥＴＤａｓｅの後をゆっくり追従し、３時間経過時にピー
クに達し、６時間まで高い値を維持し（図４Ｂ）、下流のエフェクターはアポト
ーシス過程中活性状態を維持していたことを意味している。これらのデータは、
２−ＢｒＣ２セラミド誘導性アポトーシスに対するカスパーゼ８活性化の関連性
に関する本発明者らの所見をさらに支持している。Ｓｃａｆｆｉｄｉ，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２２５３２−２２５３８（１９９９）
は最近、ＩＩ型（例えば、ＣＥＭおよびジャーカット）だけがＣ２セラミド誘導
性アポトーシスに感受性であるが、Ｉ型（例えば、ＳＫＷ６．４およびＨ９）細
胞は感受性がないことを報告した。Ｉ型細胞とＩＩ型細胞のＣＤ９５経路は、カ
スパーゼ８活性化の動態およびレベル並びにこの活性化がミトコンドリアを通過
するかどうかが異なる。彼らのデータは、Ｃ２セラミドは、ＩＩ型細胞ではアポ
トーシス経路においてカスパーゼの上流であるミトコンドリアレベルに作用する
ことを示唆した。本発明者らも、彼らの所見に一致して、セラミドはＵ９３７細
胞においてカスパーゼ８の上流に作用すると思われることを見出した。

【００４７】 ［実施例１２： ペプチド様および非ペプチド様セラミドの抗増殖作用試験］ 実施例２に記載するコンビナトリアルパラエル合成技法を使用して、ペプチド
様セラミド（ペプチド様＝アミノ酸基を１つ以上含有する）および非ペプチド様
セラミドを合成した。次いで、得られたセラミドを抗増殖活性について試験し、
結果を以下の表７および８に報告する。ＧＩ₅₀は上記のＳＲＢアッセイによって
測定した。「＋」は、最大試験濃度、５０μＭにおいて細胞死が観察されたこと
を示す（試験試料のＯＤが０時の試料より小さい場合）。「−」は、５０μＭに
おいて細胞死が観察されなかったことを示す。

【００４８】

【表５】

【００４９】

【表６】

【００５０】

【表７】

【００５１】

【表８】

【００５２】 本発明は具体的な実施例および実施態様に言及して記載されているが、当業者
は、添付の請求の範囲に規定されている本発明の精神および範囲から逸脱するこ
となく、種々の等価な構成要素と交換できることを容易に認識している。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ−図１Ｈ】 ヒト腫瘍細胞系統における２−Ｂｒ−Ｃ２セラミド誘発性アポトーシスを示す
一連の蛍光顕微鏡写真である。対照（未処理）Ｕ９３７（図１Ａ）、ＭＣＦ７（
図１Ｅ）、ＭＣＦ７／ＡＤＲ（図１Ｇ）または２−Ｂｒ−Ｃ２セラミド処理細胞
：２μＭで２時間（図１Ｂ）、５μＭで２時間（図１Ｃ）、５μＭで３時間（図
１Ｄ）処理したＵ９３７、７２５μＭで２０時間（図１Ｆ）処理したＭＣＦ、１
μＭで２０時間（図１Ｈ）処理したＭＣＦ７／ＡＤＲをビオチン−ｄＵＴＰでそ
の場で（ｉｎ ｓｉｔｕ）標識し、フルオレセイン化アビジンで対比染色した。
未処理の試料ではごく少数の細胞しか標識されず、未標識の細胞はほとんど見え
なかった。写真は、４０倍の対物レンズを使用した蛍光顕微鏡を使用して撮影し
た。

【図２Ａ−図２Ｄ】 Ｕ９３７細胞における２−Ｂｒ−Ｃ２セラミド誘発性アポトーシスの一連のグ
ラフ図である。図２Ａでは、細胞を０、２または５μＭの２−Ｂｒ−Ｃ２セラミ
ドで示した時間処理し、次いでＴＵＮＥＬアッセイを使用して処理した。ｄＵＴ
Ｐ−ビオチン標識した（アポトーシス）細胞は未標識の細胞から識別され、フロ
ーサイトメトリーを使用して定量した。少なくとも３つの独立した実験の平均値
±ＳＥを５μＭで処理した試料において示す。示すヒストグラムは代表的な実験
ものであり、細胞は、未処理（図２Ｂ）、１００μＭのＣ２セラミド（図２Ｃ）
または５μＭの２−ＢｒＣ２セラミド（図２Ｄ）で５時間処理した。細胞は、Ｄ
ＮＡ含有量（Ｘ−軸）のためのヨウ化プロピジウムとアポトーシス細胞（Ｙ−軸
）のためのビオチン−ｄＵＴＰで二重染色した。Ｒ２領域およびＲ３領域は、そ
れぞれ、非アポトーシス集団およびアポトーシス集団を示す。総事象は１５，０
００細胞を含有し、ダブレットは統計領域から除いた（ｇａｔｅｄ）。

【図３Ａおよび図３Ｂ】 Ｕ９３７細胞が２−ＢｒＣ２セラミド誘発性アポトーシスを受けるのをカスパ
ーゼ阻害剤が防止することを示すプロットである。図３Ａでは、薬物処理の１時
間前に種々のペプチド阻害剤を細胞と共にインキュベーションした。細胞は２−
Ｂｒ−Ｃ２セラミドでさらに３時間処理し、先に記載したようにＴＵＮＥＬアッ
セイを使用して処理した。図３Ｂは２−ＢｒＣ２セラミド誘発性アポトーシスの
用量依存的なＺＩＥＴＤ−ＦＭＫ阻害を示す。２−ＢｒＣ２セラミド処理の前に
漸増量のＺＩＥＴＤ−ＦＭＫを細胞に添加した。示すデータは、２つの独立した
実験を代表するものである。

【図４Ａおよび図４Ｂ】 ２−ＢｒＣ２セラミド処理によるカスパーゼ活性化を示すグラフである。Ｕ９
３７細胞は５μＭの２−ＢｒＣ２セラミドで示した時間処理し、材料と方法に記
載したように細胞質ゾル抽出物について処理した。抽出物の５０μｇの総蛋白質
を全ての試料に使用し、溶解緩衝液で容量を基準化した。抽出物のＩＥＴＤａｓ
ｅ（図４Ａ）およびＤＥＶＤａｓｅ（図４Ｂ）活性は蛍光発生基質、それぞれ、
Ａｃ−ＩＥＴＤ−ＡＦＣおよびＡｃ−ＤＥＶＤ−ＡＦＣで測定した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/40 Ａ６１Ｋ 31/40 31/405 31/405 31/695 31/695 38/00 Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 29/00 29/00 31/12 31/12 35/00 35/00 Ｃ０７Ｃ 233/22 Ｃ０７Ｃ 233/22 233/60 233/60 235/08 235/08 237/06 237/06 237/18 237/18 237/20 237/20 255/19 255/19 271/22 271/22 311/17 311/17 Ｃ０７Ｍ 7:00 // Ｃ０７Ｍ 7:00 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 タン，シン‐イー・イヴェット アメリカ合衆国カリフォルニア州94546， カストロ・ヴァリー，フーバー・ドライヴ 18905 (72)発明者 メイヒュー，エリック アメリカ合衆国ワシントン州98199，シア トル，ウェスト・バーチュナ・ストリート 3905 (72)発明者 ジャノフ，アンドリュー・エス アメリカ合衆国ペンシルヴァニア州19067， ヤードリー，カウンテス・ドライヴ 560 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 BA01 BA14 BA23 CA59 NA14 ZB11 ZB26 ZB33 ZC35 4C086 AA03 BA13 BC05 BC13 BC38 DA44 NA14 ZB11 ZB26 ZB33 ZC35 4C206 AA03 GA01 GA02 GA03 GA07 GA26 HA21 NA14 ZB11 ZB26 ZB33 ZC35 4H006 AA01 AB22 AB27 AB28 AB29 BJ20 BJ50 BM10 BM73 BN10 BN30 BP10 BP30 BS10 BU26

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式、 【化１】 （式中、 ＲはＣ_nＨ_2n+1であり、ｎは１〜１８の整数であり、 ＡはＣＨ₂−ＣＨ₂、ＣＨ₂−ＣＨ（ＯＨ）またはｃｉｓ、ｔｒａｎｓもしくはｃ
   ｉｓ＋ｔｒａｎｓＣＨ＝ＣＨであり、 ＭはＣ（Ｏ）またはＣＨ₂であり、 ＱはＣ、ＯＣまたはＳ（Ｏ₂）Ｎであり、 ＹはＨ、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、アリール、フェニル、ＮＨ₂
   、ＮＯ₂、Ｃ₆Ｈ₅、ハロゲン、ＮＨ−Ｐ₁、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺはＨ、Ｃ₆Ｈ₅、アルキル、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｐ₁またはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが
   （Ｏ）または（Ｓ）である場合には、Ｚは存在せず、Ｘ、ＹおよびＺが異なる部
   分として存在する場合には、本発明の化合物はα−炭素に対してＲ配置、Ｓ配置
   またはＲ配置とＳ配置の任意の組み合わせを有し、 ＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｃ₆Ｈ₅、Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ₃）₃、Ｏ−Ｓｉ（Ｃ₄Ｈ₉）₃
   、Ｏ−Ｓｉ（Ｃ₆Ｈ₅）₃、Ｃ₁−Ｃ₁₇アルキル、−ＣＨ₂−Ｏ−Ｘ₁または 【化２】 であり、 ｋは０〜６の整数であり、 Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、各々独立に、Ｈ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルケニ
   ル、Ｃ₂−Ｃ₆シクロアルキルまたはアリールであり、 Ｘ₁はＨ、ＯＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アル
   キル、Ｃ₂−Ｃ₆シクロアルキル、アリール、フェニル、ハロゲン、ＮＯ₂、ＣＮ
   、Ｃ（Ｏ）Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、ＮＨ₂ 、ＮＨＣＨ₃、ＣＯＮＨ₂、Ｎ（ＣＨ₂ＣＨ₂）₂Ｃｌ₂、Ｂ（ＯＨ）₂、フリル、Ｏ
   −アルキルまたはアリールスルホネートであり、 Ｘ₂は−Ｏ−ＣＨ₂−であり、Ｘ₃は−Ｏ−ＣＨ₂−または−Ｏ−であり、Ｘ₂およ
   びＸ₃は一体として複素環を形成し、 Ｐ₁はＨまたはアミノ保護基である）の化合物。
2. 【請求項２】 ＹおよびＺが各々独立にＨまたはＣ₆Ｈ₅である、請求項１に
   記載の化合物。
3. 【請求項３】 ＭがＣ（Ｏ）であり、ＸがＢｒまたはＣ₁−Ｃ₁₇アルキル基
   であり、ＱがＣであり、ＺがＨ、Ｃ₆Ｈ₅基、アルキル基またはＣ（Ｏ）ＯＨであ
   る、請求項１に記載の化合物。
4. 【請求項４】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化３】 である、請求項１に記載の化合物。
5. 【請求項５】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化４】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
   Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
   ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺがＨである、請求項１に記載の化合物。
6. 【請求項６】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化５】 であり、 ＹがＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺがＨである、請求項１に記載の化合物。
7. 【請求項７】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化６】 であり、 ＹがＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺがＨである、請求項１に記載の化合物。
8. 【請求項８】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化７】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
   Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
   ルキル、フェニルまたはアリールであり、 Ｘ₄がＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂ −Ｃ₆シクロアルキルであり、 ＹがＨ、ＣＨ₃、ＮＨ₂またはＮＯ₂であり、 ＺがＨである、請求項１に記載の化合物。
9. 【請求項９】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化８】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
   Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
   ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨであり、 ＺがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである、請求項１に記
   載の化合物。
10. 【請求項１０】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化９】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
    Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
    ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨであり、 ＺがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである、請求項１に記
    載の化合物。
11. 【請求項１１】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１０】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
    Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
    ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨであり、 ＺがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルまたはＣ₂−Ｃ₆シクロアルキルである、請求項１に記
    載の化合物。
12. 【請求項１２】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１１】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
    Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
    ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
    、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺがＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚが存在
    しない、請求項１に記載の化合物。
13. 【請求項１３】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１２】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
    Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
    ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
    、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺがＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚが存在
    しない、請求項１に記載の化合物。
14. 【請求項１４】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが−ＣＨ₂−Ｏ−Ｘ₁であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＮＯ₂、Ｃ
    Ｎ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₃、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−ア
    ルキル、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
    、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺがＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚが存在
    しない、請求項１に記載の化合物。
15. 【請求項１５】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１３】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
    ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、アリール、フェニル、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＮＨ₂
    、ＮＯ₂、（Ｏ）または（Ｓ）であり、 ＺがＨまたはＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｙが（Ｏ）または（Ｓ）の場合に、Ｚが存在
    しない、請求項１に記載の化合物。
16. 【請求項１６】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１４】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
    ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＺがＮＨ₂またはＮＨ−Ｐ₁である、請求項１に記載の化合物。
17. 【請求項１７】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１５】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
    ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールであり、 ＹがＨ、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ₂、ＮＨ−Ｐ₁、（Ｏ）または（Ｓ）である、請求
    項１に記載の化合物。
18. 【請求項１８】 ＭがＣ（Ｏ）であり、Ｘが 【化１６】 であり、 Ｘ₁がＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｏ−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆Ｓ−アルキル、
    ＣＯＣＨ₃、ＣＨ₂ＯＨ、フェニルまたはアリールである、請求項１に記載の化合
    物。
19. 【請求項１９】 Ｐ₁が、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｔｒｏｃ，シリル、スルホニ
    ル、アセチルおよびベンジルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合
    物。
20. 【請求項２０】 Ｄ−ｔｈｒｅｏ配置を有する、請求項１に記載の化合物。
21. 【請求項２１】 Ｌ−ｔｈｒｅｏ配置を有する、請求項１に記載の化合物。
22. 【請求項２２】 Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ配置を有する、請求項１に記載の化合
    物。
23. 【請求項２３】 Ｌ−ｅｒｙｔｈｒｏ配置を有する、請求項１に記載の化合
    物。
24. 【請求項２４】 ＸがＢｒであり、ＹがＨであり、ＺがＨである、請求項３
    に記載の化合物。
25. 【請求項２５】 ｎが１１であり、ＡがＣＨ₂−ＣＨ₂である、請求項２４に
    記載の化合物。