JP2003519193A - 損傷組織の治療用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 創傷のような損傷組織の治療に用いる医薬品を記述した。（ａ）増殖因子；および（ｂ）阻害剤；および所望により（ｃ）製剤的に許容される単体、希釈剤、または賦形剤を含む組成物を含んでなる医薬品であって、ここで阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 発明の分野 本発明は、組成物、特に医薬組成物に関する。本発明はまた、特に損傷組織の治
療におけるその組成物の使用に関する。

【０００２】 背景技術 創傷、より特定すると慢性創傷におけるような損傷組織を治療し得ることが望ま
れている。慢性創傷の例には、慢性皮膚潰瘍が含まれる。

【０００３】 慢性皮膚潰瘍は、高齢集団における罹患状態の主因であり、医療システムに対
する重大な経済負担となっている。褥瘡、糖尿病性及び静脈性潰瘍を含む、慢性
皮膚潰瘍についての最近の数字は、米国及び全世界で、それぞれ約３７５万及び
１２００万の全患者数を示す（『創傷治癒の技術革新と市場概況』（Wound Heal
ing Technological Innovations and Market Overview (1998) Technology Cata
lysis International Corporation, VA, USA））。これらの患者の約７０％が中
等症〜重症と分類される。その治療は最近進展してきたが、これら潰瘍の治癒は
依然として遅く（典型的には、静脈性潰瘍では最良の看護でも１６週間）、縫合
までの時間を短縮させるのに有効である薬剤は、医学及び商業上の利益をもたら
すだろう。 本発明では、上記の諸問題を克服しようとする。

【０００４】 発明の要約 本発明によれば、創傷（特に、慢性創傷）のような損傷組織が、増殖因子と阻害
剤の組み合わせを使用すれば、より有効に治療され得る。使用される阻害剤は、
プロテアーゼ阻害剤であるか、又はそれから誘導されるか、又はそれに基づく。
より詳しく言えば、阻害剤は、創傷の環境においてアップレギュレートされる特
定のタンパク質の作用を阻害するが、ここでそれらのタンパク質は創傷の環境に
おいて有害な効果を及ぼす。ここでは、通常、有害な効果とは、創傷治癒に対し
て有害な効果である。典型的には、これらの有害タンパク質は、創傷の環境でア
ップレギュレートされる有害プロテアーゼである。従って、阻害剤は、特定の阻
害剤である。

【０００５】 このように、本発明の１つの側面は、医薬品（又は、薬剤と呼ばれる）におけ
るか又はそれとして使用される組成物に関し、ここで前記組成物は、創傷の環境
においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定プロテアーゼタンパク
質の作用を阻害する阻害剤を含む。

【０００６】 １つの好ましい側面では、本発明は、医薬品（又は、薬剤と呼ばれる）におけ
るか又はそれとして使用される組成物に関し、ここで前記組成物は、創傷の環境
においてアップレギュレートされる特定プロテアーゼタンパク質の作用を阻害す
る阻害剤を含む。

【０００７】 プロテアーゼ阻害剤と増殖因子の組み合わせは有益な相加効果を生じ、それは
、ある場合には相乗的である。 我々は、本発明のプロテアーゼ阻害剤が、使用時に、増殖因子の分解が妨害、
遅延、抑制、又は消失さえされるほどに、損傷組織の環境において増殖因子を保
護すると考える。

【０００８】 創傷の環境においてアップレギュレートされる、１種又はそれ以上の特定の有
害タンパク質、特に１種又はそれ以上の特定プロテアーゼの作用を阻害する阻害
剤の使用は、非選択阻害剤を使用した研究者たちの教示とは正反対である。例え
ば、Kiyohara Yoshihumi et al (Biological & Pharmaceutical Bulletin 1993
16巻、1146-1149頁で報告している、データベース・バイオシス・データベース
受入れ番号ＰＲＥＶ１９９４９７１７８６９５ＸＰ００２１３９２５１）；Wlas
chek et al (British Journal of Dermatology 1997 137 (4) 646頁）；Witte e
t al (Surgery (St Louis) 1998 124巻 (2) 464-470頁）；Ryou et al (Arch Ph
armacal Res 1997 20巻 (1) 34-38頁）；Singer et al (New England Journal o
f Medicine Sept 2 1999 341巻 (10) 738-746頁）；Chen Chin et al (Wound Re
pair and Regeneration 7巻 (6) 486-494頁）；及びＵＳ−Ａ−５２９０７６２
号が参考になり得る。

【０００９】 発明の詳細な説明 １つの側面によれば、本発明は、（創傷内の損傷組織のような）損傷組織の治療
（例えば、治癒）における使用（又は使用時）のための医薬品を提供し；この医
薬品は組成物を含んでなり、この組成物は、（ａ）増殖因子；及び （ｂ）阻害剤；及び所望により（ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形
剤を含み；ここで阻害剤は、損傷組織の環境においてアップレギュレートされる
少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用
を阻害し得る。

【００１０】 本発明によれば、増殖因子は「成分（ａ）」と呼ばれることがあり；阻害剤は
「成分（ｂ）」と呼ばれることがあり、製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦
形剤は、「成分（ｃ）」と呼ばれることがある。

【００１１】 典型的には、局所適用混合物又は局部注射混合物では、阻害剤の増殖因子に対
する相対比は、（ｍｇ：ｍｇ又は％：％のベースで）１０００：１〜１：１であ
り得る。

【００１２】 典型的には、局所適用又は局部注射される増殖因子とともに全身投与される阻
害剤では、阻害剤の増殖因子に対する相対比は、（ｍｇ：ｍｇのベースで）１０
，０００：１〜１０：１であり得る。

【００１３】 もう１つの側面によれば、本発明は、薬剤に使用される、本発明による組成物
を提供する。 もう１つの側面によれば、本発明は、創傷のような損傷組織を治療する医薬品
の製造における、本発明による組成物の使用を提供する。

【００１４】 もう１つの側面によれば、本発明は、慢性創傷のような慢性損傷組織を治療す
る医薬品の製造における、本発明による組成物の使用を提供する。 もう１つの側面によれば、本発明は、慢性皮膚潰瘍を治療する医薬品の製造に
おける、本発明による組成物の使用を提供する。

【００１５】 もう１つの側面によれば、本発明は、治療の方法を提供し、前記方法は、本発
明による組成物を被検者へ、創傷のような損傷組織を治療する（例えば、治癒す
る）量で投与することを含んでなる。

【００１６】 もう１つの側面によれば、本発明は、本発明による組成物を製造する方法を提
供し、前記方法は、本発明による１種又はそれ以上の前記薬剤を増殖因子、及び
所望により、製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合する工程を含ん
でなる。

【００１７】 もう１つの側面によれば、本発明はある方法を提供し、前記方法は、（ｉ）本
発明による１種又はそれ以上の前記薬剤を増殖因子、及び所望により、製剤的に
許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合する工程；（ｉｉ）前記組成物を、そ
れを必要とする被検者へ投与する工程を含んでなる。

【００１８】 もう１つの側面によれば、本発明は、本発明による阻害剤として作用すること
が可能である１種又はそれ以上の薬剤を同定するためにアッセイを実施すること
を提供する。

【００１９】 もう１つの側面によれば、本発明は、本発明による組成物を製造する方法を提
供し、前記方法は、（ｉ）本発明による阻害剤として作用することが可能である
１種又はそれ以上の薬剤を同定するためにアッセイを実施する工程；（ｉｉ）１
種又はそれ以上の前記薬剤を増殖因子、及び所望により、製剤的に許容される担
体、希釈剤又は賦形剤と混合する工程を含んでなる。

【００２０】 もう１つの側面によれば、本発明はある方法を提供し、前記方法は、（ｉ）本
発明による阻害剤として作用することが可能である１種又はそれ以上の薬剤を同
定するためにアッセイを実施する工程；（ｉｉ）１種又はそれ以上の前記薬剤を
増殖因子、及び所望により、製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合
する工程；（ｉｉｉ）前記組成物を、それを必要とする被検者へ投与する工程を
含んでなる。

【００２１】 成分（ａ）及び（ｂ）は、被検者への投与のために同一の混合物に存在し得る
か、又はそれらは、被検者へ連続的若しくは同時的に投与され得て、そのように
する場合、それらは似ているか又は異なる技術により適用され得ると理解される
べきである。このように、諸成分は同一の混合物におけるように一緒に投与され
る場合がある。他のやり方では、成分の一方が経口、全身、局所、又は注射によ
り投与されて、成分の他方は同一の経路（例えば、経口、全身、局所、又は注射
の１つ）によるか、又は異なる経路（例えば、経口、全身、局所、又は注射の異
なる１つ）により投与される場合がある。本発明の１つの好ましい態様では、一
方の成分が局所適用されて、他方の成分は全身適用される。本発明のもう１つの
好ましい態様では、一方の成分が局所適用されて、他方の成分も局所適用される
。

【００２２】 このように、１つの側面によれば、本発明は、創傷のような損傷組織の治療（
例えば、治癒）に使用されるパックを提供し、このパックは、少なくとも２つの
コンパートメントを含んでなり；ここで第一の前記コンパートメントは増殖因子
を収容し；そしてここで、第二の前記コンパートメントは阻害剤を収容し、ここ
で阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少
なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を
阻害し得る。本発明のパックでは、増殖因子及び／又は阻害剤が製剤的に許容さ
れる担体、希釈剤又は賦形剤と混合され得る。さらに、他のやり方では、本発明
のパックは第三のコンパートメントを含み、この第三のコンパートメントは、製
剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を収容する。

【００２３】 本発明に関しては、本発明のパックのように、増殖因子と阻害剤は異なる形態
であり得る。例えば、一方が溶液又は錠剤で、他方はクリームであるという場合
がある。本発明の１つの好ましい態様では、パックの一方の成分が局所適用され
、パックの他方の成分は全身投与される。このパックは余分のコンパートメント
を含有し得ると理解されるべきである。

【００２４】 本発明の１つの側面によれば、創傷のような損傷組織の治療（例えば、治癒）
に使用される医薬品を製造する方法が提供され、この方法は、（ａ）増殖因子を
（ｂ）阻害剤と混合すること；及び（ｃ）所望により製剤的に許容される担体、
希釈剤又は賦形剤と混合することによって組成物を形成することを含んでなり；
ここで阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされ
る少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作
用を阻害し得る。

【００２５】 本発明の１つの側面によれば、本発明による阻害剤で治療されている被検者を
治療するための医薬品の製造における、本発明による増殖因子の使用が提供され
る。

【００２６】 本発明の１つの側面によれば、本発明による増殖因子で治療されている被検者
を治療するための医薬品の製造における、本発明による阻害剤の使用が提供され
る。

【００２７】 本発明の１つの側面によれば、治療の方法が提供され、前記方法は、本発明に
よる組成物を被検者へ、創傷のような損傷組織を治療する（例えば、治癒する）
量で投与することを含んでなる。ここで、本発明による前記増殖因子の全部又は
いくらか（好ましくは、全部）が、本発明による前記阻害剤の全部又はいくらか
（好ましくは、全部）とは異なる経路により投与され得る。しかしながら、好ま
しくは、少なくとも阻害剤及び／又は増殖因子が局所適用される。１つの好まし
い側面では、阻害剤と増殖因子の両方が局所適用される。もう１つの好ましい側
面では、阻害剤が経口で適用され、増殖因子が局所適用される。

【００２８】 本発明の１つの側面によれば、慢性損傷創のような慢性損傷組織を治療する医
薬品の製造における本発明による組成物の使用が提供される。ここで、本発明に
よる前記増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部）が、本発明による前
記阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、全部）とは異なる経路により投与さ
れ得る。しかしながら、好ましくは、少なくとも阻害剤及び／又は増殖因子が局
所適用される。好ましい側面では、阻害剤と増殖因子の両方が局所適用される。
もう１つの好ましい側面では、阻害剤が経口で適用され、増殖因子が局所適用さ
れる。

【００２９】 本発明の１つの側面によれば、本発明による阻害剤で治療されている被検者を
治療するための医薬品の製造における、本発明による増殖因子の使用が提供され
る。ここで、本発明による前記増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部
）が、本発明による前記阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、全部）とは異
なる経路により投与され得る。しかしながら、好ましくは、少なくとも阻害剤及
び／又は増殖因子が局所適用される。好ましい側面では、阻害剤と増殖因子の両
方が局所適用される。もう１つの好ましい側面では、阻害剤が経口で適用され、
増殖因子が局所適用される。

【００３０】 本発明の１つの側面によれば、本発明による増殖因子で治療されている被検者
を治療するための医薬品の製造における、本発明による阻害剤の使用が提供され
る。ここで、本発明による前記増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部
）が、本発明による前記阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、全部）とは異
なる経路により投与され得る。しかしながら、好ましくは、少なくとも阻害剤及
び／又は増殖因子が局所適用される。好ましい側面では、阻害剤と増殖因子の両
方が局所適用される。もう１つの好ましい側面では、阻害剤が経口で適用され、
増殖因子が局所適用される。

【００３１】 本発明の１つの側面によれば： （ａ）増殖因子； （ｂ）ｉ：ＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰ；及び所望により （ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬品が提供さ
れ、ここでｉＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰは、創傷のような損傷組織の環境におい
てアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、
特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る。

【００３２】 この態様では、増殖因子は内因性の増殖因子であり得る。 ここで、本発明による前記増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部）
が、本発明による前記阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、全部）とは異な
る経路により投与され得る。しかしながら、好ましくは、少なくとも阻害剤及び
／又は増殖因子は局所適用される。好ましい側面では、阻害剤と増殖因子の両方
が局所適用される。もう１つの好ましい側面では、阻害剤が経口で適用され、増
殖因子が局所適用される。

【００３３】 本発明の１つの側面によれば： （ａ）増殖因子； （ｂ）ｉ：ＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰ；及び所望により （ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬品の、創傷
のような損傷組織を治療するための使用が提供され、ここでｉＵＰＡ及び／又は
ｉＭＭＰは、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少
なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を
阻害し得る。

【００３４】 この態様では、増殖因子は内因性の増殖因子であり得る。 ここで、本発明による前記増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部）
が、本発明による前記阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、全部）とは異な
る経路により投与され得る。しかしながら、好ましくは、少なくとも阻害剤及び
／又は増殖因子は局所適用される。好ましい側面では、阻害剤と増殖因子の両方
が局所適用される。もう１つの好ましい側面では、阻害剤が経口で適用され、増
殖因子が局所適用される。

【００３５】 本発明の１つの側面によれば： （ａ）ｉ：ＵＰＡ； （ｂ）ｉＭＭＰ；及び所望により （ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬品が提供さ
れ、ここでｉＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰは、創傷のような損傷組織の環境におい
てアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、
特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る。

【００３６】 参照しやすくするために、本発明の上記側面とさらなる側面を適当な節見出し
の下で以下考察する。しかしながら、各節下の教示はそれぞれの特定の節に必ず
しも限定されない。

【００３７】 好ましい側面 好ましくは、前記増殖因子は：ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）、ＦＧＦ（線維
芽細胞増殖因子）、ＣＴＧＦ（結合組織由来増殖因子）、ＫＧＦ（角質細胞増殖
因子）、ＴＧＦ（トランスフォーミング増殖因子）、ＣＳＦ（コロニー刺激因子
）、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）、ＥＧＦ（上皮増殖因子）、クリサリン
（Chrysalin）、又はそれらの活性な変異体、相同体、誘導体又はフラグメント
の１つ又はそれ以上から選択される。

【００３８】 好ましくは、前記増殖因子は、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＣＴＧ
Ｆ様、ＫＧＦ−２、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球／マクロファージ刺激因
子）、クリサリン又はそれらの活性な変異体、相同体、誘導体又はフラグメント
の１つ又はそれ以上から選択される。

【００３９】 好ましくは、前記増殖因子は、少なくともＰＤＧＦ、又はその活性な変異体、
相同体、誘導体又はフラグメントである。フラグメントの例には、ＰＤＧＦ−Ａ
鎖及びＰＤＧＦ−Ｂ鎖が含まれる。

【００４０】 典型的には、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる
タンパク質は、プロテアーゼである。 好ましくは、前記阻害剤は、ウロキナーゼタイプのプラスミノーゲンアクチベ
ーターの阻害剤（他のやり方では、Ｉ：ｕＰＡと言及され、ｉ：ＵＰＡ若しくは
Ｉ：ＵＰＡと書かれるときもある）及び／又はマトリックスメタロプロテイナー
ゼの阻害剤（他のやり方では、Ｉ：ＭＭＰと言及され、ｉ：ＭＭＰと書かれると
きもある）である。

【００４１】 好ましくは、前記損傷組織は創傷である。 好ましくは、前記創傷は慢性創傷である。 好ましくは、前記創傷は皮膚潰瘍である、 好ましくは、前記投与経路は、経口投与、（直接注射のような）注射、局所、
吸入、腸管外投与、粘膜投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、眼内投与又
は経皮投与の少なくとも１種又はそれ以上から選択される。

【００４２】 好ましくは、前記投与経路は、経口投与及び／又は局所投与である。 好ましくは、前記阻害剤の少なくとも一部（好ましくは全部）が局所投与によ
り投与（デリバリー）され、そのような投与経路用に製剤化される。

【００４３】 好ましくは、前記増殖因子の少なくとも一部（好ましくは全部）が局所投与に
より投与（デリバリー）され、そのような投与経路用に製剤化される。 好ましくは、阻害剤は少なくともｉ：ＵＰＡである。他の態様では、又は追加
すると、好ましくは、阻害剤は少なくともｉ：ＭＭＰであり、ここで前記ＭＭＰ
はＭＭＰ３及び／又はＭＭＰ１３である。

【００４４】 損傷組織においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タン パク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害する 「損傷組織においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タン
パク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害する」という用語は、本発
明の阻害剤が多数のタンパク質にわたる活性プロフィールを有さないことを意味
する。むしろ、本発明の阻害剤は、損傷組織においてアップレギュレートされる
特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）に実質的に選択的に作用
することができる。ある状況では、阻害剤は、損傷組織においてアップレギュレ
ートされる数種の特定タンパク質に作用し得る。しかしながら、好ましくは、阻
害剤は、損傷組織においてアップレギュレートされる１種の特定タンパク質（例
えば、特定のプロテアーゼ）に選択的に作用し得る。きわめて好ましい側面にお
いて他に表現すれば、本発明の阻害剤は、創傷治癒に対して有害な効果を及ぼす
少なくとも１種の特定の有害プロテアーゼによる特定のタンパク分解効果を制限
する薬剤である。

【００４５】 好ましくは、阻害剤は、選択的である−例えば、創傷のような損傷組織の環境
において見出される他のプロテアーゼに対し、精製酵素を使用して測定される相
対Ｋｉに関して、少なくとも約５０倍、より好ましくは少なくとも約７５倍、よ
り好ましくは少なくとも約１００倍選択的である。阻害剤の選択に依存して、他
のプロテアーゼタンパク質の例には、ＭＭＰ、ｔＰＡ，プラスミン、及び好中球
エラスターゼの１種又はそれ以上が含まれ得るが、このうちのいくつかは創傷治
癒に対して有益な効果を有する。

【００４６】 ある適用では、好ましくは、阻害剤は、特定の所望されるタンパク標的に対し
て、約１００ｎＭ未満、好ましくは約７５ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ未満
、好ましくは約２５ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ未満、好ましくは約１５ｎ
Ｍ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満、好ましくは約５ｎＭ未満のＫｉ値を有する
。

【００４７】 ある適用では、好ましくは、この薬剤は、特に所望される標的に対して少なく
とも約１００倍の選択性、好ましくはその所望される標的に対して少なくとも約
１５０倍の選択性、好ましくはその所望される標的に対して少なくとも約２００
倍の選択性、好ましくはその所望される標的に対して少なくとも約２５０倍の選
択性、好ましくはその所望される標的に対して少なくとも約３００倍の選択性、
好ましくはその所望される標的に対して少なくとも約３５０倍の選択性、好まし
くはその所望される標的に対して少なくとも約４００倍の選択性、好ましくはそ
の所望される標的に対して少なくとも約４５０倍の選択性、好ましくはその所望
される標的に対して少なくとも約５００倍の選択性、好ましくはその所望される
標的に対して少なくとも約６００倍の選択性、好ましくはその所望される標的に
対して少なくとも約７００倍の選択性、好ましくはその所望される標的に対して
少なくとも約８００倍の選択性、好ましくはその所望される標的に対して少なく
とも約９００倍の選択性、好ましくはその所望される標的に対して少なくとも約
１０００倍の選択性を有する。

【００４８】 ある適用では、好ましくは、本発明の阻害剤は、約１００ｎＭ未満、好ましく
は約７５ｎＭ未満、好ましくは約５０ｎＭ未満、好ましくは約２５ｎＭ未満、好
ましくは約２０ｎＭ未満、好ましくは約１５ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未
満、好ましくは約５ｎＭ未満のＫｉ値を有する。

【００４９】 本発明のある態様では、好ましくは、本発明の薬剤は、−２〜＋４、より好ま
しくは、−１〜＋２のｌｏｇＤを有する。このｌｏｇＤは、J. Pharm. Pharmaco
l. 1990, 42: 144 に記載のように、当技術分野で既知の標準法により決定し得
る。

【００５０】 さらに、又は他のやり方では、ある態様では、好ましくは、本発明の薬剤は、
２ｘ１０^-6ｃｍ^-1より大きい、より好ましくは、５ｘ１０^-6ｃｍ^-1より大きいｃ
ａｃｏ−２フラックス（flux）を有する。このｃａｃｏフラックス値は、J. Pha
rm. Sci. 79, 7, p595-600 (1990) 及び Pharm. Res. 14巻、6号 (1997) に記載
のように、当技術分野で既知の標準法により決定し得る。

【００５１】 治療 治療に関する本明細書のあらゆる言及には、治癒、症状緩和、及び予防的治療の
１種又はそれ以上が含まれると理解されるべきである。好ましくは、治療という
用語には、少なくとも治癒的治療及び／又は症状緩和的治療が含まれる。

【００５２】 治療は、慢性皮膚潰瘍、糖尿病性潰瘍、床ずれ（又は褥瘡）、静脈不全潰瘍、
静脈うっ血潰瘍、火傷、角膜潰瘍又は融解（melts）の１種又はそれ以上の治療
であり得る。

【００５３】 治療は、創傷のような損傷組織障害、障害が糖尿病による場合の癒着、年齢、
癌又はその（放射線療法を含む）治療、神経障害、栄養不良又は慢性疾患に関連
した種々の病態を治療するためであり得る。

【００５４】 アミノ酸配列 本発明の側面はアミノ酸配列の使用に関わる。これらアミノ酸配列は、増殖因子
成分のような本発明の組成物の成分であり得る。もう１つの態様では、アミノ酸
配列は、本発明の組成物における使用に適した阻害剤を同定するための標的とし
て使用される場合がある。もう１つの態様では、アミノ酸配列は、ある薬剤が本
発明の組成物の阻害剤として使用し得ることを証明するための標的として使用さ
れる場合がある。

【００５５】 本明細書で使用されるように、「アミノ酸配列」という用語は、「ポリペプチ
ド」という用語及び／又は「タンパク質」という用語と同義である。ある例では
、「アミノ酸配列」という用語は、「ペプチド」という用語と同義である。ある
例では、「アミノ酸配列」という用語は、「タンパク質」という用語と同義であ
る。ある例では、タンパク質という用語はプロテアーゼである。

【００５６】 アミノ酸配列は、好適な供給源から単離されて調製され得るか、又はそれは合
成的に創出され得るか、又はそれは組換えＤＮＡ技術の使用により調製され得る
。

【００５７】 １つの側面では、本発明は、本発明の組成物の成分として使用されるアミノ酸
配列を提供する。 もう１つの側面では、本発明は、前記アミノ酸の阻害剤として作用し得る１種
又はそれ以上の薬剤及び／又はその誘導体の同定についてのアッセイにおける標
的として作用し得るアミノ酸配列を提供する。

【００５８】 ヌクレオチド配列 本発明の側面はヌクレオチド配列の使用に関わる。これらヌクレオチド配列は、
増殖因子成分のような本発明の組成物の成分として使用され得るアミノ酸配列を
発現するために使用される場合がある。もう１つの態様では、ヌクレオチド配列
は、本発明の組成物における使用に適した阻害剤を同定するための標的として使
用される場合がある。もう１つの態様では、ヌクレオチド配列は、ある薬剤が本
発明の組成物の阻害剤として使用し得ることを証明するための標的として使用さ
れる場合がある。

【００５９】 本明細書で使用されるように、「ヌクレオチド配列」という用語は、「ポリヌ
クレオチド」という用語と同義である。 ヌクレオチド配列は、ゲノム又は合成、又は組換え起源のＤＮＡ若しくはＲＮ
Ａであり得る。ヌクレオチド配列は二本鎖若しくは一本鎖であり得て、センス若
しくはアンチセンス鎖、又はその組み合わせを表す。

【００６０】 ある適用では、好ましくは、ヌクレオチド配列はＤＮＡである。 ある適用では、好ましくは、ヌクレオチド配列は、組換えＤＮＡ技術（例えば
、組換えＤＮＡ）の使用により調製される。

【００６１】 ある適用では、好ましくは、ヌクレオチド配列はｃＤＮＡである。 ある適用では、好ましくは、ヌクレオチド配列は天然に存在する形態と同一で
あり得る。

【００６２】 １つの側面では、本発明は、前記ヌクレオチド配列（又はそれによりコードさ
れるアミノ酸）の阻害剤として作用し得る１種又はそれ以上の薬剤及び／又はそ
の誘導体の同定についての（酵母のツーハイブリッドアッセイのような）アッセ
イにおける標的として作用し得る物質をコードするヌクレオチド配列を提供する
。

【００６３】 変異体／相同体／誘導体 本明細書で述べた特定のアミノ酸配列及びヌクレオチド配列に加えて、本発明に
はまた、その変異体、相同体及び誘導体の使用も含まれる。ここで、「相同体」
という用語は、当のアミノ酸配列と当のヌクレオチド配列とある種の相同性を有
する実体を意味する。ここで、「相同性」という用語は、「同一性」と同等であ
り得る。

【００６４】 本発明の文脈では、相同配列は、当の配列に対して少なくとも７５、８５又は
９０％同一、好ましくは少なくとも９５又は９８％同一であり得るアミノ酸配列
を包含すると考えられる。典型的には、相同体は、当のアミノ酸配列と同じ活性
部位等を含むものである。相同性は類似性（即ち、類似した化学的性質／機能を
有するアミノ酸残基）に関しても考慮し得るが、本発明の文脈では、配列同一性
に関して相同性を表現することが好ましい。

【００６５】 本発明の文脈では、相同配列は、当の配列に対して少なくとも７５、８５又は
９０％同一、好ましくは少なくとも９５又は９８％同一であり得るヌクレオチド
配列を包含すると考えられる。典型的には、相同体は、活性部位等をコードする
、当の配列と同じ配列を含むものである。相同性は類似性（即ち、類似した化学
的性質／機能を有するアミノ酸残基）に関しても考慮し得るが、本発明の文脈で
は、配列同一性に関して相同性を表現することが好ましい。

【００６６】 相同性比較は視察によるか、又はより通常は、容易に利用し得る配列比較プロ
グラムを利用して実施され得る。これらの市販コンピュータ・プログラムは、２
種又はそれ以上の配列の相同性比率（％）を算出し得る。

【００６７】 相同性比率（％）は、連続配列で算出され得る。即ち、一方のアミノ酸を他方
のアミノ酸と並置し、一方の配列内の各アミノ酸を他方の配列内の対応アミノ酸
と、１回１残基で直接比較する。これは「非ギャップ」並置と呼ばれる。典型的
には、そのような非ギャップ並置は、比較的短い数の残基でのみ実施される。

【００６８】 これはごく単純で首尾一貫した方法であるが、例えば、他の点では同一な配列
の対でも、１個の挿入若しくは欠失により、後続のアミノ酸残基が並置から外れ
、それにより、全体並置が実施されるときに相同性比率（％）が大きく減少する
可能性があることを考慮していない。従って、ほとんどの配列比較法は、全体の
相同性スコアを不当に不利にすることなく、可能な挿入及び欠失を考慮する最適
な並置を生じるように設計されている。このことは、配列並置に「ギャップ」を
挿入して局所の相同性の最大化を試みることによって達成される。

【００６９】 しかしながら、これらのより複雑な方法では、並置で生じる各ギャップにつき
「ギャップペナルティ」を割当てる。それで、同数の同一アミノ酸では、可能な
限り少ないギャップを有する配列並置−２つの比較配列間のより高い関連性を反
映する−のほうが、多くのギャップのある配列並置より高いスコアを達成するこ
とになる。「アフィンギャップコスト」は、典型的には、ギャップの存在に対し
て比較的高いコストを科し、ギャップ内の各後続残基にはより小さいペナルティ
を科すように使用される。これは、最も使用されるギャップスコアリング系であ
る。当然ながら、高いギャップペナルティを科せば、より少ないギャップを有す
る最適並置を生じる。しかしながら、そのような配列比較のソフトウェアを使用
するときには、デフォルト値を使用することが好ましい。例えば、ＧＣＧウィス
コンシン・ベストフィット・パッケージを使用する場合、アミノ酸配列について
のデフォルトギャップペナルティは、１つのギャップにつき−１２であり、それ
ぞれの追加について−４である。

【００７０】 従って、最大相同性比率（％）の算出には、ギャップペナルティを考慮した、
最適並置の産出が必要とされる。そのような並置を実行する最適のコンピュータ
・プログラムは、ＧＣＧウィスコンシン・ベストフィット・パッケージ（ウィス
コンシン大学、アメリカ；Devereux et al., 1984, Nucleic Acids Research 12
: 387）である。配列比較を実施し得る他のソフトウェアの例には、限定しない
が、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ausubel et al., 1999 同上−18章を参照のこと）
、ＦＡＳＴＡ（Atschul et al., 1990, J. Mol. Biol., 403-410）及び、比較ツ
ールのＧＥＮＥＷＯＲＫＳセットが含まれる。ＢＬＡＳＴとＦＡＳＴＡはいずれ
もオフラインとオンライン検索で利用可能である（Ausubel et al., 1999 同上,
7-58〜7-60頁を参照のこと）。しかしながら、ある適用では、ＧＣＧベストフ
ィット・プログラムを使用することが好ましい。「ＢＬＡＳＴ２配列」と呼ばれ
る新たなツールもまた、タンパク質及び核酸の配列を比較するのに利用し得る（
FEMS MIcrobiol Lett 1999 174 (2): 247-250; FEMS MIcrobiol Lett 1999 177
(1): 187-8、及び tatiana@ncbi.nlm.nih.gov を参照のこと）。

【００７１】 最終相同性比率（％）は同一性により測定され得るが、並置法そのものは、典
型的には、全か無かの対比較には基づかない。むしろ、化学的類似性又は進化距
離に基づいたそれぞれの対合比較へスコアを割り当てる定率類似性スコアマトリ
ックスが一般に使用される。一般に使用されるそのようなマトリックスの例は、
ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（ＢＬＡＳＴプログラムセットのデフォルトマト
リックス）である。ＧＣＧウィスコンシンプログラムは、一般に、公表デフォル
ト値か、もしあれば一般記号比較表のいずれかを使用する（詳しくは、使用者手
引きを参照のこと）。ある適用では、ＧＣＧパッケージに対しては公表デフォル
ト値を使用し、他のソフトウェアの場合は、ＢＬＯＳＵＭ６２のようなデフォル
トマトリックスを使用することが好ましい。

【００７２】 ソフトウェアが最適並置を算出したならば、相同性（％）、好ましくは配列同
一性（％）を算出することが可能である。典型的には、ソフトウェアは、これを
配列比較の一部として実行し、数的結果を作成する。

【００７３】 配列はまた、サイレント変化をもたらし、機能上は同一の物質をもたらす、ア
ミノ酸の欠失、挿入又は置換を有する場合がある。物質の二次の結合活性が保た
れる限りは、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性
に基づいて、意図的なアミノ酸の置換がなされ得る。例えば、負電荷のアミノ酸
にはアスパラギン酸及びグルタミン酸；陽電荷のアミノ酸にはリジン及びアルギ
ニンが含まれ、そして、同様の疎水性の数値を有する、電荷のない極性ヘッドを
もったアミノ酸には、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、
アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、及びチロ
シンが含まれる。

【００７４】 保守的な置換は、例えば、以下の表によりなし得る。第二カラムの同一ブロッ
クにあるアミノ酸、そして好ましくは、第三カラムの同一ラインにあるアミノ酸
は、互いに置換され得る：

【００７５】

【表１】

【００７６】 本発明にはまた、相同置換が起こり得ることが含まれる（本明細書では、置換
及び置き換えは、ある既存アミノ酸の他の残基との相互交換を意味するために使
用される）。即ち、塩基性には塩基性、酸性には酸性、極性には極性、等のよう
な類似物同士の置換である。非相同置換も起こり得る。即ち、ある群の残基から
別の群の残基への置換、又は他のやり方では、オルニチン（以下、Ｚと呼ぶ）、
ジアミノ酪酸オルニチン（以下、Ｂと呼ぶ）、ノルロイシンオルニチン（以下、
Ｏと呼ぶ）、ピリニルアラニン、チエニルアラニン、ナフチルアラニン及びフェ
ニルグリシンのような非天然アミノ酸の包含も関わる。

【００７７】 置換はまた非天然アミノ酸によってもなし得るが、それには、α^*−及びα−
二置換^*アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸^*、乳酸^*、トリフルオロチロシン^*、ｐ
−Ｃｌ−フェニルアラニン^*、ｐ−Ｂｒ−フェニルアラニン^*、ｐ−Ｉ−フェニル
アラニン^*のような天然アミノ酸のハロゲン化誘導体、Ｌ−アリル−グリシン^*、
β−アラニン^*、Ｌ−α−アミノ酪酸^*、Ｌ−γ−アミノ酪酸^*、Ｌ−α−アミノ
イソ酪酸^*、Ｌ−ε−アミノカプロン酸^#、７−アミノヘプタン酸^*、Ｌ−メチオ
ニンスルホン^#*、Ｌ−ノルロイシン^*、Ｌ−ノルバリン^*、ｐ−ニトロ−Ｌ−フェ
ニルアラニン^*、Ｌ−ヒドロキシプロリン^#、Ｌ−チオプロリン^*、４−メチル−
Ｐｈｅ^*、ペンタメチル−Ｐｈｅ^*のようなフェニルアラニン（Ｐｈｅ）のメチル
誘導体、Ｌ−Ｐｈｅ（４−アミノ）^#、Ｌ−Ｔｙｒ（メチル）^*、Ｌ−Ｐｈｅ（４
−イソプロピル）^*、Ｌ−Ｔｉｃ（１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン
−３−カルボン酸）^*、Ｌ−ジアミノプロピオン酸^#及びＬ−Ｐｈｅ（４−ベンジ
ル）^*が含まれる。＊の表記が誘導体の疎水性を示すために（相同若しくは非相
同置換に関して）上記の目的で利用したのに対し、＃は誘導体の親水性を示すた
めに利用した。＃＊は、両親媒性を示す。

【００７８】 変異体のアミノ酸配列には、配列の２つのアミノ酸残基間に挿入され得る好適
なスペーサー基が含まれる場合があるが、それには、メチル、エチル又はプロピ
ル基のようなアルキル基、さらに、グリシン又はβ−アラニン残基のようなアミ
ノ酸のスペーサーが含まれる。さらなる変異体の形態は、当業者によく理解され
ているように、ペプトイド形態である１つ又はそれ以上のアミノ酸残基の存在を
含む。疑念を回避すれば、「ペプトイド（peptoid）形態」は、α−炭素の置換
基がα−炭素ではなく残基の窒素原子上に存在する、変異アミノ酸残基を意味す
るために使用される。ペプトイド形態のペプチドを製造する方法は当技術分野で
知られている。例えば、Simon RJ et al., PNAS (1992) 89 (20), 9367-9371 及
び Horwell DC, Trends Biotechnol. (1995) 13 (4), 132-134。

【００７９】 本発明に使用されるヌクレオチド配列には、合成若しくは修飾ヌクレオチドが
そのなかに含まれる場合がある。オリゴヌクレオチドに対する多数の異なる修飾
が当技術分野で知られている。これには、メチルホスホネート及び／又はホスホ
ロチオエート骨格、及び／又は分子の３’及び／又は５’末端でのアクリジン又
はポリリジン鎖の付加が含まれる。本発明の目的では、本明細書に記載のヌクレ
オチド配列が当技術分野で利用可能な任意の方法により修飾され得ると理解され
るべきである。そのような修飾は、本発明のヌクレオチド配列の in vivo 活性
又は寿命を亢進するために実行され得る。

【００８０】 本発明にはまた、本明細書に提示される配列へ相補的であるヌクレオチド配列
、又はその誘導体、フラグメント又はその誘導体が含まれる。配列がそのフラグ
メントへ相補的であれば、その配列は、他の生物における類似のコーディング配
列を同定するためのプローブ等として使用し得る。

【００８１】 ハイブリダイゼーション 本発明にはまた、本明細書に提示される配列、又はその誘導体、フラグメント又
はその誘導体へ、その剤がアンチセンス配列であるかのように、ハイブリダイズ
し得るヌクレオチド配列の使用も含まれる。

【００８２】 「ハイブリダイゼーション」という用語には、本明細書で使用されるように「
核酸の鎖が塩基対合を介して相補的な鎖と結合する方法」、並びにポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）技術において実行されるような増幅の方法が含まれる。

【００８３】 本発明にはまた、本明細書に提示される配列、又はその誘導体、フラグメント
又はその誘導体に相補的である配列へハイブリダイズし得るヌクレオチド配列の
使用も含まれる。

【００８４】 「変異体」という用語には、本明細書に提示されるヌクレオチド配列へハイブ
リダイズし得る配列に相補的である配列も含まれる。 好ましくは、「変異体」という用語には、本明細書に提示されるヌクレオチド
配列へ、ストリンジェント条件（例えば、５０℃及び０．２ｘＳＳＣ｛１ｘＳＳ
Ｃ＝０．１５Ｍ ＮａＣｌ，０．０１５Ｍ クエン酸Ｎａ₃，ｐＨ７．０｝）の
下でハイブリダイズし得る配列に相補的である配列も含まれる。

【００８５】 より好ましくは、「変異体」という用語には、本明細書に提示されるヌクレオ
チド配列へ、高ストリンジェント条件（例えば、６５℃及び０．１ｘＳＳＣ｛１
ｘＳＳＣ＝０．１５Ｍ ＮａＣｌ，０．０１５Ｍ クエン酸Ｎａ₃，ｐＨ７．０
｝）の下でハイブリダイズし得る配列に相補的である配列が含まれる。

【００８６】 本発明はまた、本発明のヌクレオチド配列（本明細書に提示される配列の相補
配列も含む）へハイブリダイズし得るヌクレオチド配列にも関する。 本発明はまた、本発明のヌクレオチド配列（本明細書に提示される配列の相補
配列も含む）へハイブリダイズし得る配列に相補的であるヌクレオチド配列にも
関する。

【００８７】 さらに本発明の範囲内に含まれるのは、中等度〜最高のストリンジェンシーの
下で本明細書に提示されるヌクレオチド配列へハイブリダイズし得るポリヌクレ
オチド配列である。

【００８８】 好ましい側面では、本発明には、本発明のヌクレオチド配列、又はその相補体
へストリンジェント条件（例えば、５０℃及び０．２ｘＳＳＣ）の下でハイブリ
ダイズし得るヌクレオチド配列が含まれる。

【００８９】 より好ましい側面では、本発明には、本発明のヌクレオチド配列、又はその相
補体へ高ストリンジェント条件（例えば、６５℃及び０．１ｘＳＳＣ）の下でハ
イブリダイズし得るヌクレオチド配列が含まれる。

【００９０】 調節配列 ある適用では、本発明で使用のポリヌクレオチドは、選択される宿主細胞による
ようなコーディング配列の発現を提供することを可能にする調節配列へ機能可能
的に連結している。例えば、本発明には、そのような調節配列へ機能可能的に連
結している本発明のポリヌクレオチドを含んでなるベクターが含まれる。即ち、
そのベクターは発現ベクターである。

【００９１】 「機能可能的に連結している」という用語は、並置関係を意味し、ここでは記
載の諸成分がそれらの意図されたやり方で機能することを可能にする関係にある
。コーディング配列へ「機能可能的に連結している」調節配列は、コーディング
配列の発現がそのコントロール配列に適合した条件下で達成されるような仕方で
連結される。

【００９２】 「調節配列」という用語には、プロモーター及びエンハンサー、そして他の発
現調節シグナルが含まれる。 「プロモーター」という用語は、当技術分野の通常の意味で使用され、例えば
、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位である。

【００９３】 本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの亢進された発現はまた
、異種の調節領域、例えばプロモーター、分泌リーダー及びターミネーター領域
の選択により達成され得るが、それらは、注目タンパク質の選択される発現宿主
からの発現と、所望されるならば、分泌レベルを増加させるのに役立ち、及び／
又は本発明のポリペプチド発現の誘導される制御を提供する。

【００９４】 好ましくは、本発明のヌクレオチド配列は、少なくともプロモーターへ機能可
能的に連結され得る。 本発明のポリペプチドをコードする遺伝子に対してネーティブなプロモーター
とは別に、本発明のポリペプチドの発現を指令するために他のプロモーターを使
用し得る。プロモーターは、所望の発現宿主における本発明のポリペプチドの発
現を指令するその効率性について選択され得る。

【００９５】 もう１つの態様では、本発明の所望されるポリペプチドの発現を指令するため
に構成プロモーターが選択され得る。そのような発現構築体は、誘導基質を含有
する培地で発現宿主を培養することの必要性を回避するので、追加の利点を提供
し得る。

【００９６】 真菌発現宿主における使用に好ましい強い構成及び／又は誘導プロモーターの
例は、キシラナーゼ（ｘｌｎＡ）、フィターゼ、ＡＴＰ−シンテターゼ、サブユ
ニット９（ｏｌｉＣ）、トリオースリン酸イソメラーゼ（ｔｐｉ）、アルコール
デヒドロゲナーゼ（ＡｄｈＡ）、α−アミラーゼ（ａｍｙ）、アミノグルコシダ
ーゼ（ｇｌａＡ遺伝子由来のＡＧ）、アセトアミダーゼ（ａｍｄＳ）及びグリセ
ルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ｇｐｄ）プロモーターの真菌遺伝
子から入手されるものである。

【００９７】 強い酵母プロモーターの例は、アルコールデヒドロゲナーゼ、ラクターゼ、３
−ホスホグリセレートキナーゼ及びトリオースリン酸イソメラーゼの遺伝子から
入手されるものである。

【００９８】 強い細菌プロモーターの例は、α−アミラーゼ及びＳＰ０２のプロモーター、
並びに細胞外プロテアーゼ遺伝子由来のプロモーターである。 ハイブリッドプロモーターはまた、発現構築体の誘導調節を向上させるために
使用され得る。

【００９９】 さらに、プロモーターには、好適な宿主における発現を確実にするか又は増加
させる特徴が含まれる。例えば、この特徴は、プリブナウボックス又はＴＡＴＡ
ボックスのような保存領域であり得る。プロモーターは、本発明のヌクレオチド
配列の発現レベルに（維持、亢進、減少させるように）影響する他の配列を含む
場合さえある。例えば、他の好適な配列には、Ｓｈ１−イントロン又はＡＤＨイ
ントロンが含まれる。他の配列には、温度、化学物質、光又はストレスで誘導さ
れる要素のような、誘導要素が含まれる。また、転写若しくは翻訳を亢進するの
に適した要素も存在し得る。後者の要素の例はＴＭＶ５’シグナル配列である（
Sleat Gene 217 [1987] 217-225; 及び Dawson Plant Mol. Biol. 23 [1993] 97
を参照のこと）。

【０１００】 分泌 しばしば、本発明で使用のポリペプチドには、発現宿主から、本発明のポリペプ
チドがより容易に回収され得る培養基へ分泌されることが所望される。本発明に
よれば、分泌リーダー配列が、所望される発現宿主に基づいて選択され得る。ハ
イブリッドシグナル配列もまた本発明の文脈で使用され得る。

【０１０１】 異種の分泌リーダー配列の典型的な例は、真菌アミノグルコシダーゼ（ＡＧ）
遺伝子（例えば、アスペルギルス属由来のｇｌａＡ−１８アミノ酸と２４アミノ
酸の両バージョン）、ａ因子遺伝子（酵母、例えばサッカロミセス属及びクリー
ベロミセス属）又はα−アミラーゼ遺伝子（バシラス属）から由来するものであ
る。

【０１０２】 構築体 「構築体」という用語は、「コンジュゲート」「カセット」及び「ハイブリッド
」のような用語と同義であり、プロモーターが直接的又は間接的に付着した、本
発明により使用のヌクレオチド配列を包含する。間接的な付着の例は、プロモー
ターと本発明のヌクレオチド配列の間に、Ｓｈ１−イントロン又はＡＤＨイント
ロンのようなイントロン配列のような好適なスペーサー配列を提供することであ
る。同じことは、本発明に関連した「融合」という用語にも適用され、直接的又
は間接的な付着が含まれる。ある場合、この用語には、タンパク質をコードする
ヌクレオチド配列が野生型遺伝子プロモーターと通常通りに結合し、それらがい
ずれもその天然の環境にあるときの、天然の組み合わせが含まれない。

【０１０３】 構築体はまた、細菌、好ましくは枯草菌のようなバシラス属、又はそれが導入
された植物において、この遺伝子構築体の選択を可能にするマーカーを含有又は
発現さえする場合がある。例えば、マンノース−６−リン酸イソメラーゼ（特に
、植物の）をコードするマーカー、又は抗生物質耐性、例えばＧ４１４、ヒグロ
マイシン、ブレオマイシン、カナマイシン及びゲンタマイシンへの耐性を提供す
るマーカーのような、存在する様々なマーカーを使用し得る。

【０１０４】 ある適用では、好ましくは、本発明の構築体は、プロモーターへ機能可能的に
連結した本発明のヌクレオチド配列を少なくとも含む。

【０１０５】 ベクター 「ベクター」という用語には、発現ベクター、形質転換ベクター、及びシャトル
ベクターが含まれる。 「発現ベクター」という用語は、in vivo 又は in vitro での発現が可能であ
る構築体を意味する。 「形質転換ベクター」は、ある実体から別の実体（同じ種であり得るか、又は
異なる種であり得る）導入されることが可能である構築体を意味する。構築体が
、大腸菌のプラスミドからバシラス属のような細菌へというように１つの種から
別の種へ導入されることが可能であるならば、この形質転換ベクターは「シャト
ルベクター」と呼ばれることもある。それは、大腸菌のプラスミドからアグロバ
クテリウム属、さらに植物へ導入されることが可能である構築体でもあり得る。

【０１０６】 本発明のベクターは、以下に記載のように好適な宿主細胞へ形質転換されて、
本発明のポリペプチドの発現を提供し得る。このように、さらなる側面では、本
発明は、本発明による使用のためにポリペプチドを製造する方法を提供し、これ
は、上記のような発現ベクターで形質転換されたか又はトランスフェクトされた
宿主細胞を、ポリペプチドをコードするコーディング配列のベクターにより発現
を提供する条件の下で培養すること、及び発現されたポリペプチドを回収するこ
とを含む。

【０１０７】 ベクターは、複製起点、及び所望により前記ポリヌクレオチドの発現のプロモ
ーター、及び所望によりこのプロモーターのレギュレーターが備わった、例えば
、プラスミド、ウイルス、又はファージのベクターであり得る。

【０１０８】 本発明のベクターは、１つ又はそれ以上の選択マーカー遺伝子を含有し得る。
工業用微生物に最も適した選択系は、宿主生物における突然変異を必要としない
選択マーカーの群により形成されるものである。真菌の選択マーカ−の例は、ア
セトアミダーゼ（ａｍｄＳ）、ＡＴＰシンテターゼ、サブユニット９（ｏｌｉＣ
）、オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼ（ｐｖｒＡ）、フレオマイシ
ン及びベノミル耐性（ｂｅｎＡ）の遺伝子である。非真菌選択マーカーの例は、
細菌性Ｇ４１８耐性遺伝子（これは酵母でも使用され得るが、糸状菌では使用さ
れない）、アンピシリン耐性遺伝子（大腸菌）、ネオマイシン耐性遺伝子（バシ
ラス属）、及びβ−グルクロニダーゼをコードする大腸菌ｕｉｄＡ遺伝子（ＧＵ
Ｓ）である。

【０１０９】 ベクターは、例えばＲＮＡの産生に in vitro で使用され得るか、又は宿主細
胞をトランスフェクトするか又は形質転換するために使用され得る。 従って、本発明による使用のポリヌクレオチドは、組換えベクター（典型的に
は、複製可能なベクター）、例えばクローニング若しくは発現ベクターへ取込む
ことができる。このベクターは、適合した宿主細胞において核酸を複製するため
に使用され得る。このように、さらなる態様では、本発明は、本発明のポリヌク
レオチドを複製可能ベクターへ導入すること、このベクターを適合した宿主細胞
へ導入すること、及び、このベクターの複製をもたらす条件の下でこの宿主細胞
を増殖させることによって本発明のポリペプチドを製造する方法を提供する。ベ
クターは宿主細胞から回収され得る。好適な宿主細胞を発現ベクターとともに以
下に記載する。

【０１１０】 本発明はまた、本発明によるアミノ酸配列（又はその変異体、相同体、フラグ
メント又は誘導体）を発現する遺伝子工学的に処理された宿主細胞の、前記アミ
ノ酸配列の阻害剤及び拮抗薬の同定についてのスクリーニング（予備選択）法に
おける使用にも関する。そのような遺伝子工学的に処理された宿主細胞は、ペプ
チドライブラリー又は有機分子を予備選択するために使用され得る。抗体、ペプ
チド又は有機低分子のような、前記アミノ酸配列の拮抗薬及び阻害剤は、創傷の
ような損傷組織を治療するための医薬組成物の基礎を提供する。そのような阻害
剤若しくは拮抗薬は、単独でか、又はそのような疾患を治療するための他の治療
薬と組み合わせて投与され得る。

【０１１１】 本発明はまた、前記アミノ酸配列を阻害するか又はそれに拮抗し得る薬剤につ
いて予備選択するための、前記アミノ酸配列又はその変異体、相同体、フラグメ
ント又は誘導体をコードするポリヌクレオチド配列を含んでなる発現ベクター及
び宿主細胞にも関する。

【０１１２】 発現ベクター 本発明における使用のヌクレオチド配列は、複製可能な組換えベクターへ取込ま
れ得る。このベクターは、適合する宿主細胞において複製し、それからヌクレオ
チド配列を発現するために使用され得る。発現は、プロモーター／エンハンサー
及び他の発現調節シグナルを包含するコントロール配列を使用して制御され得る
。原核プロモーターと真核細胞で機能的なプロモーターが使用され得る。組織特
異的又は刺激特異的なプロモーターを使用し得る。上記に記載した２種又はそれ
以上の異なるプロモーター由来の配列要素を含んでなるキメラプロモーターも使
用し得る。

【０１１３】 ヌクレオチド配列の発現により宿主の組換え細胞によって産生されるタンパク
質は、その配列及び／又は使用されるベクターに依存して、分泌されるか又は細
胞内に閉じ込められる場合がある。特定の原核若しくは真核細胞膜を通した基質
コーディング配列の分泌を指令するシグナル配列の付いたコーディング配列を設
計し得る。

【０１１４】 融合タンパク質 本発明のアミノ酸配列は、例えば抽出及び精製を助けるために、融合タンパク質
として産生される場合がある。融合タンパクパートナーの例には、グルタチオン
−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６ｘＨｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合及び
／又は転写活性化ドメイン）及びβ−ガラクトシダーゼが含まれる。また、融合
タンパク配列の除去を可能にするために、融合タンパクパートナーと注目のタン
パク配列との間にタンパク分解部位を包含することも好便であり得る。好ましく
は、融合タンパク質は、タンパク配列の活性を妨害しない。

【０１１５】 融合タンパク質は、本発明の物質へ融合する抗原又は抗原決定基を含む場合が
ある。この態様では、融合タンパク質は、免疫系の全般的な刺激を提供するとい
う意味でアジュバントとして作用し得る物質を含んでなる、天然に存在しない融
合タンパク質であり得る。抗原又は抗原決定基は、基質のアミノ若しくはカルボ
キシ末端のいずれかへ付着され得る。

【０１１６】 本発明のもう１つの態様では、融合タンパク質をコード化するために、アミノ
酸配列が異種の配列へ連結され得る。例えば、物質の活性に影響を及ぼし得る薬
剤についてのペプチドライブラリーのスクリーニングでは、市販の抗体により認
識される異種エピトープを発現するキメラ物質をコード化することが有用であり
得る。

【０１１７】 増殖因子 本発明の組成物の必須成分は、１種又はそれ以上の増殖因子の存在及び／又は使
用である。増殖因子は、内因性増殖因子、及び／又は外から適用される増殖因子
であり得て、この外から適用される増殖因子は、内因性増殖因子と同一であるか
、又は類似している場合がある。

【０１１８】 本発明によれば、増殖因子は、創傷のような損傷組織の治癒を亢進するのに有
効である能力がある１種又はそれ以上の増殖因子であり得る。 本明細書で使用されるように「増殖因子」という用語は、線維芽細胞、角化細
胞及び／又は内皮細胞を含む、創傷のような損傷組織の治癒プロセスに関与する
細胞の増殖及び／又は移動を刺激する物質（典型的には、ペプチド又はタンパク
様の物質）を意味する。そのような物質は、体内の細胞により産生されるタンパ
ク質若しくはペプチドであり得る（か又はそれと相同であるか又はそれから誘導
され得る）。その場合、それは内因性増殖因子である。他のやり方では、それは
、人体にとって外来のペプチド若しくはタンパク様物質のライブラリーから発見
されたものであり得る。

【０１１９】 背景情報として、増殖因子は『細胞の分子生物学』（第２版、１９８９；Albe
rts, B., Bray, D., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Watson, J. D. 編）
で論じられ、そこではこう述べられている： 「細胞が増殖し、分裂する前に満たすべき条件は、動物細胞では酵母よりずっと
複雑である。標準的な人工の培養基中の脊椎動物細胞から血清を完全に奪ってし
まうと、通常、それらは、たとえすべての明瞭な栄養分が存在していても、制限
点を通過しない。従って、それらは増殖と、その染色体周期を介した進展を停止
する。入念な分析により、血清の必須成分が、通常きわめて低い濃度（１０^-9〜
１０^-11Ｍの次数）で存在する、ごく特異的なタンパク質であることが明らかに
なった。異なる細胞型はこれらタンパク質の異なるセットを必要とする。血清中
のこれらタンパク質のなかには細胞分裂を刺激することに直接的かつ特異的に関
与するものがあり、増殖因子と呼ばれる。１例は、血小板増殖因子、若しくはＰ
ＤＧＦである。 増殖因子はＷＯ−Ａ−９９／５９６１４号でも論じられている。

【０１２０】 細胞生物学の実験では、多くの増殖因子が、皮膚の創傷治癒に関与する主要な
細胞型、主に角化細胞及び皮膚線維芽細胞の増殖及び／又は運動性を亢進する（
Singer, A. J. & Clark, R. A. F. (1999) New Engl. J. Med. 341, 738-746）
。多くの増殖因子の医薬調製物が慢性皮膚潰瘍における効果について検査されて
きた。例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ
）、トランスフォーミング増殖因子β３（ＴＧＦβ３）、角質細胞増殖因子−２
（ＫＧＦ−２）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、及び顆粒球マクロファージコロニー
刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、慢性皮膚潰瘍の創傷治癒剤としてのその効力を評
価するために、いずれも臨床現場へ持ち込まれている。これら薬剤は創傷治癒の
動物モデルでは有望な結果を示したが、慢性皮膚潰瘍の治療における使用を正当
化するのに十分な効力が臨床現場で証明されたのは、組換えＰＤＧＦ（Ｒｅｇｒ
ａｎｅｘ）だけである。

【０１２１】 これらの増殖因子が明瞭な臨床効果を提供し得ない理由については多くのこと
が考察されてきた。例えば、相互作用する多数の細胞型と創傷治癒プロセスの特
定相で作用する増殖因子が関与する創傷治癒系が複雑であるために、増殖因子の
治療では創傷治癒の療法に変革をもたらさない、と示唆されている（Borel, J.
P. & Maquart, F. X. (1998) Ann. Biol. Clin. (パリ) 56, 11-19）。さらに、
創傷環境における増殖因子の半減期は短いことが知られていて、薬理学的効果に
供される時間を制限する。例えば、静脈性潰瘍へ注射後のＴＧＦβ３の半減期は
、約３０分であると報告された。

【０１２２】 慢性皮膚潰瘍における増殖因子の短い半減期と、その限定された臨床効果を説
明する１つの仮説は、慢性皮膚潰瘍がプロテアーゼの豊富な環境であり、これら
のプロテアーゼが増殖因子及び／又はその受容体の両方を分解する、ということ
である。

【０１２３】 正常の、すぐに治癒する創傷に比較して、慢性皮膚潰瘍では、多くのプロテア
ーゼが過剰発現される、及び／又は過剰に活性化されることが示されている。例
えば、（流動相プロテアーゼアッセイ、免疫組織化学、ゲル及び in situ ザイ
モグラフィー及びＥＬＩＳＡのような）多種多様な生化学及び組織学の技術を使
用して、ＭＭＰ−１３及びＭＭＰ−３を包含するメタロプロテイナーゼ（Saaria
lho-Kere U. K. (1998) Arch. Dermatol. Res. 290, S47-54）、好中球エラスタ
ーゼ（Herrick, S., Ashcroft, G., Ireland, G., Horan, M., McCollum, C. &
Ferguson, M. (1998) Lab. Invest. 77, 281-8）、ｕＰＡ（Rogers, A. A., Bur
nett, S., Lindholm, C., Bjellerup, M., Christensen, O. B., Zederfeldt, B
., Peschen, M, & Chen, W. Y. (1999) 同上 28, 101-5）及びプラスミン（Palo
lahti, M, Lauharanta, J, Stephens, RW. Kuusela, P, Vaheri. (1993) Exp. D
ermatol. 2, 29-37）がいずれも慢性皮膚潰瘍由来の創傷体液か同潰瘍由来の創
傷組織切片のいずれかで多量に存在していることが示された。さらに、慢性皮膚
潰瘍由来の創傷体液へ増殖因子を加えると、それらが in vitro でタンパク分解
的に分解されること（Lauer, G., Flamme, I., Kreig, T., Sollberg, S. & Emi
ng, S. (1998) J. Invest. Dermatol. 110, 528, 抄録 338）、そして創傷体液
を培養細胞へ加えると、それらが増殖因子への応答性を失うことが示された。

【０１２４】 この分解にどのプロテアーゼが原因となっているのかをこれまでに誰も同定し
ていないことにも注目すべきである。このことは、増殖因子とその受容体に対す
るプロテアーゼ阻害剤の効果の正確なモデル作製を実施することがこれまで不可
能であったという事実に主に起因した。この点に関して言えば、多様な構造及び
メカニズムの群に由来し、慢性皮膚潰瘍において過剰に発現され、過剰に活性で
ある、多くのプロテアーゼは、相互作用のネットワークと循環的な経路を介して
互いを活性化する。また、ある種のプロテアーゼは、細胞移行とコラーゲン沈着
に不可欠であり、正常な創傷治癒の重要因子となっているので、このことは、プ
ロテアーゼ阻害剤において適切な選択性が達成されなければ、創傷治癒が妨害さ
れる可能性があることを示している（Pilcher, B. K., Wang, M., Qin, X. J.,
Parks, W. C., Senior, R. M., Welgus, H. G. (1999) Ann. N. Y. Acad. Sci.
878, 12-24）。さらに、（組織メタロプロテイナーゼ阻害剤［ＴＩＭＰ］及びプ
ラスミノゲンアクチベーター阻害剤［ＰＡＩ］のような内因性プロテアーゼ阻害
剤のレベルもまた、慢性皮膚潰瘍では変化していて、この病理の複雑性と予測不
能性を高めている（Itoh, Y. & Nagase, H. (1995) J. Biol. Chem. 270, 16518
-16521; Knauper, V., Lopez-Otin, C., Smith, B., Knight, G. & Murphy, G.
(1996) J. Biol. Chem. 271, 1544-1550）。従って、全体的に見ると、増殖因子
の慢性皮膚潰瘍における保存及び機能に対する特定プロテアーゼの特異的阻害剤
の効果についてはこれまで知られてこなかった。

【０１２５】 本発明によれば、特定のタンパク分解を制限することが慢性皮膚潰瘍における
多種多様な増殖因子（内因性のものと治療的に適用されるものの両方）の効力に
影響を及ぼすと我々は考える。従って、本発明の組成物は特定のプロテアーゼ阻
害剤に関わり、これが１種又はそれ以上の増殖因子と組み合わせて使用される。
本発明の組成物は先行技術の療法に関連する（諸）問題を克服する。

【０１２６】 阻害剤がタンパク質であれば、それは（いかなる製剤でも）そのタンパク質と
して局所、経口、又は静脈内で適用され得る。さらに、又は他のやり方では、そ
のタンパク質をコードするＤＮＡが、例えば遺伝子銃のようなデバイスを使用す
ることによるように、好適なベクターへ取込まれるときのように、創傷のような
損傷組織へ適用され得る（例えば、Lu, B., Scott, G. & Goldsmith, L. A. (19
96) Proc. Assoc. Am. Physicians 108, 168-172）。

【０１２７】 本発明の増殖因子は、（いかなる製剤でも）タンパク質として局所適用され得
る。さらに、又は他のやり方では、その増殖因子をコードするＤＮＡが、例えば
遺伝子銃のようなデバイスを使用することによるように、好適なベクターへ取込
まれるときのように、創傷のような損傷組織へ適用され得る（例えば、Lu, B.,
Scott, G. & Goldsmith, L. A. (1996) Proc. Assoc. Am. Physicians 108, 168
-172）。

【０１２８】 本発明に使用の増殖因子の例には、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、ＣＴＧＦ（特にＣＴＧ
Ｆ様）、ＫＧＦ（特にＫＧＦ−２）、ＴＧＦ（特にＴＧＦ−β）、ＣＳＦ（特に
ＧＭ−ＣＳＦ）、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、クリサリンの１種又はそれ以上が含まれる
。これら増殖因子についての詳細を以下に示す。

【０１２９】 ＶＥＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＶＥＧＦであり得る。 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 塩基性線維芽細胞増殖因子及び血小板由来増殖因子のような多くのポリペプチド
マイトジェンは、広範囲の様々な細胞型に対して活性である。対照的に、血管内
皮細胞増殖因子は、主に血管内皮細胞へのマイトジェンである。しかしながら、
それは構造的には血小板由来増殖因子に関連している。 Tischner et al. (1991) は、血管透過性因子（ＶＰＧ）とも呼ばれるＶＥＧＦ
が培養された血管平滑筋細胞により産生されることを示した。これらの細胞から
の転写物のＰＣＲ及びｃＤＮＡクローニングによる分析によって、彼らは、ＶＥ
ＧＦコーディング領域に３種の異なる形態があることを示した。これらのｃＤＮ
Ａは１８９、１６５及び１２１個のアミノ酸の産物を予測していた。彼らは、Ｖ
ＥＧＦ遺伝子が８個のエクソンに分かれていること、そして様々なＶＥＧＦコー
ディング領域の形態が選択的スプライシングを介して生じることを見出した：１
６５アミノ酸の形態がエクソン６によりコードされる残基を失っているのに対し
、１２１アミノ酸の形態はエクソン６及び７によりコードされる残基を失ってい
る。ＶＥＧＦは、相対分子量４５，０００のホモ二量体の糖タンパク質であり、
内皮細胞に特異的に作用する唯一のマイトジェンである。それは、腫瘍の in vi
vo 血管新生の主要なレギュレーターであるかもしれない。 Millauer et al. (1994) は、マウスにおいて、その発現が低酸素状態によりア
ップレギュレートされること、その細胞表面受容体であるＦｌｋ１が内皮細胞で
専ら発現されることを観察した。 Folkman (1995) は、ＶＥＧＦとその受容体系の腫瘍増殖における重要性に注目
し、この系への介入が癌治療への有望なアプローチを提供する可能性があると示
唆した。 ＶＥＧＦと胎盤増殖因子は、２種の血管内皮チロシンキナーゼ受容体、ＦＬＴ１
及びＫＤＲ／ＦＬＫ１と相互作用することによって血管の形成及び透過性を制御
することが可能な調節ペプチドのファミリーを構成する。ＶＥＧＦＢも参照のこ
と。このファミリーの第三のメンバーは、リンパ管の発生に関与する関連ＦＬＴ
４受容体のリガンドであり得る。 Soker et al. (1998) は、ＶＥＧＦ１６５へ結合するがＶＥＧＦ１２１へは結合
しないＶＥＧＦ受容体の、腫瘍細胞からの精製及び発現クローニングについて記
載した。このアイソフォーム特異的なＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦ１６５Ｒ）は、
神経細胞のガイダンスに介在するコラプシン／セマホリンファミリーのヒトニュ
ーロピリン−１ａ受容体と同一である。細胞中でＫＤＲとともに発現されると、
ニューロピリン−１は、ＶＥＧＦのＫＤＲへの結合とＶＥＧＦ１６５介在性の化
学走性を亢進する。逆に、ＶＥＧＦ１６５のニューロピリン−１への結合を阻害
すると、そのＫＤＲへの結合とその内皮細胞へのマイトジェン活性が阻害される
。Soker et al. (1998) は、ニューロピリン−１が、ＶＥＧＦのＫＤＲへの結合
とその後の生物活性をモジュレートするＶＥＧＦ受容体であり、従って、ＶＥＧ
Ｆ誘導性の血管新生を調節し得ると提唱した。 Mattei et al. (1996) は、放射活性 in situ ハイブリダイゼーションを使用し
て、ＶＥＧＦを６ｐ２１−ｐ１２へマップした。Wei et al. (1996) は、ＶＥＧ
Ｆ遺伝子の染色体６ｐ１２への局在化を蛍光 in situ ハイブリダイゼーション
により報告した。 ＶＥＧＦとアンギオポエチンが腫瘍の血管形成の間に共同作用することの可能性
を探究するために、Holash et al. (1999) は、いくつかの異なるマウス及びヒ
トの腫瘍モデルを分析した。Holash et al. (1999) は、アンギオポエチン−１
が培養内皮細胞へ抗アポトーシス作用を示し、その拮抗薬であるアンギオポエチ
ン−２の発現が吸収された腫瘍血管の内皮においてその退縮前に誘導されること
に注目した。対照的に、ＶＥＧＦ発現の明瞭な誘導は、わずかに残る内部血管の
周囲と腫瘍境界にある頑丈な血管叢に隣接した腫瘍細胞の低酸素性の辺縁におい
て、腫瘍進行のずっと後で起こった。わずかに生存する内部血管と腫瘍境界にあ
る新生血管においてＡｎｇ２が発現されることは、アンギオポエチン−２の脱安
定化作用により、ＶＥＧＦの腫瘍縁での血管形成作用が促進されることを示唆し
た。Holash et al. (1999) は、ラットのＲＢＡ乳腺癌細胞をラット脳へ移植し
た。腫瘍細胞は、脳の血管とすぐに会合し、それに沿って移行した。ＶＥＧＦは
わずかにアップレギュレートしただけであった。Holash et al. (1999) は、腫
瘍の一部が存在する宿主の血管を速やかに吸収し、十分脈管形成された腫瘍の一
次塊を形成すると示唆した。おそらく、宿主の防御機構の一部として、これらの
一次吸収血管は広範に退縮し、無血管の二次腫瘍と塊状腫瘍細胞の消失をもたら
す。しかしながら、残った腫瘍は、結局は腫瘍境界での頑丈な血管新生により救
われる。 Carmellet et al. (1996) と Ferrara et al. (1996) は、マウスにおいて、Ｖ
ｅｇｆ遺伝子を標的破壊することの効果を観察した。彼らは、ヘテロ接合体のＶ
ＥＧＦ欠損胚では血管の形成が異常であるが阻止はされないこと、そしてホモ接
合体のＶＥＧＦ欠損胚ではずっと妨害されて、妊娠中期で死をもたらすことを見
出した。胚芽細胞系列の伝達により産生されるＦ（１）へテロ接合体の胚でも似
たような表現型が観察された。彼らは、自らの結果を、胚の血管発生がＶＥＧＦ
により用量依存的に調節されることを示すものと解釈した。２種のＶＥＧＦ受容
体の一方を不活性化する突然変異についてのホモ接合マウスも子宮内で死亡する
。しかしながら、ＶＥＧＦ以外の１種又はそれ以上のリガンドもそのような受容
体を活性化する可能性がある。Ferrara et al. (1996) はまた、単一のＶＥＧＦ
対立形質の損失が１１〜１２日目のマウス胚において致命的であるという予期せ
ぬ発見を報告した。血管新生と血液−島の形成が損なわれ、いくつかの発生異常
を生じていた。さらに、ＶＥＧＦの無い胚性幹細胞は、ヌードマウスにおいて腫
瘍を形成する能力が劇的に低下することを示した。 Springer et al. (1998) は、筋芽細胞介在性の遺伝子導入によるＶＥＧＦタン
パク質の長期安定産生の効果を研究した。マウスＶＥＧＦ１６４のｃＤＮＡを担
うレトロウイルスで筋芽細胞を形質導入し、マウスの肢筋肉へ注射した。ＶＥＧ
Ｆの連続デリバリーにより、血管チャネルの局在化ネットワークを含有する血管
腫を生じた。Springer et al. (1998) は、筋芽細胞介在性のＶＥＧＦ遺伝子デ
リバリーにより、正常な成体において多数の細胞型の複雑な組織をもたらし得る
ことを示した。外因性のＶＥＧＦが高レベルでか又は長い期間発現されることも
有害な効果を及ぼし得る。非虚血筋肉ではＶＥＧＦに対する生理学的な応答が観
察されたが、その成体における応答は血管新生を介して起こるようには見えず、
脈管形成か又は新たな血管発生に関連した機序が関わった可能性がある。Spring
er et al. (1998) は、ＶＥＧＦが異なる濃度で血管新生又は脈管形成の異なる
効果を及ぼす可能性があると提唱した。 Fukumura et al. (1998) は、ＶＥＧＦのプロモーターの制御下でグリーン蛍光
タンパク質を発現するトランスジェニックマウスの系を確立した。このトランス
遺伝子を担うマウスは、治癒しつつある境界の周囲と表面潰瘍創傷の顆粒組織全
体で緑色の細胞蛍光を示した。このトランスジェニックマウスに固形腫瘍を移植
すると、宿主のＶＥＧＦプロモーター活性の腫瘍誘導から生じる緑色の蛍光の蓄
積をもたらした。時間が経つと、この蛍光細胞は腫瘍へ浸潤し、腫瘍の塊全体で
見られた。このＶＥＧＦ−ＧＦＰマウスにおける腫瘍遺伝子の発現により誘導さ
れる自然乳癌は、腫瘍でなく、基質でＧＦＰの強い発現を示した。創傷モデルと
腫瘍モデルの両方で、ＧＦＰ陽性細胞が多かったのは線維芽細胞である。 軟骨内での骨形成におけるＶＥＧＦの役割を決定するために、Gerber et al. (1
999) は、２４日齢のマウスに可溶性の受容体キメラタンパク質を全身投与する
ことによってＶＥＧＦを不活性化した。血管浸潤はほとんど完全に抑制され、柱
上の骨形成の妨害と肥大性の軟骨細胞域の拡張がこれに伴った。ゼラチナーゼＢ
／マトリックスメタロプロテイナーゼ−９を発現する軟骨吸収細胞の動員及び／
又は分化と、末端軟骨細胞の再吸収が減少した。軟骨細胞の増殖、分化及び成熟
は明らかに正常であったが、再吸収は阻害された。抗ＶＥＧＦ処置を中断すると
、毛細管浸潤、骨増殖の回復、肥大性軟骨の再吸収、及び成長板構築の正常化が
後続した。上記の知見は、Gerber et al. (1999) に対し、ＶＥＧＤ介在性の毛
細管浸潤が成長板の形態形成を調節し、軟骨の再構築を引き起こす必須シグナル
であることを示した。Gerber et al. (1999) は、ＶＥＧＦが軟骨細胞の死、軟
骨吸収細胞の機能、細胞外マトリックスの再構築、血管新生、及び成長板での骨
形成に必須な調整因子であると結論づけた。 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１３０】 ＥＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＥＧＦであり得る。 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 上皮増殖因子として今日知られているものは、Cohen (1962) によりはじめて記
載された。上皮増殖因子は、特定の細胞の in vivo における分化に絶大な効果
を有し、外胚葉と中胚葉の両起源の多種多様な培養細胞への強力なマイトジェン
因子である (Carpenter と Cohen, 1979)。 Gray et al. (1983) は、マウスＥＧＦのｃＤＮＡクローンの配列を提示し、Ｅ
ＧＦが１，１６８個のアミノ酸の大きなタンパク前駆体として合成されることを
示唆した。 成熟したＥＧＦは、５３個のアミノ酸からなり、約６，０００の分子量を有する
、単鎖ポリペプチドである。Urdea et al. (1983) は、ヒトＥＧＦの遺伝子を合
成した。Smith et al. (1982) は、ヒトβ−ウロガストロンの遺伝子を合成し、
クローン化した。ウロガストロンは、十二指腸と唾液腺に主に見出されるポリペ
プチドホルモンである．それは胃酸分泌の強力な阻害剤であり、上皮細胞の増殖
も促進する。β−ウロガストロンが５３アミノ酸の単一ポリペプチド鎖を含有す
るのに対し、γ−ウロガストロンは、アミノ酸１〜５２の同一配列を有するが、
β型のカルボキシ末端アルギニンを欠く。配列比較は、ウロガストロンがＥＧＦ
と同一であることを示す。 ＥＧＦは、マウスの顎下腺により豊富に産生される。Tsutsumi et al. (1986)
は、唾液腺切開が循環ＥＧＦを検出限界以下のレベルへ減少させるが、テストス
テロンやＦＳＨのレベルには影響しないことを見出した。同時に、精巣中の精子
細胞と精巣上体中の成熟精子が減少した。この諸変化は、ＥＧＦの投与により是
正された。ヒト男性の不妊症、特に説明できない精子過少症のある症例における
ＥＧＦの役割が提唱された。 マイトジェンに対する哺乳動物細胞の極初期応答の間、ヒストンＨ３は１種又は
それ以上のキナーゼにより迅速的かつ一過的にリン酸化される。Sassone-Corsi
et al. (1999) は、Ｈ３のＥＧＦ刺激リン酸化には、増殖コントロールに関わる
可能性があるｐｐ９０（ＲＳＫ）キナーゼファミリーのメンバーである、ＲＳＫ
が必要とされることを示した。 ヒト−げっ歯類の体細胞ハイブリッドのゲノムＤＮＡプローブを用いた研究によ
り、Brissenden et al. (1984) は、ＥＧＦの遺伝子座を、Ｔ細胞増殖因子をコ
ードする座であるＴＣＧＦのおそらくは近くにある、４ｑ−２１−４ｑｔｅｒへ
マップした。 神経増殖因子と上皮増殖因子は、マウスでは両方とも第３染色体上にあるが、そ
れらは、ヒトでは異なる染色体上に存在し、それぞれ１ｐと４である（Zabel et
al., 1985）。Zabel et al., (1985) は、マウスの第３染色体がヒトの遠位１
ｐとかなり広汎な相同性を有する１つのセグメントと近位１ｐに相同な第二のセ
グメントをもつことを指摘した。in situ ハイブリダイゼーションにより、Mort
on et al., (1986) は、ＥＧＦを４ｑ２５−ｑ２７へ帰属させた。ＥＧＦの受容
体は第７染色体上にある。 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１３１】 ＰＤＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＰＤＧＦであり得る。 ＰＤＧＦに関する教示は、ＷＯ−Ａ−０９７１３８５７、ＷＯ−Ａ−０９１０
８７６１、ＷＯ−Ａ−０９３１６７１、ＵＳ−Ａ−０５０３４３７５及びＷＯ−
Ａ−０９２０１７１６に見出し得る。

【０１３２】 ＰＤＧＦ Ａ鎖の適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の
後半部分に示す。 ＰＤＧＦ Ｂ鎖の適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の
後半部分に示す。

【０１３３】 ＦＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＦＧＦであり得る。 この増殖因子に関する背景教示は、Galzie, Z., Kinsella, A. R. & Smith, J
. A. (1997)「線維芽細胞増殖因子とその受容体」, Biochem. Cell Biol. 75, 6
69-685 に示される。もう１つの概説は、Werner, S. (1998) Cytokine & Growth
Factor Reviews 9, 153-165 による。 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１３４】 ＣＴＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＣＴＧＦであり得る。 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 「Bradham et al. (1991) は、ヒト臍静脈内皮細胞により産生される新たなマイ
トジェンについて記載し、これを結合組織増殖因子と命名した。このタンパク質
は、血小板由来増殖因子に関連し、そのｃＤＮＡから、３４９個のアミノ酸、３
８ｋＤのシステインリッチ分泌タンパク質であると予測された。Martinerie et
al. (1992) は、トリ腎芽細胞腫で過剰に発現されるｎｏｖ癌原遺伝子と相同性
を共有し、ＣＴＧＦ遺伝子に対応する遺伝子座を同定した。彼らは、マウス／ヒ
ト体細胞ハイブリッドと in situ ハイブリダイゼーションの研究を組み合わせ
て、ＣＴＧＦ遺伝子を６ｑ２３．１に帰属させた。彼らは、ＣＴＧＦがＭＹＢの
近傍に位置していることを示した。 ノーザンブロットの分析により、Kim et al. (1997) は、ＣＴＧＦがヒト組織の
広い範囲で２．４ｋｂのｍＲＮＡとして発現されていることを見出した。配列比
較は、増殖因子又はある種の癌遺伝子による誘導後に発現される、極初期遺伝子
として知られる群にＣＴＧＦが属することを明らかにした。極初期遺伝子は、イ
ンスリン様増殖因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）に対して有意な配列相同性を
有し、保存されたＮ末端ＩＧＦＢＰモチーフを含有する（ＩＧＦＢＰ７を参照の
こと）。ＣＴＧＦは、ＩＧＦＢＰ１〜６と２８〜３８％のアミノ酸同一性を共有
する。Kim et al. (1997) は、ＣＴＧＦが、比較的低いアフィニティーではある
が、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）と特異的に結合することを示した。彼らは
、極初期遺伝子が、ＩＧＦＢＰ７ともに、ＩＧＦＢＰ遺伝子のサブファミリーを
構成し、その産物は低アフィニティーでＩＧＦと結合する、と提唱した。」 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１３５】 ＣＴＧＦ様 本発明の組成物に使用の増殖因子はＣＴＧＦ様であり得る。 この増殖因子は、ＣＴ５８及びＷＩＳＰ−２と時々呼ばれる。それは、以下の
受入れ番号を有する：ＡＦ０７４６０４、ＡＦ０８３５００、ＡＦ１００７８０
、Ｏ７６０７６。

【０１３６】 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 Pennica et al. (Pennica, D.; Swanson, T. A.; Welsh, J. W.; Roy, M. A.; L
awrence, D. A.; Lee, J.; Brush, J., Taneyhill, L. A.; Deuel, B.; Lew, M.
; Watanabe, C.; Cohen, R. L.; Melhem, M. F.; Finley, G. G.; Quirke, P.;
Goddard, A. D.; Hillan, K. J.; Gurney, A. L.; Botstein, D.; Levine, A. L
： ＷＩＳＰ遺伝子は、Ｗｎｔ−１−形質転換細胞においてアップレギュレート
され、ヒト結腸腫瘍において異常に発現されている、結合組織増殖因子ファミリ
ーのメンバーである。 Proc. Nat. Acad. Sci. 95: 14717-14722 (1998) は、
悪性の形質転換に関連しているＷｎｔシグナル伝達経路の下流にある３種の遺伝
子（ＷＩＳＰ１、ＷＩＳＰ２及びＷＩＳＰ３）をクローン化し、特徴づけた。Ｗ
ＩＳＰ２のｃＤＮＡは、マウスのタンパク質と７３％同一である、２５０個のア
ミノ酸のタンパク質をコードする。著者らは、ＷＩＳＰ２ ＲＮＡの発現が、結
腸腫瘍で過剰に発現されるＷＩＳＰ１及びＷＩＳＰ３とは対照的に、ヒト結腸腫
瘍で７９％に減少していることを見出した。放射ハイブリッドマップ作成パネル
の使用により、Pennica et al (1998) は、ＷＩＳＰ２遺伝子を２０ｑ１２−ｑ
１３へマップした。

【０１３７】 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。 ＫＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＫＧＦ、特にＫＧＦ−２であり得る。

【０１３８】 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 「Rubin et al. (1989) は、ヒト胚性肺線維芽細胞系のならし培地において、上
皮細胞に特異的な増殖因子を同定した。角化細胞におけるその卓越した活性のた
めに、それは角質細胞増殖因子と呼ばれた。ＫＧＦは、約２８ｋＤの単一ポリペ
プチド鎖からなることが見出された。それは上皮細胞への強力なマイトジェンで
あったが、線維芽細胞や内皮細胞へのマイトジェン活性を欠いていた。ミクロ配
列決定は、既知のタンパク質とは有意な相同性を含まないアミノ末端配列を示し
た。ヒト胚性線維芽細胞によりこの増殖因子が放出されることは、ＫＧＦが正常
な上皮細胞の増殖の間葉刺激においてある役割を担い得る可能性を高めた。Rubi
n et al. (1989) は、補遺において、その論文に報告されたＮ末端配列に基づい
たすべてのヌクレオチドプローブの使用により、自分たちがＫＧＦをコードする
クローンを単離し、ＫＧＦと線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーの他の５
種既知メンバーとの間に有意な構造上の相同性を見出したことに注目した。 Werner et al. (1994) は、基底角化細胞における優性ネガティブＫＧＦ受容体
（１７６９４３）の発現により正常皮膚と創傷皮膚におけるＫＧＦの機能を評価
した。トランスジェニックマウスの皮膚を、表皮萎縮、毛包における異常、及び
皮膚の過厚化により特徴づけた。皮膚の損傷時にＫＧＦ受容体のシグナル伝達を
阻害すると、創傷端での表皮角化細胞の増殖速度が低下し、創傷の実質的に遅延
した再上皮形成化をもたらした。 Mattei et al. (1995) は、同位体 in situ ハイブリダイゼーションを使用して
、マウス第２染色体のＦ−Ｇ領域へＦｇｆ７をマップした。ヒト−げっ歯類体細
胞ハイブリッド由来ＤＮＡのエクソン１プローブを用いた分析により、Kelley e
t al. (1992) は、ＦＧＦ７がヒトの第１５染色体上に位置していることを見出
した。マウスの第２染色体は、１５ｑ１３−ｑ２２とシンテニーの保存領域を示
す。従って、ヒトの突然変異はこの部位で生じる可能性がある。ヒト中期染色体
への in situ ハイブリダイゼーションにマウスのＦＧＦ７プローブを使用して
、Mattei et al. (1995) は、第１５染色体上にいくつかのシグナルを見出した
。Kelley et al. (1992) は、ＫＧＦ遺伝子の一部（エクソン２及び３、それら
の間のイントロン、及び３−プライム非コーディングセグメントを含む）がヒト
のゲノムでは約１６倍に増幅され、多数の染色体へ分布されていることを見出し
た。 ＫＧＦのエクソン１をコードするコスミドプローブを蛍光 in situ ハイブリダ
イゼーションに使用して、Zimonjic et al. (1997) は、ＫＧＦ７遺伝子を１５
ｑ１５−ｑ２１．１へ帰属させた。さらに、エクソン２及び３をコードするコス
ミドプローブとのみハイブリダイズするＫＧＦ様配列のコピーは、染色体２ｑ２
１、９ｐ１１、９ｑ１２−ｑ１３、１８ｐ１１、１８ｑ１１、２１ｑ１１及び２
１ｑ２１．１上の分散した部位へ局在化していた。ＫＧＦ様配列のこの分布は、
その増幅及び分散におけるアルフォイド（alphoid）ＤＮＡの役割を示唆した。
チンパンジーでは、ＫＧＦ様配列が５つの染色体部位に観察され、それはいずれ
もヒトでの部位に相同であったが、ゴリラでは、これら相同部位の４つの亜集合
が同定された。オランウータンでは２つの部位が同定されたが、ギボンでは１つ
の部位しか示されなかった。ヒト及び霊長類のゲノムにおけるＫＧＦ配列の染色
体局在性は、この増幅及び分散が多数の個別段階で起こることを示した。初期の
ＫＧＦ遺伝子の複製及び分布が多数の個別段階で起こり、初期のＫＧＦ遺伝子の
複製及び分布はギボンで起こり、ヒトの第１５及び２１染色体に対応する遺伝子
座を含んでいた。Zimonjic et al. (1997) の知見は、ヒトがチンンジー及び霊
長類と近縁な進化の関係にあること、そして高等霊長類の進化の間にＫＧＦ分散
への選択圧力があった可能性があるという概念を裏付けた。」 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１３９】 ＴＧＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＴＧＦ、特にＴＧＦ−βであり得る。 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 「ＴＧＦβは、多くの細胞型において増殖、分化、及び他の機能を制御する多機
能性ペプチドである。それは、最初、ラット線維芽細胞の表現型の変換を引き起
こすその能力により同定された。ＴＧＦβは、ＴＧＦαとは化学的に区別される
。それはＴＧＦαや、ＴＧＦαの類似体である上皮増殖因子と配列相同性がほと
んどない。ＴＧＦβと同じ遺伝子ファミリーのメンバーには、インヒビン（卵胞
刺激ホルモンの下垂体分泌を阻害する）とミュラー管抑制物質（精巣により産生
され、雄性胚におけるミュラー管（雌性生殖系の原基）の退縮の原因となる）が
含まれる。多くの細胞がＴＧＦβを合成し、そのほとんどすべてがこのペプチド
に特異的な受容体を有する。ＴＧＦα及びβは、トランスフォーミング増殖因子
のクラスである。ＴＧＦβは、形質転換を誘導するときはＴＧＦαと相乗的に作
用する。それはまた、負の自己分泌増殖因子としても作用する。体細胞ハイブリ
ダイゼーションと in situ ハイブリダイゼーションにより、Fujii et al. (198
5, 1986) は、ＴＧＦβをヒトでは１９ｑ１３．１−ｑ１３．３へ、マウスでは
第７染色体へ帰属させた。Dickinson et al. (1990) は、Ｔｇｆβ−１遺伝子を
マウス第７染色体へマップした。Marquardt et al. (1987) は、完全なアミノ酸
配列を決定した。Dickinson et al. (1990) は、高レベルのＴＧＦβ１のｍＲＮ
Ａ及び／又はタンパク質が発生中の軟骨、軟骨内と膜の骨、及び皮膚に局在化し
ていることを指摘し、これらの組織の増殖及び分化における役割を示唆した。 Heldin et al. (1997) は、標的細胞への効果を誘発する、ＴＧＦβファミリー
のメンバーにより使用される機序の理解における新たな展開を論じた。 ＳＭＡＤタンパク質は、ＴＧＦβのシグナル伝達に介在し、細胞の増殖及び分化
を調節する。Stroschein et al. (1999) は、ＳｎｏＮによるＴＧＦβシグナル
伝達の調節モデルを提唱したが、ここでは、ＳｎｏＮが、リガンドの不在下で抑
制されたＴＧＦβ標的遺伝子の状態を維持し、ＴＧＦβシグナル伝達の負のフィ
ードバック調節に参画する。ＴＧＦβシグナル伝達の正確で時宜を得た調節を可
能にする負のフィードバック機構を始動させるには、ＴＧＦβもＳｎｏＮの増加
した発現を後の段階で誘導すると、それが次いでＳＭＡＤ異節複合体と結合し、
ＴＧＦβシグナル伝達を遮断する。 １５例のデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）と１３例のベッカー型筋ジ
ストロフィー（ＢＭＤ）、並びに１１例の脊髄性筋ジストロフィー（ＳＭＡ）患
者と１６例の対照で定量的ＰＣＲを使用して、Bernasconi et al. (1995) は、
ｍＲＮＡにより測定されるＴＧＦβ１の発現がＤＭＤ及びＢＭＤ患者では対照よ
り多いことを見出した。線維症はＢＭＤ、ＳＭＡ又は対照よりＤＭＤにおいてよ
り顕著に認められた。結合組織生検の比率はＤＭＤ患者では年齢とともに増加し
たが、ＴＧＦβ１のレベルは２歳６ヶ月の年齢でピークに達した。Bernasconi e
t al. (1995) は、ＤＭＤの初期段階におけるＴＧＦβ１の発現が筋線維症を引
き起こすのに不可欠である可能性があると結論づけ、抗線維症治療がこの疾患の
進展を遅らせ、遺伝子治療の有用性を高めるかもしれないと示唆した。トランス
フォーミング増殖因子−βは組織修復に中心的な役割を担うが、このサイトカイ
ンは、Border と Noble (1995) により指摘されるように、治療と病理の可能性
について両刃の剣である。ＴＧＦβはまた、成人呼吸窮迫症候群の病態形成との
関連が示唆され（Shenkar et al., 1994）、腎臓はＴＧＦβ誘導性の線維成長に
特に敏感であるらしい。ＴＧＦβは、ほとんどの形態の実験腎疾患とヒト腎疾患
において線維症の原因として示唆されている（Border と Noble, 1994）。 ＴＧＦβは、創傷治癒において重要な役割を担う。線維症の特徴を共有する、突
発性肺線維症、硬皮症及びケロイドのような多数の病的状態が、増加したＴＧＦ
β１の発現に関連している。線維症の病態形成におけるＴＧＦβ１の役割を評価
するために、Clouthier et al. (1997) は、トランスジェニックアプローチを使
用した。彼らは、ラットのホスホエノールピルビン酸カルボキシナーゼ遺伝子の
調節配列を使用して、肝臓、腎臓、及び白色／褐色脂肪組織へ構成的に活性なＴ
ＧＦβ１分子の発現を標的化した。多くの系で、トランス遺伝子の標的化された
発現は重篤な線維症を引き起こした。肝臓の線維症は、ＴＧＦβ１遺伝子の発現
レベルに依存して、様々な重症度のレベルで起こった。肝臓におけるトランス遺
伝子の過剰発現も線維症と糸球体の疾患をもたらし、最終的には腎機能が完全に
失われた。多数の動物で重篤な閉塞性尿路障害（水腎症）も観察された。脂肪組
織における発現は全身の白色脂肪組織の劇的な減少と、褐色脂肪組織の明瞭だが
さほどひどくない減少をもたらし、リポジストロフィー様の症候群を産生した。
ｏｂ／ｏｂバックグラウンドへのトランス遺伝子の導入はこの突然変異に特有な
肥満を抑制したが、トランスジェニック突然変異マウスは、重篤な肝臓−及び脾
臓腫大を発症した。Clouthier et al. (1997) は、リポジストロフィーと総称さ
れる稀な疾患ファミリーには、ほとんどの形態で、脂肪肝及び心臓腫大を含む他
の異常が随伴していることに注目した。代謝及び内分泌の異常には、軽症又は重
症のインスリン抵抗性、高トリグリセリド血症、及び代謝亢進状態が含まれる。
双子の女性１７０組（平均年齢、５７．７歳）の研究において、Grainger et al
. (1999) は、活性＋酸活性化潜在ＴＧＦβ１の濃度がほとんど遺伝制御の下に
ある（遺伝率：０．５４）ことを示した。ＴＧＦβ１遺伝子プロモーターのＳＳ
ＣＰマッピングにより、単一塩基置換多形が２種同定された。この２種の多形（
−８００ｂｐ位でのＧからＡへの置換と−５０９ｂｐ位でのＣからＴへの置換）
は、連鎖不平衡の状態にある。−５０９Ｃ−Ｔ多形は、活性＋酸活性化潜在ＴＧ
Ｆβ１の血漿濃度に有意に関連していて、これはその濃度における追加遺伝変異
の８．２％を説明した。従って、Grainger et al. (1999) は、アテローム性動
脈硬化症、骨疾患、又は様々な形態の癌への素因は、ＴＧＦβ１の遺伝子座にあ
る特殊な対立形質の存在に関連している可能性があると示唆した。 Crawford et al. (1998) は、トロンボスポンジン−１がＴＧＦβ１の in vivo
活性化の大部分で原因であることを示した。若いＴＧＦβ１（−）とトロンボス
ポンジン−１（−）マウスにおける組織学上の異常は、９つの臓器系で驚くほど
似ていた。トロンボスポンジン−１によるＴＧＦβ１の活性化を阻止するペプチ
ドでの全身処置により、野生型の幼獣で、ＴＧＦβ１（−）動物で観察されるも
のに似た肺及び膵臓の病態を引き起こすことができた。トロンボスポンジン−１
（−）マウスでは、これらの臓器が活性ＴＧＦβ１をほとんど産生しなかったが
、ＴＧＦβ１を活性化し得る、トロンボスポンジン−１由来のペプチドで幼獣を
処置すると、活性サイトカインが in situ で検出され、肺と膵臓の異常は野生
型へ復帰した。 Dubois et al. (1995) は、プロＴＧＦβ１がフリンにより開裂されて、生物学
的に活性なＴＧＦβ１タンパク質を産生することを in vitro で示した。フリン
欠損細胞でプロＴＧＦβ１が発現してもＴＧＦβ１を産生しなかったのに対し、
プロＴＧＦβ１とフリンの同時発現はこの前駆体のプロセシングを導いた。Blan
chette et al. (1997) は、フリンのｍＲＮＡレベルが、ＴＧＦβ１の追加によ
りラット滑液細胞で増加することを示した。この効果はアクチノマイシン−Ｄで
の前処置により消失され、この調節が遺伝子転写のレベルであることを彼らに示
唆した。ラットの滑液細胞及び腎線維芽細胞のＴＧＦβ１若しくはＴＧＦβ２で
の処置は、ＴＧＦβ１アミノ末端プロ領域に対応する４０ｋＤの免疫応答性バン
ドの出現により裏付けられるように、プロＴＧＦβ１プロセシングの増加をもた
らした。これらの細胞をＴＧＦβ２で処置すると、細胞外の成熟ＴＧＦβ１の有
意な増加をもたらした。Blanchette et al. (1997) は、ＴＧＦβ１がそれ自身
の変換酵素の遺伝子発現をアップレギュレートすると結論づけた。」 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１４０】 ＣＳＦ 本発明の組成物に使用の増殖因子はＣＳＦ、特にＧＭ−ＣＳＦであり得る。 この増殖因子に関する背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Vic
tor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をその
情報源から抜粋した。 「コロニー刺激因子（ＣＳＦ）は、造血前駆細胞の生存、増殖、及び分化に必要
なタンパク質である。それらは、それが刺激する細胞により命名される。マクロ
ファージＣＳＦはＭ−ＣＳＦとして知られる。顆粒球−マクロファージＣＳＦ（
ＣＳＦ２；ＧＭＣＳＦとも略記される）は、両方の細胞を刺激する。マルチＣＳ
Ｆはインターロイキン−３（ＩＬ―３）として知られる。マウスの細胞による顆
粒球−マクロファージコロニー形成を刺激する活性がある、ヒト尿中のＣＳＦは
、はじめて均質に精製されたＣＳＦである。それはＭＷ４５，０００の糖タンパ
ク質であり、ホモ二量体である。Wong et al. (1985) は、ヒトＧＭＣＳＦのｃ
ＤＮＡクローンを単離した。Huebner et al. (1985) は、体細胞ハイブリッド分
析と in situ ハイブリダイゼーションにより、ＧＭＣＳＦの遺伝子座を５ｑ２
１−ｑ３２へ帰属させた。これは、５ｑ−症候群と急性骨髄性白血病における間
質欠失に関与しているのと同じ領域である。彼らは、ヒト前骨髄球性白血病の細
胞系に、部分欠失したＧＭＣＳＦの対立形質と５ｑ−マーカー染色体を見出した
。in situ ハイブリダイゼーションにより、Le Beau et al. (1986) は、ＦＭＳ
を５ｑ３３へ、ＧＭＣＳＦを５ｑ２３−ｑ３１へ帰属させた。いずれの遺伝子も
、難治性貧血とｄｅｌ（５）（ｑ１５ｑ３３．３）を有する２名の患者の骨髄細
胞からの５ｑ−染色体で欠失していた。他の症例の研究から、彼らは、すでに報
告された５ｑ３４−ｑ３５ではなく、５ｑ３３．２又は５ｑ３３．３のバンドに
ＦＭＳが位置づけられると結論した。Pettenati et al. (1987) は、動原体から
５ｑｔｅｒの方へ向かう遺伝子座の順序がＣＳＦ２、ＣＳＦ１、及びＦＭＳ（１
６４７７０）であると結論した。長領域マッピングにより、Yang et al. (1988)
は、ＧＭＣＳＦとＩＬ−３の遺伝子が約９キロベースのＤＮＡだけ離れている
ことを示した。それらはタンデムに配置され、ＧＭＣＳＦの５−プライム側でＩ
Ｌ―３の末端とつながる。Thangavelu et al. (1992) は、これら２つの遺伝子
と隣接配列を含むゲノムＤＮＡの７０ｋｂセグメントに２つのＲＦＬＰを同定し
た。「ヒト多形研究センター」（ＣＥＰＨ）からのパネルの試験にこれらのマー
カーを使用して、彼らは、第５染色体上にある他の多数の発現遺伝子との連鎖を
試験した。Thangavelu et al. (1992) は、第５染色体長腕の遠位にある半分に
位置づけられた１４種の発現遺伝子といくつかのマーカーを含む、物理及び遺伝
連鎖マップを提示した。蛍光 in situ ハイブリダイゼーションにより、Le Beau
et al. (1993) は、ＣＳＦ２遺伝子を５ｑ３１．１へマップした。 Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）は、新生児に肺炎及び敗血症を引き起こす最も一般的な
細菌感染である。ＧＢＳに対する宿主の応答には、肺胞マクロファージと多形核
白血球の両方の活性化が含まれる。肺におけるＧＢＳの食作用及び殺傷は、食作
用と活性酸素種介在性の殺傷を増加させる、界面活性タンパク質Ａにより亢進さ
れる。マクロファージの機能がＧＭＣＳＦにより強く影響されるので、LeVine e
t al. (1999) は、肺からのＧＢＳクリアランスが in vivo でＧＭＣＳＦにより
影響されるかどうかを試験した。Ｃｆｓ２遺伝子のノックアウトについて同型接
合マウスは、野生型マウスよりゆっくりと肺からＢ群連鎖球菌を消去した。同型
接合欠損マウスの呼吸器上皮におけるＧＭＣＳＦの発現は、細菌クリアランスを
野生型マウスより高いレベルへ改善した。野生型マウスへＧＭＣＳＦを急性エア
ゾール化すると、２４時間でのＧＢＳクリアランスを有意に亢進した。野生型マ
ウスではマクロファージの浸潤が優勢であるのに対し、同型接合ノックアウトマ
ウスでは、ＧＢＳ感染が肺における好中球浸潤の増加に関連し、ＧＭＣＳＦの不
在下ではマクロファージの細菌クリアランスが異常になることを示唆した。ＧＢ
Ｓの食作用は変わらなかったが、スーパーオキシドラジカル及び過酸化水素の産
生は、同型接合ノックアウトマウス由来のマクロファージでは顕著に乏しかった
。」 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１４１】 クリサリン 本発明の組成物に使用の増殖因子はクリサリン（Chrysalin）であり得る。クリ
サリンはＣｈｒｙｓａｌｉｓバイオテクノロジー社により開発されている。クリ
サリンは、トロンビンの配列から誘導された小さな（１２残基）ペプチドである
。クリサリンはＥＰ−Ａ−０３２８５５２に記載されている。

【０１４２】 組織損傷アップレギュレートタンパク質 本発明によれば、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされ
る有害タンパク質（特に、創傷治癒に有害な効果を及ぼす有害プロテアーゼ）の
選択阻害剤の使用がなされる。

【０１４３】 治療される損傷組織環境は、慢性皮膚潰瘍のような慢性創傷であり得る。 さらに、又は他のやり方では、治療される損傷組織環境は、加齢性の黄斑変性
、角膜潰瘍、角膜融解、炎症性腸症候群／障害／疾患、胃潰瘍、腎不全、末梢神
経障害（例、糖尿病性網膜障害）、神経変性疾患、骨の疾患若しくは傷害、軟骨
の疾患若しくは傷害、筋肉の疾患若しくは傷害、腱の疾患若しくは傷害、虚血性
損傷、歯周組織疾患、乾癬、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、脊髄の疾患若しくは
傷害に関連した１種又はそれ以上のものであり得る。

【０１４４】 好ましくは、前記損傷組織は創傷、より好ましくは、慢性皮膚潰瘍のような慢
性創傷である。 特に、創傷のような損傷組織の環境、特に、慢性皮膚潰瘍のような慢性創傷の
環境においてアップレギュレートされるプロテアーゼの選択阻害剤の使用がなさ
れる。この点で、本発明の組成物は、前記タンパク質に対する阻害剤として作用
するために前記タンパク質の１種又はそれ以上を標的にする薬剤を含む。

【０１４５】 もう１つの態様では、前記タンパク質を阻害することが可能である薬剤につい
て予備選択するアッセイに、前記タンパク質の１種又はそれ以上が使用される。
次いで、同定された薬剤を使用して、本発明による組成物を調製する。

【０１４６】 創傷のような損傷組織の環境、特に、慢性皮膚潰瘍のような慢性創傷の環境に
おいてアップレギュレートされるプロテアーゼタンパク質の例は、プラスミノー
ゲンアクチベーターとある種のマトリックスメタロプロテイナーゼである。好適
なプラスミノーゲンアクチベーターの特定の例は、ウロキナーゼ型プラスミノー
ゲンアクチベーターである。マトリックスメタロプロテイナーゼの特定の例は、
マトリックスメタロプロテイナーゼ１、マトリックスメタロプロテイナーゼ２、
マトリックスメタロプロテイナーゼ３、マトリックスメタロプロテイナーゼ７、
マトリックスメタロプロテイナーゼ８、マトリックスメタロプロテイナーゼ９、
マトリックスメタロプロテイナーゼ１０、マトリックスメタロプロテイナーゼ１
１、マトリックスメタロプロテイナーゼ１２、マトリックスメタロプロテイナー
ゼ１３、マトリックスメタロプロテイナーゼ１４、マトリックスメタロプロテイ
ナーゼ１５、マトリックスメタロプロテイナーゼ１６、マトリックスメタロプロ
テイナーゼ１７、マトリックスメタロプロテイナーゼ１９、マトリックスメタロ
プロテイナーゼ２０、マトリックスメタロプロテイナーゼ２１、マトリックスメ
タロプロテイナーゼ２４、及びマトリックスメタロプロテイナーゼＦＭＦである
。上記タンパク質のいくつかについての詳細を以下に示す。

【０１４７】 ウロキナーゼ 本発明によれば、本発明の阻害剤（又は本発明のアッセイでの推定阻害剤）の標
的は、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）であり得る。

【０１４８】 ウロキナーゼ（尿型プラスミノーゲンアクチベーター又はｕＰＡ；国際生化学
会の分類番号：ＥＣ．３．４．２１．３１）は、多種多様な細胞型（平滑筋細胞
、線維芽細胞、内皮細胞、マクロファージ、及び腫瘍細胞）により産生されるセ
リンプロテアーゼである。それは、細胞の侵入と組織再構築に重要な役割を担う
と考えられてきた。ｕＰＡの主要な基質はプラスミノーゲンであり、細胞表面に
結合したｕＰＡにより変換されてセリンプロテアーゼのプラスミンを産生する。
局所で産生された高濃度のプラスミンは、細胞外マトリックスを分解することに
よって細胞侵入に介在する。細胞侵入及び組織再構築が関与する重要なプロセス
には、創傷修復、骨再構築、血管新生、腫瘍侵襲、及び転移の拡散が含まれる。

【０１４９】 特に、ｕＰＡは、慢性皮膚潰瘍で過剰発現されているプロテアーゼの１つであ
る。ｕＰＡは、多種多様な細胞型（平滑筋細胞、線維芽細胞、内皮細胞、マクロ
ファージ、及び腫瘍細胞）により産生されるセリンプロテアーゼである。それは
、細胞の侵入と組織再構築に重要な役割を担うと考えられてきた。ｕＰＡの主要
な基質はプラスミノーゲンであり、細胞表面に結合したｕＰＡにより変換されて
セリンプロテアーゼのプラスミンを産生する。

【０１５０】 ウロキナーゼ阻害剤の有益な効果が、抗ウロキナーゼモノクローナル抗体と他
の特定の既知ウロキナーゼ阻害剤を使用して、報告されてきた。例えば、抗ウロ
キナーゼ抗体は、腫瘍細胞の in vitro 侵襲（W. Hollas, et al, Cancer Res.
51: 3690; A. Meissauer, et al, Exp. Cell Res. 192: 453 (1991)）；腫瘍の
in vivo 転移及び侵入（L. Ossowski, J. Cell Biol. 107: 2437 (1988); L. Os
sowski, et al, Cancer Res. 51: 274 (1991)）；及び in vivo 血管新生（J. A
. Jerdan et al, J. Cell. Biol. 115 [3 Pt 2]: 402a (1991)）を阻止すると報
告されている。また、適度の強度を有する既知のウロキナーゼ阻害剤である、Ａ
ｍｉｌｏｒｉｄｅ^TMは、腫瘍のin vivo転移（J. A. Kellen et al, Anticancer
Res., 8: 1373 (1988)）と in vitro 血管新生／毛細管ネットワーク形成（M. A
. Alliegro et al, J. Cell Biol. 115 [3 Pt 2]: 402a）を阻害すると報告され
た。

【０１５１】 ウロキナーゼ阻害剤による治療のために特に注目される病態には、（静脈性潰
瘍、糖尿病性潰瘍及び褥瘡を含む）慢性皮膚潰瘍が含まれるが、これは高齢集団
における罹患状態の主因であり、医療システムに対する重大な経済負担を招いて
いる。慢性皮膚潰瘍は、潰瘍の進展、機能性マトリックス分子（例、フィブロネ
クチン）の喪失、並びに上皮化及び潰瘍治癒の遅延を生じる、過剰な非制御タン
パク分解の分解により特徴づけられる。数多くの研究グループが創傷環境におけ
る過剰な分解の原因となる酵素について研究し、プラスミノーゲンアクチベータ
ーの役割に注目した（M. C. Stacey et al., Br. J. Surgery, 80, 596; M. Pal
olahti et al., Exp. Dermatol., 2, 29, 1993; A. A. Rogers et al., Wound R
epair and Regen., 3, 273, 1995）。正常なヒトの皮膚は、血管に局在化し、組
織型プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）として同定される、低レベルの
プラスミノーゲンアクチベーターを示す。きわめて対照的に、慢性潰瘍は、潰瘍
周辺と病巣の全体に分散して局在化し、創傷体液において容易に検出し得る、高
レベルのウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター（ｕＰＡ）を示す。 ｕＰＡは、いくつかのやり方で創傷治癒に影響を及ぼす。プラスミノーゲンの活
性化により産生されるプラスミンは、（マトリックスメタロプロテイナーゼの活
性化を介した）間接的な手段と直接的な手段の両方により、細胞外マトリックス
の分解をもたらし得る。プラスミンは、ゼラチン、フィブロネクチン、プロテオ
グリカンコアタンパク質、並びにその主要基質のフィブリンを含む、いくつかの
細胞外マトリックス成分を分解することが示された。マトリックスメタロプロテ
イナーゼ（ＭＭＰ）の活性化が数多くの炎症性細胞プロテアーゼ（例、エラスタ
ーゼ及びカテプシンＧ）により遂行され得るのに対し、ｕＰＡ／プラスミンカス
ケードはＭＭＰの in situ 活性化に関連し、細胞外マトリックスの全成分を分
解する広汎な能力を提供すると考えられている。さらに、そしてプラスミンの産
生に対するその効果に加えて、ｕＰＡはフィブロネクチンの直接開裂を触媒し、
抗増殖性ペプチドを産出することが示されている。このように、創傷環境におけ
るｕＰＡの過剰発現は、非制御のマトリックス分解と組織修復の阻害を促進する
可能性を有する。従って、この酵素の阻害剤には、慢性創傷の治癒を促進する可
能性がある。

【０１５２】 ｕＰＡに関するさらなる背景教示が http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で V
ictor A. McKusick et al により示されている。参照のために、以下の情報をそ
の情報源から抜粋した。 「ウロキナーゼは尿のプラスミノーゲンアクチベーターである（組織プラスミノ
ーゲンアクチベーターは第二のタイプであり、それは７０，０００ダルトンの単
一ポリペプチド鎖を有し、ウロキナーゼとは免疫学的に無関係である）。ウロキ
ナーゼは、約５４，０００ダルトンの分子量を有し、ジスルフィド結合した２つ
の鎖、ＡとＢ（それぞれ１８，０００と３３，０００の分子量）からなるタンパ
ク質である。Salerno et al. (1984) は、Ａ及びＢ鎖について別々のモノクロー
ナル抗体を開発し、それらを使用することによって、ヒト腎臓の全ポリアデニル
化ＲＮＡにより指向される、ウサギ網状赤血球の無細胞タンパク合成系において
、単鎖の生合成前駆体を同定した。従って、この前駆体は、インスリンの前駆体
が開裂されるように、開裂されなければならない。 体細胞遺伝学、in situハイブリダイゼーション、及びサザンハイブリダイゼー
ションを組み合わせて、Tripputi et al. (1985) は、ヒトのウロキナーゼ遺伝
子を１０ｑ２４−ｑｔｅｒへ局在化した。ヒト−マウス体細胞ハイブリッドの試
験における特定のｃＤＮＡプローブの使用により、Rajput et al. (1985) は、
ヒトのプラスミノーゲンアクチベーター及びウロキナーゼの遺伝子を、それぞれ
第８染色体及び第１０染色体へマップした。マウス−チャイニーズハムスター及
びマウス−ラットの体細胞ハイブリッド由来のサザンブロット分析により、Rajp
ut et al. (1985) は、マウスの同等物（Ｐｌａｕ）をマウスの第１４染色体へ
帰属させた。ウロキナーゼは単鎖の形態か又は２鎖の誘導体として生じる場合が
あるが、後者は、単鎖形態のｌｙｓ（１５８）とｉｌｅ（１５９）の間のペプチ
ド結合がプラスミンにより開裂されて産生される。Lijnen et al. (1988) は、
１５８位において部位特異的突然変異（ｌｙｓからｇｌｕへ）を産生した。プラ
スミンへ抵抗するこの突然変異体の酵素特性に関する試験は、１５８位のアミノ
酸が２鎖形態ではなく、単鎖形態の機能特性の主たる決定因子であることを示し
た。」 適切なアミノ酸配列と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。

【０１５３】 ＭＭＰ 本発明によれば、本発明の阻害剤（又は本発明のアッセイでの推定阻害剤）の標
的は、１種又はそれ以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）であり
得て、ここで前記ＭＭＰは損傷組織における創傷治癒に有害な効果を及ぼす。

【０１５４】 ＭＭＰは、構造的に類似した亜鉛含有メタロプロテアーゼのファミリーを構成
し、それは正常な生理学的プロセスと病理状態のいずれの部分としても、細胞外
マトリックスタンパク質の再構築、修復及び分解に関与する。ヒトファミリーの
少なくとも１８種のメンバーが配列決定されている。

【０１５５】 ＭＭＰは高い破壊性の潜在力を有するので、それらは通常厳しい調節下にあり
、ＭＭＰ調節の維持を損なうことが数多くの病態の成因として考えられている。
ＭＭＰが重要であると考えられている状態の例は、骨の再構築、胚の子宮内移植
、免疫細胞の炎症部位への浸潤、排卵、精子形成、静脈性及び糖尿病性潰瘍、褥
瘡、結腸潰瘍（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、十二指腸潰瘍のような
創傷修復及び臓器分化における組織再構築、線維症、腫瘍の隣接領域への局所侵
入、原発部位から続発部位への腫瘍細胞の転移拡散、関節炎における組織破壊、
ジストロフィー性表皮水疱症、疱疹状皮膚炎、又は、慢性若しくは急性の心臓若
しくは脳の梗塞のような塞栓現象により引き起こされるか又は併発される病態に
関係するものである。

【０１５６】 ＭＭＰの基質は多様であり、この遺伝子ファミリーの他のメンバーが含まれる
ときもある。例えば、ＭＭＰ１４はプロＭＭＰ２を消化して活性化することが知
られていて、ＭＭＰ３とＭＭＰ９はいずれもプロＭＭＰ１を消化して活性化し得
る。あるＭＭＰの基質は、例えばＭＭＰ１（コラゲナーゼ−１としても知られる
）により消化されるコラーゲン、例えばＭＭＰ２（ゼラチナーゼ−Ａとしても知
られる）により消化されるゼラチン、例えばＭＭＰ３（ストロメライシン−１と
しても知られる）により消化されるフィブロネクチン、及び、例えばＭＭＰ３に
より消化されるグリコサミノグリカンのように、マトリックスの成分でもある。

【０１５７】 ＭＭＰに関する最近の概説については、Zask et al, Current Pharmaceutical
Design, 1996, 2, 624-661; Beckett, Exp. Opin. Ther. Patents, 1996, 6, 1
305-1315; 及び Beckett et al, Drug Discovery Today, 第１巻 (第１号), 199
6. 16-26 を参照のこと。

【０１５８】 様々なＭＭＰの別称とこれらにより作用を受ける基質を以下の表に示す（Zask
et al, 同上）。

【０１５９】

【表２】

【０１６０】 本発明の阻害剤（又は本発明のアッセイでの推定阻害剤）に適したＭＭＰ標的
の例は、以下の１種又はそれ以上の好適なメンバーであり得る：マトリックスメ
タロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）、マトリックスメタロプロテイナーゼ２（Ｍ
ＭＰ２）、マトリックスメタロプロテイナーゼ３（ＭＭＰ３）、マトリックスメ
タロプロテイナーゼ７（ＭＭＰ７）、マトリックスメタロプロテイナーゼ８（Ｍ
ＭＰ８）、マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）、マトリックスメ
タロプロテイナーゼ１０（ＭＭＰ１０）、マトリックスメタロプロテイナーゼ１
１（ＭＭＰ１１）、マトリックスメタロプロテイナーゼ１２（ＭＭＰ１２）、マ
トリックスメタロプロテイナーゼ１３（ＭＭＰ１３）、マトリックスメタロプロ
テイナーゼ１４（ＭＭＰ１４）、マトリックスメタロプロテイナーゼ１５（ＭＭ
Ｐ１５）、マトリックスメタロプロテイナーゼ１６（ＭＭＰ１６）、マトリック
スメタロプロテイナーゼ１７（ＭＭＰ１７）、マトリックスメタロプロテイナー
ゼ１９（ＭＭＰ１９）、マトリックスメタロプロテイナーゼ２０（ＭＭＰ２０）
、マトリックスメタロプロテイナーゼ２１（ＭＭＰ２１）、マトリックスメタロ
プロテイナーゼ２４（ＭＭＰ２４）、及びマトリックスメタロプロテイナーゼＦ
ＭＦ（ＭＭＰＦＭＦ）。

【０１６１】 これら標的のいくつかをややより詳しく論じる。さらに、適切なアミノ酸配列
と適切なヌクレオチド配列を本明細書の後半部分に示す。 本発明のある態様では、好ましくは、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１３及び
／又はＭＭＰ３であり得る。

【０１６２】 ＭＭＰ１ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１であり得る。 マトリックスメタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）に関する背景教示が http:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されてい
る。参照のために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 「Brinckerhoff et al. (1987) は、ヒトコラゲナーゼ（ＥＣ３．４．２３．７
）のｃＤＮＡクローンを同定した。このクローンにより、ヒトゲノムＤＮＡのブ
ロットから約１７ｋｂの単一コラゲナーゼ遺伝子が同定された。制限酵素分析と
ＤＮＡ配列データは、このｃＤＮＡクローンが完全長であること、そしてヒト皮
膚線維芽細胞コラゲナーゼについて記載されたものとそれが同一であることを示
した。コラゲナーゼは、間質コラーゲン、Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ型の分解を始動す
ることができる唯一の酵素である。コラーゲンが体内で最も豊富なタンパク質で
あるという事実は、正常状態と病的状態のいずれでも常に発生する再構築におい
てコラゲナーゼが重要な役割を担うことを意味する。ヒト皮膚と滑膜細胞のコラ
ゲナーゼの同一性と、この酵素及び基質（コラーゲンＩ、ＩＩ及びＩＩＩ）の普
遍性は、身体全体でコラーゲン分解を制御する共通の機構が正常状態と病的状態
のいずれでも機能している可能性があることを示唆する。Gerhard et al. (1987
) は、体細胞ハイブリッドのサザン分析へのＤＮＡプローブの使用により、コラ
ゲナーゼ遺伝子の第１１染色体への帰属を確かめた。第１１染色体を含む再配置
を用いた細胞系の分析は、この遺伝子が１１ｑ１１−ｑ２３の領域にあることを
示した。Church et al. (1983) は、マウス細胞とヒト正常皮膚及び角膜線維芽
細胞の体細胞ハイブリッドと劣性ジストロフィー性表皮水疱症（ＲＤＥＢ）の皮
膚線維芽細胞を使用して、ヒトコラゲナーゼの構造遺伝子を第１１染色体へ帰属
させた。コラゲナーゼの産生は特定のラジオイムノアッセイにより測定した。正
常とＲＤＥＢのコラゲナーゼ遺伝子は、いずれも第１１染色体へマップされるよ
うであった。このことは、ＲＤＥＢにより産生される異常コラゲナーゼが構造遺
伝子の突然変異を表すことを示すとかつては受け取られた。後の研究は、常染色
体優性（１３１７５０）と常染色体劣性の両形態のジストロフィー性表皮水疱症
もＶＩＩ型コラーゲン遺伝子（ＣＯＬ７Ａ１；１２０１２０）における突然変異
によることを示した。コラゲナーゼの過剰形成は、原発性の欠損ではなく、二次
的な現象を表すに違いない。ウェルナー症候群の患者由来の線維芽細胞も高い構
成レベルのコラゲナーゼを in vitro で発現する（Bauer et al., 1986）。 Pendas et al. (1996) は、１１ｑ２２へマップされる１．５ＭｂのＹＡＣクロ
ーンを単離した。この非キメラＹＡＣクローンの詳細な分析により７種のＭＭＰ
遺伝子が以下のように順序づけられた：ｃｅｎ−ＭＭＰ８−ＭＭＰ１０−ＭＭＰ
１−ＭＭＰ３−ＭＭＰ１２−ＭＭＰ７−ＭＭＰ１３−ｔｅｌ。 命名法の註：マトリックスメタロプロテイナーゼの命名法について報告したとき
に、Nagase et al. (1992) が、間質コラゲナーゼをＭＭＰ１と呼んだ。

【０１６３】 ＭＭＰ２ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ２であり得る。 マトリックスメタロプロテイナーゼ２（ＭＭＰ２）に関する背景教示が http:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されてい
る。参照のために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 「ＩＶ型コラゲナーゼは、基底膜の主要な構造成分である、ＩＶ型コラーゲンを
特異的に開裂するメタロプロテイナーゼである。腫瘍組織の転移能力はこの酵素
の活性と相関することが見出された。 Huhtala et al. (1990) は、ＣＬＧ４Ａ遺伝子が１７ｋｂの長さであり、１１０
〜９０１ｂｐでサイズが変化する１３種のエクソンと１７５〜４，３５０ｂｐの
範囲にある１２種のイントロンを有することを示した。イントロンの並置は、Ｉ
Ｖ型コラゲナーゼ遺伝子のイントロン１〜４と８〜１２が、間質コラゲナーゼ及
びストロメライシンの遺伝子のイントロン位置に一致し、これらメタロプロテイ
ナーゼ遺伝子の緊密な構造関連性を示した。Devarajan et al. (1992) は、好中
球ゼラチナーゼと呼ばれる７８ｋＤのゼラチナーゼの構造及び発現について報告
した。７２ｋＤのＩＶ型コラゲナーゼは、正式には、マトリックスメタロプロテ
イナーゼ−２（ＭＭＰ２）と命名される。それはまた、ゼラチナーゼ、７２ｋＤ
としても知られている（Nagase et al., 1992）。 Irwin et al. (1996) は、ＭＭＰ２が子宮内膜の月経停止への可能なエフェクタ
ーであるという証拠を提示した。彼らは、プロゲステロンの存在下で子宮内膜ス
トローマ細胞を培養し、プロテイナーゼの除去後にプロテイナーゼ産生が増強さ
れることを見出した。Ｐ受容体拮抗薬であるＲＵ４８６の追加によっても同じ結
果が達成された。ウェスタンブロッティングによる酵素の特徴づけにより、それ
がＭＭＰ２であることが判明した。ノーザンブロット分析は、後期分泌相の子宮
内膜におけるＭＭＰ２・ｍＲＮＡの差次的発現を示した。 血管新生は、細胞の接着とタンパク分解の機構の両方に依存する。マトリックス
メタロプロテイナーゼ−２とインテグリンα−Ｖ／β−３は、新生血管の表面上
で機能的に関連する。Brooks et al. (1998) は、Ｃ末端にヘモぺキシン様ドメ
イン（アミノ酸４４５〜６３５）を含みＰＥＸと命名される、ＭＭＰ２のフラグ
メントが、メラノーマと内皮細胞において、この酵素がα−Ｖ／β−３へ結合す
ることを妨げ、細胞表面のコラーゲン分解活性を阻止することを見出した。ＰＥ
Ｘは、ＭＭＰ２が血管新生及び腫瘍増殖を妨害する、ニワトリの絨毛尿膜上でそ
の活性を阻止する。Brooks et al. (1998) はまた、天然に存在するＰＥＸの形
態が、腫瘍におけるα−Ｖ／β−３の発現とともに、そして発生する網膜の血管
新生の間に、in vivo で検出され得ることを見出した。これらの血管形成組織に
おけるＰＥＸのレベルは、それが内皮細胞のα−Ｖ／β−３と相互作用し、そこ
でそれがＭＭＰ２活性の天然の阻害剤として役立ち、それにより新しい血管の侵
入行動を調節することを示唆する。著者らは、組換えＰＥＸには血管新生に関連
した疾患への潜在的に新しい治療アプローチを提供する可能性がある、と結論づ
けた。 ヒト−マウス細胞ハイブリッド由来のＤＮＡのパネルへのハイブリダイゼーショ
ンにより、そして遺伝子プローブを使用する in situ ハイブリダイゼーション
により、Fan et al. (1989) は、ＣＬＧ４遺伝子を１６ｑ２１へ帰属させた；Hu
htala et al. (1990) を参照のこと。体細胞ハイブリッドＤＮＡへのハイブリダ
イゼーションにより、Collier et al. (1991) は、ＣＬＧ４ＡとＣＬＧ４Ｂの両
方を第１６染色体へ帰属させた。Chen et al. (1991) は、１４種のマウス／ヒ
トハイブリッド細胞系と脆弱部位のＦＲＡ１６Ｂの使用により、第１６染色体の
長腕上に１２種の遺伝子をマップした。ハイブリッドの断点は、脆弱部位ととも
に、長腕を１４の領域へ分割した。彼らは、ＣＬＧ４がバンド１６ｑ１３にある
と結論づけた。 Morgunova et al. (1999) は、ヒトＭＭＰ２の完全長プロフォーム（proform）
の結晶構造を報告した。この結晶構造は、このプロペプチドが触媒溝を遮蔽する
こと、そしてシステインのスイッチがプロペプチドの安定に不可欠なループの開
裂により機能し得ることを明らかにした。Becker-Follmann et al. (1997) は、
ヒト１６ｑに保存されている、マウス第８染色体の連鎖群の高解像マップを作成
した。このマップは、１６ｑ１３（最も動原体に近い遺伝子座）上にあるＭＭＰ
２の遺伝子座の相同体から１６ｑ２３．２−ｑ２３．３上のＣＴＲＢへ拡張され
た。」

【０１６４】 ＭＭＰ３ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ３であり得る。 このように、この態様によれば、本発明は、創傷のような損傷組織の治療（例
えば、治癒）における使用のための医薬品を提供し；この医薬品は組成物を含ん
でなり、この組成物は、（ａ）増殖因子；及び（ｂ）阻害剤；及び所望により（
ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含み；ここで阻害剤は、創傷
のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特
定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得て、ここ
で前記特定のタンパク質はＭＭＰ３である。

【０１６５】 マトリックスメタロプロテイナーゼ３（ＭＭＰ３）に関する背景教示が http:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されてい
る。参照のために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 「ヒト線維芽細胞のストロメライシン（トランジン又はマトリックスメタロプロ
テイナーゼ−３とも呼ばれる）は、広範囲の基質特異性を有する、コラゲナーゼ
（ＭＭＰ１）にごく近縁のプロテオグリカナーゼである。それは、主に結合組織
の細胞により産生される分泌メタロプロテアーゼである。他のメタロプロテアー
ゼと一緒になって、それは細胞外マトリックスの主要成分を相乗的に分解し得る
（Sellers and Murphy, 1981）。ストロメライシンは、プロテオグリカン、フィ
ブロネクチン、ラミニン、及びＩＶ型コラーゲンを分解することが可能であるが
、間質Ｉ型コラーゲンは分解しない。Whitham et al. (1986) は、コラゲナーゼ
及びストロメライシンのｃＤＮＡから予測されるアミノ酸配列から、それらが１
４個のアミノ酸の特に保存された領域を有し、細菌メタロプロテアーゼのサーモ
ライシンの亜鉛キレート領域と著しい相同性を共有する、ごく近縁の酵素である
ことが示されることを見出した(Matthews et al., 1974)。Wilhelm et al. (198
7) は、ヒトストロメライシンを精製し、その完全な一次構造を決定した。それ
は、５３，９７７Ｄａの算定サイズと１７アミノ酸の長さのシグナルペプチドを
有する、プレプロ酵素の形態で合成される。一次構造の比較は、ストロメライシ
ンがラットトランジンのヒト類似体であることを示唆した。Saus et al. (1988)
は、ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼ−３（ＭＭＰ３）の完全な一次構
造を決定した。それは４７７個のアミノ酸残基を有し、１７残基のシグナルペプ
チドを含む。この知見は、ＭＭＰ３がストロメライシンに同一であることを示し
た。ＭＭＰ３とコラゲナーゼは配列において５４％同一であることが見出され、
この２つのプロテイナーゼが共通の進化の起源を有することを示唆した。さらに
、ＭＭＰ３とコラゲナーゼの発現は、滑膜線維芽細胞の培養において協調的にモ
ジュレートされるように思われた。両タンパク質のｍＲＮＡのレベルはインター
ロイキン−１−βにより誘導され、レチノール酸又はデキサメタゾンにより抑制
される。Koklitis et al. (1991) は、２つの形態の組換えプロストロメライシ
ンを精製した。 体細胞ハイブリダイゼーションと in situ ハイブリダイゼーションにより、Spu
rr et al. (1988) は、ストロメライシンの遺伝子座を１１ｑへマップし、第１
１染色体、特に１１ｑ上のコラゲナーゼ遺伝子の位置を確認した。Gatti et al.
(1989) は、血管拡張性失調症を含む、その領域のマーカーを用いた連鎖分析に
より、ＳＴＭＹの座を１１ｑ２２−ｑ２３に位置付けた。パルスフィールドゲル
電気泳動法により、Formstone et al. (1993) は、メタロプロテイナーゼ遺伝子
クラスター−−ストロメライシンＩ、線維芽細胞コラゲナーゼ（ＭＭＰ１）及び
ストロメライシンＩＩ（ＭＭＰ１０）−−が第１１染色体の１３５ｋｂ領域に位
置することを示した。これら３種の遺伝子がＤＮＡマーカーのＤ１１Ｓ３８５と
物理的に近いことを、２種のＹＡＣクローンを使用して確かめ、それらの相対順
序を決定した。この情報は、放射線で減少する第１１染色体ハイブリッドのパネ
ルにおけるマーカー出現のパターンとともに、この順序がｃｅｎ−ＳＴＭＹ２−
ＣＬＧ−ＳＴＭＹ１−Ｄ１１Ｓ３８５−ｔｅｒであることを示唆した。Pendas e
t al. (1996) は、ヒトＭＭＰのファミリーが，彼らの報告時点で１４種のメン
バーからなることに注目した。ＭＭＰ遺伝子は、第１１染色体、第１４染色体（
ＭＭＰ１４）、第１６染色体（ＭＭＰ２）、第２０染色体（ＭＭＰ９）及び第２
２染色体（ＭＭＰ１１）へマップされ、第１１染色体の長腕内にいくつか密集し
ている。Pendas et al. (1996) は、１１ｑ２２へマップされる１．５ＭｂのＹ
ＡＣクローンを単離した。この非キメラＹＡＣクローンの詳細な分析により、７
種のＭＭＰ遺伝子が以下のように順序づけられた：ｃｅｎ−ＭＭＰ８−ＭＭＰ１
０−ＭＭＰ１−ＭＭＰ３−ＭＭＰ１２−ＭＭＰ７−ＭＭＰ１３−ｔｅｌ。

【０１６６】 Kerr et al. (1988) は、マトリックス分解性の分泌メタロプロテイナーゼで
あるトランジンの増殖因子刺激におけるＦＯＳ（１６４８１０）の役割を検証し
た。トランジン転写に及ぼす血小板由来増殖因子（１９００４０）と上皮増殖因
子の両方の刺激効果には、配列ＴＧＡＧＴＣＡを認識する因子が関連した。この
配列はトランジンプロモーターに見出され、転写因子のＪＵＮ／ＡＰ１と結合Ｆ
ＯＳ及びＦＯＳ関連複合体の結合部位である。 創傷修復には細胞の移行と組織の再構築が関与し、これらの秩序だった、調節さ
れたプロセスは、マトリックス分解プロテアーゼにより促進される。Saarialho-
Kere et al. (1992) は、間質コラゲナーゼが治癒表皮の移行フロントで基底角
化細胞により一様に発現されることを見出した。コラゲナーゼの基質特異性は主
に間質細線維コラーゲンに限定されているので、複雑なマトリックス組成物とと
もに効果的に組織を再構築するには、創傷環境において他の酵素も産生されるに
違いない。ストロメライシンは多くの非コラーゲン性結合組織の高分子を分解し
得る。in situ ハイブリダイゼーションと免疫組織化学を使用して、Saarialho-
Kere et al. (1994) は、ストロメライシンＩとストロメライシンＩＩがいずれ
も、多種多様な慢性潰瘍にある別個の角化細胞集団により産生されることを見出
した。ストロメライシンＩのｍＲＮＡ及びタンパク質は、おそらくは増殖表皮の
部位を代表する創傷先端に近接しているが遠位にある基底角化細胞において検出
された。対照的に、ストロメライシンＩＩのｍＲＮＡは、移行フロントの基底角
化細胞、つまりコラゲナーゼを発現するのと同じ表皮細胞の集団にのみ見られた
。ストロメライシンＩ産生角化細胞が基底膜上に存在したのに対し、ストロメラ
イシンＩＩ産生角化細胞は皮膚マトリックスに接触していた。さらに、ストロメ
ライシンＩの発現が皮膚線維芽細胞において顕著だったのに対し、ストロメライ
シンＩＩのシグナルはどの表皮細胞にも見られなかった。上記の知見は、この２
種のストロメライシンが創傷に応答して異なる基底角化細胞の集団により産生さ
れることを示し、それらが組織修復において異なる役割を担うことを示唆した。

【０１６７】 免疫蛍光染色法、ＲＴ−ＰＣＲ、及び in situ ハイブリダイゼーションを使
用して、Lu et al. (1999) は、非創傷及び創傷角膜の上皮層にストロメライシ
ンＩを局在化させた。ストロメライシンＩは、創傷後最初の３日間では深部のス
トローマ層に、外科処置後１週間ででは新たに合成されたストローマ・マトリッ
クスの領域に見出された。彼らは、ストロメライシンＩがマトリライシン（ＭＭ
Ｐ７）を活性化し（Imai et al., 1995）、ストロメライシンＩとマトリライシ
ンが組織再構築の間に相互作用すると述べた。ストロメライシンＩがエキシマ角
膜切除術後の創傷床における修復プロセスに関与する可能性があるのに対し、マ
トリライシンは、移行プロセスだけでなく後続の増殖相においても上皮創傷の再
構築においてある役割を担う可能性がある、と彼らは結論した。 一連の６アデノシン（６Ａ）と他の５アデノシン（５Ａ）を含有するＳＴＭＹ１
遺伝子のプロモーター配列には共通の多形が存在する。Ye et al. (1996) は、
冠アテローム性動脈硬化症の患者を用いた、Richardson et al. (1989) による
既報の３ヵ年研究（６Ａ対立形質についてホモ接合である患者は、全体及び局部
のいずれのアテローム動脈硬化性狭窄もより速い進行を示すことを明確にした）
を跡付けた。この観察は、メタロプロテイナーゼがじゅく腫形成の間の結合組織
再構築に関与するという他研究者の知見を裏付けた。Ye et al. (1996) は、５
Ａ／６Ａプロモーターの多形がＳＴＭＹ１遺伝子発現の調節にある役割を担うか
どうかを検討した。一過性発現の実験では、多形部位に６Ａを有するＳＴＭＹ１
構築体は、５Ａを含有する構築体よりもレポーター遺伝子を少なく発現すること
が見出された。核タンパク因子の結合は、５Ａ対立形質に対応するプローブと比
較して、６Ａ対立形質に対応するオリゴヌクレオチドプローブでより容易に検出
された。このようにして、Ye et al. (1996) は、５Ａ／６Ａ多形がＳＴＭＹ１
の発現を調節するのに重要な役割を担うらしいことを見出した。Quinones et al
. (1989) による研究では、イギリス出身の健常人３５４名のサンプルにおける
２つの対立形質（５Ａ／６Ａ）の頻度が０．５１／０．４９であることが見出さ
れた。 Sternlicht et al. (1999) は、２つの遺伝学アプローチ（テトラサイクリンに
調節されるやり方でＳＴＲ１を発現する、表現型が正常な乳腺上皮細胞と、マウ
ス「乳清酸性タンパク質」（ＷＡＰ）遺伝子プロモーターによりマウス乳腺を標
的とするＳＴＲ１遺伝子）を使用して、ＭＭＰ３又はＳＴＲ１が腫瘍の進展に影
響を及ぼすことを検証した。テトラサイクリンに調節されてＳＴＲ１を発現する
、表現型が正常な乳腺上皮細胞は、ＳＴＲ１がなければ上皮腺構造を in vivo
で形成したが、ＳＴＲ１があると、侵襲性の間葉様腫瘍を形成した。いったん始
動されると、この腫瘍は継続されるＳＴＲ１発現とは無関係になった。ＳＴＲ１
はまた、トランスジェニックマウスの乳腺において自発的な前癌性の変化と悪性
の変換を促進した。これらの変化はＴＩＭＰ１（３０５３７０）トランス遺伝子
の同時発現により阻止された。この前癌性及び悪性の病巣は、他のマウス乳癌モ
デルで見られるものとは異なる、型通りのゲノム変化を有していた。これらのデ
ータは、ＳＴＲ１が腫瘍の開始に影響を及ぼし、新生物になるリスクを変化させ
ることを示した。」

【０１６８】 ＭＭＰ７ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ７であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 この推定されるメタロプロテイナーゼ１（ＰＵＭＰ１）遺伝子は、ヒト腫瘍によ
り産生される、コラゲナーゼ関連結合組織分解性メタロプロテイナーゼの研究に
より同定された。Muller et al.（Muller, D.; Quantin, B.; Gesnel, M. -C.;
Millon-Collard, R.; Abecassis, J.; Breathnach, R.：「ヒトのコラゲナーゼ
遺伝子ファミリーは少なくとも４種のメンバーからなる」Biochem. J. 253: 187
-192, 1988）は、ＰＵＭＰタンパク質が２６７個のアミノ酸を有し、ストロメラ
イシン又はコラゲナーゼ（それぞれ、４７７個のアミノ酸と４６９個のアミノ酸
）より著しく短いことを見出した。推定メタロプロテイナーゼＩは、その後マト
リライシン若しくはマトリックスメタロプロテイナーゼ−７（ＭＭＰ７）と呼ば
れた。

【０１６９】 ＭＭＰ８ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ８であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 マトリックスメタロプロテイナーゼファミリーのメンバーである、好中球コラゲ
ナーゼは、皮膚線維芽細胞や滑膜細胞のコラゲナーゼとは、基質特異性と交差反
応性において異なる。Hasty et al.（Hasty, K. A.; Pourmotabbbed, T. F.; Go
ldberg, G. I.; Thompson, J. P.; Spinella, D. G.; Stevens, R. M.; Mainard
i, C. L.：「ヒト好中球コラゲナーゼ：他のマトリックスメタロプロテイナーゼ
への相同性を有する、別個の遺伝子産物」J. Biol. Chem. 265: 11421-11424, 1
990）は、慢性顆粒球性白血病の患者の末梢白血球から抽出したｍＲＮＡより構
築したλ−ｇｔ１１ ｃＤＮＡライブラリーを使用して、ヒト好中球コラゲナー
ゼをコードするｃＤＮＡをクローン化し、配列を決定した。このコーディング配
列から４６７個のアミノ酸タンパク質が予測される。それはヒト骨髄由来の３．
３ｋｂ・ｍＲＮＡへハイブリダイズした。この一次構造の他の特徴から、好中球
コラゲナーゼがマトリックスメタロプロテイナーゼ（例、ＭＭＰ１）ファミリー
のメンバーであるが、このファミリーの他のメンバーとは異なることが確かめら
れた。好中球コラゲナーゼは、Ｉ型コラーゲンへの選好性を示し、ＩＩＩ型コラ
ーゲンが線維芽細胞コラゲナーゼによる消化をより強く受けやすいことと対照的
である。Devarajan et al.（Devarajan, P.; Mookhtiar, K.; Van Wart, H.; Be
rliner, N.：「ヒト好中球コラゲナーゼをコードするｃＤＮＡの構造及び発現」
Blood 77: 2731-2738, 1991）は、ヒト好中球コラゲナーゼをコードする２．４
ｋｂのｃＤＮＡを単離した。その配列から、それがヒト線維芽細胞コラゲナーゼ
に対して５８％の相同性を示し、同一のドメイン構造を有する４６７残基のタン
パク質をコードすることが示された。

【０１７０】 ＭＭＰ９ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ９であり得る。 マトリックスメタロプロテイナーゼ９（ＭＭＰ９）に関する背景教示が http:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されてい
る。参照のために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 「７２−及び９２−ｋＤのＩＶ型コラゲナーゼは、哺乳動物において、細胞外マ
トリックスのコラーゲンを分解する分泌性亜鉛メタロプロテアーゼ群のメンバー
である。この群の他のメンバーには、間質コラゲナーゼとストロメライシンが含
まれる。７２−ｋＤのＩＶ型コラゲナーゼが正常な皮膚線維芽細胞から分泌され
るのに対し、９２−ｋＤコラゲナーゼ（ＣＬＧ４Ｂ）は、正常な肺胞マクロファ
ージと顆粒球により産生される。ＣＬＧとＳＴＭＹはいずれもほとんど同一の長
さのエクソンを有し、１１ｑ上に位置し、協調的なやり方で調節される。体細胞
ハイブリッドのＤＮＡへのハイブリダイゼーションにより、Collier et al. (19
91) は、ＣＬＧ４ＡとＣＬＧ４Ｂがいずれも第１６染色体に位置していることを
示した。しかしながら、St Jean et al. (1995) は、ＣＬＧ４Ｂを第２０染色体
へ帰属させた。彼らは、この遺伝子の５−プライム隣接領域にある多形ジヌクレ
オチドのリピートを使用して、１０種のＣＥＰＨ参照系統においてＣＬＧ４Ｂ遺
伝子座の連鎖マップを作成した。St Jean et al. (1995) は、染色体領域２０ｑ
１１．２−ｑ１３．１に広がるマーカーについて、１０．４５〜２０．２９の対
数得点（lod score）を観察した。ＣＬＧ４Ｂを第２０染色体へ帰属させること
のさらなる裏付けは、ヒト／げっ歯類の体細胞ハイブリッドの分析により提供さ
れた。ＣＬＧ４ＡとＣＬＧ４Ｂはいずれも１３個のエクソンと類似したイントロ
ン位置を有する（Huhtala et al., 1991）。これらの類似性により、第１６染色
体へのマッピングに使用されたＣＬＧ４ＢのｃＤＮＡクローンは、第２０染色体
上のＣＬＧ４Ｂではなく、ＣＬＧ４Ａへハイブリダイズした可能性がある。 ＣＬＧ４Ａ及びＣＬＧ４Ｂの両方の１３エクソンは、この遺伝子ファミリーの他
のメンバーに見出されたものより３つ以上多い。この余分のエクソンはフィブロ
ネクチン様ドメインのアミノ酸をコードし、これは７２−ｋＤ及び９２−ｋＤの
ＩＶ型コラゲナーゼにのみ見出された。９２−ｋＤのＩＶ型コラゲナーゼはまた
９２−ｋＤゼラチナーゼ、Ｖ型コラゲナーゼ、又はマトリックスメタロプロテイ
ナーゼ９（ＭＭＰ９）としても知られる：Nagase et al. (1992) により提供さ
れたマトリックスメタロプロテイナーゼの用語解説を参照のこと。 Linn et al. (1996) は、３種の異なる証拠（体細胞ハイブリッドマッピングパ
ネルのスクリーニング、蛍光 in situ ハイブリダイゼーション、及び新たに同
定された多形を用いる連鎖分析）に基づいて、ＭＭＰ９（ＣＬＧ４Ｂと呼ばれて
いた）を第２０染色体へ再帰属させた。彼らは又マウスのＣｌｇ４ｂをマウスの
第２染色体へマップしたが、これはヒトの第１６染色体とな既知の相同性がない
が、ヒトの第２０染色体に相同な大きな領域を有する。 胚性幹細胞における標的破壊により、Vu et al. (1998) は、ＭＭＰ９／ゼラチ
ナーゼＢ遺伝子にヌル（null）突然変異を有するホモ接合マウスを作製した。こ
れらのマウスは、骨成長板の血管形成及び骨化の異常なパターンを示した。肥大
性軟骨細胞は正常に発達したが、アポトーシス、血管形成及び骨化が遅延し、正
常の約８倍まで成長板が進行的に延長した。３週後、出生後の異常なアポトーシ
ス、血管形成及び骨化は、拡大した成長板を再構築するように補正され、最終的
には正常な外観の軸骨格を産生した。野生型骨髄細胞の移植により、ＭＭＰ９ヌ
ル成長板の血管形成及び骨化が救われ，上記のプロセスが骨髄起源のＭＭＰ９発
現細胞（即ち、軟骨吸収細胞）により介在されることが示された。培養されるＭ
ＭＰ９ヌルマウス由来の成長板は血管新生アクチベーターの放出遅延を示し、こ
のプロテイナーゼが血管新生を制御する役割を確認させる。」

【０１７１】 ＭＭＰ１０ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１０であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 ストロメライシンはコラゲナーゼに関連した（そのアミノ酸配列において約５５
％類似している）メタロプロテイナーゼであり、その基質にはプロテオグリカン
とフィブロネクチンが含まれるが、Ｉ型コラーゲンは含まれない。ストロメライ
シンＩＩはマトリックスメタロプロテイナーゼ−１０、又はＭＭＰ１０とも呼ば
れる。Muller et al.（Muller, D.; Quantin, B.; Gesnel, M. -C.; Millon-Col
lard, R.; Abecassis, J.; Breathnach, R.：「ヒトのコラゲナーゼ遺伝子ファ
ミリーは少なくとも４種のメンバーからなる」Biochem. J. 253: 187-192, 1988
）は、試験した６９種の腫瘍のうち１１種でラットのストロメライシンｃＤＮＡ
へハイブリダイズすることが可能なＲＮＡを検出した。上記の研究がなされたの
は、腫瘍の侵襲及び転移には宿主の間質マトリックスの酵素分解が必要とされる
ことの強い可能性のためである。これは腫瘍細胞ではタンパク分解活性が増加し
ているとする報告により支持される概念である。これらＲＮＡへのｃＤＮＡの分
子クローニングにより、Muller et al. (1988) は、ストロメライシンＲＮＡと
これまで記載されていない関連遺伝子、ストロメライシンＩＩの遺伝子の転写物
の混合物としてそれらを同定した。彼らはまた、より遠縁のヒト遺伝子、ＰＵＭ
Ｐ１遺伝子に対応するｃＤＮＡを単離した。

【０１７２】 ＭＭＰ１１ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１１であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 マトリックスメタロプロテイナーゼのファミリーは、胚発生、組織修復及び腫瘍
進行において生じるような細胞外マトリックスの再構築に関連した生理及び病理
プロセスに関与しているらしい。この遺伝子ファミリーのメンバーである、マト
リシアン、ストロメライシンＩＩＩは、侵襲性乳癌ストローマ細胞において過剰
に発現されているが、良性の乳腺線維腺腫を囲むストローマ細胞では過剰に発現
されていない。in situ ハイブリダイゼーションにより、Levy et al.（Levy, A
.; Zucman, J.; Delattre, O.; Mattei, M.-G.; Rio, M.-C.,; Basset, P.：「
ヒトストロメライシン３（ＳＴＭＹ３）遺伝子の第２２染色体ｑ１１．２領域へ
の帰属」Genomics 13: 881-883, 1992）は、ＳＴＭＹ３遺伝子を２２ｑへ帰属さ
せた。２２ｑの様々なセグメントを含有する体細胞ハイブリッドのパネルを使用
して、彼らは、ＳＴＭＹ３遺伝子が、慢性骨髄性白血病に関与するＢＣＲ遺伝子
のごく近傍にある２２ｑ１１．２に存在することを示した。ＳＴＭＹ１とＳＴＭ
Ｙ２はいずれも第１１染色体上に位置している。ストロメライシンＩＩＩはまた
マトリックスメタロプロテイナーゼ−１１、又はＭＭＰ１１と呼ばれる。マトリ
ックスメタロプロテイナーゼの命名法、並びに記号とＥＣ番号が、Nagase et al
.（Nagase, H.; Barrett, A. J.; Woessner, J. F., Jr.：「マトリックスメタ
ロプロテイナーゼの命名法及び用語解説」Matrix Suppl. 1: 421-424, 1992）に
より提供された。

【０１７３】 ＭＭＰ１２ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１２であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、発生及び炎症時の組織の再構築
及び修復に重要である、関連したマトリックス分解酵素のファミリーである。腫
瘍の侵襲、関節炎、アテローム性動脈硬化症のような様々な疾患に異常な発現が
関連している。ＭＭＰの活性はまた、喫煙誘導性の肺気腫にも関連している可能
性がある。Belaaouaj et al.（Belaaouaj, A.; Shipley, J. M.; Kobayashi, D.
K.; Zimonjic, D. B.; Popescu, N.; Silverman, G. A.; Shapiro, S. D.：「
ヒトマクロファージメタロエラスターゼ：ゲノム構成、染色体位置、遺伝子連鎖
、及び組織特異的発現」J. Biol. Chem. 270: 14568-14575, 1995）は、（ＭＭ
Ｐ１２とも表記される）ＨＭＥ遺伝子のゲノム構成について記載した。この１３
ｋｂの遺伝子は１０個のエクソンからなり、他のＭＭＰの高度に保存されたイン
トロン−エクソン境界部分を共有する。著者らはまた、マクロファージ及びスト
ローマ細胞における組織特異的発現を明示した。彼らは、蛍光 in situ ハイブ
リダイゼーションにより、この遺伝子を１１ｑ２２．２−ｑ２２．３へ帰属させ
た。

【０１７４】 ＭＭＰ１３ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１３であり得る。 このように、この態様によれば、本発明は、創傷のような損傷組織の治療（例
えば、治癒）における使用のための医薬品を提供し；この医薬品は組成物を含ん
でなり、この組成物は、（ａ）増殖因子；及び（ｂ）阻害剤；及び所望により（
ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含み；ここで阻害剤は、創傷
のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特
定の有害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得て、ここ
で前記特定のタンパク質はＭＭＰ１３である。

【０１７５】 マトリックスメタロプロテイナーゼ１３（ＭＭＰ１３）に関する背景教示が h
ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示され
ている。参照のために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 「Freije et al. (1994) は、乳房腫瘍から誘導したｃＤＮＡライブラリーから
「新規な」ヒトのマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）をコードするｃ
ＤＮＡをクローン化した。この単離されたｃＤＮＡは４７１個のアミノ酸のポリ
ペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含有する。予測されるタ
ンパク配列は、すでに知られたＭＭＰへの全般的な類似性を示し、十分保存され
たＰＲＣＧＸＰＤモチーフを含む、このタンパク質ファミリーに特有な構造上の
特徴をすべて提示した。さらに、それは、そのアミノ酸配列に、コラゲナーゼの
サブファミリーに特異的ないくつかの残基（ｔｙｒ２１４、ａｓｐ２３５、及び
ｇｌｙ２３７）を含有し、ストロメライシンに存在する９残基の挿入を欠く。こ
の構造上の特徴により、それが線維芽細胞（ＭＭＰ１）及び好中球（ＭＭＰ８）
コラゲナーゼからなるこのファミリーの第３のメンバーであったので、Freije e
t al. (1994) は、この新規ＭＭＰをコラゲナーゼ３と呼んだ。 Pendas et al. (1997) は、ＭＭＰ１３遺伝子が１０個のエクソンを含有し、約
１２．５ｋｂに及ぶことを報告した。この全体の遺伝子構成は、ＭＭＰ１、ＭＭ
Ｐ７及びＭＭＰ１２を含む、他のＭＭＰ遺伝子のそれに似ている。 Freije et al. (1994) は、ＣＬＧ３・ｃＤＮＡをワクシニアウイルスの系で発
現させ、この組換えタンパク質が細線維コラーゲンを分解することが可能である
ことを見出し、単離されたｃＤＮＡが真正のコラゲナーゼをコードするという着
想を裏付けた。正常及び病理組織からのＲＮＡのノーザンブロット分析は、乳房
腫瘍において３種の異なるｍＲＮＡ分子種が存在することを示し、このことは、
この遺伝子の３−プライム非コーディング領域に存在する異なるポリアデニル化
部位が利用されることの結果であると考えられた。対照的に、正常乳房、乳腺線
維腺腫、肝臓、胎盤、卵巣、子宮、前立腺、副甲状腺を含む他のヒト組織由来の
ＲＮＡを用いると、ノーザンブロットでもＲＮＡポリメラーゼ連鎖反応分析でも
ＣＬＧ３・ｍＲＮＡは検出されなかった。腫瘍化プロセスにおけるこのメタロプ
ロテイナーゼの可能な役割が提唱された。 蛍光 in situ ハイブリダイゼーションにより、Pendas et al. (1995) は、ＣＬ
Ｇ３遺伝子（ＭＭＰ１３と表記される）を１１ｑ２２．３へ位置付けた。ＣＬＧ
３を含有するＹＡＣクローンの物理マッピングは、この遺伝子が、線維芽細胞コ
ラゲナーゼ（ＭＭＰ１）、ストロメライシン−１（ＭＭＰ３）、及びストロメラ
イシン−２（ＭＭＰ１０）を含む、他のマトリックスメタロプロテイナーゼをコ
ードする遺伝子と緊密に連結していることを明らかにした。パルスフィールドゲ
ル電気泳動法を使用するこの領域のさらなるマッピングは、ＣＬＧ３遺伝子がマ
トリックスメタロプロテイナーゼクラスターのテロメア側に位置していることを
示した。Pendas et al. (1995) は、この遺伝子座の相対順序がｃｅｎ−ＳＴＭ
Ｙ２−ＣＬＧ１−ＳＴＭＹ１−ＣＬＧ３−ｔｅｌであることを見出した。Pendas
et al. (1996) は、１１ｑ２２へマップされる１．５ＭｂのＹＡＣクローンを
単離した。この非キメラＹＡＣクローンの詳細な分析により７種のＭＭＰ遺伝子
が以下のように順序づけられた：ｃｅｎ−ＭＭＰ８−ＭＭＰ１０−ＭＭＰ１−Ｍ
ＭＰ３−ＭＭＰ１２−ＭＭＰ７−ＭＭＰ１３−ｔｅｌ。 Mitchell et al. (1996) は、変形性関節症の軟骨におけるＭＭＰ１３の発現と
そのＩＩ型コラーゲンへの活性は、この酵素が軟骨コラーゲン分解においてある
重要な役割を担うことを示し、従って、コラゲナーゼ阻害に基づいて提唱される
治療介入の複雑な標的の一部を形成するに違いないと結論づけた。同様に、Rebo
ul et al. (1996) は、ヒト軟骨細胞におけるコラゲナーゼ３の発現及び合成に
ついてのデータを提示し、ヒトの変形性関節症の軟骨病理におけるその関与を示
唆した。」

【０１７６】 ＭＭＰ１４ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１４であり得る。 マトリックスメタロプロテイナーゼ１４（ＭＭＰ１４）に関する背景教示が h
ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示され
ている。参照のために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 「マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、細胞外マトリックス（ＥＣ
Ｍ）の様々な成分を分解するＺｎ（２＋）結合性エンドペプチダーゼである。Ｍ
ＭＰは、正常及び病理の組織再構築プロセス、創傷治癒、血管新生、及び腫瘍侵
襲に関連している酵素である。ＭＭＰは異なる基質特異性を有し、異なる遺伝子
によりコードされる。Sato et al. (1994) は、胎盤ｃＤＮＡライブラリーから
ヒト遺伝子のｃＤＮＡをクローン化した（彼らはこの遺伝子をＭＭＰ−Ｘ１と、
その遺伝子産物を膜型メタロプロテイナーゼと呼んだ）。著者らは、このタンパ
ク質が侵襲性の腫瘍細胞の表面で発現されることに注目した。縮重ＰＣＲを使用
して、Takino et al. (1995) は、ＭＭＰスーパーファミリーのこのメンバーの
全ゲノム配列をクローン化した（ＭＭＰ１を参照のこと）。同定されたｃＤＮＡ
は、保存配列と、他のＭＭＰに類似したドメイン構造を共有する５８２アミノ酸
のタンパク質をコードする。彼らは、彼らによりＭＭＰ−Ｘ１と名づけられたｃ
ＤＮＡがＣ末端に独自の膜貫通ドメインを有することに注目した。こうして、彼
らは、ＭＭＰ−Ｘ１が他のＭＭＰのような分泌タンパク質ではなく、膜に広がる
タンパク質であることに注目した。ノーザンブロットは、ＭＭＰ―Ｘ１の発現が
試験したほとんどすべての組織で様々な強度で存在するが、胎盤で最も高いこと
を示した。 Mignon et al. (1995) は、マトリックスメタロプロテイナーゼファミリーの１
１種のメンバーとその染色体位置について作表したが、１つの例外を除いて、そ
れらをコードする遺伝子はすでにマップが作成されていた。３種のコラゲナーゼ
と２種のストロメライシンを含む、それらの６種は１１ｑへ帰属された。膜型メ
タロプロテイナーゼ（ＭＭＰ１４）はプロゼラチナーゼＡのアクチベーターであ
る可能性があり、創傷治癒とヒトガン進行の間に線維芽細胞で発現される。同位
体 in situ ハイブリダイゼーションにより、Mignon et al. (1995) は、ＭＭＰ
１４の遺伝子を１４ｑ１１−ｑ１２へマップした。 遺伝子ターゲッティングにより、Holmbeck et al. (1999) は、Ｍｍｐ１４遺伝
子の欠損したマウスを産生し、彼らはそれをＭＴ１−ＭＭＰと呼んだ。ＭＭＰ１
４の欠乏は、頭蓋と顔の変形、関節炎、骨減少症、小人症、軟組織の線維症を引
き起こしたが、これは骨格及び骨格外の結合組織の構築に必須なコラーゲン溶解
活性の遮断によるものである。上記の知見は、結合組織の代謝におけるＭＭＰ１
４の主要機能を示し、軟結合組織マトリックスの常在細胞による構築が骨格の硬
組織の発達及び維持に不可欠であることを明示した。」

【０１７７】 ＭＭＰ１５ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１５であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 Will と Hinzmann (Will, H.; Hinzmann, B.:「潜在的な膜貫通セグメントを有
する新規なヒトマトリックスメタロプロテイナーゼのｃＤＮＡ配列とｍＲＮＡの
組織分布」Europ. J. Biochem. 231: 602-608, 1995）は、ヒト肺ｃＤＮＡライ
ブラリーから、新規なＭＭＰ（ＭＭＰ１５）をコードするｃＤＮＡを単離した。
このＭＭＰ１５・ｃＤＮＡは、ＭＭＰに典型的な構造特性を有する６６９アミノ
酸のタンパク質をコードする。さらに、それは予測される膜貫通セグメントをＣ
末端に含有する。ＭＭＰ１５は、ＭＭＰ１４（やはりＣ末端膜貫通セグメントを
含有する膜局在性のＭＭＰ）と７３．９％の配列類似性を共有する。

【０１７８】 ＭＭＰ１６ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１６であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 Takino et al. (Takino, T.; Sato, H.; Shinagawa, A.; Seiki, M.:「ヒト胎盤
ｃＤＮＡライブラリーからの第二の膜型マトリックスメタロプロテイナーゼ（Ｍ
Ｔ−ＭＭＰ２）遺伝子の同定：ＭＴ−ＭＭＰはＭＭＰファミリーにおいて独自の
膜型サブクラスを形成する」 J. Biol. Chem. 270: 23013-23020, 1995）は、ヒ
ト胎盤ｃＤＮＡライブラリーから、新規なＭＭＰ・ｃＤＮＡ（ＭＭＰ１６）を単
離した。ＭＭＰ１６タンパク質は６０４個のアミノ酸からなり、特徴的なＭＭＰ
ドメイン構造を有する。さらに、ＭＭＰ１６は、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５及びＭ
ＭＰ１７と同様に、潜在的な膜貫通ドメインを含有するＣ末端伸張部分を有する
。

【０１７９】 ＭＭＰ１７ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１７であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 Puente et al. (Puente, X. S.; Pendas, A. M.; Llano, E.; Velasco, G.; Lop
es-Otin, C.:「ヒト乳癌からの新規膜型マトリックスメタロプロテイナーゼの分
子クローニング」 Cancer Res. 56: 944-949, 1996）は、縮重ＰＣＲを使用して
、ヒト乳癌ｃＤＮＡライブラリーから、マトリックスメタロプロテイナーゼ−１
７（ＭＭＰ１７）をコードするｃＤＮＡをクローン化した。著者らによりＭＴ４
−ＭＭＰと命名されたＭＭＰ１７は、活性化の座を有するプロドメイン、亜鉛結
合部位、及びヘモペキシンドメインを含む、ＭＭＰファミリーに特有のドメイン
構成を有する、５１８個のアミノ酸のタンパク質である。ＭＭＰ１７はまた、推
定膜貫通ドメインを含有するＣ末端拡張部分を有し、それが膜型ＭＭＰサブクラ
ス（ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６を参照のこと）のメンバーであること
を示す。

【０１８０】 ＭＭＰ１９ 本発明のある態様では、本発明の阻害剤の標的はＭＭＰ１９であり得る。 このマトリックスメタロプロテイナーゼに関する背景教示が http://www.ncbi
.nlm.nih.gov/Omim で Victor A. McKusick et al により示されている。参照の
ために、以下の情報をその情報源から抜粋した。 ＥＳＴデータベースのＭＭＰ類似性検索を使用して、Cossins et al. (Cossins,
J.; Dudgeon, T. J.; Catlin, G.; Gearing, A. J. H.; Clements, J. M.:「推
定新規ヒトマトリックスメタロプロテイナーゼであるＭＭＰ１８の同定」 Bioch
em. Biophys. Res. Commun. 228: 494-498, 1996）は、推定ＭＭＰの３−プライ
ム末端をコードする部分ｃＤＮＡクローンを同定した。彼らはこれをＭＭＰ１８
と呼んだが、正式にはＭＭＰ１９と呼称された。彼らは５−プライム末端をＰＣ
Ｒ増幅し、完全長のｃＤＮＡをクローン化し、配列決定した。ＭＭＰ１９は、予
測分子量５７，２３８の５０８アミノ酸のオープンリーディングフレームを含有
し、ＭＭＰファミリーに特有な特徴をすべて有する。ＭＭＰ１８は、推定シグナ
ル配列と、それに続く、保存された「システインスイッチ」領域を有するプロド
メインを含有する。２．７ｋｂの単一転写物の発現は、胎盤、肺、膵臓、卵巣、
小腸、脾臓、胸腺、及び前立腺で検出され、精巣、結腸、及び心臓ではずっと低
いレベルであった。脳、骨格筋、肝臓、腎臓、又は末梢血の白血球では、ＭＭＰ
１９のｍＲＮＡは検出されなかった。

【０１８１】 阻害剤 本発明の組成物の必須成分は阻害剤である。阻害剤は、タンパク質（プロテアー
ゼ）が損傷組織の治癒に対して有害な（有毒な）効果を及ぼす、創傷のような損
傷組織の環境においてアップレギュレートされる各タンパク質（例、プロテアー
ゼ）の阻害剤として作用し得る、任意の好適な薬剤であり得る。

【０１８２】 「阻害剤」という用語は、本発明の薬剤に関連して本明細書で使用されるよう
に、タンパク質（プロテアーゼ）が損傷組織の治癒に対して有害な（有毒な）効
果を及ぼす、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる各
タンパク質（例、プロテアーゼ）の作用を抑制、及び／又は消失、及び／又は遮
蔽、及び／又は予防し得る薬剤を意味する。

【０１８３】 特定の阻害剤には、以下の１つ又はそれ以上の好適なメンバーが含まれる：ｕ
ＰＡの阻害剤（Ｉ：ｕＰＡ）、ＭＭＰ１の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１）、ＭＭＰ２の
阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ２）、ＭＭＰ３の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ３）、ＭＭＰ７の阻害
剤（Ｉ：ＭＭＰ７）、ＭＭＰ８の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ８）、ＭＭＰ９の阻害剤（
Ｉ：ＭＭＰ９）、ＭＭＰ１０の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１０）、ＭＭＰ１１の阻害剤
（Ｉ：ＭＭＰ１１）、ＭＭＰ１２の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１２）、ＭＭＰ１３の阻
害剤（Ｉ：ＭＭＰ１３）、ＭＭＰ１４の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１４）、ＭＭＰ１５
の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１５）、ＭＭＰ１６の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１６）、ＭＭＰ
１７の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１７）、ＭＭＰ１９の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ１９）、Ｍ
ＭＰ２０の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ２０）、ＭＭＰ２１の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ２１）
、ＭＭＰ２４の阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ２４）、ＭＭＰＦＭＦの阻害剤（Ｉ：ＭＭＰ
ＦＭＦ）。

【０１８４】 阻害剤はアミノ酸配列であるか又はその化学誘導体であり得る。この基質は有
機化合物又は他の化学品でもよい。この薬剤はヌクレオチド配列であってもよく
、センス配列か又はアンチセンス配列であり得る。薬剤はまた抗体でもよい。あ
る適用では、好ましくは、阻害剤は合成有機分子である。

【０１８５】 このように、「阻害剤」という用語には、限定しないが、天然であるかどうか
にかかわらず、任意の適切な供給源から入手されるか又はそれにより産生され得
る化合物が含まれる。

【０１８６】 阻害剤は、ペプチド、並びに、リード化合物のような、有機低分子のような他
の化合物を含み得る化合物のライブラリーから設計されるか又は入手され得る。 例を挙げると、阻害剤は、細菌、真菌又は動物（特に哺乳動物）の細胞若しく
は組織のような生物材料からの天然物質、生物学的高分子、又は抽出物、有機若
しくは無機分子、合成剤、半合成剤、構造若しくは機能上の模擬体、ペプチド、
ペプチド模擬体、誘導化された薬剤、全タンパク質から開裂されたペプチド、（
例えば、ペプチド合成機又は組換え技術のいずれか、又はその組み合わせを使用
して）人工的に合成されたペプチド、組換え薬剤、抗体、天然若しくは非天然薬
剤、融合タンパク質又はその同等物、及び突然変異体、誘導体又はそれらの組み
合わせであり得る。

【０１８７】 本明細書で使用されるように、「阻害剤」は単一の実体であり得るか、又は薬
剤の組み合わせであり得る。従って、本発明の組成物の阻害剤は、創傷のような
損傷組織の環境においてアップレギュレートされる１種又はそれ以上のタンパク
質の作用を阻害することが可能である２種又はそれ以上の薬剤であり得る。この
ように、本発明の組成物は、１つのＩ：ｕＰＡと１つのＩ：ＭＭＰを含む場合が
ある。もう１つの態様では、本発明の組成物は、１つのＩ：ｕＰＡと１つのＩ：
ＭＭＰ１及び／又はＩ：ＭＭＰ２及び／又はＩ：ＭＭＰ３及び／又はＩ：ＭＭＰ
７及び／又はＩ：ＭＭＰ８及び／又はＩ：ＭＭＰ９及び／又はＩ：ＭＭＰ１０及
び／又はＩ：ＭＭＰ１１及び／又はＩ：ＭＭＰ１２及び／又はＩ：ＭＭＰ１３及
び／又はＩ：ＭＭＰ１４及び／又はＩ：ＭＭＰ１５及び／又はＩ：ＭＭＰ１６及
び／又はＩ：ＭＭＰ１７及び／又はＩ：ＭＭＰ１９及び／又はＩ：ＭＭＰ２０及
び／又はＩ：ＭＭＰ２１及び／又はＩ：ＭＭＰ２４及び／又はＩ：ＭＭＰＦＭＦ
を含み得る。もう１つの態様では、本発明の組成物は、第一のＩ：ｕＰＡと第二
のＩ：ｕＰＡ及び／又は第一のＩ：ＭＭＰ及び／又は第二のＩ：ＭＭＰを含む場
合がある。

【０１８８】 本発明の組成物の阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギ
ュレートされる２種又はそれ以上のタンパク質の作用を阻害することが可能であ
る１つの薬剤を含み得る。このように、本発明の組成物は、Ｉ：ｕＰＡ及びＩ：
ＭＭＰとして作用することが可能である１つの薬剤を含む場合がある。もう１つ
の態様では、本発明の組成物は、Ｉ：ｕＰＡ及び１つのＩ：ＭＭＰ１及び／又は
Ｉ：ＭＭＰ２及び／又はＩ：ＭＭＰ３及び／又はＩ：ＭＭＰ７及び／又はＩ：Ｍ
ＭＰ８及び／又はＩ：ＭＭＰ９及び／又はＩ：ＭＭＰ１０及び／又はＩ：ＭＭＰ
１１及び／又はＩ：ＭＭＰ１２及び／又はＩ：ＭＭＰ１３及び／又はＩ：ＭＭＰ
１４及び／又はＩ：ＭＭＰ１５及び／又はＩ：ＭＭＰ１６及び／又はＩ：ＭＭＰ
１７及び／又はＩ：ＭＭＰ１９及び／又はＩ：ＭＭＰ２０及び／又はＩ：ＭＭＰ
２１及び／又はＩ：ＭＭＰ２４及び／又はＩ：ＭＭＰＦＭＦとして作用すること
が可能である１つの薬剤を含む場合がある。

【０１８９】 本発明の阻害剤は他の治療特性を示すことが可能であってもよい。 阻害剤は、１種又はそれ以上の他の医薬活性剤と複合して使用され得る。 活性剤の複合物が投与される場合、それらは、同時に、別々に、又は連続的に
投与され得る。

【０１９０】 立体及び幾何異性体 特定の阻害剤及び／又は増殖因子のなかには立体異性体及び／又は幾何異性体と
して存在し得るものがある−例えば、それらは１つ又はそれ以上の不斉及び／又
は幾何中心を有し、２種又はそれ以上の立体異性及び／又は幾何異性の形態で存
在し得る。本発明は、これら阻害剤の個々の立体異性体及び幾何異性体、並びに
それらの混合物すべての使用を考慮する。特許請求項において使用される用語に
はこれらの形態が含まれる。但し、前記形態は（必ずしも同じ程度ではないが）
適切な機能活性を保持するものとする。

【０１９１】 製剤塩 本発明の阻害剤、及びおそらくは本発明の増殖因子は、製剤的に許容される塩の
形態で投与され得る。

【０１９２】 製剤的に許容される塩は当業者に周知であり、例えば、Berge et al. J. Phar
m. Sci., 66, 1-19 (1977) により挙げられるものが含まれる。好適な酸付加塩
は、無毒の塩を形成する酸から形成され、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸
塩、硝酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素酸塩、酢酸塩、トリフ
ルオロ酢酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、
アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、ギ
酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホ
ン酸塩及びｐ−トルエンスルホン酸塩を包含する。

【０１９３】 １種又はそれ以上の酸部分が存在する場合、好適な製剤的に許容される塩基付
加塩が、無毒の塩を形成する塩基から形成され得て、アルミニウム、カルシウム
、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、及びジエタノールア
ミンのような製剤的に活性なアミンの塩を包含する。

【０１９４】 本発明の阻害剤の製剤的に許容される塩は、本剤と所望される酸若しくは塩基
の溶液を適宜一緒に混合することによって容易に調製され得る。この塩は溶液か
ら沈殿して濾過により採取されるか、又は溶媒の蒸発により回収され得る。

【０１９５】 本発明の阻害剤は、多形の形態で存在し得る。 本発明の阻害剤は１つ又はそれ以上の不斉炭素原子を含有する場合があり、従
って、２種又はそれ以上の立体異性の形態で存在する。薬剤がアルケニル若しく
はアルケニレン基を含有する場合、シス（Ｅ）及びトランス（Ｚ）異性も起こり
得る。本発明には、本発明の薬剤の各立体異性体、さらに、適宜そのそれぞれの
互変異性形態、並びにそれらの混合物が含まれる。

【０１９６】 ジアステレオマー又はシス及びトランス異性体の分離は、例えば、本発明の薬
剤又はその好適な塩若しくは誘導体の立体異性混合物の分別結晶化、クロマトグ
ラフィー又はＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．による、従来技術によって達成され得る。薬剤の
個別の鏡像異性体はまた、対応する光学的に純粋な中間体からか、又は好適なキ
ラル支持体を使用する、対応ラセミ化合物のＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によるような分割
によるか、又は対応ラセミ化合物の好適な光学活性の酸若しくは塩基との反応に
より適宜形成されるジアステレオマー塩の分別結晶化によっても製造され得る。

【０１９７】 本発明にはまた、本発明の薬剤又はその製剤的に許容される塩のすべての好適
な同位体変異物も含まれる。本発明の薬剤又はその製剤的に許容される塩のすべ
ての好適な同位体変異物は、少なくとも１つの原子が同じ原子数であるが通常天
然に見出される原子量とは異なる原子量を有する原子により置き換えられている
ものとして定義される。本発明の薬剤とその製剤的に許容される塩へ取込まれ得
る同位体の例には、²Ｈ、³Ｈ、¹³Ｃ、¹⁴Ｃ、¹⁵Ｎ、¹⁷Ｏ、¹⁸Ｏ、³¹Ｐ、³²Ｐ、³⁵ Ｓ、¹⁸Ｆ、及び³⁶Ｃｌのような、それぞれ水素、炭素、窒素、酸素、リン、イオ
ウ、フッ素、及び塩素の同位体が含まれる。上記の同位体、及び／又は他原子の
他の同位体を含有する、本発明の薬剤とその製剤的に許容される塩のある同位体
変異物、例えば、³Ｈ又は¹⁴Ｃのような放射活性同位体が取り込まれたものは、
薬物及び／又は基質の組織分布試験において有用である。トリチウム化、即ち³
Ｈと、炭素−１４、即ち¹⁴Ｃの同位体は、その調製のし易さと検出可能性のため
に特に好ましい。さらに、重水素、即ち²Ｈのようなより重い同位体での置換は
、より高い代謝安定性、例えば in vivo 半減期の増加、又はより少ない必要投
与量から生じるある種の治療有利性を提供し得るので、ある状況で好ましい場合
がある。一般に、本発明の薬剤とその製剤的に許容される塩の同位体変異物は、
好適な試薬の適当な同位体変異物を使用して、従来法により製造し得る。

【０１９８】 当業者には、本発明の薬剤がプロドラッグから誘導され得ることが理解されよ
う。プロドラッグの例には、ある保護基を有し、それ自身では薬理活性を有さな
い場合があるが、ある場合には、（経口又は腸管外のように）投与され、その後
体内で代謝されて、薬理学的に活性である本発明の薬剤を形成し得る実体が含ま
れる。

【０１９９】 例えば、H. Bundgaard, エルセヴィエ、1985 による「プロドラッグの設計」
（Design of Prodrugs）（この開示内容は参照により本明細書に組込まれる）に
記載されるような「プロ部分」として知られる特定の部分が本剤の適当な官能基
に置かれる場合もあることがさらに理解されよう。そのようなプロドラッグも本
発明の範囲内に含まれる。

【０２００】 本発明にはまた、本発明の阻害剤、及びおそらくは本発明の増殖因子の両性イ
オン形態の（適宜）使用も含まれる。 特許請求の範囲に使用される用語には、直前に言及した形態の１種又はそれ以
上が含まれる。

【０２０１】 溶媒和物 本発明にはまた、本発明の阻害剤、及び、適用可能ならば、本発明の増殖因子の
溶媒和物形態の使用も含まれる。特許請求項に使用される用語には、これらの形
態も含まれる。

【０２０２】 プロドラッグ 明示されたように、本発明にはまた、本発明の阻害剤、及び、適用可能ならば、
本発明の増殖因子のプロドラッグ形態の使用も含まれる。特許請求の範囲に使用
される用語には、これらの形態も含まれる。

【０２０３】 化学合成法 典型的には、本発明の阻害剤は、化学合成技術により製造される。 本発明の化合物の合成時に鋭敏な官能基を保護及び脱保護する必要があり得る
ことは、当業者に明らかであろう。このことは、例えば、「有機合成の保護基」
（Protective Groups in Organic Synthesis), T W Greene と P G M Wuts, ジ
ョン・ウィリー・アンド・サンズ社（1991）と P. J. Kocienski, 「保護基」（
Protecting Groups）Georg Thieme Verlag (1994) に記載されるような従来技術
により達成され得る。

【０２０４】 ある合成の間には、例えば塩基感受性の基を含んでなる光学中心を有する基質
を用いた反応において塩基を使用する場合のように、特定の条件下では、存在す
る立体中心がラセミ化されることがあり得る。このことは、例えばグアニル化工
程の間にあり得る。当技術分野でよく知られているように、反応順序、条件、試
薬、保護／脱保護の方法等の選択によりこのような潜在的な問題を回避すること
を可能とすべきである。

【０２０５】 本発明の化合物及び塩は、従来法により分離され、精製され得る。 ジアステレオマーの分離は、例えば、式（Ｉ）の化合物又はその好適な塩若し
くは誘導体の立体異性混合物の分別結晶化、クロマトグラフィー又はＨ．Ｐ．Ｌ
．Ｃ．による、従来技術によって達成され得る。式（Ｉ）の化合物の各鏡像異性
体はまた、対応する光学的に純粋な中間体からか、又は好適なキラル支持体を使
用する、対応ラセミ化合物のＨ．Ｐ．Ｌ．Ｃ．によるような分割によるか、又は
対応ラセミ化合物の好適な光学活性の酸若しくは塩基との反応により適宜形成さ
れるジアステレオマー塩の分別結晶化によっても製造され得る。

【０２０６】 本発明の阻害剤若しくは増殖因子、又はその変異体、相同体、誘導体、フラグ
メント又は模擬体は、その薬剤の全体若しくは部分を合成するための化学的な方
法を使用して生成し得る。例えば、それがペプチドであれば、ペプチドは固相技
術により合成され、樹脂から切り離され、調製用高速液体クロマトグラフィーに
より精製することができる（例えば、Creighton (1983) 「タンパク質の構造と
分子の原理」（Protein Structures And Molecular Principles）ＷＨフリーマ
ン社、ニューヨーク、ＮＹ）。合成ペプチドの組成はアミノ酸の分析若しくは配
列決定により確かめ得る（例えば、エドマン分解法；Creighton, 同上）。

【０２０７】 ペプチド阻害剤又は増殖因子（又はその変異体、相同体、誘導体、フラグメン
ト又は模擬体）の合成は、様々な固相技術（Roberge JY et al (1995) Science
269: 202-204）を使用して実施することが可能であり、例えば、ＡＢＩ ４３
１Ａペプチド合成機（パーキンエルマー）を使用して、製造業者により提供され
る指示書により、自動合成を達成し得る。さらに、本剤又はその一部を含んでな
るアミノ酸配列は、直接合成の間に変更し得るか、及び／又は化学法を使用して
、他のサブユニット又はその一部からの配列と結合させ、変異体の薬剤若しくは
増殖因子を生成し得る。

【０２０８】 本発明の別の態様では、ペプチド阻害剤又は増殖因子（又はその変異体、相同
体、誘導体、フラグメント又は模擬体）のコーディング配列は、当技術分野でよ
く知られている化学法（Caruthers MH et al (1980) Nuc Acids Res Symp Ser 2
15-23, Horn T et al (1980) Nuc Acids Res Symp Ser 225-232 を参照のこと）
を使用して、全体若しくは部分を合成し得る。

【０２０９】 模擬体 本明細書で使用されるように、「模擬体」という用語は任意の化学品に関連し、
限定しないが、基準薬剤と同じ定性的な活性若しくは効果を有するペプチド、ポ
リペプチド、抗体又は他の有機化学品が含まれる。

【０２１０】 化学誘導体 「誘導体」又は「誘導された」という用語には、本明細書で使用されるように、
薬剤の化学修飾が含まれる。ハロ基、アルキル基、アシル基又はアミノ基による
水素の置換は、そのような化学修飾の例である。

【０２１１】 化学修飾 本発明の１つの態様では、阻害剤は、化学修飾された阻害剤である。 本発明の阻害剤の化学修飾は、薬剤と標的間の水素結合相互作用、電荷相互作
用、疎水性相互作用、ファン・デル・ワールス相互作用又は双極子相互作用を増
強するか又は減弱させる場合がある。 １つの側面では、同定された薬剤が他の化合物の開発についてのモデル（例え
ば、鋳型）として作用し得る。

【０２１２】 組換え法 本発明の増殖因子は組換えＤＮＡ技術により製造される場合がある。

【０２１３】 ウロキナーゼ阻害剤 本発明の組成物の成分は、ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーターの阻
害剤であり得る。典型的には、Ｉ：ｕＰＡは、本明細書で示されるアッセイプロ
トコールのようなｕＰＡアッセイによりＩ：ｕＰＡであるとして同定されること
が可能である。

【０２１４】 このように、１つの側面では、本発明は、ｕＰＡの選択阻害剤と増殖因子の組
み合わせで患者を治療することによって、静脈うっ滞性潰瘍、糖尿病性潰瘍及び
圧迫潰瘍（又は褥瘡）を含む、慢性皮膚潰瘍の治療を亢進する方法に関する。こ
の複合療法は、個別の薬剤での治療より有効である。

【０２１５】 ｕＰＡの阻害剤は、阻害剤の特性とそれらが製剤化される方法に依存して、局
所適用されるか、又は経口投与され得る。 このように、本発明の１つの側面によれば、本発明の組成物は、選択ｕＰＡ阻
害剤のようなＩ：ｕＰＡと増殖因子を含む場合がある。これら２つの成分の同時
投与で、増殖因子又はｕＰＡ阻害剤のいずれかの単独投与によるより強い効力が
達成され得る。ここで、効力は、最良の医療（ケア）の条件下で、最良のケア単
独と比較した場合の、慢性皮膚潰瘍の閉鎖への時間のような、この分野でのＦＤ
Ａの標準法により測定され得る。

【０２１６】 １つの好ましい側面では、選択ｕＰＡ阻害剤の局所製剤は、その物質を物理的
に混合して、創傷のような損傷組織の環境へ両物質を放出する製剤を使用するこ
と、又は１回に１つの物質を適用し、薬剤の適用を分離させる治療プロトコール
を使用することのいずれかにより、ＰＤＧＦのような局所投与される増殖因子と
同時投与され得る。他のやり方では、経口投与されるｕＰＡ阻害剤を増殖因子の
局所適用と一緒に使用して、複合治療が達成され得る。

【０２１７】 我々は、Ｉ：ｕＰＡの増殖因子との同時投与の使用が大変有利であり、また、
意外で予測不能であったと考えている。この点に関して言えば、多くの文献報告
は、増殖因子受容体から下流のシグナル伝達カスケードの一部としてｕＰＡが必
要とされることを示している。そうである可能性はあるが、選択ｕＰＡ阻害剤の
増殖因子への保護効果と増殖因子への細胞応答のほうが優勢であることを我々は
確かめている。

【０２１８】 本発明によれば、Ｉ：ｕＰＡは増殖因子と混合して局所適用され得るか、又は
Ｉ：ｕＰＡは局所適用されるが、増殖因子とは異なる時間においてであるか、又
はＩ：ｕＰＡが経口投与され、増殖因子は局所適用され得る。

【０２１９】 Ｉ：ｕＰＡは天然に存在し得るか、又はそれは合成の実体であり得る。 数多くのＩ：ｕＰＡが知られている。例えば、C. Magill et al. Emerg. Ther
ap. Targets 1999, 3 (1), 109-133, 及び H. Yang et al. Fibrinolysis 1992,
6 (suppl 1), 31-34 が参考になり得る。

【０２２０】 天然に存在するタンパク様阻害剤の例には、プラスミノーゲンアクチベーター
阻害剤タンパク質のＰＡＩ−１及びＰＡＩ−２が含まれる（Antalis, T. M., Cl
ark, M. A., Barnes, T., Lehrbach, P. R., Devine, P. L., Schevzov, G., Go
ss, N. H., Stephens, R. W. & Tostoshev, P. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci.
U. S. A. 85, 985-999 を参照のこと）。また、ＷＯ９９／４９８８７号も参考
になり得る。もう１つの天然に存在するタンパク様阻害剤はα−アンチトリプシ
ンである。

【０２２１】 他の天然に存在する阻害剤には、ε−アミノカプロン酸（ε−ａｃａ）が含ま
れるが、これは弱い阻害剤である。ビタミンＥ（α−トコフェロール）は、未知
の機構を介して作用するウロキナーゼの不可逆的阻害剤である。緑茶から単離さ
れる、エピガロカテキン−３−没食子酸塩（ＥＧＣＧ）のような天然のカテコー
ルもウロキナーゼを阻害する。Tripterygium wilfordii から単離されたノルト
リテルペノイドのデメチルゼイラステラル（demethylzeylasteral）（ＴＺ−９
３）もウロキナーゼ活性を阻害する。タンパク質のアプロチニンは、ｔ−ＰＡで
なく、ウロキナーゼの弱い阻害剤である。

【０２２２】

【化１】

【０２２３】 さらに、ｕＰＡの合成阻害剤が存在する。これらの合成阻害剤は、典型的には
、有機化合物である。典型的には、この有機化合物はグアニジン基（即ち、−Ｎ
＝Ｃ（ＮＨ₂）（ＮＨ₂））と１つ又はそれ以上のヒドロカービル基を含む。ここ
で、「ヒドロカービル」という用語は、少なくともＣ及びＨを含んでなる基を意
味し、所望により、１つ又はそれ以上の他の好適な置換基を含む場合がある。そ
のような置換基の例には、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環式
基、等が含まれ得る。置換基が環式基であることの可能性に加えて、置換基の組
み合わせが環式基を形成する場合がある。ヒドロカービル基が１つ以上のＣを含
むならば、それらの炭素は必ずしも互いに連結している必要はない。例えば、少
なくとも２個の炭素は、好適な元素又は基を介して連結され得る。従って、ヒド
ロカービル基はヘテロ原子を含有する場合がある。好適なヘテロ原子は当業者に
明らかであり、例えば、イオウ、窒素及び酸素が含まれる。ある適用では、好ま
しくは、薬剤が少なくとも１つの環式基を含み、ここでその環式基は多環式基、
好ましくは、イソキノリン基のような縮合した多環式基である。ある適用では、
好ましくは、グアニジン基が前記ヒドロカービル基へ付く。ある適用では、薬剤
が、もう１つのヒドロカービル基へ連結した前記環式基の少なくとも１つを含み
、ここで他のヒドロカービル基はその上にエステル基、酸基又はアルコキシ基を
有する。

【０２２４】 薬剤はハロ基を含有する場合がある。ここで、「ハロ」は、フルオロ、クロロ
、ブロモ又はヨードを意味する。 薬剤は１つ又はそれ以上のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキレン及
びアルケニレン基を含有する場合があり、これらは非分岐か又は分岐した鎖であ
り得る。

【０２２５】 薬剤は、酸付加塩又は塩基塩のような、製剤的に許容される塩、又はその水和
物を含む、その溶媒和物の形態であり得る。好適な塩の概説については、Berge
et al, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 を参照のこと。

【０２２６】 Ｉ：ｕＰＡは可逆的又は不可逆的な作用を有し得る。 一般に、報告された不可逆阻害剤は、ウロキナーゼの触媒三つ組残基の一部を
形成する活性セリン部位（Ｓｅｒ−１９６）と共有結合を形成することによる。
カモスタット（ＦＯＹ−０５）とそのより血漿安定な代謝物（ＦＯＹ−２５１）
は強力なトリプシン阻害剤であり、ウロキナーゼをナノモル濃度で不可逆的に阻
害することが見出された。アルギニルクロロメチルケトン類もウロキナーゼと結
合し、それを不活性化するが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＣＨ₂Ｃｌが最良の阻
害剤である。環式ペプチド（メチル）フェニルスルホニウム（１）は、ウシトリ
プシンとともにウロキナーゼを阻害し、そして、より少ない程度でｔ−ＰＡを阻
害し得る。

【０２２７】

【化２】

【０２２８】 ベンゾチアゾールケトンのＭＯＬ−１７４はトロンビンの強力な阻害剤であり
、また、ウロキナーゼへのアフィニティーを示す。ペプチド性ボロネート（２）
は、ウロキナーゼの競合阻害剤である。フェニルアラニンから誘導される構造（
例えば、３）もウロキナーゼを阻害することが示された。ＣＶＳ−３０８３はウ
ロキナーゼの強力な阻害剤である。ＣＶＳ−３０８３はアルギニルアルデヒドで
あり、Ｓｅｒ−１９５と可逆的な共有結合を形成することによって、遷移状態模
擬体として作用する。血漿カリクレイン選択阻害剤（ＰＫＳＩ−５２７）は、ウ
ロキナーゼを弱く阻害する。

【０２２９】

【化３】

【０２３０】 ε−ａｃａの発見に続き、数多くの芳香族及びヘテロ環式アミジンがウロキナ
ーゼ阻害剤（例えば、４〜９）として報告された。ビス−（５−アミジノ−ベン
ゾイミダゾリル）メタン（ＢＡＢＩＭ；８）は最も強力なものの１つであったが
、他のトリプシン様セリンプロテアーゼに対してほとんど選択的でなかった。

【０２３１】 使用し得るもう１つの阻害剤はナファモスタット（ＦＵＴ−１７５）であり、
これはウロキナーゼを含む様々なセリンプロテアーゼを阻害し得る。しかしなが
ら、ある態様では、阻害剤はナファモスタットではない。ある適用について所望
されるほど選択性が高くない場合があるからである。

【０２３２】

【化４】

【０２３３】 芳香族グアニジンもウロキナーゼ阻害剤として報告された。利尿薬のアミロリ
ド（ａｍｉｌｏｒｉｄｅ^TM）はウロキナーゼの阻害剤である。４−クロロ及び４
−（トリフルオロメチル）フェニルグアニジン（それぞれ、１０及び１１）のよ
うな単純なフェニルグアニジンもウロキナーゼの選択阻害剤である。

【０２３４】

【化５】

【０２３５】 Bridge et al. は、ベンゾチオフェン及びチエノチオフェンの系列をウロキナ
ーゼ阻害剤として報告した［ＥＰ−Ａ−０５６８２８９号を参照のこと］。式Ｉ
の化合物、例えばＢ−４２８（Ｉａ）及びＢ−６２３（Ｉｂ）が言及された。

【０２３６】

【化６】

【０２３７】 特定の例は：４−ヨードベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミジン（Ｉ
ａ）；４−［５−（４−カルボキサミジノフェニル）フル−２−イル］ベンゾ［
ｂ］チオフェン−２−カルボキサミジン；４−［Ｅ／Ｚ−２−（ベンゾ−１，３
−ジオキソラン−５−イル）エテニル］ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキ
サミジン（Ｉｂ）；及び４−［（ベンゾ−１，３−ジオキソラン−５−イル）エ
チニル］ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミジンである。

【０２３８】 Tanaka et al. は、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェンの
系列をウロキナーゼ阻害剤として報告した［ＷＯ−Ａ−９８／１１０８９号を参
照のこと］。式ＩＩの化合物、例えばＩＩａが言及された。

【０２３９】

【化７】

【０２４０】 特定の例は：２−アミジノ−４−ｎ−ブチル−４，５，６，７−テトラヒドロ
ベンゾ［ｂ］チオフェン（ＩＩａ）である。 Greyer et al. は、２−アミジノナフタレンの系列をウロキナーゼ阻害剤とし
て報告した［ＷＯ−Ａ−９９／０５０９６号を参照のこと］。式ＩＩＩの化合物
、例えばＩＩＩａが言及された。

【０２４１】

【化８】

【０２４２】 特定の例は：６−（アミノイミノメチル）−Ｎ−［４−（アミノメチル）フェ
ニル］−４−（２−ピリミジニルアミノ）−２−ナフタレンカルボキサミド（Ｉ
ＩＩａ）；６−（アミノイミノメチル）−Ｎ−［４−（ヒドロキシメチル）フェ
ニル］−４−（２−ピリミジニルアミノ）−２−ナフタレンカルボキサミド；６
−（アミノイミノメチル）−Ｎ−フェニル−４−（２−ピリミジニルアミノ）−
２−ナフタレンカルボキサミド；及び［７−（アミノイミノメチル）−３−［［
［４−（アミノメチル）フェニル］アミノ］カルボニル］−１−ナフタレニル］
カルバミン酸メチルである。

【０２４３】 Illig et al. は、ヘテロアリールアミジン、メチルアミジン及びグアニジン
をプロテアーゼ阻害剤、特にウロキナーゼ阻害剤として報告した［ＷＯ−Ａ−９
９／４００８８号を参照のこと］。一般式ＩＶの化合物、例えばＩＶａが言及さ
れた。

【０２４４】

【化９】

【０２４５】 特定の例は：４−［４−（２，５−ジメトキシフェニル）（１，３−チアゾル
−２−イル）−５−メチルチオチオフェン−２−カルボキサミジン（ＩＶａ）；
２−｛３―［２−（５−アミジノ−２−メチルチオ−３−チエニル）−１，３−
チアゾル−４−イル］フェノキシ｝酢酸；及び５−メチルチオ−４−｛４−［３
−（２−オキソ−２−ピペラジニルエトキシ）フェニル］（１，３−チアゾル−
２−イル）｝チオフェン−２−カルボキサミジンである。

【０２４６】 Schirlin et al. は、例えばウロキナーゼを阻害する、ケトン含有ペプチダー
ゼ阻害剤を報告した［ＵＳ−Ａ−５８４９８６６号を参照のこと］。一般式Ｖの
ケトン含有阻害剤は新規である。特定のウロキナーゼ阻害剤にはＶａが含まれる
。 Ｒ₁ＮＨ−ＣＨＲ₂−Ｃ（Ｏ）−Ｘ Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＣＯＯＨ Ｖ Ｖａ Barber et al. は、イソキノリンをウロキナーゼ阻害剤として報告した［ＷＯ
−Ａ−９９／２０６０８号を参照のこと］。式ＶＩの化合物、例えばＶＩａが開
示された。

【０２４７】

【化１０】

【０２４８】 より詳細には、ＷＯ−Ａ−９９／２０６０８号の化合物は、式（Ｉ）：

【０２４９】

【化１１】

【０２５０】 のイソキノリニルグアニジン誘導体、又はその製剤的に許容される塩であり、式
中： Ｒ¹及びＲ²の１つはＨであり、他方はＮ＝Ｃ（ＮＨ₂）₂又はＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｎ
Ｈ₂であり、 Ｒ³は、Ｈ、ハロゲン、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換され
るＣ_1-6アルキル、又は１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換され
るＣ_1-6アルコキシであり、 Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ⁷は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、ハロゲン又
はＯＨから独立して選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換
されるＣ_1-6アルキル、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換され
るＣ_1-6アルコキシ、ＣＮ、ＣＯ（１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望によ
り置換されるＣ_1-6アルキル）、（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ⁸、（Ｃ_n−アルキ
レン）ＣＮ、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ⁸、（
Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ⁹Ｒ¹⁰、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ⁹ＣＯＲ¹⁰、Ｏ（Ｃ _n −アルキレン）ＣＯＮＲ⁹Ｒ¹⁰、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ⁹ＳＯ₂Ｒ¹¹、（Ｃ_m−
アルキレン）Ｓ（Ｏ）_pＲ¹¹、（Ｃ_m−アルキレン）ＳＯ₂ＮＲ⁹Ｒ¹⁰、ＣＨ＝ＣＨ
ＣＯＲ⁸、ＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ⁹Ｒ¹⁰、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ⁹Ｒ¹⁰、ＣＨ＝ＣＨＳ
Ｏ₂アリール、又は式Ｘ−アリール若しくはＸ−Ｈｅｔの基であるか、 又は、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶及びＲ⁷の２つが隣接炭素原子へ付く場合、それらは一緒に
なって−Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）Ｏ−部分を形成することが可能であり、 Ｒ⁸は、Ｈ、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アル
キル、又はアリール（Ｃ_1-6アルキレン）であり、 Ｒ⁹及びＲ¹⁰は、それぞれ独立して、Ｈ、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所
望により置換されるＣ_1-6アルキル、アリール（Ｃ_1-6アルキレン）、アリール、
ヘテロアリール又はヘテロアリール（Ｃ_1-6アルキレン）であるか、 又は、Ｒ⁹及びＲ¹⁰は、アルキレン部分により一緒に連結し、それらへ付く原子
とともに、Ｏ若しくはＮ原子から選択される追加のへテロ基又はＮＲ¹²基を所望
により取込む４〜７員環を形成する場合があり、 Ｒ¹¹は、アリール、ヘテロアリール、又は１つ又はそれ以上のハロゲンにより所
望により置換されるＣ_1-6アルキルであり、 Ｒ¹²は、Ｈ、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6ア
ルキル、又はＣＯ（１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ _1-6 アルキル）であり、 Ｘは、直接の連結、Ｃ_n−アルキレン、Ｏ、（Ｃ_n−アルキレン）Ｏ、Ｏ（Ｃ_n−
アルキレン）、ＣＨ（ＯＨ）、Ｃ（Ｃ_1-6アルキル）ＯＨ、ＣＯ、Ｓ（Ｏ）_p（Ｃ _m −アルキレン）、（Ｃ_m−アルキレン）Ｓ（Ｏ）_p、ＣＨ＝ＣＨ、又はＣ≡Ｃで
あり、 「アリール」は、フェニル若しくはナフチルであり、ハロゲン、ハロゲン及びＯ
Ｈから独立して選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換され
るＣ_1-6アルキル、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_{1 -6} アルコキシ、ＣＮ、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、
ＣＯ（１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルキル
）、（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ¹³、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ¹³、（Ｃ_m
−アルキレン）ＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＣＯＲ¹⁵、Ｏ（Ｃ_n −アルキレン）ＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）Ｓ（Ｏ）_pＲ¹³、（Ｃ_m−
アルキレン）ＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＳＯ₂Ｒ¹⁶、ＣＨ＝
ＣＨＳＯ₂Ｒ¹³、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂アリール¹、ＣＨ
＝ＣＨＣＯＲ¹³及びＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵から独立して選択される、１つ又
はそれ以上の置換基により所望により置換され、 「ヘテロアリール」は、所望によりベンゾ縮合した５若しくは６員のへテロ環式
基であって、このヘテロ環式環又は（存在する場合は）ベンゾ環の利用可能な原
子により連結し、当該ヘテロ環式基は、ジオキソリル、フリル、チエニル、ピロ
リル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、イミダゾ
リル、ピラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラ
ゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル及びピラニルから
選択され、 前記「ヘテロアリール」基は、ハロゲン、ハロゲン又はＯＨから独立して選択さ
れる１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換されるＣ_1-6アルキル、１
つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルコキシ、ＣＮ
、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、ＣＯ（１つ又はそれ
以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルキル）、（Ｃ_m−アルキレ
ン）ＣＯ₂Ｒ¹³、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ¹³、（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮ
Ｒ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＣＯＲ¹⁵、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯＮ
Ｒ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＳＯ₂Ｒ¹⁶、（Ｃ_m−アルキレン）Ｓ（Ｏ
）_pＲ¹³、（Ｃ_m−アルキレン）ＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ¹³、ＣＨ＝
ＣＨＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂Ｒ¹³、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、又は
ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂アリール¹から独立して選択される、１つ又はそれ以上の置換基
により所望により置換され、 「ｈｅｔ」は、所望によりベンゾ縮合した５若しくは６員のへテロ環式基であっ
て、このヘテロ環式環又は（存在する場合は）ベンゾ環の利用可能な原子により
「Ｘ」部分へ連結し、当該ヘテロ環式基は、ジオキソリル、フリル、チエニル、
ピロリル、オキサゾリル、オキサジニル、チアジニル、チアゾリル、イソキサゾ
リル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサジアゾリル、チアジ
アゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニ
ル、ピラジニル及びピラニルから選択されるか、 又はその完全に不飽和の、部分的又は完全に飽和した類似体であり、 そのような「ｈｅｔ」基は、ハロゲン、ハロゲン及びＯＨから独立して選択され
る１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換されるＣ_1-6アルキル、１つ
又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルコキシ、ＣＮ、
Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、ＣＯ（１つ又はそれ以
上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルキル）、（Ｃ_m−アルキレン
）ＣＯ₂Ｒ¹³、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ¹³、（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ ¹⁴ Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＣＯＲ¹⁵、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯＮＲ ¹⁴ Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＳＯ₂Ｒ¹⁶、（Ｃ_m−アルキレン）Ｓ（Ｏ）_p Ｒ¹³、（Ｃ_m−アルキレン）ＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ¹³、ＣＨ＝ＣＨ
ＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂Ｒ¹³、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、及びＣＨ
＝ＣＨＳＯ₂アリール¹から独立して選択される、１つ又はそれ以上の置換基によ
り所望により置換され、 「アリール¹」は、フェニル若しくはナフチルであり、ハロゲン、ハロゲン又は
ＯＨから独立して選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換さ
れるＣ_1-6アルキル、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換される
Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＮ、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）Ｃ
Ｎ、ＣＯ（１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アル
キル）、（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ¹³、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂Ｒ¹³、（
Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＣＯＲ¹⁵、Ｏ（
Ｃ_n−アルキレン）ＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）Ｓ（Ｏ）_pＲ¹³、（Ｃ_m −アルキレン）ＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、（Ｃ_m−アルキレン）ＮＲ¹⁴ＳＯ₂Ｒ¹⁶、ＣＨ
＝ＣＨＳＯ₂Ｒ¹³、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ¹³及びＣＨ＝
ＣＨＣＯＮＲ¹⁴Ｒ¹⁵から独立して選択される、１つ又はそれ以上の置換基により
所望により置換され、 Ｒ¹³は、Ｈ、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6ア
ルキル、又はアリール²（Ｃ_1-6アルキレン）であり、 Ｒ¹⁴及びＲ¹⁵は、それぞれ独立して、Ｈ、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所
望により置換されるＣ_1-6アルキル、アリール²（Ｃ_1-6アルキレン）、アリール² 、ヘテロアリール¹又はヘテロアリール¹（Ｃ_1-6アルキレン）であるか、 又は、Ｒ¹⁴及びＲ¹⁵は、アルキレン部分により一緒に連結し、それらへ付く原子
とともに、Ｏ若しくはＮ原子から選択される追加のへテロ基又はＮＲ¹²基を所望
により取込む４〜７員環を形成する場合があり、 Ｒ¹⁶は、アリール²、ヘテロアリール¹、又は１つ又はそれ以上のハロゲンにより
所望により置換されるＣ_1-6アルキルであり、 「アリール²」は、フェニル若しくはナフチルであり、ハロゲン、ハロゲン又は
ＯＨから独立して選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換さ
れるＣ_1-6アルキル、１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換される
Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＮ、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）Ｃ
Ｎ、又はＣＯ（１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6
アルキル）から独立して選択される、１つ又はそれ以上の置換基により所望によ
り置換され、 「ヘテロアリール¹」は、所望によりベンゾ縮合した５若しくは６員のへテロ環
式基であって、このヘテロ環式環又は（存在する場合は）ベンゾ環の利用可能な
原子により連結し、当該ヘテロ環式基は、ジオキソリル、フリル、チエニル、ピ
ロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、イミダ
ゾリル、ピラゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テト
ラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル及びピラニルか
ら選択され、 前記「ヘテロアリール¹」基は、ハロゲン、ハロゲン又はＯＨから独立して選択
される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換されるＣ_1-6アルキル、
１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルコキシ、Ｃ
Ｎ、Ｏ（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、又はＣＯ（１つ又
はそれ以上のハロゲンにより所望により置換されるＣ_1-6アルキル）から独立し
て選択される、１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換され、 ここで、上記の定義における「Ｃ―アルキレン」連結基は直線であるか又は分岐
して、１つ又はそれ以上の（１つ又はそれ以上のハロゲンにより所望により置換
されるＣ_1-6アルキル）基により所望により置換され、 ｍは０〜３の整数であり、 ｎは１〜３の整数であり、及び ｐは０〜２の整数である。

【０２５１】 最も好ましい化合物は： （４−クロロ−７−（２−メトキシフェニル）イソキノリン−１−イル）グアニ
ジン（ＶＩａ）； （４−クロロ−７−（３−メトキシフェニル）イソキノリン−１−イル）グアニ
ジン； （４−クロロ−７−（４−メトキシフェニル）イソキノリン−１−イル）グアニ
ジン； （４−ブロモ−７−（３−メトキシフェニル）イソキノリン−１−イル）グアニ
ジン； （４−ブロモ−７−（４−メトキシフェニル）イソキノリン−１−イル）グアニ
ジン； （４−クロロ−７−（α−ヒドロキシベンジル）イソキノリン−１−イル）グア
ニジン； （４−クロロ−７−（３−カルボキシフェニル）イソキノリン−１−イル）グア
ニジン； １−グアニジド−７−スルファモイルイソキノリン； １−グアニジド−７−フェニルスルファモイルイソキノリン； ４−クロロ−１−グアニジド−７−スルファモイルイソキノリン； ４−クロロ−７−シクロペンチルスルファモイル−１−グアニジドイソキノリン
； ４−クロロ−１−グアニジド−７−（１−ピロリジノスルホニル）イソキノリン
； ４−クロロ−１−グアニジド−７−モルホリノスルホニルイソキノリン； ４−クロロ−１−グアニジド−７−［（Ｎ−メチルピペラジノ）スルホニル］イ
ソキノリン； ４−クロロ−１−グアニジド−７−（フェニルスルファニル）イソキノリン；及
び ４−クロロ−１−グアニジド−７−（フェニルスルホニル）イソキノリンから選
択される。

【０２５２】 本発明における使用についてＷＯ−Ａ−９９／２０６０８号に開示されるもう
１つの好ましい化合物は、（４−クロロ−７−（２，６−ジメトキシフェニル）
イソキノリン−１−イル）グアニジン：

【０２５３】

【化１２】

【０２５４】 であり、ＷＯ−Ａ−９９／２０６０８号に報告される方法により製造され得る（
実施例３９を参照のこと）。 本発明における使用についてＷＯ−Ａ−９９／２０６０８号に開示されるもう
１つの好ましい化合物は、［７−（３−カルボキシフェニル）−４−クロロイソ
キノリン−１−イル］グアニジン：

【０２５５】

【化１３】

【０２５６】 であり、ＷＯ−Ａ−９９／２０６０８号に報告される方法により製造され得る（
実施例５５を参照のこと）。 本発明における使用に適したＩ：ｕＰＡ化合物は、１９９９年７月１５日に出
願された（ＷＯ−Ａ−００／０５２１４号として公開）ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ
／ＩＢ９９／０１２８９号（参照により本明細書に組込まれる）に開示される。
優先特許請求日：１９９８年７月２４日、及び１９９９年４月１６日。この特許
出願のいくつかの関連した教示を本明細書に提供する（「ＰＣＳ９４９４化合物
」と題する節を参照のこと）。

【０２５７】 ＷＯ−Ａ−００／０５２１４号からの好ましい化合物は、そこにおいて実施例
３２として提示される（以下、「化合物５２１４」と呼ぶ）。化合物５２１４の
式は「実施例」の節で提示する。ＷＯ−Ａ−００／０５２１４号からのもう１つ
の好ましい化合物は、その実施例３４ｂである。

【０２５８】 本発明における使用に適した他のＩ：ｕＰＡ化合物は、１９９９年４月１３日
に出願された英国特許出願第９９０８４１０．５号（参照により本明細書に組込
まれる）、米国特許出願第０９／５４６１０号（参照により本明細書に組込まれ
る）、ヨーロッパ特許出願第００３０２７７８．６号（参照により本明細書に組
込まれる）、及び日本特許出願第２０００−１０４７２５号（参照により本明細
書に組込まれる）に開示される。これら特許出願のいくつかの関連した教示を本
明細書に提供する（「ＰＣＳ９４８２化合物」と題する節を参照のこと）。

【０２５９】 ウロキナーゼ阻害剤アッセイプロトコール 以下に、本発明の組成物における使用に適する可能性があるＩ：ｕＰＡとして作
用することが可能な１種又はそれ以上の薬剤を同定するためのプロトコールを提
示する。

【０２６０】 材料 ｕＰＡ（ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター）。尿からの高分子量
ヒトウロキナーゼ、３０００ＩＵ／バイアル（カルビオケム、６７２０８１）へ
Ｈ₂Ｏを加えて元に戻し、３００００ＩＵ／ｍｌストックとし、凍結（−１８℃
）保存した。Ｓ−２４４４（ウロキナーゼの発色基質）２５ｍｇ／バイアル（ク
アドラテク、８２０３５７）をＨ₂Ｏに溶かして元に戻し、３ｍＭストックとし
、４℃で保存した。ヒトｔＰＡ刺激剤（クロモジェニクス、８２２１３０−６３
／９）を緩衝液で元に戻して１ｍｇ／ｍｌとし、新鮮なまま使用した。ヒトｔＰ
Ａ（一本鎖）１０μｇ／バイアル（クロモジェニクス、８２１１５７−０３９／
０）を緩衝液で元に戻して４μｇ／ｍｌとし、新鮮なまま使用した。Ｓ−２２８
８（セリンプロテアーゼの発色基質）２５ｍｇ／バイアル（クロモジェニクス、
８２０８５２−３９）をＨ₂Ｏに溶かして元に戻し、１０ｍＭストックとし、４
℃で保存した。ヒトプラスミン、２ｍｇ／バイアル（クアドラテク、８１０６６
５）を緩衝液で元に戻して１ｍｇ／ｍｌとし、凍結（−１８℃）保存した。クロ
モザイム−ＰＬ（ベーリンガーマンハイム、３７８ ４６１）、１ｍＭ／緩衝液
のストックは用時調製した。

【０２６１】 方法 発色アッセイを実施して、ｕＰＡ、ｔＰＡ及びプラスミン活性と、セリンプロテ
アーゼ阻害剤によるこの活性の阻害を測定する。

【０２６２】 化合物のＩＣ₅₀及びＫ_i値は、ｕＰＡアッセイ緩衝液（７５ｍＭ Ｔｒｉｓ，
ｐＨ８．１，５０ｍＭ ＮａＣｌ）で希釈された、３３ＩＵ／ｍｌ ｕＰＡ の
０．１８ｍＭ Ｓ２４４４（基質）と様々な濃度の化合物とのインキュベーショ
ンによりすべて算出する。化合物の酵素とのプレインキュベーションを３７℃で
１５分実施した後、基質を加え、さらに同じ温度で３０分インキュベートする。
最終アッセイ量は２００μｌである。ＳＰＥＣＴＲＡＭａｘマイクロプレートリ
ーダー（モレキュラー・デバイス社）を使用して、プレインキュベーション後（
バックグラウンド、時間０での測定）と基質との３０分のインキュベーションの
後で、４０５ｎｍで吸光度を読み取る。最終吸光度の値からバックグラウンド値
を引く。阻害率を算出し、化合物濃度に対してプロットし、ＩＣ₅₀値を得る。酵
素Ｋ_iは、式：Ｋ_i＝ＩＣ₅₀／（１＋（［Ｓ］／Ｋ_m））を使用して、既知の基質
のＫ_mから算出する。

【０２６３】 ｔＰＡ阻害の分析法もｕＰＡ阻害のそれに似ている。このアッセイは、ｕＰＡ
アッセイ緩衝液に調製した、最終濃度０．４μｇ／ｍｌのｔＰＡを０．１ｍｇ／
ｍｌのｔＰＡ刺激剤、０．４ｍＭ Ｓ２２８８（基質）及び、様々な濃度の阻害
剤とともに利用する。基質とのインキュベーションに先立って、化合物、酵素、
及び、ｕＰＡの酵素刺激剤を用いてプレインキュベーションを実行する。インキ
ュベーション時間は６０分で、３７℃で実施する。データ分析はｕＰＡについて
上記に記載したものと同一であり、ｔＰＡの既知Ｋ_mの２５０μＭを使用する。

【０２６４】 プラスミン阻害は、０．７μｇ／ｍｌのヒトプラスミンを０．２ｍＭのクロモ
ザイム−ＰＬ（基質）と様々な濃度の阻害剤をｕＰＡアッセイ緩衝液においてイ
ンキュベートすることによってアッセイする。ｕＰＡと同じようにプレインキュ
ベーションを実行し、インキュベーションは３７℃で３０分実施する。プラスミ
ンの既知Ｋ_mの２００μＭを使用して、データ処理と阻害比率をｕＰＡと同じよ
うに算出する。

【０２６５】 分析 以下の表は、本発明によるＩ：ｕＰＡとして機能し得ない（即ち、「不合格」）
薬剤を構成するものと、本発明によるＩ：ｕＰＡとして機能し得る（即ち、「合
格」）薬剤を構成するものについての数値を表示する。さらに、以下の表は、本
発明によるＩ：ｕＰＡとして非常によく機能し得る（即ち、「非常に良好」）薬
剤を構成するものについての数値を表示する。

【０２６６】

【表３】

【０２６７】 ＭＭＰ阻害剤 本発明の組成物の成分は、損傷組織の創傷治癒に有害な効果を及ぼすＭＭＰの阻
害剤であり得る。典型的には、Ｉ：ＭＭＰは、本明細書で示されるアッセイプロ
トコールのようなＭＭＰアッセイによりＩ：ＭＭＰであるとして同定されること
が可能である。

【０２６８】 このように、１つの側面では、本発明は、特定のＭＭＰの選択阻害剤と増殖因
子の組み合わせで患者を治療することによって、静脈うっ滞性潰瘍、糖尿病性潰
瘍及び圧迫潰瘍（又は褥瘡）を含む、慢性皮膚潰瘍の治療を亢進する方法に関す
る。この複合療法は、個別の薬剤での治療より有効である。

【０２６９】 有害なＭＭＰの阻害剤は、阻害剤の特性とそれらが製剤化される方法に依存し
て、局所適用されるか、又は経口投与され得る。 このように、本発明の１つの側面によれば、本発明の組成物は、選択ＭＭＰ阻
害剤のようなＩ：ＭＭＰと増殖因子を含む場合があり、ここで前記ＭＭＰは損傷
組織における創傷治癒に有害な効果を及ぼす。これら２つの成分の同時投与で、
増殖因子又はＭＭＰ阻害剤のいずれかの単独投与によるより強い効力が達成され
得る。ここで、効力は、最良の医療（ケア）の条件下で、最良のケア単独と比較
した場合の、慢性皮膚潰瘍の閉鎖への時間といった、この分野でのＦＤＡの標準
法により測定され得る。

【０２７０】 １つの好ましい側面では、選択ＭＭＰ阻害剤の局所製剤は、その物質を物理的
に混合して、創傷のような損傷組織の環境へ両物質を放出する製剤を使用するこ
と、又は１回に１つの物質を適用し、薬剤の適用を分離させる治療プロトコール
を使用することのいずれかにより、ＰＤＧＦのような局所投与される増殖因子と
同時投与され得る。他のやり方では、経口投与されるＭＭＰ阻害剤を増殖因子の
局所適用と一緒に使用して、複合治療が達成され得る。

【０２７１】 我々は、あるＩ：ＭＭＰの増殖因子との同時投与の使用が大変有利であり、ま
た、意外で予測不能であったと考えている。この点に関して言えば、増殖因子受
容体から下流の細胞応答の一部としてＭＭＰが必要とされることを示す、多くの
文献報告がある。そうである可能性はあるが、選択ＭＭＰ阻害剤の増殖因子への
保護効果のほうが優勢であることを我々は確かめていて、このことにより本発明
の科学的な基礎が提供される。

【０２７２】 本発明によれば、Ｉ：ＭＭＰは増殖因子と混合して局所適用され得るか、又は
Ｉ：ＭＭＰは局所適用されるが、増殖因子とは異なる時間においてであるか、又
はＩ：ＭＭＰが経口投与され、増殖因子は局所適用され得る。

【０２７３】 数多くのＩ：ＭＭＰが知られている。 例を挙げると、天然に存在するタンパク様の阻害剤で存在するものには、メタ
ロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）が含まれる。Bode, W., Fernandez-
Catalan, C., Grams, F., Gomis-Ruth, F. X., Nagase, H., Tschesche, H., Ma
skos, K. (1999) Ann. N. Y. Acad. Sci. 878, 73-91 及び Vaalamo, M., Leivo
, T., Saarialho-Kere, U. (1999) Human Pathology 30 (7), 795-802 を参照の
こと。これらにはＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３及びＴＩＭＰ−４
が含まれる。

【０２７４】 さらに、ＭＭＰの合成阻害剤が存在する。これらの合成阻害剤は、典型的には
、有機化合物である。典型的には、この有機化合物は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）−基に
より連結された２つのヒドロカービル基を含む。ここで、「ヒドロカービル」と
いう用語は、少なくともＣ及びＨを含んでなる基を意味し、所望により、１つ又
はそれ以上の他の好適な置換基を含む場合がある。そのような置換基の例には、
ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環式基、等が含まれ得る。置換
基が環式基であることの可能性に加えて、置換基の組み合わせが環式基を形成す
る場合がある。ヒドロカービル基が１つ以上のＣを含むならば、それらの炭素は
必ずしも互いに連結している必要はない。例えば、少なくとも２個の炭素は、好
適な元素又は基を介して連結され得る。従って、ヒドロカービル基はヘテロ原子
を含有する場合がある。好適なヘテロ原子は当業者に明らかであり、例えば、イ
オウ、窒素及び酸素が含まれる。ある適用では、好ましくは、薬剤が少なくとも
１つの環式基を含み、ここでその環式基は多環式基、好ましくは、縮合した多環
式基である。

【０２７５】 薬剤はハロ基を含有する場合がある。ここで、「ハロ」は、フルオロ、クロロ
、ブロモ又はヨードを意味する。 薬剤は１つ又はそれ以上のアルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキレン及
びアルケニレン基を含有する場合があり、これらは分岐しないか又は分岐した鎖
であり得る。

【０２７６】 薬剤は、酸付加塩又は塩基塩のような、製剤的に許容される塩、又はその水和
物を含む、その溶媒和物の形態であり得る。好適な塩の概説については、Berge
et al, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 を参照のこと。

【０２７７】 好ましくは、Ｉ：ＭＭＰはＭＭＰ−３及び／又はＭＭＰ−１３を阻害する。よ
り好ましくは、Ｉ：ＭＭＰはＭＭＰ―１及び／又はＭＭＰ−２及び／又はＭＭＰ
−９及び／又はＭＭＰ−１４に対して選択的である。

【０２７８】 ある既知のＭＭＰ阻害剤は以下の一般式：

【０２７９】

【化１４】

【０２８０】 に一致し、ここで「Ａ」は「α」基として知られ、ＸＣＯは、カルボン酸若しく
はヒドロキサム酸部分のような亜鉛結合基である。 さらに、又は他のやり方では、既知のＭＭＰ合成阻害剤の大多数が概して以下
に示すスキームの一般構造の１つに一致し、ＭＭＰ活性部位の触媒亜鉛原子と配
位結合する亜鉛結合基（ＺＢＧ）を含有する。ＺＢＧは、典型的には、カルボン
酸、ヒドロキサム酸、チオール、ホスフィネート及びホスホネートであり得る。
これらの群の例については最近の概説が参考になり得る（Whittaker, M.; Floyd
, C. D.; Brown, P.; Gearing, A. J. H. 「マトリックスメタロプロテイナーゼ
阻害剤の設計及び治療応用」Chem. Rev. 1999, 99, 2735-2776; 及び Michaelid
es, M. R.; Curtin, M. L. 「マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤研究に
おける最近の進歩」Current Pharmaceutical Design, 1999, 5, 787-819 を参照
のこと）。

【０２８１】

【化１５】

【０２８２】 そのような好適なＩ：ＭＭＰの例は、ＷＯ−Ａ−９０／０５７１９、ＷＯ−Ａ
−９９／３５１２４、ＷＯ−Ａ−９９／２９６６７、ＷＯ−Ａ−９６／２７５８
３、ＷＯ−Ａ−９９／０７６７５、及びＷＯ−Ａ−９８／３３７６８号に言及さ
れる。本発明における使用に好ましい阻害剤は、ＷＯ−Ａ−９０／０５７１９、
ＷＯ−Ａ−９９／３５１２４、ＷＯ−Ａ−９９／２９６６７号、及び２０００年
５月１８日に出願されたＰＣＴ／ＩＢ００／００６６７号に記載される。

【０２８３】 ＷＯ−Ａ−９０／０５７１９号からの好ましい化合物は化合物５７１９であり
、その構造式は「実施例」の節で提示する。 ＷＯ−Ａ−９９／２９６６７号からの好ましい化合物は、その実施例６６とし
て提示されるものである（「化合物９４７０」）。化合物９４７０の構造式は「
実施例」の節で提示する。

【０２８４】 ＷＯ−Ａ−９９／３５１２４号からの好ましい化合物は、その実施例１５とし
て提示されるものである（「化合物９４５４」）。その構造式は「実施例」の節
で提示する。

【０２８５】 もう１つの好ましい化合物は、ＷＯ−Ａ−９９／３５１２４号の実施例１４で
ある。 他の好ましい化合物は、ＰＣＴ／ＩＢ００／００６６７号、特に実施例１、実
施例２及び実施例３に開示される。ＰＣＴ／ＩＢ００／００６６７号からの非常
に好ましい化合物は、実施例１である。

【０２８６】 ＷＯ−Ａ−９９／３５１２４号の阻害化合物は、以下の一般式：

【０２８７】

【化１６】

【０２８８】 により提示され得るか、又はその製剤的に許容される塩であり、式中： Ｒ¹は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、又はＣ_2-4アルケニルであ
り、 Ｒ²は、フルオロ、インドリル、イミダゾリル、ＳＯ₂（Ｃ_1-4アルキル）、Ｃ_5-7 シクロアルキル、 又は所望により保護化されたＯＨ、ＳＨ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯ₂Ｈ、ＮＨ₂又はＮＨ
Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ₂基により所望により置換されるＣ_1-6アルキル、 Ｃ_1-6アルキルにより所望により置換されるＣ_5-7シクロアルキルであるか、 又は所望により保護化されたＯＨにより所望により置換されるベンジル、Ｃ_1-6
アルコキシ、ベンジルオキシ又はベンジルチオであり、 ここで前記ＯＨ、ＳＨ、ＣＯＮＨ₂、ＮＨ₂及びＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂基につい
ての所望の保護基は、Ｃ_1-6アルキル、ベンジル、Ｃ_1-6アルカノイルから選択さ
れ、ここで前記ＣＯ₂Ｈの所望の保護基は、Ｃ_1-6アルキル又はベンジルから選択
され、 Ｒ³、Ｒ⁵及びＲ⁶は、それぞれ独立して、Ｈ及びＦから選択され、 Ｒ⁴は、ＣＨ₃、Ｃｌ又はＦであり、 Ｘは、ＨＯ又はＨＯＮＨであり、 Ｙは、直接の連結であるか又はＯであり、 Ｚは、式（ａ）：

【０２８９】

【化１７】

【０２９０】 ｛式中：Ｒ¹⁰は、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシメチル、ヒドロキシ（Ｃ_2-4
アルキル）、カルボキシ（Ｃ_1-4アルキル）又は（アミノ若しくはジメチルアミ
ノ）Ｃ_2-4アルキルであり、 Ｒ¹¹は、フェニル、ナフチル又はピリジルであって、ハロ及びメチルから独立し
て選択される３個までの置換基により所望により置換される｝の基、又は（ｂ）
：

【０２９１】

【化１８】

【０２９２】 ｛式中：Ｒ¹⁴は、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ₃又はハロである｝の基のいずれかであり、 Ａｒは、式（ｃ）、（ｄ）又は（ｅ）：

【０２９３】

【化１９】

【０２９４】 ｛式中：Ａは、Ｎ又はＣＲ¹²であり、 Ｂは、Ｎ又はＣＲ¹³であり、 但し、ＡとＢはともにＮではなく、 Ｒ⁷及びＲ⁹は、それぞれ独立して、Ｈ又はＦであり、 Ｒ⁸、Ｒ¹²及びＲ¹³は、それぞれ独立して、Ｈ、ＣＮ、Ｃ_1-6アルキル、ヒドロキ
シ（Ｃ_1-6アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ_1-6）アルコキシ、Ｃ_1-6アルコキシ（Ｃ_{1 -6} ）アルコキシ、（アミノ若しくはジメチルアミノ）Ｃ_1-6アルキル、ＣＯＮＨ₂ 、ＯＨ、ハロ、Ｃ_1-6アルコキシ、（Ｃ_1-6アルコキシ）メチル、ピペラジニルカ
ルボニル、ピペリジニル、Ｃ（ＮＨ₂）＝ＮＯＨ又はＣ（＝ＮＨ）ＮＨＯＨであ
り、但し、Ｒ⁸、Ｒ¹²及びＲ¹³の少なくとも２つはＨである｝の基である。

【０２９５】 明示したように、ＷＯ−Ａ−９９／３５１２４号からの好ましい化合物は、そ
の実施例１５（以下、「化合物９４５４」と呼ぶ）と実施例１４である。化合物
９４５４の式は「実施例」の節で提示する。

【０２９６】 本発明における使用に適したＩ：ＭＭＰ化合物はまた、１９９９年６月３日に
出願された英国特許出願第９９１２９６１号（参照により本明細書に組込まれる
）、１９９９年１２月８日に出願された米国特許出願第６０／１６９３７８号（
参照により本明細書に組込まれる）、及び２０００年５月１８日に出願されたＰ
ＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ００／００６６７号（参照により本明細書に組込ま
れる）にも開示される。これら特許出願のいくつかの関連した教示を本明細書に
提供する（「ＰＣＳ１０３２２化合物」と題する節を参照のこと）。

【０２９７】 本発明における使用に好ましい阻害剤の例を以下に示す。 ＭＭＰの阻害剤は、阻害剤の特性とそれらが製剤化される方法に依存して、局
所適用されるか、又は経口投与され得る。

【０２９８】

【表４】

【０２９９】 （Ｅｘ＝実施例） ＭＭＰ阻害剤アッセイプロトコール 以下に、本発明の組成物における使用に適する可能性があるＩ：ＭＭＰとして作
用することが可能な１種又はそれ以上の薬剤を同定するためのプロトコールを提
示する。

【０３００】 材料 酵素 以下の酵素をいずれも当技術分野の標準技術により調製した： ヒトＭＭＰ−１、触媒ドメイン、初回ストック濃度：１μＭ。 ヒトＭＭＰ−２、触媒ドメイン、初回ストック濃度：６．９４μＭ。 ヒトＭＭＰ−３、触媒ドメイン、初回ストック濃度：３６μＭ。 ヒトＭＭＰ−９、触媒ドメイン、初回ストック濃度：４．５６５μＭ。 ヒトＭＭＰ−１４、触媒ドメイン、初回ストック濃度：１０μＭ。

【０３０１】 基質 ＭＭＰ−１の基質（Ｂａｃｈｅｍ；カタログ番号 Ｍ−２０５５）をジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ）で元に戻し、１ｍＭストックとし、凍結（−１８℃）保
存した。ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９の基質（ネオシステムラボラトリ
ーズ；カタログ番号 ＳＰ９７０８５３）をＤＭＳＯで元に戻し、１ｍＭストッ
クとし、凍結（−１８℃）保存した。ＭＭＰ−１４の基質（Ｂａｃｈｅｍ；カタ
ログ番号 Ｍ−１８９５）をＤＭＳＯで元に戻し、１ｍＭストックとし、凍結（
−１８℃）保存した。

【０３０２】 アッセイ緩衝液 ＭＭＰ−１について使用される緩衝液は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，２００ｍＭ Ｎ
ａＣｌ，５ｍＭ ＣａＣｌ₂，２０μＭ ＺｎＣｌ₂，０．０５％（ｗ／ｖ）Ｂｒ
ｉｊ ３５，ｐＨ７．５である。ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−９につい
て使用される緩衝液は、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ，１００ｍＭ ＮａＣｌ，１０ｍ
Ｍ ＣａＣｌ₂，０．０５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５，ｐＨ７．５である。Ｍ
ＭＰ−１４について使用される緩衝液は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，１００ｍＭ Ｎ
ａＣｌ，１０ｍＭ ＣａＣｌ₂，０．２５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５，ｐＨ７
．５である。

【０３０３】 他の材料 ＡＰＭＡ（シグマ；カタログ番号 Ａ−９５６３）をＤＭＳＯで元に戻し、２０
ｍＭストックとし、４℃で保存した。トリプシン（シグマ；Ｔ−１４２６）をア
ッセイ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．５，１００ｍＭ ＮａＣｌ，１０
ｍＭ ＣａＣｌ₂，０．２５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５）で元に戻し、０．１
μｇ／ｍｌストックとした。トリプシン−キモトリプシン阻害剤、１００ｍｇ／
バイアル（シグマ；Ｔ−９７７７）をアッセイ緩衝液で元に戻し、０．５μｇ／
ｍｌストックとした。

【０３０４】 方法 酵素の活性化 酵素はすべて酢酸アミノフェニル水銀（ＡＰＭＡ）又はトリプシンを用いて３７
℃でプレ活性化した後に、アッセイに使用される最終濃度へ調製する。ＭＭＰ−
１（３０ｎＭ）は０．９３ｍＭ ＡＰＭＡで２０分間活性化し、ＭＭＰ−２（３
０ｎＭ）は１．３２ｍＭ ＡＰＭＡで１時間活性化し、ＭＭＰ−３（１０１０ｎ
Ｍ）は１．８１ｍＭ ＡＰＭＡで３時間活性化し、ＭＭＰ−９（１００ｎＭ）は
２ｍＭ ＡＰＭＡで２時間活性化し、ＭＭＰ−１４（９００ｎＭ）はトリプシン
０．９ｎｇ／ｍｌで２５分間活性化し、その後でトリプシン阻害剤 ４．５ｎ
ｇ／ｍｌを加える。

【０３０５】 ＭＭＰアッセイプロトコール すべてのアッセイを黒い９６穴プレートにおいて、各ウェルあたり最終容量１０
０μｌで実施する。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かして１ｍ
Ｍとする。次いで、溶液を緩衝液で系列希釈し、示される最終濃度とする。酵素
及び阻害剤の、最初のプレインキュベーション（３７℃、１５分）の後で基質を
加える。ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１４では、ＢＩＯＬ
ＩＳＥソフトウェアの付いたＦｌｕｏｒｏｓｔａｒ蛍光計（ＢＭＧ）を使用して
、１時間、２分ごとに３２８ｎｍ λ_exと３９３ｎｍ λ_emで蛍光を読み取る。
ＭＭＰ−１アッセイでは使用するフィルターは３５５ｎｍ λ_exと４４０ｎｍ
λ_emであり、１時間、２分ごとに蛍光を読み取る。

【０３０６】 分析 以下の表は、本発明によるＩ：ＭＭＰ３として機能し得ない（即ち、「不合格」
）薬剤を構成するものと、本発明によるＩ：ＭＭＰとして機能し得る（即ち、「
合格」）薬剤を構成するものについての数値を表示する。さらに、以下の表は、
本発明によるＩ：ＭＭＰ３として非常によく機能し得る（即ち、「非常に良好」
）薬剤を構成するものについての数値を表示する。

【０３０７】

【表５】

【０３０８】 上記のアッセイプロトコールは、他のＭＭＰ標的についても適用され得る。

【０３０９】 他の活性成分 本発明の組成物はまた、増殖因子と阻害剤に加え、他の治療物質を含む場合があ
る。

【０３１０】 抗体 明示したように、本発明の組成物における使用の阻害剤は、１種又はそれ以上の
抗体であり得る。

【０３１１】 「抗体」には、本明細書で使用されるように、限定しないが、ポリクローナル
、モノクローナル、キメラ、単鎖、Ｆａｂ、及びＦａｂ発現ライブラリーにより
産生されるフラグメントが含まれる。そのようなフラグメントには、標的物質へ
の結合活性を保持する、完全抗体のフラグメント、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）及びＦ（
ａｂ’）２、並びに単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、融合タンパク質、及び抗体の抗原結
合部位を含む他の合成タンパク質が含まれる。さらに、抗体とそのフラグメント
は、例えば、ＵＳ−Ａ−２３９４００号に記載されるような、ヒト化抗体であり
得る。中和抗体、即ち、ポリペプチド物質の生物学的活性を阻害する抗体は、診
断薬及び治療薬に特に好ましい。

【０３１２】 抗体は、本発明の物質を用いた免疫化か又はファージ・ディスプレイ・ライブ
ラリーを使用することによるような、標準技術により産生され得る。 ポリクローナル抗体が所望される場合、選択される哺乳動物（例、マウス、ウ
サギ、ヤギ、ウマ、など）を、本発明の同定される薬剤及び／又は物質から得ら
れるエピトープを担う免疫原性ポリペプチドで免疫化する。宿主の種に応じて、
免疫学的な応答を増加させるために、様々なアジュバントが使用され得る。その
ようなアジュバントには、限定しないが、フロイントアジュバント、水酸化アル
ミニウムのような鉱質ゲル、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリビニ
ルピロリドンアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、アオガイヘモシアニン
及びジニトロフェノールのような界面活性物質が含まれる。ＢＣＧ（カルメット
−ゲラン菌）とコリネバクテリウム・パルブムは潜在的に有用なヒトのアジュバ
ントであり、精製されたポリペプチド物質が免疫低下した個体へ投与される場合
に、全身の防御を刺激する目的で利用され得る。

【０３１３】 既知の方法により、免疫化した動物の血清を採取し、処理する。本発明の同定
される薬剤及び／又は物質から得られるエピトープに対するポリクローナル抗体
を含有する血清が他の抗原への抗体を含有するならば、このポリクローナル抗体
は免疫アフィニティークロマトグラフィーにより精製し得る。ポリクローナル抗
血清を産生させ、処理するための技術は当技術分野で知られている。そのような
抗体が創製されるように、本発明はまた、動物若しくはヒトにおける免疫原とし
て使用するための、本発明のポリペプチド、又は別のポリペプチドへハプテン化
したそのフラグメントを提供する。

【０３１４】 特定のエピトープに対して指向されるモノクローナル抗体もまた、当業者によ
り容易に産生され得る。よく知られているのは、ハイブリドーマによりモノクロ
ーナル抗体を産生する一般法である。不死の抗体産生細胞系は、細胞融合、及び
腫瘍化ＤＮＡを用いたＢリンパ球の直接的な形質転換、又はエプシュタイン−バ
ー・ウイルスを用いたトランスフェクションのような他の技術によっても創出さ
れ得る。軌道（orbit）エピトープに対して産生されるモノクローナル抗体のパ
ネルは、様々な特性、即ちアイソタイプやエピトープ親和性について予備選択し
得る。

【０３１５】 モノクローナル抗体は、連続細胞系による培養での抗体分子の産生をもたらす
任意の技術を使用して調製され得る。これには、限定しないが、はじめに Koehl
er and MIlstein (1975 Nature 256: 495-497) により記載されたハイブリドー
マ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kosbor et al (1983) Immunol Today
4: 72; Cote et al (1983) Proc Natl Acad Sci 80: 2026-2030）、及びＥＢＶ
−ハイブリドーマ技術（Cote et al (1985) 「モノクローナル抗体と癌治療」ア
ラン・Ｒ．リス社、pp 77-96）が含まれる。さらに、「キメラ抗体」の産生、適
切な抗原特異性と生物学的活性を有する分子を得るための、マウス抗体遺伝子の
ヒト抗体遺伝子へのスプライシングのために開発された技術を使用し得る（Morr
ison et al (1984) Proc Natl Acad Sci 81: 6851-6855; Neuberger et al (198
4) Nature 312: 604-608; Takada et al (1985) Nature 314: 452-454）。他の
やり方では、単鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第４，９４６，
７７９号）が特定の単鎖抗体の物質を産生するために適用され得る。

【０３１６】 抗体はまた、Orlandi et al (1989, Proc Natl Acad Sci 86: 3833-3837）、
及び Winter G 及び Milstein C (1991; Nature 349: 293-299) に記載されるよ
うに、リンパ球の集団において in vivo 産生を誘導するか、又はきわめて特異
的な結合試薬の組換え免疫グロブリンライブラリー若しくはパネルを予備選択す
ることによっても産生され得る。

【０３１７】 当該物質に対して特定の結合部位を含有する抗体フラグメントも産生され得る
。例えば、そのようなフラグメントには、限定しないが、抗体分子のペプシン消
化により産生され得るＦ（ａｂ’）２フラグメントと、Ｆ（ａｂ’）２フラグメ
ントのジスルフィド架橋を還元することによって産生され得るＦａｂフラグメン
トが含まれる。他のやり方では、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフ
ラグメントの迅速かつ容易な同定を可能にするＦａｂ発現ライブラリーが構築さ
れ得る（Huse WD et al (1989) Science 256: 1275-1281）。

【０３１８】 一般的なアッセイ技術 創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされるタンパク質のア
ミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列のような、適当な標的の任意の１つ又は
それ以上が、前記タンパク質の作用を阻害することが可能な薬剤を同定するため
に使用され得る。

【０３１９】 そのような試験に利用される標的は、溶液内でフリーであるか、固形支持体へ
固定化されているか、細胞表面上に維持されているか、又は細胞内に位置づけら
れる場合がある。標的活性の消失、又は標的と試験される薬剤との結合複合体の
形成が測定され得る。

【０３２０】 本発明のアッセイは、数多くの薬剤が試験される、予備選択であり得る。１つ
の側面では、本発明のアッセイ法は、ハイスループットスクリーニングである。 薬物スクリーニングの技術は、Geysen, ヨーロッパ特許出願８４／０３５６４
号（１９８４年９月１３日公開）に記載の方法に基づく。要約すると、多数の異
なる低ペプチド試験化合物を、プラスチックピンや他のある表面のような固体基
質の上で合成する。ペプチド試験化合物を好適な標的又はそのフラグメントと反
応させ、洗浄する。次いで、当技術分野で周知の方法を適切に適用するようにし
て、結合した実体を検出する。精製された標的はまた、薬物スクリーニング技術
における使用のためにプレート上に直接コートすることが可能である。他のやり
方では、非中和抗体を使用してペプチドを捕捉し、それを固形支持体上に固定化
することも可能である。

【０３２１】 本発明ではまた、標的と結合することが可能な中和抗体が標的へ結合すること
について試験化合物と競合する、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も考慮
される。

【０３２２】 もう１つのスクリーニング技術は、当該物質への好適な結合アフィニティーを
有する薬物のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を提供し、詳しくはＷ
Ｏ８４／０３５６４号に記載の方法に基づく。

【０３２３】 本発明のアッセイ法は、試験化合物の小スケールと大スケールの両方のスクリ
ーニングだけでなく、定量アッセイにおいても適していると期待される。 １つの好ましい側面では、本発明は、創傷のような損傷組織の環境においてア
ップレギュレートされる１種又はそれ以上のプロテアーゼタンパク質を選択的に
阻害する薬剤を同定する方法に関する。

【０３２４】 レポーター 本発明のアッセイ法（並びに予備選択）では多種多様なレポーターが使用される
場合があり、好ましいレポーターは、好便にも検出可能なシグナルを（例えば、
分光法により）提供する。例を挙げると、ファルマシアバイオテク（ピスカタウ
ェイ、ＮＪ）、プロメガ（マジソン、ＷＩ）及びＵＳバイオケミカル社（クリー
ブランド、ＯＨ）のような数多くの企業がアッセイ法の市販キット及びプロトコ
ールを供給する。好適なレポーター分子若しくは標識には、放射性核種、酵素、
蛍光、化学発光、又は発色剤、並びに基質、補因子、阻害剤、磁気粒子、等が含
まれる。そのような標識の使用を教示する特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７
；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６
３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９及びＵＳ−Ａ−
４３６６２４１号が含まれる。

【０３２５】 宿主細胞 本発明に関連した「宿主細胞」という用語には、本発明の薬剤の標的を含み得る
任意の細胞が含まれる。

【０３２６】 このように，本発明のさらなる態様は、本発明の標的であるか又はそれを発現
するポリヌクレオチドで形質転換されたか又はトランスフェクトされた宿主細胞
を提供する。好ましくは、前記ポリヌクレオチドは、標的であるか又は標的を発
現することになるポリヌクレオチドの複製及び発現についてのベクターに担われ
る。

【０３２７】 グラム陰性菌である大腸菌（E. coli）は、異種遺伝子発現の宿主として広く
使用される。しかしながら、多量の異種タンパク質がその細胞内に蓄積する傾向
がある。大腸菌の細胞内タンパク質の塊から所望のタンパク質を引き続き精製す
ることが困難になる場合がある。

【０３２８】 大腸菌とは対照的に、バシラス属由来の細菌は、タンパク質を培養基の外へ分
泌するというその能力の故に、異種宿主の宿主として特に適している。宿主とし
て好適な他の細菌は、ストレプトマイセス属及びシュードモナス属由来のもので
ある。

【０３２９】 本発明のポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドの性質、及び／又は
発現されるタンパク質のさらなるプロセシングの望ましさによっては、酵母又は
他の真菌のような真核宿主が好ましい場合もある。一般に、酵母細胞が真菌細胞
より好ましいのは、それらがより操作し易いからである。しかしながら、タンパ
ク質のなかには酵母細胞からほとんど分泌されないものがあるか、又は適切にプ
ロセス化されない（例えば、酵母における過剰なグリコシル化）場合もある。上
記の例では、異なる真菌宿主が選択されるべきである。

【０３３０】 本発明の範囲内にある好適な発現宿主の例は、（ＥＰ−Ａ−０１８４４３８及
びＥＰ−Ａ−０２８４６０３号に記載されるもののような）アスペルギルス種及
びトリコデルマ種のような真菌；（ＥＰ−Ａ−０１３４０４８及びＥＰ−Ａ−０
２５３４５５号に記載されるもののような）バシラス種、ストレプトマイセス種
及びシュードモナス種のような細菌；（ＥＰ−Ａ−００９６４３０及びＥＰ−Ａ
−０３０１６７０号に記載されるもののような）クリーベロマイセス種及びサッ
カロミセス種のような酵母である。例を挙げると、典型的な発現宿主は、Asperg
illus niger, Aspergillus niger var. tubigenis, Aspergillus niger var awa
mori, Aspergillus aculeatis, Aspergillus nidulans, Aspergillus orvzae, T
richoderma reesei, Bacillus subtilis（枯草菌）, Bacillus licheniformis,
Bacillus amyloliquefaciens, Kluyveromyces lactis 及び Saccharomyces cere
visiae から選択され得る。

【０３３１】 酵母、真菌及び植物宿主細胞のような好適な宿主の使用は、本発明の組換え発
現産物に最適な生物学的活性を与えるのに必要とされ得るような翻訳後修飾（例
、ミリストイル化、グリコシル化、先端切り、ラピデーション（lapidation）、
及びチロシン、セリン又はスレオニンリン酸化）を提供し得る。

【０３３２】 生物 本発明に関連した「生物」という用語には、本発明による標的及び／又はそれら
から得られる産物を含み得る、任意の生物が含まれる。生物の例には、真菌、酵
母又は植物が含まれる場合がある。

【０３３３】 本発明に関連した「トランスジェニック生物」という用語には、本発明による
標的及び／又は得られる産物を含む、任意の生物が含まれる。

【０３３４】 宿主細胞／宿主生物の形質転換 先に示したように、宿主生物は、原核又は真核の生物であり得る。好適な原核宿
主の例には、大腸菌と枯草菌が含まれる。原核宿主の形質転換についての教示は
当技術分野で十分に文書化されている。例えば、Sambrook et al（「分子クロー
ニング：実験マニュアル、第２版」、1989，コールドスプリングハーバーラボラ
トリープレス）及び Ausbel et al.,「分子生物学の最新プロトコール」（1995
）ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、を参照のこと。

【０３３５】 原核宿主を使用する場合、ヌクレオチド配列は、形質転換の前に、イントロン
の除去によるように、適切に修飾しておく必要がある。 もう１つの態様では、トランスジェニック生物は酵母であり得る。この点に関
して言えば、酵母はまた異種遺伝子発現の運搬体として広く使用されてきた。サ
ッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）には、異種遺伝子の発
現を含む、工業使用の長い歴史を有する。サッカロミセス・セレビシエにおける
異種遺伝子の発現は、Goodey et al (1987,「酵母のバイオテクノロジー」、D R
Berry et al, 編、401-429 頁、アレン・アンド・アンウィン、ロンドン）と K
ing et al (1989,「酵母の分子／細胞生物学」、E F Walton と G T Yarronton
編、107-133 頁、ブラッキー、グラスゴー）により概説されている。

【０３３６】 サッカロミセス・セレビシエが異種遺伝子の発現によく適しているのはいくつ
かの理由からである。第一に、それは人間に対して非病原性であり、特定の内毒
素を産生することができない。第二に、それは、数世紀に及ぶ様々な目的の商業
開発の後で、安全使用の長い歴史を有する。このことにより広く大衆に受け入れ
られている。第三に、この生物へ注力された広範な商業用の使用及び研究によっ
て、サッカロミセス・セレビシエの遺伝学及び生理学、並びに大量スケール発酵
の特徴について豊富な知識がもたらされた。

【０３３７】 サッカロミセス・セレビシエにおける異種遺伝子発現と遺伝子産物の分泌の諸
原理に関する概説が、E Hinchcliffe E Kenny（1993,「異種遺伝子発現の運搬体
としての酵母」、酵母、第５巻、Anthony H Rose と J Stuart Harrison 編、第
２版、アカデミックプレス社）に述べられている。

【０３３８】 いくつかのタイプの酵母ベクターが利用可能であり、その維持に宿主ゲノムと
の組換えを必要とする組込みベクター、及び自己複製プラスミドベクターが含ま
れる。

【０３３９】 トランスジェニック・サッカロミセスを調製するには、酵母における発現のた
めに設計された構築体へ本発明のヌクレオチド配列を挿入することによって、発
現構築体を調製する。異種発現のために使用される様々なタイプの構築体が開発
されてきた。構築体は、本発明のヌクレオチド配列へ融合した酵母において活性
なプロモーター、通常は、ＧＡＬ１ プロモーターのような酵母起源のプロモー
ターを含有する。通常、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列のような、
酵母起源のシグナル配列が使用される。酵母において活性なターミネーターがこ
の発現系を終了させる。

【０３４０】 酵母の形質転換については、いくつかの形質転換プロモーターが開発されてき
た。例えば、本発明によるトランスジェニック・サッカロミセスは、Hinnen et
al (1978, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 75,
1929); Beggs, J D (1978, Nature, London, 275, 104); 及び Ito, H et al (
1983, J Bacteriology 153, 163-168) の教示に従うことによって調製され得る
。

【０３４１】 形質転換された酵母細胞は、様々な選択マーカーを使用して選択される。形質
転換に使用されるマーカーには、ＬＥＵ２、ｈｉｓ４及びＴＲＰ１のような数多
くの栄養要求性マーカー、及びアミノグリコシド抗生物質マーカー、例えばＧ４
１８のような優性抗生物質耐性マーカーがある。

【０３４２】 もう１つの宿主生物は植物である。遺伝子修飾される植物の構築における基本
原理は、遺伝情報を植物ゲノムに挿入し、挿入された遺伝物質の安定な維持を得
ることである。遺伝情報を挿入するにはいくつかの技術が存在し、その２つの主
要原理は、遺伝情報の直接的な導入と、ベクター系の使用による遺伝情報の導入
である。一般的な技術の概説は、Potrykus (Annu Rev Plant Physiol Plant Mol
Biol [1991] 42: 205-225) 及び Christou (Agro-Food-Industry Hi-Tech Marc
h/April 1994 17-27) による論文に見出し得る。植物の形質転換に関するさらな
る教示はＥＰ−Ａ−０４４９３７５号に見出し得る。

【０３４３】 このように、本発明はまた、標的であるか又は標的を発現することが可能であ
るヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法を提供する。このヌクレオチ
ド配列で形質転換された宿主細胞は、コード化されるタンパク質の発現に適した
条件の下で培養され得る。組換え細胞により産生されるタンパク質は、細胞の表
面上に示される場合がある。所望されるならば、当業者により理解されるように
、コーディング配列を含有する発現ベクターは、特定の原核若しくは真核細胞膜
を介したコーディング配列の分泌を指令するシグナル配列を有するように設計さ
れ得る。他の組換え構築物により、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペ
プチドドメインをコードするヌクレオチド配列へコーディング配列を結合し得る
（Kroll D J et al (1993) DNA Cell Biol 12: 441-53）。

【０３４４】 療法 本発明のアッセイ法により同定される薬剤は、治療薬剤として、即ち、治療応用
において使用され得る。

【０３４５】 「治療」という用語と同じように、「療法」という用語には、治癒効果、症状
緩和効果、及び予防効果が含まれる。 療法は、ヒト又は動物に対するものであり得る。

【０３４６】 療法は、慢性皮膚潰瘍、糖尿病性潰瘍、床ずれ（又は褥瘡）、静脈不全潰瘍、
静脈うっ血潰瘍、火傷、角膜潰瘍又は融解（melts）の１種又はそれ以上の治療
を包含し得る。

【０３４７】 療法は、創傷のような損傷組織障害、障害が糖尿病による場合の治癒、年齢、
癌又はその（放射線療法を含む）治療、神経障害、栄養不良又は慢性疾患に関連
した種々の病態を治療するためであり得る。

【０３４８】 医薬組成物 本発明はまた、本発明の治療有効量の薬剤及び／又は増殖因子と製剤的に許容さ
れる担体、希釈剤又は賦形剤（それらの組み合わせを含む）を含んでなる医薬組
成物を提供する。

【０３４９】 この医薬組成物は、ヒト及び動物用医薬品においてヒト又は動物に使用され得
て、典型的には、製剤的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤の１種又はそれ以
上を含む。治療使用に受容される担体若しくは希釈剤は製薬技術の分野で周知で
あり、例えば、「レミントン製薬科学」、マック・パブリッシング社（A. R. Ge
nnaro 編、1985）に記載されている。医薬担体、賦形剤又は希釈剤の選択は、意
図される投与の経路と標準的な薬剤使用に関して選別され得る。医薬組成物は、
担体、賦形剤又は希釈剤として、又はそれに加えて、任意の好適な結合剤、潤滑
剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含み得る。

【０３５０】 保存剤、安定化剤、色素、及び芳香剤さえも本発明の医薬組成物で提供され得
る。保存剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安
息香酸のエステルが含まれる。抗酸化剤と懸濁剤も使用され得る。

【０３５１】 様々なデリバリー系に依存して、様々な組成物／製剤の必要条件が存在し得る
。例を挙げると、本発明の医薬組成物は、ミニポンプを使用するか、又は例えば
鼻孔スプレー、吸入エアゾール又は経口摂取溶液として粘膜経路によるか、又は
、例えば静脈内、筋肉内又は皮下経路によるデリバリーの注射形態により組成物
が製剤化されて腸管外から投与されるように、製剤化され得る。他のやり方では
、製剤は、多数の経路により投与されるように設計され得る。

【０３５２】 薬剤が胃腸粘膜を通して粘膜により投与され得る場合、それは胃腸管を通過す
る間安定であるべきである。例えば、それは、タンパク分解に対して抵抗性であ
り、酸性ｐＨで安定で、胆汁の界面活性効果に対して抵抗性であるべきである。

【０３５３】 本発明の医薬組成物は、適宜、吸入により、坐剤又はペッサリーの形態で、ロ
ーション、溶液、クリーム、軟膏又は散布剤の形態で局所的に、皮膚パッチの使
用により、デンプン若しくはラクトースのような賦形剤を含有する錠剤の形態で
、又は、単独でか又は賦形剤とともにカプセル剤若しくは丸剤（ovules）におい
て、又は芳香剤若しくは着色剤を含有するエリキシル剤、溶液又は懸濁液の形態
で投与され得るか、又はそれらは腸管外で、例えば静脈内、筋肉内又は皮下に注
射され得る。腸管外投与では、組成物は、無菌水溶液の形態で最も良好に使用さ
れ、他の物質、例えば溶液を血液と等張にするのに十分な塩又は単糖を含有する
場合がある。頬内又は舌下の投与では、組成物は、従来のやり方で製剤化され得
る錠剤若しくはトローチ剤の形態で投与され得る。

【０３５４】 ある態様では、本発明の薬剤及び／又は増殖因子はまた、シクロデキストリン
と組み合わせて使用され得る。シクロデキストリンは、薬物分子と封入及び非封
入の複合体を形成することが知られている。薬物−シクロデキストリン複合体の
形成は、薬物の溶解度、溶解速度、バイオアベイラビリティ及び／又は安定特性
を変化させる場合がある。薬物−シクロデキストリン複合体は、ほとんどの剤形
及び投与経路に概して有用である。薬物との直接的な複合化に代わる手段として
、シクロデキストリンは、補助添加剤、例えば担体、希釈剤又は可溶化剤として
使用される場合がある。α−、β−及びγ−シクロデキストリンが最も一般的に
使用され、好適な例がＷＯ−Ａ−９１／１１１７２、ＷＯ−Ａ−９４／０２５１
８及びＷＯ−Ａ−９８／５５１４８号に記載される。

【０３５５】 増殖因子及び／又は阻害剤がタンパク質である場合、前記タンパク質は治療さ
れる被検者において in situ で製造される場合がある。この点に関して言えば
、前記タンパク質をコードする核酸配列が非ウイルス技術（例，リポソームの使
用による）及び／又はウイルス技術（例、レトロウイルスベクターの使用による
）の使用により、前記タンパク質が前記ヌクレオチド配列から発現されるように
デリバリーされ得る。

【０３５６】 好ましい態様では、本発明の医薬品は局所投与される。 従って、好ましくは、医薬品は局所デリバリーに適している形態である。 投与 「投与される」という用語には、ウイルス若しくは非ウイルスの技術によるデリ
バリーが含まれる。ウイルスデリバリーの機序には、限定しないが、アデノウイ
ルスベクター、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ヘルペスウイルスベク
ター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、及びバキュロウイル
スベクターが含まれる。非ウイルスデリバリーの機序には、脂質介在性トランス
フェクション、リポソーム、免疫リポソーム、リポフェクチン、陽イオン界面両
親媒性化合物（ＣＦＡ）、及びそれらの組み合わせが含まれる。

【０３５７】 本発明の成分は単独で投与され得るが、例えば、投与の経路と標準的な薬剤使
用に関して選別される好適な医薬賦形剤、希釈剤又は担体とこの成分が混合され
るときのように、一般的には、医薬組成物として投与される。

【０３５８】 例えば、成分は、即時、遅延、改良、持続、パルス、又は制御された放出の適
用に、芳香剤又は着色剤を含有し得る、錠剤、カプセル剤、丸剤、エリキシル剤
、溶液又は懸濁剤の形態で投与することができる。

【０３５９】 医薬品が錠剤である場合、錠剤は、微結晶性セルロース、ラクトース、クエン
酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二塩基性カルシウム及びグリシンのよう
な賦形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデン
プン）、グリコール酸ナトリウムデンプン、クロスカルメロースナトリウム及び
特定の複合珪酸塩のような崩壊剤、並びにポリビニルピロリドン、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース（ＨＭＰＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ
）、スクロース、ゼラチン及びアカシアのような造粒結合剤を含有し得る。さら
に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル及びタルク
のような潤滑剤も含まれる場合がある。

【０３６０】 同様のタイプの固形組成物は、ゼラチンカプセルの充填剤としても利用され得
る。この点で好ましい賦形剤には、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、
又は高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性懸濁液及び／又はエリキ
シル剤では、薬剤は、様々な甘味剤若しくは芳香剤、着色物質又は色素と、乳化
剤及び／又は懸濁剤と、そして水、エタノール、プロピレングリコール及びゼラ
チン、及びそれらの組み合わせのような希釈剤と複合され得る。

【０３６１】 投与（デリバリー）の経路には、限定しないが、以下の１つ又はそれ以上が含
まれる：経口（例、錠剤、カプセル剤、又は経口摂取溶液として）、局所、粘膜
（例、鼻孔スプレー又は吸入用エアゾールとして）、鼻孔内、腸管外（例、注射
可能な形態による）、胃腸内、脊髄内、腹腔内、筋肉内、静脈内、子宮内、眼球
内、皮内、頭蓋内、気管内、膣内、脳質内、大脳内、皮下、眼内（硝子体内又は
眼房内を含む）、経皮、直腸内、頬内、膣内、硬膜外、舌下。

【０３６２】 好ましい側面では、医薬組成物は局所的にデリバリーされる。 好ましくは、本発明の組成物は、慢性皮膚潰瘍を治療するために局所投与され
る。

【０３６３】 本発明の医薬品の成分がすべて同一の経路により投与される必要はないことが
理解されるべきである。同様に、組成物が１種以上の有効成分を含む場合、これ
らの成分は、異なる経路により投与され得る。

【０３６４】 本発明の成分が腸管外投与される場合、そのような投与の例には、以下の１つ
又はそれ以上が含まれる：静脈内、動脈内、腹腔内、鞘内、心室内、尿道内、胸
骨内、頭蓋内、筋肉内又は皮下に成分を投与すること；及び／又は注入技術を使
用することによる。

【０３６５】 腸管外投与では、成分は、無菌水溶液の形態で最も良好に使用され、他の物質
、例えば溶液を血液と等張にするのに十分な塩又はグルコースを含有する場合が
ある。水溶液は、必要ならば、適切に緩衝化（好ましくは、３〜９のｐＨへ）さ
れるべきである。無菌条件下での好適な腸管外製剤の調製は、当業者に周知の標
準的な製薬技術により容易に達成される。

【０３６６】 明示されるように、本発明の成分は、鼻腔内又は吸入により投与することが可
能であり、好便にも、加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーからの乾燥
粉末吸入器若しくはエアゾールスプレーの形態において、好適な噴霧剤、例えば
ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオ
ロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ １３４Ａ^TM）又は
１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ ２２７ＥＡ^TM ）のようなヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素又は他の好適な気体の使用によ
り、デリバリーされる。加圧エアゾールの場合、投与単位は、目盛量をデリバリ
ーするための栓を提供することによって決定され得る。加圧容器、ポンプ、スプ
レー又はネブライザーは、例えば、潤滑剤（例、トリオレイン酸ソルビタン）を
追加して含有し得る、エタノール及び噴霧剤の混合物を溶媒として使用して、活
性化合物の溶液若しくは懸濁液を含有し得る。吸入器若しくは通気器に使用され
る（例えば、ゼラチンから製造される）カプセル及びカートリッジは、本発明の
薬剤とラクトース若しくはデンプンのような好適な粉末基剤の粉末混合物を含有
するように製剤化され得る。

【０３６７】 他のやり方では、本発明の成分は、坐剤若しくはペッサリーの形態で投与され
得るか、又はそれは、ゲル、ヒドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏又
は散布剤の形態で局所適用され得る。本発明の成分はまた、例えば、皮膚パッチ
の使用により、皮膚へか又は経皮的に投与され得る。それらはまた、肺又は直腸
の経路により投与され得る。それらは、眼球の経路によっても投与され得る。眼
への使用では、本発明の化合物は、等張で、ｐＨ調整された、無菌の生理食塩水
の微細化懸濁液としてか、又は、好ましくは、等張で、ｐＨ調整された、無菌の
生理食塩水の溶液として、所望により塩化ベンジルアルコニウムのような保存剤
と組み合わせて、製剤化され得る。他のやり方では、それらは、ワセリンのよう
な軟膏において製剤化され得る。

【０３６８】 皮膚への局所適用では、本発明の成分は、例えば以下の１種又はそれ以上との
混合物に懸濁又は溶解した活性化合物を含有する好適な軟膏として製剤化され得
る：鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシ
エチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水。他のやり方では、
それは、例えば以下の１種又はそれ以上の混合物に懸濁又は溶解した好適なロー
ション若しくはクリームとして製剤化され得る：鉱油、モノステアリン酸ソルビ
タン、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチル
エステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベン
ジルアルコール及び水。

【０３６９】 用量レベル 典型的には、個々の被検者に最も適している実際の投与量は、医師により決定さ
れる。特定の患者についての特定の用量レベル及び投与頻度は変化する場合があ
り、利用される特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用時間、年
齢、体重、全般的な健康状態、性、食事、投与の形式及び時間、排出速度、薬物
の組み合わせ、特定の病態の重症度、個別の体験療法を含む、多種多様な要因に
依存する。

【０３７０】 薬剤は、必要に応じて、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．１〜１０
ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され得る
。

【０３７１】 組成物が局所適用される場合、典型的な用量は、創傷のような損傷組織の領域
で約１〜５０ｍｇ／ｃｍ²の次数であり得る。 製剤 本発明の成分は、当技術分野で知られている技術を使用することによって、好適
な担体、希釈剤又は賦形剤の１種又はそれ以上と混合するようにして医薬組成物
へ製剤化し得る。

【０３７２】 製剤的に許容される塩 本発明の薬剤は製剤的に許容される塩として投与され得る。典型的には、製剤的
に許容される塩は、所望の酸若しくは塩基を適宜使用することによって容易に調
製され得る。この塩は溶液から沈殿されるか、又は濾過により採取されるか、又
は溶媒の蒸発により回収され得る。

【０３７３】 動物試験モデル 慢性創傷を治療するための療法若しくは治療薬剤を検討及び／又は設計するため
に、in vivo モデルが使用され得る。このモデルは、慢性創傷の治療法の開発に
意味のある多種多様な変数に対する様々なツール／リード化合物の効果を検討す
るために使用し得る。これらの動物試験モデルは、本発明のアッセイとしてか、
又はそのアッセイにおいて使用し得る。この動物試験モデルは非ヒト動物試験の
モデルである。

【０３７４】 一般的な組換えＤＮＡ方法の技術 一般に、本明細書に述べられる技術は当技術分野でよく知られているが、特に、
Sambrook et al., 「分子クローニング：実験マニュアル」(1989）と Ausbel et
al.,「分子生物学の簡略プロトコール」（1999）、第４版、ジョン・ウィリー
・アンド・サンズ社、が参考になり得る。ＰＣＲについてはＵＳ−Ａ−４６８３
１９５、ＵＳ−Ａ−４８００１９５及びＵＳ−Ａ−４９６５１８８号に記載され
ている。

【０３７５】 要約 まとめると、本発明は、創傷のような損傷組織の治療（例えば、治癒）に使用の
医薬品；（ａ）増殖因子、及び（ｂ）阻害剤；及び所望により（ｃ）製剤的に許
容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む組成物を含んでなる医薬品に関し、ここ
で阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少
なくとも１種の特定プロテアーゼタンパク質の作用を阻害し得る。

【０３７６】 本発明はまた、前記組成物の使用、並びにそれを製造する方法にも関する。 他に表現すれば、本発明は、創傷のような損傷組織の治療（例えば、治癒）に
使用の医薬品；（ａ）増殖因子、及び（ｂ）阻害剤；及び所望により（ｃ）製剤
的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む組成物を含んでなる医薬品に関し
、ここで阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレギュレートさ
れる少なくとも１種の特定プロテアーゼタンパク質の作用を阻害し得て、前記プ
ロテアーゼタンパク質は、阻害剤がなければ、前記増殖因子を有害にも分解する
ことが可能である。

【０３７７】

【実施例】

以下に、本発明を実施例を例として説明する。試験１：プロテアーゼ阻害剤による増殖因子分解保護の生化学的決定 個々のプロテアーゼ酵素による分解から増殖因子を保護する、ｕＰＡ阻害剤及び
ＭＭＰ阻害剤の潜在能力を評価する実験を設計する。

【０３７８】 プロテアーゼによる分解に対する増殖因子の感受性を評価するために、個々の
増殖因子を、ある範囲のプロテアーゼ酵素（ｕＰＡ、ｔＰＡ、プラスミン又はＭ
ＭＰ−１、−２、−３、−９、−１３又は−１４を含む）と３７℃で１５分〜４
８時間の範囲の時間インキュベートする。増殖因子の分解に対するｕＰＡの効果
を、プラスミノーゲンの存在下及び不在下の両方で評価する。

【０３７９】 次いで、増殖因子レベルの低下を定量するか、又はペプチド分解産物の存在を
測定することのいずれかによって、特定の増殖因子の個別プロテアーゼによる分
解を評価する。

【０３８０】 増殖因子分解の定量に適した生物学的技術には、ＨＰＬＣ検出、増殖因子の特
異抗体を使用するウェスタンブロット分析、及び放射標識増殖因子の使用が含ま
れる。

【０３８１】 個別のプロテアーゼにより、インキュベーション時間の間に適度の増殖因子分
解が生じることが見出される場合、この分解に抗する保護活性についてプロテア
ーゼ阻害化合物を評価する。

【０３８２】 化合物を（１５分間）プレインキュベートし、上記に記載のような方法の１つ
により分解を評価する。蛍光基質に対して測定されたように、個別プロテアーゼ
の活性を阻害することがかつて示された濃度ですべての化合物を試験する。使用
される担体（ＤＭＳＯ）は，増殖因子の安定性に影響しない。

【０３８３】 これらの実験は、（上記に言及されたもののような）Ｉ：ｕＰＡ又は（上記に
言及されたもののような）特定のＩ：ＭＭＰの、増殖因子を分解から保護する潜
在能力、それ故に、これら薬剤の増殖因子との同時投与を含む治療の臨床上の潜
在能力を明示する。

【０３８４】 試験２：細胞生物学実験における増殖因子活性の機能亢進 遊走：線維芽細胞、角化細胞及び内皮細胞のような主要なヒト皮膚細胞を用いて
実験を実施する。対照試験では、好適な生理学的マトリックス（例、コラーゲン
、フィブロネクチン、Ｍａｔｒｉｇｅｌ^TM）を貫通又は通過する細胞の遊走能力
を測定する。ある一定の時間に細胞の遊走を亢進する個々の増殖因子の能力につ
いて試験し、それにより今後の実験のために増殖因子の最適濃度を決定する。個
々のプロテアーゼの細胞遊走に対する効果を評価するために、様々な濃度の精製
ヒトプロテアーゼを適切な増殖因子とプレインキュベートする。この処置の後で
、この変化したマトリックスを通過する細胞遊走を亢進する能力について、増殖
因子を再試験する。これらの状況の下で細胞遊走が低下すれば、試験したプロテ
アーゼに、細胞が遊走するマトリックスを分解する能力があると結論される。プ
ロテアーゼ阻害剤の保護機能効果を評価するには、精製プロテアーゼの追加に先
立って、化合物をマトリックスへ加える。

【０３８５】 増殖：線維芽細胞、角化細胞及び内皮細胞のような主要なヒト皮膚細胞を用い
て実験を実施する。これら試験のエンドポイントは、チミジン取込み又は細胞増
殖のような標準法により測定されるような細胞増殖である。ある一定の時間に細
胞の増殖を亢進する個々の増殖因子の能力について試験し、それにより今後の実
験のために増殖因子の最適濃度を決定する。プロテアーゼ阻害剤単独でも細胞増
殖を亢進する能力について試験する。組み合わせ実験には、増殖因子を特定のプ
ロテアーゼで前処理した後で、増殖因子の増殖効果を評価することが含まれる。
プロテアーゼ阻害剤の保護機能効果を評価するには、精製プロテアーゼの追加に
先立って、増殖因子をプロテアーゼ阻害化合物とプレインキュベートする。次い
で、上記に記載のように細胞増殖を定量する。

【０３８６】 これらの実験は、（上記に言及されたもののような）Ｉ：ｕＰＡ及び（上記に
言及されたもののような）Ｉ：ＭＭＰが増殖因子及び／又は増殖因子受容体を保
護し得て、細胞機能に対して相加及び／又は相乗効果を生じ、これら阻害剤の増
殖因子との同時投与の臨床上の潜在能力を明示する。

【０３８７】 実施例１：ヒトｕＰＡ、プラスミン、ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１３とその阻害 剤の増殖因子に対する in vitro での効果 材料と方法 材料：ヒト組換えＴＧＦ−β２及びＫＧＦは、Ｒ＆Ｄシステムズから入手した。
ヒト組換えＶＥＧＦは、ファーミンゲンから入手した。トリプシン、ＡＰＭＡ、
トリプシン−キモトリプシン阻害剤、ヒト組換えＰＤＧＦ−ＢＢ、アプロチニン
、Ｔｗｅｅｎ−２０及びヤギ抗ＶＥＤＦ抗体は、シグマから入手した。ＴＧＦ−
β２、ＫＧＦ−２及びＰＤＧＦ−ＢＢに対する抗体は、サンタクルツ・バイオテ
クノロジー社から入手した。プラスミン、ヒトｔＰＡ刺激剤、Ｓ−２２８８及び
Ｓ−２４４４発色セリンとウロキナーゼ基質は、それぞれクアドラテクから入手
した。ｕＰＡは、カルビオケムから入手した。クロモザイム−ＰＬは、ベーリン
ガー・マンハイムからであった。ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ
−９、ＭＭＰ−１３及びＭＭＰ−１４は、標準技術によりクローン化し、発現さ
せ、精製した。ＭＭＰ−１３のアッセイ基質であるＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｃｈａ−Ｇ
ｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（ＮＭＡ）ＮＨ₂は、ペプチド
・インターナショナル社から入手した。ＭＭＰ−１の基質であるＤＮＰ−Ｐｒｏ
−β−シクロヘキシル−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ）ＮＨ₂と、ＭＭＰ−１４の基質であるＭｃａ−Ｐｒｏ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｐａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ₂は、バケム（Ｂａ
ｃｈｅｍ）から入手した。ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９の基質であるＭ
ｃａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｎｖａ−Ｔｒｐ−Ｍ
ｅｔ−Ｌｙｓ（Ｄｎｐ）−ＮＨ₂は、ネオシステムラボラトリーズから入手した
。化合物５７１９、化合物５２１４、化合物９４７０及び化合物９４５４は標準
技術により合成し、ＤＭＳＯの１０ｍＭストック溶液として調製した。電気泳動
及びウェスタンブロッティングの試薬はすべてインビトロゲン（ＮＯＶＥＸ）か
らであった。阻止試薬（SuperBlock）はピアスから、ＴＢＳ（Ｔｒｉｓ緩衝化生
理食塩水）はバイオ−ラドから入手した。ウェスタンブロッティングの発色試薬
はベクター・ラボラトリーズから入手した。化学品はすべて試薬グレードであっ
た。

【０３８８】 方法 ｉ）合成化合物による酵素の阻害 ＭＭＰアッセイ 酵素の活性化：酵素はすべて酢酸アミノフェニル水銀（ＡＰＭＡ）又はトリプシ
ンを用いて３７℃でプレ活性化した後に、アッセイに使用される最終濃度へ調製
した。ＭＭＰ−１（３０ｎＭ）は０．９３ｍＭ ＡＰＭＡで２０分間活性化し、
ＭＭＰ−２（３０ｎＭ）は１．３２ｍＭ ＡＰＭＡで１時間活性化し、ＭＭＰ−
３（１０１０ｎＭ）は１．８１ｍＭ ＡＰＭＡで３時間活性化するか、又は５５
℃で３時間加熱活性化し、ＭＭＰ−９（１００ｎＭ）は２ｍＭ ＡＰＭＡで２時
間活性化し、ヒトＭＭＰ−１３（１００ｎＭ）は２ｍＭ ＡＰＭＡで２時間活性
化し、ＭＭＰ−１４（９００ｎＭ）はトリプシン ０．９ｎｇ／ｍｌで２５分間
活性化し、その後でトリプシン阻害剤 ４．５ｎｇ／ｍｌを加えた。

【０３８９】 アッセイ緩衝液：ＭＭＰ−１では、使用される緩衝液は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ
，２００ｍＭ ＮａＣｌ，５ｍＭ ＣａＣｌ₂，２０μＭ ＺｎＣｌ₂，０．０５
％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５，ｐＨ７．５であった。ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３及
びＭＭＰ−９では、使用される緩衝液は、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ，１００ｍＭ
ＮａＣｌ，１０ｍＭ ＣａＣｌ₂，０．０５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５，ｐＨ
７．５であった。ＭＭＰ−１３では、使用される緩衝液は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ
，ｐＨ７．５，２００ｍＭ ＮａＣｌ，５ｍＭ ＣａＣｌ₂，２００ｍＭ Ｚｎ
Ｃｌ₂及び０．０２％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５であった。ＭＭＰ−１４では、
使用される緩衝液は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，１００ｍＭ ＮａＣｌ，１０ｍＭ
ＣａＣｌ₂，０．２５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５，ｐＨ７．５であった。

【０３９０】 Ｋ_iの決定：ヒトＭＭＰ−１の活性化触媒ドメイン（１ｎＭ／アッセイ緩衝液
）を１０μＭのＤＮＰ−Ｐｒｏ−β−シクロヘキシル−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ）ＮＨ₂と６種の濃度の
阻害剤とともにインキュベートすることによって、ＭＭＰ−１阻害をアッセイし
た。インキュベーションは３７℃で６０分実施した。時間と線形である、０〜６
０分での平均反応速度を使用して、Ｋ_iを算出した。

【０３９１】 ヒトＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−９の活性化触媒ドメイン（１ｎＭ／
アッセイ緩衝液）を５μＭの基質Ｍｃａ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｙｒ−Ａｌａ−Ｎｖａ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ（Ｄｎｐ）−ＮＨ₂と６種の濃
度の阻害剤とともにインキュベートすることによって、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３
及びＭＭＰ−９の阻害をアッセイした。インキュベーションは３７℃で６０分実
施した。次いで、時間と線形である、０〜６０分での平均反応速度を使用して、
Ｋ_iを算出した。

【０３９２】 ヒトＭＭＰ−１４の活性化触媒ドメイン（１ｎＭ／アッセイ緩衝液）を１０μ
ＭのＭｃａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｐａ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ＮＨ ₂ と６種の濃度の阻害剤とともにインキュベートすることによって、ＭＭＰ−１
阻害をアッセイした。インキュベーションは３７℃で６０分実施した。次いで、
時間と線形である、０〜６０分での平均反応速度を使用して、Ｋ_iを算出した。

【０３９３】 化合物及び基質の濃度：Ｋ_iを決定するＭＭＰ−１アッセイに使用される阻害
剤の最終アッセイ濃度は、５０、４０、３０、２０、１０及び５μＭであった。
ＭＭＰ−２では、使用される阻害剤の最終アッセイ濃度は、１０００、８００、
６００、４００、２００及び１００ｎＭであった。ＭＭＰ−３では、使用される
阻害剤の最終アッセイ濃度は、５、４、３、２、１及び０．５ｎＭであった。Ｍ
ＭＰ−９とＭＭＰ−１４では、使用される阻害剤の最終アッセイ濃度は、５、４
、３、２、１及び０．５μＭであった。

【０３９４】 ＭＭＰ−１、−２、−３、−９及び−１４のアッセイプロトコール：すべての
アッセイを黒い９６穴プレートにおいて、各ウェルあたり最終容量１００μｌで
実施した。阻害剤をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かして１ｍＭとした
。次いで、溶液を緩衝液で系列希釈し、示される最終濃度とした。酵素及び阻害
剤の、最初のプレ−インキュベーション（３７℃、１５分）の後で基質を加えた
。ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１４では、ＢＩＯＬＩＳＥ
ソフトウェアの付いたＦｌｕｏｒｏｓｔａｒ蛍光計（ＢＭＧ）を使用して、１時
間、２分ごとに３２８ｎｍ λ_exと３９３ｎｍ λ_emで蛍光を読み取った。ＭＭ
Ｐ−１アッセイでは使用するフィルターは３５５ｎｍ λ_exと４４０ｎｍ λ_em であり、１時間、２分ごとに蛍光を読み取った。

【０３９５】 ＭＭＰ−１３のアッセイ：最終濃度６０ｎｇ／ｍｌ（１ｎＭ）／ＭＭＰ−１３
アッセイ緩衝液の活性化酵素を、１００μｌの最終アッセイ容量において、１０
μＭのＤＮＰ−Ｐｒｏ−Ｃｈａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｍｅ）−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ（ＮＭＡ）ＮＨ₂基質と様々な濃度（３０、３、０．３、０．０３、０．０
０３及び０．０００３μＭ）の阻害剤とともにインキュベートすることによって
、ＭＭＰ−１３についてのＩＣ₅₀を算出した。９６穴ミクロ蛍光（microfluor）
プレートでアッセイを実行した。インキュベーションはすべで３７℃で実施し、
蛍光の読み取りは、３６０ｎｍ λ_exと４５０ｎｍ λ_emで決定した。

【０３９６】 このアッセイでは、１５若しくは２０分で決定される蛍光値から時間０での蛍
光値を差引いた。次いで、陽性対照（阻害剤の不在下での酵素、緩衝液及び基質
）に比較して反応率（％）を算出した。次いで、ＦｉｔＣｕｒｖｅ（Ｅｘｃｅｌ
Ｔｅｓｓｅｌｌａ Ｓｔａｔｓ付属）を使用して、ＩＣ₅₀値を決定した。Ｇｒ
ｕｂｂｓ検定（Barnet & Lewis, 1994）を使用して、アウトライアー（異常値）
を決定した。

【０３９７】 Ｋ_i値の算出：以下の式を使用してこれを評定した： ＩＣ₅₀＝（Ｋ_i ^*１＋（Ｓ／Ｋ_m） ここでＳは基質濃度であり、Ｋ_mはミカエリス・メンテン定数である。

【０３９８】 セリンプロテアーゼのアッセイ ヒトｕＰＡ（３３ＩＵ／ｍｌ／７５ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．１，５０ｍＭ Ｎ
ａＣｌ）を１８０μＭ Ｓ２４４４（基質）と様々な濃度の阻害剤とインキュベ
ートすることによって、ｕＰＡ（ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベータ
ー）の阻害をアッセイした。一次スクリーニングの結果では、インキュベーショ
ンを３７℃で３０分実施した。阻害率を算出し、次いで、Ｅｘｃｅｌ付属Ｆｉｔ
Ｃｕｒｖｅを使用して化合物の濃度に対してプロットしてＩＣ₅₀を得て、基質
の既知Ｋ_m（９０μＭ）からＫ_iを算出した。

【０３９９】 ヒトｔＰＡ（０．４μｇ／ｍｌ；７５ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．１，５０ｍＭ ＮａＣｌにｔＰＡ刺激剤０．１ｍｇ／ｍｌを含有する）を０．４ｍＭ Ｓ２２
８８（基質）と様々な濃度の阻害剤とインキュベートすることによって、ｔＰＡ
（組織型プラスミノーゲンアクチベーター）の阻害をアッセイした。インキュベ
ーションを３７℃で６０分実施した。阻害率を算出した。

【０４００】 ヒトプラスミン（０．７μｇ／ｍｌ／７５ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．１，５０
ｍＭ ＮａＣｌ）を０．２ｍＭ クロモザイム−ＰＬ（基質）と様々な濃度の阻
害剤とインキュベートすることによって、プラスミンの阻害をアッセイした。イ
ンキュベーションを３７℃で３０分実施した。阻害率を算出した。

【０４０１】 上記のアッセイは９６穴プレートで実行した。ｕＰＡ及びプラスミンのアッセ
イは２００μｌの最終容量を有した。ｔＰＡアッセイは１００μｌの最終容量を
有する。阻害剤はＤＭＳＯに溶かして０．４ｍＭとし、次いで系列希釈して、１
００、３０、１０、３、１、０．３、０．１及び０．０３μＭの最終濃度を得た
。３７℃、１５分での開始プレインキュベーションの後でインキュベーションを
実施し、ＳＯＦＴＭａｘＰｒｏソフトウェアを使用するＳＰＥＣＴＲＡＭａｘマ
イクロプレートリーダー（モレキュラー・デバイス・コーポレーション）におい
て、０分とインキュベーションの終了時で４０５ｎｍでの吸光度を読み取った。

【０４０２】 ｉｉ）増殖因子のインキュベーション条件 ＴＧＦ−β₂、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ及びＫＧＦ−２をプロテアーゼのｕＰ
Ａ、プラスミン、ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１３とともにアッセイ緩衝液（ｕＰＡ
／プラスミン緩衝液：５０ｍＭ ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４か又はＭＭＰア
ッセイ緩衝液：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ，１０ｍＭ ＮａＣｌ，１０ｍＭ ＣａＣ
ｌ₂，０．０５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ ３５，ｐＨ７．５のいずれか１つ）にお
いてインキュベートすることによって、増殖因子のタンパク分解の程度をアッセ
イした。緩衝液の選択はこの試験のタンパク分解に対して影響を及ぼさなかった
。特に断らなければ、増殖因子は、７．９ｍｇ／ｍｌの最終濃度でインキュベー
ション混合物へ加えた。

【０４０３】 ｕＰＡの効果は、各増殖因子につき２５μｇ／ｍｌ（１５００Ｕ／ｍｌ）の典
型的な最終濃度でのインキュベーションにより決定した。プラスミンの効果は、
アッセイ緩衝液の各増殖因子につき０．１ｍｇ／ｍｌの典型的な最終濃度でのイ
ンキュベーションにより決定した。ＭＭＰ−３及び−１３は、アッセイ緩衝液の
各増殖因子と１０ｎＭの典型的な最終濃度でインキュベートした。ｕＰＡ及びＭ
ＭＰ−３と一緒に実行する二重プロテアーゼアッセイは、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ
，１０ｍＭ ＮａＣｌ，１０ｍＭ ＣａＣｌ₂，０．０５％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ
３５，ｐＨ７．５で実施した。インキュベーションはすべてシリコン処理試験
管（シグマ・アルドリッチ、イギリス）で実施した。

【０４０４】 上記の実験で使用した阻害剤は、化合物９４５４、化合物９４７０及び化合物
５２１４であった。これらを１０ｍＭの濃度でＤＭＳＯに溶かした。これら阻害
剤の典型的な最終濃度は１００μＭ〜１０ｎＭの範囲であった。アプロチニンは
Ｔｒｉｓ緩衝液に１０ｍｇ／ｍｌで溶かし、１０μｇ／ｍｌの典型的な濃度で使
用した。

【０４０５】 アッセイはすべて３７℃で実行し、増殖因子の添加に先立って、適宜阻害剤と
一緒か又は一緒でないまま酵素を１５分間プレインキュベートした。増殖因子を
加えた後で、このインキュベーション混合物を、使用する時間点につきシリコン
処理試験管のアリコートへ分割した。特に断らなければ、インキュベーションは
、典型的には２４時間の時間経過にわたって実行した。等量の２Ｘ Ｎｏｖｅｘ
還元ローディング緩衝液（最終濃度：１．０９Ｍ グリセロール、１４１ｍＭ
Ｔｒｉｓ−塩基、１０６ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、７３ｍＭ ドデシル硫酸リチ
ウム（ＬＤＳ）、０．５１ｍＭ エチレンジアミン四酢酸、０．２２ｍＭ Ｓｅ
ｒｖａ Ｂｌｕｅ Ｇ２５０、０．１７５ｍＭ フェノールレッド、ｐＨ８．５
）を加えて反応を止め、７０℃で１０分インキュベートすることによって、電気
泳動用にサンプルを調製した。

【０４０６】 ｉｉｉ）電気泳動 Laemmli（1970）の方法の変法を使用するＮＯＶＥＸ Ｘｃｅｌｌ ＩＩ Ｍｉ
ｎｉ−Ｃｅｌｌゲル装置（グロニンゲン、オランダ）を用いてＬＤＳ−ＰＡＧＥ
を実施した。分子量マーカー（ＳｅｅＢｌｕｅ Ｐｌｕｓ２ 前染色標準品）と
ともに等量のサンプルを４〜１２％のビス−トリスゲル上にロードした。分子量
３、６、１４、１７、２８、３８、４９、６２、９８及び１８８ｋＤａの分子量
マーカーのバンドとの比較により、分子量の決定を実施した。各レーンにつき７
９ｎｇの増殖因子をロードし、上部の陽極チャンバに０．２５％ ＮｕＰＡＧＥ
抗酸化剤を含有する泳動緩衝液（５０ｍＭ ２−（Ｎ−モルホリノ）プロパンス
ルホン酸、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基、３．５ｍＭ ドデシル硫酸ナトリウム、
１ｍＭ ＥＤＴＡ，ｐＨ７．３）を使用して、３５分間、２００Ｖの垂直スラブ
電気泳動により、サンプルを分割した。電気泳動の後でウェスタンブロッティン
グを実行するか、又はＮＯＶＥＸのＳｉｌｖｅｒＸｐｒｅｓｓキットを使用して
ゲルを染色した。

【０４０７】 ｉｖ）ウェスタンブロッティング 還元かつ変性の条件下でサンプルを分離し、ＸＣｅｌｌ ＩＩブロットモジュー
ルを使用して、ニトロセルロース膜へ電気泳動的に移した。移動は、ＮＯＶＥＸ
トランスファー緩衝液（２０％ メタノール、２５ｍＭ ビシン、２５ｍＭ Ｂ
ｉｓ−Ｔｒｉｓ，１．０ｍＭ ＥＤＴＡ，０．１％（ｖ／ｖ）抗酸化剤、ｐＨ７
．３）を使用して、２５Ｖ、６０分で実行した。ブロッティングの後で、Ｓｕｐ
ｅｒＢｌｏｃｋを使用して、膜を１又は２４時間ブロックした。この膜を一次抗
体（一次抗体は、ＴＴＢＳ（Ｔｗｅｅｎ−２０ Ｔｒｉｓ緩衝化生理食塩水、２
０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４，５００ｍＭ ＮａＣｌ，０．１％ Ｔ
ｗｅｅｎ−２０）で４００倍に希釈した）において１時間インキュベートした。
次いで、膜を洗浄し、ペルオキシダーゼ共役二次抗体のベクター系を使用して視
覚化を実施した；Ｎｏｖａ−Ｒｅｄ基質キットによりペルオキシダーゼを視覚化
した。

【０４０８】 ｉｖ）定量 ＧＳ−７００造影濃度計（バイオ−ラド、イギリス）及びＳｙｓｔｅｍＯｎｅ
ｖ４．１．１ソフトウェアを使用して、免疫ブロットして発色させた膜の分析を
実施した。実験の時間経過にわたる、ブロット膜上での元のタンパク質の消失を
定量することによって、阻害剤の試験結果を分析した。以下の式を使用して、タ
ンパク質の消失率を算出した： Ｄ＝Ｖ［対照］−Ｖ［プロテアーゼ処理後］、及び 阻害率（％）＝（１００−（Ｖ［プロテアーゼ＋阻害剤処理後］／Ｄ）） ここでＤは分解値であり、Ｖは元の増殖因子バンドの痕跡量である。

【０４０９】 結果 １．プラスミン、ｕＰＡ及びｔＰＡ阻害剤について算出されたＫ_i値 表１は、ｕＰＡの選択阻害剤としての化合物５２１４の効力を示すデータである
。この結果は、化合物５２１４がｕＰＡの強力な阻害剤であることを示す。ｔＰ
Ａ及びプラスミンの完全な阻害は、この化合物の溶解性の限度内では達成されな
かった。これらの酵素に対してはＩＣ₅₀値が求まらなかったので、ｔＰＡ又はプ
ラスミンに対するＫ_iを算出することはできなかった。従って、結果は１００μ
Ｍでのこの化合物の阻害率を示す。

【０４１０】 対照的に、アプロチニンはプラスミンの選択阻害剤である。表２に示されるよ
うな文献からのデータはこの陳述を裏付ける。 表３のデータは、化合物５７１９がＭＭＰの非選択阻害剤であること、化合物
９４５４がＭＭＰ−３の選択阻害剤であること、そして化合物９４７０がＭＭＰ
−３及びＭＭＰ−１３の二重選択阻害剤であることを示す。

【０４１１】 ２．増殖因子のタンパク分解 表４は、（この増殖因子が正常な治癒中の創傷に内因的に存在しているか、又は
それらが慢性皮膚潰瘍への薬剤として外因的に加えられる場合があるといういず
れかの理由で）創傷治癒に関連している増殖因子をプロテアーゼが消化し得るこ
とを示す。

【０４１２】 ３．増殖因子の分解を抑制する酵素阻害剤の能力 プロテアーゼによる増殖因子の消化を抑制する選択プロテアーゼ阻害剤の能力を
表５〜８に示す（合成基質を使用する実験と比較してこれらの化合物の効力が見
かけ上消失するのは、薬剤のタンパク結合特性のために、増殖因子とのインキュ
ベーション時にそのフリー濃度が低下するためらしい）。

【０４１３】 適当な条件の下では、２種の阻害剤を加えることで、同じ濃度で阻害剤の一方
が使用されるより以上に増殖因子を分解から保護することができる（表９）。

【０４１４】

【表６】

【０４１５】

【表７】

【０４１６】

【表８】

【０４１７】

【表９】

【０４１８】

【表１０】

【０４１９】

【表１１】

【０４２０】

【表１２】

【０４２１】

【表１３】

【０４２２】

【表１４】

【０４２３】 参考文献 Barnet, V と Lewis, T. (1994) 「統計データのアウトライアー（Outliers in
Statistical Data）」p. 223, ウィリー、チチェスター、イギリス． Laemmli, U. K. (1970) Nature, 227, 680-685． Lottenberg, R., Sjak-Shie, N., Fazleabas, A. T. & Roberts, R. M. (1988)
Thrombosis Research, 49: 549-556. Wiman, B. (1980) Thromb. Res. 17, 143-152. 実施例２：非選択プロテアーゼ阻害剤は正常な創傷治癒を in vivo で混乱さ
せる 材料と方法 試験品と担体 試験品は化合物５７１９（０．３％ｗ／ｖ製剤／ＣＭＣヒドロゲル）で、担体は
ＣＭＣヒドロゲルであった。 試験品と担体は室温で暗所に保存した。

【０４２４】 動物 ３頭の雌ＳＰＦブタ（デンマーク地方、デュロック種とヨークシャー種の雑種）
で実験を実施した。馴化期間の最初では、動物の体重は約３０ｋｇであった。

【０４２５】 １週間の馴化期間の間に動物を毎日観察し、不良な状態を示す動物は除去した
。 収容 ２１℃±３℃の温度、５５％±１５％の相対湿度の換気された動物室で試験を実
施した。部屋は１時間につき１０回空気を入換えるように設計された。１２時間
の点灯と１２時間の消灯のサイクルで部屋を照明した。点灯は６時から１８時ま
でであった。

【０４２６】 動物は１匹ずつ檻に収容した。 寝藁 寝藁は軟材のおが屑「ＬＩＧＮＯＣＥＬ ３−４」（Ｈａｈｎ ＆ Ｃｏ．，Ｄ
−２４７９６ Bredenbek-Kronsburg）であった。関連してあり得る汚染物質に
ついて定期的に分析を実施した。

【０４２７】 食餌 Chr. Petersen A/S, DK-4100 Ringsted から市販されるブタ餌「Ａｌｔｒｏｍｉ
ｎ ９０３３」を与えた（約７００ｇ，１日２回）。主要な栄養成分に関連して
あり得る汚染物質についての分析を定期的に実施した。

【０４２８】 飲料水 動物に１日２回家庭用飲料水を与えた。関連してあり得る汚染物質についての分
析を定期的に実施した。

【０４２９】 動物及び檻の確認 ブタは、試験番号及び動物番号の付いた耳タグにより確認した。檻は、試験番号
及び動物番号を記したカードにより確認した。

【０４３０】 外科処置 １日目に、外傷を施した。動物をＳｔｒｅｎｉｋ（登録商標）Ｖｅｔ．ヤンセン
、ベルギー（アザペロン ４０ｍｇ／ｍｌ，１ｍｌ／１０ｋｇ）で麻酔し、Ａｔ
ｒｏｐｉｎ ＤＡＫ，デンマーク（アトロピン １ｍｇ／ｍｌ，０．０５ｍｌ／
ｋｇ）単回筋肉内注射に次いで、Ｈｙｐｎｏｄｉｌ（登録商標）ヤンセン、ベル
ギー（メトミデート ５０ｍｇ／ｍｌ，１〜２ｍｌ）を静脈内注射した。

【０４３１】 動物の背部の両側にある側背領域を剃毛し、石鹸と水で洗浄し、７０％エタノ
ールで消毒し、これを滅菌生理食塩水で濯ぎ落とし、最後に滅菌ガーゼで乾燥さ
せた。

【０４３２】 このように調製した領域に、十分隙間のある円形の外傷（直径２０ｍｍ）を８
個、脊柱の両側に４個ずつつけた。外傷の番号は、動物の左側を１（最も頭に近
い）〜４（最も尻尾に近い）とし、動物の右側を５（最も頭に近い）〜８（最も
尻尾に近い）とした。

【０４３３】 凝固した血液は滅菌ガーゼで拭き取った。 外科処置の直前、外科処置の終了から８時間後、そしてその後必要なときに、
動物へブプレノルフィン ０．０１ｍｇ／ｋｇ（Ａｎｏｒｆｉｎ（登録商標）０
．０３３ｍｇ／ｋｇ，Ａ／Ｓ ＧＥＡ，デンマーク）を筋肉内注射した。

【０４３４】 薬剤投与 外科処置後、連日、以下のように試験品を塗布した：

【０４３５】

【表１５】

【０４３６】 それぞれの投与の投与量は１ｍｌであった。 包帯 包帯をガーゼ包帯で覆い、Ｆｉｘｏｍｕｌ（登録商標）により固定した。包帯、
ガーゼ、及びＦｉｘｏｍｕｌ（登録商標）は、ネット状のボディーストッキング
，Ｂｅｎｄ−ａ−ｒｅｔｅ（登録商標）（Ｔｅｓｖａｌ，イタリア）により保持
した。

【０４３７】 包帯は毎日取り換えた。 取り換える前には、Ｚｏｌｅｔｉｌ ５０（登録商標）Ｖｅｔ．，Ｖｉｒｂａ
ｃ，フランス（溶媒５ｍｌ中にチレタミン１２５ｍｇとゾラゼパム１２５ｍｇを
含む、５ｍｌ）、Ｒｏｍｐｕｎ（登録商標）Ｖｅｔ．，バイエル、ドイツ（キシ
ラジン２０ｍｇ／ｍｌ，６．５ｍｌ）、Ｋｅｔａｍｉｎｏｌ（登録商標）Ｖｅｔ
．，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ社、スイス（ケタミン１００ｍｇ／ｍｌ，１．５ｍ
ｌ）及びＭｅｔｈａｄｏｎ（登録商標）ＤＡＫ，ナイコメッドＤＡＫ，デンマー
ク（メサドン１０ｍｇ／ｍｌ，２．５ｍｌ）の混合液を頚部に筋肉内注射して、
動物を麻酔させた。

【０４３８】 観察 それぞれの外傷を毎日観察した。創傷端及び上皮端の輪郭を滅菌透明シート上に
描き、この端の内側に含まれる領域を平面測定的に測定した。面積の測定は、Ｓ
ｃａｎ Ｂｅａｍ ＡｐＳ，Ｎｏｒｒｅｇａｄｅ １０，ＤＫ−９５６０ Ｈａ
ｄｓｕｎｄにより実施した。

【０４３９】 統計 群平均値と標準偏差が適宜得られるようにデータを処理した。あり得る異常値も
確認した。シャピロ−ウィルク法により、各変数を正規性について検定した。正
規分布の場合、動物と処置という因子の変数について両変分の分散分析を実行し
、有意差が検出された場合、最小二乗法を使用して、あり得る群間差を評価した
。他のやり方では、ウィルコクソンの階級和検定であり得る群間差を確認した。

【０４４０】 「ＳＡＳ／ＳＴＡＴ（登録商標）ユーザーガイド、バージョン６、第４版、１
＋２巻」（１９８９）ＳＡＳインスティテュート社（キャリィ、ノースカロライ
ナ ２７５１３、アメリカ）に記載のＳＡＳ（登録商標）法（バージョン６．１
２）を用いて統計分析をした。

【０４４１】 結果

【０４４２】

【表１６】

【０４４３】 この表は、非選択ＭＭＰ阻害剤が創傷治癒を混乱させることを示す。選択ＭＭ
Ｐ阻害剤（特に、ＭＭＰ−３阻害剤）を使用する試験は、正常な創傷治癒に効果
を示さなかった。

【０４４４】 セリンプロテアーゼについても同様に、ノックアウトマウスを用いた公知の試
験（Carmeliet et al., 1994）は、ｕＰＡ−／−マウスでは比較的軽微な表現型
が明らかであるのに対し、ｕＰＡ−／−及びｔＰＡ−／−であるマウスではより
重篤な表現型が明らかである。この二重ノックアウトは、非選択セリンプロテア
ーゼ阻害剤を使用することと遺伝的に等価であり、自然発生的なフィブリン沈着
の発症（マウスと罹患した臓器について）と広がりの増加、繁殖力と寿命の低下
、フィブリン溶解の消失を示す。従って、ｕＰＡの選択阻害剤は、非選択阻害剤
よりずっと有効な創傷治癒の製品であると結論付けてよいだろう。

【０４４５】 参考文献 Carmeliet, P., Schoonjans, L., Kieckens, L., Ream, B., Degen, J., Bronso
n, R., De Vos, R., van den Oord, J. J., Collen, D. & Mulligan, R. C. (19
94) Nature 368: 419-424. ＰＣＳ９４９４化合物 上記のように、本発明での使用に適した阻害化合物（薬剤）がＰＣＴ／ＩＢ９９
／０１２８９（ＷＯ−Ａ−００／０５２１４号）に開示される。以下の教示が発
明のさらなる陳述と好ましい側面に関連する場合、そのような陳述と好ましい側
面は、上記の陳述と好ましい側面、即ちｉＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰと増殖因子
を含んでなる医薬組成物（並びにその使用）、又はｉＵＰＡ及びｉＭＭＰと所望
の増殖因子を含んでなる医薬組成物（並びにその使用）に関連して読まねばなら
ないと理解されるべきである。

【０４４６】 ＰＣＳ９４９４化合物は、ウロキナーゼ阻害剤として有用であるイソキノリン
であり、特に、ウロキナーゼ阻害剤として有用なイソキノリニルグアニジンであ
る。特に、このイソキノリニルグアニジン化合物は、式（Ｉ）：

【０４４７】

【化２０】

【０４４８】 及びその製剤的に許容される塩であって、式中： Ｇは、Ｎ＝Ｃ（ＮＨ₂）₂又はＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり； Ｒ¹は、Ｈ又はハロであり； Ｘは、ＣＯ、ＣＨ₂又はＳＯ₂であり； Ｒ²は、Ｈ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_3-7シクロアルキル又はＣ_1-6アルキ
ルであって、当該Ｃ_3-7シクロアルキル又はＣ_1-6アルキルのそれぞれは、ハロ、
アリール、ｈｅｔ、Ｃ_3-7シクロアルキル、Ｃ_5-7シクロアルケニル、ＯＨ、Ｃ_{1- 6} アルコキシ、Ｏ−ｈｅｔ¹、Ｃ_1-3アルキル、ＣＯ₂Ｒ⁷及びＮＲ⁴Ｒ⁵から独立し
て選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換され； Ｘ¹は、アリーレン（arylene）、１つ又はそれ以上のＲ⁶基により所望により置
換されるＣ_1-6アルキレン、又はＲ⁶により所望により置換されるシクロ（Ｃ_4-7
）アルキレンであって、当該シクロ（Ｃ_4-7）アルキレン環は、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_p又
はＮＲ⁷から選択されるヘテロ部分を所望により含有し得るか； 又は、Ｒ²及びＸ¹は、それらに付くＮ原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリ
ジン、ピペリジン又はホモピペリジン環を形成し； Ｒ³は、ＣＯ₂Ｒ⁷、ＣＨ₂ＯＨ、ＣＯＮＲ⁸Ｒ⁹又はＣＨ₂ＮＲ⁸Ｒ⁹であるか； 又は、Ｘ¹がＲ²から独立して取扱われ、１つ又はそれ以上のＲ⁶基により所望に
より置換されるメチレンであるか、又は、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_p又はＮＲ⁷から選択され
るヘテロ部分を所望により含有し、Ｒ⁶により所望により置換される１，１−シ
クロ（Ｃ_4-7）アルキレンである場合、Ｒ²及びＲ³は、それらに付くＮ及びＸ¹基
と一緒になって、式（ＩＡ）若しくは（ＩＢ）：

【０４４９】

【化２１】

【０４５０】 （式中、Ｘ²は、エチレン、ｎ−プロピレン又はｎ−ブチレンである）の基とし
て一緒になり得て； Ｒ⁴とＲ⁵は、それぞれ独立して、Ｈ、アリール、又はアリールにより所望により
置換されるＣ_1-6アルキルであり； Ｒ⁶は、ハロ、ＯＨ、Ｃ_1-6アルコキシ、Ｃ_1-6アルキルチオ、Ｃ_3-7シクロアルキ
ル、ＳＨ、アリール、ＣＯ₂Ｒ⁷、ＣＯＮＨＲ⁸、又はアリール、Ｃ_1-6アルコキシ
、ＣＯ₂Ｈ、ＯＨ、ＣＯＮＲ⁸Ｒ⁹又はＮＲ⁸Ｒ⁹により所望により置換されるＣ_1-6 アルキルであり； Ｒ⁷は、Ｈ又はＣ_1-6アルキルであり； Ｒ⁸とＲ⁹は、それぞれ独立して、Ｈであるか、又はＯＨ、ＣＯ₂Ｒ⁷、Ｃ_1-6アル
コキシによるか又はＮＲ⁴Ｒ⁵により所望により置換されるＣ_1-6アルキルである
か； 又は、Ｒ⁸とＲ⁹は、それらに付くＮ原子と一緒になって、Ｏ、Ｓ及びＮＲ⁷から
選択される追加のへテロ基を所望により取込む、４〜７員の環を形成し； ｐは、０、１又は２であり； 「アリール」は、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、又はハロから独立して選択
される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換されるフェニルであり； 「ｈｅｔ」は、Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される３個までのヘテロ原子を含
有する、飽和しているか、又は部分的若しくは全体的に不飽和である５〜７員の
へテロ環であり、これは、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＯ₂Ｒ⁷又はハロ
から独立して選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換され； 「ヘテロアリール」は、Ｏ、Ｎ及びＳから独立して選択される３個までのヘテロ
原子を含有する、全体的に不飽和である５〜７員のへテロ環であり、これは、Ｃ _1-6 アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＯ₂Ｒ⁷又はハロから独立して選択される１つ
又はそれ以上の置換基により所望により置換され； 「ｈｅｔ¹」は、テトラヒドロピラン−２−イル（２−ＴＨＰ）であり； そして、「アリーレン」は、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＯ₂Ｒ⁷又はハ
ロから独立して選択される１つ又はそれ以上の置換基により所望により置換され
るフェニレンである。

【０４５１】 「アルキル」基は、直鎖又は分岐鎖であり得る。上記の定義の「ハロ」は、Ｆ
、Ｃｌ又はＢｒを意味する。 Ｘ¹リンカー部分の定義における、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_p又はＮＲ⁷から選択されるヘ
テロ部分を所望により含有し、Ｒ⁶により所望により置換される「シクロアルキ
レン」基は、利用可能な原子により連結され得る。Ｘ¹リンカー部分の定義にお
ける、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_p又はＮＲ⁷から選択されるヘテロ部分を所望により含有し、
Ｒ⁶により所望により置換される「１，１−シクロアルキレン」基は、４週連結
が環内の１つの位置にある共通の４級中心を介していることを意味する。即ち、
例えば：１，１−シクロブチレンと４，４−テトラヒドロピラニレンは、Ｏ、Ｓ
（Ｏ）_p又はＮＲ⁷から選択されるヘテロ部分を所望により含有し、Ｒ⁶により所
望により置換される同じ属の「１，１−シクロアルキレン」基にいずれも属する
ものとみなされる。

【０４５２】 式（Ｉ）の化合物の「Ｇ」部分に対して与えられる２つの定義は、当然ながら
、互変異性である。当業者は、ある状況では一方の互変異性体が優勢であり、ま
た別の状況では、互変異性体の混合物が存在することを理解されよう。銘記すべ
きは、本発明の物質のあらゆる互変異性形態とその混合物が本発明に網羅される
ことである。

【０４５３】 好ましくは、ＧはＮ＝Ｃ（ＮＨ₂）₂である。 好ましくは、Ｒ¹はハロである。 より好ましくは、Ｒ¹はクロロ又はブロモである。

【０４５４】 最も好ましくは、Ｒ¹はクロロである。 好ましくは、ＸはＳＯ₂である。 好ましくは、Ｒ²は、Ｈ、Ｃ_3-7シクロアルキル又はＣ_1-6アルキルであって、
当該Ｃ_3-7シクロアルキル又はＣ_1-6アルキルのそれぞれは、アリール、ｈｅｔ、
Ｃ_3-7シクロアルキル、ＯＨ、Ｏ−ｈｅｔ¹、Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＯ₂Ｈ、ＣＯ₂
（Ｃ_1-6アルキル）又はＮＲ⁴Ｒ⁵から独立して選択される１つ又はそれ以上の置
換基により所望により置換されるか、又はＲ²及びＸ¹は、それらに付くＮ原子と
一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン又はホモピペリジン環を形
成する。

【０４５５】 より好ましくは、Ｒ²は、Ｈ、アリールにより所望により置換されるか、又は
ピリジル若しくはＮＲ⁴Ｒ⁵若しくはＨＯ若しくはＯ−ｈｅｔ¹より所望により置
換されるＣ_1-3アルキルであるか、又はＲ²及びＸ¹は、それらに付くＮ原子と一
緒になって、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン又はホモピペリジン環を形成
する。

【０４５６】 さらにより好ましくは、Ｒ²は、Ｈ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₂、ＣＨ₃、ＣＨ₂
ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ（２−ＴＨＰ）、ピリジニルメチル、ベンジル又はメ
トキシベンジルであるか、又はＲ²及びＸ¹は、それらに付くＮ原子と一緒になっ
て、その環の２位を介してＲ³部分へ連結する、アゼチジン、ピロリジン、ピペ
リジン又はホモピペリジン環を形成する。

【０４５７】 最も好ましくは、Ｒ²は、Ｈ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₂、ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ
Ｈ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ（２−ＴＨＰ）であるか、又はＲ²及びＸ¹は、それらに付くＮ
原子と一緒になって、２位を介してＲ³部分へ連結されるピロリジン環を形成す
る。

【０４５８】 好ましくは、Ｘ¹は、メトキシ及びハロから独立して選択される１又は２個の
置換基により所望により置換されるフェニレンであるか、又は、アリール又は（
アリール、Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＯ₂Ｈ、ＯＨ、ＮＨ₂又はＣＯＮＨ₂により所望に
よル置換されるＣ_1-6アルキル）から選択される１つ又はそれ以上の基により所
望により置換されるＣ_1-3アルキレンであるか、又は、Ｏ若しくはＮＲ⁷から選択
されるヘテロ部分を所望により含有するシクロ（Ｃ_4-7）アルキレンである（当
該環はＲ⁶により所望により置換される）か、又は、Ｒ²とそれらに付くＮ原子と
一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン又はホモピペリジン環を形
成する。

【０４５９】 より好ましくは、Ｘ¹は、アリール又は（ＯＨ、ＮＨ₂又はＣＯＮＨ₂により所
望によル置換されるＣ_1-4アルキル）から選択される１つ又はそれ以上の基によ
り所望により置換されるメチレンであるか、 又は、Ｒ⁷により置換される、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロへキ
シレン、シクロヘプチレン、テトラヒドロピラニレン、ピペリジニレンであるか
、 又は、Ｒ²とそれらに付くＮ原子と一緒になって、アゼチジン、ピロリジン、ピ
ペリジン又はホモピペリジン環を形成する。

【０４６０】 さらにより好ましくは、Ｘ¹は、Ｃ（ＣＨ₃）₂、１，１−シクロペンチレン、
４，４−テトラヒドロピラニレン、Ｎ−メチル−４，４−ピペリジニレン、ＣＨ ₂ 、ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂）、ＣＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、ＣＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂、Ｃ
Ｈ（ＣＨ₂）ＣＯＮＨ₂、１，１−シクロブチレン、１，１−シクロペンチレン、
１，１−シクロへキシレン、１，１−シクロヘプチレン、Ｎ−メチル−４，４−
ピペリジニレン、４，４−テトラヒドロピラニレンであるか、又は、Ｒ²とそれ
らに付くＮ原子と一緒になって、２位を介してＲ³部分へ連結されるアゼチジン
、ピロリジン、ピペリジン又はホモピペリジン環を形成する。

【０４６１】 最も好ましくは、Ｘ¹は、Ｃ（ＣＨ₃）₂、１，１−シクロペンチレン、４，４
−テトラヒドロピラニレン、Ｎ−メチル−４，４−ピペリジニレンであるか、又
は、Ｒ²とそれらに付くＮ原子と一緒になって、２位を介してＲ³部分へ連結され
るアゼチジン、ピロリジン、ピペリジン環を形成する。

【０４６２】 好ましくは、Ｒ³は、ＣＯ₂Ｒ⁷又はＣＯＮＲ⁸Ｒ⁹である。 より好ましくは、Ｒ³は、ＣＯ₂Ｈ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮ（ＣＨ₃）（ＣＨ₂）₂Ｏ
Ｈ、ＣＯＮ（ＣＨ₃）（ＣＨ₂）₂ＮＨＣＨ₃、ＣＯ₂（Ｃ_1-3アルキル）、ＣＯＮＨ
（ＣＨ₂）₂ＯＨ、ＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＯＣＨ₃、（モルホリノ）ＣＯ又は（４−
メチルピペラジノ）ＣＯである。

【０４６３】 最も好ましくは、Ｒ³はＣＯ₂Ｈである。 物質（ａ）の好ましい群は、ＸがＳＯ₂である化合物であって、ここでＲ³−Ｘ ¹ −ＮＲ²−部分は、Ｘ¹がＲ²から独立して取扱われ、１つ又はそれ以上のＲ⁶基
により所望により置換されるメチレンであるか、又は、Ｏ、Ｓ（Ｏ）_p又はＮＲ⁷ から選択されるヘテロ部分を所望により含有し、Ｒ⁶により所望により置換され
る場合、 そしてＲ²及びＲ³は、それらに付くＮ及びＸ¹基と一緒になって、式（ＩＡ）若
しくは（ＩＢ）：

【０４６４】

【化２２】

【０４６５】 （式中、Ｘ²は、エチレン、ｎ−プロピレン又はｎ−ブチレンである）の基とし
て一緒になり得る。 この物質（ａ）の群において、Ｘ¹は、好ましくはＣ（ＣＨ₃）₂、１，１−シ
クロブチレン、１，１−シクロペンチレン、１，１−シクロへキシレン、４，４
−テトラヒドロピラニレン又はＮ−メチル−４，４−ピペリジニレンであり、最
も好ましくは、１，１−シクロペンチレンである。

【０４６６】 この物質（ａ）の群で、Ｘ²は、好ましくはエチレンである。 好ましい物質の群は、置換基Ｒ¹が以下の実施例に記載のような適合基（value
s）を有する化合物、及びその塩である。

【０４６７】 好ましい物質の群は、置換基Ｘが以下の実施例に記載のような適合基を有する
化合物、及びその塩である。 好ましい物質の群は、置換基Ｒ¹が以下の実施例に記載のような適合基を有す
る化合物、及びその塩である。

【０４６８】 好ましい物質の群は、置換基Ｘ¹が以下の実施例に記載のような適合基を有す
る化合物、及びその塩である。 好ましい物質の群は、置換基Ｒ³が以下の実施例に記載のような適合基を有す
る化合物、及びその塩である。

【０４６９】 もう１つの好ましい物質の群は、置換基Ｒ¹、Ｘ、Ｒ²、Ｘ¹及びＲ³が以下の実
施例に記載のような適合基を有する化合物、及びその塩である。 好ましい物質の群は、Ｒ¹がクロロ又はブロモであり；ＸがＳＯ₂であり；Ｒ²
が、Ｈ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₂、ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ（２
−ＴＨＰ）、ピペリジニルメチル、ベンジル又はメトキシベンジルであるか、又
はＲ²及びＸ¹が、それらに付くＮ原子と一緒になって、前記環の２位を介してＲ ³ 部分へ連結される、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン又はホモピペリジン
環を形成し； Ｘ¹が、Ｃ（ＣＨ₃）₂、１，１−シクロペンチレン、４，４−テトラヒドロピラ
ニレン、Ｎ−メチル−４，４−ピペリジニレン、ＣＨ₂、ＣＨ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂
）、ＣＨ（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂、ＣＨ（ＣＨ₂）₃ＮＨ₂、ＣＨ（ＣＨ₂）ＣＯＮＨ₂、１
，１−シクロブチレン、１，１−シクロペンチレン、１，１−シクロへキシレン
、１，１−シクロヘプチレン、Ｎ−メチル−４，４−ピペリジニレン、４，４−
テトラヒドロピラニレンであるか、又は、Ｒ²とそれらに付くＮ原子と一緒にな
って、２位を介してＲ³部分へ連結されるアゼチジン、ピロリジン、ピペリジン
又はホモピペリジン環を形成し； Ｒ³が、ＣＯ₂Ｈ、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮ（ＣＨ₃）（ＣＨ₂）₂ＯＨ、ＣＯＮ（ＣＨ₃
）（ＣＨ₂）₂ＮＨＣＨ₃、ＣＯ₂（Ｃ_1-3アルキル）、ＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＯＨ、
ＣＯＮＨ（ＣＨ₂）₂ＯＣＨ₃、（モルホリノ）ＣＯ又は（４−メチルピペラジノ
）ＣＯである化合物、及びその塩である。

【０４７０】 もう１つの好ましい物質の群は、Ｒ¹がクロロであり；ＸがＳＯ₂であり；Ｒ²
が、Ｈ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（ＣＨ₃）₂、ＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ、ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ（２
−ＴＨＰ）であるか、又はＲ²及びＸ¹が、それらに付くＮ原子と一緒になって、
２位を介してＲ³部分へ連結されるピロリジン環を形成し； Ｘ¹が、Ｃ（ＣＨ₃）₂、１，１−シクロペンチレン、４，４−テトラヒドロピラ
ニレン、Ｎ−メチル−４，４−ピペリジニレンであるか、又は、Ｒ²とそれらに
付くＮ原子と一緒になって、２位を介してＲ³部分へ連結されるアゼチジン、ピ
ロリジン、ピペリジン環を形成し； Ｒ³がＣＯ₂Ｈである化合物、及びその塩である。

【０４７１】 もう１つの好ましい物質の群は、以下の実施例の化合物、及びその塩である。
この群の中でより好ましいのは、実施例３２（ｂ）、３４（ｂ）、３６（ｂ）、
３７（ｂ）、３８、３９（ａ及びｂ）、４１（ｂ）、４３（ｂ）、４４（ｂ）、
７１、７５、７６、７８、７９、８４（ｂ）、及び８７（ｂ及びｃ）の化合物、
及びその塩である。

【０４７２】 好ましい化合物又は塩は以下から選択される： Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ
−プロリン； ２−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝イソ酪酸； １−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝シクロブタンカルボン酸； Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］シク
ロロイシン； Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］シク
ロロイシン； １−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）シクロペンタンカルボキサミン； １−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロペンタンカルボキサミン
； １−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロペンタンカルボキサミン
； Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ
−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシン； １−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝シクロヘキサンカルボン酸； ４−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸； （２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル｝スルホ
ニル）−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル； （２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル｝スルホ
ニル）−２−ピペリジンカルボン酸； １−［（｛４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル｝スルホニル）ア
ミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチルシクロペンタンカルボキサ
ミド； １−［（｛４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル｝スルホニル）ア
ミノ］−Ｎ−（２−メトキシエチル）シクロペンタンカルボキサミド； ４−クロロ−１−グアニジド−Ｎ−［１−（モルホリノカルボニル）シクロペン
チル］−７−イソキノリンスルホンアミド； ４−クロロ−１−グアニジド−Ｎ−｛１−［（４−メチルピペラジノ）カルボニ
ル］シクロペンチル｝−７−イソキノリンスルホンアミド； Ｎ−（｛４−ブロモ−１−グアニジド−７−イソキノリニル｝スルホニル）−Ｎ
−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシン； １−｛［（４−クロロ−１−グアニジド−７−イソキノリニル）スルホニル］［
２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝シクロ
ペンタンカルボン酸；及び Ｎ”−｛４−クロロ−７−［（１０−オキソ−９−オキサ−６−アザスピロ［４
．５］デク−６−イル）スルホニル］−１−イソキノリニル｝グアニジン；及び
その製剤的に許容される塩。

【０４７３】 本発明は、本発明の物質の製造法をさらに提供し、これは以下と実施例に記載
される。当業者は、本発明の物質が本明細書で記載される以外の方法により、そ
して以下の節に記載の本明細書に記載の方法及び／又はその適用、及び当技術分
野で知られた方法の適用により製し得ることを理解されよう。

【０４７４】 以下の方法では、特に明記しなければ、置換基は上記の式（Ｉ）の化合物に関
連して上記に定義される通りである。 方法１ 式（Ｉ）の化合物は，対応する１−アミノイソキノリン誘導体（ＩＩ）：

【０４７５】

【化２３】

【０４７６】 から、シアナミド（ＮＨ₂ＣＮ）、又はカルボキサミジン誘導体、例えば、１Ｈ
−ピラゾール−１−カルボキサミジン（M. S. Bernatowicz, Y. Wu, G. R. Mats
ueda, J. Org. Chem., 1992, 57, 2497）、その３，５−ジメチルピラゾール類
似体（M. A. Brimble et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I (1990) 311）、
Ｏ−メチルイソチオ尿素（F. El-Fehail et al, J. Med. Chem. (1986), 29, 98
4）、Ｓ−メチルイソチオウロニウム硫酸塩（S. Botros et al, J. Med. Chem.
(1986) 29, 874; P. S. Chauhan et al, Ind. J. Chem., 1993, 32B, 858）又は
Ｓ−エチルイソチオウロニウムブロミド（M. L. Pedersen et al, J. Org. Chem
. (1993) 58, 6966）のような単純なＯ−アルキルチオウロニウム塩又はＳ−ア
ルキルイソチオウロニウム塩のような「ＮＨＣ⁺＝ＮＨ」シンソンとして作用す
る試薬との反応により得ることができる。他のやり方では、アミノイミノメタン
スルフィン酸、又はアミノイミノメタンスルホン酸が使用され得る（A. E. Mill
er et al, Synthesis (1986) 777; K. Kim et al, Tet Lett. (1988) 29, 3183
）。

【０４７７】 この変換についての他の方法は当業者に知られている（例えば、「有機官能基
の諸変換（Comprehensive Organic Functional Group Transformations）」（19
95）ペルガモン・プレス、第６巻、639頁、T. L. Gilchrist（編）；Patai の「
官能基の化学（Chemistry of Functional Groups）」第２巻「アミジン及びイミ
デートの化学」（1991）448 を参照のこと）。

【０４７８】 アミノイソキノリン（ＩＩ）は、対応するカルボキシ誘導体からの再配置（ホ
フマン、クルチウス、ロッセン、シュミット型の再配置）と後続の脱保護を含む
、公知の標準法（例えば、「へテロ環式化合物の化学（The Chemistry of Heter
ocyclic Compounds）」第３８巻、Ｐｔ．２ ジョン・ウィリー・アンド・サン
ズ、F. G. Kathawala, G. M. Coppolq, H. F. Schuster（編）を参照のこと）に
より製造され得る。

【０４７９】 アミノイソキノリン（ＩＩ）は、他のやり方では、Ｃｌ若しくはＢｒのような
脱離基のアジドのような窒素求核体での直接置換（に続く還元）、又はアンモニ
アによるか、又は（ベンジルアミンのような）好適な保護化アミンを用いたＰｄ
触媒に続いて当技術分野で周知の標準条件を使用する脱保護化により、製造され
得る。

【０４８０】 ハロイソキノリンは市販されているか、又は、他のやり方では、例えば以下に
記載の様々な方法により製造し得る：Goldschmidt, Chem. Ber. (1895) 28, 153
2; Brown and Plasz, J. Het. Chem. (1971) 6, 303; 米国特許第３，９３０，
８３７号；Hall et al, Can. J. Chem. (1966) 44, 2473; White, J. Org. Chem
. (1967) 32, 2689; 及び Ban, Chem. Pharm. Bull. (1964) 12, 1296. １，４−（ジクロロ−又はジブロモ）イソキノリンは、M. Robison et al, J.
Org. Chem. (1958) 23, 1071 に記載の方法により、対応するイソカルボスチリ
ル化合物のＰＣｌ₅若しくはＰＢｒ₅との反応によって、製造され得る。

【０４８１】 方法２ 式（Ｉ）の化合物は、上記の方法１で定義されるような対応するアミノイソキノ
リン誘導体（ＩＩ）から、化合物ＰＮＨＣ（＝Ｘ）ＮＨＰ₁、ＰＮ＝ＣＸＮＨＰ₁ 又はＰＮＨＣＸ＝ＮＰ₁のような保護化アミジン（２＋）シンソン（ＩＩＩ）：

【０４８２】

【化２４】

【０４８３】 （式中：ＸはＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、メシレート、トシレート、アルコキシ、等のよう
な脱離基であり、ここでＰとＰ₁は同じであるか又は異なる場合があり、ｔ−ブ
トキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、トルエンスルホニルのようなア
リールスルホニル、ニトロ、等のような、当技術分野で周知であるようなＮ−保
護基である）として作用する試薬との反応により得ることができる。

【０４８４】 シンソン（ＩＩＩ）として作用する試薬の例には、Ｎ，Ｎ’−ビス（ｔ−ブト
キシカルボニル）−Ｓ−Ｍｅ−イソチオ尿素、Ｎ，Ｎ’−ビス（ベンジルオキシ
カルボニル）−Ｓ−メチルイソチオ尿素、又はこれらのスルホン酸誘導体のよう
なＮ，Ｎ’−保護化−Ｓ−アルキルチオウロニウム誘導体（J. Org. Chem. 1986
, 51, 1882）、又はＮ，Ｎ’−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｓ−（２，４
−ジニトロベンゼン）のようなＳ−アリールチオウロニウム誘導体（S. G. Lamm
in, B. L. Pedgrift, A. J. Ratcliffe, Tet. Lett. 1996, 37, 6815）、又は［
（４−メチル−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］−カルバミミド
チオン酸メチルエステル、又は対応する２，２，５，７，８−ペンタメチルクロ
マン−６−スルホニル類似体のようなモノ保護化類似体（D. R. Kent, W. L. Co
dy, A. M. Doherty, Tet Lett., 1996, 37, 8711）、又はＳ−メチル−Ｎ−ニト
ロイソチオ尿素（L. Fishbein et al, J. Am. Chem. Soc. (1954) 76, 1877）、
又は、向山試薬（Yong, Y. F.; Kowalski, J. A.; Lipton, M. A. J. Org. Chem
., 1997, 62, 1540）のような助触媒の存在若しくは不在下でのＮ，Ｎ'−ビス（
ｔ−ブトキシカルボニル）チオ尿素のような様々な置換チオ尿素（C. Levallet,
J. Lerpiniere, S. Y. Ko, Tet. 1997, 53, 5291）、又は銅、水銀又は銀の塩
、特に塩化水銀（ＩＩ）が含まれる。Ｏ−メチル−Ｎ−ニトロイソ尿素のような
好適にＮ−保護化されたＯ−アルキルイソ尿素（N. Heyboer et al, Rec. Chim.
Trav. Pays-Bas (1962) 81, 69）も使用し得る。他のやり方では、１−Ｈ−ピ
ラゾール−１−［Ｎ，Ｎ'−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）］カルボキサミジ
ン、対応するビス−Ｃｂｚ誘導体（M. S. Bernatowicz, Y. Wu, G. R. Matsueda
, Tet Lett. 1993, 34, 3389）又はモノＢｏｃ若しくはモノ−ＣＢＺ誘導体（B.
Drake, Synthesis, 1994, 579, M. S. Bernatowicz, Tet Lett. 1993, 34, 338
9）のような当業者に知られている他のグアニル化剤も使用され得る。同様に、
３，５−ジメチル−１−ニトログアニルピラゾールも使用し得る（T. Wakayima
et al, Tet Lett. (1986) 29, 2143）。

【０４８５】 この反応は、好便にも、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）、メタノールのような好適な溶媒を使用して実行され得る。 この反応はまた、好便にも、トリエチルアミン／ジクロロメタンのような好適
な塩基／溶媒混合物において、アミノイソキノリン（ＩＩ）と（ＩＩＩ）型のチ
オ尿素誘導体の混合物へ塩化水銀（ＩＩ）を加えることによって実行される。

【０４８６】

【化２５】

【０４８７】 この反応の生成物は、保護化イソキノリニルグアニジン（ＩＶ）であり［ここ
でＧ¹は、保護化グアニジン部分Ｎ＝Ｃ（ＮＨＰ）（ＮＨＰ₁）又はその互変異性
体であり、Ｐ及びＰ₁は、ｔ−ブトキシカルボニル（「Ｂｏｃ」）、ベンジル、
ベンジルオキシカルボニル等のような窒素保護基である］、これは好便にも脱保
護化され得て、（Ｉ）又はその塩を生じる。

【０４８８】 例えば、保護基のＰ及び／又はＰ₁がｔ−ブトキシカルボニルである場合、好
便にも、脱保護化は、ジクロロメタンのような好適な溶媒において、トリフルオ
ロ酢酸（ＴＦＡ）又は塩酸のような酸を使用して実行され、（Ｉ）のビストリフ
ルオロ酢酸塩を生じる。

【０４８９】 Ｐ及び／又はＰ₁がベンジルオキシカルボニルのような水素化分解し得る基で
ある場合、脱保護化は、水素化分解により実施され得る。 他の保護化／脱保護化様式には、ニトロ（K. Suzuki et al, Chem. Pharm. Bu
ll. (1985) 33, 1528, Nencioni et al, J. Med. Chem. (1991) 34, 3373, B. T
. Golding et al, J. C. S. Chem. Comm. (1994) 2623）；ｐ−トルエンスルホ
ニル（J. F. Callaghan et al, Tetrahedron (1993) 49, 3479）；メシチルスル
ホニル（Shiori et al, Chem. Pharm. Bull. (1987) 35, 2698, 同上 (1987) 35
, 2561, 同上 (1989) 37, 3432, 同上 (1987) 35, 3880, 同上 (1987) 35, 1076
）；２−アミダイトマントイルオキシカルボニル（Iuchi et al, 同上 (1987) 3
5, 4307）；及びメチルスルホニルエトキシカルボニル（Filippov et al, Syn.
Lett. (1994) 922）が含まれる。

【０４９０】 当業者には、本発明の化合物の合成時に、他の保護化と後続の脱保護化の様式
が、例えば T W Greene と P G M Wuts による「有機合成の保護基（Protective
Groups in Organic Synthesis）」ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社（1991
）、及び P. J. Kocienski による「保護基（Protecting Groups）」Georg Thie
me Verlag（1994）に記載のような、様々な他の従来技術により達成され得るこ
とが明らかであろう。

【０４９１】 方法３ 式（Ｉ）の化合物は、式（Ｖ）：

【０４９２】

【化２６】

【０４９３】 （式中、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ又はＯＰｈのような好適な脱離基である）の化合物か
ら、グアニジンのフリー塩基による脱離基の置換によって、得ることができる。 式（Ｖ）の化合物は、方法１における式（ＩＩ）の化合物の製法に関する節で
上記に述べたようにか、又はその定常的な変法により入手可能である。

【０４９４】 グアニジンのフリー塩基は、好ましくは、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｄ
ＭＳＯ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、エチレングリコールジメチ
ルエーテル（ＤＭＥ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、トルエン又
はそれらの混合物のような乾燥非プロトン溶媒において、好便にも、塩酸塩、炭
酸塩、硝酸塩又は硫酸塩のような好適な塩から、水素化ナトリウム、水素化カリ
ウム、又は別のアルカリ金属塩基のような好適な塩基を用いて、in situ で生成
され得る。他のやり方では、それは、カリウムｔ−ブトキシド／トルエンのよう
なアルコール溶媒、又は上記のような非プロトン溶媒においてアルコキシドを使
用して、好適な塩から生成され得る。

【０４９５】 このように形成されたフリーのグアニジンは、１−イソキノリン誘導体（Ｖ）
と結合し得て、式（Ｉ）の化合物を形成するこの反応は、好ましくは４時間〜６
日の間、室温〜２００℃、好ましくは約５０℃〜１５０℃で実行され得る。

【０４９６】 当業者には、Ｒ³、Ｒ²及び／又はＸ¹基の官能基のあるものが保護化されてグ
アニル化に次いで遊離されるか又は加えられるか、又はグアニジン部分が基質へ
付加した後で産生されるかのいずれかである必要があることが明らかであろう。

【０４９７】 例えば、酸基は、エステルとして保護化される間にグアニル化工程を経て、そ
の後加水分解され得る。エチルエステルの塩基触媒性加水分解とｔ−ブチルエス
テルの酸触媒性加水分解は、このことのそのような２種の好適な例である。もう
１つの例では、２−テトラヒドロピラニルエーテル（２−ＴＨＰ）のような文献
で十分に文書化されている基でアルコールが保護化され得て、引き続き、酸での
処理により除去され得る。

【０４９８】 グアニジン部分が取り付けられた後で新たな官能基を加えることも本発明に包
含される。例えば、スルホンアミドＮＨ（即ち、「Ｘ−ＮＲ²」はＳＯ₂ＮＨであ
る）のハロゲン化アルキルによるアルキル化が、炭酸カリウムのような塩基の存
在下で、所望によりＫＩのような助触媒の存在下で実施され得る。もう１つの例
では、当業者に既知の連続したカップリング条件によるか、又は好便にも、フリ
ー又は保護化グアニジンの存在下で、酸基が酸塩化物を介してアミドへ変換され
得る。他のやり方では、エステル基が直接アミンと反応して、アミドを生成し得
る。これが分子内プロセスで起こる場合、ラクタムが形成され得る。同様の方法
論を使用して、エステルとラクトンが製造され得る。追加の官能基は、この段階
では保護化された形態で存在し得るが、その後（文献に十分文書化されている基
（例、Ｂｏｃ基）により保護化され得るアミノ基のように）露わにされ、引き続
き、ＨＣｌ又はＴＦＡのような強酸での処理のような標準条件の下で除去され得
る。

【０４９９】 方法４ １つ又はそれ以上の置換基がカルボン酸基若しくはカルバモイル基であるか又は
それを含有する、本発明の化合物は、対応する置換基がニトリルである対応する
化合物から、完全若しくは部分加水分解により製することができる。１つ又はそ
れ以上の置換基がカルボン酸基であるか又はそれを含有する、本発明の化合物は
、対応する置換基がカルバモイルである対応する化合物から、加水分解により製
することができる。

【０５００】 この加水分解は、当技術分野で周知の方法、例えば、J. March による「最新
有機化学（Advanced Organic Chemistry）」第３版（ウィリー・インターサイエ
ンス）６−５章、及びその参考文献に記載の方法により実行しうる。好便にも、
この加水分解は、高温で、濃塩酸を用いて実行され、生成物は塩酸塩を形成する
。

【０５０１】 方法５ 所望されるか又は必要である場合、式（Ｉ）の化合物は、その製剤的に許容され
る塩へ変換される。式（Ｉ）の化合物の製剤的に許容される塩は、好便にも、式
（Ｉ）の化合物の溶液と所望の酸若しくは塩基の溶液を適宜一緒に混合すること
によって製造され得る。この塩は溶液から沈殿され、濾過により採取され、溶媒
の蒸発によるような他の手段により採取され得る。

【０５０２】 他の方法 １つ又はそれ以上の置換基がＣｌ若しくはＢｒであるか又はそれを含有する式（
Ｉ）の化合物は、脱ハロゲン化され、エタノールのような好適な溶媒において、
約２０℃、及び上昇気圧で、好適にもパラジウム／活性炭触媒を使用する水素化
分解により、式（Ｉ）の対応するヒドリド化合物を生じ得る。

【０５０３】 １つ又はそれ以上の置換基がカルボキシ基であるか又はそれを含有する式（Ｉ
）の化合物は、加水分解され得てカルボキシ部分を生じる基、例えば、対応する
ニトリル又はエステルを有する化合物から、還流での加水分解、例えば濃ＨＣｌ
を用いた酸加水分解により、製造され得る。他の加水分解法も当技術分野でよく
知られている。

【０５０４】 １つ又はそれ以上の置換基がアミド部分であるか又はそれを含有する式（Ｉ）
の化合物は、選択されるアミンとの直接カップリング、又は対応する酸塩化物又
は混合無水物をはじめに形成した後のアミンとの反応に次ぐ適宜脱保護化のいず
れかによる、所望により保護化された対応するカルボキシ化合物の反応により製
し得る。そのような変換は当技術分野でよく知られている。

【０５０５】 芳香環に付いた親電子基を有する式（Ｉ）の化合物のあるものは、対応するヒ
ドリド化合物の親電子試薬との反応により製することができる。 例えば、発煙硫酸のような標準試薬及び方法を使用する芳香環のスルホニル化
により、対応するスルホン酸が得られる。次いで、これは、当技術分野で知られ
た方法により、例えばはじめに酸塩化物へ変換した後にアミンと反応させること
によって、対応するスルホンアミドへ所望により変換され得る。

【０５０６】 本発明の化合物のあるものは、当技術分野で周知の方法、例えば以下の「製法
」のあるものに記載の方法によって、例えば芳香環へ付いたブロモ置換基を含有
する化合物の、例えばボロン酸誘導体、オレフィン、又はスズ誘導体との反応に
よるような交差カップリング技術により製し得る。

【０５０７】 親電子置換基を有する本発明の化合物のあるものは、ハロゲン／金属交換に後
続する親電子試薬との反応を介して製し得る。例えば、ブロモ置換基は、ｎ−ブ
チルリチウムのようなリチウム化試薬に次いで、ＣＯ₂、アルデヒド又はケトン
のような親電子試薬と反応し、それぞれ酸又はアルコールを生じ得る。

【０５０８】 本発明の化合物は、本明細書の「方法」及び「実施例」に記載の方法か、又は
当技術分野で既知の方法を使用する、その適切な適用のいずれかにより入手可能
である。本明細書で述べられる合成変換方法が、所望の化合物が効率的に組立て
られ得るように、様々な異なる順序で実行し得ることを理解されたい。当業者は
、所定の標的化合物の合成について最も効率的な合成順序に関してその判断及び
技量を行使し得る。

【０５０９】 実験の部 一般事項 融点（ｍｐ）は、Gallenkamp 又は電熱融点測定装置のいずれかを使用して決定
し、補正しない。プロトン核磁気共鳴（¹Ｈ ＮＭＲ）データは、Ｖａｒｉａｎ
Ｕｎｉｔｙ ３００又はＶａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ ４００を使用して得た。
低解像質量スペクトル（ＬＲＭＳ）データは、Ｆｉｓｏｎｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅ
ｎｔｓ Ｔｒｉｏ １０００（熱スプレー）又はＦｉｎｎｉｇａｎ Ｍａｔ．Ｔ
ＳＱ ７０００（ＡＰＣＩ）に記録した。元素燃焼分析値（Anal．分析値）は、
Ｅｘｅｔｅｒ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ＵＫ社により決定された。

【０５１０】 カラムクロマトグラフィーは、メルクシリカゲル６０（０．０４０〜０．０６
３ｍｍ）を使用して実施した。逆相カラムクロマトグラフィーは、三菱 ＭＣＩ
ゲル（ＣＨＰ ２０Ｐ）を使用して実施した。

【０５１１】 以下の略号を用いた：アンモニア溶液特級（０．８８０ＮＨ₃）；アゾジカル
ボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ）；１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）；Ｎ，Ｎ−
ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）；トリフル
オロ酢酸（ＴＦＡ）；トルエン（ＰｈＭｅ）；メタノール（ＭｅＯＨ）；酢酸エ
チル（ＥｔＯＡｃ）；プロパノール（ＰｒＯＨ）。他の略号も標準的な化学の慣
例に従って使用する。

【０５１２】 アドバンスト・ケミカル・デヴェロップメント社から入手可能なＩＵＰＡＣ
ＮａｍｅＰｒｏソフトウェアを使用して、いくつかの命名を割り当てた。塩基感
受性の基（例えば、エステル）に隣接して４級中心を含有する中間体のグアニル
化を含む以下のいくつかの製法のあとでは、ある種のラセミ化が起こり、そのよ
うな場合、鏡像異性体の混合物が生成される場合があることが注目された。

【０５１３】 実施例 実施例１： （ａ）２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル （ｂ）２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝安息香酸・塩酸塩

【０５１４】

【化２７】

【０５１５】 ＮａＨ（１８ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、０．６ミリモル）のＤＭＳＯ（３
．０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（６０ｍｇ，０．６３ミリモル）を一時に加
え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。２−｛［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（１
１０ｍｇ，０．２４ミリモル）を加え、この混合物を１００℃で２４時間加熱し
た。冷やした混合物を水へ注ぎ、ＥｔＯＡｃ（ｘ３）で抽出し、次いで、合わせ
た有機相を塩水で洗浄し、真空で蒸発させた。ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８
０ＮＨ₃（９７：３：０．３〜９５：５：０．５）を溶出液として使用するシリ
カゲルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、黄色の樹脂（３６ｍｇ
）を得た。この樹脂を水に懸濁し、エーテル（ｘ３）で抽出した。合わせた有機
相を塩水で洗浄し、真空で蒸発させて、黄褐色の固形物として２−｛［（４−ク
ロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息香酸ｔ
ｅｒｔ−ブチル（３０ｍｇ，０．０６３ミリモル）を得た。

【０５１６】

【化２８】

【０５１７】 次いで、このシリカゲルカラムをＭｅＯＨで溶出させ、合わせた洗液を真空で
濃縮して、白色がかった固形物を得た。ＨＣｌガスが飽和したＥｔＯＨ溶液にこ
れを溶かし、この混合物を室温で撹拌した。溶媒を真空で蒸発させ、次いで残渣
をＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨに溶かし、濾過し、再び真空で蒸発させた。この固形物
を水で粉砕し、次いで乾燥させて、薄黄色の固形物として２−｛［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息香酸・塩酸
塩（１１．８ｍｇ，０．０２ミリモル）を得た。

【０５１８】

【化２９】

【０５１９】 実施例２： （ａ）３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル （ｂ）３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝安息香酸・トリフルオロ酢酸塩

【０５２０】

【化３０】

【０５２１】 ＮａＨ（４４ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．４７ミリモル）のＤＭＳＯ（
４．０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１４０ｍｇ，１．４７ミリモル）を一時
に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。３−｛［（１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル
（２８０ｍｇ，０．５９ミリモル）のＤＭＳＯ（２．０ｍＬ）溶液を加え、この
混合物を９０℃で１８時間加熱した。冷やした混合物を水（５０ｍＬ）へ注ぎ、
ＥｔＯＡｃ（ｘ３）で抽出し、次いで、合わせた有機相を真空で蒸発させた。Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９７：３：０．３〜９５：５：０．５
）を溶出液として使用するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を
精製し、茶褐色の固形物として３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イ
ソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（６４ｍｇ，０
．１３ミリモル）を得た。

【０５２２】

【化３１】

【０５２３】

【化３２】

【０５２４】 ３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝安息香酸ｔｅｒｔ−ブチル（３０ｍｇ，０．０６３ミリモル）をＣＦ₃
ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室温で１時間撹拌した。この混
合物をＰｈＭｅで希釈し、溶媒を真空で蒸発させた。残渣をＥｔ₂Ｏで粉砕し、
次いでＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸させて、薄白色の固形物として３−｛［（４−クロロ−
１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−安息香酸・トリ
フルオロ酢酸塩（２９ｍｇ，０．０５５ミリモル）を得た。

【０５２５】

【化３３】

【０５２６】 実施例３： （ａ）３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−４−メトキシ安息香酸メチル （ｂ）３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−４−メトキシ安息香酸・塩酸塩

【０５２７】

【化３４】

【０５２８】 ＮａＨ（５４．９ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．８３ミリモル）のＤＭ
ＳＯ（１０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１７９．８ｍｇ，１．８８ミリモル
）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で２０分加熱した。３−｛［（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−４−メトキシ安
息香酸メチル（２３８．６ｍｇ，０．５４１ミリモル）を加え、この混合物を９
０℃で２４時間加熱した。溶媒を真空で蒸発させ、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．
８８０ＮＨ₃（９７：３：０．３〜９０：１０：１）を溶出液として使用するシ
リカゲルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、薄黄色の固形物とし
て３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−４−メトキシ安息香酸メチル（２０３．２ｍｇ，０．４３ミリモル）
を得た。

【０５２９】

【化３５】

【０５３０】 ３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−４−メトキシ安息香酸メチル（５２．２ｍｇ，０．１１３ミリモル）
の撹拌されたジオキサン（２．５ｍＬ）溶液へ、ＮａＯＨ（０．７ｍＬ，１．０
Ｍ，０．７ミリモル）の水溶液をゆっくりと加え、この混合物を室温へ冷やし、
希塩酸（２ｍＬ，２Ｎ）を加え、溶媒を真空で蒸発させ、ｉ−ＰｒＯＨとの共沸
（ｘ３）により乾燥させた。この固形物を温ｉ−ＰｒＯＨ（ｘ４）で抽出し、合
わせた有機抽出物を濾過し、溶媒を真空で蒸発させた。残渣をＥｔ₂Ｏで粉砕し
、白色の固形物として３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］アミノ｝−４−メトキシ安息香酸・塩酸塩（２９ｍｇ，０．
０５５ミリモル）を得た。

【０５３１】

【化３６】

【０５３２】 実施例４： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］グリシン・トリフルオロ酢酸塩

【０５３３】

【化３７】

【０５３４】 塩酸グアニジン（１４６ｍｇ，１．５２ミリモル）の撹拌されたＤＭＳＯ（２
．０ｍＬ）溶液へＮａＨ（２９ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、０．９７ミリモ
ル）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステ
ル（１５０ｍｇ，０．３８ミリモル）を加え、この混合物を９０℃で９時間加熱
した。冷やした混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（４ｘ２０ｍＬ）
で抽出し、合わせた有機抽出物を水、塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）させ、
真空で蒸発させた。この残渣をＥｔ₂Ｏに溶かし、ＨＣｌのＥｔ₂Ｏ（１Ｍ）溶液
を加えて、粘りのある沈殿物を得た。Ｅｔ₂Ｏをデカントし、残渣をＥｔＯＡｃ
で粉砕し、白色の固形物を得た。ＥｔＯＡｃとの濾過とＥｔ₂Ｏ洗浄により、Ｎ
−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシ
ンｔ−ブチルエステル塩酸塩（６８ｍｇ，０．１４ミリモル）を得た。

【０５３５】

【化３８】

【０５３６】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリ
シンｔ−ブチルエステル塩酸塩（５０ｍｇ，０．１１ミリモル）をＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ
（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室温で１．５時間撹拌した。この混合物
をＰｈＭｅで希釈し、溶媒を真空で蒸発させた。残渣をＥｔ₂ＯとＥｔＯＡｃで
粉砕し、白色の粉末としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］グリシン・トリフルオロ酢酸塩（３６ｍｇ，０．０７３ミ
リモル）を得た。

【０５３７】

【化３９】

【０５３８】 実施例５： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−β−アラニンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−β−アラニン・トリフルオロ酢酸塩

【０５３９】

【化４０】

【０５４０】 ＮａＨ（３５ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．１７ミリモル）の撹拌され
たＤＭＥ（８．０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１４０ｍｇ，１．４６ミリモ
ル）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、３０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−β−アラニンｔ−ブチル
エステル（１５０ｍｇ，０．３７ミリモル）を加え、この混合物を９０℃で１８
時間加熱した。冷やした混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、塩水で洗浄し、乾燥
（ＭｇＳＯ₄）させ、真空で蒸発させた。ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０Ｎ
Ｈ₃（９７：３：０．３〜９５：５：０．５）を溶出液として使用するシリカゲ
ルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、黄色の泡状物としてＮ−［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−β−アラ
ニンｔ−ブチルエステル（７５ｍｇ，０．１７５ミリモル）を得た。

【０５４１】

【化４１】

【０５４２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
β−アラニンｔ−ブチルエステル（３０ｍｇ，０．０７ミリモル）をＣＦ₃ＣＯ₂ Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物を
真空で蒸発させ、ＰｈＭｅ、ＭｅＯＨ、次いでＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸させ、白色の固
形物としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホ
ニル］−β−アラニン・トリフルオロ酢酸塩（３２ｍｇ，０．０６６ミリモル）
を得た。

【０５４３】

【化４２】

【０５４４】 実施例６： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−メチルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−メチルグリシンビス（トリフルオロ酢酸塩）

【０５４５】

【化４３】

【０５４６】 ＮａＨ（７７．５ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、２．５８ミリモル）の撹拌
されたＤＭＥ（２．０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（２８６ｍｇ，２．９９ミ
リモル）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、５０℃で２０分加熱した。Ｎ−［
（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−メチルグリシン
ｔ−ブチルエステル（３９３ｍｇ，０．９７ミリモル）のＤＭＥ（１０ｍＬ）溶
液を加え、この混合物を９０℃で２時間加熱した。溶媒を真空で蒸発させ、ＣＨ ₂ Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９７：３：０．３）を溶出液として使用
するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、薄白色の泡状
物としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］−Ｎ−メチルグリシンｔ−ブチルエステル（２６０ｍｇ，０．６０７ミリモ
ル）を得た。

【０５４７】

【化４４】

【０５４８】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−メチルグリシンｔ−ブチルエステル（２５５ｍｇ，５．９６ミリモル）をＣ
Ｆ₃ＣＯ₂Ｈ（４．０ｍＬ）及びＣＨ₂Ｃｌ₂（２．０ｍＬ）に溶かし、この混合物
を室温で１時間撹拌した。この混合物をＰｈＭｅで希釈し、溶媒を真空で蒸発さ
せて、白色の粉末としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−Ｎ−メチルグリシンビス（トリフルオロ酢酸塩）（３４９
ｍｇ，０．５６ミリモル）を得た。

【０５４９】

【化４５】

【０５５０】 実施例７： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−フェニルグリシン・トリフルオロ酢酸塩

【０５５１】

【化４６】

【０５５２】 塩酸グアニジン（１６４ｍｇ，１．７１ミリモル）の撹拌されたＤＭＥ（５．
０ｍＬ）懸濁液へＮａＨ（３２ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．０７ミリモ
ル）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−フェニルグリシンｔ
−ブチルエステル（２００ｍｇ，０．４３ミリモル）を加え、この混合物を９５
℃で６時間加熱した。溶媒を真空で蒸発させ、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８
０ＮＨ₃（９７：３：０．３〜９５：５：０．５）を溶出液として使用するシリ
カゲルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、黄色の樹脂としてＮ−
［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−フ
ェニルグリシンｔ−ブチルエステル（２８ｍｇ，０．０５７ミリモル）を得た。

【０５５３】

【化４７】

【０５５４】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（２５ｍｇ，０．０５ミリモル）をＣ
Ｆ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室温で２時間撹拌した。この
混合物を真空で濃縮し、ＰｈＭｅと共沸させ、残渣をＥｔ₂Ｏで粉砕し、薄黄色
の粉末としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−Ｎ−フェニルグリシン・トリフルオロ酢酸塩（１３ｍｇ，０．２３ミ
リモル）を得た。

【０５５５】

【化４８】

【０５５６】 実施例８： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（シクロペンチルメチル）−グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（シクロペンチルメチル）グリシン

【０５５７】

【化４９】

【０５５８】 ＮａＨ（１９ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、０．６７ミリモル）の撹拌され
たＤＭＥ（５．０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（９６ｍｇ，１．００ミリモル
）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（シクロペンチルメチ
ル）グリシンｔ−ブチルエステル（１２０ｍｇ，０．２５ミリモル）のＤＭＥ（
５．０ｍＬ）を加え、この混合物を９０℃で３時間加熱した。溶媒を真空で蒸発
させ、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶かし、水性ＮＨ₄Ｃｌ（１５０ｍＬ
）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）させ、真空で蒸発させた。ペンタン−ＥｔＯＡ
ｃ（１００：０〜４０：６０）を溶出液として使用するシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィーにより残渣を精製し、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７
−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（シクロペンチルメチル）−グリシンｔ
−ブチルエステル（６０ｍｇ，０．１２ミリモル）を得た。

【０５５９】

【化５０】

【０５６０】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ
−（シクロペンチルメチル）−グリシンｔ−ブチルエステル（５０ｍｇ，０．１
０ミリモル）のジオキサン（４．０ｍＬ）溶液へＨＣｌ（２ｍＬ，２Ｍ，４ミリ
モル）溶液を加え、この混合物を６０℃で２４時間加熱した。溶媒を真空で蒸発
させ、残渣をジクロロメタンで粉砕し、白色の固形物としてＮ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（シクロペンチル
メチル）グリシン塩酸塩（４０ｍｇ，０．０８０ミリモル）を得た。

【０５６１】

【化５１】

【０５６２】 実施例９： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（シクロヘキシルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（シクロヘキシルメチル）グリシン塩酸塩

【０５６３】

【化５２】

【０５６４】 ＮａＨ（２５ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、０．８２ミリモル）の撹拌され
たＤＭＥ（１０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１２５ｍｇ，１．３１ミリモル
）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（シクロヘキシルメチ
ル）グリシンｔ−ブチルエステル（１６０ｍｇ，０．３３ミリモル）を加え、こ
の混合物を８０〜９０℃で２．５時間加熱した。溶媒を真空で蒸発させ、残渣を
ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶かし、水性ＮＨ₄Ｃｌ（１５０ｍＬ）で洗浄し、
乾燥（ＭｇＳＯ₄）させ、真空で蒸発させた。ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：
０〜４０：６０）を溶出液として使用するシリカゲルのカラムクロマトグラフィ
ーにより残渣を精製し、薄白色の泡状物としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（シクロヘキシルメチル）グリ
シンｔ−ブチルエステル（６５ｍｇ，０．１２７ミリモル）を得た。

【０５６５】

【化５３】

【０５６６】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（シクロヘキシルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル（５３ｍｇ，０．１
０ミリモル）のジオキサン（４．０ｍＬ）溶液へＨＣｌ（２ｍＬ，２Ｍ，４ミリ
モル）溶液を加えた。この混合物を２３℃で１８時間撹拌し、次いで５０〜６０
℃で１６時間加熱した。冷却すると、白色の沈殿物が溶液から析出した。この固
形物を濾過により採取し、ＥｔＯＡｃで粉砕し、次いで真空下で乾燥させて、Ｎ
−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−
（シクロヘキシルメチル）グリシン塩酸塩（２６ｍｇ，０．０５７ミリモル）を
得た。

【０５６７】

【化５４】

【０５６８】 実施例１０： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−ベンジルグリシン・トリフルオロ酢酸塩

【０５６９】

【化５５】

【０５７０】 ＮａＨ（４５ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．５ミリモル）のＤＭＥ（１
１ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１８０ｍｇ，１．８８ミリモル）を一時に加
え、この混合物をＮ₂下、５０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ
−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステ
ル（２２５ｍｇ，０．４６７ミリモル）を加え、この混合物を９０℃で１８時間
加熱した。冷やした混合物を水へ注ぎ込み、ＥｔＯＡｃ（ｘ３）で抽出し、次い
で、合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）させ、真空で蒸発させた
。ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９７：３：０．３）を溶出液とし
て使用するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、黄色の
泡状物としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステル（１７２ｍｇ，０．３４ミ
リモル）を得た。

【０５７１】

【化５６】

【０５７２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステル（５０ｍｇ，０．１０ミリモル）をＣ
Ｆ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室温で１時間撹拌した。この
混合物をＰｈＭｅで希釈し、溶媒を真空で蒸発させた。残渣をＰｈＭｅに次いで
ＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸させて、白色の固形物としてＮ−［（４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−ベンジルグリシン・トリフルオ
ロ酢酸塩（５２ｍｇ，０．１０ミリモル）を得た。

【０５７３】

【化５７】

【０５７４】 実施例１１： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシン・トリフルオロ酢酸塩

【０５７５】

【化５８】

【０５７６】 ＮａＨ（３２ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．０６ミリモル）のＤＭＥ（
１０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１２０ｍｇ，１．２６ミリモル）を一時に
加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシン
ｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ，０．４０５ミリモル）を加え、この混合物を
９０℃で２時間加熱した。冷やした混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、水、塩水で洗
浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）させ、真空で蒸発させた。ペンタン−ＣＨ₂Ｃｌ₂（５
０：５０）に次いでＣＨ₂Ｃｌ₂、そして最後にＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８
０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶出液として使用するシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィーにより残渣を精製し、薄白色の固形物としてＮ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メチルベン
ジル）グリシンｔ−ブチルエステル（９４ｍｇ，０．１８ミリモル）を得た。

【０５７７】

【化５９】

【０５７８】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（３０ｍｇ，０．０５
８ミリモル）をＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室温で１時
間撹拌した。この混合物をＰｈＭｅで希釈し、溶媒を真空で蒸発させた。残渣を
ＰｈＭｅに次いでＥｔ₂Ｏと共沸させて、薄白色の固形物としてＮ−［（４−ク
ロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メチル
ベンジル）グリシン・トリフルオロ酢酸塩（２９ｍｇ，０．０５ミリモル）を得
た。

【０５７９】

【化６０】

【０５８０】 実施例１２： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル・トリフルオロ
酢酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシン・トリフルオロ酢酸塩

【０５８１】

【化６１】

【０５８２】 ＮａＨ（４４ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．４７ミリモル）の撹拌され
たＤＭＥ（２０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（２２５ｍｇ，２．３６ミリモル
）を一時に加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メトキシベンジ
ル）グリシンｔ−ブチルエステル（３００ｍｇ，０．５９ミリモル）を加え、こ
の混合物を９０℃で２時間加熱した。冷やした混合物を水へ注ぎ込み、ＥｔＯＡ
ｃ（ｘ３）で抽出した。次いで、合わせた有機抽出物を水と塩水で洗浄し、乾燥
（Ｎａ₂ＳＯ₄）させ、真空で蒸発させた。ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（８０：２０）
に次いでＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５〜９０：
１０：１）を溶出液として使用するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによ
り残渣を精製し、黄色の半固形物として生成物を得た。この半固形物をＥｔＯＡ
ｃに溶かし、ＴＦＡ（３５μＬ）のＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）溶液を加え、Ｐｈｅ
Ｍｅと共沸させて、溶媒を真空で蒸発させた。残渣をｉ−Ｐｒ₂Ｏで粉砕し、生
じた白色の固形物を濾過により採取し、次いで乾燥させて、Ｎ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メトキシベ
ンジル）グリシンｔ−ブチルエステル・トリフルオロ酢酸塩（２１９ｍｇ，０．
３３８ミリモル）を得た。

【０５８３】

【化６２】

【０５８４】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル・トリフルオロ酢酸
塩（１５０ｍｇ，０．２３１ミリモル）をＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし
、この混合物を室温で４０分撹拌した。この混合物をＰｈＭｅで希釈し、真空で
濃縮し、ＰｈＭｅと共沸させ、残渣をｉ−Ｐｒ₂Ｏで粉砕し、白色の固形物とし
てＮ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシン・トリフルオロ酢酸塩（１２２ｍｇ，０
．２０６ミリモル）を得た。

【０５８５】

【化６３】

【０５８６】 実施例１３： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（３−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（３−メトキシベンジル）グリシン

【０５８７】

【化６４】

【０５８８】 ＮａＨ（３５ｍｇ，８０重量％の鉱油分散液、１．１６ミリモル）のＤＭＥ（
１０ｍＬ）懸濁液へ塩酸グアニジン（１４９ｍｇ，１．５５ミリモル）を一時に
加え、この混合物をＮ₂下、６０℃で３０分加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−メトキシベンジル）グリシ
ンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ，０．３９ミリモル）を加え、この混合物を
９０℃で２時間加熱した。冷やした混合物を水へ注ぎ込み、ＥｔＯＡｃ（ｘ３）
で抽出し、合わせた有機抽出物を水と塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）させ、
真空で蒸発させた。Ｅｔ₂Ｏ−ＥｔＯＡｃに残渣を溶かし、ＨＣｌのＥｔ₂Ｏ（０
．５Ｍ）溶液を加えると、沈殿物が生じた。この固形物を濾過により採取し、Ｅ
ｔＯＡｃで粉砕し、次いで乾燥させて、白色の固形物としてＮ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−メトキシベ
ンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１２４ｍｇ，０．２１ミリモル）
を得た。

【０５８９】

【化６５】

【０５９０】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（３−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（９５ｍｇ，
０．１６７ミリモル）をＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）に溶かし、この混合物を室
温で１時間撹拌した。この混合物をＰｈＭｅで希釈し、溶媒を真空で蒸発させた
。残渣をＥｔＯＡｃに溶かし、室温で１時間撹拌した。生じた沈殿物を濾過によ
り採取し、Ｅｔ₂Ｏで洗浄し、乾燥させ、白色の粉末としてＮ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−メトキシベ
ンジル）グリシン（６５ｍｇ，０．１２８ミリモル）を得た。

【０５９１】

【化６６】

【０５９２】 実施例１４： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（３−クロロベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（３−クロロベンジル）グリシントリフルオロ酢酸塩

【０５９３】

【化６７】

【０５９４】 ＮａＨ（３５ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．１６ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１５０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の懸濁液
中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。Ｎ−［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−クロロベン
ジル）グリシンｔ−ブチルエステル（１８５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を加え、
そして混合物を９０℃で５時間加熱した。冷却した混合物をＥｔ₂Ｏで希釈し、
水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をＥｔ₂
Ｏに溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）を加えて、沈殿物を得た
。溶媒を真空中で蒸発し、そして白色の固体をＥｔＯＡｃで摩砕し、そして次い
で乾燥して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−Ｎ−（３−クロロベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（８
５ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）を得た。

【０５９５】

【化６８】

【０５９６】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（３−クロロベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（６０ｍｇ、０
．１０４ｍｍｏｌ）をＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（０．５ｍＬ）中に溶解し、そして混合物を
室温で１時間撹拌した。混合物をＰｈＭｅで希釈し、そして溶媒を真空中で蒸発
した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し、そして室温で１時間撹拌した。得られた沈殿
物を濾過により収集し、Ｅｔ₂Ｏで洗浄し、そして乾燥して、Ｎ−［（４−クロ
ロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−クロロベ
ンジル）グリシントリフルオロ酢酸塩（３１ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を、白
色の固体として得た。

【０５９７】

【化６９】

【０５９８】 実施例１５： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシン

【０５９９】

【化７０】

【０６００】 塩酸グアニジン（１１８ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（２３ｍｇ、鉱
油中の８０重量％の分散物、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の撹拌
された懸濁液に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した
。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−
メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（１５５ｍｇ、０．３１ｍｍｏ
ｌ）を加え、そして混合物を９０℃で１時間加熱した。冷却した混合物を水に注
ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。次いで混合した有機抽出物を水、食
塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリ
カゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）、
そして次いでＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から
９０：１０：１に）を溶出剤として使用して精製して、黄色のゴム状物を得た。
ｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］−Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエス
テル（８０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、粘着性の黄色の固体として得た。少量
の試料（１０−１５ｍｇ）をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液を
加え、そして溶媒を真空中で蒸発して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ
−ブチルエステル塩酸塩（１８ｍｇ）を、固体として得た。（全ての特性データ
は、ＨＣｌ塩に対するものである）。

【０６０１】

【化７１】

【０６０２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（６５ｍｇ、０．１
２２ｍｍｏｌ）をＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）中に溶解し、そして混合物を室温
で４０分間撹拌した。混合物をＰｈＭｅで希釈し、真空中で濃縮し、そして残留
物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８
８０ＮＨ₃（８３：１５：３）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（４−
クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−メト
キシベンジル）グリシン（１１ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）を、白色の固体とし
て得た。

【０６０３】

【化７２】

【０６０４】 実施例１６： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（２−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（２−ピリジルメチル）グリシン二塩酸塩

【０６０５】

【化７３】

【０６０６】 塩酸グアニジン（２９３ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌを、ＮａＨ（５７ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、１．９２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の撹拌された懸濁
液に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。Ｎ−［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−ピリジルメ
チル）グリシンｔ−ブチルエステル（３７０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＥ
（１０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９０℃で１時間加熱した。溶媒を
真空中で蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、そしてＮＨ₄
Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸
発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯ
Ａｃ（１００：０から２０：８０に）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２
−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル（１２０ｍｇ、０．２４ｍｍｏ
ｌ）を、淡黄色の泡状物として得た。

【０６０７】

【化７４】

【０６０８】 ＨＣｌの溶液（３ｍＬ、２Ｍ、６ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グ
アニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−ピリジルメチル）グ
リシンｔ−ブチルエステル（１１５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のジオキサン（５
．０ｍＬ）中の溶液に加え、そして混合物を６０℃で１８時間加熱した。溶媒を
真空中で蒸発し、残留物を熱ＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−ピリジルメチル）
グリシン二塩酸塩（９５ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の固体
として得た。

【０６０９】

【化７５】

【０６１０】 実施例１７： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（３−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（３−ピリジルメチル）グリシン二塩酸塩

【０６１１】

【化７６】

【０６１２】 塩酸グアニジン（３１７ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌを、ＮａＨ（６２．３ｍｇ、
鉱油中の８０重量％、２．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の撹拌された
懸濁液に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。Ｎ−
［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−ピリジ
ルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル（４００ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）のＤ
ＭＥ（１０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を８０℃で４時間加熱した。溶
媒を真空中で蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、そしてＮ
Ｈ₄Ｃｌ水溶液（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で
蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、（ｉ）ペンタン
−ＥｔＯＡｃ（７０：３０から５０：５０に）、そして次いで（ｉｉ）ＣＨ₂Ｃ
ｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から９０：１０１に）を溶
出剤として使用して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエ
ステル（１０４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体として得た。

【０６１３】

【化７７】

【０６１４】 ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチ
ルエステル（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１．０ｍＬ）中の
撹拌された溶液に加え、そして混合物を２３℃で３．５時間撹拌した。溶媒を真
空中で蒸発し、ＰｈＭｅ及びＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸した。油状の残留物をＥｔＯＡｃ
に溶解し、そしてＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの溶液（３．０ｍＬ）を加え、こ
れにより沈殿物を得た。白色の固体を濾過により収集し、そして乾燥して、Ｎ−
［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（
３−ピリジルメチル）グリシン二塩酸塩（４８ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を得
た。

【０６１５】

【化７８】

【０６１６】 実施例１８： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（４−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（４−ピリジルメチル）グリシン二塩酸塩

【０６１７】

【化７９】

【０６１８】 塩酸グアニジン（３００ｍｇ、３．１４ｍｍｏｌを、ＮａＨ（５９ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、１．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の撹拌された懸濁
液に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。Ｎ−［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−ピリジルメ
チル）グリシンｔ−ブチルエステル（３７９ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）のＤＭＥ
（１０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を８０℃で４時間加熱した。溶媒を
真空中で蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、そしてＮＨ₄
Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸
発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、（ｉ）ペンタン−
ＥｔＯＡｃ（７０：３０から５０：５０に）、そして次いで（ｉｉ）ＣＨ₂Ｃｌ₂ −ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から９０：１０１に）を溶出
剤として使用して繰り返して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−ピリジルメチル）グリシンｔ−
ブチルエステル（９６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を得た。

【０６１９】

【化８０】

【０６２０】 ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチ
ルエステル（８８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１．０ｍＬ）中の撹
拌された溶液に加え、そして混合物を２３℃で３．５時間撹拌した。溶媒を真空
中で蒸発し、ＰｈＭｅ及びＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸した。油状の残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂−
ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ、９：１）に溶解し、そしてＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃ
の溶液（３．０ｍＬ）を加え、これにより沈殿物を得た。白色の固体を濾過によ
り収集し、そして乾燥して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキ
ノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−ピリジルメチル）グリシン二塩酸塩（１８
ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を得た。

【０６２１】

【化８１】

【０６２２】 実施例１９： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］グリシン塩酸塩

【０６２３】

【化８２】

【０６２４】 ＮａＨ（３０ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．０１ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１５４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（６．０ｍＬ）中の撹拌
された懸濁液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱し
た。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（
１Ｒ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．
４０ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（３．０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９５℃
で５時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラム
クロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（５０：５０から３３：６６に）
を溶出剤として使用して精製して、ＣＨ₂Ｃｌ₂からの蒸発を繰り返した後、Ｎ−
［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［
（１Ｒ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル（１２５ｍｇ、０
．２３ｍｍｏｌ）を、淡黄色の泡状物として得た。

【０６２５】

【化８３】

【０６２６】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル（１００ｍ
ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの溶液（７．０ｍＬ）
中に溶解し、そして混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、
そして残留物をＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］グ
リシン塩酸塩（７５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【０６２７】

【化８４】

【０６２８】 実施例２０： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル］グリシン塩酸塩

【０６２９】

【化８５】

【０６３０】 ＮａＨ（３０ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．０１ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１５４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（６．０ｍＬ）中の撹拌
された懸濁液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱し
た。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（
１Ｓ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．
４０ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（３．０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９５℃
で５時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラム
クロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（５０：５０から３３：６６に）
を溶出剤として使用して精製して、ＣＨ₂Ｃｌ₂からの蒸発を繰り返した後、Ｎ−
［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［
（１Ｓ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル（１２８ｍｇ、０
．２３ｍｍｏｌ）を、淡黄色の泡状物として得た。

【０６３１】

【化８６】

【０６３２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル］グリシンｔ−ブチルエステル（１００ｍ
ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの溶液（４．０ｍＬ）
中に溶解し、そして混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、
そして残留物をＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル］グ
リシン塩酸塩（７２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【０６３３】

【化８７】

【０６３４】 実施例２１： （ａ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］−Ｌ−アラニン塩酸塩

【０６３５】

【化８８】

【０６３６】 ＮａＨ（３０ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．０１ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１５４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５．０ｍＬ）中の撹拌
された懸濁液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で４５分間加熱し
た。Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＤ
ＭＥ（２．０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９５℃で４時間加熱した。
溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
で、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（５０：５０から２０：８０に）を溶出剤として使用
して精製して、ＣＨ₂Ｃｌ₂からの蒸発を繰り返した後、Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニ
ンｔ−ブチルエステル（１２０ｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）を、淡黄色の泡状物と
して得た。

【０６３７】

【化８９】

【０６３８】 Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）
スルホニル］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏ
ｌ）を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの溶液（５．０ｍＬ）中に溶解し、そして
混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、ＥｔＯＡｃと共沸
して、Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］−Ｌ−アラニン塩酸塩（７７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、白
色の粉末として得た。

【０６３９】

【化９０】

【０６４０】 実施例２２： （ａ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）−Ｎ−［（４−クロロ−１−グア
ニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］グリシン塩酸塩

【０６４１】

【化９１】

【０６４２】 無水のＫ₂ＣＯ₃（８８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、そして次いでブロモ酢酸ｔ
−ブチル（５６μＬ、０．３８ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル（１３２
ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、
そして混合物を２３℃で１８時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）
で希釈し、食塩水（１５０ｍＬ）、水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ ₄ ）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０から５０：５０に）を溶出剤として
使用して精製して、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）−Ｎ−［（４−クロ
ロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエ
ステル（１０１ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、淡黄色の泡状物として得た。

【０６４３】

【化９２】

【０６４４】 ＨＣｌの溶液（３ｍＬ、２Ｍ、６ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グ
アニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル
メチル）グリシンｔ−ブチルエステル（９０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のジオキ
サン（４．０ｍＬ）中の溶液に加えた。混合物を２３℃で１８時間撹拌し、そし
て次いで７０℃に加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物を乾燥して、
Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキ
ノリニル）スルホニル］グリシン塩酸塩（６１ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）を、
白色の固体として得た。

【０６４５】

【化９３】

【０６４６】 実施例２３： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−アラニントリフルオロ酢酸塩

【０６４７】

【化９４】

【０６４８】 ＮａＨ（３７ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．２３ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１８９ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（６ｍＬ）中の撹拌され
た溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。１
−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−
アラニンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を加え、そして
混合物を９０℃で７時間加熱した。冷却した混合物を真空中で濃縮し、残留物を
水に懸濁し、そしてＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。混合した有機抽出
物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして溶媒を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲ
ルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（
９５：５：０．５）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエ
ステル（１６０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【０６４９】

【化９５】

【０６５０】 ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル（約１５０ｍ
ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３．０ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え
、そして混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を真空中で蒸発し、ＰｈＭｅ及
びＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸し、そして次いでＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニントリフル
オロ酢酸塩（６２ｍｇ、０．１２６ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【０６５１】

【化９６】

【０６５２】 実施例２４： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−アラニンメチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−アラニン塩酸塩

【０６５３】

【化９７】

【０６５４】 ＮａＨ（３５ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．１７ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１７９ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の撹拌さ
れた溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で４５分間加熱した。
１−｛Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝
−Ｄ−アラニンメチルエステル（１７０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を加え、そし
て混合物を９０℃で６４時間加熱した。冷却した混合物を水中に注ぎ、そしてＥ
ｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。混合した有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄
）し、そして溶媒を真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグ
ラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（６６：３３から０：１００に）を溶出剤と
して使用して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−Ｄ−アラニンメチルエステル（２２ｍｇ、０．０５７ｍｍ
ｏｌ）を、黄色の泡状／油状物として得た。

【０６５５】

【化９８】

【０６５６】 ＮａＯＨの溶液（１ｍＬ、２Ｍ、２ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アラニンメチルエステル
（１７ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）中の溶液に加え、そし
て混合物を６０℃で１８時間加熱した。冷却した混合物を希釈ＨＣｌ（２Ｍ）で
中和し、ＭｅＯＨを真空中で蒸発し、そして残留物を水（１０ｍＬ）で摩砕した
。固体を水で洗浄しながら濾過により収集し、そして高真空で乾燥して、Ｎ−［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アラ
ニン塩酸塩（９ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の粉末として得
た。

【０６５７】

【化９９】

【０６５８】 実施例２５： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−Ｌ−バリンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−バリントリフルオロ酢酸塩

【０６５９】

【化１００】

【０６６０】 ＮａＨ（３５ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．１７ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１７６ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（４ｍＬ）中のＮ₂下の
撹拌された溶液中に一度に加え、そして混合物を６０℃で３０分間加熱した。１
−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−
バリンｔ−ブチルエステル（１６１ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を一度に加え、そ
して混合物を８０℃で１８時間加熱した。冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に
注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機抽出物を食塩
水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をＥｔ₂
Ｏに溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）を加え、これにより白色
の沈殿物を得た。Ｅｔ₂Ｏをデカントし、そして固体の残留物をＭｅＣＮ中に溶
解し、そして約０℃に冷却し、これにより沈殿物を得た。固体を濾過により収集
し、そして次いで乾燥して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−バリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（３
６ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。混合した有機母液の
蒸発によりゴム状物を得て、これをシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、
ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤として使
用して精製して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル
）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−バリンｔ−ブチルエステル（１０４ｍｇ、０．２
２８ｍｍｏｌ）を得た。（試料は、塩酸塩として特徴付けされた。）

【０６６１】

【化１０１】

【０６６２】 １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−Ｌ−バリンｔ−ブチルエステル（１０４ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）
を、ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．０ｍＬ）中に溶解し、そして混合物を室温で１時間撹拌
した。混合物をＰｈＭｅ（２５ｍＬ）で希釈し、そして真空中で濃縮した。残留
物を少量のＥｔＯＡｃを含むＥｔ₂Ｏで再結晶させて、白色の固体を得た。次い
でこの固体を水で摩砕し、そして乾燥して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−バリントリフルオロ酢
酸塩（３９ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を得た。

【０６６３】

【化１０２】

【０６６４】 実施例２６： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−Ｄ−バリンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−バリン塩酸塩

【０６６５】

【化１０３】

【０６６６】 ＮａＨ（３５ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．１７ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１７６ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２．５ｍＬ）中のＮ ₂ 下の撹拌された溶液中に一度に加え、そして混合物を２３℃で３０分間加熱し
た。１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝
−Ｄ−バリンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を一度に加
え、そして混合物を９０℃で３時間加熱した。冷却した混合物を水に注ぎ、Ｅｔ
ＯＡｃで抽出し、そして混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ ₄ ）し、そして真空中で蒸発した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ中
のＨＣｌの溶液（０．５ｍＬ、１Ｍ）を加え、これにより白色の沈殿物を得た。
残留物の、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶
出剤として使用するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーの精製により、産物
を得て、これを再びＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）で処理して、１−｛［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｄ
−バリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（７６．６ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）を得
た。

【０６６７】

【化１０４】

【０６６８】 １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−Ｄ−バリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（６１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ
）を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの０℃の溶液（１０ｍＬ）中に溶解し、そし
て混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、残留物をＥｔＯＡ
ｃで抽出し、そして次いで有機溶液を真空中で濃縮し、そして乾燥して、１−｛
［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝
−Ｄ−バリン塩酸塩（２４．３ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体と
して得た。

【０６６９】

【化１０５】

【０６７０】 実施例２７： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシン塩酸塩

【０６７１】

【化１０６】

【０６７２】 ＮａＨ（５８ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．２７ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１９１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５．０ｍＬ）中のＮ₂
下の撹拌された溶液中に一度に加え、そして混合物を２３℃で３０分間加熱した
。１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−
Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシンｔ−ブチルエステル（２２５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）
のＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中の溶液を一度に加え、そして混合物を９０℃で９時
間加熱した。２回目のＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）中のグアニジン（０．６７ｍｍｏ
ｌ）［塩酸グアニジン（１００ｍｇ）及びＮａＨ（２０ｍｇ）から調製］を加え
、そして混合物を９０℃で更に８時間加熱した。冷却した混合物を水に注ぎ、Ｅ
ｔＯＡｃで抽出し、そして混合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｍ
ｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し、そしてＥｔ ₂ Ｏ中のＨＣｌの溶液（１．５ｍＬ、１Ｍ）を加え、これにより白色の沈殿物を
得た。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、１−｛［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｄ
−ｔｅｒｔ−ロイシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（２２２ｍｇ、０．４３ｍｍｏ
ｌ）を得た。

【０６７３】

【化１０７】

【０６７４】 １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１８８ｍｇ、０
．３６ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの０℃の溶液（３０ｍＬ）中
に溶解し、そして混合物を室温で５時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、そ
して残留物をＥｔＯＡｃと加熱して、白色の固体を得た。熱有機溶液をデカント
し、そして固体を真空中で乾燥して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシン塩酸塩（
１０９．３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０６７５】

【化１０８】

【０６７６】 実施例２８： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−フェニルアラニントリフルオロ酢酸塩

【０６７７】

【化１０９】

【０６７８】 ＮａＨ（２２ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、０．７３ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（７６．７ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５．０ｍＬ）中の
撹拌された懸濁液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で２０分間加
熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−
フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（１０３ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加え
、そして混合物を９５℃で１７時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残
留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．
８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から８０：２０：２に）を溶出剤として使用し
て精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−Ｌ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（３４．７ｍｇ、０．０６
９ｍｍｏｌ）を、黄色の樹脂状物として得た。

【０６７９】

【化１１０】

【０６８０】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｌ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（３０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）を
、ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（２．５ｍＬ）中に溶解し、そして混合物を室温で２．５時間撹
拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂及びＰｈＭｅで希釈し、真空中で濃縮し、ＰｈＭｅ
と共沸し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グア
ニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−フェニルアラニントリフルオ
ロ酢酸塩（２４．４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０６８１】

【化１１１】

【０６８２】 実施例２９： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｏ−メチル−Ｄ−セリン塩酸塩

【０６８３】

【化１１２】

【０６８４】 ＮａＨ（５０ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．６６ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（２６０ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４ｍＬ）中のＮ₂下
の撹拌された溶液中に一度に加え、そして混合物を５０℃で３０分間加熱した。
１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｏ
−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル（３００ｍｇ、０．６８９ｍｍｏｌ）
を一度に加え、そして混合物を９０℃で８時間加熱した。冷却した混合物を水（
５０ｍＬ）中に注ぎ、水溶液をＥｔＯＡｃ（×２）で抽出し、そして混合した有
機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）した。溶媒を真空中で蒸発
し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−Ｍ
ｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤として使用して精製して
、所望の産物を得た。この物質をＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１．０ｍＬ、１Ｍ
）で処理し、溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏ（×２）で摩砕し
て、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］アミノ｝−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１８ｍｇ、０
．０３６ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０６８５】

【化１１３】

【０６８６】 １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１８ｍｇ、０．
０３６ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの溶液（５ｍＬ）中に溶解し
、そして混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、そして残留
物をＥｔＯＡｃ（×３）で摩砕して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−ｔｅｒｔ−ロイシン塩酸塩（
９ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の固体として得た。

【０６８７】

【化１１４】

【０６８８】 実施例３０： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−アスパラギン酸ジ−ｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−アスパラギン酸塩酸塩

【０６８９】

【化１１５】

【０６９０】 塩酸グアニジン（１９０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（４７ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、１．５７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（７ｍＬ）中の撹拌された懸濁液
に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。１−｛［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｄ−アスパラ
ギン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（２５０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、そし
て混合物を還流で１８時間加熱した。冷却した混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水
、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして溶媒を真空中で蒸発した。残
留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．
８８０ＮＨ₃（９７：３：０．３）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アスパ
ラギン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（５０ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）を黄色の固
体として得た。

【０６９１】

【化１１６】

【０６９２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｄ−アスパラギン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（５０ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）
を、ＨＣｌで飽和したＥｔＯＡｃの溶液（１０ｍＬ）中に溶解し、そして混合物
を室温で４時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、そして残留物をＰｈＭｅで
、そして次いでＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７
−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アスパラギン酸塩酸塩（２９ｍｇ、０．
０６２ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の固体として得た。

【０６９３】

【化１１７】

【０６９４】 実施例３１： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−プロリンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−プロリン塩酸塩

【０６９５】

【化１１８】

【０６９６】 ＮａＨ（３５ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．１６ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１７７ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）中の撹拌され
た溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で４５分間加熱した。１
−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｌ−
プロリンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２ｍ
Ｌ）中の溶液を加え、そして混合物を９５℃で４時間加熱した。溶媒を真空中で
濃縮し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−
ＥｔＯＡｃ（８０：２０から０：１００に）を溶出剤として使用して精製し、続
いてＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキ
ノリニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンｔ−ブチルエステル（１５３ｍｇ、０．
３２ｍｍｏｌ）を、淡黄色の泡状物として得た。

【０６９７】

【化１１９】

【０６９８】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｌ−プロリンｔ−ブチルエステル（６０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで
飽和されたＥｔＯＡｃの溶液（５．０ｍＬ）中に溶解し、そして混合物を室温で
１時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、ＥｔＯＡｃと共沸し、そして残留物
をＣＨ₂Ｃｌ₂で摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン塩酸塩（４４ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）
を、白色の粉末として得た。

【０６９９】

【化１２０】

【０７００】 実施例３２： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−プロリンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−プロリン塩酸塩

【０７０１】

【化１２１】

【０７０２】 塩酸グアニジン（２２０ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（５５ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、１．８３ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（８ｍＬ）中の撹拌された懸濁液
に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。１−｛［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｄ−プロリン
ｔ−ブチルエステル（２５０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を
乱流で５時間加熱した。冷却した混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、食塩水で洗
浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして溶媒を真空中で蒸発した。残留物をシリカ
ゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃
（９７：３：０．３）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−
１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリンｔ−ブチル
エステル（２００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【０７０３】

【化１２２】

【０７０４】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｄ−プロリンｔ−ブチルエステル（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで
飽和したＥｔＯＡｃの溶液（１０ｍＬ）中に溶解し、そして混合物を室温で２．
５時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、ＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸して、Ｎ−［（４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン
塩酸塩（４０ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【０７０５】

【化１２３】

【０７０６】 ある条件で上記の調製を繰り返している間に、ある程度のラセミ化が起こって
いることに注目した。以下に例示するように、グアニル化／加水分解の順序を逆
転することによって、実施例３２（ｂ）に対する別の経路を開発した。

【０７０７】 １．加水分解

【０７０８】

【化１２４】

【０７０９】 （２Ｓ）−１−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
２−ピロリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５０．０ｇ、０．１１６ｍｏｌ）
を、濃ＨＣｌ（１２Ｍ、２００ｍｌ）中に溶解し、そして３．５時間撹拌した。
水（２００ｍｌ）を３０分間にわたって加え、そして得られた白色の沈殿物を更
に０．５時間撹拌し、濾過し、そして水（３×１００ｍｌ）で洗浄した。真空下
で乾燥して、（２Ｓ）−１−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−２−ピロリジンカルボン酸を、白色の固体（４２．９ｇ、０．１１４
ｍｏｌ）として得た。

【０７１０】

【化１２５】

【０７１１】 細管電気泳動を使用してキラル分析を行い、９７．４１％の鏡像異性体純度が
示された。 ２．遊離酸のグアニル化

【０７１２】

【化１２６】

【０７１３】 ＤＭＥ（２１０ｍｌ）中の、カリウムｔ−ブトキシド（４９．０ｇ、．０４３
７ｍｏｌ）及びグアニジン・ＨＣｌ（４２．８ｇ、０．４４８ｍｏｌ）を、窒素
下の還流で２０分間加熱した。（２Ｓ）−１−［（１，４−ジクロロ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］−２−ピロリジンカルボン酸（４２．０ｇ、０．１１
２ｍｏｌ）を加え、そして還流での加熱を５．５時間継続した。水（４２０ｍｌ
）を加え、そして混合物を濃ＨＣｌでｐＨ＝５に酸性化して、固体を得て、これ
を濾過により取り出し、水、ＤＭＥ（１：１、２×７５ｍｌ）及び水（２×７５
ｍｌ）で洗浄し、そして乾燥して、表題化合物（ｂ）を、黄色の固体（４０．７
１ｇ、０．１０２ｍｏｌ）として得た。

【０７１４】

【化１２７】

【０７１５】 細管電気泳動を使用してキラル分析を行い、９９．７６％（ｎ＝２）の鏡像異
性体純度が示された。

【０７１６】 実施例３３： ４−クロロ−１−グアニジノ−７−｛［（２Ｒ）−（ヒドロキシメチル）−１−
ピロリジニル］スルホニル｝イソキノリン塩酸塩

【０７１７】

【化１２８】

【０７１８】 ＮａＨ（２６ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、０．８７ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１２６ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の撹拌さ
れた溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の５０℃で２０分間加熱した。
１，４−ジクロロ−７−｛［（２Ｒ）−（ヒドロキシメチル）−１−ピロリジニ
ル］スルホニル｝イソキノリン（１２０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（
３ｍＬ）中の溶液を一度に加え、そして混合物を８０−９０℃で１時間加熱した
。冷却した混合物を、水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、そして次いで
混合した有機抽出物を水（×３）、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そ
して真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から８０：２０：５
に）を溶出剤として使用して精製して、所望の産物を、オフホワイト色の粘着性
の固体として得た。この物質をＭｅＯＨに溶解し、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（
１Ｍ）を加え、そして溶媒を真空中で蒸発した。残留物をＭｅＯＨから再結晶し
て、４−クロロ−１−グアニジノ−７−｛［（２Ｒ）−（ヒドロキシメチル）−
１−ピロリジニル］スルホニル｝イソキノリン塩酸塩（４３ｍｇ、０．１０ｍｍ
ｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０７１９】

【化１２９】

【０７２０】 実施例３４： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝イソ酪酸メチルエステル （ｂ）２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝イソ酪酸塩酸塩

【０７２１】

【化１３０】

【０７２２】 ＮａＨ（３２ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．０７ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１６７ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の撹拌され
た溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の５０℃で２０分間加熱した。１
−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝イソ酪
酸メチルエステル（１６１ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を一度に加え、そして混合
物を８０℃で６．５時間加熱した。冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、
ＥｔＯＡｃ（２×１００、２×２５ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機抽出物
を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留
物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、（ｉ）ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−
０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）、（ｉｉ）ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７０
：３０）そして次いで（ｉｉｉ）ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９
０：１０：０１）を溶出剤として使用して繰り返して精製して、産物を黄色の油
状物として得た。Ｅｔ₂Ｏにより摩砕して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝イソ酪酸メチルエステル（２
３ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【０７２３】

【化１３１】

【０７２４】 ＮａＯＨの溶液（１ｍＬ、２Ｍ、２ｍｍｏｌ）を、１−｛［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝イソ酪酸メチルエス
テル（１６．５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）中の溶液
に加え、そして混合物を４０−５０℃で１６時間加熱した。冷却した混合物を希
釈ＨＣｌ（０．５ｍＬ、２Ｍ）で中和して、沈殿物を得た。多量の水で洗浄しな
がら固体を濾過により収集し、そして次いで濃ＨＣｌに溶解した。溶媒を真空中
で蒸発し、ＰｈＭｅで共沸し、そして次いで高真空下で乾燥して、１−｛［（４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝イソ酪
酸塩酸塩（１２ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を、薄いクリーム色の固体として得
た。

【０７２５】

【化１３２】

【０７２６】 実施例３５： ２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝−２−メチルプロパンアミド塩酸塩

【０７２７】

【化１３３】

【０７２８】 ＮａＨ（４１ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．３６ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（２１０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中のＮ₂下
の撹拌された溶液中に一度に加え、そして混合物を２３℃で３０分間加熱した。
２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−２
−メチルプロパンアミド（２２５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を一度に加え、そし
て混合物を９０℃で８時間加熱した。冷却した混合物を真空中で部分的に濃縮し
、そして残留物を水中に注いだ。水溶液をＥｔＯＡｃ（×４）で抽出し、そして
混合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）した。溶媒を真
空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ ₂ Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤として使用し
て精製して、所望の産物を得た。この物質をＭｅＯＨに溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ
中のＨＣｌの溶液（１．０ｍＬ、１Ｍ）で処理して、２−｛［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−２−メチルプロパ
ンアミド塩酸塩（８６ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の粉末と
して得た。

【０７２９】

【化１３４】

【０７３０】 実施例３６： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロブタンカルボン酸エチル （ｂ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロブタンカルボン酸塩酸塩

【０７３１】

【化１３５】

【０７３２】 ＮａＨ（３７ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．２４ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１８９ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中の撹拌さ
れた溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。
１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シ
クロブタンカルボン酸エチル（２００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を一度に加え、
そして混合物を８０℃で１０時間加熱した。冷却した混合物を水中に注ぎ、Ｅｔ
ＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ ₄ ）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（５０：５０から０：１００に）を溶出剤として
使用して精製して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］アミノ｝シクロブタンカルボン酸エチル（１５０ｍｇ、０．３
４ｍｍｏｌ）を、黄色の粉末として得た。

【０７３３】

【化１３６】

【０７３４】 ＮａＯＨの溶液（５ｍＬ、２Ｍ、１０ｍｍｏｌ）を、１−｛［（４−クロロ−
１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロブタンカル
ボン酸エチル（１００ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の溶液
に加え、そして混合物を５５℃で６時間加熱した。冷却した混合物を希釈ＨＣｌ
（５ｍＬ、２Ｍ）で中和して、沈殿物を得て、そしてＭｅＯＨを真空中で蒸発し
た。多量の水で洗浄しながら固体を濾過により収集し、そして高真空下で乾燥し
て、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］アミノ｝シクロブタンカルボン酸塩酸塩（１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を
得た。

【０７３５】

【化１３７】

【０７３６】 実施例３７： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］シクロ−ロイシンエチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］シクロロイシン （ｃ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］シクロロイシントリフルオロ酢酸塩

【０７３７】

【化１３８】

【０７３８】 ＮａＨ（１．１２ｇ、鉱油中の８０重量％分散物、３７．３ｍｍｏｌ）を、塩
酸グアニジン（５．８５ｇ、５９．４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３２０ｍＬ）中の
撹拌された懸濁液中に分割して加え、そして混合物をＮ₂下の３０−５０℃で３
０分間加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−シクロロイシンエチルエステル（６．２ｇ、１４．９ｍｍ
ｏｌ）を一度に加え、そして混合物を８０℃で８時間加熱した。冷却した混合物
を真空中で約１６０ｍＬまで濃縮し、そして水（８００ｍＬ）中に注いだ。水性
混合物をＥｔＯＡｃ（４×１５０ｍＬ）で抽出し、そして次いで混合した有機抽
出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。
残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０
．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から９０：１０：１に）を溶出剤として使用
して精製し、そして次いでＥｔＯＡｃから再結晶して、Ｎ−［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］シクロ−ロイシンエチルエス
テル（１．４３ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【０７３９】

【化１３９】

【０７４０】 ＮａＯＨの溶液（７５ｍＬ、２Ｍ、１５０ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］シクロロイシンエチルエ
ステル（１．３９ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（７５ｍＬ）中の溶液に加
え、そして混合物を４０−５０℃で２４時間加熱した。冷却した混合物を希釈Ｈ
Ｃｌ（７５ｍＬ、２Ｍ）で中和して、沈殿物を得て、そしてＭｅＯＨを真空中で
蒸発した。多量の水で洗浄しながら固体を濾過により収集し、そして高真空下で
乾燥して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホ
ニル］シクロロイシン（１．２７ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として
得た。

【０７４１】

【化１４０】

【０７４２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］シ
クロロイシン（８ｍｇ）を、ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（約１ｍＬ）中に溶解し、そして混合
物を真空中で蒸発し、ＰｈＭｅと共沸した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏ及びＥｔ₂Ｏで
摩砕して、白色の固体を得た。固体をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、そして濾液を
真空中で蒸発して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル
）スルホニル］シクロロイシントリフルオロ酢酸塩（１２ｍｇ）を得た。

【０７４３】

【化１４１】

【０７４４】 実施例３８： １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）シクロペンタンカルボキサミン塩酸塩

【０７４５】

【化１４２】

【０７４６】 （ＣＯＣｌ）₂（６０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）、そして次いでＤＭＦ（３滴
）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］シクロロイシン塩酸塩（１５０ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１
５ｍＬ）中の撹拌された懸濁液に加え、そして混合物を２３℃で３０分間撹拌し
た。溶媒を真空中で蒸発し、ＰｈＭｅと共沸して、対応する酸の塩を得た。この
物質をＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍＬ）中に再溶解し、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍＬ）中
の２−ヒドロキシエチルアミン（４００μＬ）の撹拌された溶液に加え、そして
混合物を１時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルの
カラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０
：１０：１）を溶出剤として使用して精製して、１−｛［（４−クロロ−１−グ
アニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｎ−（２−ヒドロキシ
エチル）シクロペンタンカルボキシアミンを得た。この物質をＥｔＯＡｃ−Ｅｔ
ＯＨ中に溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌ溶液（１Ｍ）を加え、これにより沈
殿物を得た。溶媒をデカントし、そして固体をＥｔ₂Ｏで摩砕し、濾過により収
集し、そして乾燥して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］アミノ｝−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）シクロペンタン
カルボキシアミン塩酸塩（７７ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を、白色の固体とし
て得た。

【０７４７】

【化１４３】

【０７４８】 実施例３９： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロペンタンカルボキ
サミン （ｂ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロペンタンカルボキ
サミン二塩酸塩

【０７４９】

【化１４４】

【０７５０】 Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌ溶液（０．５ｍＬ、１Ｍ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］シクロロイシン（１００ｍｇ、
０．２４３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中の撹拌された溶液に加えた。溶媒を真空中で
蒸発し、そして残留物をＰｈＭｅと共沸して、対応する塩酸塩を得た。

【０７５１】 （ＣＯＣｌ）₂（４２μＬ、０．４８ｍｍｏｌ）、そして次いでＤＭＦ（２滴
）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］シクロロイシン塩酸塩（０．２４３ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の撹
拌された溶液に加え、そして混合物を２３℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空中
で蒸発し、残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中に再溶解し、そして２−（ジメチル
アミノ）エチルアミン（６０μＬ、０．４８ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を
３時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔＯＡｃ及びＮａＨ
ＣＯ₃水溶液（１０％）間に分配した。有機相を乾燥し、そして蒸発した。残留
物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８
８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から９０：１０：１に）を溶出剤として使用して
精製して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］アミノ｝−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロペンタンカル
ボキシアミンを得た。 ＬＲＭＳ ４８２（ＭＨ⁺）。

【０７５２】 この物質をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌ溶液（１Ｍ）を加え、そ
して溶媒を真空中で蒸発して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イ
ソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］
シクロペンタンカルボキシアミン二塩酸塩（２８ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を
、白色の固体として得た。

【０７５３】

【化１４５】

【０７５４】 実施例４０： ４−クロロ−１−グアニジノ−Ｎ−［１−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル
］−７−イソキノリンスルホンアミド塩酸塩

【０７５５】

【化１４６】

【０７５６】 ＮａＨ（３０ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．０ｍｍｏｌ）を、塩酸グ
アニジン（１５７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の撹拌された
溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で２０分間加熱した。１，
４−ジクロロ−Ｎ−［１−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］−７−イソキ
ノリンスルホンアミド（１５０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を一度に加え、そして
混合物を８０℃で４時間加熱した。２回目のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中のグアニジン
（０．４０ｍｍｏｌ）［塩酸グアニジン（３８ｍｇ）及びＮａＨ（１２ｍｇ）か
ら調製］を加え、そして混合物を８０℃で更に６時間加熱した。冷却した混合物
を水（８０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、そして次い
で混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中
で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−
ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９７．５：２．５：０．２５から８０：２０：５
に）を溶出剤として使用して精製して、部分的に精製された産物（９０ｍｇ）を
得た。この物質をＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）で処理によって対応する塩
酸塩に転換し、そして次いでＥｔＯＨから再結晶して、４−クロロ−１−グアニ
ジノ−Ｎ−［１−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］−７−イソキノリンス
ルホンアミド塩酸塩（１６ｍｇ、０．０４０ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得
た。

【０７５７】

【化１４７】

【０７５８】 実施例４１： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシンエチルエステル二塩
酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシン二塩酸塩

【０７５９】

【化１４８】

【０７６０】 ＮａＨ（３２ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．０５ｍｍｏｌ）を、塩酸
グアニジン（１４５ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４ｍＬ）中の撹拌さ
れた溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の５０℃で２０分間加熱した。
Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（
ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシンエチルエステル塩酸塩（１６０ｍｇ、
０．３０５ｍｍｏｌ）を一度に加え、そして混合物を９０℃で１時間加熱した。
冷却した混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出し、そして次
いで混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空
中で蒸発した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し、濾過し、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの
溶液（１Ｍ）を加え、これにより沈殿物を得た。溶媒を真空中で蒸発し、そして
残留物を熱ＥｔＯＨから再結晶して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７
−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シク
ロロイシンエチルエステル二塩酸塩（１２３ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を、淡黄
色の固体として得た。

【０７６１】

【化１４９】

【０７６２】 ＮａＯＨの溶液（５ｍＬ、５Ｍ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シ
クロロイシンエチルエステル二塩酸塩（７５ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）のジオ
キサン（５ｍＬ）中の溶液に加え、そして混合物を８０℃で３０時間加熱した。
冷却した混合物を水（２０ｍＬ）で希釈し、ジオキサンを真空中で蒸発し、そし
て残留物水溶液を希釈ＨＣｌ（２Ｍ）でｐＨ６に中和した。沈殿物を水で洗浄し
ながら濾過により収集し、そして次いでＭｅＯＨに溶解し、濾過し、そして真空
中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂ −ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１から８０：２０：５に）を溶出
剤として使用して精製して、所望の産物を得た。この物質をＭｅＯＨ−ＥｔＯＡ
ｃに溶解し、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）を加え、そして溶媒を真空中で
蒸発した。残留物をＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジ
ノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル
］シクロロイシン二塩酸塩（１５．４ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）を得た。

【０７６３】

【化１５０】

【０７６４】 実施例４２： Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ
−７−イソキノリニル）スルホニル］シクロロイシンエチルエステル

【０７６５】

【化１５１】

【０７６６】 無水のＫ₂ＣＯ₃（３４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びブロモ酢酸ｔ−ブチル（
４４μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］シクロロイシンエチルエステル（１１０ｍｇ、０
．２５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして混
合物を２３℃で１８時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で希釈し、
水（３×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発し
た。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ
（１００：０から２０：８０に）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−（ｔ−
ブトキシカルボニルメチル）−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］シクロロイシンエチルエステル（９５ｍｇ、０．１７
ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０７６７】

【化１５２】

【０７６８】 実施例４３： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸メチル （ｂ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩

【０７６９】

【化１５３】

【０７７０】 ＮａＨ（２２．３ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、０．７４３ｍｍｏｌ）を
、塩酸グアニジン（１１７ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の
撹拌された溶液中に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の５０−７０℃で２５分
間加熱した。１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸メチル（１２４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）
を一度に加え、そして混合物を８０℃で８時間加熱した。冷却した混合物を水（
５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有
機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発し
た。残留物を最少量の熱ＥｔＯＡｃから結晶化して、１−｛［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカル
ボン酸メチル（１２ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。母
液の蒸発及び残留物のＥｔ₂Ｏによる摩砕により、第２の収穫（７ｍｇ）を得た
。

【０７７１】

【化１５４】

【０７７２】 ＮａＯＨの溶液（１ｍＬ、２Ｍ、２ｍｍｏｌ）を、１−｛［（４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボ
ン酸メチル（１２ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）中の溶液に
加え、そして混合物を５０−６０℃で４日間加熱した。冷却した混合物を希釈Ｈ
Ｃｌ（１ｍＬ、２Ｍ）で中和して、沈殿物を得た。大量の水で洗浄しながら固体
を濾過により収集し、そして次いでＥｔＯＡｃで摩砕した。固体を濃ＨＣｌに溶
解し、溶媒を真空中で蒸発し、ＰｈＭｅと共沸し、そして次いで高真空下で乾燥
して、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩（１１ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ
）を得た。

【０７７３】

【化１５５】

【０７７４】 実施例４４： （ａ）４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル （ｂ）４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸塩酸塩

【０７７５】

【化１５６】

【０７７６】 ＮａＨ（３３．５ｍｇ、鉱油中の８０重量％分散物、１．１２ｍｍｏｌ）を、
塩酸グアニジン（１７６ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３．０ｍＬ）中
の撹拌されたＮ₂下の溶液中に一度に加え、そして混合物を５０℃で１５分間加
熱した。４−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミ
ノ｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル（１８７ｍｇ、０．４
４６ｍｍｏｌ）を一度に加え、そして混合物を８０℃で８時間加熱した。２回目
のＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）中のグアニジン（０．４５ｍｍｏｌ）［塩酸グアニジ
ン及びＮａＨから調製］を加え、そして混合物を９０℃で更に４時間加熱した。
冷却した混合物を水（１００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽
出し、そして混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）した。
溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
で、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶出剤と
して使用して精製し、そして次いでＥｔＯＡｃから結晶化して、４−｛［（４−
クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝テトラヒ
ドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル（８３ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）
を、黄色の固体として得た。

【０７７７】

【化１５７】

【０７７８】 ＮａＯＨの溶液（１ｍＬ、２Ｍ、２ｍｍｏｌ）を、４−｛［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝テトラヒドロ−２Ｈ
−ピラン−４−カルボン酸メチル（６８ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ
（１２ｍＬ）中の溶液に加え、そして混合物を還流で３０時間加熱した。冷却し
た混合物を希釈ＨＣｌ（１ｍＬ、２Ｍ）で中和し、真空中の蒸発により部分的に
濃縮して、沈殿物を得て、これを水で洗浄しながら濾過により収集した。固体を
温濃ＨＣｌで抽出し、溶液を不溶性物質からデカントし、そして溶媒を真空中で
蒸発した。固体の残留物をＰｈＭｅと共沸し、そして次いで高真空下で乾燥して
、４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸塩酸塩（３０ｍｇ、０．
０６２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０７７９】

【化１５８】

【０７８０】 実施例４５： （ａ）（±）−ｃｉｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル （ｂ）（±）−ｃｉｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩

【０７８１】

【化１５９】

【０７８２】 塩酸グアニジン（３２５ｍｇ、３．４ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（８９ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、２．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）中の撹拌された懸濁液
に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。（±）−ｃ
ｉｓ−２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ
｝シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（３９１ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）のＤ
ＭＥ（５ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９０℃で６時間加熱した。溶媒
を真空中で蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃで溶解し、ＮＨ₄Ｃｌ水溶液で洗浄し、
乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラム
クロマトグラフィーで、トルエン−ｉ−ＰｒＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（１００：
０：０から９０：１０：０．０５）を溶出剤として使用して精製して、（±）−
ｃｉｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホ
ニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（７５ｍｇ、０．１５ｍ
ｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０７８３】

【化１６０】

【０７８４】 ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（３．０ｍＬ）を、（±）−ｃｉｓ−２−｛［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカ
ルボン酸ｔ−ブチル（６６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３．０ｍＬ
）中の撹拌された溶液に加え、そして混合物を２３℃で６時間撹拌した。溶媒を
真空中で蒸発し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（×３）と共沸した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し
、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（２００μＬ、１．０Ｍ）を加え、これによ
り沈殿物を得た。白色の固体を濾過により収集し、そして乾燥して、（±）−ｃ
ｉｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩（３５ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ
）を得た。

【０７８５】

【化１６１】

【０７８６】 実施例４６： （±）−ｔｒａｎｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸エチル

【０７８７】

【化１６２】

【０７８８】 塩酸グアニジン（４５８ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（９０ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、２．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の撹拌された懸濁
液に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。（±）−
ｃｉｓ−２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミ
ノ｝シクロヘキサンカルボン酸エチル（３７７ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）のＤＭ
Ａ（５ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９０℃で４時間加熱した。溶媒を
真空中で蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、ＮＨ₄Ｃｌ水
溶液（２０ｍＬ）、次いで水（５００ｍＬ）で洗浄し、そして混合した水性洗浄
液をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合したＥｔＯＡｃ抽出物を水（
４×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。
残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、トルエン−ｉ−ＰｒＯＨ−
０．８８０ＮＨ₃（１００：０：０から９０：１０：０．０５）を溶出剤として
使用して精製して、（±）−ｔｒａｎｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジ
ノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸エ
チル（６５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。［少量の（±
）−ｃｉｓ−２−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）ス
ルホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸エチル（＜２０ｍｇ）も更に単
離された］。

【０７８９】

【化１６３】

【０７９０】 実施例４７： （ａ）ｃｉｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）
スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−カルボン酸ｔ−ブチル （ｂ）ｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−カルボン酸ｔ−ブチル （ｃ）ｃｉｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）
スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸塩酸塩

【０７９１】

【化１６４】

【０７９２】 塩酸グアニジン（２８６ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（５６ｍｇ、鉱油
中の８０重量％、１．８２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）中の撹拌された懸濁液
に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。ｃｉｓ−４
−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロ
ヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（３４６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１
５ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９０℃で２時間加熱した。２回目のＤ
ＭＥ（５ｍＬ）中のグアニジン（０．７５ｍｍｏｌ）［塩酸グアニジン（７２ｍ
ｇ）及びＮａＨ（２２ｍｇ）から調製］を加え、そして混合物を９０℃で１時間
加熱した。次いで不均質な反応混合物にＤＭＡ（１０ｍＬ）を加え、そして均質
となった混合物を更に６時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、残留物をＮＨ₄
Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、水（１５０ｍＬ）で希釈し、そしてＥｔ
ＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機抽出物を水（１００ｍＬ）
で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲ
ルのカラムクロマトグラフィーで、（ｉ）ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０か
ら２５：７５に）、そして次いで（ｉｉ）ＰｈＭｅ−ＥｔＯＡｃ（５０：５０か
ら０：１００に）を溶出剤として使用して繰り返し精製して、ｃｉｓ−４−｛［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−
シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（２４７ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を得た
。［少量のｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（２０ｍ
ｇ）も更に単離された］。

【０７９３】

【化１６５】

【０７９４】 ｃｉｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］アミノ｝−シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（５５ｍｇ、０．１２
１ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌで飽和されたＥｔＯＡｃの溶液（５０ｍＬ）中に懸濁し
、そして混合物を還流で加熱した。混合物を冷却し、白色の固体をＥｔＯＡｃで
洗浄しながら濾過により収集し、そして次いで乾燥して、ｃｉｓ−４−｛［（４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シク
ロヘキサン−カルボン酸塩酸塩（１１０ｍｇ、０．２３６ｍｍｏｌ）を得た。

【０７９５】

【化１６６】

【０７９６】 実施例４８： （ａ）ｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−カルボン酸エチル （ｂ）ｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−カルボン酸塩酸塩

【０７９７】

【化１６７】

【０７９８】 塩酸グアニジン（２７３ｍｇ、２．８６ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（５５ｍｇ、鉱
油中の８０重量％、１．８２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中の撹拌された懸
濁液に一度に加え、そして混合物をＮ₂下の６０℃で３０分間加熱した。ｔｒａ
ｎｓ−４−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ
｝シクロヘキサンカルボン酸エチル（３７０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＡ
（１０ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９０℃で３時間加熱した。溶媒を
真空中で蒸発し、残留物をＥｔ₂Ｏ（１００ｍＬ）、ＮＨ₄Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ
）及び水（１５０ｍＬ）間に分配した。分離した水相をＥｔ₂Ｏ（３×１００ｍ
Ｌ）で抽出し、そして混合した有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空
中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、トルエン−
ｉ−ＰｒＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（１００：０：０から９０：１０：０．０５）
を溶出剤として使用して精製して、ｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グ
アニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−カル
ボン酸エチル（７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を得た。

【０７９９】

【化１６８】

【０８００】 ＨＣｌの溶液（５ｍＬ、２Ｍ、１０ｍｍｏｌ）を、ｔｒａｎｓ−４−｛［（４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シク
ロヘキサンカルボン酸エチル（５５ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）のジオキサン（
５．０ｍＬ）中の溶液に加え、そして混合物を還流で２時間加熱した。溶媒を真
空中で蒸発し、そして残留物をＭＣＩゲル（ＣＨＰ ２０Ｐ）のカラムクロマト
グラフィーで、水−ＭｅＯＨ（１００：０から２０：８０に）を溶出剤として使
用して精製して、ｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イ
ソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−カルボン酸を得た。こ
の物質を希釈ＨＣｌ（２０ｍＬ、０．１Ｍ）中に溶解し、溶媒を真空中で蒸発し
、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、ｔｒａｎｓ−４−｛［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−シクロヘキサン−
カルボン酸塩酸塩（３５ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た
。

【０８０１】

【化１６９】

【０８０２】 実施例４９： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］グリシントリフルオロ酢酸塩

【０８０３】

【化１７０】

【０８０４】 ＮａＨ（３４ｍｇ、鉱油中の６０％、０．８５ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニジン
（８０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の２３℃の撹拌された
溶液に加えた。３０分後、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カ
ルボニル］グリシンｔ−ブチルエステル（１２０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加
え、そして得られた溶液を９０℃で２１時間加熱した。冷却した後、混合物を水
（３０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ、そして次いでＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、そして
混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物
をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８
０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（４−ク
ロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］グリシンｔ−ブチル
エステル（２５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を、黄色のゴム状物として得た。 ＬＲＭＳ ３７８（ＭＨ⁺）、７５６（Ｍ₂Ｈ⁺）。

【０８０５】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］グ
リシンｔ−ブチルエステル（２４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（０
．５ｍｌ）中の溶液を、０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物をＰｈＭｅで希
釈し、真空中で蒸発し、ＰｈＭｅと共沸し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して
、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］グ
リシントリフルオロ酢酸塩（２１ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を、白色の固体とし
て得た。

【０８０６】

【化１７１】

【０８０７】 実施例５０： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−β−アラニンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−β−アラニン

【０８０８】

【化１７２】

【０８０９】 ＮａＨ（１１４ｍｇ、鉱油中の６０％分散物、２．８５ｍｍｏｌ）を、塩酸グ
アニジン（２７２ｍｇ、２．８５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（８ｍＬ）中の撹拌され
た溶液に分割して加え、そして溶液を８０℃で２０分間加熱した。Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−β−アラニンｔ−ブチルエ
ステル（４２０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を９０℃で一晩
加熱した。冷却した混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、そして混合した
有機抽出物を水、飽和食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で
蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏ−ＣＨ₂Ｃｌ₂から結晶化して、Ｎ−［（４−ク
ロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−β−アラニンｔ−
ブチルエステル（１９０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を得た。

【０８１０】

【化１７３】

【０８１１】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
β−アラニンｔ−ブチルエステル（１４５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＣＦ₃Ｃ
Ｏ₂Ｈ（１．５ｍＬ）中の溶液を、０℃で３０分間、そして次いで室温で１時間
撹拌した。ＰｈＭｅ（１５ｍＬ）を加え、混合物を真空中で蒸発し、そして残留
物をＥｔＯＡｃ及びＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ
−７−イソキノリニル）カルボニル］−β−アラニン（１１７ｍｇ、０．２６ｍ
ｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０８１２】

【化１７４】

【０８１３】 実施例５１： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］シクロロイシンエチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］シクロロイシン

【０８１４】

【化１７５】

【０８１５】 ＮａＨ（４５ｍｇ、鉱油中の６０％分散物、１．１３ｍｍｏｌ）を、Ｔ−Ｂｕ
ＯＨに加え、そして混合物を５０℃で１５分間加熱した。塩酸グアニジン（１０
５ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を５０℃で更に１５分間加熱
した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］シクロロ
イシンエチルエステル（３５０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物
を還流で１７時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲル
のカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９
０：１０：１）を溶出剤として使用して精製し、続いてＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂
Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カ
ルボニル］シクロロイシンエチルエステル（５５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、
淡黄色の粉末として得た。

【０８１６】

【化１７６】

【０８１７】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］シ
クロロイシンエチルエステル（４５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のジオキサン（１
．５ｍＬ）中の部分的に不均質な溶液を、ＮａＯＨ水溶液（１ｍＬ、２Ｍ）と２
３℃で２．５時間撹拌した。希釈ＨＣｌ（１ｍＬ、２Ｍ）を加えて、クリーム色
の懸濁液を得た。固体を濾過により収集し、そして真空中で乾燥して、Ｎ−［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］シクロロイシ
ン（４０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を得た。

【０８１８】

【化１７７】

【０８１９】 実施例５２： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−フェニルグリシントリフルオロ酢酸塩

【０８２０】

【化１７８】

【０８２１】 塩酸グアニジン（３２６ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ）及びＮａＨ（１３７ｍｇ、
油中の６０％分散物、３．４３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の混合物を、
７０℃に加熱し、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（５９０ｍｇ、１．３７ｍｍｏ
ｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を８０−９０℃で一晩
加熱した。冷却した後、反応混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡ
ｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。混合した有機抽出物を水で洗浄し、乾燥（Ｎａ ₂ ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ ₃ （９０：１０：１）を溶出剤として使用したシリカゲルのカラムクロマトグラ
フィー、それに続くｉ−Ｐｒ₂Ｏからの結晶化による残留物の精製によって、Ｎ
−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ
−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（１１０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を、
淡黄色の固体として得た。

【０８２２】

【化１７９】

【０８２３】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）
のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１．５ｍＬ）中の溶液を、０℃で３０分間、そして次いで２３
℃で１時間撹拌した。反応混合物をＰｈＭｅ（１５ｍＬ）で希釈し、そして真空
中で蒸発した。残留したゴム状物をＥｔＯＡｃで、そして次いでＥｔ₂Ｏで摩砕
し、そして得られた白色の固体を真空中で乾燥して、Ｎ−［（４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−フェニルグリシントリ
フルオロ酢酸塩（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を得た。

【０８２４】

【化１８０】

【０８２５】 実施例５３： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−Ｌ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−Ｌ−フェニルグリシントリフルオロ酢酸塩

【０８２６】

【化１８１】

【０８２７】 ＮａＨ（３８ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．２７ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１２１ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４ｍＬ）中の２３℃の撹
拌された溶液に加え、そして混合物を８０−８５℃で１５分間加熱した。Ｎ−［
（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｌ−フェニルグリシ
ンｔ−ブチルエステル（２１８ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物
を８５℃で４時間加熱した。冷却した溶液を水中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（×
３）で抽出した。混合した有機物を飽和食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し
、そして真空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化して、Ｎ−［（４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｌ−フェニル
グリシンｔ−ブチルエステル（５５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体
として得た。

【０８２８】

【化１８２】

【０８２９】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
Ｌ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＣ
Ｆ₃ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。反応混合物をＰｈＭ
ｅで希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｌ−フェニ
ルグリシントリフルオロ酢酸塩（３２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を、白色の粉末
として得た。

【０８３０】

【化１８３】

【０８３１】 実施例５４： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−Ｄ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−Ｄ−フェニルグリシントリフルオロ酢酸塩

【０８３２】

【化１８４】

【０８３３】 ＮａＨ（３０ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．０ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニ
ジン（９７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中の溶液に加え、そし
て溶液を８０℃で３０分間加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノ
リニル）カルボニル］−Ｄ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（１７５ｍｇ
、０．４１ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を８５℃で３．５時間、そして次い
で２３℃で一晩加熱した。混合物を水（２５ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×
２０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機物を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ ₄ ）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶出
剤として使用して精製し、続いてＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化して、Ｎ
−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｄ−
フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（３７ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を固体と
して得た。

【０８３４】

【化１８５】

【０８３５】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
Ｄ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＣ
Ｆ₃ＣＯ₂Ｈ（０．５ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅ
で希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−
クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｄ−フェニルグ
リシントリフルオロ酢酸塩（２１ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、白色の粉末とし
て得た。

【０８３６】

【化１８６】

【０８３７】 実施例５５： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−バリンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−バリントリフルオロ酢酸塩

【０８３８】

【化１８７】

【０８３９】 ＮａＨ（８８ｍｇ、鉱油中の６０％分散物、２．２ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニ
ジン（２１０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の７０℃の撹拌さ
れた溶液に加え、そして溶液を３０分間撹拌した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−
７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−バリンｔ−ブチルエステル（３５０
ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を加え、そして溶液を８０−９０℃で一晩加熱した。
冷却した混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、そして混
合した有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物を
ＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ
−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−バリンｔ−ブチルエステル（２８
５ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【０８４０】

【化１８８】

【０８４１】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−バリンｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＣＦ₃Ｃ
Ｏ₂Ｈ（１．５ｍＬ）中の溶液を、０℃で３０分間、そして２３℃で１時間撹拌
した。反応混合物をＰｈＭｅで希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔＯ
Ａｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）
カルボニル］−ＤＬ−バリントリフルオロ酢酸塩（１７０ｍｇ、０．３６ｍｍｏ
ｌ）を、白色の固体として得た。

【０８４２】

【化１８９】

【０８４３】 実施例５６： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−プロリンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−プロリントリフルオロ酢酸塩

【０８４４】

【化１９０】

【０８４５】 ＮａＨ（６５ｍｇ、鉱油中の６０％分散物、１．６３ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１５４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の５０℃の撹
拌された溶液に加え、そして溶液を１５分間撹拌した。Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−プロリンｔ−ブチルエステル（
２５３ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を８０℃で一晩加熱した
。混合物を水（２０ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（×２）で抽出した。混
合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中
で蒸発した。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（４−ク
ロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−プロリンｔ
−ブチルエステル（２４１ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を得た。

【０８４６】

【化１９１】

【０８４７】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−プロリンｔ−ブチルエステル（１７５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）のＣＦ₃
ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅで希釈
し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−プロリントリフ
ルオロ酢酸塩（１５６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０８４８】

【化１９２】

【０８４９】 実施例５７： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−フェニルアラニントリフルオロ酢酸塩

【０８５０】

【化１９３】

【０８５１】 ＮａＨ（７８ｍｇ、鉱油中の６０％分散物、１．９５ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１８８ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中の５０℃の溶
液に加え、そして溶液を１５分間撹拌した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（３
５０ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を８０℃で一晩加熱した。
冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）
で抽出した。混合した有機物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして
真空中で蒸発した。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−フェ
ニルアラニンｔ−ブチルエステル（１７２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を、クリー
ム色の固体として得た。

【０８５２】

【化１９４】

【０８５３】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（２１０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）
のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅ
で希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−
クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−フェニル
アラニントリフルオロ酢酸塩（１９６ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を得た。

【０８５４】

【化１９５】

【０８５５】 実施例５８： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−ロイシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−ロイシントリフルオロ酢酸塩

【０８５６】

【化１９６】

【０８５７】 ＮａＨ（７３ｍｇ、鉱油中の６０％分散物、１．８３ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１７４ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中の５０℃の撹
拌された溶液に加え、そして溶液を１５分間撹拌した。Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−ロイシンｔ−ブチルエステル（
３００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を加え、そして溶液を８０℃で一晩加熱した。
冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出
し、そして混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そし
て真空中で蒸発した。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−ロ
イシンｔ−ブチルエステル（１８５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を得た。

【０８５８】

【化１９７】

【０８５９】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−ロイシンｔ−ブチルエステル（１８４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）のＣＦ₃
ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅで希釈
し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−ロイシントリフ
ルオロ酢酸塩（１８３ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を得た。

【０８６０】

【化１９８】

【０８６１】 実施例５９： （ａ）ＤＬ−３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カ
ルボニル］アミノ｝−３−フェニルプロパン酸ｔ−ブチル （ｂ）ＤＬ−３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カ
ルボニル］アミノ｝−３−フェニルプロパン酸トリフルオロ酢酸塩

【０８６２】

【化１９９】

【０８６３】 ＮａＨ（６７ｍｇ、油中の６０％分散物、１．６８ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニ
ジン（１６１ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中の溶液に加え、
そして溶液を５０℃で１５分間加熱した。ＤＬ−３−［（１，４−ジクロロ−７
−イソキノリニル）カルボニル］アミノ｝−３−フェニルプロパン酸ｔ−ブチル
（３００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を加え、そして溶液を８０℃で一晩加熱した
。冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ
）で抽出した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、
そして真空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、ＤＬ−３−｛［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］アミノ｝−
３−フェニルプロパン酸ｔ−ブチル（５５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を、黄色の
固体として得た。

【０８６４】

【化２００】

【０８６５】 ＤＬ−３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボ
ニル］アミノ｝−３−フェニルプロパン酸ｔ−ブチル（１５３ｍｇ、０．３３ｍ
ｍｏｌ）のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液を
ＰｈＭｅで希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、ＤＬ
−３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］
アミノ｝−３−フェニルプロパン酸トリフルオロ酢酸塩（１３２ｍｇ、０．２５
ｍｍｏｌ）を得た。

【０８６６】

【化２０１】

【０８６７】 実施例６０： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−アスパラギン酸α，β−ジ−ｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−アスパラギン酸トリフルオロ酢酸塩

【０８６８】

【化２０２】

【０８６９】 ＮａＨ（５３ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．７７ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１６８ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中の溶液に加え
、そして溶液を５０℃で３０分間加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−アスパラギン酸α，β−ジ−ｔ−ブチルエ
ステル（３３０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を８０−９０℃
で一晩加熱した。冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ
抽出物（２×２０ｍＬ）で抽出した。混合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し
、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物を（ｉ）ｉ−Ｐｒ₂
Ｏによる摩砕、（ｉｉ）ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：
０．５）を溶出剤として使用したシリカゲルのカラムクロマトグラフィー、及び
（ｉｉｉ）ｉ−Ｐｒ₂Ｏからの結晶化によって精製して、Ｎ−［（４−クロロ−
１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−アスパラギン酸α
，β−ジ−ｔ−ブチルエステル（１４５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、黄色の固
体として得た。

【０８７０】

【化２０３】

【０８７１】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−アスパラギン酸α，β−ジ−ｔ−ブチルエステル（１２０ｍｇ、０．２４
ｍｍｏｌ）のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液
をＰｈＭｅで希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ
−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ
−アスパラギン酸トリフルオロ酢酸塩（６０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を得た。

【０８７２】

【化２０４】

【０８７３】 実施例６１： （ａ）Ｏ−ｔ−ブチル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）カルボニル］−ＤＬ−セリンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−セリントリフルオロ酢酸塩

【０８７４】

【化２０５】

【０８７５】 ＮａＨ（５４ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．８０ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１７３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍＬ）中の溶液に加え
、そして溶液を８０℃で３０分間加熱した。Ｏ−ｔ−ブチル−Ｎ−［（１，４−
ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−セリンｔ−ブチルエステ
ル（３３０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を８０で３時間加熱
した。冷却した混合物を水（５０ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出した
。混合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真
空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｏ−ｔ−ブチル−Ｎ−［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−セ
リンｔ−ブチルエステル（１３８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、黄色の固体とし
て得た。

【０８７６】

【化２０６】

【０８７７】 Ｏ−ｔ−ブチル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル
）カルボニル］−ＤＬ−セリンｔ−ブチルエステルのＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中
の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅで希釈し、真空中で蒸発し、
そして残留物をＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃから２回再結晶して、Ｎ−［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−セリントリフル
オロ酢酸塩（６８ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０８７８】

【化２０７】

【０８７９】 実施例６２： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−α−シクロペンチルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−α−シクロペンチルグリシントリフルオロ酢酸塩

【０８８０】

【化２０８】

【０８８１】 ＮａＨ（３０ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．００ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（９６ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中の溶液に加え、
そして溶液を７５−８０℃で加熱した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキ
ノリニル）カルボニル］−α−シクロペンチルグリシンｔ−ブチルエステル（１
７０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を８０で４．５時間加熱し
た。冷却した混合物を水（２５ｍＬ）中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（３×２０ｍ
Ｌ）で抽出した。混合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄ ）し、そして真空中で蒸発して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イ
ソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−α−シクロペンチルグリシンｔ−ブチルエ
ステル（１０５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【０８８２】 分析用の試料は、次のように調製した：この黄色の固体を熱ｉ−Ｐｒ₂Ｏ（３
×２０ｍＬ）で抽出し、熱溶液を濾過し、そして冷却して、表題化合物を淡黄色
の固体（４０ｍｇ）として得て、これを濾過により収集し、そして真空中で乾燥
した。

【０８８３】

【化２０９】

【０８８４】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−α−シクロペンチルグリシンｔ−ブチルエステル（６５ｍｇ、０．１５ｍ
ｍｏｌ）のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（０．５ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶
液をＰｈＭｅで希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔＯＡｃで結晶化し
た。次いでこの固体をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジ
ノ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−α−シクロペンチルグリシント
リフルオロ酢酸塩（５２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【０８８５】

【化２１０】

【０８８６】 実施例６３： （ａ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）カルボニル］グリシン塩酸塩 （ｂ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）カルボニル］グリシン塩酸塩

【０８８７】

【化２１１】

【０８８８】 ＮａＨ（１６ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、０．５３ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（８２ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（４ｍＬ）中の溶液に加え、そ
して混合物を６０℃で３０分間加熱した。Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジク
ロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］グリシンｔ−ブチルエステル（９５ｍ
ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２ｍＬ）中の溶液を加え、そして混合物を９
０で４時間加熱した。冷却した混合物をＥｔ₂Ｏ及び水間に分配し、そして混合
した有機抽出物を乾燥し、そして真空中で蒸発した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し
、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）を加えて、Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（
４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カルボニル］グリシン塩酸
塩の沈殿物を得た。エーテル性の母液を蒸発して、未反応のＮ−ベンジル−Ｎ−
［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］グリシンｔ−ブチル
エステルを回収し、これを再びグアニジンと反応（上記のように）させて、第２
のバッチを得た。合計収率：７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ。

【０８８９】

【化２１２】

【０８９０】 Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）
カルボニル］グリシン塩酸塩（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（
１ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅで希釈し、真空中
で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、白色の固体（４１ｍｇ）を得た
。この固体をＥｔＯＡｃに溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液を加え、こ
れにより沈殿物を得た。母液をデカントし、そして固体をＭｅＣＮで摩砕して、
Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）カ
ルボニル］グリシン塩酸塩（１６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色
の粉末として得た。

【０８９１】

【化２１３】

【０８９２】 実施例６４： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］−
Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］−
Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル二塩酸塩 （ｃ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］−
Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリシントリフルオロ酢酸塩

【０８９３】

【化２１４】

【０８９４】 ＮａＨ（２１ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、０．７ｍｍｏｌ）を、ｔ−ＢｕＯ
Ｈ（２．５ｍｌ）に加え、そして５０℃で１５分間加熱した。塩酸グアニジン（
６８ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を加え、そして５０℃で更に１５分間加熱した。
Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル］−Ｎ−メチル−ＤＬ
−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（１０２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加
え、そして混合物を９５℃で９．５時間加熱した。冷却した混合物を真空中で蒸
発し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−Ｅ
ｔＯＡｃ（９：１）、そして次いでＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（
９０：１０：１）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］−Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリ
シンｔ−ブチルエステル（２６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を、黄色のゴム状物と
して得た。この物質の一部をＥｔ₂Ｏに溶解し、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液を加え
、そして得られた沈殿物をヘキサン、そして次いでｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して、対
応する二塩酸塩を得た。

【０８９５】

【化２１５】

【０８９６】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］−Ｎ−
メチル−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（２０ｍｇ、０．４４ｍｍ
ｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中の溶液を、ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（２ｍＬ）と室温で４
時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで、そして次い
でＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）メチル］−Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリシントリフルオロ酢酸塩（
６．５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０８９７】

【化２１６】

【０８９８】 実施例６５： （ａ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）メチル］グリシンｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）メチル］グリシンビストリフルオロ酢酸塩

【０８９９】

【化２１７】

【０９００】 ＮａＨ（４８．６ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．６２ｍｍｏｌ）を、ｔ−
ＢｕＯＨ（５ｍＬ）に加え、そして５０℃で１５分間加熱した。塩酸グアニジン
（１５５ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を加え、そして５０℃で更に２０分間加熱し
た。Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル］
グリシンｔ−ブチルエステル（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加え、そして次
いで混合物を９５℃で２０時間加熱した。冷却した混合物を真空中で蒸発し、そ
して残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ
−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶出剤として使用して精製し、続い
てヘキサンで摩砕し、そしてｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−ベンジル−Ｎ−［
（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］グリシンｔ−ブ
チルエステル（５ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０９０１】

【化２１８】

【０９０２】 Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）
メチル］グリシンｔ−ブチルエステル（１６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＣＦ₃
ＣＯ₂Ｈ（１ｍＬ）中の溶液を、室温で１．５時間撹拌した。溶液をＰｈＭｅで
希釈し、真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−ベンジル−
Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］グリシン
ビストリフルオロ酢酸塩（６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得
た。

【０９０３】

【化２１９】

【０９０４】 実施例６６： （ａ）Ｎα−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］−Ｎε−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リシンｔｅｒｔ−ブチル
エステル （ｂ）Ｎα−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］−Ｌ−リシン二塩酸塩。

【０９０５】

【化２２０】

【０９０６】 ＮａＨ（４４ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．４７ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（２２４ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍｌ）中の溶液に一度
に加え、そして溶液となるまで室温で撹拌した。Ｎα−［（１，４−ジクロロ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎε−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
−Ｌ−リシン−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を
加え、そして溶液を１００℃で６時間撹拌した。冷却した後、反応混合物を水（
３０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、そして混合し
た有機抽出物を水及び食塩水で洗浄した。有機溶液を真空中で蒸発し、そして残
留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．
８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤として精製して、Ｎα−［（４−クロ
ロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎε−ｔｅｒｔ−ブ
チルオキシカルボニル−Ｌ−リシンｔｅｒｔ−ブチルエステル（１５２ｍｇ、０
．２６ｍｍｏｌ）を得た。分析用試料は、ｉ−Ｐｒ₂Ｏからの結晶化により得た
。

【０９０７】

【化２２１】

【０９０８】 Ｎα−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
−Ｎε−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リシンｔｅｒｔ−ブチルエス
テル（１１９ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）中に溶解し
、そしてガス状ＨＣｌで飽和した。２０分後、得られた白色の沈殿物を濾過によ
って得て、そしてＥｔＯＨから再結晶して、Ｎα−［（４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−リシン（１３ｍｇ、０．０３ｍ
ｍｏｌ）を得た。

【０９０９】

【化２２２】

【０９１０】 実施例６７： Ｎα−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｄ−リシン二塩酸塩

【０９１１】

【化２２３】

【０９１２】 ＮａＨ（３３ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．１ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニ
ジン（１７０ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍｌ）中の５０℃の撹拌
された溶液に加えた。３０分後、Ｎα−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−Ｎε−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−リシン−
ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２５０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加え、そして溶
液を９０℃で８時間撹拌した。冷却した混合物を水中に注ぎ、そして沈殿物をＥ
ｔ₂Ｏ（４×１５ｍｌ）で抽出した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾
燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして１Ｎのエーテル性ＨＣｌで処理した。溶液を真空中
で濃縮し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで、そして次いでＥｔＯＡｃ−ＥｔＯＨで摩
砕して、Ｎα−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホ
ニル］−Ｄ−リシン二塩酸塩（９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を得た。

【０９１３】

【化２２４】

【０９１４】 実施例６８： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−グルタミンｔｅｒｔ−ブチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｌ−グルタミントリフルオロ酢酸塩

【０９１５】

【化２２５】

【０９１６】 ＮａＨ（２５ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、０．８３ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１２８ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍｌ）中の溶液に加え
、そして５０℃で１時間撹拌した。Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−Ｌ−グルタミンｔｅｒｔ−ブチルエステル（１５０ｍｇ、
０．３２ｍｍｏｌ）を加え、そして得られた溶液を１００℃で６時間撹拌し、冷
却させ、そして次いで水に注いだ。水性混合物をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍｌ）で
抽出し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤
として使用して精製して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］−Ｌ−グルタミンｔｅｒｔ−ブチルエステル（３０ｍｇ、
０．０６ｍｍｏｌ）を、淡黄褐色の粉末として得た。

【０９１７】

【化２２６】

【０９１８】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｌ−グルタミンｔｅｒｔ−ブチルエステル（１５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を、
トリフルオロ酢酸（１ｍｌ）中に溶解し、そして得られた溶液を室温で１時間撹
拌し、トルエンで希釈し、そして残留物まで濃縮した。Ｅｔ₂Ｏで摩砕して、粉
末を得て、これにＭｅＯＨを加え、そして懸濁液を濾過した。濾液を濃縮し、そ
して次いでＥｔＯＡｃで摩砕して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−グルタミントリフルオロ酢酸塩（９ｍｇ、
０．０２ｍｍｏｌ）を得た。

【０９１９】

【化２２７】

【０９２０】 実施例６９： （２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホ
ニル）−２−ピロリジンカルボキサミド

【０９２１】

【化２２８】

【０９２２】 塩化オキサリル（１３６μｌ、１．５６ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−
１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン（３３９ｍ
ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）中の溶液に加え、続いてＤＭ
Ｆ（１００μｌ）を加え、そして反応物を室温で１０分間撹拌した。混合物を真
空中で蒸発し、そしてトルエンと共沸して、オフホワイト色の固体を得た。これ
をＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍｌ）中に懸濁し、０．８８０ＮＨ₃（７６０μｌ、７．８
ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を室温で１８時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃ
ｌ₂及び水間に分配し、そして各層を分離した。水相をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、混
合した有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。粗製産物を
シリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０
ＮＨ₃（１００：０：０から９５：５：０．１に）の溶出勾配を使用して精製し
て、（２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝ス
ルホニル）−２−ピロリジンカルボキサミド（１０２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）
を、淡黄色の固体として得た。

【０９２３】

【化２２９】

【０９２４】 実施例７０： （２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホ
ニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２−ピロリジンカルボキサミド。

【０９２５】

【化２３０】

【０９２６】 塩化オキサリル（４０μｌ、０．４６ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン（１００ｍｇ
、０．２３ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中の溶液に加え、続いてＤＭＦ
（１滴）を加え、そして反応物を室温で３０分間撹拌した。混合物を真空中で蒸
発し、そしてトルエンと共沸した。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍｌ）中に溶解し、
そしてエタノールアミン（１７μｌ、０．２８ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍｌ
）中の溶液に加え、反応物を室温で２時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。粗
製産物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０
．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．１から９０：１０：１に）の溶出勾配を使用し
て精製して、（２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル｝スルホニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２−ピロリジンカルボキ
サミド（６５ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）を、黄色の泡状物として得た。

【０９２７】

【化２３１】

【０９２８】 実施例７１： （ａ）（２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝
スルホニル）−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル （ｂ）（２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝
スルホニル）−２−ピペリジンカルボン酸塩酸塩

【０９２９】

【化２３２】

【０９３０】 塩酸グアニジン（１２８ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（３２ｍｇ、鉱
油中の８０％分散物、１．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍｌ）中の溶液に加え、
そして混合物を６０℃で３０分間撹拌した。（２Ｒ）−１−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−
ブチル（１５０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を還流下で７時
間加熱し、そして室温で更に１８時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、
水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留し
た黄色のゴム状物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−Ｍ
ｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９７：３：０．３）を溶出剤として使用して精製し
て、（２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝ス
ルホニル）−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、黄色の固体（１２
６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）として得た。

【０９３１】

【化２３３】

【０９３２】 （２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スル
ホニル）−２−ピペリジンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５０ｍｇ、０．１０７
ｍｍｏｌ）のＨＣｌで飽和されたＥｔＯＡｃ（１０ｍｌ）中の溶液を、室温で２
時間撹拌した。溶液を真空中で濃縮し、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂と数回共沸して、（２
Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル
）−２−ピペリジンカルボン酸塩酸塩（３７ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）を、白
色の固体として得た。

【０９３３】

【化２３４】

【０９３４】 実施例７２： （ａ）４−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニ
ル）アミノ］−１−メチル−４−ピペリジンカルボン酸メチル （ｂ）４−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニ
ル）アミノ］−１−メチル−４−ピペリジンカルボン酸塩酸塩

【０９３５】

【化２３５】

【０９３６】 塩酸グアニジン（２７０ｍｇ、２．８３ｍｍｏｌ）を、ＮａＨ（６５ｍｇ、鉱
油中の８０％分散物、２．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（６ｍｌ）中の溶液に加え
、そして溶液を６０℃で３０分間撹拌した。４−｛［（１，４−ジクロロ−７−
イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−１−メチル−４−ピペリジンカルボン
酸メチル（３００ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を８０℃で５時
間撹拌した。更にＤＭＳＯ（１ｍｌ）中のＮａＨ（３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、及
び塩酸グアニジン（１３５ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を更に
２．５時間加熱した。冷却した混合物を水中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出し
た。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空
中で蒸発した。残留した黄色の固体をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで
、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から９０：１０
：１に）の溶出勾配を使用して精製して、４−［（｛４−クロロ−１−グアニジ
ノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］−１−メチル−４−ピペリジン
カルボン酸メチル（２３２ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を得た。

【０９３７】

【化２３６】

【０９３８】 ４−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）
アミノ］−１−メチル−４−ピペリジンカルボン酸メチル（１００ｍｇ、０．２
２ｍｍｏｌ）のＮａＯＨ水溶液（２ｍｌ、２Ｍ、４ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（５
ｍｌ）中の溶液を、６０℃で４２時間撹拌した。冷却した溶液を２ＭのＨＣｌを
使用して中和し、そして混合物を真空中で沈殿が起こるまで濃縮した。固体を濾
過し、乾燥し、そして濃ＨＣｌに溶解し、そして溶液を真空中で蒸発した。得ら
れた固体をＥｔ₂Ｏ、次いでｉ−ＰｒＯＨで摩砕し、そして真空下で乾燥して、
４−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）ア
ミノ］−１−メチル−４−ピペリジンカルボン酸塩酸塩（１８ｍｇ、０．０３５
ｍｍｏｌ）を得た。

【０９３９】

【化２３７】

【０９４０】 実施例７３： （ａ）Ｎ−［（１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロ
リンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル （ｂ）Ｎ−［（１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロ
リン塩酸塩

【０９４１】

【化２３８】

【０９４２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｄ−プロリンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）及
び木炭上の５％パラジウム（１５０ｍｇ）の、ＥｔＯＨ（３０ｍｌ）中の混合物
を、約３．５ｋｇ／ｃｍ²（５０ｐｓｉ）及び５０℃で２４時間水素化した。冷
却した混合物をＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過し、そしてフィルターパッド
をＥｔＯＨで充分に洗浄した。混合した濾液を真空中で濃縮し、そして残留物を
シリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０
ＮＨ₃（９７：３：０．３から９５：５：０．５に）の溶出勾配を使用して精製
して、Ｎ−［（１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロ
リンカルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１４３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を、オフホ
ワイト色の固体として得た。

【０９４３】

【化２３９】

【０９４４】 Ｎ−［（１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン
カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１３０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＨＣｌで飽和
されたＥｔＯＡｃ（７ｍｌ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。反応混合物を
真空中で蒸発し、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸して、Ｎ−［（１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン塩酸塩（１１８ｍｇ、０．２９５
ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０９４５】

【化２４０】

【０９４６】 実施例７４： １−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）ア
ミノ］−Ｎ−メチル−Ｎ−［２−（メチルアミノ）エチル］シクロペンタンカル
ボキサミド塩酸塩

【０９４７】

【化２４１】

【０９４８】 ＤＭＦ（５滴）を、１−｛［（１−グアニジノ−４−クロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］アミノ｝シクロペンタンカルボン酸塩酸塩（１．１ｇ、２．
４６ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）中の懸濁液に加え、続いて塩化オキ
サリル（３１９μｌ、３．６８ｍｍｏｌ）加え、そして反応物を室温で４５分間
撹拌した。更に塩化オキサリル（１０６μｌ、１．２３ｍｍｏｌ）を加え、そし
て撹拌を更に３０分間継続した。混合物を真空中で蒸発し、ＣＨ₂Ｃｌ₂で摩砕し
、そして次いで残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）中に溶解した。この酸塩化物
の溶液（１０ｍｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（５００μｌ、４．
７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）中の溶液に加え、そして得られた溶液を
室温で１時間撹拌した。乾燥状態まで蒸発した後、残留物を水及びＣＨ₂Ｃｌ₂間
に分配し、水層を分離し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機抽出物を
乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、ゴム状物まで蒸発し、そしてシリカゲルのカラムクロマ
トグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）
を溶出剤として溶出して精製して、油状物を得た。これをＥｔＯＡｃに溶解し、
エーテル性ＨＣｌ（１Ｎ）で処理し、そして白色の沈殿物を濾過し、そしてＥｔ ₂ Ｏ、ｉ−Ｐｒ₂Ｏ、及びＥｔＯＨで摩砕して、表題化合物（２８ｍｇ、０．０５
８ｍｍｏｌ）を得た。

【０９４９】

【化２４２】

【０９５０】 実施例７５： １−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）ア
ミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチルシクロペンタンカルボキサ
ミド塩酸塩

【０９５１】

【化２４３】

【０９５２】 塩化１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロペンタンカルボニル（１１０ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）の
ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中の懸濁液（実施例７６に記載したように調製）を、Ｎ
−メチルエタノールアミン（５００μｌ、６．２５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１
０ｍｌ）中の溶液に１分間にわたって加え、そして得られた黄色の溶液を室温で
７２時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルの
カラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０
：１０：１）を溶出剤として使用して精製して、透明なゴム状物を得た。これを
ＥｔＯＡｃに溶解し、エーテル性ＨＣｌ（１Ｎ）を加え、混合物を真空中で蒸発
し、そしてＥｔＯＡｃで摩砕した。得られた固体を濾過し、そして真空下の５０
℃で乾燥して、１−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝
スルホニル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチルシクロペン
タンカルボキサミド塩酸塩を得た。

【０９５３】

【化２４４】

【０９５４】 実施例７６： １−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）ア
ミノ］−Ｎ−（２−メトキシエチル）シクロペンタンカルボキサミド塩酸塩

【０９５５】

【化２４５】

【０９５６】 １−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）
アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）シクロペンタンカルボキサミドを、２
−メトキシエチルアミン及び塩化１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−
イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロペンタンカルボニルから、実施例
７６に記載したと同様な方法に従って調製した。この産物をエーテル性ＨＣｌ（
１Ｎ）で処理し、そして混合物を真空中で蒸発した。残留した固体をＥｔＯＨに
溶解し、水（１滴）を加え、沈殿が起こるまで溶液を真空中で濃縮し、そして得
られた固体を濾過し、Ｅｔ₂Ｏで洗浄し、そして真空下の５０℃で乾燥して、１
−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）アミ
ノ］−Ｎ−（２−メトキシエチル）シクロペンタンカルボキサミド塩酸塩（３５
ｍｇ、２８％）を得た。

【０９５７】

【化２４６】

【０９５８】 実施例７７： （ａ）Ｎ−（２−アミノエチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル）−１−［（｛４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］シクロ
ペンタンカルボキサミド （ｂ）Ｎ−（２−アミノエチル）−１−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７
−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］シクロペンタン−カルボキサミド二塩
酸塩

【０９５９】

【化２４７】

【０９６０】 塩化１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロペンタンカルボニル（２２０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の懸
濁液を、２−アミノエチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブトキシ（２５０ｍｇ、１．
５６ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中の溶液に加え、そして反応物を室温
で１８時間撹拌した。混合物を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカ
ラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：
１０：１）を溶出剤として使用して精製して、黄色の油状物を得た。この産物を
ＭｅＯＨ−ｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化して、Ｎ−（２−アミノエチルカルバミン酸
ｔｅｒｔ−ブチル）−１−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル｝スルホニル）アミノ］シクロペンタンカルボキサミド（２７ｍｇ、０．０
５ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体として得た。

【０９６１】

【化２４８】

【０９６２】 Ｎ−（２−アミノエチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル）−１−［（｛４−ク
ロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］シクロペン
タンカルボキサミド（２０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）のエーテル性ＨＣｌ（１
ｍｌ、１Ｎ）中の溶液を、室温で２時間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで希釈
し、真空中で濃縮し、そして残留物をＥｔ₂Ｏで、次いでｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕し、
そして乾燥して、Ｎ−（２−アミノエチル）−１−［（｛４−クロロ−１−グア
ニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］シクロペンタン−カルボキ
サミド二塩酸塩（１６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の粉末とし
て得た。

【０９６３】

【化２４９】

【０９６４】 実施例７８： ４−クロロ−１−グアニジノ−Ｎ−［１−（モルホリノカルボニル）シクロペン
チル］−７−イソキノリンスルホンアミド塩酸塩

【０９６５】

【化２５０】

【０９６６】 表題化合物を、塩化１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］アミノ｝シクロペンタンカルボニル、及びモルホリンから、
実施例７４に記載した方法と同様な方法によって調製した。

【０９６７】

【化２５１】

【０９６８】 実施例７９： ４−クロロ−１−グアニジノ−Ｎ−｛１−［（４−メチルピペラジノ）カルボニ
ル］シクロペンチル｝−７−イソキノリンスルホンアミド二塩酸塩

【０９６９】

【化２５２】

【０９７０】 トリエチルアミン（１．３６ｍｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を、（１−アミノシク
ロペンチル）（４−メチル−１−ピペラジニル）メタノン二塩酸塩（５６７ｍｇ
、２．０ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（
５９２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍｌ）中の溶液に加え、そし
て反応物を室温で１８時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮し、そして残留物を
ＥｔＯＡｃ及び水間に分配し、そして層を分離した。有機相を水で洗浄し、ＨＣ
ｌ（２Ｎ）で抽出し、そしてこれらの混合した酸性抽出物をＥｔＯＡｃで洗浄し
、そしてＮａ₂ＣＯ₃を使用して再び塩基性化した。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出し
、混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中
で蒸発して、泡状物を得た。これをＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化して、
１，４−ジクロロ−Ｎ−｛１−［（４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル
］シクロペンチル｝−７−イソキノリンスルホンアミド（１５３ｍｇ、０．３３
ｍｍｏｌ）を固体として得た。

【０９７１】

【化２５３】

【０９７２】 ＮａＨ（２２ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、０．７３ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１４２ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍｌ）中の溶液に加え
、そして溶液を５０℃で３０分間撹拌した。１，４−ジクロロ−Ｎ−｛１−［（
４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル］シクロペンチル｝−７−イソキノ
リンスルホンアミド（１４０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を
９０℃で５時間撹拌した。冷却した反応物を水中に注ぎ、混合物をＥｔＯＡｃで
抽出し、そして混合した抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そし
て真空中で蒸発した。残留した黄色の泡状物をｉ−ＰｒＯＨに溶解し、エーテル
性ＨＣｌ（１Ｎ）を加え、溶液を真空中で蒸発し、そして産物をエタノール中に
懸濁した。この混合物を濾過し、濾液を氷浴中で冷却し、そして得られた固体を
濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、そして乾燥して、４−クロロ−１−グアニジノ−Ｎ
−｛１−［（４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル］シクロペンチル｝−
７−イソキノリンスルホンアミド二塩酸塩（６８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を得
た。

【０９７３】

【化２５４】

【０９７４】 実施例８０： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（メチル）シクロロイシンエチルエステル （ｂ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−（メチル）シクロロイシン塩酸塩

【０９７５】

【化２５５】

【０９７６】 ＮａＨ（３１ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．０４ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（１６４ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（４ｍｌ）中の溶液に加え
、そして溶液を５０℃で１時間撹拌した。ＤＭＳＯ（２ｍｌ）中のＮ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（メチル）シクロロイ
シンエチルエステル（１８０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を
８０℃で３時間加熱した。冷却した反応混合物を水中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ
で抽出した。混合した有機抽出物を、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、
そして真空中で蒸発した。残留した黄色の油状物をシリカゲルのカラムクロマト
グラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を
溶出剤として使用して精製し、そしてＥｔＯＡｃから再結晶して、Ｎ−［（４−
クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（メチル）
シクロロイシンエチルエステル（１０５ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、黄色の固
体として得た。

【０９７７】

【化２５６】

【０９７８】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（メチル）シクロロイシンエチルエステル（８０ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ
）の、ＮａＯＨ（１ｍｌ、２Ｎ）及びＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中の溶液を、７０℃
１８時間撹拌した。冷却した混合物をＨＣｌ（２Ｎ）を使用して中和し、そして
ＭｅＯＨを真空中で除去した。得られた沈殿物を濾過して取り出し、水で洗浄し
、そして濃ＨＣｌ中に再び溶解した。この溶液を真空中で蒸発し、トルエンと共
沸し、残留物をＥｔＯＨに溶解し、そして濾過した。濾液を真空中で蒸発し、そ
して得られた固体をｉ−ＰｒＯＨから再結晶して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グ
アニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（メチル）シクロロイシン
塩酸塩（１８ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【０９７９】

【化２５７】

【０９８０】 実施例８１： （ａ）Ｎ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−プロリンｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｄ−プロリン塩酸塩

【０９８１】

【化２５８】

【０９８２】 ＮａＨ（４８ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．６ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニ
ジン（２３３ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（８ｍｌ）中の溶液に加え、
そして溶液を室温で３０分間撹拌した。Ｎ−［（４−ブロモ−１−クロロ−７−
イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリンｔｅｒｔ−ブチルエステル（２９
０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を６０℃で２時間撹拌し、そ
して一晩で室温まで冷却させた。混合物を水中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出
した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真
空中で蒸発した。残留した黄色の油状物を、シリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９７．５：２．５：０．２
５）を溶出剤として使用して精製して、黄色の泡状物を得た。これをＥｔ₂Ｏに
溶解し、エーテル性ＨＣｌで処理し、混合物を真空中で蒸発し、そして残留物を
Ｅｔ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］−Ｄ−プロリンｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩（１６６ｍｇ
、０．３１ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【０９８３】

【化２５９】

【０９８４】 Ｎ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｄ−プロリンｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩（１５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ
）を、ＥｔＯＡｃ中のＨＣｌの氷冷した溶液（２０ｍｌ）で処理し、そして反応
物を室温まで温まらせ、そして４時間撹拌した。溶液を真空中で濃縮し、そして
粗製産物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−
０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶出剤として使用して精製した。産物を
エーテル性ＨＣｌで処理し、得られた沈殿物を濾過し、Ｅｔ₂Ｏで洗浄し、そし
て乾燥して、Ｎ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−Ｄ−プロリン塩酸塩（７５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）を、白色の粉
末として得た。

【０９８５】

【化２６０】

【０９８６】 実施例８２： （２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホ
ニル）−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−２−ピロリジンカルボキサミ
ド

【０９８７】

【化２６１】

【０９８８】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｌ−プロリン塩酸塩（３００ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５滴）及び
ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍｌ）の溶液に懸濁し、そして塩化オキサリル（１５０μｌ、
１．７２ｍｍｏｌ）を滴下により加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、次いで
真空中で濃縮し、そしてトルエンと共沸した。残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍｌ）
に溶解し、Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルアミン（１ｍｌ、０．
９ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を室温で２時間撹拌した。混合物を真空中で
蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃ及びＮａ₂ＣＯ₃の溶液間に分配し、層を分離し、そ
して有機相を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した
。残留した黄色の固体をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂ −ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５から９０：１０：１に）の溶
出勾配を使用して精製して、（２Ｒ）−１−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル｝スルホニル）−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−
２−ピロリジンカルボキサミド（１９５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、黄色の固
体として得た。

【０９８９】

【化２６２】

【０９９０】 実施例８３： １−｛（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）［
２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ｝−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ
−メチルシクロペンタンカルボキサミド二塩酸塩

【０９９１】

【化２６３】

【０９９２】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシン二塩酸塩（１７０ｍｇ、
０．３１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０μｌ）及びＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍｌ）中に溶
解した。塩化オキサリル（１００μｌ、１．１５ｍｍｏｌ）を加え、そして混合
物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、新しいＣＨ₂Ｃｌ₂で置き換
え、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中のＮ−メチルエタノールアミン（２３０μｌ、２
．８６ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を２時間撹拌した。溶媒を真空中で除去
し、そして得られたゴム状物をＥｔ₂Ｏ及びＥｔＯＡｃで抽出した。混合したこ
れらの有機抽出物を真空中で濃縮し、そして粗製産物をシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１
）で溶出して精製した。得られた黄色の油状物をＥｔＯＡｃに溶解し、そしてエ
ーテル性ＨＣｌ（１Ｎ）で酸性化して、表題化合物をクリーム色の固体（１７ｍ
ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）として得た。

【０９９３】

【化２６４】

【０９９４】 実施例８４： （ａ）Ｎ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル
］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−シクロロイシンエチル二塩酸塩 （ｂ）Ｎ−（｛４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル
）−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−シクロロイシン二塩酸塩

【０９９５】

【化２６５】

【０９９６】 ＮａＨ（２８ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、０．９３ｍｍｏｌ）及び塩酸グア
ニジン（１２６ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＳＯ（３ｍｌ）中の混合物
を、５０℃で３０分間加熱した。Ｎ−［（４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキ
ノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−シクロロイ
シン塩酸塩（１５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を９０℃で
１時間加熱し、冷却し、水中に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。混
合した有機抽出物を水及び食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空
中で濃縮して黄色のゴム状物を得た。ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃
（９５：５：０．５）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにかけ
た後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、そしてエーテル性ＨＣｌ（１Ｎ）で酸性化
して、白色の沈殿物を得た。これを濾過し、乾燥し、そしてＥｔＯＨから再結晶
して、白色の固体（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を得た。母液を濃縮して、Ｎ
−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−
［２−（ジメチルアミノ）エチル］−シクロロイシンエチル二塩酸塩の第２の収
穫（９５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を得た。

【０９９７】

【化２６６】

【０９９８】 ＥｔＯＨ（３ｍｌ）中のＮ−［（４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−シクロロイシ
ンエチル二塩酸塩（９５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、ＮａＯＨ（４Ｎ、８ｍｌ
）で処理し、そして溶液を６０℃で５時間撹拌し、そして室温で６０時間静置さ
せた。反応混合物を２ＮのＨＣｌを使用して酸性化し、真空中で濃縮し、そして
残留物をｉ−ＰｒＯＨと共沸して、オフホワイト色の固体を得た。これをＭｅＯ
Ｈ中に抽出し、溶液を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロ
マトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（８０：２０：５
）を溶出剤として使用して精製した。産物をＥｔＯＡｃ中に懸濁し、エーテル性
ＨＣｌで処理し、混合物を真空中で蒸発し、そして産物をＥｔＯＡｃで摩砕して
、Ｎ−（｛４−ブロモ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）−
Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−シクロロイシン二塩酸塩（１５ｍｇ、
０．０２７ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体として得た。

【０９９９】

【化２６７】

【１０００】 実施例８５： （ａ）３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝−２，２−ジメチルプロパン酸エチル塩酸塩 （ｂ）Ｎ−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル
）−２，２−ジメチル−β−アラニン塩酸塩

【１００１】

【化２６８】

【１００２】 ３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−２，２−ジメチルプロパン酸エチル塩酸塩を、３−｛［（１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−２，２−ジメチルプロパ
ン酸エチルから、実施例８３に記載した方法と同様の方法によって白色の固体と
して調製（２９％）した。

【１００３】

【化２６９】

【１００４】 ３−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝−２，２−ジメチルプロパン酸エチル塩酸塩（２８ｍｇ、０．０６ｍｍ
ｏｌ）の、ＮａＯＨ溶液（２Ｎ、０．５ｍｌ）及びＭｅＯＨ（１ｍｌ）中の溶液
を、７５℃で２４時間撹拌した。冷却した混合物をＨＣｌ（２Ｎ）を使用してｐ
Ｈ６に酸性化し、真空中で濃縮して、ＭｅＯＨを除去し、そして得られた沈殿物
を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥した。固体をＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃの溶液中
に懸濁し、エーテル性ＨＣｌを加え、そして混合物を真空中で蒸発して、Ｎ−（
｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）−２，２−
ジメチル−β−アラニン塩酸塩を、白色の固体（２２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）
として得た。

【１００５】

【化２７０】

【１００６】 実施例８６： （ａ）１−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニ
ル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロペンタンカルボキサミド （ｂ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝
−Ｎ−Ｎ−ジメチルシクロペンタンカルボキサミド （ｃ）１−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニ
ル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロペンタンカル
ボキサミド塩酸塩

【１００７】

【化２７１】

【１００８】 塩化オキサリル（３．５ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（｛４−クロロ−１
−グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）シクロロイシン塩酸塩（８７
０ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）中の懸濁液に加え、続
いてＤＭＦ（５滴）を加え、そして反応物を室温で２時間撹拌した。溶液を真空
中で濃縮し、そしてトルエンと共沸して、黄色のゴム状物を得た。これをＣＨ₂
Ｃｌ₂（１００ｍｌ）中に溶解し、溶液を−２０℃に冷却し、そして冷却したＮ
，Ｎ−ジメチルアミン（１０ｍｌ）を加えた。反応物を３０分間にわたって撹拌
しながら室温まで温まらせ、次いで真空中で濃縮し、そして残留物をトルエンと
共沸した。粗製産物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−
ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶出剤として使用して精製
し、そしてＭｅＯＨから結晶化して、１−［（｛４−クロロ−１−グアニジノ−
７−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロペンタン
カルボキサミド（３０２ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を、黄色の固体として得た。

【１００９】

【化２７２】

【１０１０】 Ｋ₂ＣＯ₃（１１３ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を、１−［（｛４−クロロ−１−
グアニジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルシ
クロペンタンカルボキサミド（１５０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．
５ｍｌ）中の溶液に加え、そして混合物を７５℃に加熱した。次いで２−（２−
ブロモエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（Ｊ．Ｃ．Ｓ．１９４８；４１８
７）（１５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びヨウ化ナトリウム（３ｍｇ）を加え
、そして反応物を７５℃で３日間撹拌した。冷却した反応混合物を水中に注ぎ、
そしてＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎ
ａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留した黄色の油状物をシリカゲルの
カラムクロマトグラフィーで、ＥｔＯＡｃを溶出剤として使用して精製し、そし
てヘキサン−ＥｔＯＡｃ（２０：１）の溶液で摩砕して、１−｛［（４−クロロ
−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］［２−（テトラヒドロ−
２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝−Ｎ−Ｎ−ジメチルシクロペ
ンタンカルボキサミド（５６ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を得た。

【１０１１】

【化２７３】

【１０１２】 エーテル性ＨＣｌを、１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノ
リニル）スルホニル］［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）
エチル］アミノ｝−Ｎ−Ｎ−ジメチルシクロペンタンカルボキサミド（３７ｍｇ
、０．０６５ｍｍｏｌ）の、ＥｔＯＡｃ（１．５ｍｌ）中の溶液に、更なる沈殿
が起こらなくなるまで滴下により加えた。得られた懸濁液を室温で２０分間撹拌
し、そして次いで真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラ
フィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶
出剤として使用して精製し、そしてトルエンと共沸した。産物をＭｅＯＨ−ＣＨ ₂ Ｃｌ₂の溶液に溶解し、エーテル性ＨＣｌ（５ｍｌ）を加え、そして混合物を真
空中で蒸発し、そしてＥｔ₂Ｏで摩砕して、１−［（｛４−クロロ−１−グアニ
ジノ−７−イソキノリニル｝スルホニル）（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−
Ｎ，Ｎ−ジメチルシクロペンタンカルボキサミド塩酸塩（９ｍｇ、０．０１７ｍ
ｍｏｌ）を、クリーム色／白色の固体として得た。

【１０１３】

【化２７４】

【１０１４】 実施例８７： （ａ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝
シクロペンタンカルボン酸エチル （ｂ）１−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝
シクロペンタンカルボン酸 （ｃ）Ｎ’’−｛４−クロロ−７−［（１０−オキソ−９−オキサ−６−アザス
ピロ［４．５］デク−６−イル）スルホニル］−１−イソキノリニル｝グアニジ
ン塩酸塩

【１０１５】

【化２７５】

【１０１６】 ＮａＨ（４５ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．５ｍｍｏｌ）を、塩酸グアニ
ジン（２３１ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍｌ）中の溶液に加え、そ
して溶液を５０℃で２０分間撹拌した。１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキ
シ）エチル］アミノ｝シクロペンタンカルボン酸エチル（３３０ｍｇ、０．６ｍ
ｍｏｌ）を加え、そして反応物を７０℃で２．５時間撹拌した。冷却した反応物
を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、そして混合した有機抽出物を食塩水で洗浄
し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留した黄色のゴム状物
をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８
０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶出剤として使用して精製して、１−｛［（４
−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］［２−（テトラ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝シクロペンタンカル
ボン酸エチルを、オレンジ色の油状物として得た。

【１０１７】

【化２７６】

【１０１８】 １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝シク
ロペンタンカルボン酸エチルのＭｅＯＨ（５ｍｌ）中の溶液を、７５℃に加熱し
、ＮａＯＨの溶液（１ｍｌ、２Ｎ、２ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を５０℃
で４８時間撹拌した。冷却した混合物を真空中で濃縮して、ＭｅＯＨを除去し、
そして残った水溶液を１ＮのＨＣｌを使用してｐＨ６に酸性化した。得られた沈
殿物を濾過し、水で洗浄し、そして濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機
抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発して、１−｛［（４−クロ
ロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］［２−（テトラヒドロ
−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝シクロペンタンカルボン酸
（９ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体として得た。

【１０１９】

【化２７７】

【１０２０】 １−｛［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）スルホニル］
［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝シク
ロペンタンカルボン酸（２０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ（２０
ｍｌ）中に溶解し、エーテル性ＨＣｌ（１０ｍｌ）を加え、そして反応物を室温
で１８時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、そして真
空下で乾燥して、Ｎ’’−｛４−クロロ−７−［（１０−オキソ−９−オキサ−
６−アザスピロ［４．５］デク−６−イル）スルホニル］−１−イソキノリニル
｝グアニジン塩酸塩（１７ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を得た。

【１０２１】

【化２７８】

【１０２２】 実施例８８： （ａ）Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］シ
クロロイシンメチルエステル （ｂ）Ｎ−（｛４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル｝メチル）シ
クロロイシン二塩酸塩

【１０２３】

【化２７９】

【１０２４】 ＮａＨ（５２ｍｇ、鉱油中の８０％分散物、１．７３ｍｍｏｌ）を、塩酸グア
ニジン（２６５ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２．５ｍｌ）中のスラリ
ーに加え、そして混合物を５０℃で２０分間加熱した。ＤＭＳＯ（２．５ｍｌ）
中のＮ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル］シクロロイシン
メチルエステル（２４５ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を加え、そして９０℃で４．
５時間加熱した後、溶液を水（５０ｍｌ）中に注いだ。混合物をＥｔＯＡｃ（２
×）で抽出し、混合した有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、そして次いで乾燥（
Ｎａ₂ＳＯ₄）した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂
Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）で溶出して精製して、黄
色の固体を得た。これをＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨの溶液に溶解し、そしてエーテル
性ＨＣｌ（１Ｎ）で酸性化し、真空中で濃縮し、そして粗製産物をＥｔＯＨから
再結晶して、Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチ
ル］シクロロイシンメチルエステル（３０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を、クリー
ム色の固体として得た。

【１０２５】

【化２８０】

【１０２６】 Ｎ−［（４−クロロ−１−グアニジノ−７−イソキノリニル）メチル］シクロ
ロイシンメチルエステル（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を、メタノール（４
ｍｌ）中に５０℃で溶解し、ＮａＯＨ（２Ｎ、１ｍｌ）を加え、そして反応混合
物を５０℃で２日間加熱した。冷却した混合物をＮａＯＨ（２Ｎ）でｐＨ６に塩
基性化して、沈殿物を得て、これを濾過して取り出し、そして水で洗浄した。固
体をＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ中に溶解し、エーテル性ＨＣｌ（１Ｎ）で酸性化し、
そしてｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して表題化合物（ｂ）を、淡黄色の固体（１０ｍｇ、
０．０３ｍｍｏｌ）として得た。

【１０２７】

【化２８１】

【１０２８】 調製例 調製例１： ７−ブロモ−１，４−ジクロロイソキノリン

【１０２９】

【化２８２】

【１０３０】 ４−ブロモケイヒ酸（５．０３ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）のＳＯＣｌ₂（１５ｍ
Ｌ）中の溶液を、２３℃で１６時間撹拌し、そして次いで還流下で更に２時間加
熱した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＰｈＭｅ（×３）と共沸して、
塩化４−ブロモシンナモイル（２２ｍｍｏｌ）を、オレンジ色−褐色の固体とし
て得た。

【１０３１】

【化２８３】

【１０３２】 ＮａＮ₃（２．２ｇ、３３．８ｍｍｏｌ）の水（７．５ｍＬ）中の溶液を、塩
化４−ブロモシンナモイル（２２ｍｍｏｌ）のアセトン（２２ｍＬ）中の−１０
℃の撹拌された溶液に５分間にわたって滴下により加えた。不均質な混合物を０
℃で１時間撹拌し、そして水（２５ｍＬ）で希釈した。沈殿物を濾過により収集
し、そしてＰ₂Ｏ₅で真空中で乾燥して、４−ブロモシンナモイルアジド（５．２
２ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）を、金色の固体として得た。

【１０３３】

【化２８４】

【１０３４】

【化２８５】

【１０３５】 ４−ブロモシンナモイルアジド（５．２２ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）のＰｈ₂Ｏ
（２５ｍＬ）中の温溶液を、撹拌されたＰｈ₂Ｏ（１０ｍＬ）に２７０℃で１５
分間にわたって滴下により加えた。［注意：潜在的に爆発性−防爆幕を使用する
こと］。混合物を２７０℃で１．５時間加熱し、２３℃に冷却し、そして次いで
ヘキサン（４００ｍＬ）中に注いだ。沈殿物をヘキサン（２×１００ｍＬ）で洗
浄しながら濾過により収集し、そしてシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで
、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（６：４から０：１００に）を溶出剤として使用して精
製して、７−ブロモ−１（２Ｈ）−イソキノロン（１．６４ｇ、７．３ｍｍｏｌ
）を、白色の固体として得た。

【１０３６】

【化２８６】

【１０３７】

【化２８７】

【１０３８】 ７−ブロモ−１（２Ｈ）−イソキノロン（１．２８ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）及
びＰＣｌ₅（２．０４ｇ、９．８０ｍｍｏｌ）の混合物を、１４０℃で５時間加
熱した。冷却した混合物を氷（５０ｇ）でクエンチし、そしてリトマス試験紙で
アルカリ性となるまで０．８８０ＮＨ₃を加えた。水性の混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（
３×５０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機相を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そし
て真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキ
サン−ＥｔＯＡｃ（９７：３から９５：５に）を溶出剤として使用して精製して
、７−ブロモ−１，４−ジクロロイソキノリン（１．１３ｇ、４．０８ｍｍｏｌ
）を、白色の固体として得た。

【１０３９】

【化２８８】

【１０４０】 調製例２： ２−アミノ安息香酸ｔ−ブチル

【１０４１】

【化２８９】

【１０４２】 塩化２−ニトロベンゾイル（１５ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）及びｔ−ＢｕＯＨ（
１００ｍＬ）の混合物を、還流で３時間加熱した。冷却した混合物を氷水に注ぎ
、Ｎａ₂ＣＯ₃で塩基性化し、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂（×２）で抽出した。混合した有
機抽出物を食塩水で洗浄し、溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲル
のカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９５：５）を溶出剤と
して使用して精製して、２−ニトロ安息香酸ｔ−ブチル（４．９ｇ、２２ｍｍｏ
ｌ）を、黄色の油状物として得た。

【１０４３】

【化２９０】

【１０４４】 ２−ニトロ安息香酸ｔ−ブチル（４．９ｇ、２２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１６
０ｍＬ）中の溶液を、１０％パラジウム−炭素（７００ｍｇ）と２３℃のＨ₂（
約４．２ｋｇ／ｃｍ²（６０ｐｓｉ））雰囲気下で撹拌した。４時間後、混合物
を濾過し、そして真空中で蒸発して、２−アミノ安息香酸ｔ−ブチル（４．０ｇ
、２０．７ｍｍｏｌ）を、黄色の油状物として得た。

【１０４５】

【化２９１】

【１０４６】 調製例３： ２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息
香酸ｔ−ブチル

【１０４７】

【化２９２】

【１０４８】 ｎ−ブチルリチウム（０．８８ｍＬ、ヘキサン中の２．５Ｍ、２．２ｍｍｏｌ
）を、７−ブロモ−１，４−ジクロロイソキノリン（５７０ｍｇ、２．０ｍｍｏ
ｌ）のＴＨＦ−Ｅｔ₂Ｏ（１０ｍＬ、１：１）中のＮ₂下の−７８℃で撹拌された
溶液に滴下により加えた。５分後、混合物をＳＯ₂Ｃｌ₂（０．３５ｍＬ、４．３
５ｍｍｏｌ）のヘキサン（１０ｍＬ）中の−７８℃のＮ₂下の溶液に加え、そし
て混合物をゆっくりと２３℃に温め、そして次いで４．５時間撹拌した。溶媒を
真空中で蒸発し、ＣＨ₂Ｃｌ₂及びＰｈＭｅと共沸し、残留物をＮＥｔ₃（１．１
５ｍＬ、８．２５ｍｍｏｌ）を含むＣＨ₂Ｃｌ₂（１２ｍＬ）中に懸濁し、そして
２−アミノ安息香酸ｔ−ブチル（５２０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合
物を室温で３日間撹拌し、そして次いで還流で６時間加熱した。冷却した混合物
をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、ＨＣｌ（２Ｍ）水溶液、食塩水で洗浄し、そして次いで
真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサ
ン−ＥｔＯＡｃ（９７：３から９５：５に）を溶出剤として使用して精製して、
最初１，４，７−トリクロロイソキノリン（２００ｍｇ）、続いて２−｛［（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息香酸ｔ−ブチ
ル（１２０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を、黄色の樹脂状物として得た。

【１０４９】

【化２９３】

【１０５０】 調製例４： ３−アミノ安息香酸ｔ−ブチル

【１０５１】

【化２９４】

【１０５２】 ３−ニトロ安息香酸（５ｇ、３０ｍｍｏｌ）、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（
２０ｇ、９２ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（０．８４ｇ、６．９ｍｍｏｌ）の、Ｔ
ＨＦ（６０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で２日間撹拌した。混合物を氷水に注ぎ
、Ｎａ₂ＣＯ₃で塩基性化し、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂（×３）で抽出した。混合した有
機抽出物を食塩水で洗浄し、溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲル
のカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９５：５）を溶出剤と
して使用して精製して、３−ニトロ安息香酸ｔ−ブチル（５．４ｇ、２４ｍｍｏ
ｌ）を、無色の油状物として得た。

【１０５３】

【化２９５】

【１０５４】 ３−ニトロ安息香酸ｔ−ブチル（５．８ｇ、２６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２６
０ｍＬ）中の溶液を、１０％パラジウム−炭素（１．０ｇ）と２３℃のＨ₂（約
４．２ｋｇ／ｃｍ²（６０ｐｓｉ））雰囲気下で撹拌した。４時間後、混合物を
濾過し、そして真空中で蒸発して、３−アミノ安息香酸ｔ−ブチル（４．０ｇ、
２０．７ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１０５５】

【化２９６】

【１０５６】 調製例５： ３−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝安息
香酸ｔ−ブチル

【１０５７】

【化２９７】

【１０５８】 ｎ−ブチルリチウム（０．８８ｍＬ、ヘキサン中の２．５Ｍ、２．２ｍｍｏｌ
）を、７−ブロモ−１，４−ジクロロイソキノリン（５７０ｍｇ、２．０ｍｍｏ
ｌ）のＴＨＦ−Ｅｔ₂Ｏ（１０ｍＬ、１：１）中のＮ₂下の−７８℃で撹拌された
溶液に滴下により加えた。５分後、混合物をＳＯ₂Ｃｌ₂（０．３５ｍＬ、４．３
５ｍｍｏｌ）のヘキサン（１０ｍＬ）中の−７８℃のＮ₂下の溶液に加え、そし
て混合物をゆっくりと２３℃に温め、そして次いで４．５時間撹拌した。溶媒を
真空中で蒸発し、ＰｈＭｅと共沸し、残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１２ｍＬ）中に懸濁
し、そして３−アミノ安息香酸ｔ−ブチル（５２０ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）、続
いてＮＥｔ₃（１．１５ｍＬ、８．２５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４
日間撹拌し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグ
ラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９０：１０から５０：５０に）を溶出剤と
して使用して精製して、最初１，４，７−トリクロロイソキノリン（１５０ｍｇ
）、続いて２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］ア
ミノ｝安息香酸ｔ−ブチル（２８９ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を、褐色の固体と
して得て、これを更に精製せずに使用した。

【１０５９】

【化２９８】

【１０６０】 調製例６： 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル

【１０６１】

【化２９９】

【１０６２】 Ｎ−クロロスクシンイミド（９．６６ｇ、７２ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（８０ｍ
Ｌ）中の溶液を、１−（２Ｈ）−イソキノロン（１０ｇ、６９ｍｍｏｌ）のＭｅ
ＣＮ（２５０ｍＬ）中の還流下で加熱されている撹拌された溶液に滴下により加
えた。混合物を還流下で更に１．５時間加熱し、そして次いで室温に冷却した。
得られた沈殿物をＭｅＣＮで洗浄しながら濾過により収集し、そして次いで真空
中で乾燥して、４−クロロ−１（２Ｈ）−イソキノロン（１１．３ｇ、６２．９
ｍｍｏｌ）を、薄いピンク色の固体として得た。

【１０６３】

【化３００】

【１０６４】

【化３０１】

【１０６５】 ４−クロロ−１（２Ｈ）−イソキノロン（２０．６２ｇ、１１５ｍｍｏｌ）を
、撹拌された０℃のクロロスルホン酸（６１ｍＬ、９１８ｍｍｏｌ）に分割して
加えた。混合物を１００℃で３．５日間加熱し、そして次いで室温に冷却した。
反応混合物を小部分ずつ氷水に加え［要注意］、そして得られた沈殿物を濾過に
より収集した。固体を水で洗浄し、ＭｅＣＮで摩砕し、そして次いで真空中で乾
燥して、塩化４−クロロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−７−イソキノリンス
ルホニル（１８．７５ｇ、６７．４ｍｍｏｌ）を、クリーム色の固体として得た
。

【１０６６】

【化３０２】

【１０６７】

【化３０３】

【１０６８】 ＰＯＣｌ₃（９．６５ｍＬ、１０３．５ｍｍｏｌ）を、塩化４−クロロ−１−
オキソ−１，２−ジヒドロ−７−イソキノリンスルホニル（２２．１ｇ、７９．
６ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（５００ｍＬ）中の室温の撹拌された懸濁液に加え、そ
して次いで混合物を還流で１５時間加熱した。冷却してから、ＭｅＣＮ溶液を不
溶性のスラッジからデカントし、そして真空中で蒸発した。残留物を熱ＥｔＯＡ
ｃで抽出し、そして蒸発して、固体を残し、これをＥｔ₂Ｏ（１．２Ｌ）と室温
で一晩撹拌した。エーテル性の溶液を不溶性の物質からデカントし、そして真空
中で蒸発して、塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（２０ｇ、
６７ｍｍｏｌ）を、淡黄色の固体として得た。

【１０６９】

【化３０４】

【１０７０】 調製例７： ３−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−４
−メトキシ安息香酸メチル

【１０７１】

【化３０５】

【１０７２】 ３−アミノ−４−メトキシ安息香酸メチル（２１２ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）
を、塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（３４２ｍｇ、１．１
５ｍｍｏｌ）の、２，６−ルチジン（０．１３５ｍＬ、１．１６ｍｍｏｌ）を含
むＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中のＮ₂下の０℃の撹拌された溶液に加えた。５分後
、混合物を室温に温め、そして２２時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そし
て残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に懸濁し、そして次いで水、食塩水で洗浄
し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカ
ラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０から２０：８０
に）を溶出剤として使用して精製して、３−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］アミノ｝−４−メトキシ安息香酸メチル（３６５ｍｇ
、０．８３ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の固体として得た。

【１０７３】

【化３０６】

【１０７４】 調製例８： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブ
チルエステル

【１０７５】

【化３０７】

【１０７６】 ＮＥｔ₃（０．５９ｍＬ、４．２４ｍｍｏｌ）を、グリシンｔ−ブチルエステ
ル塩酸塩（３４０ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）の、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２５
ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加え、そして混合物を室温で１８時間撹拌
した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（×２、１Ｍ）、
飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中
で蒸発した。固体をＥｔＯＡｃで摩砕し、濾過により収集し、そして乾燥して、
Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブ
チルエステル（４３５ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１０７７】

【化３０８】

【１０７８】 調製例９： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−β−アラニン
ｔ−ブチルエステル

【１０７９】

【化３０９】

【１０８０】 ＮＥｔ₃（０．６０ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ）を、β−アラニンｔ−ブチルエス
テル塩酸塩（３３１ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−
イソキノリンスルホニル（５１０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）の、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１
０ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加え、そして混合物を室温で２２時間撹
拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、半飽和の食塩水で洗浄し、
乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラム
クロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（９０：１０から６０：４０に）
を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−β−アラニンｔ−ブチルエステル（５８０ｍｇ、１．４３
ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１０８１】

【化３１０】

【１０８２】 調製例１０： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−メチルグ
リシンｔ−ブチルエステル

【１０８３】

【化３１１】

【１０８４】 Ｎ−メチルグリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（２６４ｍｇ、１．４５ｍｍｏ
ｌ）を、塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（３７６ｍｇ、１
．２７ｍｍｏｌ）の、ＮＥｔ₃（０．４４ｍＬ、３．１６ｍｍｏｌ）を含むＣＨ₂ Ｃｌ₂（２５ｍＬ）中のＮ₂下の０℃の撹拌された溶液に加え、そして次いで混合
物を室温で２２時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、残留物をＥｔＯＡｃ（５
０ｍＬ）中に溶解し、水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空
中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−
ＥｔＯＡｃ（８０：２０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−
ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−メチルグリシンｔ−ブチル
エステル（４８５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１０８５】

【化３１２】

【１０８６】 調製例１１： Ｎ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル

【１０８７】

【化３１３】

【１０８８】 クロロ酢酸ｔ−ブチル（１０ｇ、６６．３ｍｍｏｌ）を、アニリン（１１．３
ｇ、１２０ｍｍｏｌ）のＮＥｔ₃（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に滴下により
加え、そして混合物を室温で２４時間、そして次いで６０℃で１８時間撹拌した
。冷却した混合物をＥｔ₂Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ₂Ｏで洗浄しながら濾
過し、そして次いで濾液を水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして
真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサ
ン−ＥｔＯＡｃ（９８：２から９２：８に）を溶出剤として使用して精製して、
Ｎ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（６．５６ｇ、３１．６ｍｍｏｌ）を
油状物として得た。

【１０８９】

【化３１４】

【１０９０】 調製例１２： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−フェニル
グリシンｔ−ブチルエステル

【１０９１】

【化３１５】

【１０９２】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（３００ｍｇ、１．０１
ｍｍｏｌ）を、Ｎ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（２２８ｍｇ、１．１
０ｍｍｏｌ）の、ＮＥｔ₃（０．３５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を含むＣＨ₂Ｃｌ₂
（５．０ｍＬ）中のＮ₂下の室温の撹拌された溶液に加え、そして混合物を５日
間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（２０ｍＬ
、１Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空
中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−
ＥｔＯＡｃ（９０：１０から６０：４０に）を溶出剤として使用して精製して、
Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−フェニル
グリシンｔ−ブチルエステル（４８５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）を、白色の固体
として得た。

【１０９３】

【化３１６】

【１０９４】 調製例１３： Ｎ−（シクロペンチルメチル）−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル

【１０９５】

【化３１７】

【１０９６】 ＰＰｈ₃（２４３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、そして次いでＤＥＡＤ（２３６μ
Ｌ、１．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）中の溶液を、Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル（３９１ｍ
ｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びシクロペンタンメタノール（１３０μＬ、１．２ｍ
ｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）中のＮ₂下の０℃の撹拌された溶液に加え、そして
混合物を室温で１８時間撹拌した。シクロペンタンメタノール（１．２ｍｍｏｌ
）、ＰＰｈ₃（１．５ｍｍｏｌ）、及びＤＥＡＤ（１．５ｍｍｏｌ）の更なる部
分を加え、そして混合物を室温で更に２日間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、
そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡ
ｃ（１００：０から９５：５に）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−（シク
ロペンチルメチル）−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホ
ニル］グリシンｔ−ブチルエステル（１４４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、白色
の固体として得た。

【１０９７】

【化３１８】

【１０９８】 調製例１４： Ｎ−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル

【１０９９】

【化３１９】

【１１００】 臭化シクロヘキシルメチル（２０９μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル
（３９１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及び無水のＫ₂ＣＯ₃（２７６ｍｇ、２．０ｍ
ｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ₂下の２３℃の撹拌された溶液に加えた。混
合物を２時間撹拌し、そして次いで５０−６０℃で６時間加熱した。冷却した混
合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（
ＭｇＳＯ₄）し、そして溶媒を真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラム
クロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０から９５：５に）を
溶出剤として使用して精製して、Ｎ−（シクロヘキシルメチル）−Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエステル
（３２０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を得た。

【１１０１】

【化３２０】

【１１０２】 調製例１５： Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステル

【１１０３】

【化３２１】

【１１０４】 ブロモ酢酸ｔ−ブチル（１．５ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０
ｍＬ）中の溶液を、ベンジルアミン（１０．９ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）のＣＨ₂
Ｃｌ₂（４０ｍＬ）中の０℃の撹拌された溶液に滴下により加え、混合物を１時
間撹拌し、そして次いで室温まで温め、そして更に３日間撹拌した。混合物を水
（３×５０ｍＬ）、希釈ＨＣｌ（１Ｎ）で洗浄し、そして混合した水性洗浄液を
Ｅｔ₂Ｏで抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂Ｓ
Ｏ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し、エーテル中のＨ
Ｃｌの溶液（０．５Ｍ）で処理し、そして得られた沈殿物を収集し、そしてＥｔ
ＯＡｃに溶解した。この溶液をハイフロー（ｈｙｆｌｏ）を通して濾過し、そし
て真空中で部分的に蒸発して、濃厚なスラリーを得た。固体を濾過により収集し
、Ｅｔ₂Ｏで洗浄し、そして次いで乾燥して、Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチル
エステル塩酸塩（１．０３ｇ、４．００ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１１０５】

【化３２２】

【１１０６】 調製例１６： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−ベンジル
グリシンｔ−ブチルエステル

【１１０７】

【化３２３】

【１１０８】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（３００ｍｇ、１．０１
ｍｍｏｌ）を、Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステル（３１０ｍｇ、１．２
０ｍｍｏｌ）の、ＮＥｔ₃（０．３５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を含むＣＨ₂Ｃｌ₂
（２０ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加え、そして混合物を室温で３日間
撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和Ｎａ
ＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、次いで乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中
で濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−Ｅ
ｔＯＡｃ（９０：１０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチル
エステル（２９０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を、オフホワイト色の固体として得
た。

【１１０９】

【化３２４】

【１１１０】 調製例１７： Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１１１】

【化３２５】

【１１１２】 クロロ酢酸ｔ−ブチル（２．１３ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）を、２−メチルベン
ジルアミン（１．７１ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）の、ＮＥｔ₃（２．９５ｍＬ、２
１．２ｍｍｏｌ）を含むＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に
加え、そして混合物を室温で１７時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、残留物
をＥｔＯＡｃ中に懸濁し、そして水、食塩水で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ₄
）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィ
ーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（９５：５から８０：２０に）を溶出剤として使用
して精製して、Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（１．
２９ｇ、５．４８ｍｍｏｌ）を得た。

【１１１３】

【化３２６】

【１１１４】 調製例１８： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メ
チルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１１５】

【化３２７】

【１１１６】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（４００ｍｇ、１．３５
ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（３８
０ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の、ＮＥｔ₃（０．２８ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を
含むＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加え、そして混合物
を室温で１８時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして希釈ＨＣｌ（
２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ₄）し
、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで
、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０から９０：１０に）を溶出剤として使用し
て精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−
Ｎ−（２−メチルベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（４８０ｍｇ、０．９
７ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１１１７】

【化３２８】

【１１１８】 調製例１９： Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１１９】

【化３２９】

【１１２０】 ブロモ酢酸ｔ−ブチル（１．５ｍＬ、１０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０
ｍＬ）中の溶液を、２−メトキシベンジルアミン（６．８８ｇ、５０．２ｍｍｏ
ｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（７０ｍＬ）中のＮ₂下の０℃の撹拌された溶液に加え、そし
て次いで混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を希釈ＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ
）で徹底的に洗浄し、そして分離された水相をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出した。混合した
有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、次いで乾燥（Ｎａ₂ＳＯ ₄ ）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ（９９：１から９５：５に）を溶出剤として使用
して精製して、Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（０
．９０ｇ、３．５８ｍｍｏｌ）を、淡黄色の油状物として得た。

【１１２１】

【化３３０】

【１１２２】 調製例２０： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メ
トキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１２３】

【化３３１】

【１１２４】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９
ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（５
０８ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の、ＮＥｔ₃（０．３５ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）
を含むＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加え、そして混合
物を室温で２１時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして希釈ＨＣｌ
（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、次いで乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄
）し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィ
ーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９５：５から９０：１０に）を溶出剤として使用
して精製し、そして次いでヘキサン−ｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（１，４
−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−メトキシベンジル
）グリシンｔ−ブチルエステル（５０１ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を、黄色の固
体として得た。

【１１２５】

【化３３２】

【１１２６】 調製例２１： Ｎ−（３−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１２７】

【化３３３】

【１１２８】 ブロモ酢酸ｔ−ブチル（１．５ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０
ｍＬ）中の溶液を、３−メトキシベンジルアミン（６．８６ｇ、５０ｍｍｏｌ）
のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の０℃の撹拌された溶液に滴下により加え、そして
次いで混合物を室温まで温め、そして１．５時間撹拌した。希釈ＨＣｌ（３０ｍ
Ｌ、１Ｍ）を加え、そして混合物を１５分間撹拌した。水相をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出
し、そして混合した有機抽出物を水、食塩水、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液で洗浄し
、次いで乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲル
のカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ（９９：１から９０：１
０に）を溶出剤として使用して精製して、必要とするアミンを無色の油状物とし
て得た。エーテル中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）で処理して、Ｎ−（３−メトキシベ
ンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（０．８３ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）
を、白色の固体として得た。

【１１２９】

【化３３４】

【１１３０】 調製例２２： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−メ
トキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１３１】

【化３３５】

【１１３２】 ＮＥｔ₃（０．５９ｍＬ、４．２４ｍｍｏｌ）、そして次いで塩化１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を、Ｎ
−（３−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（５８２ｍｇ、
２．０２ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加
え、そして混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）
で希釈し、希釈ＨＣｌ（２×、１Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄
し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で濃縮した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏで抽
出し、これを静置して沈殿物を得た。白色の固体を濾過により収集し、そして乾
燥して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−
（３−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル（２６２ｍｇ、０．５１
ｍｍｏｌ）を得た。第２のバッチ（１６５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、母液の
蒸発、及び残留物のヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）を使用したシリカゲル
のカラムクロマトグラフィーによる精製によって得た。

【１１３３】

【化３３６】

【１１３４】 調製例２３： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−ク
ロロベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１３５】

【化３３７】

【１１３６】 塩化３−クロロベンジル（０．０６３ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）を、Ｎ−［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチルエス
テル（１９５．５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の、Ｋ₂ＣＯ₃（８３ｍｇ、０．６０
ｍｍｏｌ）を含むＤＭＦ（５ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして混合物を
室温で１８時間撹拌した。混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、Ｅｔ₂Ｏ（３×３
０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出し、そして次いで混合した有機
抽出物を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した
。固体をヘキサンで摩砕し、濾過により収集し、そして乾燥して、Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−クロロベンジル
）グリシンｔ−ブチルエステル（２１２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を、淡黄色の
固体として得た。

【１１３７】

【化３３８】

【１１３８】 調製例２４： Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１３９】

【化３３９】

【１１４０】 ブロモ酢酸ｔ−ブチル（１．５ｍＬ、１０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０
ｍＬ）中の溶液を、４−メトキシベンジルアミン（６．８９ｇ、５０．２ｍｍｏ
ｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（７０ｍＬ）中の０℃の撹拌された溶液に滴下により加え、そ
して次いで混合物を室温まで温め、そして１時間撹拌した。希釈ＨＣｌ（３０ｍ
Ｌ、１Ｍ）を加え、そして混合物を１０分間撹拌した。水相をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出
し、そして混合した有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、次
いで乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカ
ラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ（９９：１から９０：１０に
）を溶出剤として使用して精製して、必要とするアミンを無色の油状物として得
た。エーテル中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）で処理し、続いてＥｔ₂Ｏで摩砕して、
Ｎ−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１４８ｍｇ
、０．５１ｍｍｏｌ）を、オレンジ色の固体として得た。

【１１４１】

【化３４０】

【１１４２】 調製例２５： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−メ
トキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１４３】

【化３４１】

【１１４４】 ＮＥｔ₃（０．２５ｍＬ、１．７８ｍｍｏｌ）、そして次いで塩化１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリンスルホニル（２１０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を、Ｎ
−（４−メトキシベンジル）グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（２４５ｍｇ、
０．８５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中のＮ₂下の撹拌された溶液に加
え、そして混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、希
釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ ₄ ）し、そして真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ
ィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９５：５から９０：１０に）を溶出剤として使
用して精製し、そして次いでヘキサン−ｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して、Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−メトキシベンジ
ル）グリシンｔ−ブチルエステル（１６０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を、白色の
固体として得た。

【１１４５】

【化３４２】

【１１４６】 調製例２６： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（２−ピ
リジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１４７】

【化３４３】

【１１４８】 ２−（クロロメチル）ピリジン塩酸塩（２４６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ
−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチ
ルエステル（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び無水のＫ₂ＣＯ₃（４１５ｍｇ、
３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ₂下の２３℃の撹拌された溶液に加
え、そして混合物を１８時間撹拌した。冷却した混合物をキシレンと共沸し、Ｅ
ｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、そして次いで有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）
し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
で、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０から５０：５０に）を溶出剤として使用
して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
−Ｎ−（２−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル（４００ｍｇ、０．
８３ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１１４９】

【化３４４】

【１１５０】 調製例２７： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（３−ピ
リジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１５１】

【化３４５】

【１１５２】 ３−（クロロメチル）ピリジン塩酸塩（２４６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ
−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチ
ルエステル（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び無水のＫ₂ＣＯ₃（４１６ｍｇ、
３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ₂下の２３℃の撹拌された溶液に加
え、そして混合物を１８時間撹拌した。冷却した混合物をキシレンと共沸し、Ｅ
ｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、そして次いで有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）
し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
で、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０から５０：５０に）を溶出剤として使用
して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
−Ｎ−（３−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル（４００ｍｇ、０．
８３ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１１５３】

【化３４６】

【１１５４】 調製例２８： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−（４−ピ
リジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル

【１１５５】

【化３４７】

【１１５６】 ４−（クロロメチル）ピリジン塩酸塩（２４６ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、Ｎ
−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］グリシンｔ−ブチ
ルエステル（３９１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び無水のＫ₂ＣＯ₃（４１６ｍｇ、
３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中のＮ₂下の２３℃の撹拌された溶液に加
え、そして混合物を１８時間撹拌した。冷却した混合物をキシレンと共沸し、Ｅ
ｔＯＡｃで希釈し、水で洗浄し、そして次いで有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）
し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
で、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０から５０：５０に）を溶出剤として使用
して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
−Ｎ−（４−ピリジルメチル）グリシンｔ−ブチルエステル（３９７ｍｇ、０．
８２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１１５７】

【化３４８】

【１１５８】 調製例２９： Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル）］グリシンｔ−ブチルエステル

【１１５９】

【化３４９】

【１１６０】 ブロモ酢酸ｔ−ブチル（５．０ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ
）中の溶液を、（＋）−（Ｒ）−α−メチルベンジルアミン（４．６５ｇ、３８
．５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍＬ）中の０℃の撹拌された溶液に滴下によ
り加え、そして次いで混合物を室温まで温め、そして１８時間撹拌した。混合物
をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、水、希釈ＨＣｌ（１Ｍ）で洗浄し、そして次いで乾燥（
ＭｇＳＯ₄）した。溶媒を真空中で蒸発して、Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエ
チル）］グリシンｔ−ブチルエステル（３．１５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を、白
色の粉末として得た。

【１１６１】

【化３５０】

【１１６２】 調製例３０： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（１Ｒ
）−１−フェニルエチル）］グリシンｔ−ブチルエステル

【１１６３】

【化３５１】

【１１６４】 ＮＥｔ₃（０．５９ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ）、塩化１，４−ジクロロ−７−
イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＮ−［（１Ｒ）
−１−フェニルエチル）］グリシンｔ−ブチルエステル（４７６ｍｇ、２．０２
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（８ｍＬ）中の混合物を、Ｎ₂下の室温で１８時間撹拌
した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和Ｎ
ａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸
発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯ
Ａｃ（９０：１０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル
）］グリシンｔ−ブチルエステル（４９０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を、無色の
油状物として得た。

【１１６５】

【化３５２】

【１１６６】 調製例３１： Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル）］グリシンｔ−ブチルエステル

【１１６７】

【化３５３】

【１１６８】 ブロモ酢酸ｔ−ブチル（５．０ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ
）中の溶液を、（−）−（Ｓ）−α−メチルベンジルアミン（４．６５ｇ、３８
．５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍＬ）中の０℃の撹拌された溶液に滴下によ
り加え、そして次いで混合物を室温まで温め、そして１８時間撹拌した。混合物
をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、水、希釈ＨＣｌ（１Ｍ）で洗浄し、そして次いで乾燥（
ＭｇＳＯ₄）した。溶媒を真空中で蒸発して、Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエ
チル）］グリシンｔ−ブチルエステル（２．０２ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を、白色
の粉末として得た。

【１１６９】

【化３５４】

【１１７０】 調製例３２： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（１Ｓ
）−１−フェニルエチル）］グリシンｔ−ブチルエステル

【１１７１】

【化３５５】

【１１７２】 ＮＥｔ₃（０．５９ｍＬ、４．２１ｍｍｏｌ）、塩化１，４−ジクロロ−７−
イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＮ−［（１Ｓ）
−１−フェニルエチル）］グリシンｔ−ブチルエステル（４７６ｍｇ、２．０２
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（８ｍＬ）中の混合物を、Ｎ₂下の室温で２４時間撹拌
した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和Ｎ
ａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸
発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯ
Ａｃ（９０：１０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル
）］グリシンｔ−ブチルエステル（４２０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を、無色の
油状物として得た。

【１１７３】

【化３５６】

【１１７４】 調製例３３： Ｎ−ベンジル−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル

【１１７５】

【化３５７】

【１１７６】 ベンズアルデヒド（２．６９ｍＬ、２６．４ｍｍｏｌ）を、Ｌ−アラニンｔ−
ブチルエステル（４．０ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（３．０７ｍＬ、
２２．０ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（７０ｍＬ）中の２３℃の撹拌されたスラリー
に加え、そして混合物を１０分間撹拌した。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）₃（６．４４ｇ
、３０．４ｍｍｏｌ）を分割して加え、そして混合物を２３℃で２４時間撹拌し
た。混合物を水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして溶媒を真空中で蒸発し
た。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ
（９９：１から９５：５に）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−ベンジル−
Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル（３．９７ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）を、無色の
油状物として得た。

【１１７７】

【化３５８】

【１１７８】 調製例３４： Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル

【１１７９】

【化３５９】

【１１８０】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（６００ｍｇ、２．０２
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍＬ）中の溶液を、Ｎ−ベンジル−Ｌ−アラニンｔ
−ブチルエステル（５７１ｍｇ、２．４３ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（０．７０ｍ
Ｌ、５．０６ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そ
して混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈
し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎ
ａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマト
グラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（９５：５から８５：１５に）を溶出剤と
して使用して精製して、Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキ
ノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステル（４７０ｍｇ、０．
９５ｍｍｏｌ）を、無色の固体として得た。

【１１８１】

【化３６０】

【１１８２】 調製例３５： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニン
ｔ−ブチルエステル

【１１８３】

【化３６１】

【１１８４】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍＬ）中の溶液を、Ｌ−アラニンｔ−ブチルエステ
ル（３２２ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（０．８２ｍＬ、５．９ｍｍ
ｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（６ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして混合物を２３
℃で１７時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽
和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で
濃縮した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−Ｅｔ
ＯＡｃ（９０：１０から５０：５０に）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−
［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−アラニンｔ−
ブチルエステル（５００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【１１８５】

【化３６２】

【１１８６】 調製例３６： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アラニン
メチルエステル

【１１８７】

【化３６３】

【１１８８】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｍＬ）中の溶液を、Ｄ−アラニンメチルエステル（
２４７ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（０．８２ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ
）のＣＨ₂Ｃｌ₂（６ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして混合物を２３℃で
１６時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和Ｎ
ａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で濃縮
した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡ
ｃ（９０：１０から５０：５０に）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（
１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アラニンメチルエ
ステル（４２０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【１１８９】

【化３６４】

【１１９０】 調製例３７ Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−バリンｔ
−ブチルエステル

【１１９１】

【化３６５】

【１１９２】 ＮＥｔ₃（０．５９ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を、塩化１，４−ジクロロ−７−
イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＬ−バリンｔ−
ブチルエステル（３５４ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）
中の撹拌された混合物に加え、そして混合物を２３℃で３日間撹拌した。混合物
を希釈ＨＣｌ（２×２０ｍＬ、１Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄
し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をヘキサンで抽出
し、これは静置により結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］−Ｌ−バリンｔ−ブチルエステル（４６３ｍｇ、１．０７ｍ
ｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１１９３】

【化３６６】

【１１９４】 調製例３８： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−バリンｔ
−ブチルエステル

【１１９５】

【化３６７】

【１１９６】 Ｄ−バリンｔ−ブチルエステルは、以前から調製されている：Ｓｈｅｐｅｌ，
Ｅ．Ｎ．；Ｉｏｄａｎｏｖ，Ｓ．；Ｒｙａｂｏｖａ，Ｉ．Ｄ．；Ｍｉｒｏｓｈｎ
ｉｋｏｖ，Ａ．Ｉ．；Ｉｖａｎｏｖ，Ｖ．Ｔ．；Ｏｖｃｈｉｎｎｉｋｏｖ，Ｙｕ
Ａ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｋｈｉｍ．１９７２，２，５８１−５９３を参照されたい
。

【１１９７】 Ｄ−バリンｔ−ブチルエステル（３５４ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）、そして次
いでＮＥｔ₃（０．５９ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を、塩化１，４−ジクロロ−７
−イソキノリンスルホニル（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＣＨ₂Ｃｌ₂（
２０ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして混合物を２３℃で１６時間撹拌し
た。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、水、
クエン酸水溶液（１Ｍ）、水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして
真空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏに溶解し、そしてヘキサンを加え、こ
れにより沈殿物を得た。溶媒を真空中で蒸発し、そして固体をヘキサンで摩砕し
て、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−バリ
ンｔ−ブチルエステル（５３２ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として
得た。分析用試料は、ヘキサンからの再結晶によって得た。

【１１９８】

【化３６８】

【１１９９】 調製例３９： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−ｔｅｒｔ
−ロイシンｔ−ブチルエステル

【１２００】

【化３６９】

【１２０１】 Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（２５０ｍｇ、１．１２ｍ
ｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．４０ｍＬ、２．８７ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジク
ロロ−７−イソキノリンスルホニル（３３０ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂
Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１６時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、水、クエン酸水溶液（１Ｍ）、水、飽和ＮａＨＣＯ₃ 水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残
留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９０
：１０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−ｔｅｒｔ−ロイシンｔ−ブチルエステル（２
５０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を、白色の泡状物として得た。

【１２０２】

【化３７０】

【１２０３】 調製例４０： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−フェニル
アラニンｔ−ブチルエステル

【１２０４】

【化３７１】

【１２０５】 Ｌ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（３５２ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）
、ＮＥｔ₃（０．４１ｍＬ、２．９７ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７
−イソキノリンスルホニル（３９９ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１
０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で２０時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そ
して残留物をＥｔＯＡｃ中に懸濁した。溶液を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｍｇ
ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグ
ラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（９０：１０から７０：３０に）を溶出剤と
して使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スル
ホニル］−Ｌ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（４５０ｍｇ、０．９４ｍ
ｍｏｌ）を、白色の結晶化した泡状物として得た。

【１２０６】

【化３７２】

【１２０７】 調製例４１： Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステ
ル

【１２０８】

【化３７３】

【１２０９】 凝縮したイソブチレンガス（３５ｍＬ）を、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル
）−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンジシクロヘキシルアミン塩（２．５ｇ、５．７６ｍ
ｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３５ｍＬ）中の−７８℃の鋼鉄製容器中の溶液に加えた
。濃Ｈ₂ＳＯ₄（０．５ｍＬ）を加え、容器を密封し、そして混合物を２３℃に温
まらせた［要注意：圧力］。混合物を２３℃で６日間撹拌し、容器をガス抜きし
、そして過剰のイソブチレンを蒸発させた。次いで混合物をＮａＨＣＯ₃水溶液
（３０ｍＬ、１０％）中に注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３×３０ｍＬ）で抽出し、そして
混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物
をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２
０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｏ
−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル（１．２ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）を、
無色の油状物として得た。

【１２１０】

【化３７４】

【１２１１】 調製例４２： Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル

【１２１２】

【化３７５】

【１２１３】 Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエス
テル（１．１５ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の溶液を、１
０％Ｐｄ／Ｃ（１５０ｍｇ）で、Ｈ₂雰囲気下（約１．０５ｋｇ／ｃｍ²（１５ｐ
ｓｉ））の２３℃で１８時間水素化した。混合物を濾過し、そして濾液を真空中
で蒸発した。残留物をＥｔ₂Ｏに溶解し、Ｅｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）を加
え、溶媒を真空中で蒸発して、白色の固体を得て、この物質をヘキサンで摩砕し
て、Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル（０．６２ｇ、２．９０ｍｍｏ
ｌ）を得た。

【１２１４】

【化３７６】

【１２１５】 調製例４３： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｏ−メチル−
Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル

【１２１６】

【化３７７】

【１２１７】 Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（３００ｍｇ、１．４２ｍ
ｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．５０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリンスルホニル（４２０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（２０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で３日間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂
（３０ｍＬ）で希釈し、水、クエン酸水溶液（１Ｍ）、水、飽和ＮａＨＣＯ₃水
溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留
物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：
２０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソ
キノリニル）スルホニル］−Ｏ−メチル−Ｄ−セリンｔ−ブチルエステル（３５
６ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２１８】

【化３７８】

【１２１９】 調製例４４： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アスパラ
ギン酸ジ−ｔ−ブチルエステル

【１２２０】

【化３７９】

【１２２１】 Ｄ−アスパラギン酸ジ−ｔ−ブチルエステル（４６２ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ
）、ＮＥｔ₃（０．５０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７
−イソキノリンスルホニル（４００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３
０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１８時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０
ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄
し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発して、Ｎ−［（１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−アスパラギン酸ジ−ｔ−ブチルエ
ステル（５２０ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２２２】

【化３８０】

【１２２３】 調製例４５： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン
ｔ−ブチルエステル

【１２２４】

【化３８１】

【１２２５】 Ｌ−プロリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（３３５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）、
ＮＥｔ₃（０．５３ｍＬ、３．７８ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−
イソキノリンスルホニル（４４９ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０
ｍＬ）中の混合物を、２３℃で２０時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そし
て残留物をＥｔＯＡｃ中に懸濁した。この溶液を水、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｍ
ｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマト
グラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（９０：１０から７０：３０に）を溶出剤
として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）ス
ルホニル］−Ｌ−プロリンｔ−ブチルエステル（５４３ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ
）を、白色の固体として得た。

【１２２６】

【化３８２】

【１２２７】 調製例４６： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン
ｔ−ブチルエステル

【１２２８】

【化３８３】

【１２２９】 Ｄ−プロリンｔ−ブチルエステル塩酸塩（３４０ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ）、
ＮＥｔ₃（０．５０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリンスルホニル（４００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍ
Ｌ）中の混合物を、２３℃で２０時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ
）で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、
乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で濃縮して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−
７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｄ−プロリンｔ−ブチルエステル（５５０
ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２３０】

【化３８４】

【１２３１】 調製例４７： １，４−ジクロロ−７−｛［（２Ｒ）−（ヒドロキシメチル）−１−ピロリジニ
ル］スルホニル｝イソキノリン

【１２３２】

【化３８５】

【１２３３】 （Ｒ）−２−ピロリジンメタノール（１．１ｍＬ、１１．０ｍｍｏｌ）、ＮＥ
ｔ₃（１．５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ンスルホニル（３．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）中の混合物
を、２３℃で３０分間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し、ク
エン酸水溶液（１Ｎ）、水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真
空中で蒸発して、１，４−ジクロロ−７−｛［（２Ｒ）−（ヒドロキシメチル）
−１−ピロリジニル］スルホニル｝イソキノリン（４．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を
、白色の固体として得た。

【１２３４】

【化３８６】

【１２３５】 調製例４８： ２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝イソ
酪酸メチル

【１２３６】

【化３８７】

【１２３７】 ２−アミノイソ酪酸メチル（３１０ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０
．７０ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリン
スルホニル（５００ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）中の混
合物を、２３℃で１７時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）で希釈し
、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグ
ラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７０：３０）を溶出剤として使用して精製
して、２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ
｝イソ酪酸メチル（２１０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た
。

【１２３８】

【化３８８】

【１２３９】 調製例４９： ２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝−２
−メチルプロパンアミド

【１２４０】

【化３８９】

【１２４１】 ２−アミノ−２−メチルプロパンアミド（２００ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）、
ＮＥｔ₃（０．６９ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリンスルホニル（５８０ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍ
Ｌ）中の混合物を、２３℃で１７時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ
）で希釈し、水、クエン酸水溶液（１Ｎ）、水、食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳ
Ｏ₄）し、そして真空中で蒸発してた。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグ
ラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９０：１０：１）を溶
出剤として使用して精製して、２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル］アミノ｝−２−メチルプロパンアミド（２２８ｍｇ、０．６２
ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２４２】

【化３９０】

【１２４３】 調製例５０： １−アミノシクロブタンカルボン酸エチル

【１２４４】

【化３９１】

【１２４５】 １−アミノシクロブタンカルボン酸（５００ｍｇ、４．３４ｍｍｏｌ）のＥｔ
ＯＨ（１０ｍＬ）中の溶液を、ＨＣｌガスで飽和し、そして混合物を２３℃で４
日間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、ＰｈＭｅ及びＣＨ₂Ｃｌ₂と共沸して、１
−アミノシクロブタンカルボン酸エチル塩酸塩（７５４ｍｇ、４．２０ｍｍｏｌ
）を、オフホワイト色の固体として得た。

【１２４６】

【化３９２】

【１２４７】 調製例５１： １−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シク
ロブタンカルボン酸エチル

【１２４８】

【化３９３】

【１２４９】 １−アミノシクロブタンカルボン酸エチル塩酸塩（３８２ｍｇ、２．１２ｍｍ
ｏｌ）、ＮＥｔ₃（１．０４ｍＬ、７．４３ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリンスルホニル（６３０ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（８ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１８時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂
で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾
燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムク
ロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（９０：１０から８０：２０に）を
溶出剤として使用して精製して、１−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル］アミノ｝シクロブタンカルボン酸エチル（４８０ｍｇ、１．
１９ｍｍｏｌ）を、白色の粉末として得た。

【１２５０】

【化３９４】

【１２５１】 調製例５２： シクロロイシンエチルエステル

【１２５２】

【化３９５】

【１２５３】 シクロロイシン（８．９４ｇ、６９．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）
中の溶液を、ＨＣｌガスで飽和し、そして混合物を２３℃で２日間撹拌した。溶
媒を真空中で蒸発し、残留物を水（２００ｍＬ）中に溶解し、そして溶液を固体
のＮａＨＣＯ₃で塩基性化した。水溶液をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出
し、そして混合した抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真
空中で蒸発した。残留物をヘキサン−Ｅｔ₂Ｏ（１：１）中に溶解し、そしてＥ
ｔ₂Ｏ−ジオキサン中のＨＣｌの溶液（０．５Ｍ、１：１）を加えて、沈殿物を
得た。このオフホワイト色の固体を濾過により収集し、そして乾燥して、シクロ
ロイシンエチルエステル塩酸塩（６．５７ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）を得た。

【１２５４】

【化３９６】

【１２５５】 調製例５３： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］シクロロイシン
エチルエステル

【１２５６】

【化３９７】

【１２５７】 シクロロイシンエチルエステル塩酸塩（５．５６ｇ、２８．７ｍｍｏｌ）、Ｎ
Ｅｔ₃（９．９ｍＬ、７２ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノ
リンスルホニル（７．１０ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４８０ｍＬ）
中の混合物を、２３℃で３日間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、希釈Ｈ
Ｃｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）
し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー
で、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０から７０：３０に）を溶出剤として使用
して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
シクロロイシンエチルエステル（６．３６ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を、白色の固
体として得た。

【１２５８】

【化３９８】

【１２５９】 調製例５４： １，４−ジクロロ−Ｎ−［１−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］−７−イ
ソキノリンスルホンアミド

【１２６０】

【化３９９】

【１２６１】 １−アミノ−１−シクロペンチルメタノール（５５９ｍｇ、４．８６ｍｍｏｌ
）、ＮＥｔ₃（０．８５ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７
−イソキノリンスルホニル（１．２ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（８０
ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１６時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍ
Ｌ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し
、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラ
ムクロマトグラフィーで、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５
：０．５）を溶出剤として使用して精製し、続いてＥｔ₂Ｏで摩砕して、１，４
−ジクロロ−Ｎ−［１−（ヒドロキシメチル）シクロペンチル］−７−イソキノ
リンスルホンアミド（０．６２ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得
た。

【１２６２】

【化４００】

【１２６３】 調製例５５： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（
ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシンエチルエステル

【１２６４】

【化４０１】

【１２６５】 塩化２−（ジメチルアミノ）エチル（１４０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を、Ｎ−
［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］シクロロイシンエチ
ルエステル（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及び無水のＫ₂ＣＯ₃（８０ｍｇ、
０．５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中のＮ₂下の２３℃の撹拌された溶液に
加え、そして混合物を２１時間撹拌した。冷却した混合物をＥｔＯＡｃで希釈し
、水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして溶媒を真空中で蒸発した。残留物
をＥｔ₂Ｏに溶解し、そしてＥｔ₂Ｏ中のＨＣｌの溶液（１Ｍ）を加えて、沈殿物
を得た。このオフホワイト色の固体を濾過により収集し、そして乾燥して、Ｎ−
［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］−Ｎ−［２−（ジメ
チルアミノ）エチル］シクロロイシンエチルエステル（１７０ｍｇ、０．３２ｍ
ｍｏｌ）を得た。

【１２６６】

【化４０２】

【１２６７】 調製例５６： １−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シク
ロヘキサンカルボン酸メチル

【１２６８】

【化４０３】

【１２６９】 １−アミノシクロヘキサンカルボン酸メチルは、以前から調製されている：Ｄ
ｉｄｉｅｒ，Ｅ．；Ｈｏｒｗｅｌｌ，Ｄ．Ｃ．；Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ，Ｍ．Ｃ．
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９２，４８，８４７１−８４９０を参照されたい
。

【１２７０】 １−アミノシクロヘキサンカルボン酸メチル（３２５ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ
）、ＮＥｔ₃（０．４９ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロロ−７
−イソキノリンスルホニル（４１５ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３
０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１６時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈
し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎ
ａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発してた。残留物をシリカゲルのカラムクロマ
トグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０から７０：３０に）を溶出
剤として使用して精製し、続いてｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して、１−｛［（１，４−
ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン
酸メチル（１３２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２７１】

【化４０４】

【１２７２】 調製例５７： ４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１２７３】

【化４０５】

【１２７４】 ４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸は、以前に調製され
ている：Ｐａｌａｃｉｎ，Ｓ．；Ｃｈｉｎ，Ｄ．Ｎ．；Ｓｉｍａｎｅｋ，Ｅ．Ｅ
．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｊ．Ｃ．：Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ，Ｇ．Ｍ．；ＭｃＢ
ｒｉｄｅ，Ｍ．Ｔ．；Ｐａｌｍｏｒｅ，Ｇ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１
９９７，１１９，１１８０７−１１８１６を参照されたい。

【１２７５】 ４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸（０．５０ｇ、３．
４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の溶液を、ＨＣｌガスで０−５℃で飽和
し、そして次いで混合物を還流で３．５時間加熱した。溶媒を真空中で蒸発し、
残留物を飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液に溶解し、そして水溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂（２×５
０ｍＬ）で抽出した。混合した抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で
蒸発して、４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル（４
１０ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ）を得た。

【１２７６】

【化４０６】

【１２７７】 調製例５８： ４−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝テト
ラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１２７８】

【化４０７】

【１２７９】 ４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル（４００ｍｇ
、２．５１ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．４４ｍＬ、３．１４ｍｍｏｌ）及び塩化
１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（６２１ｍｇ、２．０９ｍｍｏ
ｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で２０時間撹拌した。混合
物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、飽和ＮａＨＣＯ₃水溶液、食塩
水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカ
ゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）、そ
して次いでＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶
出剤として使用して精製し、続いてｉ−Ｐｒ₂Ｏで摩砕して、４−｛［（１，４
−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝テトラヒドロ−２Ｈ−
ピラン−４−カルボン酸メチル（１９７ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を、白色の固
体として得た。

【１２８０】

【化４０８】

【１２８１】 調製例５９： （±）−ｃｉｓ−２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル

【１２８２】

【化４０９】

【１２８３】 （±）−ｃｉｓ−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチルは、以前に
調製されている：Ｘｉｅ，Ｊ．；Ｓｏｌｅｉｌｈａｃ，Ｊ．Ｍ．；Ｒｅｎｗａｒ
ｔ，Ｎ．；Ｐｅｙｒｏｕｘ，Ｊ．；Ｒｏｑｕｅｓ，Ｂ．Ｐ．；Ｆｏｕｒｎｉｅ−
Ｚａｌｕｓｋｉ，Ｍ．Ｃ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ １
９８９，３４，２４６−２５５を参照されたい。

【１２８４】 （±）−ｃｉｓ−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル塩酸塩（２
８２ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．３３ｍＬ、２．３７ｍｍｏｌ）
及び塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（２８２ｍｇ、０．９
５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１時間撹拌した
。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中に懸濁し
た。この溶液を希釈ＨＣｌ（１０ｍＬ、１Ｍ）、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄
）し、そして真空中で蒸発して、（±）−ｃｉｓ−２−｛［（１，４−ジクロロ
−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブ
チル（３９５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２８５】

【化４１０】

【１２８６】 調製例６０： （±）−ｃｉｓ−２−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニ
ル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸エチル

【１２８７】

【化４１１】

【１２８８】 （±）−ｃｉｓ−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸エチル塩酸塩（２５１
ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）及び塩
化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（２９６ｍｇ、１．００ｍｍ
ｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の混合物を、２３℃で１時間撹拌した。混合
物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ）、水で
洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発して、（±）−ｃｉｓ−２
−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロ
ヘキサンカルボン酸エチル（３８５ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を、白色の固体と
して得た。

【１２８９】

【化４１２】

【１２９０】 調製例６１： ｃｉｓ−４−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミ
ノ｝シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル

【１２９１】

【化４１３】

【１２９２】 ｃｉｓ−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチルは、以前に調製され
ている：Ｂａｒｎｉｓｈ，Ｉ．Ｔ．；Ｊａｍｅｓ，Ｋ．；Ｔｅｒｒｅｔｔ，Ｎ．
Ｋ．；Ｄａｎｉｌｅｗｉｃｚ，Ｊ．Ｃ．；Ｓａｍｕｅｌｓ，Ｇ．Ｍ．Ｒ．；Ｗｙ
ｔｈｅｓ，Ｍ．Ｊ．欧州特許１９８８年ＥＰ２７４２３４を参照されたい。

【１２９３】 ｃｉｓ−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（２８２ｍｇ、１．
２０ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．３３ｍＬ、２．３７ｍｍｏｌ）及び塩化１，４
−ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（２９６ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の
ＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の混合物を、０℃で１時間撹拌した。混合物をＣＨ₂
Ｃｌ₂（１５０ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（３０ｍＬ、１Ｍ）、水で洗浄し、
乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラム
クロマトグラフィーで、ペンタン−ＥｔＯＡｃ（１００：０から７５：２５に）
を溶出剤として使用して精製して、ｃｉｓ−４−｛［（１，４−ジクロロ−７−
イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸ｔ−ブチル（
３６０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２９４】

【化４１４】

【１２９５】 調製例６２： ｔｒａｎｓ−４−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］
アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸エチル

【１２９６】

【化４１５】

【１２９７】 ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸エチルは、以前に調製され
ている：Ｓｋａｒｉｃ，Ｖ．；Ｋｏｖａｃｅｖｉｃ，Ｍ．；Ｓｋａｒｉｃ，Ｄ．
Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１ １９７６，１１９９
−１２０１を参照されたい。

【１２９８】 ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサンカルボン酸エチル（１６８ｍｇ、０．
８１ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ₃（０．２２ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−
ジクロロ−７−イソキノリンスルホニル（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のＣ
Ｈ₂Ｃｌ₂（８ｍＬ）中の混合物を、０℃で１時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂ （１００ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（５０ｍＬ、１Ｍ）、水で洗浄し、乾燥（
ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発して、ｔｒａｎｓ−４−｛［（１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸
エチル（２３２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１２９９】

【化４１６】

【１３００】 調製例６３： 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル

【１３０１】

【化４１７】

【１３０２】 Ｎ−クロロスクシンイミド（４．１３ｇ、３１ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（５０ｍ
Ｌ）中の溶液を、７−ブロモ−１−（２Ｈ）−イソキノロン（６．６ｇ、２９．
５ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１５０ｍＬ）中の還流下で加熱され、撹拌された溶液
に滴下により加えた。混合物を還流下で更に３時間加熱し、そして次いで室温に
冷却した。得られた沈殿物をＭｅＣＮで洗浄しながら濾過により収集し、そして
次いで真空中で乾燥して、７−ブロモ−４−クロロ−１（２Ｈ）−イソキノロン
（６．７２ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３０３】

【化４１８】

【１３０４】 ＬＲＭＳ ２５９（ＭＨ⁺）、５１７（Ｍ₂Ｈ⁺）。 分析値。実測値Ｃ，４１．６９；Ｈ，１．９０；Ｎ，５．３７；Ｃ₉Ｈ₅ＢｒＣｌ
ＮＯに対する計算値：Ｃ，４１．８０；Ｈ，１．９５；Ｎ，５．４２。

【１３０５】

【化４１９】

【１３０６】 ７−ブロモ−４−クロロ−１（２Ｈ）−イソキノロン（１．０ｇ、３．８７ｍ
ｍｏｌ）及び塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（１００
ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）及びＥｔ₃（２ｍＬ）中の混
合物を、ＣＯ雰囲気（約７．０ｋｇ／ｃｍ²（１００ｐｓｉ））下の圧力容器中
で１００℃で４８時間加熱した。冷却し、そして容器をガス抜きした後、触媒を
濾過により除去し、そして濾液を真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラ
ムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（５０：５０）を溶出剤として
使用して精製し、そして次いでｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化した。この物質を、触媒
上の残留物のＣＨ₂Ｃｌ₂による洗浄回収物と混合して、４−クロロ−１−オキソ
−１，２−ジヒドロ−７−イソキノリンカルボン酸エチル（７４３ｍｇ、２．９
５ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３０７】

【化４２０】

【１３０８】

【化４２１】

【１３０９】 ４−クロロ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−７−イソキノリンカルボン酸エ
チル（５００ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を、透明な溶液が形成されるまでＰＯＣ
ｌ₃（３ｍＬ）中で温め、そして次いで２３℃で１８時間静置させた。反応混合
物を温水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機
抽出物を水及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸
発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯ
Ａｃ（９０：１０）を溶出剤として使用して精製し、続いてｉ−Ｐｒ₂Ｏから結
晶化して、１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボン酸エチル（３７７ｍｇ
、１．４０ｍｍｏｌ）を、薄いピンク色の固体として得た。

【１３１０】

【化４２２】

【１３１１】

【化４２３】

【１３１２】 ＴＨＦ（２ｍＬ）中の１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボン酸エチル
（５００ｍｇ、１．８５ｍｍｏｌ）を、ＮａＯＨの水溶液（３．７ｍＬ、１Ｍ）
で処理し、そしてＥｔＯＨ（数滴）を加えて、単一相の混合物を得た。室温で一
晩撹拌した後、ＨＣｌ（３．７ｍＬ、１Ｍ）を加えて、濃厚なスラリーを得て、
これを濾過して取り出し、水で洗浄し、そしてｉ−ＰｒＯＨから結晶化した。綿
毛状の白色の結晶質の固体をヘキサンで摩砕し、そして乾燥して、１，４−ジク
ロロ−７−イソキノリンカルボン酸（２４０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）を得た。

【１３１３】

【化４２４】

【１３１４】

【化４２５】

【１３１５】 塩化オキサリル（１４４μＬ、１．６５ｍｍｏｌ）を、１，４−ジクロロ−７
−イソキノリンカルボン酸（２００ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）の室温のＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（１０ｍＬ）中の懸濁液に加え、続いてＤＭＦ（１滴）を加えた。３０分後
、得られた透明な溶液を真空中で蒸発して、塩化１，４−ジクロロ−７−イソキ
ノリンカルボニルを得て、これを更に精製せずに使用した。

【１３１６】 調製例６４： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］グリシンｔ−ブ
チルエステル

【１３１７】

【化４２６】

【１３１８】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（２１３ｍｇ、０．８ｍ
ｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液を、グリシンｔ−ブチルエステル塩
酸塩（１６６ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（２５３μＬ、１．８２ｍ
ｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の撹拌された懸濁液中に加えた。反応混合物
を室温で一晩撹拌し、１滴の水でクエンチし、そして次いで真空中で蒸発した。
残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７
０：３０）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−
イソキノリニル）カルボニル］グリシンｔ−ブチルエステル（１４０ｍｇ、０．
３９ｍｍｏｌ）を得た。分析用の試料は、ｉ−Ｐｒ₂Ｏ−ＣＨ₂Ｃｌ₂からの結晶
化によって調製した。

【１３１９】

【化４２７】

【１３２０】 調製例６５： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−β−アラニン
ｔ−ブチルエステル

【１３２１】

【化４２８】

【１３２２】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（４５０ｍｇ、１．７ｍ
ｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の溶液を、β−アラニンｔ−ブチルエステ
ル塩酸塩（３７６ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（５３０μＬ、３．８
１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の撹拌された懸濁液中に加え、そして
混合物を室温で３時間撹拌した。混合物をＨＣｌ（２×３０ｍＬ、１Ｍ）、Ｎａ
ＨＣＯ₃水溶液（１０％、３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして
真空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジ
クロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−β−アラニンｔ−ブチルエステル
（４４０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３２３】

【化４２９】

【１３２４】 調製例６６： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］シクロロイシン
エチルエステル

【１３２５】

【化４３０】

【１３２６】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（２７０ｍｇ、１．０４
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１２ｍＬ）中の溶液を、シクロロイシンエチルエステ
ル塩酸塩（３００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（４１５μＬ、２．９
８ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の撹拌された溶液中に加え、そして混
合物を室温で１時間撹拌した。混合物を希釈ＨＣｌ（２Ｍ）、ＮａＨＣＯ₃水溶
液（１０％）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留
物をｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）カルボニル］シクロロイシンエチルエステル（３７２ｍｇ、０．９８ｍｍ
ｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３２７】

【化４３１】

【１３２８】 調製例６７： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−フェニ
ルグリシンｔ−ブチルエステル

【１３２９】

【化４３２】

【１３３０】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（４５０ｍｇ、１．７３
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の溶液を、ＤＬ−フェニルグリシンｔ−
ブチルエステル塩酸塩（５０５ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（５３０
μＬ、３．８１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）中の撹拌された溶液中に加
え、そして混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を希釈ＨＣｌ（２×３０ｍＬ
、１Ｍ）、ＮａＨＣＯ₃水溶液（１０％）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そ
して真空中で蒸発して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カル
ボニル］−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（６００ｍｇ、１．３９
ｍｍｏｌ）を、ワックス状の固体として得た。分析用試料は、ＣＨ₂Ｃｌ₂中の溶
液のゆっくりとした蒸発によって調製して、綿毛状の白色の固体を得た。

【１３３１】

【化４３３】

【１３３２】 調製例６８： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｌ−フェニル
グリシンｔ−ブチルエステル

【１３３３】

【化４３４】

【１３３４】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（１４８ｍｇ、０．５７
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（６ｍＬ）中の溶液を、Ｓ−（＋）−フェニルグリシン
ｔ−ブチルエステル塩酸塩（１３８ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（２
００μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の撹拌された溶液中に
加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）で
希釈し、希釈ＨＣｌ（０．５Ｍ）、ＮａＨＣＯ₃水溶液（１０％）、食塩水で洗
浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発して、Ｎ−［（１，４−ジク
ロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｌ−フェニルグリシンｔ−ブチルエ
ステル（２１８ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を、ゴム状物として得た。分析用試料
は、ヘキサンによる摩砕によって調製して、固体を得た。

【１３３５】

【化４３５】

【１３３６】 調製例６９： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｄ−フェニル
グリシンｔ−ブチルエステル

【１３３７】

【化４３６】

【１３３８】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（１４８ｍｇ、０．５７
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（６ｍＬ）中の溶液を、Ｒ−（＋）−フェニルグリシン
ｔ−ブチルエステル塩酸塩（１３８ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（２
００μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の撹拌された溶液中に
加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）で
希釈し、希釈ＨＣｌ（０．５Ｍ）、ＮａＨＣＯ₃水溶液（１０％）、食塩水で洗
浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物のヘキサンによ
る摩砕によって、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−Ｄ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（２０３ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ
）を、白色の固体として得た。

【１３３９】

【化４３７】

【１３４０】 調製例７０： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−バリン
ｔ−ブチルエステル

【１３４１】

【化４３８】

【１３４２】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（４５０ｍｇ、１．７３
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の溶液を、ＤＬ−バリンｔ−ブチルエス
テル塩酸塩（４３５ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（５３０μＬ、３．
８１ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして混
合物を室温で３時間撹拌した。混合物を希釈ＨＣｌ（１Ｍ）、ＮａＨＣＯ₃水溶
液（１０％）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留
物をｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニ
ル）カルボニル］−ＤＬ−バリンｔ−ブチルエステル（３９０ｍｇ、０．９８ｍ
ｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３４３】

【化４３９】

【１３４４】 調製例７１： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−プロリ
ンｔ−ブチルエステル

【１３４５】

【化４４０】

【１３４６】 ＤＬ−プロリンｔ−ブチルエステル（３２０ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）、そし
て次いでＮＥｔ₃（５１３μＬ、３．６９ｍｍｏｌ）を、塩化１，４−ジクロロ
−７−イソキノリンカルボニル（２７０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂ （３２ｍＬ）中の撹拌された溶液に加え、そして次いで濁った溶液を室温で４時
間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）で希釈し、希釈ＨＣｌ（１Ｍ）、
飽和食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物
をｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル
）カルボニル］−ＤＬ−プロリンｔ−ブチルエステル（３９５ｍｇ、１．００ｍ
ｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３４７】

【化４４１】

【１３４８】 調製例７２： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−フェニ
ルアラニンｔ−ブチルエステル

【１３４９】

【化４４２】

【１３５０】 ＮＥｔ₃（３３０μＬ、２．３７ｍｍｏｌ）、ＤＬ−フェニルアラニンｔ−ブ
チルエステル塩酸塩（２９３ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及び塩化１，４−ジクロ
ロ−７−イソキノリンカルボニル（２４７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（２０ｍＬ）中の溶液を、室温で１８時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し
、そして残留物を希釈ＨＣｌ（１Ｍ）及びＥｔＯＡｃ間に分配した。有機相を食
塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をｉ−
Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カル
ボニル］−ＤＬ−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル（３８４ｍｇ、０．８６
ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３５１】

【化４４３】

【１３５２】 調製例７３： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−ロイシ
ンｔ−ブチルエステル

【１３５３】

【化４４４】

【１３５４】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（２４７ｍｇ、０．９５
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液を、ＤＬ−ロイシンｔ−ブチルエ
ステル塩酸塩（２５５ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（３３０μＬ、２
．３７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液に加え、そして混合物を室
温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物を希釈ＨＣｌ（１Ｍ）
及びＥｔＯＡｃ間に分配した。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し
、そして真空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏで結晶化して、Ｎ−［（１，
４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−ロイシンｔ−ブチル
エステル（２８５ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）を得た。

【１３５５】

【化４４５】

【１３５６】 調製例７４： ＤＬ−３−｛［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］アミノ
｝−３−フェニルプロパン酸ｔ−ブチル

【１３５７】

【化４４６】

【１３５８】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（２４７ｍｇ、０．９５
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液を、ＤＬ−３−アミノ−３−フェ
ニルプロピオン酸ｔ−ブチルエステル（２５２ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びＮ
Ｅｔ₃（２６０μＬ、１．８７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液に
加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留
物を希釈ＨＣｌ（１Ｍ）及びＥｔＯＡｃ間に分配した。有機相を食塩水で洗浄し
、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発して、ＤＬ−３−｛［（１，４−
ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］アミノ｝−３−フェニルプロパン
酸ｔ−ブチル（３２３ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を得た。分析用試料は、ｉ−Ｐ
ｒ₂Ｏ−ヘキサンによる結晶化によって調製して、白色の粉末を得た。

【１３５９】

【化４４７】

【１３６０】 調製例７５： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−アスパ
ラギン酸α，β−ジ−ｔ−ブチルエステル

【１３６１】

【化４４８】

【１３６２】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（２４７ｍｇ、０．９５
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液を、ＤＬ−アスパラギン酸α，β
−ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸塩（３２１ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ ₃ （３３０μＬ、２．３７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液に加え
、そして混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）で希釈
し、希釈ＨＣｌ（３×３０ｍＬ、１Ｍ）、飽和Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄
し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をヘキサンから結
晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−Ｄ
Ｌ−アスパラギン酸α，β−ジ−ｔ−ブチルエステル（２９８＋８８ｍｇ、０．
６３＋０．１９ｍｍｏｌ）を、綿毛状の白色の固体の、二つの収穫として得た。

【１３６３】

【化４４９】

【１３６４】 調製例７６： Ｏ−ｔ−ブチル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル
］−ＤＬ−セリンｔ−ブチルエステル

【１３６５】

【化４５０】

【１３６６】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（２４７ｍｇ、０．９５
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液を、Ｏ−ｔ−ブチル−ＤＬ−セリ
ンｔ−ブチルエステル塩酸塩（２８８ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（
３３０μＬ、２．３７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の溶液に加え、そ
して混合物を室温で３時間撹拌した。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍＬ）で希釈し
、ＨＣｌ（１Ｍ）、飽和Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液、飽和食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂
ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をヘキサンから結晶化して、Ｏ−
ｔ−ブチル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−
ＤＬ−セリンｔ−ブチルエステル（３７８ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を、白色の
固体として得た。

【１３６７】

【化４５１】

【１３６８】 調製例７７： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］−ＤＬ−α−シ
クロペンチルグリシンｔ−ブチルエステル

【１３６９】

【化４５２】

【１３７０】 塩化１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボニル（１４８ｍｇ、０．５７
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（６ｍＬ）中の溶液を、ＤＬ−α−シクロペンチルグリ
シンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１３４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃
（２００μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の溶液に加え、そ
して混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍＬ）で希釈
し、希釈ＨＣｌ（０．５Ｍ）、飽和Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液、食塩水で洗浄し、乾燥（
Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した。残留物をｉ−Ｐｒ₂Ｏ−ヘキサンか
ら結晶化して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］
−ＤＬ−α−シクロペンチルグリシンｔ−ブチルエステル（１９８ｍｇ、０．４
７ｍｍｏｌ）を、白色の固体として得た。

【１３７１】

【化４５３】

【１３７２】 調製例７８： Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニル］
グリシンｔ−ブチルエステル

【１３７３】

【化４５４】

【１３７４】 塩化オキサリル（９５μｌ、１．０９ｍｍｏｌ）、そして次いでＤＭＦ（２滴
）を、１，４−ジクロロ−７−イソキノリンカルボン酸（１３０ｍｇ、０．５４
ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中の撹拌された懸濁液に加え、そして混合
物を３０分間撹拌して、対応する酸塩化物の透明な溶液を得た。溶媒を真空中で
蒸発し、そして残留物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍＬ）中に再溶解した。Ｎ−ベンジル
グリシンｔ−ブチルエステル塩酸塩（１５２ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）及びＮＥ
ｔ₃（２００μＬ、１．４４ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を室温で一晩撹拌
した。溶媒を真空中で蒸発し、そして残留物をＥｔ₂Ｏ及び希釈ＨＣｌ（１Ｍ）
間に分配した。有機相を希釈ＨＣｌ（１Ｍ）、Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液（１０％、２０
ｍＬ）、飽和食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、そして真空中で蒸発した
。残留物を熱ヘキサンで抽出し、そして有機溶液を不溶性物質からデカントした
。有機溶液を真空中で蒸発し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラ
フィーで、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）を溶出剤として使用して精製し
て、Ｎ−ベンジル−Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）カルボニ
ル］グリシンｔ−ブチルエステル（１３０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を油状物と
して得た。

【１３７５】

【化４５５】

【１３７６】 調製例７９： ７−（クロロメチル）−１，４−ジクロロ−イソキノリン

【１３７７】

【化４５６】

【１３７８】 ＬｉＢＨ₄（５３０ｍｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を、４−クロロ−１−オキソ−
１，２−ジヒドロ−７−イソキノリンカルボン酸エチル（３．０６ｇ、１２．２
ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中の撹拌された溶液に分割して加え、そして
混合物を室温で１時間撹拌した。不均質な混合物を希釈ＨＣｌ（２Ｍ）でクエン
チし、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（５×１００ｍＬ）
で抽出した。残った固体を熱ＥｔＯＡｃ中に取り込み、そして冷却させて、白色
の綿毛状の固体を得た。この固体を混合した有機抽出物と混合し、真空中で蒸発
し、そしてＥｔＯＨで結晶化して、４−クロロ−７−（ヒドロキシメチル）−１
（２Ｈ）−イソキノロン（２．１９ｇ、１０．４９ｍｍｏｌ）を、白色の固体と
して得た。

【１３７９】

【化４５７】

【１３８０】

【化４５８】

【１３８１】 ＰＯＣｌ₃中の４−クロロ−７−（ヒドロキシメチル）−１（２Ｈ）−イソキ
ノロン（１．００ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を、５０℃で１９時間撹拌した。反応
混合物を氷浴中で冷却し、希釈ＨＣｌ（１Ｍ）の滴下による添加によってクエン
チ（反応温度＜３０℃）し、そして次いで水及びＥｔＯＡｃ間に分配した。水相
をＥｔＯＡｃで再抽出し、そして混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、
そして真空中で蒸発した。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、
ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）を溶出剤として使用して精製して、７−（
クロロメチル）−１，４−ジクロロイソキノリン（８７０ｍｇ、３．５３ｍｍｏ
ｌ）を得た。

【１３８２】

【化４５９】

【１３８３】 調製例８０： Ｎ−［（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル］−Ｎ−メチル−ＤＬ
−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル

【１３８４】

【化４６０】

【１３８５】 ７−（クロロメチル）−１，４−ジクロロイソキノリン（２３０ｍｇ、０．９
３ｍｍｏｌ）を、Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル（２
４８ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）及びＮＥｔ₃（１８７μＬ、１．３４ｍｍｏｌ）
のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の溶液に加え、そして混合物を還流で１５時間加熱し
た。［ＴＬＣは、不完全な反応を示した］。溶媒を真空中で蒸発し、ＴＨＦ（３
０ｍＬ）及びＮＥｔ₃（１００μＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物
を還流で２４時間加熱した。反応はなお不完全であったが、溶媒を真空中で蒸発
し、そして残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで、ヘキサン−Ｅｔ ₂ Ｏ（９８：２）を溶出剤として使用して精製して、Ｎ−［（１，４−ジクロロ
−７−イソキノリニル）メチル］−Ｎ−メチル−ＤＬ−フェニルグリシンｔ−ブ
チルエステル（１２０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を、無色の油状物として得た。

【１３８６】 相当する二塩酸塩は次のように製造した：アミンのヘキサン中の溶液を、ＨＣ
ｌのＥｔ₂Ｏ中の溶液（０．５Ｍ）と共に撹拌した。得られた白色沈殿を濾過に
よって集め、乾燥した。

【１３８７】

【化４６１】

【１３８８】 調製例８１： Ｎ−ベンジル−Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル]グリシ
ンｔ−ブチルエステル

【１３８９】

【化４６２】

【１３９０】 ７−（クロロメチル）−１，４−ジクロロイソキノリン（３７８mg、１．５３
mmol）を、Ｎ−ベンジルグリシンｔ−ブチルエステル（３４０mg、１．５３mmol
）およびＮＥｔ₃（２５６μL、１．８４mmol）のTHF（２０ｍＬ）中の撹拌溶液
に加え、混合物を１８時間、加熱還流した。溶媒を真空蒸発させ、残留物を、ヘ
キサン−ＥｔＯＡｃ（９５：５〜９０：１０）を溶離剤として用いるシリカゲル
上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−ベンジル−Ｎ−[（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル]グリシンｔ−ブチルエステル（
２４５mg、０．５７mmol）を得た。

【１３９１】 相当する二塩酸塩は次のように製造した：アミンのＥｔ₂Ｏ中の溶液を、ＨＣ
ｌのジオキサン中の溶液（０．５Ｍ）と共に撹拌した。得られた白色沈殿を濾過
によって集め、乾燥した。

【１３９２】

【化４６３】

【１３９３】 調製例８２： Ｎα− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎε−ｔ−
ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リシンｔ−ブチルエステル

【１３９４】

【化４６４】

【１３９５】 １，４−ジクロロ−７−イソキノリニルスルホニルクロリド（２５０mg、０．
８４mmol）、Ｎε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−リシンｔ−ブチルエステ
ル塩酸塩（２８６mg、０．８４mmol）およびトリエチルアミン（２３５μｌ、１
．６９mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍｌ）中の溶液を２３℃で３時間撹拌した。反
応混合物を水（２×２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空濃縮して
、残留物を得た。これをヘキサン、次いでｉ−Ｐｒ₂Ｏ中で粉砕して、Ｎα− [
（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎε−ｔ−ブチルオ
キシカルボニル−Ｌ−リシンｔ−ブチルエステルを白色粉末 （２７０mg、０．
４８mmol）として得た。

【１３９６】

【化４６５】

【１３９７】 調製例８３： Ｎα− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎε−ｔ−
ブチルオキシカルボニル−Ｄ−リシンｔ−ブチルエステル

【１３９８】

【化４６６】

【１３９９】 １，４−ジクロロ−７−イソキノリニルスルホニルクロリド（２５０mg、０．
８４mmol）、Ｎε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−リシンｔ−ブチルエステ
ル塩酸塩（２８６mg、０．８４mmol）およびトリエチルアミン（２３５μｌ、１
．６９mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍｌ）中の溶液を２３℃で１８時間撹拌した。
反応混合物を真空濃縮し、残留物を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７０：３０）を溶
離剤として用いるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製した
。ｉ−Ｐｒ₂Ｏからの結晶化でＮα− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル]−Ｎε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−リシンｔ−ブチル
エステル （２８５mg、０．５１mmol）を得た。

【１４００】

【化４６７】

【１４０１】 調製例８４： Ｎ− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｌ−グルタミ
ンｔ−ブチルエステル

【１４０２】

【化４６８】

【１４０３】 １，４−ジクロロ−７−イソキノリニルスルホニルクロリド（２５０mg、０．
８４mmol）、Ｌ−グルタミンｔ−ブチルエステル塩酸塩（２０１mg、０．８４mm
ol）およびトリエチルアミン（２３５μｌ、１．６９mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２５
ｍｌ）中の溶液を２３℃で１８時間撹拌した。反応混合物を水（２×２０ｍｌ）
で洗浄し、溶媒を真空除去して、Ｎ− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニ
ル）スルホニル]−Ｌ−グルタミンｔ−ブチルエステル （３０９mg、０．６７mm
ol）を得た。分析試料はＥｔＯＡｃからの結晶化の後に得た。

【１４０４】

【化４６９】

【１４０５】 調製例８５： Ｎ− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−シクロペンチ
ルアミン

【１４０６】

【化４７０】

【１４０７】 １，４−ジクロロ−７−イソキノリニルスルホニルクロリド（２５０mg、０．
８４mmol）を、シクロペンチルアミン（１００μｌ、１．０mmol）およびトリエ
チルアミン（１７０μｌ、１．２２mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍｌ）中の溶液に
加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、２Ｍ
塩酸、飽和水性Ｎａ₂ＣＯ₃溶液、そしてブラインで洗浄した。この溶液を乾燥し
（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発させて、Ｎ− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリ
ニル）スルホニル]−シクロペンチルアミン（２５０mg、０．７２mmol）を白色
結晶質固体として得た。

【１４０８】

【化４７１】

【１４０９】 調製例８６： １，４−ジクロロ−７−（１−ピロリジニルスルホニル）イソキノリン

【１４１０】

【化４７２】

【１４１１】 ピロリジン （９６mg、１．３５mmol）を、１，４−ジクロロ−７−イソキノ
リニルスルホニルクロリド（２０mg、０．６７mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍｌ）中
の溶液に加え、反応混合物を室温で７２時間撹拌した。混合物を真空濃縮し、残
留固体を水中で粉砕し、濾過し、乾燥した。粗生成物を、ＥｔＯＡｃ−ヘキサン
（５０：５０）を溶離剤として用いるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィ
ーによって精製し、ｉ−Ｐｒ₂Ｏからの再結晶で１，４−ジクロロ−７−（１−
ピロリジニルスルホニル）イソキノリン （６７mg、０．２０mmol）を白色固体
として得た。

【１４１２】

【化４７３】

【１４１３】 調製例８７： ｔ−ブチル（２Ｒ）−１− [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホ
ニル]−２−ピペリジンカルボキシレート

【１４１４】

【化４７４】

【１４１５】 濃Ｈ₂ＳＯ₄（２．０ｍｌ）を、２−（Ｒ）−ピペリジンカルボン酸 （４１５m
g、３．２１mmol）のジオキサン（１０ｍｌ）中の氷冷溶液に加えた。凝縮イソ
ブチレン（４０ｍｌ）を注意深く加え、反応混合物を密閉容器中で室温にて２１
時間撹拌した。反応混合物をＥｔ₂Ｏ（１００ｍｌ）および５Ｎ ＮａＯＨ（２
０ｍｌ）の氷冷溶液に注ぎ、混合物を撹拌しながら室温に温め、水で希釈した。
相を分離し、有機層を１Ｎ ＮａＯＨで洗浄し、半分の体積に真空濃縮し、２Ｎ
ＨＣｌで抽出した。一緒にした酸性抽出物は１Ｎ ＮａＯＨで塩基性にし、Ｃ
Ｈ₂Ｃｌ₂で抽出し、合わせた有機溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発させて
、ｔ−ブチル２(Ｒ）−ピペリジンカルボキシレート（２１０mg、１．１４mmol
）を油状物として得た。

【１４１６】

【化４７５】

【１４１７】 １，４−ジクロロ−７−イソキノリニルスルホニルクロリド（２４５mg、０．
８３mmol）をｔ−ブチル２(Ｒ）−ピペリジンカルボキシレート（１５３mg、０
．８３mmol）およびトリエチルアミン（１７０μｌ、１．２２mmol）のＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（１５ｍｌ）中の溶液に加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。溶液
をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、２Ｍ塩酸、飽和水性Ｎａ₂ＣＯ₃溶液、そしてブラインで
洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発させた。残留油状物を、ペンタン−Ｅ
ｔＯＡｃ（１００：０〜９０：１０）の溶離勾配を用いるシリカゲル上でのカラ
ムクロマトグラフィーによって精製して、ｔ−ブチル（２Ｒ）−１− [（１，４
−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−２−ピペリジンカルボキシレ
ート （２９０mg、０．６５mmol）を無色フィルムとして得た。

【１４１８】

【化４７６】

【１４１９】 調製例８８： メチル４−｛ [（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]アミノ
｝−１−メチル−４−ピペリジンカルボキシレート

【１４２０】

【化４７７】

【１４２１】 ４−アミノ−１−メチル−４−ピペリジンカルボン酸（４．０ｇ、１５．６mmo
l）のメタノール性ＨＣｌ（１００ｍｌ）中の溶液を２０時間還流下、撹拌した
。冷却した混合物を真空濃縮し、ＣＨ₂Ｃｌ₂と共に共沸させて油状物を得た。こ
れを氷冷Ｎａ₂ＣＯ₃溶液に溶解し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×）で抽出した。一緒にした
有機抽出物を乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発させて、４−アミノ−１−メチル
−４−ピペリジンカルボキシレート（１．６ｇ、９．３mmol）を油状物として得
た。

【１４２２】

【化４７８】

【１４２３】 １，４−ジクロロ−７−イソキノリニルスルホニルクロリド（１．０ｇ、３．
３７mmol）を、メチル４−アミノ−１−メチル−４−ピペリジンカルボキシレー
ト(７００mg、４．０mmol)およびトリエチルアミン（７００μｌ、１．０mmol）の
ＣＨ₂Ｃｌ₂（６０ｍｌ）中の溶液に加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した
。混合物を真空濃縮し、残留物を、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８ＮＨ₃（９
７：３：０．３〜９５：５：０．５）の溶離勾配を用いてシリカゲル上でのカラ
ムクロマトグラフィーによって精製して、メチル４−｛ [（１，４−ジクロロ−
７−イソキノリニル）スルホニル]アミノ｝−１−メチル−４−ピペリジンカル
ボキシレート（７００mg、１．６２mmol）を白色固体として得た。

【１４２４】

【化４７９】

【１４２５】 調製例８９： Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎ−（メチル）
シクロロイシンエチルエステル

【１４２６】

【化４８０】

【１４２７】 Ｋ₂ＣＯ₃（２３８mg、１．７３mmol)を、Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソ
キノリニル）スルホニル]−シクロロイシンエチルエステル（３００mg、０．７
２mmol)のＤＭＦ（５ｍｌ）中の溶液に加え、混合物を室温で４０分間撹拌した
。ヨウ化メチル（４７μｌ、０．７６mmol)を加え、反応混合物をさらに３０分
間、室温で撹拌した。反応混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、一緒にした
有機抽出物を水、次いでブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発さ
せた。残留黄色固体は、ＥｔＯＡｃ−ヘキサン（２０：８０）を溶離剤として用
いるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｎ−[（１
，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎ−（メチル）シクロロ
イシンエチルエステル（２０４mg、０．４７mmol）を白色固体として得た。

【１４２８】

【化４８１】

【１４２９】 調製例９０： ４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキノリンスルホニルクロリド

【１４３０】

【化４８２】

【１４３１】 イソキノリノール（１０g、６８．９mmol）の５０℃のＭｅＣＮ（２５０ｍｌ
）中の懸濁液をＮ−ブロモスクシンイミド（１２．６g、７０．８mmol）で処理
したところほとんど完全に溶液となり、その後、粘稠な沈殿が形成した。３時間
加熱還流した後、反応混合物を氷の中で冷却し、固体を濾過し、ＭｅＣＮで洗浄
し、乾燥して、４−ブロモ−１−（２Ｈ）−イソキノロン（７．６g、３４．０m
mol）を得た。

【１４３２】

【化４８３】

【１４３３】 ４−ブロモ−１−（２Ｈ）−イソキノロン（７．５g、３３．０mmol）をクロ
ロスルホン酸（２３ml、３４６mmol）に分けて加え、得られた溶液を１００℃に
２．５日間加熱した。冷却後、反応混合物を氷の上に注意深く注ぎ、白色固体を
得た。これを濾過し、水、ＭｅＣＮおよびＥｔ₂Ｏで洗浄し、空気乾燥して、ク
リーム色の固体を得た。４−ブロモ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−７−イソ
キノリンスルホニルクロリド（〜１３．５ｇ）は、それ以上乾燥することなく、
直ちに使用した。

【１４３４】

【化４８４】

【１４３５】 ４−ブロモ−１−オキソ−１，２−ジヒドロ−７−イソキノリンスルホニルク
ロリド（〜１３．５ｇ）のアセトニトリル（２００ｍｌ）中の撹拌溶液に、ＰＯ
Ｃｌ₃（１０ml、１１０mmol）を分けて加えた。得られた不均質混合物を２４時
間、加熱還流し、冷却し、上澄みを褐色油状残留物からデカントし、濃縮して固
体を得た。固体をＥｔ₂Ｏに抽出し、溶媒を除去した後、粘着性固体を得た。こ
れをＥｔ₂Ｏ中で粉砕して、標題化合物（３．８３g、１１．０mmol）を白色固体
として得た。

【１４３６】

【化４８５】

【１４３７】 調製例９１： Ｎ−[（４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｄ−プロ
リン−ｔ−ブチルエステル

【１４３８】

【化４８６】

【１４３９】 ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍｌ）中の４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキノリニルス
ルホニルクロリド（４００mg、１．１７mmol）を（Ｄ）−プロリンｔ−ブチルエ
ステル塩酸塩（２５０mg、１．２０mmol）およびトリエチルアミン（４１０μｌ
、２．９４mmol）で処理し、室温で２時間撹拌した。反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で
希釈し、水、１０％水性クエン酸、そしてブラインで連続洗浄し、乾燥し（Ｍｇ
ＳＯ₄）、真空濃縮して、オフホワイト色の固体を得た。これを、ＥｔＯＡｃ−
ヘキサン（１６：８４）を溶離剤として用いるシリカゲル上でのカラムクロマト
グラフィーによって精製して、Ｎ−[（４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキノ
リニル）スルホニル]−Ｄ−プロリン−ｔ−ブチルエステル（３５０mg、０．７
４mmol）を白色固体として得た。

【１４４０】

【化４８７】

【１４４１】 調製例９２： Ｎ−[[（４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎ−[２
−（ジメチルアミノ）エチル］シクロロイシンエチルエステル塩酸塩

【１４４２】

【化４８８】

【１４４３】 トリエチルアミン（１．０２ｍｌ、７．３３mmol）を、４−ブロモ−１−クロ
ロイソキノリニルスルホニルクロリド（１．０g、２．９３mmol）のＣＨ₂Ｃｌ₂
（２５ｍｌ）中の溶液に加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物
を１Ｎ ＨＣｌ、Ｎａ₂ＣＯ₃溶液、、そしてブラインで連続洗浄し、乾燥し（Ｎ
ａ₂ＳＯ₄）、真空蒸発させた。残留油状物をＣＨ₂Ｃｌ₂−ｉ−Ｐｒ₂Ｏから結晶
化して、Ｎ−[[（４−ブロモ−１−クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]
シクロロイシンエチルエステル（３８０mg、０．８２mmol）を固体として得た。

【１４４４】

【化４８９】

【１４４５】 Ｋ₂ＣＯ₃（１５７mg、１．１４mmol）を、Ｎ−[[（４−ブロモ−１−クロロ−
７−イソキノリニル）スルホニル]シクロロイシンエチルエステル（３００mg、
０．６５mmol）のＤＭＦ（５ml）中の溶液に加え、溶液を５分間撹拌した。Ｎ，
Ｎ−ジメチルアミノエチルクロリド塩酸塩（１１２mg、０．７８mmol）を加え、
反応混合物を室温で３６時間撹拌した。反応混合物を水およびＥｔＯＡｃとの間
で分配し、層を分離し、水性相をＥｔＯＡｃで抽出した。一緒にした有機溶液を
ブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、真空蒸発させた。残留物を、ＣＨ₂
Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ₃（９５：５：０．５）を溶離剤として用いる
シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製してガムを得た。これ
をＥＴ₂Ｏ−ＥｔＯＡｃ溶液に溶解し、エーテル性ＨＣｌを加え、混合物を真空
蒸発させた。得られた固体を水と共に粉砕し、濾過し、乾燥して、Ｎ−[[（４−
ブロモ−１−クロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎ−[２−（ジメチル
アミノ）エチル］シクロロイシンエチルエステル塩酸塩（９０mg、０．１６mmol
）を固体として得た。

【１４４６】

【化４９０】

【１４４７】 調製例９３： エチル３−[[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]アミノ]−
２，２−ジメチルプロパノエート塩酸塩

【１４４８】

【化４９１】

【１４４９】 標題化合物は、製造９０に記載の手順と同様にして、１，４−ジクロロスルホ
ニルクロリドおよびエチル３−アミノ−２，２−ジメチルプロパノエート塩酸塩
から白色固体（８６％）として得た。

【１４５０】

【化４９２】

【１４５１】 調製例９４： Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎ−［２−（テ
トラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］シクロロイシンエチルエ
ステル

【１４５２】

【化４９３】

【１４５３】 Ｋ₂ＣＯ₃（２３８mg、１．７３mmol）を、Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イ
ソキノリニル）スルホニル]シクロロイシンエチルエステル（６００mg、１．４
４mmol）のＤＭＦ（１０ml）中の溶液に加え、懸濁液を室温で３０分間撹拌した
。２−（２−ブロモエトキシ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン（J.C.S. １９４８
；４１８７）（３１６mg、１．４４mmol）のＤＭＦ（４ml）中の溶液を、次いで
ヨウ化ナトリウム（１０mg）を加え、反応混合物を７０℃で２３時間撹拌した。
冷却した混合物を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。一緒にした有機溶液はブラ
インで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発させた。残留黄色油状物は、ヘ
キサン−Ｅｔ₂Ｏ（７５：２５）を溶離剤として用いるシリカゲル上でのカラム
クロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ₂Ｃｌ₂と共に共沸し、真空乾燥して、
Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）スルホニル]−Ｎ−［２−（テ
トラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］シクロロイシンエチルエ
ステル（３４１mg、０．６３mmol）を固体として得た。

【１４５４】

【化４９４】

【１４５５】 調製例９５： Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチル]シクロロイシンメチル
エステル

【１４５６】

【化４９５】

【１４５７】 ７−クロロメチル−１，４−ジクロロ−イソキノリン（４００mg、１．６２mm
ol）を、シクロロイシンメチルエステル（２５５mg、１．７８mmol）、Ｋ₂ＣＯ₃ （５００mg、３．６２mmol）およびヨウ化ナトリウム（１５mg）の懸濁液に加え
、反応混合物を７５℃で２．５時間加熱した。冷却後、反応混合物を水に注ぎ、
ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×６０ｍｌ)で抽出した。有機抽出物を水、ブラインで洗浄し、
乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、真空濃縮して油状物を得た。これは、ヘキサン−Ｅｔ₂
Ｏ（８５：１５）を溶離剤として用いるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフ
ィーによって精製して、Ｎ−[（１，４−ジクロロ−７−イソキノリニル）メチ
ル]シクロロイシンメチルエステル（４１４mg、１．１７mmol）を黄色油状物と
して得た。この油状物試料をエーテル性ＨＣｌで処理し、混合物を蒸発させて標
題化合物の塩酸塩を白色固体として得た。

【１４５８】

【化４９６】

【１４５９】 調製例９６： （１−アミノシクロペンチル）（４−メチル−１−ピペラジニル）メタノン二塩
酸塩

【１４６０】

【化４９７】

【１４６１】 （１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボイミド塩酸塩（２
．４９g、１３．０mmol）を、ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．４９g
、１１．０mmol）および１−［（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］シクロペン
タンカルボン酸（２．２９g、１０．０mmol）のＤＭＦ（１５ml）中の冷却（４
℃）溶液に分けて加え、混合物を３０分間撹拌した。Ｎ−メチルピペラジン（１
．１０g、１１．０mmol）を加え、反応混合物を３０分間撹拌し、室温に温め、
さらに１７時間撹拌を続けた。反応混合物を真空蒸発させ、残留黄色油状物を飽
和Ｎａ₂ＣＯ₃溶液とＥｔＯＡｃとの間で分配した。層を分離し、水性相をＥｔＯ
Ａｃで抽出し、一緒にした有機溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、真空蒸発させた。
残留固体をシリカゲルに予備吸収させ、ＣＨ₂Ｃｌ₂−ＭｅＯＨ−０．８８０ＮＨ ₃ （９７．５：２．５：０．２５〜９０：１０：１）の溶離勾配を配用いるシリ
カゲル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製して、Ｅｔ₂Ｏ中で粉砕し
て、ｔ−ブチル１−［（４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル］シクロペ
ンチルカルバメート（２．３１g、７．４mmol）を結晶質固体として得た。

【１４６２】

【化４９８】

【１４６３】 ｔ−ブチル１−［（４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル］シクロペン
チルカルバメート（２．２g、７．０４mmol）のＥｔＯＡｃ（１２０ml）中の４
℃の懸濁液をＨＣｌガスで飽和し、そして反応混合物を４時間撹拌した。混合物
をＥｔＯＡｃと、次いで乾燥Ｅｔ₂Ｏと共に共沸し、真空乾燥して、（１−アミ
ノシクロペンチル）（４−メチル−１−ピペラジニル）メタノン二塩酸塩（２．
１ｇ）を白色固体として得た。

【１４６４】

【化４９９】

【１４６５】ＰＣＳ９４８２化合物 上に示したように、本発明での使用に適した阻害剤化合物（薬剤）は、ＧＢ特
許出願第９９０８４１０．５号（参照することによってここに記載されたものと
する）および米国特許出願第０９／５４６４１０号（参照することによってここ
に記載されたものとする）およびヨーロッパ特許出願第００３０２７７８．６号
（参照することによってここに記載されたものとする）および日本特許出願第２
０００−１０４７２５（参照することによってここに記載されたものとする）に
開示されている。下記の教示が本発明のさらなる記載および好ましい側面に関す
るものであるならば、これらの記載および好ましい側面は、上記の記載および好
ましい側面（すなわち、ｉＵＰＡおよび／またはｉＭＭＰおよび成長因子を含む
またはｉＵＰＡおよびｉＭＭＰおよび任意の成長因子を含む医薬組成物（並びに
それらの使用））と関連させて読むべきである。

【１４６６】 ＰＣＳ９４８２化合物はウロキナーゼ阻害剤として有用なピリジン誘導体、特
に、２−ピリジルグアニジン誘導体とも呼ばれる２−ジアミノメチレンアミノピ
リジン誘導体である。

【１４６７】 ＰＣＳ９４８２化合物は一般式（Ｉ）：

【１４６８】

【化５００】

【１４６９】 の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であり、式中、 Ｒ¹は、Ｈ、ハロゲン、ＣＮ、１つ以上のハロゲンで置換されていてもよいＣ_{1 -6} アルキル、または１つ以上のハロゲンで置換されていてもよいＣ_1-6アルコキ
シであり； Ｒ²およびＲ³は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、１つ以上のハロゲンで置換さ
れていてもよいＣ_1-6アルキルまたはＣ_1-6アルコキシ、アリール、（Ｃ_n−アル
キレン）ＣＯ₂Ｈ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂（Ｃ_1-6アルキル）、（Ｃ_n−アル
キレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＲ⁷、ＣＨ＝ＣＨＣＯ₂Ｈ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＮ
Ｒ⁵Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶、Ｃ≡ＣＲ⁷、Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＯＨ、
Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＯＲ⁸、ＯＲ⁸、Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、Ｃ
Ｈ₂ＯＲ⁸またはＣＨ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶であり； Ｒ⁴は、Ｎ＝Ｃ（ＮＨ₂）₂またはＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ₂であり； Ｒ⁵およびＲ⁶は、各々独立して、Ｈ、ＯＨもしくはＣＯ₂Ｈで置換されていて
もよいＣ_1-6アルキル、het（Ｃ_1-6アルキレン）またはアリール（Ｃ_1-6アルキレ
ン）であるか、あるいはそれらが結合している窒素と一緒になって、Ｏ、Ｓまた
はＮＲ⁹から選択される追加複素部分を含んでいてもよい４〜７員飽和環を形成
してもよく； 環はベンゾ縮合していてもよく； ベンゾ縮合していてもよい環は、ＯＨ、ハロゲン、ＣＯ₂Ｈ、ＣＯ₂（Ｃ_1-6ア
ルキル）およびＣ_1-6アルキルから独立して選択される３つ以下の置換基で置換
されていてもよく； Ｒ⁷は、Ｃ_1-6アルキル、アリールまたはhetであり； Ｒ⁸は、Ｃ_1-6アルキル、アリール、het、アリール（ＣＨＣＯ₂Ｈ）またはアリ
ール（Ｃ_1-6アルキレン）であり； Ｒ⁹は、Ｈ、Ｃ_1-6アルキル、アリールまたはＣＯ（Ｃ_1-6アルキル）であり；
ここで、 アリール（Ｃ_1-6アルキレン）基のアリール部分を含めた「アリール」とは、
ハロゲン、Ｃ_1-6アルキル、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂Ｈ、（Ｃ_n−アルキレン）
ＣＯ₂（Ｃ_1-6アルキル）、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＮ、Ｃ_1-6アルコキシ、ＣＮ、
（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＣＯ₂Ｈ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ⁵
Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶、Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＯＨ、ＣＨ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶、
およびＯ（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶から独立して選択される３つ以下の
置換基で置換されていてもよいフェニルを意味し； 「het」とは、複素環またはベンゾ環（存在するならば）中の利用可能な原子
によって結合している任意にベンゾ縮合した５もしくは６員飽和または不飽和複
素環を意味し、該複素環基はジオキソリル、フリル、チエニル、ピロリル、オキ
サゾリル、チアゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラ
ゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピ
リジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、およびピラニルから選択さ
れ、 該任意にベンゾ縮合した複素環は、ハロゲン、Ｃ_1-6アルキル、（Ｃ_n−アルキ
レン）ＣＯ₂Ｈ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂（Ｃ_1-6アルキル）、（Ｃ_n−アルキ
レン）ＣＮ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＣＯ₂Ｈ、ＣＨ＝Ｃ
ＨＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶、Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＯＨ、ＣＨ ₂ ＮＲ⁵Ｒ⁶、およびＯ（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶から独立して選択される
３つ以下の置換基で置換されていてもよく； ｎは０、１または２であり； ｍは１または２であり； 上記定義における「Ｃ−アルキレン」結合基は１つ以上のＣ_1-6アルキルで置
換されていてもよく； ただし、Ｒ¹、Ｒ²およびＲ³は全てがＨではない。 これらの化合物は以後、「本発明の物質」と呼ぶ。

【１４７０】 「アルキル」基および「アルコキシ」基のアルキル部分は、直鎖状、分枝鎖状
、または炭素原子数が許すならば環状でもよい。 「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。

【１４７１】 Ｒ⁴部分に対する２つの定義はもちろん互変異性体である。特定の状況で１つ
の互変異性体が優勢となり、他の状況で互変異性体の混合物が存在することは、
当業者には明らかであろう。

【１４７２】 好ましくは、Ｒ¹は、Ｈ、ＣＮ、ハロゲン、または１つ以上のハロゲンで置換
されていてもよいメチルである。 より好ましくは、Ｒ¹は、Ｈ、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒまたはメチルである。

【１４７３】 最も好ましくは、Ｒ¹は、ＣｌまたはＢｒである。 好ましくは、Ｒ²は、Ｈ、ハロゲン、１つ以上のハロゲンで置換されていても
よいＣ_1-6アルキル、アリール、ＣＨ₂ＯＲ⁸、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶ 、ＣＯ₂Ｈ、またはＣＨ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶である。

【１４７４】 より好ましくは、Ｒ²は、Ｈ、Ｃｌ、メチル、フェニル、ＣＯＮＨＣＨ₂Ｐｈ、
ＣＨ₂ＯＰｈ、ＣＨ₂ＮＣＨ₃Ｂｎ、またはピロリジノメチルである。 最も好ましくは、Ｒ²はＨである。

【１４７５】 好ましくは、Ｒ³は、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ₃、アリール、（Ｃ_n−アルキレン
）ＣＯ₂Ｈ、（Ｃ_n−アルキレン）ＣＯ₂（Ｃ_1-6アルキル）、（Ｃ_n−アルキレン
）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、ＣＨ＝ＣＨＲ⁷、ＣＨ＝ＣＨＣＯ₂Ｈ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶ 、ＣＨ＝ＣＨＳＯ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶、Ｃ≡ＣＲ⁷、Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＯＨ、Ｏ（Ｃ_m −アルキレン）ＯＲ⁸、ＯＲ⁸、Ｏ（Ｃ_m−アルキレン）ＣＯＮＲ⁵Ｒ⁶、ＣＨ₂ＯＲ ⁸ またはＣＨ₂ＮＲ⁵Ｒ⁶である。

【１４７６】 より好ましくは、Ｒ³は、ＣＨ＝ＣＨＣＯ₂Ｈ、（２−カルボキシピロリジノ）
ＳＯ₂ＣＨ＝ＣＨ、（シアノフェニル）ＣＨ＝ＣＨ、または（カルボキシフェニ
ル）ＣＨ＝ＣＨである。

【１４７７】 さらにより好ましくは、Ｒ³は、ＣＨ＝ＣＨＣＯ₂Ｈ、（２−カルボキシピロリ
ジノ）ＳＯ₂ＣＨ＝ＣＨ、（３−シアノフェニル）ＣＨ＝ＣＨ、または（３−カ
ルボキシフェニル）ＣＨ＝ＣＨである。

【１４７８】 最も好ましくは、Ｒ³は、（２−カルボキシピロリジノ）ＳＯ₂ＣＨ＝ＣＨ、（
３−シアノフェニル）ＣＨ＝ＣＨ、または（３−カルボキシフェニル）ＣＨ＝Ｃ
Ｈである。

【１４７９】 本発明の物質の好ましいグループは、Ｒ¹がＨ、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒまたはメチ
ルであり；Ｒ²がＨ、Ｃｌ、メチル、フェニル、ＣＯＮＨＣＨ₂Ｐｈ、ＣＨ₂ＯＰ
ｈ、ＣＨ₂ＮＣＨ₃Ｂｎ、またはピロリジノメチルであり；そしてＲ³がＣＨ＝Ｃ
ＨＣＯ₂Ｈ、（２−カルボキシピロリジノ）ＳＯ₂ＣＨ＝ＣＨ、（３−シアノフェ
ニル）ＣＨ＝ＣＨ、または（３−カルボキシフェニル）ＣＨ＝ＣＨである化合物
である。

【１４８０】 本発明の物質のさらにより好ましいグループは、Ｒ¹がＣｌまたはＢｒであり
；Ｒ²がＨであり；そしてＲ³が（２−カルボキシピロリジノ）ＳＯ₂ＣＨ＝ＣＨ
、（３−シアノフェニル）ＣＨ＝ＣＨ、または（３−カルボキシフェニル）ＣＨ
＝ＣＨである化合物である。

【１４８１】 本発明の物質さらに好ましいグループは、以下の実施例に記載の化合物、並び
にそれらの塩および溶媒和物である。 以下の合成法では、特に断りがなければ、置換基は上記式（Ｉ）の化合物に関
して上で定義した通りである。

【１４８２】 望ましいまたは必要な場合、式（Ｉ）の化合物はその薬学的に許容される塩に
変換される。式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、式（Ｉ）の化合物お
よび望ましい酸または塩基の溶液を適切に共に混合することによって都合よく製
造しうる。塩は溶液から沈殿させ、濾過によって集めても、あるいは溶媒の蒸発
のような他の手段によって集めてもよい。

【１４８３】合成方法 方法１ 式（Ｉ）の化合物は相当する２−アミノピリジン誘導体（ＩＩ）から、シアン
アミド（ＮＨ₂ＣＮ）、またはカルボキサミジン誘導体のような「ＮＨＣ⁺＝ＮＨ
」シントン（Synthon）として働く試薬、例えば１Ｈ−ピラゾール−１−カルボ
キサミジン（M. S. Bernatowicz, Y. Wu, G. R. Matsueda, J. Org. Chem., 199
2, 57, 2497）、その３，５−ジメチルピラゾール類似体（M. A. Brimble 等, J
. Chem. Soc. Perkin Trans. I (1990) 311）、単純なＯ−アルキルチオウロニ
ウム塩またはＳ−アルキルイソチオウロニウム塩、例えばＯ−メチルイソチオ尿
素（F. El-Fehail 等, J. Med. Chem. (1986), 29, 984）、Ｓ−メチルイソチオ
ウロニウムスルフェート（S. Botros 等, J. Med. Chem. (1986), 29, 874；P.
S. Chauhan 等, Ind. J. Chem., 1993, 32B, 858）またはＳ−エチルイソチオウ
ロニウムブロミド（M. L. Pedersen 等, J. Org. Chem., (1993), 58, 6966）と
反応させることによって得ることができる。あるいは、アミノイミノメタンスル
フィン酸またはアミノイミノメタンスルホン酸を用いてもよい（A. E. Miller
等, Synthesis (1986) 777；K. Kim 等, Tet. Lett. (1988) 29, 3183）。

【１４８４】

【化５０１】

【１４８５】 この変換の別の方法は本技術分野における当業者に公知である（例えば、「Co
mprehensive Organic Functional Group Transformations」, 1995, Pergamon P
ress, Vol.6, p639, T. L. Gilchrist(編集)；Pataiの「Chemistry of Function
al Groups」, Vol.2,「The Chemistry of Amidines and Imidates」, 1991, 488
参照）。

【１４８６】 ２−アミノピリジン（ＩＩ）は公表されている標準的な方法によって製造でき
（例えば、「The Chemistry of Heterocyclic Compounds」, Vol.38 Pt.2 John
Wiley & Sons, 編集F. G. Kathawala, G. M. Coppolq, H. F. Schuster参照）、
例えば、相当するカルボキシ誘導体からの転位（ホフマン、クルチウス、ローゼ
ン、シュミット−タイプ転位）およびその後の脱保護による方法がある。

【１４８７】 あるいは、２−アミノピリジンは、チチバビン反応を用いる環水素の直接置換
反応によって製造しうる（A. F. Pozharskii 等, Russian Chem. Reviews, 1978
, 47, 1042, C. K. McGill 等, Advances in Heterocyclic Chemistry 1988, Vo
l.44, 1）。

【１４８８】 あるいは２−アミノピリジン（ＩＩ）は相当する２−ハロピリジンから、Ｃｌ
またはＢｒのような脱離基の、アジドのような窒素求核性化合物での直接置換反
応（その後、還元）、あるいはアンモニアによる、または適当なアミン（例えば
、ベンジルアミン）を用いるＰｄ触媒による置換反応、そしてその後の本技術分
野で周知の標準条件を用いる脱保護によって製造しうる。そのような化学反応の
例は「The Chemistry of Heterocyclic Compounds」, Vol.14, Pts.2および3, J
ohn Wiley & Sons, 特にPt.2 (1961), Pt.3 (1962), Pt.2増補 (1974)およびPt.
3増補 (1974) に概説されている。

【１４８９】 ２−ハロピリジンは、文献でよく知られた方法によって製造しうる。例えば、
２−ヒドロキシピリジン（２−ピリミジノン）のハロゲン化剤、例えばＳＯＣｌ ₂ （Y. S. Lo., 等, Syn. Comm., 1988, 19, 553）、ＰＯＣｌ₃（M. A. Walters,
Syn. Comm., 1992, 22, 2829）、またはＰＯＢｒ₃（G. J. Quallich, J. Org.
Chem., 1992, 57, 761）での処理による。あるいは、２−アルコキシピリジンは
、ＰＯＣｌ₃＋ＤＭＦのようなビルスマイヤー−ハック条件下で相当する２−ア
ミノピリジンに変換しうる（L-L Lai 等, J. Chem. Res. (S), 1996, 194）。相
当するＮ−オキシドは適当なハロゲン化反応混合物（例えば、ＰＯＣｌ₃／ＰＣ
ｌ₅）で処理すると直接２−ハロピリジンが得られる（M. A. Walters, Tetrahed
ron Lett., 1995, 42, 7575）。２−位置の直接ハロゲン化は特定の環置換基の
存在の下で可能である（M. Tiecco 等, Tetrahedron, 1986, 42, 1475, K. J. E
dgar, J. Org. Chem., 1990, 55, 5287）。

【１４９０】方法２ 式（Ｉ）の化合物は、上記方法１で定義した通りの相当する２−アミノピリジ
ン誘導体（ＩＩ）から、保護アミジン（２＋）シントン（ＩＩＩ）：

【１４９１】

【化５０２】

【１４９２】 として働く試薬、例えば、ＰＮＨＣ（＝Ｚ）ＮＨＰ¹、ＰＮ＝ＣＺ¹ＮＨＰ¹また
はＰＮＨＣＺ¹＝ＮＰ¹（ＺはＯまたはＳのような基であり、Ｚ¹はＣｌ、Ｂｒ、
Ｉ、メシレート、トシレート、アルキルオキシ等のような脱離基であり、Ｐおよ
びＰ¹は同じでも異なっていてもよく、本技術分野で周知のＮ−保護基、例えば
、ｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、アリールスルホニル、
例えばトルエンスルホニル、ニトロ等である）との反応によって得ることができ
る。

【１４９３】 シントン（ＩＩＩ）として働く試薬の例は、Mukaiyamaの試薬（Yong, Y. F.;
Kowalski, J. A.; Lipton, M. A., J. Org. Chem., 1997, 62, 1540）または銅
、水銀もしくは銀塩、特に塩化水銀（ＩＩ）のような促進剤の存在下または不在
下での、Ｎ，Ｎ´−保護Ｓ−アルキルチオウロニウム誘導体、例えばＮ，Ｎ´−
ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｓ−Ｍｅ−イソチオ尿素、Ｎ，Ｎ´−ビス（
ベンジルオキシカルボニル）−Ｓ−メチルイソチオ尿素、またはこれらのスルホ
ン酸誘導体（J. Org. Chem., 1986, 51, 1882）、またはＳ−アリールチオウロ
ニウム誘導体、例えばＮ，Ｎ´−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｓ−（２，
４−ジニトロベンゼン）（S. G. Lammin, B. L. Pedgrift, A. J. Ratcliffe, T
et. Lett. 1996, 37, 6815）、またはモノ−保護類似体、例えば［（４−メトキ
シ−２，３，６−トリメチルフェニル）スルホニル］−カルバムイミドチオ酸メ
チルエステルまたは相当する２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−
スルホニル類似体（D. R. Kent, W. L. Cody, A. M. Doherty, Tet. Lett., 199
6, 37, 8711）またはＳ−メチル−Ｎ−ニトロイソチオ尿素（L. Fishbein 等, J
. Am. Chem. Soc., (1954) 76, 1877）、または各種置換チオ尿素、例えばＮ，
Ｎ´−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）チオ尿素（C. Levallet, J. Lerpiniere
, S. Y. Ko, Tet., 1997, 53, 5291）である。適したＮ−保護Ｏ−アルキルイソ
尿素、例えばＯ−メチル−Ｎ−ニトロイソ尿素（N. Heyboer等, Rec. Chim. Tra
v. Pays-Bas (1962) ,81, 69）も用いうる。あるいは、本技術分野における当業
者に公知の他のグアニル化剤、例えば１−Ｈ−ピラゾール−１−［Ｎ，Ｎ´−ビ
ス（ｔ−ブトキシカルボニル）］カルボキサミジン、相当するビス−Ｃｂｚ誘導
体（M. S. Bernatowicz, Y. Wu, G. R. Matsueda, Tet. Lett., 1993, 34, 3389
）またはモノ−Ｂｏｃもしくはモノ−Ｃｂｚ誘導体（B. Drake, Synthesis, 199
4, 579, M. S. Bernatowicz, Tet. Lett., 1993, 34, 3389）を用いてもよい。
同様に、３，５−ジメチル−１−ニトログアニルピラゾールを用いてもよい（T.
Wakayima 等, Tet. Lett., (1986) 29, 2143）。

【１４９４】 反応は適当な溶媒、例えばジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（
ＤＭＦ）、メタノールを用いて行なうと好都合である。 反応はまた、塩化水銀（ＩＩ）を、アミノピリジン（ＩＩ）およびタイプ（Ｉ
ＩＩ）のチオ尿素誘導体の適当な塩基／溶媒混合物、例えばトリエチルアミン／
ジクロロメタン中の混合物に加えることによって行なうと好都合である。

【１４９５】

【化５０３】

【１４９６】 この反応の生成物は保護ピリジニルグアニジン（ＩＶ）であり、これを脱保護
すると（Ｉ）またはその塩が得られる。例えば、保護基Ｐおよび／またはＰ¹が
ｔ−ブトキシカルボニルであるならば、脱保護はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）ま
たは塩酸のような酸を用い、ジクロロメタンのような適当な溶媒中で行なって、
（Ｉ）のトリフルオロ酢酸（トリフレート）塩をモノ−またはジトリフレートと
して得るのが好都合である。

【１４９７】 Ｐおよび／またはＰ¹が水素添加分解可能な基、たとえばベンジルオキシカル
ボニルであるならば、脱保護は水素添加分解によって行なうことができる。 他の保護／脱保護法には次のものが含まれる： ニトロ（K. Suzuki 等, Chem. Pharm. Bull., (1985) 33, 1528, Nencioni 等,
J. Med. Chem., (1991) 34, 3373, B. T. Golding 等, J. C. S. Chem. Comm.,
(1994) 2613) ; ｐ−トルエンスルホニル（J. F. Callaghan 等, Tetrahedron (
1993) 49, 3479) ; メシチルスルホニル（Shiori 等, Chem. Pharm. Bull., (19
87) 35, 2698, 同 (1987) 35, 2561, 同 (1989) 37, 3432, 同 (1987) 35, 3880
, 同 (1987) 35, 1076) ; ２−アダマントイルオキシカルボニル（Iuchi 等、同
(1987) 35, 4307) ;メチルスルホニルエトキシカルボニル（Filippov 等, Syn,
Lett., (1994) 922）。

【１４９８】 本発明の化合物の合成における他の保護およびその後の脱保護が、例えば「Pr
otective Groups in Organic synthesis」, T. W.Greene およびP. G. Wuts, Jo
hn Wiley and Sons Inc. (1991) および「Protecting Groups」, P. J. Kociens
ki, George Thieme Verlag (1994) に記載のような従来技術によって行ないうる
ことは本技術分野における当業者には明らかである。

【１４９９】方法３ 式（Ｉ）の化合物は式（Ｖ）：

【１５００】

【化５０４】

【１５０１】 （式中、ＺはＣｌ，ＢｒまたはOPhのような適当な脱離基である） の化合物から、グアニジンの遊離塩基による脱離基の置換によって得ることがで
きる。

【１５０２】 グアニジンの遊離塩基は、好都合なことに、適当な塩、例えば塩酸塩、炭酸塩
、硝酸塩、または硫酸塩と、適当な塩基、例えば水酸化ナトリウム、水素化カリ
ウム、または別のアルカリ金属塩基とから、好ましくは乾燥非プロトン性溶媒、
例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ＤＭＳＯ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）、エチレングリコールジメチルエーテル（ＤＭＥ）、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルアセトアミド（ＤＭＡ）、トルエン、またはこれらの混合物中で、その場で
製造しうる。あるいは、アルコール溶媒中のアルコキシド、例えば、ｔ−ブタノ
ール中または上記非プロトン性溶媒中のカリウムｔ−ブトキシドを用いて、適当
な塩から製造することもできる。

【１５０３】 このようにして形成した遊離グアニジンは、式（Ｖ）の化合物と化合すること
ができ、式（Ｉ）の化合物を形成する反応は、室温〜２００℃、好ましくは約５
０〜１５０℃で、好ましくは４時間〜６日間行なうことができる。

【１５０４】方法４ １つ以上のＲ^1-3が水酸基を含む式（Ｉ）の化合物は、適当に「保護された」
ヒドロキシ誘導体、すなわち１つ以上のＲ^1-3が相当する「ＯＰ²」（Ｐ²は適当
なＯ−保護基、たとえばＯ−ベンジルである）を含む式（Ｉ）の化合物から製造
しうる。ベンジル基は、エタノールのような適当な溶媒中、約２０℃、加圧下、
任意に過剰の酸、例えばＨＣｌ、ＡｃＯＨまたはＴＦＡの存在下、パラジウム担
持炭を用いる接触水素添加によって、または他の公知の脱保護法によって除去し
うる。適したＯ−保護基および保護／脱保護は上記Greeneおよび Wuts、並びにK
ocienskiのテキストに記載されている。

【１５０５】方法５ Ｒ²またはＲ³がカルボン酸基またはカルバモイル基であるかまたはこれを含む
本発明の化合物は、置換基がニトリルであるかあるいはニトリルを含む相当する
化合物から、完全または部分加水分解によって製造することができる。Ｒ²また
はＲ³がカルボン酸基であるかまたはこれを含む本発明の化合物は、置換基がカ
ルバモイル部分である相当する化合物から、加水分解によって製造することがで
きる。加水分解は、本技術分野で周知の方法、例えば、「Advanced Organic Che
mistry」, J. March, 第３版（Wiley-Interscience）, 第６−５章、およびその
中の引例に記載の方法によって行なうことができる。加水分解は、濃塩酸を用い
、高温で行なうと好都合であり、生成物は塩酸塩となる。

【１５０６】 Ｒ¹、Ｒ²またはＲ³の１つ以上がＣｌまたはＢｒであるかまたはこれを含む式
（Ｉ）の化合物は、好都合にはパラジウム担持炭を用い、エタノールのような適
当な溶媒中、約２０℃および加圧下、水素添加分解することによって、脱ハロゲ
ン化して式（Ｉ）の相当するヒドリド化合物を得てもよい。

【１５０７】 Ｒ²またはＲ³の１つ以上がアミド部分を含む式（Ｉ）の化合物は、選択したア
ミンとの結合による、任意に保護した相当するカルボキシ化合物の反応を経て、
例えば、相当する酸ハロゲン化物または混合無水物を初めに形成し、その後アミ
ンと反応させ、そして必要ならば脱保護することにより製造しうる。そのような
変換は本技術分野ではよく知られている。

【１５０８】 芳香族環に結合した求電子基を有する式（Ｉ）の特定の化合物は、相当するヒ
ドリド化合物と求電子試薬との反応によって製造しうる。 例えば、発煙硫酸のような標準試薬および方法を用いる芳香族環のスルホニル
化では、相当するスルホン酸が得られる。これはその後、本技術分野で公知の方
法、例えばまず酸ハロゲン化物に変換し、その後、アミンと反応させることによ
って、相当するスルホンアミドに変換してもよい。

【１５０９】 本発明の特定の物質は、本技術分野で周知の方法、例えば以下の特定の製造に
記載の方法による、例えば芳香族環に結合したブロモ置換基を含む化合物と、例
えばボロン酸誘導体、オレフィンまたはスズ誘導体との反応によるようなクロス
−カップリング技術によって製造することができる。

【１５１０】 求電子置換基を有する本発明の特定の物質は、ハロゲン／金属交換、次いで求
電子試薬との反応によって製造することができる。例えば、ブロモ置換基はｎ−
ブチルリチウムのようなリチウム化試薬、その後は求電子試薬、例えばＣＯ₂、
アルデヒドまたはケトンと反応して、各々酸またはアルコールを生じる。

【１５１１】 本発明の物質は、ここに記載の方法および実施例に記載の方法、または本技術
分野で公知の方法を用いてこれらを都合よく適合させた方法のいずれかを用いう
る。望ましい化合物を効率的に組み立てるために、ここに記載の変換合成法を様
々な順序で実施しうることは無論のことである。定められた目標化合物の合成の
ための最も効率的な反応順序について、熟練した化学者の判断および技能が発揮
される。実施例および製造 融点はガレンカンプ融点装置を使用して測定し、未補正である。核磁気共鳴デ
ータはVarian Unity 300 またはVarian Inova 400 分光計を用いて得て、テトラ
メチルシランからのppmで示す。質量スペクトルデータはFinnigan Mat. TSQ 700
0 または Fisons Instruments Trio 1000 で得た。示した理論および実測イオン
は最低質量の同位体組成物に関する。この項における「エーテル」とは、特に断
りがなければ、ジエチルエーテルと読み取るべきである。「Ph」はフェニル基を
表す。「Bn」はベンジル基を表す。「Me」はメチル基を表す。「TLC」は薄層ク
ロマトグラフィーを意味する。「RT」は室温を意味する。「EtOAc」は酢酸エチ
ルを意味する。他の省略形は本技術分野で標準的かつ周知のものである。命名法
はアドバンスド・ケミカル・ディベロップメント社から入手しうるIUPAC NamePr
oソフトウェアを用いて決めた。

【１５１２】実施例１：Ｎ″−（５−メチル−２−ピリジニル）グアニジン（Ｉ；Ｒ¹＝ＣＨ₃ ；Ｒ²＝Ｒ³＝Ｈ） トリフルオロ酢酸（２ml）を注意深くｔ−ブチルＮ−［ｔ−ブトキシカルボニ
ル）アミノ］［（５−メチル−２−ピリジニル）イミノ］メチルカルバメート（
１１１mg、０．３２mmol）に加え、溶液を室温で２時間撹拌し、トルエンで希釈
し、蒸発乾燥させた。固体を塩化メチレンと共沸させ、メタノールから再結晶し
て、Ｎ″−（５−メチル−２−ピリジニル）グアニジンのトリフルオロ酢酸塩を
クリーム色の固体（３２mg、０．１mmol）として得た。

【１５１３】

【化５０５】

【１５１４】 同じ方法で製造した式（Ｉ；Ｒ⁴がＮ＝Ｃ（ＮＨ₂）₂）の他の化合物を以下の
表１に挙げる。

【１５１５】

【表１７】

【１５１６】

【１５１７】

【１５１８】

【１５１９】

【１５２０】

【１５２１】

【１５２２】

【１５２３】

【１５２４】

【１５２５】

【１５２６】

【１５２７】

【１５２８】

【１５２９】実施例３６：３−（（Ｅ）−２−[５−クロロ−２−[（ジアミノメチレン）アミ ノ]−３−ピリジニル]エテニル）安息香酸（Ｉ；Ｒ¹ ＝Ｃｌ；Ｒ²＝Ｈ；Ｒ³＝Ｅ
−ＣＨ＝ＣＨ（３−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＯ₂Ｈ）） Ｎ″−５−クロロ−３−[（Ｅ）−２−（３−シアノフェニル)エテニル］−２
−ピリジニルグアニジン（８５mg、０．２mmol）を濃ＨＣｌ（１．５ml）および
酢酸（０．５ml）中で４８時間、加熱還流した。溶媒を真空除去し、残留物をト
ルエンと共に共沸乾燥して淡褐色固体を得た。これをジエチルエーテル中で粉砕
して、３−（（Ｅ）−２−[５−クロロ−２−［（ジアミノメチレン）アミノ］
−３−ピリジニル]エテニル）安息香酸をオフホワイト色の固体（６５mg、０．
２mmol）として得た。

【１５３０】

【化５０６】

【１５３１】製造１：ｔ−ブチル（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)
−２−プロペノエート ３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミン（C. W. Murtiashaw, R. Breit
enbach, S. W. Goldstein, S. L. Pezzullo, J. Quallich, R. Sarges, J. Org.
Chem., 1992, 57, 1930）（８．５６g、４１．４mmol）、ｔ−ブチルアクリレ
ート（１２ml、８２mmol）、トリ−ｏ−トリルホスフィン（２．９２g、９．６m
mol）および酢酸パラジウム（５４０mg、２．４mmol）のトリエチルアミン（１
３０ml）中の混合物を密閉ボンベ中で１５０℃に１０時間加熱した。反応混合物
を濾過し、残留物をＥｔＯＡｃで洗浄し、一緒にした濾液を蒸発させて暗褐色油
状物を得た。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７：３）を溶離剤として用いるシリカゲル
上でのカラムクロマトグラフィーによって精製し、その後ヘキサンから−７８℃
で結晶化させて、標題化合物を鮮黄色固体（４．７５g、１８．６mmol）として
得た。

【１５３２】

【化５０７】

【１５３３】製造２：（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−２−プロ
ペン酸 ｔ−ブチル（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−２−
プロペノエート（２g、７．８mmol）を、３mlのトリフルオロ酢酸中で周囲温度
にて１時間撹拌した。反応混合物をトルエンで希釈し、蒸発乾燥し、残留物をジ
エチルエーテル中で粉砕して、標題化合物を淡黄色固体（１．８９g、６．０mmo
l）として得た。

【１５３４】

【化５０８】

【１５３５】製造３：ｔ−ブチル３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)プロパノ
エート 室温のｔ−ブチル（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)
−２−プロペノエート（５００mg、２．０mmol）のエタノール（１０ml）中の溶
液に、硼水素化ナトリウム（３１７mg、８．４mmol）を分けて加え、混合物を１
６時間撹拌した。水を加えた後、エタノールを真空除去し、混合物をジエチルエ
ーテルで抽出した。エーテル性抽出物をＭｇＳＯ₄で乾燥し、蒸発乾燥させ、ヘ
キサン−ＥｔＯＡｃ（７：３）を溶離剤として用いるシリカゲル上でのカラムク
ロマトグラフィーによって精製して、ｔ−ブチル３−（２−アミノ−５−クロロ
−３−ピリジニル)プロパノエートを無色油状物（３４０mg、１．３mmol）を得た
。

【１５３６】

【化５０９】

【１５３７】製造４：（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−Ｎ−メチ
ル−２−プロペンアミド １−ヒドロキシベンゾトリアゾール・Ｈ₂Ｏ（１９６mg、１．４mmol）、メチ
ルアミン・ＨＣｌ（１１４mg、１．７mmol）、Hunigの塩基（１．５８ml、９．
１mmol）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・
ＨＣｌ（５５５mg、２．８mmol）および（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ
−３−ピリジニル)−２−プロペン酸・ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ（４３８mg、１．４mmol）
をＤＭＦ（５ml）中で一緒にし、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を水（５
０ml）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ml）で抽出し、一緒にした有機抽出物を飽
和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮して黄色固体を得た。ジエチル
エーテル中で粉砕して標題化合物（１９８mg、０．９mmol）を得た。

【１５３８】

【化５１０】

【１５３９】 製造５〜９の以下の化合物を同様に製造した：製造５：２−アミノ−Ｎ−ベンジルイソニコチンアミド 標題化合物は２−アミノイソニコチン酸（L. W. Deady, O. L. Korytsky, J.
E. Rowe, Aust. J. Chem., 1982, 35, 2025）およびベンジルアミンから製造し
た：

【１５４０】

【化５１１】

【１５４１】製造６：（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−Ｎ−ベン
ジル−２−プロペンアミド 標題化合物は（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−２
−プロペン酸およびベンジルアミンから黄色固体として製造した：

【１５４２】

【化５１２】

【１５４３】製造７：（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−１−（３
−ヒドロキシピペリジノ）−２−プロペン−１−オン 標題化合物は（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−２
−プロペン酸および３−ヒドロキシピペリジンから白色固体として製造した：

【１５４４】

【化５１３】

【１５４５】製造８：（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−Ｎ−ベン
ジル−Ｎ−メチル−２−プロペンアミド 標題化合物は、（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−
２−プロペン酸およびＮ−メチルベンジルアミンから、ジイソプロピルエーテル
からの結晶化後に、黄色固体として製造した：

【１５４６】

【化５１４】

【１５４７】製造９：（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−１−モル
ホリノ−２−プロペン−１−オン 標題化合物は、（Ｅ）−３−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−
２−プロペン酸およびモルホリンから、イソプロピルアルコールからの結晶化お
よびジイソプロピルエーテル中での粉砕後に、黄色固体として製造した：

【１５４８】

【化５１５】

【１５４９】製造１０：（Ｅ）−２−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル)−Ｎ−メ
チル−１−エテンスルホンアミド ３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミン（４１４mg、２mmol）、Ｎ−メ
チルエテンスルホンアミド（２６６mg、２．２mmol）およびトリエチルアミン（
５５５μl、４mmol）、酢酸パラジウム（１８mg、０．０８mmol）およびトリ−
ｏ−トリルホスフィン（５０mg、０．１６mmol）のＤＭＦ（０．５ml）中の混合
物をテフロン^TM加圧容器内で、３０秒間、マイクロ波処理し（全出力）、室温に
冷却し、さらに３０秒間照射した。冷却後、反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡ
ｃで抽出し、有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮して褐
色の半固体を得た。塩化メチレン−メタノール（９５：５）で溶離するシリカゲ
ル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製し、メタノールから結晶化して
、標題化合物（１３０mg、０．５mmol）を得た：

【１５５０】

【化５１６】

【１５５１】 製造１１〜１５の以下の化合物を同様に製造した：製造１１：５−クロロ−３−［（Ｅ）−２−フェニルエテニル］−２−ピリジン アミン 標題化合物は、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミンおよびスチレン
から製造した。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７０：３０）で溶離するシリカゲル上で
のカラムクロマトグラフィーによる精製で油状物を得た。これをヘキサンから結
晶化して、５−クロロ−３−［（Ｅ）−２−フェニルエテニル］−２−ピリジン
アミンを黄色固体として得た：

【１５５２】

【化５１７】

【１５５３】製造１２：５−クロロ−３−［（Ｅ）−２−（４−メトキシフェニル）エテニル ］−２−ピリジンアミン 標題化合物は、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミンおよび４−メト
キシスチレンから製造した。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）で溶離するシ
リカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによる精製で油状物を得た。これをヘ
キサンから結晶化して黄色固体を得た：

【１５５４】

【化５１８】

【１５５５】製造１３：５−クロロ−３−［（Ｅ）−２−（２−ピリジニル）エテニル］−２ −ピリジンアミン 標題化合物は、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミンおよび２−ビニ
ルピリジンから製造した。塩化メチレン−メタノール（９５：５）で溶離するシ
リカゲル上でのカラムクロマトグラフィーで精製し、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（７
０：３０〜５０：５０）を溶離剤として用いて繰り返して、黄色固体を得た：

【１５５６】

【化５１９】

【１５５７】製造１４：５−クロロ−３−［（Ｅ）−２−シクロヘキシルエテニル］−２−ピ リジンアミン 標題化合物は、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミンおよびビニルシ
クロヘキサンから製造した。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：２０）で溶離するシ
リカゲル上でのカラムクロマトグラフィーによる精製で淡黄色油状物を得た。分
析試料はヘキサンからの結晶化により製造した：

【１５５８】

【化５２０】

【１５５９】製造１５：３−［（Ｅ）−２−（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル）エ テニル］ベンゾニトリル 標題化合物は、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミンおよび３−シア
ノスチレンから製造した。粗製反応混合物の塩化メチレン抽出物を濃縮し、塩化
メチレン−メタノール（９８：２）で溶離するシリカゲル上でのカラムクロマト
グラフィーで精製して、望ましい生成物を黄色固体として得た：

【１５６０】

【化５２１】

【１５６１】製造１６：３−［（Ｅ）−２−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）エテ ニル］−５−クロロ−２−ピリジンアミン 標題化合物は、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミン（３１８mg、１
．５mmol）、［（Ｅ）−２−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）エテニ
ル］（トリブチル）スズ（２５０mg、１．７mmol）、（A. J. Bridges, A. Lee,
C. E. Schwatrz, M. J. Towle, B. A. Littlefield, Bioorg. Med. Chem., 199
3, 1, 403）、酢酸パラジウム（１９mg、０．０８mmol）およびトリ−ｏ−トリ
ルホスフィン（５０mg、０．１６mmol）のDMF（０．５ml）中の溶液をテフロン
加圧容器内で、２０秒間、マイクロ波処理し（全出力）、室温に冷却し、さらに
１分２０秒間マイクロ波加熱した。冷却後、反応混合物を水（２０ml）に注ぎ、
ＥｔＯＡｃ（３×２０ml）で抽出した。一緒にした抽出物を水（２×２０ml）で
洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ−ヘキサンからの再結晶で
標題化合物を褐色固体（１７０mg、０．６mmol）として得た：

【１５６２】

【化５２２】

【１５６３】製造１７：５−クロロ−３−（２−フェニルエチニル）−２−ピリジンアミン ３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミン（４１４mg、２．０mmol）、フ
ェニルアセチレン（２２５mg、２．２mmol）、塩化銅（Ｉ）（１６mg、０．１６
mmol）、トリエチルアミン（５５５μl、４．０mmol）およびジクロロビス（ト
リフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（３２mg、０．０５mmol）のＤＭＦ
（０．５ml）中の溶液をテフロン加圧容器内で、３０秒間、マイクロ波処理し（
全出力）、室温に冷却し、さらに３０秒間再加熱した。室温に冷却後、反応混合
物を水−ＥｔＯＡｃ間で分配し、有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で
乾燥し、濃縮した。塩化メチレン−メタノール（９９：１）で溶離するシリカゲ
ル上でのカラムクロマトグラフィーによって精製し、その後、ヘキサンから結晶
化して、標題化合物を黄色固体（１３０mg、０．６mmol）として得た：

【１５６４】

【化５２３】

【１５６５】製造１８：５−クロロ−３−フェノキシ−２−ピリジンアミン ３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリジンアミン（５２０mg、２．５mmol）、フ
ェノール（２．０g、２１．３mmol）、水酸化カリウム（フレーク、８５％、６
００mg、９．１mmol）および無水硫酸銅（ＩＩ）（１００mg、０．６mmol）、お
よびジメトキシエタン（２５０μl）を一緒に１４０℃で加熱し、冷却し、混合
物を水（５０ml）に注いだ。ＥｔＯＡｃ抽出物（５×１５ml）をセライトに通し
て濾過し、２N ＨＣｌ（４×１０ml）に抽出した。一緒にした水性抽出物をＮ
ａＯＨで塩基性にし、ＥｔＯＡｃ（３×２０ml）に再度抽出し、ＭｇＳＯ₄で乾
燥し、濃縮して褐色油状物（２３０mg）を得た。ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（８０：
２０）で溶離するシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーで精製して標題化
合物を白色固体（１３６mg、０．６mmol）として得た。分析試料はヘキサンから
の結晶化により製造した：

【１５６６】

【化５２４】

【１５６７】製造１９：３−（ベンジルオキシ）−５−クロロ−２−ピリジンアミン （この化合物は公知であり、様々なルートによる合成はJ. A. Bristol, I. Gr
oss, R. G. Lovey, Synthesis, 1981, 971に開示されている） 標題化合物は、製造１８の条件を用いて、３−ブロモ−５−クロロ−２−ピリ
ジンアミンおよびベンジルアルコールから製造した：

【１５６８】

【化５２５】

【１５６９】製造２０：２−［（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル）オキシ］−１− エタノール 標題化合物は、G. Mattern（Helv. Chimica Acta, 1977, 60, 2062）の方法に
より製造した：

【１５７０】

【化５２６】

【１５７１】製造２１：５−クロロ−３−（２−メトキシエトキシ）−２−ピリジンアミン 標題化合物は、G. Mattern（Helv. Chimica Acta, 1977, 60, 2062）の方法に
より製造した：

【１５７２】

【化５２７】

【１５７３】製造２２：２−［（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル）オキシ］−Ｎ− ベンジルアセトアミド 標題化合物は、P. Nedenskov, N. Clauson-Kaas, J. Lei, H. N. Heide, Ｇ.
Olsen および G. Jansen（Acta Chemica Scandinavica, 1969, 23, 1791）の方
法により、２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジノール（G. Mattern, Helv. Ch
imica Acta, 1977, 60, 2062）およびＮ−ベンジル−α−クロロアセトアミドか
ら製造した。赤味がかった暗黄色の固体であった：

【１５７４】

【化５２８】

【１５７５】製造２３：メチル３−［（２−アミノ−５−クロロ−３−ピリジニル）オキシ］ メチルベンゾエート 標題化合物は、製造２２の方法を用いて、２−アミノ−５−クロロ−３−ピリ
ジノールおよびメチル３−（ブロモメチル）ベンゾエートから製造して、黄褐色
固体を得た：

【１５７６】

【化５２９】

【１５７７】製造２４：５−クロロ−３−（フェノキシメチル）−２−ピリジンアミン 水素化ナトリウム（油中８０％、１２４mg、４．１mmol）を、フェノール（２
９０mg、３．１mmol）の無水ＴＨＦ（１５ml）中の溶液に分けて加えた。５−ク
ロロ−３−（クロロメチル）−２−ピリジンアミン・ＨＣｌ（R. Herbert, D. G. Wibberley, J. Chem. Soc. 1969, 1504）（３００mg、１．４mmol）を次に加
え、反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。ＴＨＦを真空除去した後、残留物を
ジエチルエーテルと１Ｎ ＮａＯＨとの間で分配した。水性相を取り出し、ジエ
チルエーテルで抽出し、一緒にした有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ₄
で乾燥し、濃縮して油状物を得た。これをヘキサン中で粉砕して、標題化合物を
白色固体（２６５mg、１．１mmol）として得た：

【１５７８】

【化５３０】

【１５７９】製造２５：（２−アミノ−３，５−ジクロロ−４−ピリジニル）メタノール ７５〜８０℃の濃ＨＣｌ（２２ml）中の（２−アミノ−４−ピリジニル）メタ
ノールの塩酸塩（J. B. Balkovec, M. J. Szymonifka, J. V. Heck, R. W. Ratc
liffe; J. Antibiotics, 1991, 44, 1172）（３．２g、２０mmol）に、過酸化水
素（１５％水性、１９．６ml）を３０分かけて加えた。８０℃でさらに３時間撹
拌した後、反応混合物を氷浴中で冷却し、得られた黄色固体を濾過により取り出
し、ジイソプロピルエーテルおよびジエチルエーテル中で粉砕して、標題化合物
を塩酸塩（３．３g、１４．３mmol）として得た：

【１５８０】

【化５３１】

【１５８１】製造２６：３，５−ジクロロ−４−（クロロメチル）−２−ピリジンアミン （２−アミノ−３，５−ジクロロ−４−ピリジニル）メタノール・ＨＣｌ（２
．２g、９．６mmol）を塩化チオニル（５ml）中で１６時間、室温にて撹拌した
。不均質混合物をトルエンで希釈し、白色固体を濾過により取り出し、ジエチル
エーテルで洗浄し、乾燥して、標題化合物を塩酸塩（２．２７g、９．２mmol）
として得た：

【１５８２】

【化５３２】

【１５８３】製造２７：３，５−ジクロロ−４−（フェノキシメチル）−２−ピリジンアミン フェノール（２５０mg、２．７mmol）および水素化ナトリウム（油中６０％
、１０６mg、２．７mmol）の乾燥ＴＨＦ（１５ml）中、室温での反応によって、
ナトリウムフェノキシドを製造した。溶媒を真空除去し、乾燥ＤＭＦ（１０ml）
に代え、３，５−ジクロロ−４−（クロロメチル）−２−ピリジンアミン（３０
０mg、１．２mmol）を加え、混合物を６０℃に２．５時間加熱した。室温に冷却
した後、反応混合物を水（１５ml）で希釈し、ジエチルエーテル（４×１５ml）
で抽出した。一緒にしたエーテル性抽出物を水および飽和ブラインで洗浄し、Ｍ
ｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮して固体を得た。これを塩化メチレンおよびヘキサンか
ら結晶化して、標題化合物を白色固体（２１９mg＋２回目に４５mg、１．０mmol
）として得た：

【１５８４】

【化５３３】

【１５８５】製造２８：Ｎ−［（２−アミノ−３，５−ジクロロ−４−ピリジニル）メチル］ −Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン ３，５−ジクロロ−４−（クロロメチル）−２−ピリジンアミン・ＨＣｌ（３
００mg、１．２mmol）をＮ−ベンジルメチルアミン（３ml）中で室温にて４８時
間撹拌し、その後、反応混合物を水で希釈して油状沈殿を得た。上澄みを除去し
、新しい水を加え、再び水性層を除去した。ヘキサン中で粉砕した後、固体を塩
化メチレンに溶解し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、最後に塩化メチレン−ヘキサンから
結晶化して、標題化合物をふわふわした白色固体（１９０mg、０．６mmol）とし
て得た：

【１５８６】

【化５３４】

【１５８７】製造２９：３，５−ジクロロ−４−（１−ピロリジニルメチル）−２−ピリジン アミン 標題化合物は、ピロリジンを用いて製造２８の方法で製造した。白色固体：

【１５８８】

【化５３５】

【１５８９】製造３０：ｔ−ブチルＮ−［（ｔ−ブトキシカルボニル)アミノ］［（５−メチ
ル−２−ピリジニル）イミノ］メチルカルバメート ０℃のトリエチルアミン（０．７７ml、５．５mmol）および２−アミノ−５−
ピコリン（２００mg、１．８mmol）の塩化メチレン（２０ml）中の溶液に、１，
３−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）−２−メチル−２−チオプソイド尿素（０
．５９g、２．０mmol）および塩化水銀（ＩＩ）（０．５５g、２．０mmol）を加
えた。反応混合物を室温で６４時間撹拌し、水銀残留物を濾過し、廃棄した。濾
液を、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（９５：５〜９０：１０）で溶離するシリカゲル上
でのカラムクロマトグラフィーにかけて、ｔ−ブチルＮ−［（ｔ−ブトキシカル
ボニル)アミノ］［（５−メチル−２−ピリジニル）イミノ］メチルカルバメー
ト化合物（１１１mg、０．３２mmol）を得た：

【１５９０】

【化５３６】

【１５９１】 同じ方法で製造した式（ＩＶ；ＰおよびＰ¹は共にＣＯ₂Ｂｕ^t）の他の化合物
を以下の表２に示す。

【１５９２】

【表１８】

【１５９３】

【１５９４】

【１５９５】

【１５９６】

【１５９７】

【１５９８】

【１５９９】

【１６００】

【１６０１】

【１６０２】

【１６０３】

【１６０４】

【１６０５】

【１６０６】

【１６０７】

【１６０８】

【１６０９】

【１６１０】ＰＣＳ１０３２２化合物 上に示したように、本発明で用いるのに適した阻害剤化合物（薬剤）は、ＧＢ
特許出願第９９１２９６１号(参照することによってここに記載されたものとす
る)、米国特許出願第６０／１６９５７８号(参照することによってここに記載さ
れたものとする)およびＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＩＢ００／００６６７(参照す
ることによってここに記載されたものとする)に開示されている。下記の教示が
本発明のさらなる記載および好ましい側面に関するものであるならば、これらの
さらなる記載および好ましい側面は、上記の記載および好ましい側面（すなわち
、ｉＵＰＡおよび／またはｉＭＭＰおよび成長因子を含むまたはｉＵＰＡおよび
ｉＭＭＰおよび任意の成長因子を含む医薬組成物（並びにそれらの使用））と関
連させて読むべきである。 製造８４： メチル４−［４−（４−[３−（２−［（ｔ−ブトキシカルボニル)アミノ］エ
トキシ）フェニル]−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル
］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート； メチル４−［４−（４−[３−（２−アミノエトキシ)フェニル]−３−メチル
フェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
−４−カルボキシレート； 製造６１： メチル４−［４−（４−[３−（２−オキシエトキシ)フェニル]−３−メチル
フェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
−４−カルボキシレート；および メチル４−［４−（４−[３−（２，２−ジエトキシエトキシ)フェニル]−３
−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ
−ピラン−４−カルボキシレート； ４−［４−（４−[６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル]−３
−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ
−ピラン−４−カルボン酸； メチル４−[［４−（４−[６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イ
ル]−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イル]スルホニル]−テトラヒド
ロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート； メチル４−［４−（４−[６−［２−ベンジルオキシ］エトキシピリジン−２
−イル]−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１
−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート；お
よび メチル４−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テ
トラヒドロピリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４
−カルボキシレート； Ｎ−ヒドロキシ４−[［４−（４−[６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン
−２−イル]−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル]テトラ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド； Ｎ−ヒドロキシ４−[［４−（４−[６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン
−２−イル]−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル]−ピペ
リジン−４−カルボキサミド； Ｎ−ヒドロキシ４−[［４−（４−[６−［２−アミノエトキシ］ピリジン−２
−イル]−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル]テトラヒド
ロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド； 並びにこれらの薬学的に許容される塩および溶媒和物。

【１６１１】 さらに、本技術分野における当業者にとって、式（Ｉ）で定義される化合物の
製造を可能にする、実施例および製造の項に含まれるここに記載の方法の変形法
および代替法、例えば、特定の結合形成基または官能基相互変換反応を様々な順
序で実施する方法は明らかであろう。

【１６１２】 いくつかの中間体および最終化合物の製造例を次の合成スキームで略述する。
ここで用いる略号は標準的かつ本技術分野における当業者に周知のものである。
これらのきまりきった変形ルートで、本発明の必要化合物の全てを得ることがで
きる。 ルート１（ピリジルアルコール）

【１６１３】

【化５３７】

【１６１４】 ｉ＝ＮａＨ（１．１当量）、ＨＯＣＨ₂ＣＨＲ¹¹´ＯＲ¹⁰（１当量）、トルエ
ン中、２〜５時間還流 ｉｉ＝ｎ−ＢｕＬｉ（１．１当量）、Ｂｕ₃ＳｎＣｌ（１．１当量）、ＴＨＦ
、−７０℃〜室温、またはＰｄ（ＰＰｈ₃）₄（０．０１〜０．０５当量）、［Ｓ
ｎＭｅ₃］₂（１．１当量）、ジオキサン、２〜５時間還流 ｉｉｉ＝ＢＳＡ（０．５当量）、ＭｅＣＯ₂ＣＨ₂ＳＯ₂Ｃｌ（１．２当量）、
ＴＨＦ、１８時間室温 ｉｖ＝ＭｅＳＯ₂Ｃｌ（１．２当量）、Ｅｔ₃Ｎ（１．４当量）、ＣＨ₂Ｃｌ₂、
１時間室温 ｖ＝Ｅｔ₃ＳｉＨ（３当量）、ＣＦ₃ＳＯ₃Ｈ（０．１当量）、ＴＦＡ：ＣＨ₂Ｃ
ｌ₂（１：１）、１〜２４時間室温 ｖｉ＝ＮａＨ（２当量）、Ｍｅ₂ＣＯ₃（４当量）、トルエン、２時間還流 Ｒ¹⁰−アルコール保護基、例えばベンジルまたはジオキサラン（ジオールの場
合） Ｒ¹¹´−Ｈまたは保護アルコール

【１６１５】

【化５３８】

【１６１６】 ｖｉｉ＝（ＶＢ）、（１．３当量）、Ｋ₂ＣＯ₃（３当量）、ＤＭＳＯ、１８〜
２４時間室温、またはＫＯｔＢｕ（２．５当量）、（ＶＡ）または（ＶＢ）（過
剰）、ＴＨＦ中、７２時間室温 ｖｉｉｉ＝なお結合しているＰｄ（ＰＰｈ₃）₄（０．０５当量）、スズ（１．
５当量）、トルエン、４〜２０時間還流、またはＰｄＣｌ₂（ＰＰｈ₃）₂（０．
０５当量）、、スズ（１．１当量）、ＴＨＦ、１７時間還流 ｉｘ＝ＮＨ₄ ⁺ＨＣＯ₃ ^-（過剰）、Ｐｄ（ＯＨ）₂／Ｃ、ＡｃＯＨ、ＭｅＯＨ、
２０時間還流、または１０％Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ中、３．３気圧
、室温、６〜１７時間（いずれの方法もベンジル基を脱保護する）、（２Ｎ Ｈ
Ｃｌ、ジオキサン（３：１）、室温、７５分間、ジオキサランの室温脱保護）、
またはＰｄ（ＯＨ）₂／Ｃ、ＮＨ₄ ⁺ＨＣＯ₃ ^-（過剰）、ＭｅＯＨ：ジオキサン（
２．５：１）中、２時間６０℃、 Ｒ¹¹＝Ｈまたは脱保護されたアルコール同様に Ｒ¹およびＲ²が一緒になってピペリジン基であるとき、

【１６１７】

【化５３９】

【１６１８】 ｘ＝ＮａＨ（３当量）、テトラ−ｎＢｕＮＨ₄Ｂｒ（１当量）、ＢｎＮ（ＣＨ₂ ＣＨ₂Ｃｌ）₂（０．９５当量）、ＮＭＰ、６時間６０℃、 ｘｉ＝Ｒ¹²がＭｅであるとき、ホルムアルデヒド（４当量）、Ｎａ（ＯＡｃ） ₃ ＢＨ（２当量）、ＣＨ₂Ｃｌ₂、室温で２０時間、 Ｒ¹²がＢｏｃであるとき、（Ｂｏｃ）₂Ｏ（１．０５当量）、Ｅｔ₃Ｎ（
１．１当量）、ＣＨ₂Ｃｌ₂、１時間室温、 ルート２（フェニルアルコール）

【１６１９】

【化５４０】

【１６２０】

【化５４１】

【１６２１】 ｘｉｉ＝ｎＢｕＬｉ（１．１当量）、Ｂ［ＯＣＨ（ＣＨ₃）₂］₃（１．５当量
）、ＴＨＦ、−７０℃〜室温 ｘｉｉｉ＝スズキカップリング−アリールボロン酸（１．２〜１．５当量）、
ＣｓＦ（２〜２．６当量）、Ｐ（ｏ−ｔｏｌ）₃（０．１当量）、Ｐｄ₂（ｄｂａ
）₂（０．００５当量）、ＤＭＥ、６〜５０時間還流 ｘｉｖ＝Ｅｔ₃ＳｉＨ（３当量）、ＴＦＡ：ＣＨ₂Ｃｌ₂（１：１）、２〜２４
時間室温 ｘｖ＝Ｒ／Ｓグリシドール（１当量）、Ｅｔ₃Ｎ（触媒性）、ＭｅＯＨ、２０
時間還流、またはミツノブ反応−ＤＥＡＤ（１．５当量）、ＰＰｈ₃（１．５当
量）、ＨＯＣＨ（Ｒ¹¹´）ＣＨ₂ＯＲ¹³´（１．５当量）、ＴＨＦ中、３時間室
温 Ｒ¹¹´はＨまたは任意に保護されたアルコール Ｒ¹³´は任意に保護されたアルコール 製造５０〜５１では、ｉｘに記載の条件を用いたＢｎ脱保護が必要である。代替ルート

【１６２２】

【化５４２】

【１６２３】 ｘｘｉｖ＝ｉ−ＮａＨ（２．２当量）、Ｍｅ₂ＣＯ₃（５当量）、トルエン、Ｍ
ｅＯＨ（触媒性）、９０℃、一晩、ｉｉ−Ｏ（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）₂（１．３当量
）、ＮＭＰ、９０℃、２０時間 ｘｘｖ＝グリニャール試薬（１．１当量）、ＴＨＦ、−７８℃〜室温、ほぼ１
時間 製造４８におけるＲ¹⁵´−任意に保護されたアルコールは、ｔ−ブチルエーテ
ルである 製造４８では、Ｒ¹⁵´−ＯＨ ルート３（フェニルアミノアルコール）

【１６２４】

【化５４３】

【１６２５】

【化５４４】

【１６２６】 Ｒ¹⁵が保護基、例えばベンジルであるとき、以下に示すように、脱保護の後に
、別の基、例えばＢｏｃを用いて保護してもよい。

【１６２７】

【化５４５】

【１６２８】 ｘｖｉ＝１Ｎ ＨＣｌ（１〜２．３当量）、アセトン：ジオキサン（１：１）
、２〜６時間７０℃、 ｘｖｉｉ＝還元性アミノ化−アミン（５．５当量）、Ｎａ（ＯＡｃ）₃ＢＨ（
３〜４当量）、ＣＨ₂Ｃｌ₂、室温、一晩 ｘｖｉｉｉ＝Ｐｄ（ＯＨ）₂／Ｃ、ＭｅＯＨ、５０psi、室温、１８時間 ｘｉｘ＝Ｒ¹⁶がＢｏｃであるとき、（Ｂｏｃ）₂Ｏ（１〜１．１当量）、Ｅｔ₃ Ｎ、ＤＭＡＰ（任意、触媒）、ＣＨ₂Ｃｌ₂、室温、３時間 ルート４（アミノアルキルフェニル）

【１６２９】

【化５４６】

【１６３０】 ルート５（複素環）

【１６３１】

【化５４７】

【１６３２】

【化５４８】

【１６３３】 ｘｘ＝イソ−ＰｒＳＯ₂Ｃｌ（１当量）、Ｅｔ₃Ｎ（１．１当量）、ＣＨ₂Ｃｌ₂ 、室温で３時間 ｘｘｉ＝ｎ−ＢｕＬｉ（１．１当量）、ＭｅＯＣＯＣｌ（１．２当量）、ＴＨ
Ｆ、−７８℃〜室温 ｘｘｉｉ＝２，６−ｔ−Ｂｕ−４−Ｍｅピリジン（２．５当量）、（ＣＦ₃Ｓ
Ｏ₂）₂Ｏ（２．５当量）、ＣＨ₂Ｃｌ₂、４℃から室温、５日間 ｘｘｉｉｉ＝Ｐｄ₂（ｄｂａ）₃（０．０２当量）、ビニルトリフレート（１．
１当量）、Ｐｈ₃Ａｓ（０．２１当量）、ＣｕＩ（０．１当量）、ＮＭＰ中、５
時間７５℃、チアゾール

【１６３４】

【化５４９】

【１６３５】 ルート６（シクロペンタンジオール）

【１６３６】

【化５５０】

【１６３７】 ｘｘｖｉ＝ＮａＨ（１．１当量）、テトラ−ｎＢｕＮＨ₄Ｂｒ（１当量）、Ｃ
ｌＣＨ₂ＣＨＣＨＣＨ₂Ｃｌ（１．１当量）、ＮＭＰ、３時間室温、次いでＮａＨ
（１．１当量）、２日間 ｘｘｖｉｉ＝ＮＭＯ（１．１当量）、ＯｓＯ₄（３mol％）、ジオキサン／水、
１８時間室温、または（ａ）ＡｇＯＡｃ（２．３当量）、ＡｃＯＨ、１８時間室
温、（ｂ）１Ｎ ＮａＯＨ、ジオキサン／水 ｘｘｖｉｉｉ＝２，２−ジメトキシプロパン（２当量）、ＴｓＯＨ（０．１当
量）、ＤＭＦ、４．５時間５０℃

【１６３８】実施例および製造 室温（ｒｔ）とは２０〜２５℃を意味する。フラッシュクロマトグラフィーと
は、シリカゲル（珪藻土６０、２３０〜４００メッシュ）上でのカラムクロマト
グラフィーを指す。融点は未補正である。¹Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル
はBruker AC300、Varian Unity Inova-300 またはVarian Unity Inova-400分光
計を用いて記録し、いずれの場合も提案した構造と一致した。特有の化学シフト
は、主要ピーク表示のための一般的な略号：例えばｓ，singlet；ｄ，doublet；
ｔ，triplet；ｑ，quartet；ｍ，multiplet；br，broad を用いて、テトラメチ
ルシランから低磁場にしたppmで示す。質量スペクトルはFinnigan Mat. TSQ 700
0 またはFisons Instruments Trio 1000質量分析計を使用して記録した。LRMSと
は、低分解性質量スペクトルを意味し、示した理論および実測イオンは最低質量
同位体組成物に関する。ヘキサンとは、ヘキサン（hplcグレード）の混合物、沸
点６５〜７０℃を指す。エーテルとはジエチルエーテルを指す。酢酸とは氷酢酸
を指す。１−ヒドロキシ−７−アザ−１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール（
ＨＯＡｔ）、Ｎ−[（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール[４，
５−ｂ]ピリジン−１−イルメチレン]−Ｎ−メチルメタンイミニウムヘキサフル
オロホスフェートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）および７−アザベンゾトリアゾール
−１−イルオキシトリス(ピロリジノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
（ＰｙＡＯＰ）は、PerSeptive Biosystems U.K. Ltd から購入した。「Ｍｅ」
はメチル、「Ｂｕ」はブチル、「Ｂｎ」はベンジルである。他の略号および用語
は標準化学慣行に関連させて用いる。

【１６３９】実施例１ Ｎ−ヒドロキシ２−［（４−[４−[６−（２−ヒドロキシエトキシ）ピリジン
−２−イル]−３−メチルフェニル]ピペリジン−１−イル）スルホニル］−２−
メチルプロパンアミド

【１６４０】

【化５５１】

【１６４１】 Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ml）を、製造７０からの酸（４３０mg、
０．９３mmol）のピリジン（５ml）中の溶液に加え、その後、クロロトリメチル
シラン（１３０μl、１．０３mmol）を加え、溶液を１．５時間撹拌した。１−
（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２１５mg
、１．１１mmol）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１３０mg、０
．９３mmol）を加え、反応混合物をさらに２時間撹拌した。ヒドロキシルアミン
塩酸塩（１９５mg、２．８mmol）を次に加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した
。反応混合物を２Ｎ塩酸でｐＨ１の酸性にし、１時間撹拌し、次いでｐＨを４に
再調整した。水（５０ml）を加え、得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空乾
燥した。この固体を、ジクロロメタン：メタノール：０．８８アンモニア（９０
：１０：１）を溶離剤として用いるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー
で精製して、標題化合物を白色固体（２２０mg、４９％）として得た。

【１６４２】

【化５５２】

【１６４３】実施例２ Ｎ−ヒドロキシ２−[［４−（４−[６−［２−（メトキシ）エトキシ］ピリジ
ン−２−イル]−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル]スルホニル]−２
−メチルプロパンアミド

【１６４４】

【化５５３】

【１６４５】 Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ´，Ｎ´−テト
ラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４２５mg、０．９５mmol）お
よびＮ−エチルジイソプロピルアミン（１５０μl、０．７０mmol）を、製造７
１からの酸（３００mg、０．６３mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０m
l）中の溶液に加え、溶液を室温で３０分間撹拌した。ヒドロキシルアミン塩酸
塩（１５８mg、１．９mmol）および追加のＮ−エチルジイソプロピルアミン（４
１０μl、１．９mmol）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物
を水（２０ml）、そしてｐＨ７緩衝液（２０ml）で希釈し、酢酸エチル（３×３
０ml）で抽出した。一緒にした有機抽出物をブライン（３×）、水（２×）で洗
浄し、次いで乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空蒸発させた。残留物をジイソ
プロピルエーテル中で粉砕して、標題化合物をオフホワイト色の固体（２２０mg
、７１％）として得た。

【１６４６】

【化５５４】

【１６４７】実施例３ Ｎ−ヒドロキシ４−[［４−（４−[６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン
−２−イル]−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル]スルホニル]テトラ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【１６４８】

【化５５５】

【１６４９】 クロロトリメチルシラン（２．１ml、１６．４６mmol）を、製造７２からの酸
（７．５５g、１４．９６mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５０ml）お
よびピリジン（１５０ml）中の溶液に加え、溶液を室温で窒素雰囲気下、１時間
撹拌した。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩
酸塩（３．４４mg、１７．９５mmol）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾト
リアゾール（２．０４ｇ、１４．９６mmol）を加え、さらに４５分間撹拌を続け
た。ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．１２mg、４４．８mmol）を次に加え、反応
混合物を室温で７２時間撹拌した。反応混合物を塩酸でｐＨ２の酸性にし、３０
分間撹拌し、次いで１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨを４に再調整した。混合物
を酢酸エチル（３×）で抽出し、一緒にした有機抽出物をブラインで洗浄し、乾
燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空蒸発させた。残留物を、酢酸エチルを溶離剤
として用いるシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーで精製し、メタノール
／酢酸エチルから再結晶して、標題化合物を白色固体（３．７５g、４８％）と
して得た。

【１６５０】

【化５５６】

【１６５１】 代替経路：塩化水素ガスを、製造例１３３からの tert−ブチルエーテル（３
．０ｇ，５．２２ｍｍｏｌ）の無水トリフルオロ酢酸（３０ｍｌ）およびジクロ
ロメタン（３０ｍｌ）中溶液中に１０分間通気後、室温で一晩撹拌した。窒素ガ
スをその反応混合物中に１時間通気後、その溶液がｐＨ６に達するまで２Ｎ Ｎ
ａＯＨ溶液を加えた。得られた沈澱を０℃まで冷却し、濾過し、冷水を用いて洗
浄した。得られた固体を熱酢酸エチル（５００ｍｌ）中に溶解させ、有機層を、
水（３ｘ２５０ｍｌ）およびブライン（２５２ｍｌ）を用いて洗浄後、乾燥させ
（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した。０℃まで一晩冷却すると、固体が
形成し、これを濾過し、冷酢酸エチルを用いて洗浄し、乾燥させた。標題化合物
をベージュ色固体（１．６ｇ，６０％）として得た。

【１６５２】 実施例４ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（４−｛６−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ
−１−プロポキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−
１−イル］スルホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【１６５３】

【化５５７】

【１６５４】 クロロトリメチルシラン（１６８μｌ，１．３２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタ
ン（６ｍｌ）中の製造例７３からの酸（３１８ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）および
ピリジン（２ｍｌ）の溶液に加え、その溶液を窒素雰囲気下において室温で１時
間撹拌した。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド
塩酸塩（１３８ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベン
ゾトリアゾール（９０ｍｇ，０．６６ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を更に１時間続け
た。ヒドロキシルアミン塩酸塩（１２４ｍｇ，１．８０ｍｍｏｌ）を加え、反応
を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、残留物をメタノール
中に溶解させ、塩酸（２Ｍ）を用いて溶液をｐＨ１まで酸性にした後、１０分間
撹拌した。その溶液を、水を用いて希釈し、ｐＨを６に調整し、得られた沈澱を
濾過し、乾燥させた。その固体を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに
より、ジクロロメタン：メタノール（９０：１０）を溶離剤として用いて精製し
、メタノール／ジイソプロピルエーテルから再結晶させて、標題化合物を白色固
体（２００ｍｇ，６０％）として生じた。

【１６５５】

【化５５８】

【１６５６】 実施例５ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（４−｛６−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ
−１−プロポキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−
１−イル］スルホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【１６５７】

【化５５９】

【１６５８】 標題化合物を、製造例７４の酸から、実施例４に記載の手順にしたがって製造
した。粗生成物を、酢酸エチルからの結晶化によって精製して、オフホワイト固
体（１８０ｍｇ，５８％）を生じた。

【１６５９】

【化５６０】

【１６６０】 実施例６ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジ
ン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−
ピペリジン−４−カルボキサミド二塩酸塩

【１６６１】

【化５６１】

【１６６２】 塩化水素ガスを、製造例８７からのヒドロキサム酸（１３５ｍｇ，０．２２ｍ
ｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）中氷冷溶液中に１０分間通気し、その溶液を
室温で撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、残留物をメタノールと一緒に
共沸させた。固体をメタノール／エーテルから再結晶させて、標題化合物を白色
固体（８８ｍｇ，６４％）として与えた。

【１６６３】

【化５６２】

【１６６４】 実施例７ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジ
ン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−
１−メチルピペリジン−４−カルボキサミド

【１６６５】

【化５６３】

【１６６６】 標題化合物を、製造例７５の酸およびヒドロキシルアミン塩酸塩から、実施例
１に記載されたのと同様の手順にしたがって製造した。反応混合物を、塩酸を用
いてｐＨ２まで酸性にし、この混合物を４５分間撹拌後、水酸化ナトリウム溶液
（２Ｎ）を用いてｐＨ８まで塩基性にした。この溶液を、酢酸エチル（３ｘ）を
用いて抽出し、合わせた有機抽出物を、水、次にブラインを用いて洗浄し、乾燥
させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を真空下において６
０℃で乾燥させて、標題化合物（３９ｍｇ，８％）を与えた。

【１６６７】

【化５６４】

【１６６８】 実施例８ Ｎ−ヒドロキシ２−［４−（４−｛３−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−
１−プロポキシ］フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルス
ルホニル］−２−メチルプロパンアミド

【１６６９】

【化５６５】

【１６７０】 標題化合物を、製造例７７の酸から、実施例３に記載されたのと同様の手順に
したがって製造した。粗生成物を、メタノール／ジイソプロピルエーテルから再
結晶させて、所望の生成物（７５ｍｇ，２４％）を白色固体として生じた。その
母液を真空中で蒸発させ、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ジ
クロロメタン：メタノール（９８：２〜９５：５）の溶離勾配を用いて精製して
、追加（３８ｍｇ，１２％）の所望の生成物を生じた。

【１６７１】

【化５６６】

【１６７２】 実施例９ Ｎ−ヒドロキシ４−｛４−［４−（３−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−
１−プロポキシ］フェニル）−３−メチルフェニル］−ピペリジン−１−イルス
ルホニル｝−テトラヒドロ−（２Ｈ）−ピラン−４−カルボキサミド

【１６７３】

【化５６７】

【１６７４】 クロロトリメチルシラン（４５μｌ，０．３７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン
（２ｍｌ）中の製造例７９の酸（９０ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）およびピリジン
（１ｍｌ）の溶液に加え、その溶液を窒素雰囲気下において室温で１時間撹拌し
た。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（
４０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾ
ール（２６ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を更に１時間続けた。次に、
ヒドロキシルアミン塩酸塩（３６ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温
で更に２時間撹拌した。反応混合物を、メタノール（５ｍｌ）を用いて希釈し、
塩酸を用いてｐＨ１まで酸性にし、混合物を１時間激しく撹拌した。その混合物
を、ジクロロメタン（３ｘ３０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を乾
燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、蒸発させた。残留物を、シリカゲル上のカラム
クロマトグラフィーにより、ジクロロメタン：メタノール（９０：１０）を溶離
剤として用いて精製して、標題化合物をオフホワイト固体（４０ｍｇ，４３％）
として与えた。

【１６７５】

【化５６８】

【１６７６】 実施例１０ Ｎ−ヒドロキシ４−｛４−［４−（３−｛（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２−ヒ
ドロキシメチル｝エトキシフェニル）−３−メチルフェニル］−ピペリジン−１
−イルスルホニル｝−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【１６７７】

【化５６９】

【１６７８】 標題化合物を、製造例８０の酸から、実施例９に記載されたのと同様の手順に
したがって製造した。粗生成物を、メタノール／ジイソプロピルエーテルを用い
て研和し、得られた沈澱を濾過し、乾燥させて、標題化合物を黄褐色固体（１５
８ｍｇ，４５％）として与えた。

【１６７９】

【化５７０】

【１６８０】 実施例１１ Ｎ−ヒドロキシ４−｛４−［４−（３−｛１，３−ジヒドロキシ−２−プロポ
キシフェニル）−３−メチルフェニル］−ピペリジン−１−イルスルホニル｝−
テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【１６８１】

【化５７１】

【１６８２】 標題化合物を、製造例７８の酸およびヒドロキシルアミン塩酸塩から、実施例
９に記載されたのと同様の手順を用いて、白色固体として得た（２５％）。

【１６８３】

【化５７２】

【１６８４】 実施例１２ Ｎ−ヒドロキシ２−｛［４−（４−｛３−［２−（メチルアミノ）エトキシ］
フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−２
−メチルプロパンアミド塩酸塩

【１６８５】

【化５７３】

【１６８６】 塩化水素を飽和したジクロロメタン（１２ｍｌ）を、製造例８８からのヒドロ
キサム酸（１２０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍｌ）中溶液に
加え、その反応を室温で４時間撹拌した。得られた沈澱を濾過後、ジクロロメタ
ン、エーテルを用いて洗浄した後、真空下において６０℃で乾燥させて、標題化
合物を固体（９０ｍｇ，８５％）として与えた。

【１６８７】

【化５７４】

【１６８８】 実施例１３ Ｎ−ヒドロキシ２−［４−（４−｛３−（２−アミノエトキシ）フェニル｝−
３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパ
ンアミド塩酸塩

【１６８９】

【化５７５】

【１６９０】 標題化合物を、製造例８９のヒドロキサム酸から、実施例１２に記載の手順に
したがって、固体として得た（７６％）。

【１６９１】

【化５７６】

【１６９２】 実施例１４ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（４−｛６−［２−アミノエトキシ］ピリジン−
２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝テトラ
ヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド塩酸塩

【１６９３】

【化５７７】

【１６９４】 塩化水素のジクロロメタン（２５０ｍｌ）中飽和溶液を、製造例９０のヒドロ
キサム酸（４．５ｇ，７．２８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍｌ）中溶液
に加え、その反応を室温で３と１／２時間撹拌した。混合物を氷浴中で冷却し、
得られた沈澱を濾去し、ジクロロメタン、次にエーテルを用いて洗浄した。次に
、固体を真空下において７０℃で乾燥させて、標題化合物（３．１ｇ，７７％）
を与えた。

【１６９５】

【化５７８】

【１６９６】 実施例１５ Ｎ−ヒドロキシ２−［４−（４−｛３−（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエトキ
シ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−
２−メチルプロパンアミド

【１６９７】

【化５７９】

【１６９８】 １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１
３０ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾ
ール（８０ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）を、製造例８３からの酸（２７０ｍｇ，０
．５５ｍｍｏｌ）のピリジン（６ｍｌ）およびジクロロメタン（６ｍｌ）中溶液
に窒素雰囲気下で加え、その懸濁液を３０分間撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（５ｍｌ）を加え、反応を５０℃まで加温して溶液を得た。ヒドロキシ
ルアミン塩酸塩（１１５ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で１８時
間撹拌した。反応混合物を、酢酸エチル（１００ｍｌ）とｐＨ７緩衝液（３０ｍ
ｌ）とに分配し、相を分離した。有機層を、水（２ｘ３０ｍｌ）、ブライン（３
０ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させ
た。残留物を、トルエン（ｘ３）および酢酸エチル（２ｘ）と一緒に共沸させ、
真空下において６０℃で乾燥させて、標題化合物を固体（１８０ｍｇ，６５％）
として与えた。

【１６９９】

【化５８０】

【１７００】 実施例１６ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（４−｛３−（メチル）アミノメチル｝−３−メ
チルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラ
ン−４−カルボキサミド塩酸塩

【１７０１】

【化５８１】

【１７０２】 塩化水素を飽和したジクロロメタンの溶液（２０ｍｌ）を、製造例９１のヒド
ロキサム酸（３４７ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）中
溶液に加え、その溶液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、
残留物を、熱メタノール／ジイソプロピルエーテルを用いて研和して、標題化合
物を白色固体（２０２ｍｇ，６４％）として生じた。

【１７０３】

【化５８２】

【１７０４】 実施例１７ Ｎ−ヒドロキシ４−｛［４−（３−メチル−４−｛３−［４−モルホリニルメ
チル］｝フェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−
ピラン−４−カルボキサミド

【１７０５】

【化５８３】

【１７０６】 １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２
６５ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾ
ール（１５７ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）を、製造例８６からの酸（６２５ｍｇ，
１．１５ｍｍｏｌ）のピリジン（６ｍｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
（６ｍｌ）中溶液に窒素雰囲気下で加え、その懸濁液を１時間撹拌した。ヒドロ
キシルアミン塩酸塩（２１０ｍｇ，３．４５ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で１
８時間撹拌した。反応混合物を、酢酸エチルとｐＨ７緩衝液とに分配し、相を分
離し、水性層を、酢酸エチルを用いて抽出した。合わせた有機溶液を、水、ブラ
インを用いて洗浄後、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した。粗
生成物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン：
メタノール（９５：５）を溶離剤として用いて精製し、酢酸エチルから再結晶さ
せて、所望の生成物を白色固体（３９８ｍｇ，６２％）として生じた。

【１７０７】

【化５８４】

【１７０８】 実施例１８ Ｎ−ヒドロキシ２−（｛４−［４−（３−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール−１−
イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−２−メチ
ルプロパンアミド

【１７０９】

【化５８５】

【１７１０】 １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１
２９ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾ
ール（７６ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）を、製造例１０３からの酸（２３５ｍｇ，
０．５６ｍｍｏｌ）のピリジン（１．５ｍｌ）およびジクロロメタン（３ｍｌ）
中溶液に窒素雰囲気下で加え、その懸濁液を３０分間撹拌した。ヒドロキシルア
ミン塩酸塩（７８ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で１８時間撹拌
した。反応混合物を、酢酸エチル（１００ｍｌ）中に注ぎ、ｐＨ７緩衝液（２ｘ
５０ｍｌ）を用いて洗浄後、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発さ
せた。残留する白色固体を、熱酢酸エチルから再結晶させて、標題化合物を白色
固体（１５６ｍｇ，６４％）として与えた。

【１７１１】

【化５８６】

【１７１２】 実施例１９ Ｎ−ヒドロキシ２−［（４−｛４−［３−（２−ヒドロキシエトキシ）−１Ｈ
−ピラゾール−１−イル］−３−メチルフェニル｝ピペリジン−１−イル）スル
ホニル］−２−メチルプロパンアミド

【１７１３】

【化５８７】

【１７１４】 ピリジン（６ｍｌ）を、製造例１０４からの酸（３２５ｍｇ，０．７２ｍｍｏ
ｌ）のジクロロメタン（６ｍｌ）中懸濁液に加え、その溶液に窒素をパージした
。クロロトリメチルシラン（８５８ｍｇ，０．７９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１
時間撹拌後、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（９８ｍｇ，０．７
２ｍｍｏｌ）を加え、続いて１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル
カルボジイミド塩酸塩（１６６．８ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）を加え、その溶液
を更に１時間撹拌した。次に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（１５０ｍｇ，２．１
６ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で１７時間撹拌した。その反応を酢酸エチルと
ｐＨ７緩衝液とに分配し、その混合物のｐＨを、塩酸（２Ｎ）を用いて注意深く
３に調整した。層を分離し、有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中
で蒸発させ、残留物を、エーテルを用いて研和した。得られた白色固体を濾過後
、酢酸（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）およびメタノール（１０ｍｌ）の溶液中に
溶解させ、この混合物を室温で４５分間撹拌した。その溶液をｐＨ７緩衝液（３
００ｍｌ）中に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ１００ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた
有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をト
ルエンおよび酢酸エチルと一緒に共沸させ、エーテルを用いて数回研和して、標
題化合物を白色固体（１４１ｍｇ，４２％）として生じた。

【１７１５】

【化５８８】

【１７１６】 実施例２０ Ｎ−ヒドロキシ２−メチル−２−（｛４−［３−メチル−４−（１，３−チア
ゾール−２−イル）フェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）プロパンア
ミド

【１７１７】

【化５８９】

【１７１８】 標題化合物を、製造例１０５の酸から、実施例１８に記載の手順にしたがって
製造した。粗生成物を、最少量のメタノールから結晶化して、所望の生成物を白
色固体（５８ｍｇ，３５％）として生じた。

【１７１９】

【化５９０】

【１７２０】 実施例２１ （１α，３α，４α）−Ｎ，３，４−トリヒドロキシ−１−［（４−｛４−［
６−（２−ヒドロキシエトキシ）ピリジン−２−イル］−３−メチルフェニル｝
ピペリジン−１−イル）スルホニル］シクロペンタンカルボキサミド

【１７２１】

【化５９１】

【１７２２】 塩化水素ガスを、製造例１２１からの tert−ブチルエーテル（２６０ｍｇ，
０．４１２ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）およびジクロロメタン（
１０ｍｌ）中溶液中に５分間通気し、その反応を周囲温度で５と１／２時間撹拌
した。反応混合物を真空中で蒸発させ、得られた油状物をトルエン（ｘ２）と一
緒に共沸させた後、酢酸エチル（５０ｍｌ）とｐＨ７リン酸緩衝液（４０ｍｌ）
とに分配した。有機層を分離し、水性層を、酢酸エチル（２ｘ５０ｍｌ）を用い
て抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で
蒸発させた。得られた固体は、若干の出発化合物を含有していて、これに、反応
条件を再度施した。周囲温度で５時間後、反応混合物中に窒素ガスを１５分間通
気した。次に、反応混合物を真空中で蒸発させ、得られた油状物をトルエン（ｘ
２）と一緒に共沸させた後、酢酸エチル（５０ｍｌ）とｐＨ７リン酸緩衝液（４
０ｍｌ）とに分配した。有機層を分離し、水性層を、酢酸エチル（２ｘ５０ｍｌ
）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、
真空中で蒸発させた。得られた固体を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィ
ーにより、ジクロロメタン：メタノール（９８：２〜９３：７）を溶離剤として
用いて精製した。標題化合物を白色固体（３０ｍｇ，１５％）として単離した。

【１７２３】

【化５９２】

【１７２４】 実施例２２ （１α，３α，４α）−１−（｛４−［４−（６−エトキシピリジン−２−イ
ル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−Ｎ，３，４
−トリヒドロキシシクロペンタンカルボキサミド

【１７２５】

【化５９３】

【１７２６】 ２Ｎ塩酸（２ｍｌ）を、製造例１２２からのジオキソランのジオキサン（２ｍ
ｌ）およびテトラヒドロフラン（２ｍｌ）中溶液に加え、その反応混合物を周囲
温度で１８時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、得られた固体を、ｐ
Ｈ７リン酸緩衝液（２０ｍｌ）と酢酸エチル（２０ｍｌ）とに分配した。水性層
を、酢酸エチル（２ｘ２０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥さ
せ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した。得られた固体を酢酸エチルから
再結晶させて、標題化合物を白色固体（９５ｍｇ，７０％）として与えた。

【１７２７】

【化５９４】

【１７２８】

【化５９５】

【１７２９】 実施例２３ （１α，３β，４β）−１−（｛４−［４−（６−エトキシピリジン−２−イ
ル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−Ｎ，３，４
−トリヒドロキシシクロペンタンカルボキサミド

【１７３０】

【化５９６】

【１７３１】 標題化合物を、製造例１２３のジオキソランから、実施例２２に記載されたの
と同様の手順で製造した。これにより、標題化合物を白色固体（５０ｍｇ，５５
％）として得た。

【１７３２】

【化５９７】

【１７３３】 実施例２４ （１α，３α，４α）−Ｎ，３，４−トリヒドロキシ−１−｛４−［４−（３
−メトキシフェニル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル
｝シクロペンタンカルボキサミド

【１７３４】

【化５９８】

【１７３５】 ２Ｎ塩酸（２ｍｌ）を、製造例１２４からのジオキソランのジオキサン（３ｍ
ｌ）およびテトラヒドロフラン（２ｍｌ）中溶液に加え、その反応混合物を周囲
温度で４時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発させ、得られた固体を水（２
０ｍｌ）と酢酸エチル（２０ｍｌ）とに分配した。水性層を、酢酸エチル（２ｘ
２０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾
過し、真空中で濃縮した。得られた固体を酢酸エチルから再結晶させて、標題化
合物を白色固体（６０ｍｇ，４６％）として与えた。

【１７３６】

【化５９９】

【１７３７】 実施例２５ （１α，３β，４β）−Ｎ，３，４−トリヒドロキシ−１−｛４−［４−（３
−メトキシフェニル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル
｝シクロペンタンカルボキサミド

【１７３８】

【化６００】

【１７３９】 標題化合物を、製造例１２５のジオキソランから、実施例２４に記載されたの
と同様の手順で製造した。これにより、標題化合物を白色固体（５５ｍｇ，５０
％）として得た。

【１７４０】

【化６０１】

【１７４１】 製造例１ ２−［２−（ベンジルオキシ）エトキシ］−６−ブロモピリジン

【１７４２】

【化６０２】

【１７４３】 水素化ナトリウム（９００ｍｇ，鉱油中６０％分散液，２２．５ｍｍｏｌ）を
、２−（ベンジルオキシ）エタノール（３．０ｇ，２０．０ｍｍｏｌ）のトルエ
ン（１００ｍｌ）中氷冷溶液に少量ずつ加え、その溶液を３０分間撹拌した。２
，６−ジブロモピリジン（４．７５ｇ，２０．０ｍｍｏｌ）を加え、反応を還流
下で２時間加熱した。冷却した混合物を、水（１００ｍｌ）を用いて希釈し、酢
酸エチル（３ｘ１００ｍｌ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ
（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させて、標題化合物を黄色油状物（定量
的）として生じた。

【１７４４】

【化６０３】

【１７４５】 製造例２ ２−ブロモ−６−｛［（４Ｒ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−
４−イル］メトキシ｝ピリジン

【１７４６】

【化６０４】

【１７４７】 水素化ナトリウム（１．６２ｇ，鉱油中６０％分散液，４０．５ｍｍｏｌ）を
、（Ｒ）−（−）−１，２−Ｏ−イソプロピリデングリセロール（４．８６ｇ，
３６．８ｍｍｏｌ）のトルエン（１００ｍｌ）中氷冷溶液に少量ずつ加え、添加
が完了したら、その溶液を室温まで暖め且つ３０分間撹拌した。２，６−ジブロ
モピリジン（８．７２ｇ，３６．８ｍｍｏｌ）を加え、反応を還流下で５時間加
熱した。冷却した混合物を、水を用いて希釈し、層を分離し、水性相を、エーテ
ルを用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、
真空中で蒸発させて、標題化合物を黄色油状物（定量的）として生じた。

【１７４８】

【化６０５】

【１７４９】 製造例３ ２−ブロモ−６−｛［（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−
４−イル］メトキシ｝ピリジン

【１７５０】

【化６０６】

【１７５１】 標題化合物を、（Ｓ）−（−）−１，２−Ｏ−イソプロピリデングリセロール
および２，６−ジブロモピリジンから、製造例２に記載の手順にしたがって、黄
色油状物（定量的）として得た。

【１７５２】

【化６０７】

【１７５３】 製造例４ ２−［２−（ベンジルオキシ）エトキシ］−６−（トリブチルスタニル）ピリ
ジン

【１７５４】

【化６０８】

【１７５５】 ｎ−ブチルリチウム（１３．８ｍｌ，ヘキサン中１．６Ｍ溶液，２２．０ｍｍ
ｏｌ）を、製造例１の臭化物（２０．０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍｌ）
中冷（−７８℃）溶液に、＜−７０℃の内部温度を維持するように滴加し、溶液
を２０分間撹拌した。塩化トリ−ｎ−ブチルスズ（６．０ｍｌ，２２．０ｍｍｏ
ｌ）を、＜−７０℃の温度を維持するように徐々に加えた後、反応を室温まで１
時間にわたって暖めた。その反応を、水を用いて希釈し、混合物を、Ｅｔ₂Ｏ（
２ｘ１００ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄
）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグ
ラフィーにより、ペンタン：Ｅｔ₂Ｏ（９８：２）を溶離剤として用いて精製し
て、標題化合物を無色油状物（７．０ｇ，６７％）として与えた。

【１７５６】

【化６０９】

【１７５７】 製造例５ ２−｛［（４Ｒ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル］メ
トキシ｝−６−（トリブチルスタニル）ピリジン

【１７５８】

【化６１０】

【１７５９】 標題化合物を、製造例２の臭化物から、製造例４に記載されたのと同様の手順
を用いて、油状物（定量的）として製造した。

【１７６０】

【化６１１】

【１７６１】 製造例６ ２−｛［（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル］メ
トキシ｝−６−（トリブチルスタニル）ピリジン

【１７６２】

【化６１２】

【１７６３】 標題化合物を、製造例３の臭化物から、製造例５に記載されたのと同様の手順
にしたがって、無色油状物（７１％）として得た。

【１７６４】

【化６１３】

【１７６５】 製造例７ ３−ブロモ−１−（tert−ブトキシ）ベンゼン

【１７６６】

【化６１４】

【１７６７】 縮合イソブチレン（１００ｍｌ）を、ドライアイス／アセトン指形冷却器を介
して、ジクロロメタン（７０ｍｌ）に−３０℃で加えた後、３−ブロモフェノー
ル（２１．５ｇ，１２５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍｌ）中溶液を加え
た。トリフルオロメタンスルホン酸（１．５ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）を滴加し、
反応を−７５℃まで冷却し、２時間撹拌した。次に、トリエチルアミン（１．４
ｍｌ，１０．０ｍｍｏｌ）を加え、その溶液を室温まで暖めた後、真空中で濃縮
してイソブチレンを除去した。残りの溶液を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎ
ａ₂ＳＯ₄）、濾過し、蒸発させて、所望の生成物を淡黄色油状物（３３ｇ，僅か
に不純）として生じた。

【１７６８】

【化６１５】

【１７６９】 製造例８ ３−（tert−ブトキシ）−フェニルホウ酸

【１７７０】

【化６１６】

【１７７１】 ｎ−ブチルリチウム（４０ｍｌ，ヘキサン中２．５Ｍ溶液，１００ｍｍｏｌ）
を、製造例７の臭化物（２３．９ｇ，９０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３
００ｍｌ）中冷（−７８℃）溶液に、−７０℃未満の温度を維持するように滴加
した。得られた溶液を１時間撹拌し、ホウ酸トリイソプロピル（３０．６ｍｌ，
１３５ｍｍｏｌ）を１０分間にわたって滴加した。その反応を室温まで暖め、エ
ーテル（１５０ｍｌ）を用いて希釈後、水酸化ナトリウム溶液（１Ｎ）を用いて
抽出した。合わせた水性層を、エーテルを用いて洗浄後、塩酸（２Ｎ）を用いて
ｐＨ２まで再度酸性にした。この水性混合物を、ジクロロメタン（３ｘ２００ｍ
ｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、
真空中で濃縮した。得られた白色固体を、ペンタン中で激しく撹拌し、濾過（２
回）後、真空下で乾燥させて、標題化合物を白色固体（１３．１ｇ，７５％）と
して生じた。

【１７７２】

【化６１７】

【１７７３】 製造例９ １−ブロモ−３−（２，２−ジエトキシエトキシ）ベンゼン

【１７７４】

【化６１８】

【１７７５】 炭酸カリウム（１．５ｇ，１０９ｍｍｏｌ）、３−ブロモフェノール（１．７
３ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）およびブロモアセトアルデヒドジエチルアセタール（
１．５ｍｌ，９．６７ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１０ｍｌ）中混合物
を、１６０℃で１と１／２時間加熱した。冷却した反応を、水（５０ｍｌ）と酢
酸エチル（１００ｍｌ）とに分配し、相を分離した。水性層を、酢酸エチル（５
０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機溶液を、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液、水
（２ｘ）、ブラインを逐次的に用いて洗浄後、乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し
、真空中で蒸発させた。残留物を、シリカゲル上の中圧カラムクロマトグラフィ
ーにより、エーテル：ペンタン（０：１００〜５：９５）の溶離勾配を用いて精
製して、標題化合物（２．０１ｇ，７２％）を与えた。

【１７７６】

【化６１９】

【１７７７】 製造例１０ ３−（２，２−ジエトキシエトキシ）フェニルホウ酸

【１７７８】

【化６２０】

【１７７９】 ｎ−ブチルリチウム（１８．５ｍｌ，ヘキサン中２．５Ｍ，４６．２５ｍｍｏ
ｌ）を、製造例９の臭化物（１１．４ｇ，３９．６ｍｍｏｌ）の無水テトラヒド
ロフラン（１００ｍｌ）中冷（−７８℃）溶液に、＜−７０℃の内部温度を維持
するように滴加した。この溶液を１時間撹拌後、ホウ酸トリイソプロピル（１．
１３ｇ，６．０ｍｍｏｌ）を徐々に加え、その反応を室温まで３時間にわたって
暖めた。混合物を氷浴中で冷却し、２Ｎ塩酸を用いてｐＨ４まで酸性にし、酢酸
エチル（２ｘ５００ｍｌ）を用いて速やかに抽出した。合わせた有機抽出物を、
水およびブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で
蒸発させた。残留する油状物を、シリカゲル上の中圧カラムクロマトグラフィー
により、エーテル：ペンタン（０：１００〜５０：５０）の溶離勾配を用いて精
製して、標題化合物（８．２４ｇ，８２％）を与えた。

【１７８０】

【化６２１】

【１７８１】 製造例１１ １−メチルスルホニルピペリジン−４−オンエチレンケタール

【１７８２】

【化６２２】

【１７８３】 メタンスルホニルクロリド（２４．８ｇ，０．２１７ｍｏｌ）を、４−ピペリ
ドンエチレンケタール（２８．２ｇ，０．１９７ｍｏｌ）およびトリエチルアミ
ン（３０．２ｍｌ，０．２１７ｍｏｌ）のエーテル（２８０ｍｌ）中溶液に滴加
し、その反応を室温で３時間撹拌した。混合物を、水（２ｘ）、塩酸（１Ｎ）お
よび飽和重炭酸ナトリウム溶液を逐次的に用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄
）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を、ヘキサンを用いて研和し、濾過し
、乾燥させて、所望の生成物をオフホワイト固体（４１．６ｇ，９５％）として
生じた。

【１７８４】

【化６２３】

【１７８５】 製造例１２ １−イソプロピルスルホニルピペリジン−４−オンエチレンケタール

【１７８６】

【化６２４】

【１７８７】 イソプロピルスルホニルクロリド（５．６ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）を、４−ピペ
リドンエチレンケタール（６．４ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン
（７．７ｍｌ，５５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍｌ）中氷冷溶液に滴
加し、その反応を室温で３時間撹拌した。混合物を、水（２ｘ）を用いて洗浄し
、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を、エーテル
／ペンタンから結晶化して、標題化合物を固体（１０．５５ｇ，８５％）として
与えた。

【１７８８】

【化６２５】

【１７８９】 製造例１３ ２−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニ
ル）酢酸メチル

【１７９０】

【化６２６】

【１７９１】 カリウム tert−ブトキシド（２４．６ｇ，２１９ｍｍｏｌ）を、製造例１１
のエチレンケタール（３２．３ｇ，１４６ｍｍｏｌ）および炭酸ジメチル（６１
ｍｌ，７３０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍｌ）中溶液に少量ずつ
加え、添加が完了したら、反応を窒素雰囲気下において室温で一晩撹拌した。そ
の反応を、塩酸（１Ｎ）およびエーテルの混合物中に注ぎ、層を分離した。水性
層を、酢酸エチルを用いて抽出し、合わせた有機溶液を、ブラインを用いて洗浄
し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を、ジイソ
プロピルエーテル中に懸濁させ、混合物を加熱して還流し、冷却し、濾過して、
標題化合物を固体（２６．７ｇ，６５％）として与えた。

【１７９２】

【化６２７】

【１７９３】 製造例１４ ２−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニ
ル）−２−メチルプロパン酸メチル

【１７９４】

【化６２８】

【１７９５】 ｎ−ブチルリチウム（２８ｍｌ，ヘキサン中１．６Ｍ，４４．１ｍｍｏｌ）を
、製造例１２のスルホンアミド（１０ｇ，４０．１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフ
ラン（１００ｍｌ）中冷（−７８℃）溶液に、−４５℃未満の温度を維持するよ
うに滴加した。添加が完了したら、溶液を０℃まで暖めた後、−７８℃まで再冷
却した。クロロギ酸メチル（３．７ｍｌ，４８．１ｍｍｏｌ）を、−４５℃未満
の温度を維持するように滴加し、その反応を３０分間撹拌後、室温まで暖めた。
反応混合物を酢酸エチルと水とに分配し、層を分離した。有機相を、水を用いて
洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物を、
エーテルを用いて研和して、標題化合物を固体（９．８８ｇ，８０％）として生
じた。

【１７９６】

【化６２９】

【１７９７】 製造例１５ ４−（１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デク−８−イルスルホニ
ル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１７９８】

【化６３０】

【１７９９】 水素化ナトリウム（８８０ｍｇ，鉱油中６０％分散液，２２ｍｍｏｌ）を、製
造例１１のスルホンアミド（２．２１ｇ，１０ｍｍｏｌ）および炭酸ジメチル（
４．２ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（４０ｍｌ）中溶液に加え、その混
合物を９０℃で９０分間加熱した。薄層クロマトグラフィー分析は、出発物質が
存在することを示したので、メタノール（２０？ｌ）を加え、反応を９０℃で一
晩撹拌した。１−メチル−２−ピロリジノン（１０ｍｌ）およびビス（２−ブロ
モエチル）エーテル（１．６３ｍｌ，１３ｍｍｏｌ）を加え、反応を９０℃で更
に２０時間、そして室温で３日間撹拌した。反応混合物を、１Ｎクエン酸溶液と
エーテルとに分配し、層を分離した。有機相を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（
ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を、エーテルを用いて研和
して、標題化合物を白色固体（１．０５ｇ，３０％）として生じた。

【１８００】 代替法 カリウム tert−ブトキシド（２２０ｍｌ，テトラヒドロフラン中１Ｍ，２２
０ｍｍｏｌ）を、製造例１３の酢酸塩（２７．９ｇ，１００ｍｍｏｌ）およびビ
ス（２−ブロモエチル）エーテル（１６．３ｍｌ，１３０ｍｍｏｌ）のテトラヒ
ドロフラン（２００ｍｌ）および１−メチル−２−ピロリジノン（２０ｍｌ）中
溶液に滴加し、反応を室温で一晩撹拌した。薄層クロマトグラフィー分析は、出
発物質が残留していることを示したので、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（３
．７ｇ，１０ｍｍｏｌ）および水素化ナトリウム（２．０ｇ，鉱油中６０％分散
液，５０ｍｍｏｌ）を加え、反応を更に７２時間撹拌した。追加の１−メチル−
２−ピロリジノン（１００ｍｌ）、水素化ナトリウム（４．０ｇ，鉱油中６０％
分散液，１００ｍｍｏｌ）およびビス（２−ブロモエチル）エーテル（１２．６
ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）を加え、反応を更に２４時間続けた。その反応を、エー
テルおよび１０％クエン酸溶液の混合物中に注ぎ、層を分離した。水性相を、エ
ーテルを用いて抽出し、合わせた有機溶液を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｍ
ｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物をエーテル中に懸濁させ、混
合物を加熱して還流し、冷却し、得られた沈澱を濾過し、エーテルを用いて洗浄
し、乾燥させて、標題化合物（７．２ｇ，２１％）を生じた。

【１８０１】

【化６３１】

【１８０２】 製造例１６ ４−（４−オキソピペリジン−１−イルスルホニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピ
ラン−４−カルボン酸メチル

【１８０３】

【化６３２】

【１８０４】 塩酸（２０ｍｌ，１Ｎ）を、製造例１５のエチレンケタール（７．１ｇ，２０
．３ｍｍｏｌ）のアセトン（２０ｍｌ）および１，４−ジオキサン（２０ｍｌ）
中溶液に加え、反応を６０℃で６時間撹拌後、室温で一晩放置した。その反応を
、重炭酸ナトリウムを少量ずつ加えることによって中和し、この混合物を真空中
で濃縮した。残留物を、水を用いて希釈後、酢酸エチル（３ｘ）を用いて抽出し
た。合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させ
た。粗生成物を、エーテル／ジイソプロピルエーテルを用いて研和して、所望の
生成物を固体（４．１ｇ，６６％）として与えた。

【１８０５】

【化６３３】

【１８０６】 製造例１７ ２−メチル−２−（４−オキソピペリジン−１−イルスルホニル）プロパン酸
メチル

【１８０７】

【化６３４】

【１８０８】 標題化合物を、製造例１６に記載されたのと同様の方法にしたがって、製造例
１４のエチレンケタールからペンタンを用いた研和後、固体（９８％）として得
た。

【１８０９】

【化６３５】

【１８１０】 製造例１８ ４−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン
−１−カルボン酸 tert−ブチル

【１８１１】

【化６３６】

【１８１２】 ｎ−ブチルリチウムのヘキサン中２．５Ｍ溶液（３８ｍｌ，９４ｍｍｏｌ）を
、２−ブロモ−５−ヨードトルエン（２８ｇ，９４ｍｍｏｌ）の無水エーテル（
５００ｍｌ）中撹拌混合物に、窒素下において約−７５℃で約１０分間にわたっ
て加えた。更に１５分後、４−オキソピペリジン−１−カルボン酸ｔ−ブチル（
１７ｇ，８５ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中溶液を、反応
温度が−６０℃未満で維持されるような速度で加えた。反応混合物を約−７５℃
で１時間撹拌し、０℃まで暖め、そして塩化アンモニウム水溶液を用いて急冷し
た。有機相を分離し、水を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真
空中で蒸発させた。残留物をペンタン中に溶解させ、０℃まで冷却して標題化合
物を晶出させ、これを濾過によって無色固体（２０．１ｇ，６４％）として集め
た。

【１８１３】

【化６３７】

【１８１４】 製造例１９ ４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピ
リジン

【１８１５】

【化６３８】

【１８１６】 トリフルオロ酢酸（１００ｍｌ）を、製造例１８の臭化物（２０ｇ，５４ｍｍ
ｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍｌ）中撹拌溶液に室温で加えた。更に１８時
間後、反応混合物を真空中で蒸発させ、残留物を、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液
を用いてｐＨ＞１２まで塩基性にした。得られた混合物を、エーテルを用いて抽
出し、合わせた抽出物を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し
、減圧下で蒸発させて、標題化合物を低融点固体（１３．６ｇ，１００％）とし
て生じた。

【１８１７】

【化６３９】

【１８１８】 代替法 ｐ−トルエンスルホン酸（１０．２７ｇ，５４ｍｍｏｌ）を、製造例１８の臭
化物（１０ｇ，２７ｍｍｏｌ）のトルエン（１３０ｍｌ）中撹拌溶液に室温で加
えた。そのゼラチン状混合物を、ディーン・スターク（Dean-Stark）装置中で加
熱して９０分間還流後、室温まで冷却して、濃厚白色沈澱を生じた。その混合物
を、２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いて塩基性にし、酢酸エチル（３ｘ）を用い
て抽出後、合わせた抽出物を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減
圧下で蒸発させて、標題化合物を低融点固体（６．８ｇ，１００％）として生じ
た。

【１８１９】 製造例２０ ４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１−メチルスルホニル−１，２，
３，６−テトラヒドロピリジン

【１８２０】

【化６４０】

【１８２１】 メタンスルホニルクロリド（１７．５ｍｌ，２２７ｍｍｏｌ）を、トリエチル
アミン（３４．４ｍｌ，２４７ｍｍｏｌ）および製造例１９のアミン（５１．８
ｇ，２０６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４００ｍｌ）中氷冷溶液に滴加した後
、その反応を室温で１時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー分析は、出発物質
が残留していることを示したので、追加のメタンスルホニルクロリド（１．７５
ｍｌ，２２．７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５ｍｌ，３５．９ｍｍｏｌ
）を加え、撹拌を更に１時間続けた。その反応を、塩酸（２００ｍｌ，２Ｎ）お
よび水（３００ｍｌ）を用いて希釈し、相を分離した。水性層を、ジクロロメタ
ン（２ｘ２５０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を、ブライン（２０
０ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した
。残留する固体を、イソプロピルエーテルを用いて研和し、濾過し、乾燥させて
、標題化合物を淡黄色固体（６５．１ｇ，９６％）として与えた。

【１８２２】

【化６４１】

【１８２３】 製造例２１ ２−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒ
ドロピリジン−１−イルスルホニル］酢酸メチル

【１８２４】

【化６４２】

【１８２５】 Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（０．９ｍｌ，４．０ｍｍｏ
ｌ）を、製造例１９のアミン（２．０ｇ，７．９ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロ
フラン（４０ｍｌ）中撹拌溶液に、窒素下において室温で加えた。クロロスルホ
ニル酢酸メチル（１．６４ｇ，９．５ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（１
５ｍｌ）中溶液を加え、反応混合物を室温で１８時間撹拌した。得られた混合物
を真空中で蒸発させ、酢酸エチルと重炭酸ナトリウム水溶液とに分配した。有機
層を分離し、水を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸
発させた。残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ジクロ
ロメタンを溶離剤として用いて精製後、ジイソプロピルエーテルから結晶化させ
て、標題化合物を無色固体（１．６５ｇ，５５％）として生じた。

【１８２６】

【化６４３】

【１８２７】 製造例２２ ２−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒ
ドロピリジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパン酸メチル

【１８２８】

【化６４４】

【１８２９】 ヨードメタン（２ｍｌ，３２．１ｍｍｏｌ）を、製造例２１の酢酸塩（５ｇ，
１２．９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（５．４ｇ，３９．１ｍｍｏｌ）の無水
ジメチルスルホキシド（５０ｍｌ）中撹拌混合物に、窒素下において室温で加え
た。２４時間後、反応混合物をエーテルと水とに分配し、分離し、有機層を、水
を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留
物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、ジエチルエーテル：ペンタン（４
０：６０〜１００：０）を溶離剤として用いて精製後、ジイソプロピルエーテル
から結晶化させて、標題化合物を無色固体（４．７ｇ，８７％）として生じた。

【１８３０】

【化６４５】

【１８３１】 製造例２３ ４−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒ
ドロピリジン−１−イルスルホニル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボ
ン酸メチル

【１８３２】

【化６４６】

【１８３３】 ビス−２−ヨードエチルエーテル（３．９ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）を、製造例
２１の酢酸塩（３．６ｇ，９．３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．８ｇ，２
７．８ｍｍｏｌ）の無水ジメチルスルホキシド（５０ｍｌ）中撹拌混合物に、窒
素下において室温で加えた。１８時間後、反応混合物をジエチルエーテルと水と
に分配し、分離し、有機層を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾
過し、真空中で蒸発させた。残留物を、フラッシュクロマトグラフィーにより、
ジクロロメタンおよびメタノール（９９：１）の混合物を溶離剤として用いて精
製後、ジイソプロピルエーテルから結晶化させて、標題化合物を無色固体（３．
４３ｇ，８０％）として生じた。

【１８３４】

【化６４７】

【１８３５】 製造例２４ ４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−１−（メチルスルホニル）ピペリ
ジン

【１８３６】

【化６４８】

【１８３７】 トリエチルシラン（４７．２ｍｌ，２９６ｍｍｏｌ）、次にトリフルオロメタ
ンスルホン酸（１．７３ｍｌ，１９．７ｍｍｏｌ）を、製造例２０のスルホンア
ミド（６５．０ｇ，１９７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３００ｍｌ）およびト
リフルオロ酢酸（３００ｍｌ）中溶液に加え、その反応を室温で１時間撹拌した
。薄層クロマトグラフィー分析は、出発物質が残留していることを示したので、
追加のトリエチルシラン（７５．２ｍｌ，４７１ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ
メタンスルホン酸（０．８６ｍｌ，９．８ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温で更に
２０時間撹拌した。その反応を真空中で濃縮し、残留物を飽和炭酸カリウム水溶
液中に注ぎ、その混合物を、ジクロロメタン（３ｘ６５０ｍｌ）を用いて抽出し
た。合わせた有機抽出物を、ブライン（５００ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥させ
（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、熱メタノール／ヘキ
サンを用いて研和し、濾過し、乾燥させて、標題化合物（５２．４３ｇ，８０％
）を黄褐色固体として生じた。

【１８３８】

【化６４９】

【１８３９】 製造例２５ ２−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホ
ニル］酢酸メチル

【１８４０】

【化６５０】

【１８４１】 水素化ナトリウム（１２．２ｇ，鉱油中６０％分散液，３０５ｍｍｏｌ）を、
製造例２４のスルホンアミド（５０．６１ｇ，１５２ｍｍｏｌ）および炭酸ジメ
チル（６３．８ｍｌ，７６０ｍｍｏｌ）のトルエン（６００ｍｌ）中溶液に加え
、その反応を還流下で１と１／２時間加熱した。その反応を、酢酸エチル（１０
００ｍｌ）と冷塩酸（６００ｍｌ，１Ｎ）とに分配し、層を分離した。水性層を
、酢酸エチル（５００ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出物を、ブライン
（３ｘ３００ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中
で濃縮した。残留物を、ヘキサンを用いて研和し、固体を濾過した。これを、ジ
イソプロピルエーテルから再結晶させ、真空中で乾燥させて、標題化合物を黄褐
色結晶（４０．９ｇ，６９％）として生じた。

【１８４２】

【化６５１】

【１８４３】 製造例２６ ２−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホ
ニル］−２−メチルプロパン酸メチル

【１８４４】

【化６５２】

【１８４５】 トリエチルシラン（１．４３ｍｌ，９．０ｍｍｏｌ）、次にトリフルオロメタ
ンスルホン酸（０．０２ｍｌ，０．３ｍｍｏｌ）を、製造例２２の１，２，３，
６−テトラヒドロピリジン（１．２５ｇ，３．０ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ
酢酸（１５ｍｌ）のジクロロメタン（１５ｍｌ）中溶液に加え、反応を室温で１
時間撹拌した。その反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を、ジクロロメタン（
２５ｍｌ）を用いて希釈後、酢酸エチル（１５０ｍｌ）と飽和重炭酸ナトリウム
溶液（１５０ｍｌ）とに分配し、層を分離した。水性相を、酢酸エチル（２ｘ３
５ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し
、真空中で蒸発させた。残留する固体を、ジイソプロピルエーテルを用いて研和
して、標題化合物を白色固体（９６３ｍｇ，７７％）として生じた。

【１８４６】

【化６５３】

【１８４７】 製造例２７ ４−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホ
ニル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１８４８】

【化６５４】

【１８４９】 水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散液，１．１６ｇ，２９．０ｍｍｏｌ）を
、製造例２５の酢酸塩（１０．１４ｇ，２６．０ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリ
ジノン（６０ｍｌ）中撹拌溶液に、窒素下において周囲温度で加えた。４５分後
、ビス−２−ブロモエチルエーテル（４．２６ｍｌ，３３．８ｍｍｏｌ）をその
撹拌混合物に加え、更に１５０分後、追加部分の水素化ナトリウム（鉱油中６０
％分散液；１．１６ｇ，２９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１８時間撹拌したまま
にした。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルと水とに分配した。有機層
を集め、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、減圧下で蒸発させ
た。残留物を酢酸エチルおよびジイソプロピルエーテルから結晶化して、標題化
合物を無色固体（７．３４ｇ，６１％）として生じた。濾液を蒸発させ、フラッ
シュクロマトグラフィーによりジクロロメタンを用いて溶離して精製し、そして
酢酸エチルおよびジイソプロピルエーテルから結晶化して、追加バッチの標題化
合物を無色固体（１．８６ｇ，１５％）として生じた。更に特性決定するために
、少量の試料を酢酸エチルから再結晶させた。

【１８５０】

【化６５５】

【１８５１】 代替経路：トリエチルシラン（５０ｍｌ，０．３０ｍｏｌ）を、製造例１３０
のカルビノール（６０ｇ，０．１２ｍｏｌ）のジクロロメタン（１５０ｍｌ）お
よびトリフルオロ酢酸（１５０ｍｌ）中溶液に、窒素下において０℃で２分間に
わたって滴加した。トリフル酸（triflic acid）（０．５３ｍｌ，６．０ｍｍｏ
ｌ）を１０分間にわたって滴加し、得られた混合物を０℃で４時間撹拌した。ジ
クロロメタン（３００ｍｌ）および脱イオン水（３００ｍｌ）を加え、水性相を
分離した。有機相を、水（２００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ２０
０ｍｌ）および脱イオン水（２００ｍｌ）を用いて洗浄後、真空中で濃縮して無
色固体とした。この固体を熱酢酸エチル（３００ｍｌ）中で２０分間スラリーに
し、混合物を０℃まで冷却後、濾過した。残留物を真空中で乾燥させて、標題化
合物を無色固体（５３ｇ，９２％）として残した。

【１８５２】 製造例２８ １−ベンジル−４−［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピペリジン−
１−イルスルホニル］−４−ピペリジンカルボン酸メチル

【１８５３】

【化６５６】

【１８５４】 製造例２５の酢酸塩（４．１７ｇ，１０．７ｍｍｏｌ）を、水素化ナトリウム
（９９４ｍｇ，鉱油中６０％分散液，３３．１ｍｍｏｌ）の１−メチル−２−ピ
ロリジノン（４０ｍｌ）中懸濁液に少量ずつ加え、得られた溶液を１時間撹拌し
た。臭化テトラブチルアンモニウム（３．４４ｇ，１０．７ｍｍｏｌ）およびＮ
−ベンジルビス−（２−クロロエチル）アミン（２．７３ｇ，１０．１ｍｍｏｌ
）を少量ずつ加え、添加が完了したら、反応を６０℃で６時間撹拌した。冷却し
た反応を水と酢酸エチルとに分配し、層を分離し、水性相を、酢酸エチルを用い
て抽出した。合わせた有機抽出物を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄ ）、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物を、シリカゲル上のカラムクロマトグ
ラフィーにより、ジクロロメタン：エーテル（１００：０〜９０：１０）の溶離
勾配を用いて精製して、標題化合物（３．０４ｇ，５２％）を与えた。

【１８５５】

【化６５７】

【１８５６】 製造例２９ ２−メチル−２−｛４−［トリフルオロメタンスルホニルオキシ］−１，２，
３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルスルホニル｝プロパン酸メチル

【１８５７】

【化６５８】

【１８５８】 ２，６−ジ−tert−ブチル−４−メチルピリジン（３．７ｇ，１８ｍｍｏｌ）
を、製造例１７のケトン（３．８ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５
０ｍｌ）中溶液に加えた後、その溶液を４℃まで冷却した。無水トリフルオロメ
タンスルホン酸（２．９５ｍｌ，１７．５ｍｍｏｌ）を滴加後、反応を室温で１
７時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー分析は、出発物質が残留していること
を示したので、追加の２，６−ジ−tert−ブチル−４−メチルピリジン（３．７
ｇ，１８ｍｍｏｌ）および無水トリフルオロメタンスルホン酸（２．７ｍｌ，１
６ｍｍｏｌ）を、その撹拌された反応に、引き続き４日間にわたって少量ずつ加
えた。次に、混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮し、残留物を、エーテルを用
いて研和した。得られた固体を濾去し、濾液を真空中で蒸発させた。粗生成物を
、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ヘキサン：酢酸エチル（９
１：９〜５０：５０）の溶離勾配を用いて精製して、標題化合物（４．２５ｇ，
７４％）を白色固体として与えた。

【１８５９】

【化６５９】

【１８６０】 製造例３０ ２−［４−（４−｛３−ホルミルフェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリ
ジン−１−イルスルホニル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチ
ル

【１８６１】

【化６６０】

【１８６２】 製造例２７の臭化物（４．０２ｇ，８．７３ｍｍｏｌ）、３−ホルミルフェニ
ルホウ酸（１．８３ｇ，１１．５６ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（３．４６ｇ，
２２．８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（４
３０ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）およびトリ（ｏ−トリル）ホスフィン（２８４ｍ
ｇ，０．９３ｍｍｏｌ）の１，２−ジメトキシエタン（７０ｍｌ）中混合物を、
還流下で６時間加熱した。冷却した反応を、水を用いて希釈し、混合物を、酢酸
エチル（３ｘ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインを用いて洗
浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を、シリカ
ゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、酢酸エチル：ヘキサン（２５：７５
〜４０：６０）の溶離勾配を用いて精製し、ジイソプロピルエーテルを用いて研
和して、標題化合物を固体（２．６９ｇ，６３％）として生じた。

【１８６３】

【化６６１】

【１８６４】 製造例３１ ２−［４−（４−｛６−［２−ベンジルオキシ］エトキシピリジン−２−イル
｝−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イル
スルホニル］−２−メチルプロパン酸メチル

【１８６５】

【化６６２】

【１８６６】 製造例４のスタナン（２．８ｇ，５．４ｍｍｏｌ）および製造例２２の臭化物
（１．５ｇ，３．６２ｍｍｏｌ）の混合物、およびトルエン（３５ｍｌ）中のテ
トラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２０５ｍｇ，０．１８
ｍｍｏｌ）を、還流下で一晩加熱した。冷却した混合物を真空中で蒸発させ、残
留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ペンタン：酢酸エチ
ル（７５：２５）を溶離剤として用いて精製して、標題化合物を無色油状物（１
．７ｇ，８３％）として与えた。

【１８６７】

【化６６３】

【１８６８】 製造例３２ ４−［４−（４−｛６−［２−ベンジルオキシ］エトキシピリジン−２−イル
｝−３−メチルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イル
スルホニル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１８６９】

【化６６４】

【１８７０】 製造例４のスタナン（１．７４ｇ，３．３６ｍｍｏｌ）および製造例２３の臭
化物（１．１ｇ，２．４ｍｍｏｌ）の混合物、およびトルエン（１６ｍｌ）中の
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１３８ｍｇ，０．１
４ｍｍｏｌ）を、還流下で４時間加熱した。冷却した混合物を、水を用いて希釈
し、その混合物を、エーテル（３ｘ）を用いて抽出した。合わせた有機抽出物を
、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、Arbocel（登録商標）を介
して濾過し、真空中で蒸発させた。残留する黄色油状物を、シリカゲル上のカラ
ムクロマトグラフィーにより、ペンタン：エーテル（５０：５０〜２５：７５）
の溶離勾配を用いて精製して、標題化合物を淡黄色油状物（１．１８ｇ，８１％
）として与えた。

【１８７１】

【化６６５】

【１８７２】 製造例３３ １−ベンジル−４−｛［４−（４−｛６−［２−ベンジルオキシエトキシ］ピ
リジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル
｝−ピペリジン−４−カルボン酸メチル

【１８７３】

【化６６６】

【１８７４】 製造例４のスタナン（４．０５ｇ，７．８ｍｍｏｌ）、次にトリス（トリフェ
ニルホスフィン）パラジウム（０）（４１０ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）を、製造
例２８の臭化物（３．９１ｇ，７．１ｍｍｏｌ）のトルエン（５０ｍｌ）中溶液
に加え、反応を脱気後、窒素雰囲気還流下で７時間加熱した。フッ化カリウム水
溶液（２０ｍｌ，２５％）を、その冷却した反応に加え、混合物を室温で２０分
間撹拌後、Arbocel（登録商標）を介して濾過した。濾液を、酢酸エチルを用い
て希釈し、ブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中
で蒸発させた。残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、酢
酸エチル：ヘキサン（４０：６０〜６０：４０）の溶離勾配を用いて２回精製し
て、所望の生成物を黄色結晶性固体（２．７７ｇ，５６％）として生じた。

【１８７５】

【化６６７】

【１８７６】 製造例３４ ２−［４−（４−｛３−［２，２−ジエトキシエトキシ］フェニル｝−３−メ
チルフェニル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルスルホニル
］−２−メチルプロパン酸メチル

【１８７７】

【化６６８】

【１８７８】 フッ化セシウム（１．８１ｇ，１１．９２ｍｍｏｌ）、トリ−ｏ−トリルホス
フィン（１８０ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）
ジパラジウム（０）（２８０ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）および製造例１０のホウ
酸（１．８３ｇ，７．２ｍｍｏｌ）および製造例２２の臭化物（２．５ｇ，６．
０ｍｍｏｌ）の１，２−ジメトキシエタン（６０ｍｌ）中混合物を、還流下で５
と１／２時間加熱した。冷却した反応混合物を水と酢酸エチルとに分配し、この
混合物を、Arbocel（登録商標）を介して濾過した。濾液を分離し、有機相を、
水、次にブラインを用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で
蒸発させた。残留する緑色油状物を、シリカゲル上の中圧カラムクロマトグラフ
ィーにより、ペンタン：酢酸エチル（１００：０〜８５：１５）の溶離勾配を用
いて精製して、標題化合物（３．０４ｇ，９３％）を与えた。

【１８７９】

【化６６９】

【１８８０】 製造例３５ ２−［（４−｛４−［６−（２−ヒドロキシエトキシ）ピリジン−２−イル］
−３−メチルフェニル｝−ピペリジン−１−イル）スルホニル］−２−メチルプ
ロパン酸メチル

【１８８１】

【化６７０】

【１８８２】 製造例３１のベンジルエーテル（１．７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）、ギ酸アンモニ
ウム（３．０ｇ，５０．０ｍｍｏｌ）、炭素上水酸化パラジウム（５００ｍｇ）
および酢酸（１０ｍｌ）のメタノール（３０ｍｌ）中混合物を、還流下で一晩加
熱した。追加のギ酸アンモニウム（１．５ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）および炭素上
水酸化パラジウム（１．５ｇ）を加え、反応を還流下で更に７２時間加熱した。
冷却した混合物を、Arbocel（登録商標）を介して濾過し、フィルターパッドを
、酢酸エチルを用いて充分に洗浄した。合わせた濾液を、飽和重炭酸ナトリウム
溶液を用いて中和し、相を分離し、水性層を、酢酸エチル（２ｘ１００ｍｌ）を
用いて抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空
中で蒸発させて、標題化合物を無色固体（１．２ｇ，８４％）として生じた。

【１８８３】

【化６７１】

【１８８４】 製造例３６ ４−｛［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル｝
−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イル］スルホニル｝テトラヒドロ−
２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１８８５】

【化６７２】

【１８８６】 標題化合物を、製造例３２のベンジルエーテルから９３％収率で、製造例３５
に記載されたのと同様の手順にしたがって製造した。

【１８８７】

【化６７３】

【１８８８】 製造例３７ ４−（｛４−［４−（６−｛［（４Ｒ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキ
ソラン−４−イル］メトキシ｝ピリジン−２−イル）−３−メチルフェニル］ピ
ペリジン−１−イル｝スルホニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン
酸メチル

【１８８９】

【化６７４】

【１８９０】 製造例５のスタナン（２．０ｇ，４．９７ｍｍｏｌ）および製造例２７の臭化
物（１．７６ｇ，３．８２ｍｍｏｌ）の混合物、およびトルエン（５０ｍｌ）中
のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２４２ｍｇ，０．
２１ｍｍｏｌ）を、還流下で７時間加熱した。冷却した混合物を減圧下で濃縮し
、残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、エーテル：ペン
タン（６６：３４〜３４：６６）の溶離勾配を用いて２回精製して、標題化合物
を白色固体（１．２９ｇ，５７％）として生じた。

【１８９１】

【化６７５】

【１８９２】 製造例３８ ４−（｛４−［４−（６−｛［（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキ
ソラン−４−イル］メトキシ｝ピリジン−２−イル）−３−メチルフェニル］ピ
ペリジン−１−イル｝スルホニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン
酸メチル

【１８９３】

【化６７６】

【１８９４】 標題化合物を、製造例６のスタナンおよび製造例２７の臭化物から、製造例３
７に記載されたのと同様の手順にしたがって、メタノールからの再結晶後、白色
固体（６５％）として得た。

【１８９５】

【化６７７】

【１８９６】 製造例３９ ４−｛［４−（４−｛６−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキ
シ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スル
ホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１８９７】

【化６７８】

【１８９８】 製造例３７のジオキソラン（７９９ｍｇ，１．３６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオ
キサン（１０ｍｌ）中溶液を、塩酸（３０ｍｌ，２Ｎ）の氷冷溶液に加え、その
反応を７５分間撹拌した。その溶液を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２００ｍｌ
）中に注ぎ、得られた沈澱を濾過し、乾燥させた。固体を酢酸エチル／ジイソプ
ロピルエーテルから再結晶させて、所望の生成物を白色粉末（６４２ｍｇ，８６
％）として与えた。

【１８９９】

【化６７９】

【１９００】 製造例４０ ４−｛［４−（４−｛６−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキ
シ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スル
ホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１９０１】

【化６８０】

【１９０２】 標題化合物を、製造例３８のジオキソランから、製造例３９に記載の手順にし
たがって、白色結晶性固体（８６％）として得た。

【１９０３】

【化６８１】

【１９０４】 製造例４１ ４−｛［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル｝
−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−ピペリジン−４
−カルボン酸メチル

【１９０５】

【化６８２】

【１９０６】 製造例３３のベンジルピペリジン（３．３２ｇ，４．７６ｍｍｏｌ）、ギ酸ア
ンモニウム（３．０ｇ，４７．６ｍｍｏｌ）および炭素上水酸化パラジウム（３
．３２ｇ）の酢酸：メタノール：テトラヒドロフラン溶液（２：２：１，３０ｍ
ｌ）中混合物を、還流下で２時間加熱した。冷却した反応を、テトラヒドロフラ
ンを用いて充分に洗浄しながら Arbocel（登録商標）を介して濾過し、濾液を真
空中で濃縮した。残留物を水と酢酸エチルとに分配し、層を分離した。有機相を
乾燥させ（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物を、シリカゲ
ル上のカラムクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン：メタノール（９０：
１０〜８５：１５）の溶離勾配を用いて精製して、標題化合物（１．２８ｇ，５
２％）を与えた。

【１９０７】

【化６８３】

【１９０８】 製造例４２ ４−｛［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル｝
−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−１−メチルピペ
リジン−４−カルボン酸メチル

【１９０９】

【化６８４】

【１９１０】 ホルムアルデヒド（０．４９ｍｌ，水中３７重量％，４．９ｍｍｏｌ）を、製
造例４１のピペリジン（６３４ｍｇ，１．２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３
０ｍｌ）中溶液に加え、その溶液を室温で３０分間激しく撹拌した。水素化トリ
アセトキシホウ素ナトリウム（５１９ｍｇ，２．４５ｍｍｏｌ）を加え、反応を
室温で２０時間撹拌した。その反応を、水を用いて洗浄し、乾燥させ（Ｎａ₂Ｓ
Ｏ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物を、シリカゲル上のカラムクロ
マトグラフィーにより、ジクロロメタン：メタノール（９５：５）を溶離剤とし
て用いて精製して、標題化合物（５５９ｍｇ，８６％）を生じた。

【１９１１】

【化６８５】

【１９１２】 製造例４３ １−（tert−ブトキシカルボニル）−４−｛［４−（４−｛６−［２−ヒドロ
キシエトキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−
イル］スルホニル｝−４−ピペリジンカルボン酸メチル

【１９１３】

【化６８６】

【１９１４】 トリエチルアミン（１７５μｌ，１．２６ｍｍｏｌ）を、製造例４１のアミン
（５９４ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍｌ）中溶液に加
えた後、ジ炭酸ジ−tert−ブチル（２６２ｍｇ，１．２０ｍｍｏｌ）を少量ずつ
加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌後、真空中で濃縮して２０ｍｌの容量と
した。その溶液を、エーテル（１５０ｍｌ）を用いて希釈し、塩酸（０．５Ｎ）
、ブラインを用いて洗浄後、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発さ
せた。残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ジクロロメ
タン：メタノール（９５：５）を溶離剤として用いて精製して、標題化合物（６
５３ｍｇ，９２％）を白色泡状物として生じた。

【１９１５】

【化６８７】

【１９１６】 製造例４４ ２−［４−（４−｛３−tert−ブトキシフェニル｝−３−メチルフェニル）−
ピペリジン−１−イルスルホニル］酢酸メチル

【１９１７】

【化６８８】

【１９１８】 窒素ガスを、フッ化セシウム（３．７１ｇ，２４．４４ｍｍｏｌ）、トリ−ｏ
−トリルホスフィン（３４ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデン
アセトン）ジパラジウム（０）（５０ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、製造例２５の
臭化物（４．２７ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）および製造例８のホウ酸（３．２ｇ，
１６．５ｍｍｏｌ）の無水１，２−ジメトキシエタン（４０ｍｌ）中混合物中に
通気した。次に、その反応を窒素雰囲気下において９０℃で５０時間加熱した。
冷却した反応混合物を、酢酸エチルを用いて希釈し、その混合物を、水を用いて
洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で濃縮した。残留物を、シリ
カゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ヘキサン：酢酸エチル（９５：５
〜５０：５０）の溶離勾配を用いて精製して、標題化合物を油状物として生じ、
これを放置して結晶化させた（３．１５ｇ，６２％）。

【１９１９】

【化６８９】

【１９２０】 製造例４５ ２−［４−（４−｛３−tert−ブトキシフェニル｝−３−メチルフェニル）−
ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパン酸メチル

【１９２１】

【化６９０】

【１９２２】 カリウム tert−ブトキシド（１３．６３ｍｌ，テトラヒドロフラン中１Ｍ，
１３．６３ｍｍｏｌ）を、製造例４４の酢酸塩（２．５ｇ，５．４５ｍｍｏｌ）
およびヨウ化メチル（３．４ｍｌ，５４．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン中
溶液に滴加し、添加が完了したら、反応を室温で７２時間撹拌した。その混合物
を酢酸エチルと水とに分配し、層を分離した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）
、濾過し、真空中で蒸発させて、粗製標題化合物を生じ、これを更に精製するこ
となく用いた（３．１ｇ）。

【１９２３】

【化６９１】

【１９２４】 製造例４６ ４−［４−（４−｛３−tert−ブトキシフェニル｝−３−メチルフェニル）−
ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボ
ン酸メチル

【１９２５】

【化６９２】

【１９２６】 窒素ガスを、フッ化セシウム（２．１９ｇ，１４．４３ｍｍｏｌ）、トリ−ｏ
−トリルホスフィン（２０ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデ
ンアセトン）ジパラジウム（０）（３０ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）および製造
例２７の臭化物（２．９ｇ，６．５ｍｍｏｌ）および製造例８のホウ酸（１．７
８ｇ，９．７５ｍｍｏｌ）の無水１，２−ジメトキシエタン（４０ｍｌ）中混合
物中に通気した。次に、その反応を窒素雰囲気下の還流下で２４時間加熱した。
冷却した反応を酢酸エチルと水とに分配し、有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、
濾過し、真空中で濃縮した。残留物を、ジイソプロピルエーテルを用いて研和し
、固体を濾過し、真空下で乾燥させて、所望の生成物をクリーム色固体（２．０
ｇ，５８％）として生じた。濾液を真空中で濃縮し、残留する油状物を、シリカ
ゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ヘキサン：ジクロロメタン：メタノ
ール（５０：５０：０〜０：１００：０〜０：９９：１）の溶離勾配を用いて精
製して、追加（６３０ｍｇ，１８％）の標題化合物を与えた。

【１９２７】

【化６９３】

【１９２８】 製造例４７ ２−［４−（４−｛３−ヒドロキシフェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペ
リジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパン酸メチル

【１９２９】

【化６９４】

【１９３０】 トリフルオロ酢酸（２５ｍｌ）を、製造例４５の tert−ブトキシエーテル（
４．８ｇ，９．８０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍｌ）中溶液に加え、そ
の溶液を４時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を、シリカゲル
上のカラムクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン：メタノール（１０：０
〜９５：５）の溶離勾配を用いて２回精製して、所望の生成物（５３６ｍｇ，１
３％）を生じた。

【１９３１】

【化６９５】

【１９３２】 製造例４８ ４−［４−（４−｛３−ヒドロキシフェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペ
リジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸
メチル

【１９３３】

【化６９６】

【１９３４】 トリエチルシラン（２ｍｌ，１３．０５ｍｍｏｌ）、次にトリフルオロ酢酸（
５ｍｌ）を、製造例４６の tert−ブチルエーテル（２．３ｇ，４．３５ｍｍｏ
ｌ）のジクロロメタン（５ｍｌ）中氷冷溶液に加え、その反応を２時間撹拌した
。混合物を真空中で濃縮し、残留物をトルエンと一緒に共沸させた。得られた泡
状物を、ジイソプロピルエーテルを用いて研和し、濾過し、乾燥させて、標題化
合物を固体（１．９４ｇ，９４％）として与えた。

【１９３５】 代替法 酢酸パラジウム（II）（３００ｍｇ，１．３４ｍｍｏｌ）およびトリフェニル
ホスフィン（７０８ｍｇ，２．７０ｍｍｏｌ）を、アセトン（９０ｍｌ）中に懸
濁させ、２分間音波処理した。次に、その懸濁液を、５−ブロモ−２−ヨードト
ルエン（７．９ｇ，２７ｍｍｏｌ）、製造例８のホウ酸（５．７ｇ，２９．４ｍ
ｍｏｌ）の水性炭酸ナトリウム（４２ｍｌ，２Ｎ）中混合物に加えた。その反応
混合物を還流下で２時間加熱後、冷却し、水（３００ｍｌ）を用いて希釈した。
この混合物を、エーテル（２ｘ２５０ｍｌ）を用いて抽出し、合わせた有機抽出
物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発させた。残留物を、シリカ
ゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ヘキサン：エーテル（９９：１）を
溶離剤として用いて精製して、３−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）フェニ
ル tert−ブチルエーテル７．９ｇを生じた。

【１９３６】 この中間体エーテル（４８０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（
２ｍｌ）中溶液、次にヨウ素の結晶を、マグネシウム（４５ｍｇ，１．８ｍｍｏ
ｌ）に加え、その混合物を還流下で２時間加熱した。その溶液を、テトラヒドロ
フラン（３ｍｌ）を用いて希釈し、−７８℃まで冷却し、そして製造例１６のケ
トン（４２５ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１５ｍｌ）中溶液
を滴加した。その反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌後、室温まで暖めた。水
性塩化アンモニウムを加え、混合物を、酢酸エチル（２ｘ５０ｍｌ）を用いて抽
出し、合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濾過し、真空中で蒸発さ
せた。残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ペンタン：
酢酸エチル（５０：５０）を用いて精製して、４−［４−（４−｛３−tert−ブ
トキシフェニル｝−３−メチルフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン−１−イ
ルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチルを透明油
状物２８０ｍｇとして与えた。

【１９３７】 トリエチルシラン（０．５ｍｌ，３．１４ｍｍｏｌ）、次にトリフルオロ酢酸
（５ｍｌ）を、この中間体（３５０ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン
（５ｍｌ）中溶液に加え、その反応を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中
で濃縮し、残留物をトルエンと一緒に共沸させ、得られた固体を真空下で乾燥さ
せて、標題化合物（３００ｍｇ）を与えた。

【１９３８】

【化６９７】

【１９３９】 製造例４９ ２−［４−（４−｛３−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ］フェ
ニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−メチ
ルプロパン酸メチル

【１９４０】

【化６９８】

【１９４１】 製造例４７のアルコール（８００ｍｇ，１．８６ｍｍｏｌ）、Ｓ−グリシドー
ル（０．１２ｍｌ，１．８６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０μｌ，０
．０９ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）中混合物を、還流下で一晩加熱した
。薄層クロマトグラフィー分析は、出発物質が残っていることを示したので、そ
の混合物を少量まで濃縮し、還流下で更に４時間加熱した。冷却した反応を真空
中で蒸発させ、残留物を、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、ヘ
キサン：酢酸エチル（９１：９〜５０：５０）の溶離勾配を用いて精製した。所
望の生成物を油状物として得、これを真空下で乾燥させて白色泡状物を生じた（
３９１ｍｇ，４２％）。

【１９４２】

【化６９９】

【１９４３】 製造例５０ ４−［４−（４−｛３−［１，３−ジベンジルオキシ−２−プロポキシ］フェ
ニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒ
ドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸メチル

【１９４４】

【化７００】

【１９４５】 製造例４８のアルコール（３００ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）、アゾジカルボン
酸ジエチル（１５０μｌ，０．９５ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（２５
０ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）および１，３−ジベンジルオキシ−２−プロパノー
ル（２６０ｍｇ，０．９５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（６ｍｌ）中混合物
を、室温で３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー分析は、出発物質が残って
いることを示したので、追加の１，３−ジベンジルオキシ−２−プロパノール（
８０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（８０ｍｇ，０．３ｍｍ
ｏｌ）およびアゾジカルボン酸ジエチル（５０μｌ，０．３２ｍｍｏｌ）を加え
、撹拌を１時間続けた。その混合物を真空中で蒸発させ、残留物を、シリカゲル
上のカラムクロマトグラフィーにより、ペンタン：酢酸エチル（６６：３４）を
溶離剤として用いて精製して、標題化合物を無色油状物（４００ｍｇ，８７％）
として生じた。

【１９４６】

【化７０１】

【１９４７】 製造例５１ メチル４−［４−（４−｛３−［１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ］フェ
ニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒ
ドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート

【１９４８】

【化７０２】

【１９４９】 メタノール（４０ｍｌ）中の、製造例５０で得たジベンジルエーテル（７７０
ｍｇ，１．０６ｍｍｏｌ）と、ギ酸アンモニウム１．４ｇ，１１．０ｍｍｏｌ）
と、水酸化パラジウム担持炭素（４００ｍｇ）との混合物を還流下で２時間加熱
した。ＴＬＣ分析結果は若干の出発物質の残存を示したのでさらに水酸化パラジ
ウム（３００ｍｇ）を加えて、反応物を還流下で一夜間加熱した。冷却した混合
物をＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過して、濾液を真空蒸発させた。溶離液と
して酢酸エチル：ペンタン（８４：１６）を用い、シリカゲルを充填剤とするカ
ラムクロマトグラフィーにより該粗製物を精製して、標記化合物を白色発泡体（
３７５ｍｇ，６５％）として得た。

【１９５０】

【化７０３】

【１９５１】 製造例５２ メチル４−［４−（４−｛３−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ］
フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テト
ラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート

【１９５２】

【化７０４】

【１９５３】 製造例４９に記載したと同様の方法に従って、製造例４８で得た化合物及びＲ
−グリシドールから標記化合物（１７％）を得た。

【１９５４】

【化７０５】

【１９５５】 製造例５３ メチル４−［４−（４−｛３−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ］
フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テト
ラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート

【１９５６】

【化７０６】

【１９５７】 製造例４９に記載したと同様の方法に従い、製造例４８のアルコール及びＳ−
グリシドールから、ジイソプロピルエーテルからの再結晶後に、標記化合物を白
色固体（５２％）として得た。

【１９５８】

【化７０７】

【１９５９】 製造例５４ メチル２−［４−（４−｛３−（２，２−ジエトキシエトキシ）フェニル｝−３
−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパノ
エート

【１９６０】

【化７０８】

【１９６１】 製造例３４で得た１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（３．０ｇ，５．５
ｍｍｏｌ）とギ酸アンモニウム（１．０４ｇ，１６．５ｍｍｏｌ）をメタノール
（７０ｍｌ）および１，４−ジオキサン（２８ｍｌ）に溶解した液に、２０％水
酸化パラジウムを担持した炭素（２５０ｍｇ）を加えて、反応物を６０℃で２時
間撹拌した。さらにギ酸アンモニウム（１．０ｇ，１５．８ｍｍｏｌ）と水酸化
パラジウムを担持した炭素（２５０ｍｇ）を加えて、さらに２時間撹拌を続けた
。混合物を冷却して、Ａｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過し、フィルターパッド
をメタノールで十分に洗った。合わせた濾液を真空蒸発させて、残留物を水とエ
ーテルとの間に分配させた。層を分離させて、有機相を水および食塩水で洗い、
乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濾過し、真空蒸発させて、標記化合物を無色の油（２．
８ｇ，９３％）として得た。

【１９６２】

【化７０９】

【１９６３】 分析実測値：Ｃ，６３．４３；Ｈ，７．７５；Ｎ，２．４６。Ｃ₂₉Ｈ₄₁ＮＯ₇Ｓ
の理論値：Ｃ，６３．６０；Ｈ，７．５５；Ｎ，２．５６％。 製造例５５ メチル４−［４−（４−｛３−（２，２−ジエトキシエトキシ）フェニル｝−３
−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ
−ピラン−４−カルボキシレート

【１９６４】

【化７１０】

【１９６５】 無水１，２−ジメトキシエタン（７０ｍｌ）中の、フッ化セシウム（４．３ｇ
，２８．３ｍｍｏｌ）と、トリ−ｏ−トリルホスフィン（３５２ｍｇ，１．１５
ｍｍｏｌ）と、トリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（Ｏ）（５３５
ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）と、製造例１０で得たホウ酸（３．８９ｇ，１４．９
５ｍｍｏｌ）と、製造例２７で得たブロミド（５．０ｇ，１０．８６ｍｍｏｌ）
との混合物を還流下で４．５時間加熱した。冷却した反応混合物をその容積の半
分まで真空濃縮した後、水と酢酸エチルとの間に分配させた。層分離させて、水
相を酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機液をＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標
）で濾過した。濾液を食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して、真空
蒸発させた。残留緑色油をジクロロメタン：メタノール（１００：０→９７：３
）の溶離勾配を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーで２
回精製した後、ジイソプロピルエーテルで微粉化して、標記化合物を白色固体（
２．３８ｇ，３７％）として得た。

【１９６６】

【化７１１】

【１９６７】 製造例５６ メチル２−メチル−２−［４−（４−｛３−（２−オキソエトキシ）フェニル｝
−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］プロパノエート

【１９６８】

【化７１２】

【１９６９】 製造例５４で得たジエチルケタール（４．４３ｇ，８．１ｍｍｏｌ）をアセト
ン（１９ｍｌ）および１，４−ジオキサン（２２ｍｌ）に溶解した液に塩酸（１
９ｍｌ，１Ｎ，１９ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を７０℃で２時間撹拌した。冷
却した混合物を重炭酸ナトリウムを用いて中和し、真空濃縮して、残留物をエー
テルと水との間に分配させた。層分離させて、有機相を水、食塩水で洗った後乾
燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。残留物を酢酸エチルと共沸さ
せて標記化合物（定量的）を得た。

【１９７０】

【化７１３】

【１９７１】 製造例５７ メチル４−［４−（４−｛３−（２−オキソエトキシ）フェニル｝−３−メチル
フェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
−４−カルボキシレート

【１９７２】

【化７１４】

【１９７３】 製造例５６に記載した方法に従い、製造例５５で得たジエチルケタールから標
記化合物を白色発泡体（定量的）として得た。

【１９７４】

【化７１５】

【１９７５】 分析実測値：Ｃ，６１．７９；Ｈ，６．６６；Ｎ，２．４６。Ｃ₂₇Ｈ₃₃ＮＯ₇Ｓ
；０．２５ＣＨ₃ＣＯ₂Ｃ₂Ｈ₅；０．４Ｈ₂Ｏの理論値：Ｃ，６１．７２；Ｈ，６
．６２；Ｎ，２．５７％。

【１９７６】 製造例５８ メチル２−メチル−２−［４−（４−｛３−（２−メチルアミノエトキシ）フェ
ニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］プロパノエ
ート

【１９７７】

【化７１６】

【１９７８】 製造例５６で得たアルデヒド（１．０ｇ，２．１ｍｍｏｌ）とメチルアミン（
５．８ｍｌ，テトラヒドロフラン中２Ｎ，１１．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン
（５０ｍｌ）溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド（１．５ｇ，
７．０８ｍｍｏｌ）を１時間にわたり少量ずつ添加し、添加が完了するやいなや
、反応物を室温で一夜間撹拌した。この反応物を酢酸エチルと重炭酸ナトリウム
飽和溶液との間に分配させて層分離させた。有機相を水、食塩水で洗い、乾燥（
Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させて、無色の油を得た。これを、ジクロ
ロメタン：メタノール（１００：０→９０：１０）の溶離勾配を用い、シリカゲ
ルを充填剤とする中圧カラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物を
発泡体（６５０ｍｇ，６３％）として得た。

【１９７９】

【化７１７】

【１９８０】 分析実測値：Ｃ，５８．３９；Ｈ，６．９０；Ｎ，４．９７。Ｃ₂₆Ｈ₃₆Ｎ₂Ｏ₅Ｓ
；０．７５ＣＨ₂Ｃｌ₂の理論値：Ｃ，５８．１７；Ｈ，６．８４；Ｎ，５．０７
％。

【１９８１】 製造例５９ないし６３ 一般式：

【１９８２】

【化７１８】

【１９８３】 の化合物を、製造例５８に記載したと同様の方法に従って、対応するアルデヒド
とアミンから調製した。

【１９８４】

【表１９】

【１９８５】 １＝酢酸エチル／ジクロロメタン／ジ−イソプロピルエーテルから結晶化させて
精製した。 ２＝溶離液として酢酸エチル／ペンタン（７５：２５）を用い、シリカゲルを充
填剤とするカラムクロマトグラフィーにより精製した。

【１９８６】 製造例６４ メチル２−［４−（４−｛３−（２−［（Ｎ−第三級ブトキシカルボニル）（Ｎ
−メチル）アミノ］エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン
−１−イルスルホニル］−２−メチル−プロパノエート

【１９８７】

【化７１９】

【１９８８】 ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の、製造例５８で得た化合物（６４０ｍｇ，１
．３１ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（１８０μｌ，１．３０ｍｏｌ）と、ジ
第三級ブチルジカルボネート（２９０ｍｇ，１．３３ｍｍｏｌ）と、４−ジメチ
ルアミノピリジン（触媒）との混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物をジ
ジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈して、水、食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ
４）し、濾過して、真空蒸発させた。残留油を、ペンタン：ジクロロメタン：メ
タノール（１００：０：０→０：９９．５：０．５）の溶離勾配を用い、シリカ
ゲルを充填剤とするの中圧カラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合
物をガム（５９０ｍｇ，７７％）として得た。

【１９８９】

【化７２０】

【１９９０】 分析実測値：Ｃ，６０．５１；Ｈ，７．１９；Ｎ，４．４７。Ｃ₃₁Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₇Ｓ
；０．４ＣＨ₂Ｃｌ₂の理論値：Ｃ，６０．５６；Ｈ，７．２５；Ｎ，４．５０％
。

【１９９１】 製造例６５ メチル２−［４−（４−｛３−（２−アミノエトキシ）フェニル｝−３−メチル
フェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−メチル−プロパノエート

【１９９２】

【化７２１】

【１９９３】 メタノール（７５ｍｌ）中の、製造例６０で得たアミン（１．２ｇ，２．１２
ｍｍｏｌ）と２０％水酸化パラジウム担持炭素（２５０ｍｇ）との混合物を５０
ｐｓｉおよび室温において１８時間水素化した。反応混合物をＡｒｂｏｃｅｌ（
登録商標）で濾過して、フィルターパッドをメタノ−ルで十分に洗った。合わせ
た濾液を真空蒸発させて油を得た。これをジクロロメタン：メタノ−ル（１００
：０→９０：１０）の溶離勾配を用い、シリカゲルを充填剤とする中圧カラムク
ロマトグラフィーにより精製して標記化合物（６１０ｍｇ，６０％）を得た。

【１９９４】

【化７２２】

【１９９５】 分析実測値：Ｃ，６１．２６；Ｈ，７．０９；Ｎ，５．６３。Ｃ₂₅Ｈ₃₄Ｎ₂Ｏ₅Ｓ
；０．２５ジクロロメタンの理論値：Ｃ，６１．１６；Ｈ，７．０１；Ｎ，５．
６５％。

【１９９６】 製造例６６ メチル４−［４−（４−｛３−（２−アミノエトキシ）フェニル｝−３−メチル
フェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン
−４−カルボキシレート

【１９９７】

【化７２３】

【１９９８】 製造例６５に記載した方法に従って、製造例６１で得た化合物から標記化合物
を固体（６５％）として得た。

【１９９９】

【化７２４】

【２０００】 分析実測値：Ｃ，６２．３０；Ｈ，６．９８；Ｎ，５．４０。Ｃ₂₇Ｈ₃₆Ｎ₂Ｏ₆Ｓ
；０．０５ＣＨ₂Ｃｌ₂の理論値：Ｃ，６２．３７；Ｈ，６．９９；Ｎ，５．３８
％。

【２００１】 製造例６７ メチル２−［４−（４−｛３−（２−［（第三級ブトキシカルボニル）アミノ］
エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニ
ル］−２−メチル−プロパノエート

【２００２】

【化７２５】

【２００３】 製造例６４に記載したと同様の方法に従って、製造例６５で得たアミンから標
記化合物を白色発泡体（６９％）として得た。

【２００４】

【化７２６】

【２００５】 分析実測値：Ｃ，６２．４９；Ｈ，７．４６；Ｎ，４．７８。Ｃ₃₀Ｈ₄₂Ｎ₂Ｏ₇Ｓ
の理論値：Ｃ，６２．６９；Ｈ，７．３７；Ｎ，４．８７％。

【２００６】 製造例６８ メチル４−［４−（４−｛３−（２−［（第三級ブトキシカルボニル）アミノ］
エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニ
ル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート

【２００７】

【化７２７】

【２００８】 製造例６６で得たアミン（６５０ｍｇ，１．２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン
（１０ｍｌ）溶液にジ第三級ブチルジカルボネート（３００ｍｇ，１．３７ｍｍ
ｏｌ）を添加して、反応物を室温で１８時間撹拌した。この反応物をジクロロメ
タン（５０ｍｌ）で希釈した後、水（２×）、食塩水で洗ってから乾燥（Ｎａ２
ＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。残留物を、ジクロロメタン：メタノール
（９９．５：０．５→９９：１）の溶離勾配を用い、シリカゲルを充填剤とする
中圧カラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物を白色発泡体（７１
０ｍｇ，９１％）として得た。

【２００９】

【化７２８】

【２０１０】 分析実測値：Ｃ，６２．１５；Ｈ，７．２０；Ｎ，４．４７。Ｃ₃₂Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₈Ｓ
の理論値：Ｃ，６２．３２；Ｈ，７．１９；Ｎ，４．５４％。

【２０１１】 製造例６９ メチル４−［４−（４−｛３−（［Ｎ−第三級ブトキシカルボニル−Ｎ−メチル
アミノ］メチル）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルス
ルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート

【２０１２】

【化７２９】

【２０１３】 製造例６４に記載したと同様の方法を用いて、製造例６２で得たアミンから標
記化合物を調製した。この粗製物を、酢酸エチル：ペンタン（２５：７５→５０
：５０）の溶離勾配を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィ
ーにより精製してからジイソプロピルエーテルで微粉化して、標記化合物を白色
固体（７１４ｍｇ，６５％）として得た。

【２０１４】

【化７３０】

【２０１５】 分析実測値：Ｃ，６３．９２；Ｈ，７．３６；Ｎ，４．５７。Ｃ₃₂Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₇Ｓ
の理論値：Ｃ，６３．９８；Ｈ，７．３８；Ｎ，４．６６％。

【２０１６】 製造例７０ ２−［４−｛４−［６−（２−ヒドロキシエトキシ）ピリジン−２−イル］−３
−メチルフェニル｝−ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパン
酸

【２０１７】

【化７３１】

【２０１８】 メタノール（５０ｍｌ）中の、製造例３５で得たメチルエステル（４．１ｇ，
８．６ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水溶液（１７ｍｌ，１Ｎ，１７．０ｍｍｏ
ｌ）との混合物を還流下で３０分間加熱後冷却した。反応物を真空濃縮し、残留
物を水（２００ｍｌ）に溶解して、溶液をｐＨ４まで酸性にした。生じた沈殿を
濾過し、水洗し、真空乾燥し、酢酸エチルから再結晶させて、標記化合物を白色
固体（３．１５ｇ，７９％）として得た。

【２０１９】

【化７３２】

【２０２０】 分析実測値：Ｃ，５８．３５；Ｈ，６．３８；Ｎ，５．８３。Ｃ₂₃Ｈ₃₀Ｎ₂Ｏ₆Ｓ
；０．５Ｈ２Ｏの理論値：Ｃ，５８．８５；Ｈ，６．６２；Ｎ，５．９４％。

【２０２１】 製造例７１ ２−（４−｛４−［６−（２−メトキシエトキシ）ピリジン−２−イル］−３−
メチルフェニル｝−ピペリジン−１−イルスルホニル）−２−メチルプロパン酸

【２０２２】

【化７３３】

【２０２３】 製造例３５で得たメチルエステル（３００ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）のテトラ
ヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（６０ｍｇ，鉱油中６０％分
散液，０．６３ｍｍｏｌ）を加えて、その溶液を１５分間撹拌した。ヨウ化メチ
ル（２００μｌ，３．３ｍｍｏｌ）を添加して反応物を還流下で４５分間加熱し
た。ついで水酸化ナトリウム水溶液（２ｍｌ，１Ｎ，２．０ｍｍｏｌ）およびメ
タノール（５ｍｌ）を加えて、混合物を還流下でさらに３０分間加熱した。反応
混合物を室温に冷却し、水（２０ｍｌ）で希釈してｐＨ４まで酸性にした。この
溶液をジクロロメタン（３×３０ｍｌ）で抽出して、合わせた有機抽出物を乾燥
（Ｎｎ２ＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させて標記化合物を淡黄色発泡体（定量
的）として得た。

【２０２４】

【化７３４】

【２０２５】 製造例７２ ４−［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル｝−３
−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホニル］テトラヒドロ−２Ｈ−ピ
ラン−４−カルボン酸

【２０２６】

【化７３５】

【２０２７】 製造例３６で得たメチルエステル（７２０ｍｇ，１．３９ｍｍｏｌ）のメタノ
ール（２０ｍｌ）溶液に水酸化ナトリウム水溶液（５．５６ｍｌ，１Ｎ，５．５
６ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を還流下で３時間加熱し、室温でさらに１８時間
撹拌した。混合物を真空濃縮してメタノールを除き、酢酸溶液を用いて溶液をｐ
Ｈ４まで酸性にした。これを酢酸エチル（３×）で抽出し、合わせた有機抽出物
を食塩水で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して、真空蒸発させた。残留固体
を酢酸エチル／ジイソプロピルエーテルから再結晶させて標記化合物を固体（５
１７ｍｇ，７４％）として得た。

【２０２８】

【化７３６】

【２０２９】 製造例７３ ４−［４−（４−｛６−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキシ］
ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホニル
］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸

【２０３０】

【化７３７】

【２０３１】 製造例３９で得たメチルエステル（６４０ｍｇ，１．１７ｍｍｏｌ）をメタノ
ール（１５ｍｌ）および１，４−ジオキサン（１５ｍｌ）に溶解した液に水酸化
ナトリウム水溶液（３．５ｍｌ，１Ｍ，３．５ｍｍｏｌ）を加えて、この反応物
を還流下で２時間加熱した。ＴＬＣ分析の結果出発物質の残存が認められたので
、さらに水酸化ナトリウム（２ｍｌ，１Ｍ，２ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を還
流下でさらに３時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧濃縮し、残留物を水に
溶解し、塩酸（２Ｎ）を用いてｐＨを４に調節した。生じた沈殿を濾過して乾燥
し、濾液をジクロロメタン（２×）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｍ
ｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させ、その生成物を濾過した固体と合わせた。
これをジクロロメタン／酢酸エチルから２回再結晶させて、標記化合物を白色固
体（５７９ｍｇ，９２％）として得た。

【２０３２】

【化７３８】

【２０３３】 製造例７４ ４−［４−（４−｛６−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキシ］
ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホニル
］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸

【２０３４】

【化７３９】

【２０３５】 製造例７３に記載したと同様の方法に従って、製造例４０のメチルエステルか
ら標記化合物を白色固体（８７％）として得た。

【２０３６】

【化７４０】

【２０３７】 製造例７５ ４−［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル｝−３
−メチルフェニル）ピペリジン−１−イルスルホニル］−１−メチルピペリジン
−４−カルボン酸

【２０３８】

【化７４１】

【２０３９】 メタノール（８ｍｌ）および１，４−ジオキサン（８ｍｌ）中の、製造例４２
で得たメチルエステル（２００ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水
溶液（１．５ｍｌ，１Ｎ，１．５ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で一夜間加熱し
た。冷却した反応物を真空濃縮し、酢酸を用いて残留物をｐＨ４まで酸性にして
、酢酸エチルで抽出を行った。有機層中に生じた沈殿を濾過し、分液漏斗内の残
留固体と合わせて、所望の化合物を白色粉末（定量的）として得た。 ＬＲＭＳ：ｍ／ｚ ５１８（Ｍ＋１）⁺

【２０４０】 製造例７６ １−（第三級ブトキシカルボニル）−４−［４−（４−｛６−［２−ヒドロキシ
エトキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル
スルホニル］−ピペリジン−４−カルボン酸

【２０４１】

【化７４２】

【２０４２】 製造例７５に記載したと同様の方法に従って、製造例４３で得たメチルエステ
ルから標記化合物を白色固体（８７％）として得た。

【２０４３】

【化７４３】

【２０４４】 製造例７７ ２−［４−（４−｛３−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−１−ピロポキシ］
フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−２−
メチル−プロパン酸

【２０４５】

【化７４４】

【２０４６】 製造例４９で得たメチルエステル（３９１ｍｇ，０．７７ｍｍｏｌ）のメタノ
ール（５ｍｌ）溶液に水酸化ナトリウム水溶液（１．５５ｍｌ，１Ｍ，１．５５
ｍｍｏｌ）を加えて、反応液を室温で一夜間撹拌した。この混合物を酢酸エチル
と塩酸（２Ｎ）との間に分配させて相分離させた。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）
し、濾過して真空濃縮した。残留固体をジイソプロピルエーテルで微粉化し、濾
過し、真空乾燥して標記化合物を白色固体（３２０ｍｇ，８５％）として得た。

【２０４７】

【化７４５】

【２０４８】 分析実測値：Ｃ，６０．７７；Ｈ，６．８９；Ｎ，２．７８。Ｃ₂₅Ｈ₃₃ＮＯ₇Ｓ
の理論値：Ｃ，６１．０８；Ｈ，６．７７；Ｎ，２．８５％。

【２０４９】 製造例７８ ４−［４−（４−｛３−［２，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ］フェニル｝
−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テトラヒドロ−
２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸

【２０５０】

【化７４６】

【２０５１】 メタノール（５ｍｌ）およびび１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の、製造例５
１で得たメチルエステル（３７０ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム
水溶液（３ｍｌ，１Ｍ，３ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で６時間加熱した。冷
却した反応液を真空濃縮した後水で希釈した。塩酸（２Ｎ）を用い、この水溶液
をｐＨ４まで酸性にして、生じた沈殿を濾過し、水洗し、真空乾燥して、所望の
生成物（２７０ｍｇ，７４％）を得た。

【２０５２】

【化７４７】

【２０５３】 製造例７９ ４−［４−（４−｛３−［（２Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキシ］
フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テト
ラヒドロ−（２Ｈ）−ピラン−４−カルボン酸

【２０５４】

【化７４８】

【２０５５】 メタノール（５ｍｌ）および１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の、製造例５２
で得たメチルエステル（１１０ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水
溶液（１ｍｌ，１Ｍ，１ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で２時間加熱した。冷却
した反応物を真空蒸発させて、残留物を水に溶解し、塩酸（１Ｎ）を用いてｐＨ
１まで酸性にした。生じた沈殿を濾過して、固体を水洗し、真空乾燥して、標記
化合物を白色固体（９１ｍｇ，８５％）として得た。

【２０５６】

【化７４９】

【２０５７】 製造例８０ ４−［４−（４−｛３−［（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシ−１−プロポキシ］
フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルスルホニル］−テト
ラヒドロ−（２Ｈ）−ピラン−４−カルボン酸

【２０５８】

【化７５０】

【２０５９】 製造例７９に記載した方法に従って、製造例５３で得たメチルエステルから標
記化合物を固体（６６％）として得た。

【２０６０】

【化７５１】

【２０６１】 製造例８１ ２−［４−（４−｛３−（２−［Ｎ−第三級ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルア
ミノ］エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イルス
ルホニル］−２−メチルプロパン酸

【２０６２】

【化７５２】

【２０６３】 １，４−ジオキサン（２．３ｍｌ）およびメタノール（６ｍｌ）中の、製造例
６４で得たメチルエステル（５４０ｍｇ，０．９２ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウ
ム水溶液（６ｍｌ，１Ｎ，６．０ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で３．５時間加
熱した。冷却した混合物を真空濃縮して有機溶剤を除き、酢酸を用いて残留水溶
液をｐＨ４まで酸性にした。これを酢酸エチル（２×）で抽出し、合わせた有機
抽出物を水、食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた
。残留物をトルエン、次いで酢酸エチル、最後にジクロロメタンと共沸させて、
標記化合物を白色発泡体（５２０ｍｇ，９８％）として得た。

【２０６４】

【化７５３】

【２０６５】 分析実測値：Ｃ，６１．１７；Ｈ，７．２７；Ｎ，４．６５。Ｃ₃₀Ｈ₄₂Ｎ₂Ｏ₇Ｓ
；０．２ＣＨ₂Ｃｌ₂の理論値：Ｃ，６１．３０；Ｈ，７．２２；Ｎ，４．７３％
。

【２０６６】 製造例８２ないし８６ 一般式：

【２０６７】

【化７５４】

【２０６８】 の化合物を、製造例８１に記載したと同様の方法に従い対応するメチルエステル
から調製した。

【２０６９】

【表２０】

【２０７０】

【表２１】

【２０７１】 １＝酢酸水溶液から濾過して単離させた。 ２＝酢酸エチル／メタノールから再結晶させた。 ３＝ジイソプロピルエーテルで微粉化させた。

【２０７２】 製造例８７ Ｎ−ヒドロキシ１−（第三級ブトキシカルボニル）−４−｛［４−（４−｛６−
［２−ヒドロキシエトキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペ
リジン−１−イル］スルホニル｝−ピペリジン−４−カルボキサミド

【２０７３】

【化７５５】

【２０７４】 製造例７６で得た酸（３００ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４
ｍｌ）およびピリジン（２ｍｌ）に溶解した液にクロロトリメチルシラン（７０
μｌ，０．５５ｍｍｏｌ）を加えて、溶液を室温下、窒素雰囲気中で１時間撹拌
した。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
（１１５ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリア
ゾール（７５ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を加えて、さらに１時間撹拌を続けた。
ヒドロキシルアミン塩酸塩（１０４ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）を加えて、反応物
を室温で一夜間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、塩酸（２Ｍ）を用いて溶液
をｐＨ１まで酸性にした後酢酸エチルで抽出した。合わせた有機液を食塩水で洗
い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。残留物を酢酸エチルで微
粉化し、生じた沈殿を濾過して濾液を真空蒸発させた。残留物を酢酸エチルから
再結晶させて標記化合物を白色固体（１４８ｍｇ，４８％）として得た。

【２０７５】

【化７５６】

【２０７６】 製造例８８ Ｎ−ヒドロキシ２−［４−（４−｛３−（２−［（Ｎ−第三級ブトキシカルボニ
ル−Ｎ−メチル）アミノ］エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペ
リジン−１−イルスルホニル］−２−メチルプロパンアミド

【２０７７】

【化７５７】

【２０７８】 製造例８１で得た酸（５２０ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）とＮ−エチルジイソプ
ロピルアミン（１９３μｌ，１．１２ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリジノン（１
０ｍｌ）溶液に、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾル−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ′
，Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５４０ｍｇ，１
．４２ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温において、窒素雰囲気中で４０分間撹
拌した。ヒドロキシルアミン塩酸塩（２１０ｍｇ，３．０２ｍｍｏｌ）および補
足的Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（７３０μｌ，４．２３ｍｍｏｌ）を加え
て、反応物を室温で一夜間撹拌した。混合物を酢酸エチルとｐＨ７の緩衝液との
間に分配させて、層分離させた。有機相を連続して水、食塩水で洗った後乾燥（
ＮａＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。この粗製物を、ジクロロメタン：メ
タノール（９９．５：０．５→９８：２→８０：２０）の溶離勾配を用い、シリ
カゲルを充填剤とする中圧カラムクロマトグラフィーにより精製して標記化合物
（１８０ｍｇ，３４％）を得た。

【２０７９】

【化７５８】

【２０８０】 分析実測値：Ｃ，６０．９６；Ｈ，７．３３；Ｎ，７．１１。Ｃ₃₀Ｈ₄₃Ｎ₃Ｏ₇Ｓ
の理論値：Ｃ，６１．１０；Ｈ，７．３５；Ｎ，７．１２％。

【２０８１】 製造例８９ Ｎ−ヒドロキシ２−［４−（４−｛３−（２−［（第三級ブトキシカルボニル）
アミノ］エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−イル
スルホニル］−２−メチルプロピオンアミド

【２０８２】

【化７５９】

【２０８３】 製造例８８に記載したと同様の方法に従って、製造例８２で得た酸から標記化
合物（４９％）を得た。

【２０８４】

【化７６０】

【２０８５】 分析実測値：Ｃ，５９．２５；Ｈ，７．０９；Ｎ，７．３８。Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｎ₃Ｏ₇Ｓ
；０．１ＣＨ₂Ｃｌ₂の理論値：Ｃ，５９．８３；Ｈ，７．１１；Ｎ，７．１９％
。

【２０８６】 製造例９０ Ｎ−ヒドロキシ４−［４−（４−｛３−（２−［（Ｎ−第三級ブトキシカルボニ
ル）アミノ］エトキシ）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−
イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【２０８７】

【化７６１】

【２０８８】 製造例８４で得た酸（６２０ｍｇ，１．０３ｍｍｏｌ）をピリジン（２ｍｌ）
およびジクロロメタン（６ｍｌ）に溶解した液に、１−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２６０ｍｇ，１．３６ｍｍｏｌ）
と１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１５０ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ
）を加えて、混合物を室温で３０分間撹拌した。ヒドロキシル塩酸塩（１５５ｍ
ｇ，２．２５ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温で１８時間撹拌した。この反応
混合物を酢酸エチルとｐＨ７の緩衝液との間に分配させて、層分離させた。水層
を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機液を再びｐＨ７の緩衝液、次いで食塩水で
洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。残留物をトルエンと
共沸させた後、ジクロロメタン：メタノール（１００：０→９０：１）の溶離勾
配を用い、シリカゲルを充填剤とする中圧カラムクロマトグラフィーによって精
製した。この生成物を酢酸エチル／ペンタンから再結晶させて、標記化合物を固
体（３４０ｍｇ，５３％）として得た。

【２０８９】

【化７６２】

【２０９０】 分析実測値：Ｃ，６０．２７；Ｈ，７．０４；Ｎ，６．６３。Ｃ₃₁Ｈ₄₃Ｎ₃Ｏ₈Ｓ
の理論値：Ｃ，６０．２７；Ｈ，７．０２；Ｎ，６．８８％。

【２０９１】 製造例９１ Ｎ−ヒドロキシ４−［４−（４−｛３−（Ｎ−第三級ブトキシカルボニル−Ｎ−
メチル）アミノメチル）フェニル｝−３−メチルフェニル）−ピペリジン−１−
イルスルホニル］−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【２０９２】

【化７６３】

【２０９３】 製造例８５で得た酸（５５０ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）をピリジン（２ｍｌ）
およびＮ，Ｎ ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶解した液に、１−（３−ジ
メチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２１６ｍｇ，１．
１２ｍｍｏｌ）と１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１２８ｍｇ，
０．９４ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温で１時間撹拌した。ヒドロキシルア
ミン塩酸塩（１９５ｍｇ，２．８２ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温で一夜間
撹拌した。反応混合物を酢酸エチルとｐＨ７の緩衝液との間に分配させて、層分
離させた。水層を酢酸エチル（×２）で抽出し、合わせた有機液を２Ｎ塩酸で洗
い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。残留物をメタノール／酢
酸エチルから再結晶させて、標記化合物を固体（３９３ｍｇ，７０％）として得
た。

【２０９４】

【化７６４】

【２０９５】 製造例９２ １−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾル−３−オール

【２０９６】

【化７６５】

【２０９７】 カリウム第三級ブトキシド（２０ｍｌ，第三級ブタノール中１Ｍ，２０．０ｍ
ｍｏｌ）を１−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）ヒドラジン（Ｊ．Ｃｈｅｍ
．Ｓｏｃ．１０９；１９１６；５８２）（２．０１ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）に加
えて暗褐色の懸濁液とした。次いで冷却しながらエチルプロピオール酸（１．０
２ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）を１０分間にわたり滴下し、滴下が完了するや、反応物
を還流下で４時間加熱した。この反応物を水（２００ｍｌ）で希釈し、この混合
物をジクロロメタン（２×５０ｍｌ）で洗った。塩酸（２Ｎ）を用いて水層を酸
性にして、ジクロロメタン（５×１００ｍｌ）で抽出し、これらの合わせた有機
抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。この粗製物を、溶離
液としてジクロロメタン：メタノール（９８：２）を用い、シリカゲルを充填剤
とするカラムクロマトグラフィーにより精製し、さらにエーテル／ジイソプロピ
ルエーテルで微粉化して標記化合物を固体（６１５ｍｇ，２４％）として得た。

【２０９８】

【化７６６】

【２０９９】 分析実測値：Ｃ，４７．３１；Ｈ，３．５２；Ｎ，１０．９９。Ｃ₁₀Ｈ₉ＢｒＮ₂ Ｏの理論値：Ｃ，４７．４６；Ｈ，３．５８；Ｎ，１１．０７％。

【２１００】 製造例９３ １−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）−３−メトキシ−１Ｈ−ピラゾール

【２１０１】

【化７６７】

【２１０２】 １−メチル−２−ピロリジノン（１５ｍｌ）中の、製造例９２で得たピラゾー
ル（１．５２ｇ，６．０ｍｍｏｌ）と、炭酸カリウム（８２８ｍｇ，６．０ｍｍ
ｏｌ）と、ジメチルサルフェート（６２４ｍｌ，６．６ｍｍｏｌ）との混合物を
９０℃で５時間加熱した。ＴＬＣ分析の結果出発物質の残存が認められたので、
補足的炭酸カリウム（８２８ｍｇ，６．０ｍｍｏｌ）およびジメチルスルホキシ
ド（６２４？ｌ，６．６ｍｍｏｌ）を加えて、９０℃でさらに１８時間撹拌を続
けた。冷却した反応物を水（２００ｍｌ）中に注入して、混合物を酢酸エチル（
３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水（３×１００ｍｌ）
で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。残留物を、溶離液とし
てジクロロメタンを用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィー
により精製して、所望の生成物を淡黄色油（９７０ｍｇ，６１％）として得た。

【２１０３】

【化７６８】

【２１０４】 製造例９４ １−（４−ブロモ−２−メチルフェニル）−３−（２−ヒドロキシエトキシ）−
１Ｈ−ピラゾール

【２１０５】

【化７６９】

【２１０６】 Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）中の、製造例９２で得たアルコー
ル（２．７６ｇ，１０．９ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（３．０１ｇ，２１．８ｍ
ｍｏｌ）との混合物に、２−ブロモエタノール（１．５５ｍｌ，２１．８ｍｍｏ
ｌ）を加えて、反応物を８０℃で５時間撹拌した。冷却した混合物を真空濃縮し
、残留物を酢酸エチル（２５０ｍｌ）中に懸濁させて、混合物を水（５×５０ｍ
ｌ）で洗った。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。この
粗製物を、溶離剤としてジクロロメタン：エーテル（８０：２０）を用い、シリ
カゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーにより精製し、次いでジイソプ
ロピルエーテルから結晶化させて、所望の生成物を黄褐色結晶（１．６１ｇ，５
０％）として得た。

【２１０７】

【化７７０】

【２１０８】 分析実測値：Ｃ，４８．３８；Ｈ，４．３０；Ｎ，９．３４。Ｃ₁₂Ｈ₁₃ＢｒＮ₂
Ｏ₂の理論値：Ｃ，４８．５０；Ｈ，４．４１；Ｎ，９．４３％。

【２１０９】 製造例９５ ３−（２−ベンジルオキシエトキシ）−１−（４−ブロモ−２−メチルフェニル
）−１Ｈ−ピラゾール

【２１１０】

【化７７１】

【２１１１】 製造例９４で得たアルコール（１．５５ｇ，５．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロ
フラン（１２ｍｌ）溶液を、水素化ナトリウム（２２９ｍｇ，鉱油中６０％分散
液，５．７３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）懸濁液に加え、生じ
た混合物を窒素雰囲気中で２分間撹拌した。次いでベンジルブロミド（６８１μ
ｌ，５．７３ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を還流下で１６時間加熱した。冷却し
た反応混合物を食塩水（７０ｍｌ）中に注入して酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で
抽出した。合わせた有機液を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、真空濃縮して黄色
油を得た。この粗製物を、ヘキサン：酢酸エチル（９０：１０→８０：２０）の
溶離勾配を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーにより精
製して、標記化合物を無色の油（１．９３ｇ，９６％）として得た。

【２１１２】

【化７７２】

【２１１３】 製造例９６ ３−メトキシ−１−［（２−メチル−４−トリメチルスタンニル）フェニル］−
１Ｈ−ピラゾール

【２１１４】

【化７７３】

【２１１５】 製造例９３で得たブロミド（６５９ｍｇ，２．４７ｍｍｏｌ）とヘキサメチル
二スズ（８８９ｍｇ，２．７１ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８ｍｌ）溶液
にテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３０ｍｇ，０．０
２６ｍｍｏｌ）を加えて、生じた混合物中に窒素を吹込んだ。反応物を還流下で
４．５時間加熱した後、ＴＬＣの分析結果は出発物質の残存を示した。さらにテ
トラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４８ｇ）を加えて、反
応物を還流下でさらに１６時間加熱した。冷却した反応物に５０％フッ化カリウ
ム水溶液（５ｍｌ）を加えて、混合物を１５分間撹拌した後、Ａｒｂｏｃｅｌ（
登録商標）で濾過してエーテルで洗った。濾液を食塩水（３０ｍｌ）で洗い、乾
燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。この粗製物を、溶離液としてペ
ンタン：エーテル（９０：１０）を用いて、シリカゲルを充填剤とするカラムク
ロマトグラフィーにより精製して、標記化合物を淡黄色の油（５９８ｍｇ，６９
％）として得た。

【２１１６】

【化７７４】

【２１１７】 製造例９７ ３−（２−ベンジルオキシエトキシ）−１−［２−メチル−４−（トリメチルス
タンニル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾール

【２１１８】

【化７７５】

【２１１９】 製造例９５で得たブロミド（１．９２ｇ，４．９６ｍｍｏｌ）とヘキサメチル
二スズ（１．７８ｇ，５．４５ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１８ｍｌ）溶
液にテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２８６ｍｇ，０
．２５ｍｍｏｌ）を加えて、生じた混合物中に窒素を吹き込んだ。反応物を還流
下で２時間加熱した後冷却した。フッ化カリウム溶液（５ｍｌ，５０％）を加え
て、混合物を３０分間撹拌しＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過して、酢酸エチ
ル（１５０ｍｌ）で十分に洗った。濾液を食塩水（２×３０ｍｌ）で洗い、乾燥
（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。残留物を、ヘキサン：エーテル（
８４：１６）を用いてシリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーによ
り精製して、所望の生成物を結晶質固体（１．８７ｇ，８０％）として得た。

【２１２０】

【化７７６】

【２１２１】 分析実測値：Ｃ，５６．２１；Ｈ，５．９７；Ｎ，５．９５。Ｃ₂₂Ｈ₂₈Ｎ₂Ｏ₂Ｓ
ｎの理論値：Ｃ，５６．０８；Ｈ，５．９９；Ｎ，５．９５％。

【２１２２】 製造例９８ メチル２−｛４−［４−（３−メトキシ−１Ｈ−ピラゾル−１−イル｝−３−メ
チルフェニル］−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−１−イルスルホニル
｝−２−メチル−プロパノエート

【２１２３】

【化７７７】

【２１２４】 製造例２９で得たビニルトリフレート（７２７ｍｇ，１．８４ｍｍｏｌ）、製
造例９６で得たスタンナン（５９０ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）、およびトリフェ
ニルアルシン（１０４ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）の１−メチル−２−ピロリジノ
ン（４ｍｌ）溶液にトリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）（３
０．７ｍｇ，０．０３４ｍｍｏｌ）を加えて、その溶液を窒素雰囲気中で撹拌し
た。ヨウ化銅（Ｉ）（１６ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を加えて、その溶液を脱ガ
スし、ついで反応物を６０℃で３０分間、および７５℃でさらに４．５時間撹拌
した。冷却した反応物にフッ化カリウム溶液（３ｍｌ，５０％）を加えて、１５
分間撹拌を続け、混合物をＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過して酢酸エチル（
１５０ｍｌ）で洗った。濾液を水（３０ｍｌ）、食塩水（３０ｍｌ）で洗い、乾
燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。この残留橙色発泡体をペンタン
：エーテル（５０：５０）を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグ
ラフィーにより精製して、標記化合物を淡黄色ガム（５８８ｍｇ，８１％）とし
て得た。

【２１２５】

【化７７８】

【２１２６】 製造例９９ メチル２−｛４−［４−（３−｛２−ベンジルオキシエトキシ｝−１Ｈ−ピラゾ
ル−１−イル｝−３−メチルフェニル］−１，２，３，６−テトラヒドロピリジ
ン−１−イルスルホニル｝−２−メチル−プロパノエート

【２１２７】

【化７７９】

【２１２８】 製造例９８に記載したと同様の方法を用いて、製造例２９で得たトリフレート
及び製造例９７のスタンナンから標記化合物を黄色油（７５％）として得た。

【２１２９】

【化７８０】

【２１３０】 製造例１００ メチル２−｛４−［４−（３−メトキシ−１Ｈ−ピラゾル−１−イル｝−３−メ
チルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２−メチルプロパノエート

【２１３１】

【化７８１】

【２１３２】 製造例９８で得た１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（５８０ｍｇ，１．
３８ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に１０％パラジウムを担持した木
炭（６０ｍｇ）を加えて、混合物を５０ｐｓｉ及び室温で６時間水素化した。Ｔ
ＬＣ分析の結果出発物質の残存を認めたので、さらに１０％パラジウムを担持し
た木炭（５０ｍｇ）を加えて、混合物をさらに１８時間水素化した。反応混合物
をＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過し、濾液をジクロロメタン（５０ｍｌ）中
に懸濁させて、再びＡｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過し、濾液を真空蒸発させ
て、所望の生成物を無色固体（３６５ｍｇ，６１％）として得た。

【２１３３】

【化７８２】

【２１３４】 製造例１０１ メチル２−｛４−［４−（３−｛２−ヒドロキシエトキシ｝−１Ｈ−ピラゾル−
１−イル｝−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２−メ
チルプロパノエート

【２１３５】

【化７８３】

【２１３６】 エタノール（３５ｍｌ）中の製造例９９で得たベンジルエーテル（７９０ｍｇ
，１．４２ｍｍｏｌ）と１０％パラジウムを担持した木炭（１６０ｍｇ）との混
合物を５０ｐｓｉ及び室温において１７時間水素化した。ＴＬＣ分析の結果出発
物質の残存を認めたので、さらに１０％パラジウムを担持した木炭（８０ｍｇ）
を加え、そしてさらに１０％パラジウムを担持した木炭（１６０ｍｇ）を少量ず
つ添加しながら反応をさらに４８時間継続した。反応混合物をＡｒｂｏｃｅｌ（
登録商標）で濾過して、エタノールで洗い、濾液を真空濃縮した。残留物を酢酸
エチル（１００ｍｌ）と重炭酸ナトリウム飽和溶液（１００ｍｌ）との間に分配
させて、層分離させ、有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過し、真空蒸発させて
、標記化合物を無色の油（６３０ｍｇ，９５％）として得た。

【２１３７】

【化７８４】

【２１３８】 製造例１０２ メチル２−メチル−２−｛４−［３−メチル−４−（１，３−チアゾル−２−イ
ル）フェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−プロパノエート

【２１３９】

【化７８５】

【２１４０】 製造例２６で得たブロミド（５７７ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ）と２−（トリメ
チルスタンニル）−１，３−チアゾール（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８６，７５
７）（３７２ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３．５ｍｌ）溶液
にビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）塩化物（４９ｍｇ，０．
０７ｍｍｏｌ）を加え、生じた混合物を脱ガスして、アルゴン雰囲気中に置いた
。この反応物を還流下で１７時間加熱した。ＴＬＣ分析の結果出発物質の残存を
認めたので、補足的２−（トリメチルスタンニル）−１，３−チアゾール（１７
３ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（
ＩＩ）塩化物（４９ｍｇ，０．０７ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を脱ガスした後
、還流下でさらに１７時間加熱した。冷却した混合物を真空濃縮して、残留物を
、ヘキサン：酢酸エチル（９１：９→６６：３４）の溶離勾配を用い、シリカゲ
ルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーにより精製した。この生成物を溶離
液としてエーテルを用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィー
により再精製して、標記化合物を黄褐色固体（２４０ｍｇ，４０％）として得た
。

【２１４１】

【化７８６】

【２１４２】 分析実測値：Ｃ，５６．６４；Ｈ，６．１９；Ｎ，６．５５。Ｃ₂₀Ｈ₂₆Ｎ₂Ｓ₂Ｏ ₄ の理論値：Ｃ，５６．８５；Ｈ，６．２０；Ｎ，６．６３％。

【２１４３】 製造例１０３ ２−｛４−［４−（３−メトキシ−１Ｈ−ピラゾル−１−イル｝−３−メチルフ
ェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２−メチルプロパン酸

【２１４４】

【化７８７】

【２１４５】 メタノール（５ｍｌ）および１，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の製造例１００
で得たメチルエステル（３５５ｍｇ，０．８２ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水
溶液（５．９ｍｌ，１Ｍ，５．９ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で２時間加熱し
た。冷却した反応物を水で希釈し、塩酸（２Ｎ）を用いてｐＨ３まで酸性にした
。生じた沈殿を濾過し、水洗し、７５℃で真空乾燥して、標記化合物を白色粉末
（２８１ｍｇ，８２％）として得た。

【２１４６】

【化７８８】

【２１４７】 分析実測値：Ｃ，５６．７８；Ｈ，６．４０；Ｎ，９．７１。Ｃ₂₀Ｈ₂₇Ｎ₃Ｏ₅Ｓ
の理論値；Ｃ，５６．９９；Ｈ，６．４６；Ｎ，９．９７％。

【２１４８】 製造例１０４ ２−｛４−［４−（３−｛２−ヒドロキシエトキシ｝−１Ｈ−ピラゾル−１−イ
ル｝−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２−メチルプ
ロパン酸

【２１４９】

【化７８９】

【２１５０】 １，４−ジオキサン（５ｍｌ）中の製造例１０１で得たメチルエステル（５２
０ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水溶液（３．６ｍｌ，１Ｎ，３．
６ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で２．５時間加熱した。冷却した反応物を水（
１００ｍｌ）と酢酸エチル（１００ｍｌ）との間に分配させ、塩酸（２Ｎ）を用
いてｐＨ２まで酸性にして層分離させた。水層を酢酸エチル（２×３５ｍｌ）で
抽出し、合わせた有機液を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。残留
物をエーテルで２回微粉化して標記化合物を白色固体（３３８ｍｇ，６２％）と
して得た。

【２１５１】

【化７９０】

【２１５２】 製造例１０５ ２−メチル−２−｛４−［３−メチル−４−（１，３−チアゾル−２−イル）フ
ェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−プロパン酸

【２１５３】

【化７９１】

【２１５４】 製造例１０４に記載したと同様の方法に従って、製造例１０２のメチルエステ
ルから標記化合物を白色固体（９２％）として得た。

【２１５５】

【化７９２】

【２１５６】 分析実測値：Ｃ，５５．２８；Ｈ，５．９０；Ｎ，６．７０。Ｃ₁₉Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₄Ｓ ₂ の理論値：Ｃ，５５．８６；Ｈ，５．９２；Ｎ，６．８６％。

【２１５７】 製造例１０６ メチル１−｛［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル
］スルホニル｝−３−シクロペンテン−１−カルボキシレート

【２１５８】

【化７９３】

【２１５９】 無水Ｎ−メチルピロリジノン（３０ｍｌ）中、水素化ナトリウム（１．１ｇ，
鉱油中６０％分散液，２８ｍｍｏｌ）の懸濁液を窒素雰囲気中で０℃に冷却した
。製造例２５で得たエステル（１０ｇ，２６ｍｍｏｌ）のＮ−メチルピロリジノ
ン（７０ｍｌ）溶液を撹拌しながら滴下して、反応混合物を５０分間かけて外界
温度まで温めた。反応混合物に１，４−ジクロロブト−２−エン（３．０ｍｌ，
２８ｍｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムブロミド（８．３ｇ，２６ｍｍｏｌ
）とを加え、さらに３時間後に水素化ナトリウムの追加分（１．１ｇ，鉱油中６
０％分散液，２８ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物をさらに２日間撹拌した。反
応混合物を酢酸エチル（３００ｍｌ）と水（３００ｍｌ）との間に分配させて、
層分離させた。水層を酢酸エチル（３００ｍｌ）で抽出して合わせた有機抽出物
を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。残留物を、ジクロロメタン
で溶離させ、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物を白色
固体（７．４ｇ，６５％）として得た。

【２１６０】

【化７９４】

【２１６１】 製造例１０７ メチル（１α，３α，４α）−１−｛［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル
）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−３，４−ジヒドロキシシクロペンタン
カルボキシレート

【２１６２】

【化７９５】

【２１６３】 製造例１０６で得たシクロペンテン（２．０ｇ，４．５２ｍｍｏｌ）をジオキ
サン（２０ｍｌ）および水（０．１ｍｌ）に溶解した液に、Ｎ−メチルモルホリ
ンＮ−オキシド（５８０ｍｇ，４．９７ｍｍｏｌ）と四酸化オスミウム（第三級
ブタノール中２．５重量％，１．１ｍｌ，０．１３６ｍｍｏｌ）とを加えて、そ
の溶液を室温で１８時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチル（２００ｍｌ）
と水（３００ｍｌ）との間に分配させて、層分離させた。水層を酢酸エチル（２
×２００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過
して真空濃縮した。残留物を、溶離剤としてジクロロメタン／メタノール（１０
０：０→９７：３）を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィ
ーにより精製して、標記化合物を白色固体（１．２ｇ，５６％）として得た。

【２１６４】

【化７９６】

【２１６５】 製造例１０８ メチル（１α，３β，４β）−１−｛［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル
）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−３，４−ジヒドロキシシクロペンタン
カルボキシレート

【２１６６】

【化７９７】

【２１６７】 製造例１０６で得たシクロペンテン（２．４５ｇ，５．５４ｍｍｏｌ）の氷酢
酸（１２５ｍｌ）溶液に酢酸銀（２．１ｇ，１２．４６ｍｍｏｌ）とヨウ素（１
．５ｇ，５．８１ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を外界温度で１時間撹拌した。つ
いで湿潤酢酸（１：２５ 水／氷酢酸混合物 ２．５ｍｌ）を加えて、反応物を
９５℃に３時間加熱後、外界温度で１８時間撹拌した。この混合物に塩化ナトリ
ウムを加え、生じた沈殿をａｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過した後トルエンで
洗った。生じた濾液を真空濃縮し、トルエンと共沸させて固体を得て、それをジ
イソプロピルエーテルで微粉化した。この固体を、ジクロロメタンで溶離させ、
フラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製して、中間体のモノアセテート
化合物をベージュ色の固体（１．３５ｇ，５０％）として得た。このモノアセテ
ート中間体のジオキサン／メタノール（１２ｍｌ／８ｍｌ）溶液に１Ｎ水酸化ナ
トリウム（４ｍｌ）を加えて反応物を外界温度で１時間撹拌した。減圧で溶剤を
除き、残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）と水（７５ｍｌ）との間に分配させて、
層分離させた。水層を酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出
物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空濃縮して、標記化合物を白色固体（
８７５ｍｇ，７０％）として得た。

【２１６８】

【化７９８】

【２１６９】 製造例１０９ メチル（３ａα，５α，６ａα）−５−｛［４−（４−ブロモ−３−メチルフェ
ニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−２，２−ジメチルテトラヒドロ−
３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキシレート

【２１７０】

【化７９９】

【２１７１】 窒素雰囲気中で、製造例１０７で得たジオール（１．４３ｇ，３ｍｍｏｌ）の
無水ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）溶液に２，２−ジメトキシプロパン（０
．７４ｍｌ，６ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸（６０ｍｇ，０．３ｍｍｏ
ｌ）を加えた。反応物を５０℃に４．５時間加温した。混合物を酢酸エチル（５
０ｍｌ）及び水（４０ｍｌ）で希釈して層分離させた。水層を酢酸エチル（２×
５０ｍｌ）で抽出して、合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し
て真空濃縮した。生じた固体を酢酸エチル／ジイソプロピルエーテルから再結晶
させて、標記化合物を白色固体（１．０５ｇ，７０％）として得た。

【２１７２】

【化８００】

【２１７３】 製造例１１０ メチル（３ａβ，５α，６ａβ）−５−｛［４−（４−ブロモ−３−メチルフェ
ニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−２，２−ジメチルテトラヒドロ−
３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキシレート

【２１７４】

【化８０１】

【２１７５】 製造例１０９に記載したと同様の方法で、製造例１０８で得たジオールから標
記化合物を調製した。標記化合物は淡黄色固体（１．３ｇ，７５％）として単離
された。

【２１７６】

【化８０２】

【２１７７】 製造例１１１ メチル（３ａα，５α，６ａα）−５−｛［４−（４−｛６−［２−（第三級ブ
トキシ）エトキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−
１−イル］スルホニル｝−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペン
タ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキシレート

【２１７８】

【化８０３】

【２１７９】 トルエン（２５ｍｌ）中の製造例１２７で得たスタンナン（２．３ｇ，４．７
８ｍｍｏｌ）と、製造例１０９で得たアリールブロミド（１．９ｇ，３．６８ｍ
ｍｏｌ）と、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（
２１３ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）との混合物を窒素雰囲気中で１０時間還流させ
た後、外界温度で７時間撹拌した。混合物を真空蒸発させ、生じた油に酢酸エチ
ル（３０ｍｌ）とフッ化カリウム水溶液（２０ｍｌ）を加えて、急速に１０分間
撹拌した。生じた沈殿をａｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過して酢酸エチルで洗
った。濾液を分離させて水層を酢酸エチル（３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有
機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。残留物を、溶離液
としてペンタン：酢酸エチル（９８：２→６０：４０）を用い、シリカゲルを充
填剤とするカラムクロマトグラフィーにより精製した。生じた固体を酢酸エチル
から再結晶させて、標記化合物を白色固体（１．４ｇ，６０％）として得た。

【２１８０】

【化８０４】

【２１８１】 製造例１１２ メチル（３ａα，５α，６ａα）−５−（｛４−［４−（６−エトキシピリジン
−２−イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−２
，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソ
ール−５−カルボキシレート

【２１８２】

【化８０５】

【２１８３】 製造例１１１に記載したと同様の方法で、製造例１０９から得たアリールブロ
ミド及び製造例１２９から得たスタンナンから標記化合物を調製した。標記化合
物は白色固体（１．１ｇ，５０％）として単離された。

【２１８４】

【化８０６】

【２１８５】 製造例１１３ メチル（３ａβ，５α，６ａβ）−５−（｛４−［４−（６−エトキシピリジン
−２−イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−２
，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソ
ール−５−カルボキシレート

【２１８６】

【化８０７】

【２１８７】 製造例１１１に記載したと同様の方法で、製造例１１０で得たアリールブロミ
ド及び製造例１２９で得たスタンナンから標記化合物を調製した。標記化合物は
白色発泡体（４１３ｍｇ，６０％）として単離された。

【２１８８】

【化８０８】

【２１８９】 製造例１１４ メチル（３ａα，５α，６ａα）−５−｛４−［４−（３−メトキシフェニル）
−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２，２−ジメチル
テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カル
ボキシレート

【２１９０】

【化８０９】

【２１９１】 １，２−ジメトキシエタン（２５ｍｌ）中の、製造例１０９で得たアリールブ
ロミド（１．０３，１．９９ｍｍｏｌ）と、３−メトキシフェニルホウ酸（３６
４ｍｇ，２．４０ｍｍｏｌ）と、フッ化セシウム（６０６ｍｇ，４．００ｍｍｏ
ｌ）と、トリス（ジベンジリデンアセトン）二パラジウム（０）（９１ｍｇ，０
．１ｍｍｏｌ）と、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン（６１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ
）との混合物を窒素雰囲気中、還流下で９時間加熱した。冷却した反応物を水及
び酢酸エチルで希釈し、ａｒｂｏｃｅｌ（登録商標）で濾過して、水及び酢酸エ
チルで洗った。有機層を分離して、食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾
過して真空濃縮した。残留物を、溶離液としてペンタン：酢酸エチル（９５：５
→６０：４０）を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーに
より精製した。標記化合物は白色固体（６３０ｍｇ，６０％）として得られた。

【２１９２】

【化８１０】

【２１９３】 製造例１１５ メチル（３ａβ，５α，６ａβ）−５−｛４−［４−（３−メトキシフェニル）
−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２，２−ジメチル
テトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カル
ボキシレート

【２１９４】

【化８１１】

【２１９５】 製造例１１４に記載したと同様の方法で、製造例１１０で得たアリールブロミ
ドから標記化合物を調製し、白色発泡体（３１０ｍｇ，４５％）として単離させ
た。

【２１９６】

【化８１２】

【２１９７】 製造例１１６ （３ａα，５α，６ａα）−５−｛［４−（４−｛６−［２−（第三級ブトキシ
）エトキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イ
ル］スルホニル｝−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ ］［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸

【２１９８】

【化８１３】

【２１９９】 メタノール（７ｍｌ）及びジオキサン（７ｍｌ）中の、製造例１１１で得たメ
チルエステル（１．４ｇ，２．２２ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水溶液（５．
５ｍｌ，２Ｎ，１１．１ｍｍｏｌ）との混合物を還流下で１時間加熱した後冷却
した。反応物を真空濃縮し、残留物を水（２０ｍｌ）に溶解して、溶液を氷酢酸
でｐＨ４まで酸性にした。水相を酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出し、集めた
有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。生じた油状固体をト
ルエンと共沸させた後、冷酢酸エチルで微粉化して標記化合物を白色固体（１．
０ｇ，７５％）として得た。

【２２００】

【化８１４】

【２２０１】 製造例１１７ （３ａα，５α，６ａα）−５−（｛４−［４−（６−エトキシピリジン−２−
イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−２，２−
ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−
５−カルボン酸

【２２０２】

【化８１５】

【２２０３】 製造例１１２で得たメチルエステル（７８０ｍｇ，１．４０ｍｍｏｌ）と水酸
化ナトリウム水溶液（３．５ｍｌ，２Ｎ，６．９８ｍｍｏｌ）との混合物をメタ
ノール（５ｍｌ）およびジオキサン（５ｍｌ）に溶解して、還流下で１．５時間
加熱した後冷却した。この反応物を真空濃縮し、残留物を水（２０ｍｌ）に溶解
して、氷酢酸で溶液をｐＨ４まで酸性にした。生じた混合物を酢酸エチル（２×
５０ｍｌ）で抽出し、集めた有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空濃
縮した。これにより標記化合物が白色固体（２４０ｍｇ，８５％）として得られ
た。

【２２０４】

【化８１６】

【２２０５】 製造例１１８ （３ａβ，５α，６ａβ）−５−（｛４−［４−（６−エトキシピリジン−２−
イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホニル）−２，２−
ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−
５−カルボン酸

【２２０６】

【化８１７】

【２２０７】 製造例１１７に記載したと同様の方法で、製造例１１３で得たメチルエステル
から標記化合物を調製して、白色発泡体（２５０ｍｇ，６５％）として単離させ
た。

【２２０８】

【化８１８】

【２２０９】 製造例１１９ （３ａα，５α，６ａα）−５−｛４−［４−（３−メトキシフェニル）−３−
メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２，２−ジメチルテトラ
ヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸

【２２１０】

【化８１９】

【２２１１】 製造例１１４で得たメチルエステル（６３０ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）と水酸
化ナトリウム水溶液（３．０ｍｌ，２Ｎ，５．８０ｍｍｏｌ）との混合物をメタ
ノール（５ｍｌ）及びジオキサン（５ｍｌ）に溶解して、還流下で１時間加熱し
た後冷却した。反応物を真空濃縮し、残留物を水（２０ｍｌ）に溶解して、２Ｎ
塩酸で溶液をｐＨ１まで酸性にした。生じた混合物を酢酸エチル（２×５０ｍｌ
）で抽出し、集めた有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。
この結果標記化合物が白色固体（５００ｍｇ，８３％）として得られた。

【２２１２】

【化８２０】

【２２１３】 製造例１２０ （３ａβ，５α，６ａβ）−５−｛４−［４−（３−メトキシフェニル）−３−
メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２，２−ジメチルテトラ
ヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸

【２２１４】

【化８２１】

【２２１５】 製造例１１９に記載したと同様の方法で、製造例１１５で得たメチルエステル
から標記化合物を調製し、白色発泡体（２５０ｍｇ，８５％）として単離させた
。

【２２１６】

【化８２２】

【２２１７】 製造例１２１ （３ａα，５α，６ａα）−Ｎ−ヒドロキシ−５−｛［４−（４−｛６−［２−
（第三級ブトキシ）エトキシ］ピリジン−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピ
ペリジン−１−イル］スルホニル｝−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−
シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−カルボキサミド

【２２１８】

【化８２３】

【２２１９】 製造例１１６で得た酸（５００ｍｇ，０．８１ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド（６ｍｌ）及びピリジン（３ｍｌ）に溶解した液に、１−（３−ジ
メチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１９０ｍｇ，０．
９７３ｍｍｏｌ）と１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１２１ｍｇ
，０．８９２ｍｍｏｌ）とを加えて、反応物を窒素雰囲気中で５０分間撹拌した
。ついでヒドロキシルアミン塩酸塩（１７０ｍｇ，２．４．ｍｍｏｌ）を加えて
、反応物を室温で一夜間撹拌した。この反応物を酢酸エチル（５０ｍｌ）で希釈
し、ｐＨ７のリン酸塩緩衝液（３０ｍｌ）で洗った。水層を酢酸エチル（２×５
０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水、次いで水で洗い、乾燥（Ｎａ
２ＳＯ４）し、濾過して真空濃縮した。生じた固体を酢酸エチルから再結晶させ
て、標記化合物を白色固体（２６０ｍｇ，５０％）として得た。

【２２２０】

【化８２４】

【２２２１】 製造例１２２ （３ａα，５α，６ａα）−Ｎ−ヒドロキシ−５−（｛４−［４−（６−エトキ
シピリジン−２−イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スルホ
ニル）−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３
］ジオキソール−５−カルボキサミド

【２２２２】

【化８２５】

【２２２３】 製造例１２１に記載したと同様の方法で、製造例１１７で得た酸から標記化合
物を調製し、白色固体（１５０ｍｇ，６０％）として単離させた。

【２２２４】

【化８２６】

【２２２５】 製造例１２３ （３ａβ，５α，６ａβ）−Ｎ−ヒドロキシ−５−（｛４−［４−（６−エトキ
シ−ピリジン−２−イル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イル｝スル
ホニル）−２，２−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，
３］ジオキソール−５−カルボキサミド

【２２２６】

【化８２７】

【２２２７】 製造例１２１に記載したと同様の方法で、製造例１１８で得た酸から標記化合
物を調製した。標記化合物はカラムクロマトグラフィー（溶離液としてジクロロ
メタン／メタノール ９９：１を使用）後に白色固体（１０７ｍｇ，４５％）と
して単離された。

【２２２８】

【化８２８】

【２２２９】 製造例１２４ （３ａα，５α，６ａα）−Ｎ−ヒドロキシ−５−｛４−［４−（３−メトキシ
フェニル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２，２
−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール
−５−カルボキサミド

【２２３０】

【化８２９】

【２２３１】 製造例１２１に記載したと同様の方法で、製造例１１９で得た酸から標記化合
物を調製し、白色固体（１１０ｍｇ，４３％）として単離させた。

【２２３２】

【化８３０】

【２２３３】 製造例１２５ （３ａβ，５α，６ａβ）−Ｎ−ヒドロキシ−５−｛４−［４−（３−メトキシ
フェニル）−３−メチルフェニル］ピペリジン−１−イルスルホニル｝−２，２
−ジメチルテトラヒドロ−３ａＨ−シクロペンタ［ｄ］［１，３］ジオキソール
−５−カルボキサミド

【２２３４】

【化８３１】

【２２３５】 製造例１２１に記載したと同様の方法で、製造例１２０で得た酸から標記化合
物を調製した。標記化合物は、カラムクロマトグラフィー（溶離液としてジクロ
ロメタン／メタノール ９８：２を使用）後に白色固体（１３０ｍｇ，５０％）
として単離された。

【２２３６】

【化８３２】

【２２３７】 製造例１２６

【２２３８】

【化８３３】

【２２３９】 ２−［２−（第三級ブトキシ）エトキシ］−６−ブロモピリジン 窒素雰囲気中で、２−（第三級ブトキシ）エタノール（２０．０ｇ，０．１６
９ｍｏｌ）のトルエン（５００ｍｏｌ）氷冷溶液に水素化ナトリウム（６．８ｇ
，鉱油中６０％分散液，０．１６９ｍｏｌ）を少量ずつ加えて、その溶液を外界
温度まで加温しながら３０分間撹拌した。２，６−ジブロモピリジン（４０．０
，０．１６９ｍｏｌ）を加えて、反応物を還流下で３時間加熱した。この混合物
を外界温度まで冷却し、水（１０００ｍｌ）で希釈して、酢酸エチル（２×４０
０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、
真空蒸発させて、標記化合物を黄色の油（定量的）として得た。

【２２４０】

【化８３４】

【２２４１】 製造例１２７ ２−［２−（第三級ブトキシ）エトキシ］−６−（トリブチルスタンニル）ピリ
ジン

【２２４２】

【化８３５】

【２２４３】 窒素雰囲気中で、製造例１２６で得たブロミド（４６．３ｇ，０．１６９ｍｏ
ｌ）を無水ＴＨＦ（１０００ｍｌ）に溶解して冷却（−７８℃）した液に、内部
温度を＜−７０℃に保ように、ｎ−ブチルリチウム（７１ｍｌ，ヘキサン中２．
５Ｍ溶液，０．１７７ｍｏｌ）を滴下して、溶液を１０分間撹拌した。内部温度
を＜−７０℃に保つようにトリ−ｎ−ブチルスズ塩化物（４８ｍｌ，０．１７７
ｍｏｌ）を徐々に加えて、反応物を１時間かけて室温まで温めた。この反応物を
水（１０００ｍｌ）で希釈して、混合物をＥｔ２Ｏ（２×１０００ｍｌ）で抽出
し、合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過して真空蒸発させた。
残留物は、溶離液としてペンタン：Ｅｔ２Ｏ（１００：１→９８：２）を用い、
シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合
物を無色の油（４５．５ｇ，５５％）として得た。

【２２４４】

【化８３６】

【２２４５】 製造例１２８ ２−ブロモ−６−エトキシピリジン

【２２４６】

【化８３７】

【２２４７】 窒素雰囲気中で、外界温度において、トルエン（１５０ｍｌ）中の２，６−ジ
ブロモピリジン（１５ｇ，６３ｍｍｏｌ）にナトリウムエトキシド（１．５ｇ，
エタノール（３０ｍｌ）中６３ｍｍｏｌ（ナトリウム））を加えて、反応物を還
流下で５時間加熱した。冷却した混合物を水（１００ｍｌ）で希釈して、酢酸エ
チル（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４
）し、濾過して真空蒸発させた。残留物を、溶離液としてペンタン／酢酸エチル
（１００：０→９５：５）を用い、シリカゲルを充填剤とするカラムクロマトグ
ラフィーにより精製して、標記化合物を黄色の油（定量的）として得た。

【２２４８】

【化８３８】

【２２４９】 製造例１２９ ２−エトキシ−６−（トリブチルスタンニル）ピリジン

【２２５０】

【化８３９】

【２２５１】 製造例１２７に記載したと同様の方法で、製造例１２８で得たブロミドから標
記化合物を調製し、無色の油（１．３ｇ，６％）として単離させた。

【２２５２】

【化８４０】

【２２５３】 製造例１３０ メチル４−｛［４−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）−４−ヒドロキシ−１
−ピペリジン−１−イル］スルホニル｝テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カル
ボキシレート

【２２５４】

【化８４１】

【２２５５】 窒素雰囲気中で、ＴＨＦ（５０ｍｌ）およびトルエン（５０ｍｌ）中でマグネ
シウム（４．７ｇ，０．１９ｍｏｌ）を撹拌しつつある混合物にイソプロピルブ
ロミド（２０ｍｌ，０．２１ｍｏｌ）を１時間にわたり滴下した。この混合物を
室温で１時間撹拌後、０℃に冷却した。０ないし５℃の間で３０分間にわたり２
−ブロモ−５−ヨードトルエン（５７ｇ，０．１９ｍｏｌ）のトルエン（５０ｍ
ｌ）溶液を滴下して、混合物を０℃で３０分間撹拌した。ついでこの混合物を、
製造例で得たケトン（５０ｇ，０．１６ｍｏｌ）をトルエン（２５０ｍｌ）中に
懸濁させて撹拌しつつある液に４５分間にわたり滴下した。生じた混合物を０℃
で１時間撹拌後、クエン酸溶液（１０％，４００ｍｌ）及び酢酸エチル（２００
ｍｌ）を加えた。有機相を分離して、水相を酢酸エチル（２×２００ｍｌ）で２
回抽出した。合わせた有機相を水（２００ｍｌ）で洗い、真空濃縮して固体にし
、それをトルエン（５００ｍｌ）から再結晶させて、標記化合物を無色の固体（
６６ｇ，８４％）として得た。

【２２５６】

【化８４２】

【２２５７】 製造例１３１ メチル４−｛［４−（４−｛６−［２−（第三級ブトキシ）エトキシ］ピリジン
−２−イル｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝テト
ラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシレート

【２２５８】

【化８４３】

【２２５９】 窒素雰囲気中で、−７８℃において、製造例１２６で得たブモロピリジン（２
．０ｇ，７．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に、ｎ−ブチルリチウムの
ヘキサン溶液（２．５Ｍ，３．１ｍｌ，７．７ｍｍｏｌ）を５分間にわたり滴下
した。混合物を−７８℃で１０分間撹拌後、１０分間にわたりトリイソプロピル
ボレート（１．９ｍｌ，８．０ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を−７８℃で
１０分間撹拌した後、１時間にわたり室温まで温めた。製造例２７で得たアリー
ルブロミド（２．７ｇ，５．８ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（８２ｍｇ，０．３
６ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１９１ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）、エ
タノール（２０ｍｌ）および炭酸ナトリウム水溶液（２Ｍ，２０ｍｌ）を加えて
、混合物を窒素雰囲気中、還流下で４時間加熱した後冷却した。酢酸エチル（５
０ｍｌ）および脱塩水（５０ｍｌ）を加えて、有機相を分離した。水相を酢酸エ
チル（２×３０ｍｌ）で２回抽出し、合わせた有機相を脱塩水（５０ｍｌ）で洗
った後、真空濃縮して固体にした。メタノール（３０ｍｌ）からの再結晶により
精製して、標記化合物を無色の固体（２．０ｇ，６０％）として得た。

【２２６０】

【化８４４】

【２２６１】 製造例１３２ ４−｛［４−（４−｛６−［２−第三級ブトキシエトキシ］ピリジン−２−イル
｝−３−メチルフェニル）ピペリジン−１−イル］スルホニル｝−テトラヒドロ
−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸

【２２６２】

【化８４５】

【２２６３】 ジオキサン（２５０ｍｌ）中の製造例１３１で得たメチルエステル（９．１ｇ
，１６．０ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム水溶液（８０ｍｌ，１Ｎ，８０．０ｍ
ｍｏｌ）との混合物を還流下で２時間加熱した。メタノール（１００ｍｌ）およ
び水酸化ナトリウム水溶液（４０ｍｌ，１Ｎ，４０．０ｍｍｏｌ）を加えて、混
合物をさらに２時間還流させた後、外界温度まで冷却した。反応物を真空濃縮し
、残留物を水（２００ｍｌ）に溶解して、溶液を氷酢酸でｐＨ４まで酸性にした
。水層を酢酸エチル（２×２００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水
（２００ｍｌ）、ついで水（２×２００ｍｌ）で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し
、濾過して真空濃縮した。生じた油状固体をトルエンと共沸させた後冷ジイソプ
ロピルエーテルで微粉化して、標記化合物を淡黄色固体（７．６６ｇ，８５％）
として得た。

【２２６４】

【化８４６】

【２２６５】 製造例１３３ Ｎ −ヒドロキシ−４−［（４−｛４−［６−（２−第三級ブトキシエトキシ）ピ
リジン−２−イル］−３−メチルフェニル｝ピペリジン−１−イル）スルホニル
］テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキサミド

【２２６６】

【化８４７】

【２２６７】 製造例１３２で得た酸（７．６６ｇ，１４ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（
８０ｍｌ）およびピリジン（８０ｍｌ）に溶解した液に１−（３−ジメチルアミ
ノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（３．１５ｇ，１６．０ｍｍｏ
ｌ）と１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（２．０５ｇ，１５．０ｍ
ｍｏｌ）とを加えて、反応物を窒素雰囲気中で１時間撹拌した。ついでヒドロキ
シルアミン塩酸塩（２．８５ｇ，４１．０ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温で
一夜間撹拌した。この反応物をジクロロメタン（２００ｍｌ）で希釈して、ｐＨ
７のリン酸塩緩衝液（２００ｍｌ）で洗った。水層をジクロロメタン（２×２０
０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物を希酢酸水溶液（１５０ｍｌ）、食塩水
（１５０ｍｌ），ついで水（１５０ｍｌ）で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾
過して真空濃縮した。生じた固体をトルエンと共沸させた後、酢酸エチルおよび
ジイソプロピルエーテルから再結晶させて、標記化合物を白色固体（６．３ｇ，
７５％）として得た。

【２２６８】

【化８４８】

【２２６９】 化合物の化学式 これらは次頁に示す。

【２２７０】

【化８４９】

【２２７１】

【化８５０】

【２２７２】

【化８５１】

【２２７３】

【化８５２】

【２２７４】 まとめ 成長因子および／またはＩ：μＰＡおよび／またはＩ：ＭＭＰの併用は傷、癒
合のような損傷組織に有効である。

【２２７５】 上記明細書中に挙げたすべての刊行物は本明細書に参照として組み入れてある
。本発明に記載された方法及びシステムの、本発明の範囲及び精神から逸脱する
ことのない種々の修正および変更が、当業者には明らかであろう。本発明を特定
の好ましい態様に関連させて述べたけれども、クレームとしての本発明を該特定
態様に不当に限定してはならないことを理解すべきである。実際に、生化学及び
生物工学又は関連分野の専門家にとっては明らかな、本発明を実施するために述
べた態様のさまざまな変更は下記クレームの範囲内に入ることを意図するもので
ある。 参考文献

【２２７６】

【表２２】

【２２７７】

【２２７８】

【２２７９】

【２２８０】

【２２８１】

【２２８２】

【２２８３】

【２２８４】

【２２８５】

【２２８６】

【２２８７】

【２２８８】

【２２８９】

【２２９０】

【２２９１】

【２２９２】 配列 一連の配列は以下に示した。疑いを回避するために述べるが、これらの配列は
発明の詳細な説明に含まれる。

【２２９３】 配列（発明の詳細な説明の一部）

【２２９４】

【表２３】

【２２９５】

【２２９６】

【２２９７】

【２２９８】

【２２９９】

【２３００】

【２３０１】

【２３０２】

【２３０３】

【２３０４】

【２３０５】

【２３０６】

【２３０７】

【２３０８】

【２３０９】

【２３１０】

【２３１１】

【２３１２】

【２３１３】

【２３１４】

【２３１５】

【２３１６】

【２３１７】

【２３１８】

【２３１９】

【２３２０】

【２３２１】

【２３２２】

【２３２３】

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｐ 17/02 19/00 19/00 21/00 21/00 25/28 25/28 27/02 27/02 31/12 31/12 43/00 １１１ 43/00 １１１ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ハギンズ，ジョナサン・ポール イギリス国ケント シーティー13・９エヌ ジェイ，サンドウィッチ，ラムズゲート・ ロード，ファイザー・グローバル・リサー チ・アンド・ディベロプメント (72)発明者 マッキントッシュ，フレイザー・スチュア ート イギリス国ケント シーティー13・９エヌ ジェイ，サンドウィッチ，ラムズゲート・ ロード，ファイザー・グローバル・リサー チ・アンド・ディベロプメント (72)発明者 オクルストン，ニコラス・ローレンス イギリス国ケント シーティー13・９エヌ ジェイ，サンドウィッチ，ラムズゲート・ ロード，ファイザー・グローバル・リサー チ・アンド・ディベロプメント Ｆターム(参考） 4C084 AA20 MA02 NA14 ZA891 ZC022

Claims (29)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）増殖因子；及び （ｂ）阻害剤；及び所望により （ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む組成物を含んでなる医
   薬品であって、ここで阻害剤は、創傷のような損傷組織の環境においてアップレ
   ギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特定のプロ
   テアーゼ）の作用を阻害し得る、前記医薬品。
2. 【請求項２】 前記増殖因子が、クリサリン、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ
   、ＦＧＦ、ＣＴＧＦ、ＫＧＦ、ＴＧＦ、ＣＳＦ、又はそれらの活性な変異体、相
   同体、誘導体又はフラグメントの１つ又はそれ以上から選択される、請求項１に
   記載の医薬品。
3. 【請求項３】 前記増殖因子が、クリサリン、ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ
   、ＦＧＦ、ＣＴＧＦ様、ＫＧＦ−２、ＴＧＦ−β、ＧＭ−ＣＳＦ、又はそれらの
   活性な変異体、相同体、誘導体又はフラグメントの１つ又はそれ以上から選択さ
   れる、請求項２に記載の医薬品。
4. 【請求項４】 前記増殖因子が、少なくともＰＤＧＦ、又はその活性な変異
   体、相同体、誘導体又はフラグメントである、請求項１〜３のいずれか１項に記
   載の医薬品。
5. 【請求項５】 前記阻害剤がＩ：ｕＰＡ及び／又はＩ：ＭＭＰである、請求
   項１〜４のいずれか１項に記載の医薬品。
6. 【請求項６】 前記損傷組織が創傷、好ましくは慢性創傷である、請求項１
   〜５のいずれか１項に記載の医薬品。
7. 【請求項７】 前記損傷組織が皮膚潰瘍である、請求項１〜６のいずれか１
   項に記載の医薬品。
8. 【請求項８】 薬剤に使用される請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成
   物。
9. 【請求項９】 慢性損傷創のような慢性損傷組織を治療する医薬品の製造に
   おける、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
10. 【請求項１０】 慢性皮膚潰瘍を治療する医薬品の製造における、請求項１
    〜７のいずれか１項に記載の組成物の使用。
11. 【請求項１１】 治療の方法であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載
    の組成物を被検者へ、創傷のような損傷組織を治療する量で投与することを含ん
    でなる、前記方法。
12. 【請求項１２】 前記損傷組織が創傷、好ましくは慢性創傷である、請求項
    １１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記損傷組織が皮膚潰瘍である、請求項１１又は１２に記
    載の方法。
14. 【請求項１４】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物を製造する方
    法であって： （ｉ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の阻害剤として作用することが可能で
    ある１種又はそれ以上の薬剤を同定するアッセイを実施する工程； （ｉｉ）前記薬剤の１種又はそれ以上を増殖因子と所望により、製剤的に許容さ
    れる担体、希釈剤又は賦形剤と混合する工程を含んでなる、前記方法。
15. 【請求項１５】 請求項１４に記載の方法であって： （ｉｉｉ）前記組成物を、それを必要とする被検者へ投与する後続の工程も包含
    する、前記方法。
16. 【請求項１６】 創傷のような損傷組織を治療することに使用する医薬品を
    製造する方法であって；（ａ）増殖因子を（ｂ）阻害剤と混合すること；及び（
    ｃ）所望により、製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤と混合することに
    よって組成物を形成することを含んでなり；ここで阻害剤は、創傷のような損傷
    組織の環境においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タン
    パク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る、前記方法。
17. 【請求項１７】 少なくとも２つのコンパートメントを含んでなるパックで
    あって；ここで第一の前記コンパートメントは増殖因子を収容し；そしてここで
    、第二の前記コンパートメントは阻害剤を収容し、ここで阻害剤は、創傷のよう
    な損傷組織の環境においてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有
    害タンパク質（例えば、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る、前記パック
    。
18. 【請求項１８】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の阻害剤で治療されて
    いる被検者を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれか１
    項に記載の増殖因子の使用。
19. 【請求項１９】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の増殖因子で治療され
    ている被検者を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれか
    １項に記載の阻害剤の使用。
20. 【請求項２０】 治療の方法であって、請求項１〜７のいずれか１項に記載
    の組成物を被検者へ、創傷のような損傷組織を治療する（例えば、治癒する）量
    で投与することを含んでなり；ここで請求項１〜７のいずれか１項に記載の前記
    増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部）が局所投与され、ここで請求
    項１〜７のいずれか１項に記載の前記阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、
    全部）が局所投与される、前記方法。
21. 【請求項２１】 慢性損傷創のような慢性損傷組織を治療する医薬品の製造
    における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物の使用であって；ここで
    請求項１〜７のいずれか１項に記載の前記増殖因子の全部又はいくらか（好まし
    くは、全部）が局所投与され、ここで請求項１〜７のいずれか１項に記載の前記
    阻害剤の全部又はいくらか（好ましくは、全部）が局所投与される、前記使用。
22. 【請求項２２】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の阻害剤で治療されて
    いる被検者を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜７のいずれか１
    項に記載の増殖因子の使用であって；ここで請求項１〜７のいずれか１項に記載
    の前記増殖因子の全部又はいくらか（好ましくは、全部）が局所投与され、ここ
    で請求項１〜７のいずれか１項に記載の前記阻害剤の全部又はいくらか（好まし
    くは、全部）が局所投与される、前記使用。
23. 【請求項２３】 （ａ）増殖因子； （ｂ）ｉ：ＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰ；及び所望により （ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬品であって
    、ここでｉＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰは、創傷のような損傷組織の環境において
    アップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば、特
    定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る、前記医薬品。
24. 【請求項２４】 創傷のような損傷組織を治療するための、請求項８に記載
    の医薬組成物の使用。
25. 【請求項２５】 （ａ）ｉ：ＵＰＡ； （ｂ）ｉＭＭＰ；及び所望により （ｃ）製剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬組成物であ
    って、ここでｉＵＰＡ及び／又はｉＭＭＰは、創傷のような損傷組織の環境にお
    いてアップレギュレートされる少なくとも１種の特定の有害タンパク質（例えば
    、特定のプロテアーゼ）の作用を阻害し得る、前記組成物。
26. 【請求項２６】 請求項２５に記載の医薬組成物であって、増殖因子も含む
    、前記組成物。
27. 【請求項２７】 前記増殖因子が外因性増殖因子である、請求項２６に記載
    の医薬組成物。
28. 【請求項２８】 阻害剤が少なくともｉ：ＵＰＡである、請求項１〜２７の
    いずれか１項に記載の発明。
29. 【請求項２９】 阻害剤が少なくともｉ：ＭＭＰであって；ここで前記ＭＭ
    ＰがＭＭＰ３及び／又はＭＭＰ１３である、請求項１〜２８のいずれか１項に記
    載の発明。