JP2003517017A

JP2003517017A - 腫瘍の治療に用いるクモの毒素から得た製薬成分、その製造方法、およびその使用方法

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Publication number: JP2003517017A
Application number: JP2001544891A
Authority: JP
Inventors: ディルクヴェイクマン
Original assignee: トキシムドゲーエムベーハー
Priority date: 1999-12-17
Filing date: 2000-12-18
Publication date: 2003-05-20
Also published as: US20030175261A1; WO2001043754A2; AU2366501A; DE19961141A1; DE50008032D1; WO2001043754A3; ES2230177T3; US6998389B2; EP1244462A2; ATE277625T1; EP1244462B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から得られた製薬として効果的な物質、その製造方法および薬剤としての使用を示す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、少なくとも一つのペプチドトキシンと少なくとも一つの拮抗作用を
持つ物質および／または浸透剤を一つの調合薬の有効量含む製薬成分、その製造
方法（準備方法）、および使用方法に関し、少なくとも一つのペプチドトキシン
、および選択的に、拮抗作用を持つ物質、および／または浸透剤は、ヤリダマグ
モ科（Sicariidae）のクモの毒から得られる。

【０００２】

【従来の技術】

近年、部分的に生じた腫瘍の場合、その腫瘍をできるだけ完全に部分的に切除
する方法が最も一般的な療法である。手術に先立ち、映像的手法により腫瘍の位
置を特定し、その後開口することにより手術で部分的に切除する。この間、手術
箇所が空気に接するのを防ぐことはできない。文献（シュテークナーハー
エー（Stegner H．−E．）（１９８６）：乳房腫瘍の組織病理学（Histopatholo
gie der Mammatumoren）、エンケ出版（Enke Verlag）、シュトゥットガルト（S
tuttgart）; ガルベツェー（Garbe C．）、ドゥンマーエル（Dummer R．）
、カウフマンエル（Kaufmann R．）およびティールゲンヴェー（ Tielgen W
．）（１９９７）: デーアマトローギシュオンコロギー（Dermatologische On
kologie）。シュプリンガー出版（Springer Verlag）、ベルリン（正誤表も参照
のこと））によれば、空気と接することにより、最初の腫瘍は９３％の割合で転
移する可能性があるとされる。

【０００３】腫瘍の療法の他の形態としては、化学療法、照射、抗体療法、シトキン療法（
cytokine treatment）、高熱療法（hyperthermic treatment）、または酸素療法
（oxygen therapy）等がある。

【０００４】一般的に、腫瘍の化学療法において、体全体に広がった腫瘍および部分的な腫
瘍を手術で切除した後の残りの腫瘍細胞に適用すべく、細胞毒素が用いられる（
レムプ（Rompp（oはウムラウト））、化学百科事典（Chemielexikon）、第９版
、ボリューム１、１９８９、６８０ページ）。化学療法で用いられる物質には、
例えば、アルキル化剤（alkylating substances）、代謝拮抗物質、アルカロイ
ド、抗生物質、およびホルモンである（レムプ百科事典（Rompp Lexikon（oはウ
ムラウト））、生物工学および遺伝子工学（Biotechnologie und Gentechnik）
、第２版、１９９９、１５３ページ）。アルキル化剤として知られているのは、
例えば、シスプラチン（cisplatin）、ニトロソ尿素化合物、またはチオテパ（t
hiotepa）である。さらに、例えば、アミノプテリン、フルオロウラシル等のピ
リミジン類似体等の葉酸拮抗薬を用いることができる。ＤＮＡ依存ＲＮＡポリメ
ラーゼへの抑制効果を持つ抗生物質としては、ブレオマイシン（bleomycin）、
アドリアマイシン（doxorubicine）、またはマイトマイシンＣ（mitomycin C）
を挙げることができる。また、Ｌ−アスパラギナーゼ等の酵素を化学療法に用い
ることができる。

【０００５】化学療法の不利な点は、化学療法を部位特異的に用いるのが困難なことであり
、これらの細胞成長抑止剤は非常に猛烈な細胞毒素なので、腫瘍組織に加えて肝
臓や腎臓の細胞を含む健全な組織をもかなりの量損なってしまう。この細胞成長
抑止剤の浸透分配により、脱毛、めまい、吐き気、胃腸の出血、血液循環の乱れ
等の副作用を判断するのが困難になる（ドイツガン研究センターデーカー
エフツェット（Deutsches Krebsforschungszentrum DKFZ）ハイデルベルク（He
idelberg）−フォーカス１９／１９９５）。これらの多数の危険で望ましくない
副作用は、主に、早急な増殖組織の再生成の阻害、および特に、血液生成システ
ム、粘膜（mucosal）および生殖腺（gonadal）の皮膚組織、同様に、皮膚および
皮膚外肢に影響することから説明される。生命を脅かす合併症の中で、その後に
出血が続く感染は最も重要である（プスフィレンベル−クリニック辞書（Pschyr
embel − Klinisches Worterbuch（oはウムラウト））、第２５６版、１９９０
、１８６６ページ）。

【０００６】照射は電離放射線により行われ、一般的に、電子、ガンマ、中性子、Ｘ線が用
いられる（ツェットキン／シャールダッハ（Zetkin／Schaldach）：薬学事典（L
exikon der Medizin）、第１６版、１９９９、１９２２／１９２３ページ、ウル
シュタインメディカル（Ullstein Medical））。化学療法と同様、照射の不利な
点は、空間的な制限を得ることができないということである。照射の強度により
、健全な細胞および特にＤＮＡが猛烈に損傷される。一般的に、癌細胞は正常な
細胞よりも早く分裂するため、典型的な状況下では、癌細胞は照射療法により最
初に破壊される。しかし、照射潰瘍が成長するおそれがある（プスフィレンベル
−クリニック辞書、第２５６版、１９９０、１６０２ページ）。

【０００７】本発明の目的は、腫瘍の療法および／または、上述した従来技術の不利な点を
避けるべく、例えば腫瘍の外科手術療法における付随的な療法に有用な、改良さ
れた手段および方法を提供することにある。

【０００８】本発明によれば、製薬的に効果的な量の製薬成分が、ａ）少なくとも一つのペプチドトキシン（peptide toxin）と、ｂ）拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／または少なくとも一つの浸
透剤と、を含み、少なくとも前記ペプチドトキシンは、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの
毒から得られ、選択的に、前記拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤はヤリ
ダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から得られることを特徴とする製薬成分に
よりこれを得ることができる。

【０００９】さらに、好ましくは、本発明の製薬成分は、ヤリダマグモ科（Sicariidae）の
クモの毒から得られる一つ以上の他の成分をさらに含むことができる。また別の
形態において、好ましくは、毒を含む他の有機体から得られた物質をさらに含む
ことができる。

【００１０】ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモとしては、ヤリダマグモ属（シケイリウ
ス、Sicarius）、イトグモ科（Loxosceles）、ヤマシログモ科（Scytodes）およ
びドライムサ科（Drymusa ）が好ましい。

【００１１】ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤が、ヤリダ
マグモ属（シケイリウス、Sicarius）、イトグモ科（Loxosceles）、ヤマシログ
モ科（Scytodes）、およびドライムサ科（Drymusa ）の種類のクモの毒から得ら
れた製薬成分が好ましい。

【００１２】さらに好ましくは、製薬成分において、ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持
つ物質および／または浸透剤は、シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）、シ
ケイリウステステイチェス（Sicarius testaceus）、ヒラタヤマシログモ（シケ
イリウスハーニ，Sicarius hahni）、およびシケイリウスアルボスピノサス（Si
carius albospinosus）のヤリダマグモ属（シケイリウス、Sicarius）のクモ種
、ドクイトグモ（Loxosceles rufescens）、ドクイトグモ（Loxosceles reclusa
）、およびオオドクイトグモ（Loxosceles laeta）のイトグモ科（Loxosceles）
のクモ種、および／またはサイトデストラシカ（Scytodes thoracica）、サイト
デスルファ（Scytodes rufa）、およびサイトデスロンギプス（Scytodes longip
es）のヤマシログモ科（Scytodes）のクモ種から得られる。ここでは、一つの有
機体のペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質の自然の相互作用を用いるこ
とができるという利点がある。

【００１３】しかしながら、本発明によれば、拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は
、異なる有機体から得ることもでき、または遺伝子工学により合成により準備す
ることもでき、または他の有機体から得られたペプチドトキシンを付加的に含む
こともできる。例えば、他のペプチドトキシンとしてヘビの毒カプトリルを含む
ことができ、拮抗作用を持つ物質はコブラの毒から得られたヒアルロニダーゼ（
hyaluronidase）とすることもできる。

【００１４】本発明によれば、用いられるペプチドトキシンは、好ましくは細胞破壊作用を
有する。

【００１５】拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は、好ましくはホスホリパーゼ（ph
ospholipase）またはヒアルロニダーゼまたはこれらの物質の組み合わせである
。本発明によれば、ペプチドトキシンに対する拮抗作用を有するおよび／または
浸透剤として機能するホスホリパーゼまたはヒアルロニダーゼとは異なる他の物
質を含むことができる。さらに好ましくは、拮抗作用を持つ物質は、本発明で記
述した種類のクモの毒中に存在するホスホリパーゼまたはヒアルロニダーゼの混
合物である。他の形態において、拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は、
ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモとは異なる有機体、例えば他の種類のクモ
またはヘビから得られたホスホリパーゼおよび／またはヒアルロニダーゼである
。好ましくは、ヘビの毒、好ましくはコブラの毒から得られたヒアルロニダーゼ
、またはアトラクタスピスビブロニー（Actrataspis bibronii）、バイティスア
リエタンス（Bitis arietans）、またはヴァイペラアスピスジニケリ（Vipera a
spis zinnikeri）から得られたホスホリパーゼを含む。浸透剤は、好ましくはホ
スホリパーゼである。

【００１６】好ましくは、ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透
剤は、フラクション分別法によりクモの毒から得ることができ、さらに好ましく
は、製薬成分は異なるフラクションから得られたペプチドトキシンおよび拮抗作
用を持つ物質および／または浸透剤から得られる。これにより、製薬成分の効力
を治療される腫瘍の種類および／または大きさによって好適に適合させることが
できる。

【００１７】ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は、未精製
（raw）のクモの毒混合物（クモの毒カクテル）から、タンパク質の分別法とし
て本質的に既知である方法により得られる。好ましくは、ペプチドトキシンおよ
び拮抗作用を持つ物質をゲルクロマトグラフィ、液体高速クロマトグラフィ（Ｈ
ＰＬＣ）、親和クロマトグラフィ法、および／またはイオン交換クロマトグラフ
ィ法により得ることができる。ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質およ
び／または浸透剤は、同様の方法で他の有機体から得ることもできる。

【００１８】さらに好ましくは、製薬成分には、腫瘍細胞に対して、ペプチドトキシンおよ
び拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤の破壊効果を与えるのに充分な量の
ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤が存在する。
好ましくは、ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質の比率および量は、そ
れぞれ、時間的および／または空間的な分散に関して、適用される組織中で制御
された分散を確保できるように選択される。さらに、この量は、ペプチドトキシ
ンが治療される患者に毒素の副作用をほとんど、または非常に微量のみしか与え
ないように選択される。しかしながら、この量は、治療される腫瘍および患者に
関して適合された量であることが理解される。互いを考慮した個々の物質の適切
な量および特性は、動物実験および／または設定基準に従った人体実験を骨格と
して、熟練工により定められる。好ましくは、浸透剤の量は、浸透剤が主に全て
の悪性細胞を認識し、ペプチドトキシンとの組み合わせで、選択的に腫瘍細胞を
破壊しつつ正常な細胞を広い範囲で影響のない状態に保つよう選択される。

【００１９】さらに好ましくは、製薬成分において、ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持
つ物質および／または浸透剤の量は、空間的および時間的に制御された分散を確
保するように選択される。

【００２０】好ましくは、製薬成分は、治療される腫瘍に基づいて選ばれた量のペプチドト
キシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤を含む。

【００２１】さらに好ましくは、製薬成分は、従来のキャリアおよび賦形剤（補形剤、exci
pients）を含むことができる。好ましくは、製薬成分は、活性物質（antibiotic
s）、抗真菌薬（antimycotics）、抗結核剤（anti−tuberculosis agents）、坑
寄生虫薬（anti−parasite agents）、細胞成長抑止剤（cytostatics）、アミノ
酸、創傷回復促進酵素（enzymes promoting wound−healing）、および／または
有糸分裂阻止剤（mitosis inhibitors）等のさらなる活性成分を含むことができ
る。この観点からは、ペニシリン／ストレプトマイシン、ポリミキシン／ゲンタ
マイシン、グルタミン（５％）、ミトポドサイド（mitopodocide）、ニチニチソ
ウアルカロイド（Vinca rosea alkaloids）、ブロメライナ（bromelaina）、ま
たはブロメラインが好ましい。

【００２２】本発明の製薬製剤に含まれるヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から得
たペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は、本質的
に既知の単離方法によって得ることができる。これらの好ましい例としては、フ
ラクション分別法がある。この方法で単離され、精製方法によって精製されたか
たちで得られた物質は、薬剤治療に適用される。好ましい方法は以下に詳細に示
す。

【００２３】しかしながら、ペプチドトキシンをヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒
から準備し、および拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤を化学合成または
遺伝子工学の組み替え的方法で準備をすることもできる。化学物質の典型例とし
て、本発明は本発明で提供される物質の誘導体または塩を含むことができる。例
えば、ペプチドトキシンは一つ以上のアミノ酸付加体、置換体、および／または
欠失したものを含むことができるが、本発明における医学的活性は確保されなけ
ればならない。

【００２４】ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤の準備は、
従来の化学的な方法で行うことができる。これらは、主に、フラクション分別方
法を含むが、免疫学的方法等他の方法で全毒混合物から所望の物質を「捕る」こ
とができる。

【００２５】本発明の製薬成分を製造（準備）する好ましい方法は以下のステップを含む。
ここで、製薬成分は、薬剤として効果的な量の少なくとも一つのペプチドトキシ
ンと、少なくとも一つの拮抗作用を持つ物質および／または少なくとも一つの浸
透剤を含み、ペプチドトキシンは、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒か
ら得られ、選択的に、前記拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は、ヤリダ
マグモ科（Sicariidae）のクモの毒から得られる。 −未精製のクモの毒混合物を本質的に既知の手法で準備し、同様に混合物を分
別してペプチドトキシンおよび選択的に拮抗作用を持つ物質および／または浸透
剤、および選択的に他の物質をフラクションとして、可能であれば互いに分離し
て取得し、 −ペプチドトキシンのフラクションを拮抗作用を持つ物質および／または浸透
剤を含む他のフラクション、または他の有機体から得られた拮抗作用を持つ物質
および／または浸透剤とあわせ、製薬的に効果的な成分を得る。

【００２６】クモの毒は種々のペプチドトキシンおよび種々の拮抗作用を持つ物質および／
または浸透剤、および選択的に、医療治療的に関連する他の活性成分を含む。こ
れらの全ての物質は、熟練工により決定された特異的な比率で製薬製剤として治
療に用いることができる。実施例で示した実験は、特にフラクション１〜１２に
関するが、特にここで示したフラクション分別の残りのフラクションも治療上有
効な物質を含む。また、フラクション分別方法は、単にペプチドトキシンおよび
拮抗作用を持つ物質を得ることができるということを例示として示したものにす
ぎない。他の実施の形態も可能である。

【００２７】この観点からは、未精製のクモの毒混合物はヤリダマグモ科（Sicariidae）の
メスのクモから準備される。ヤリダマグモ科（Sicariidae）のメスのクモは、オ
スのものよりも高い量の毒を生成するからである。

【００２８】さらに好ましくは、未精製のクモの毒混合物は手で搾り取ることにより得られ
る。未精製のクモの毒素混合物は特に注意深い方法で得られるので、有利である
。

【００２９】さらに、本発明の方法では、フラクション分別に先立ち、未精製のクモの毒混
合物を均一化し、さらに好ましくは、さらなる処理に先立ち、急速冷凍され、凍
結乾燥される。

【００３０】本発明の製薬成分は、薬剤の中に用いるのに適している。

【００３１】本発明によれば、製薬成分は、好ましくは腫瘍の治療に用いることができ、こ
こで、腫瘍の手術の補助的な治療として用いるのがさらに好ましい。

【００３２】明細書現在、世界中に約３５，０００種の真性クモ目が存在する。およそ３００種の
例外を除き、これらのすべては獲物を捕るために毒を用いる活性な有毒動物であ
る。クモは口が非常に小さくしか開かないので、体外の獲物を消化するために酵
素と毒を発達させ、液化した食物を吸い込む。彼らの毒のうち、約５０種のクモ
の毒は人類にも危険である。それにも関わらず、主にこれらの種類の毒は粗くし
か研究されていないか、または全く研究されていない。クモの毒の主成分は、以
下のものである。

【００３３】 − 消化酵素（digestive enzymes） − 生物起源アミン（biogenic amines） − 有機酸（organic acids） − ペプチド（peptides） − ペプチドトキシン（peptide toxins）

【００３４】ペプチドトキシンの中には、以下の毒素グループが含まれる。 − 心臓毒素（heart toxins） − 神経毒素（nerve toxins） − 血液毒素（blood toxins） − 細胞毒素（cell toxins） − 組織破壊毒素（tissue−destructive poisons）

【００３５】まず、すべての活性な有毒動物の全毒混合物は、消化しやすいように調整され
、異なる物質の相互作用により元々の動物細胞が特異的に変質される。

【００３６】本発明の毒混合物で用いられるクモの全種は、細胞毒性（cytotoxic）、壊死
（necrotic）およびアポトーシス（細胞死、apoptotic）の手法（毒の消化活動
）で機能する物質を含む。なお、これらは、細胞を溶解する効果を持つ物質に対
して拮抗する作用を持つ阻止物質、および／または浸透剤をも含む。

【００３７】クモは有用な状態のままの食物（全てのタンパク質構造および無傷のアミノ酸
）を消化しなければならないため、３億５千万年続く彼らの進化の過程で非常に
高い効果的な毒混合物を開発してきた。これらの毒混合物の中で、ペプチドトキ
シンの空間分解能は、ペプチドトキシンと拮抗作用を持つ物質との相互作用によ
り制御された方法で、特異的な活性酵素の時間および濃度のファクタによって制
限される。

【００３８】ここで、驚くべきことに、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモのクモ毒素成
分は腫瘍の治療に用いられることが判明した。

【００３９】混合物中に含まれる種々の物質の相助作用および反対作用により、非常に少量
の投与でも致死効果があるため、毒混合物全体としては製薬の目的では有用では
ない。防御用の毒としてクモから分泌され、かまれた人は以下の兆候が現れる。

【００４０】かまれた人の９０％以上がかまれたこと自体気がつかない。約９０分後、かま
れた箇所の周りに、皮膚にわたって既に柔らかくなった約３ｃｍの直径の猛烈に
化膿した部分的な壊死が現れる。２時間後、かまれた傷口は部分的に開き、例え
ば血液循環ショックおよび／または心臓の不整脈等の全身への影響が早くも現れ
る。さらに２〜３時間経過後、細胞を溶解する物質が活動を始める。かまれた人
は強い急激な排尿におそわれ、尿は既に出血している。毒は気管を壊死する作用
があるため、痛みは腹部全体に広がる。肝臓はクモにより運ばれた高濃度の毒お
よびそれらの組み合わせを代謝することができない。クモがかんでいる間に大量
の毒を注入した場合、体はその変質を制御することができず、血液への猛毒の結
果、腎臓不全のため患者は死んでしまう。

【００４１】しかし、驚くべきことに、ペプチドトキシンおよび反対の作用の（ペプチドト
キシンへの拮抗作用を持つ）酵素との組み合わせおよび／またはクモの毒に含ま
れる浸透剤、ここで少なくともペプチドトキシン、および選択的に拮抗作用を持
つ物質および／または浸透剤は、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から
得られ、これらは適切な濃度で適切な比率で腫瘍の治療に用いられ、平行して、
または腫瘍の手術に補佐的に用いられると、（残存する）腫瘍の組織を破壊する
ことができる。本発明によれば、例えば、手術の間に切除されなかった腫瘍組織
の破壊と、同様に、気管中での部分的な腫瘍の転移の形成を防ぐことができる。

【００４２】ペプチドトキシンと組み合わせて用いられる物質の作用のモード：拮抗作用：本発明によれば、インヴィトロで所望の、部分的に限定された領域
で、特に腫瘍となる領域において合併症なしで組織が破壊される。この場合の活
性のメカニズムは、ペプチドトキシンと毒混合物中に存在する拮抗作用を持つ物
質との自然で相互的な相互作用のモードに基づく。本発明によれば、拮抗作用を
持つ物質は、それに結合したペプチドトキシンを消化または分解することのでき
る物質を意味する。ヒトの細胞で行った実験により以下のことが判明した。細胞
破壊作用を持つペプチドトキシンのポーションは、この毒素を消化し、つまり拮
抗作用を持つ酵素よりも速く細胞培養に分配された。これらの発見に基づき、ペ
プチドトキシンと拮抗作用を持つ物質の組み合わせ成分の量は、空間的および位
置的に制御された破壊を行うために、分解されるべき組織領域の性質および量に
応じて定められる。電気泳動による分子量の簡単な決定法を用いて、接触前／接
触後の比較で、溶液に接触させた後、もとのペプチドトキシンは、検出されなか
った（対応するバンドが消えている）。本発明において、拮抗作用を持つ物質は
、例えば、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモから得られたホスホリパーゼお
よびヒアルロニダーゼとすることができ、クモの毒素にはさらに拮抗作用を持つ
物質が存在し、これらもまた本発明に用いられ得ることを妨げるものではない。

【００４３】浸透剤（共同作用）: 遺伝子欠陥体細胞または腫瘍細胞の表面のタンパク質の
構造は、それぞれ変質される（ロットシュピッヒエフ（Lottspeich F．）、ツ
ォーバスハー（Zorbas H．）（１９９８）：生物分析論（Bioanalytik）。
スペクトラムアカデミック出版（Spektrum Akademischer Verlag）、ハイデルベ
ルクベルリン）。本発明で用いられるホスホリパーゼおよび／またはヒアルロ
ニダーゼおよび選択的に加えられる物質は、腫瘍細胞を認識し、選択的に結合し
、これらの腫瘍細胞を溶解してその表面の構造を変質することができる。本発明
によれば、これは特にホスホリパーゼに当てはまる。動物由来のホスホリパーゼ
が単独で用いられた場合、癌患者のヒトのホスホリパーゼのように、免疫状態が
しばしば非常に低いので、本発明の腫瘍の治療のための療法には、例えばクモや
ヘビ等の他の生物を用いることができる。実験により、クモやヘビの毒素から得
られた異物ホスホリパーゼは、それぞれ、遺伝子欠陥ヒト体細胞を認識するだけ
でなく、結合した壊死活性または細胞毒性活性のタンパク質の浸透にも有用であ
ることが示された。ここではヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から得ら
れたペプチドトキシンであるこれらのタンパク質は、細胞中に導入されたら、細
胞を破壊する作用を持つ。アポトーシスの重要なマーカー、caspase−3が媒体（
上積supernatant）で測定されたため、この効果はおそらくアポトーシスである
。

【００４４】本発明によれば、浸透剤は、ペプチドトキシンとの組み合わせで、選択的に腫
瘍細胞を破壊し、正常な細胞を広い範囲で維持する物質とすることができる。そ
のため、本発明によれば、浸透剤もまたホスホリパーゼ、ヒアルロニダーゼおよ
び毒に含まれる他の物質の能力を含み、悪性細胞の表面構造が変質することによ
り悪性細胞を認識し、これらの悪性細胞に合体することにより細胞壁をゆるめ、
例えばそこに結合している活性な浸透物質（好ましくは細胞破壊効果を持つペプ
チドトキシン）を悪性細胞の中に導入する。この観点からは、本発明で用いられ
る浸透剤、特にホスホリパーゼは、メッセンジャーおよび補助剤（共同作用）と
して機能する。それゆえ、本発明によれば、浸透剤は浸透性増長効果には言及さ
れない。浸透性増長効果は、文献では主に組織内での分散を増長させる傾向のも
のを指すからである。

【００４５】分子量が約１００ｋＤａのペプチドトキシンは、組織破壊作用を持つ。これら
の高い分子量のため、およびこれらの空間的な構造のため、ピコグラムあたり組
織中の１００の細胞層にのみ分散する傾向がある。選択的に、未精製のクモの毒
混合物に含まれる他の物質は、上述した効果に寄与することができる。

【００４６】細胞の好ましくない破壊を避けるべく、治療すべき腫瘍の種類および大きさに
応じたペプチドトキシン／酵素混合物の絶対量および相対量に関する調整は、本
発明によれば、治療すべき組織の種類の生きているヒトの細胞（正常および悪性
）を用いたインヴィトロで決められる。この観点からは、分配傾向を決定するの
が最も重要である。これは、予備的な実験で、腫瘍組織の強さを腫瘍を取り囲ん
でいる組織の強さと比較して決定することができる（実施例２参照）。

【００４７】動物全毒混合物、またはこれらをカラムクロマトグラフィで分離し、分子量か
ら特定した個々の物質の活性のメカニズムは、ヒトの正常細胞および悪性細胞の
適切なラインでテストすることによって評価された。

【００４８】本発明によれば、少なくともペプチドトキシン、および選択的に、拮抗作用を
持つ物質および／または浸透剤は、ヤリダマグモ科（family of Sicariidae）の
クモの毒から得られる。より好ましくは、ヤリダマグモ属（Sicarius）、イトグ
モ科（Loxosceles）、ヤマシログモ科（Scytodes）、および／またはドライムサ
クモ種（Drymusa spider species）の種類である。ヤリダマグモ属（Sicarius g
enus）のクモの中では、シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）、シケイリウ
ステステイチェス（Sicarius testaceus）、ヒラタヤマシログモ（シケイリウス
ハーニ，Sicarius hahni）、およびシケイリウスアルボスピノサス（Sicarius a
lbospinosus）のクモ種が特に好ましく用いられる。イトグモ科（Loxosceles）
のクモの中では、ドクイトグモ（Loxosceles rufescens）、ドクイトグモ（Loxo
sceles reclusa）、およびオオドクイトグモ（Loxosceles laeta）のクモ種が本
発明に用いられ得る。ヤマシログモ科（Scytodes）のクモの中では、サイトデス
トラシカ（Scytodes thoracica）、サイトデスルファ（Scytodes rufa）、およ
びサイトデスロンギプス（Scytodes longipes）のクモ種が本発明に用いられ得
る。

【００４９】本発明によれば、ペプチドトキシンは、好ましくは、拮抗作用を持つ物質およ
び／または浸透剤、および選択的に含まれる他の活性物質と同じ生物体から得ら
れる。この方法によれば、自然界で進化したこれらの物質の相互作用の効果を用
いることができる。

【００５０】また別の好ましい形態において、拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は
、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモとは異なる生物体、例えば他の科のクモ
、ヘビ、サソリなどから得られる。この場合、しばしば、上述した物質をより多
い量得ることができる。このような他の生物体の例としては、コブラ、アトラク
タスピスビブロニー（Actrataspis bibronii）、バイティスアリエタンス（Biti
s arietans）、またはヴァイペラアスピスジニケリ（Vipera aspis zinnikeri）
が挙げられる。

【００５１】本発明の製薬成分は、まず本質的に公知の方法でクモから未精製の毒混合物を
準備し、その未精製のクモの毒混合物をこれもまたタンパク質の分離として本質
的に公知の分離手法を用いて分離し、ペプチドトキシンおよび拮抗作用を持つ物
質、および／または浸透剤を可能な限り互いに分離されたかたち、または分離さ
れたフラクションとしてそれぞれ得る。その後、異なるフラクションのペプチド
トキシンを拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤を含む他のフラクションと
あわせ、または個々のペプチドトキシンのフラクションを異なる生物体から得ら
れた拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤とあわせて製薬成分を準備する。
好ましくは、ハブ（pit viper snake）の毒のカプトリル（captopril）等のヘビ
の毒もまたペプチドトキシンとして含まれる。好ましくは、拮抗作用を持つ物質
としても、例えばコブラの毒等のヘビの毒から得られたヒアルロニダーゼ、およ
び／または浸透剤としてもアトラクタスピスビブロニー（Actrataspis bibronii
）、バイティスアリエタンス（Bitis arietans）、またはヴァイペラアスピスジ
ニケリ（Vipera aspis zinnikeri）から得られたヒアルロニダーゼが、一つ以上
のヤリダマグモ属（Sicarius）のペプチドトキシンのフラクションとの組み合わ
せで用いることができる。

【００５２】製薬成分の準備としては、本発明において、上記のフラクションをさらに有用
な活性試剤および／または従来の製薬的なキャリアおよび賦形剤と組み合わせる
ことができる。

【００５３】本発明の製薬成分の準備としては、上述した種類のクモから手動で搾り取って
得られた毒混合物から、例えばカラムクロマトグラフィ精製法により特異的な毒
成分（壊死活性および細胞毒性活性を持つペプチドトキシン）とともにホスホリ
パーゼおよびヒアルロニダーゼタイプの自然な拮抗作用を持つ物質（抑制物質）
および／または浸透剤を選び出すことができる。

【００５４】フラクション中に含まれる成分を分化するための分析法としては、ＨＰＬＣ−
ＭＳ−ＭＳ（例えばパーキンエルマー社（Perkin−Elmer company）の装置を用
いる）により行われる。ＭＳ−ＭＳにより分析された骨格構造に基づき、高分子
量の物質はホスホリパーゼおよびヒアルロニダーゼタイプの酵素であることがこ
の分析法により照明された。これらの酵素に加えて、ＭＳ−ＭＳ分析法により明
らかにされたこれらの原点、活性のモード、およびこれらのＮＸ、ＮＨＸ、ＮＯ
Ｘ、およびＳＫタイプの毒素基により、ペプチドトキシンにクラス分けされるポ
リペプチドが見られた。

【００５５】本発明の製薬成分に用いられる物質は、ヤリダマグモ属（Sicarius）のクモ（
Araneae）から自然に生成される毒で、元々動物タンパク質の捕食および消化を
容易にするために発達されたものである。この自然モードの活性は、基本的な毒
物質を機能を維持したまま、注意深く準備する（例えば手で搾り取る）ことによ
り保つことができる。

【００５６】電気的手法を用いた従来の節足動物の搾取方法（ヴィックマンデー（Weickm
ann D．）（１９９１）: ヤリダマグモ科の生態および毒素（Haltung und Gift
igkeit von Sicariidae）。クモ類学指示書（Arachnologischer Anzeiger）１６
：１２−１３; ヴィックマンデー（Weickmann D．）、バーダエル（Burda R
．）（１９９４）: サソリ毒素の電気泳動（Electrophoresis of scorpion veno
ms）。電気泳動フォーラム１９９４、アブストラクト、ミュンヘン工学大学（Te
chnische Universitat Munchen）、１０月２４−２６）、つまり動物の毒腺の
回収を誘発する電気パルスにより動物から毒を除去する電気的手法を用いた従来
の節足動物搾取法（milking methods）とは対照的に（この目的のため、動物は
好ましくは低体温にされる）、本発明による手動での毒混合物において、動物は
刺激されて、自然の防衛行動により彼らの毒を放出する。

【００５７】本発明の実施の形態によれば、クモを手で搾り取る方法が考えられる。これに
より、例えば電気的な搾り取り方法とは対照的に純真で単一な自然な毒を準備で
きる。電気的な搾り取り方法では、電流により、物質および分子がそれぞれ再構
築され、これらは活性が変質され、物質は動物が通常分泌しない毒に含まれるも
のとなる。これらの物質は、必ずしも必要ないが、医療効果を持つ毒混合物に含
まれる化合物の効率にネガティブな効果を及ぼすことができる。標準的な分析お
よび／または未精製の毒混合物のクオリティコントロールは、電気泳動法により
行うことができる。

【００５８】以下に本発明の好ましい形態を示すが、本発明の範囲はこれに限定されるもの
ではない。

【実施例】実施例１：本発明における製薬成分の準備

【００５９】搾り取りの手作業としては、ヤリダマグモ属（Sicarius spider species）の
シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）、シケイリウステステイチェス（Sica
rius testaceus）、ヒラタヤマシログモ（シケイリウスハーニ，Sicarius hahni
）、またはシケイリウスアルボスピノサス（Sicarius albospinosus）のそれぞ
れ亜成体（半成人subadult）および成人のメスの背中を一方の手で固定し、他方
の手で、殺菌したシリンジ（べーブラウン（B． Braun）社製の２ｍｌブラウ
ンインジェクト（Brauninject））および改造し殺菌したニードル（ベクトンデ
ィッケンソン社（Becton Dickinson）の２０または２１）を用いて、室温２１℃
から２７℃で湿度５０から７０％の昼間の時間、ニードルの平たい端で鋏角（ch
elicera）を触ることにより刺激して毒を集めた。

【００６０】ここでは、動物が不必要なストレスにさらされてしまうため、刺激する時間は
９０秒を越えないことが好ましい。毒のつめ（poison claws）に毒の滴が見られ
たら、ニードルを介してシリンジで吸い取る。各動物ごとに、新しい管（cannul
a）の新しいシリンジを用いた。その後、ニードルを保護ニードルキャップで閉
じた。その後すぐに、閉鎖されたシリンジ中の吸い取られた毒を乾燥器（exsicc
ator）に入れた。この中で少なくとも１２時間、少なくともマイナス１４℃で急
速冷凍して冷やした。

【００６１】急速冷凍から取り出した後、凍結した毒素全体を含むシリンジから、保護ニー
ドルキャップを取り外した。管をカールロースゲーエムべーハーウント
コーカーゲー（Carl Roth GmbH ＆ Co． KG）製（タンパク質のカラムクロマ
トグラフィ用溶媒：０．２５Ｍトリス／ＨＣｌ、ｐＨ６．５〜７．３、１．９２
Ｍグリシンの蒸留および脱イオン水／変性を防ぐため、バッファ中にはＳＤＳを
用いない）のタンパク質溶媒等の溶媒に浸し、１ｍｌ引き上げた。これにより、
溶液中に毒が得られた。その後、ニードルを取り外した。このようにしてシリン
ジ（５）中に準備された個々の毒溶液を室温で殺菌したきれいなテフロン（登録
商標）瓶に噴出（注射）した。密封したテフロン瓶を渦巻ミキサ（vortex mixer
）で３０秒間泡が立たないようにして振り動かし、均一な溶液を得た。

【００６２】混合の後、溶液全部を（コンタミネーションを避けるため）パースペックス（
Perspex）の漏斗を介して固定された透明なパースペックスのカラムに入れた。
カラムは、内径が１．５ｃｍ、壁の厚さが２ｍｍ、高さが５０ｃｍ、底部がテー
パ状で１．５ｍｍとなり、開放され、２０ｍｌのゲル（シグマ／スペルコ社（Si
gma／Supelco company）、ＡｃＡ３４；マトリックス：３％アクリルアミド／４
％アガロース；フラクション範囲（ＭＷ）：タンパク質：２０〜３５０Ｄａ；カ
ットオフリミット：７５０ｋＤａ；ビーズ直径：６０〜１４０μｍ）で充填した
。このようにして入れられた毒溶液は、ゲルを通過し、ゲル中のバッファと置換
された。

【００６３】毒溶液が完全にゲルに浸った後、さらに１６５ｍｌの溶媒（０．２５Ｍトリス
／ＨＣｌ、ｐＨ６．５〜７．３、１．９２Ｍグリシン）をカラムの上に乗せた。
ゲルを通過する間、この追加した溶媒はその中に含まれる毒溶液を置換する。カ
ラムの底部から溶出した最初の１５ｍｌは、バッファの残りなので、廃棄した。
この１５ｍｌの後、それぞれ４ｍｌずつ、４０のフラクションを回収した。４ｍ
ｌのフラクションへの分離は、好ましくはＳＤＳ−ＰＡＧＥである電気泳動によ
り決定された個々のフラクションの物理的および化学的特性によるものである。
ペプチド結合およびタンパク質を保護するために用いたバッファは、ロティロー
ド（Roti Load）１＋２（カールロースゲーエムべーハーウントコー
カーゲー（Carl Roth GmbH ＆ Co． KG）製、Karlsruhe；ＳＤＳ、グリセロール
、ブロモフェノールブルー（bromophenol blue）、リン酸バッファ、メルカプト
エタノール含有のロティロード１、メルカプトエタノールなしのロティロード２
）である。個々のフラクションをスクリューキャップが付いた殺菌したきれいな
５ｍｌのテフロン瓶に別々に回収した。個々のフラクションの質の精度評価は電
気泳動により行われた。

【００６４】本発明の製薬成分としては、フラクション１から１２の異なる組み合わせが用
いられた。これらのフラクションは、約７５から１７５ｋＤａの範囲の分子量の
クモの毒タンパク質成分を含んでいた。

【００６５】シケイリウステステイチェス（Sicarius testaceus）の全毒混合物のＳＤＳ−
ＰＡＧＥ電気泳動を図１に示す。

【００６６】この物質の構造を明らかにするために、個々のフラクションは、ＤＡＤ−ＵＶ
スペクトロメトリー（それぞれＤＡＤまたはＤＡＤＩ：娘イオンの直接分析（D
irect Analysis of Daughter Ions））と同様にＨＰＬＣ−ＭＳ−ＭＳにより調
べられた。高分子量の範囲（１０，０００Ｄａより大きい）では、知られた物質
は検出されなかった。しかし、骨格構造の決定により、この物質は毒素成分を持
つポリペプチド（＝ポリペプチドトキシン）の種類および一方ホスホリパーゼお
よびヒアルロニダーゼの種類に属することが示された。

【００６７】同様の成分を持つフラクションは一緒に回収することができる。次の処理およ
び保存のため、個々のフラクションは例えば次のパラメータを用いて凍結乾燥さ
れた。

【００６８】凍結乾燥するフラクションを開放されたテフロン瓶に入れ、穴をあけたアルミ
ニウムフォイルで覆い、マイナス２２℃に冷却した。サンプルが確実に凍るよう
に、１１時間冷却した。それから、０．２００ミリバールの真空状態にした。真
空状態になった後、フラクションを４℃に温め、この温度で、真空を保ったまま
、少なくとも２４時間放置した。この凍結乾燥処理の後、凍結乾燥したフラクシ
ョンを含むテフロン瓶をスクリューをしめてしっかりと密封した。保存安定性は
、室温で約３ヶ月、７℃では約１年、マイナス１４℃では約５年である。

【００６９】フラクションの含有物質、効果、および分子量を以下の表に示す。

【００７０】

【表１】

【００７１】この実施例で示した精製パラメータを用いることにより、この溶出プロファイ
ルおよびフラクションの成分をほぼ再現できた。

【００７２】フラクション１３〜４０は、３５０ｋＤａまでの分子量であった。これらの毒
成分の分子量が大きくなればなるだけ、さらなる調査のためにこれらを溶解する
のが困難になる。しかし、予備的な実験によれば、残りのフラクション全部（１
３〜４０）は、例えばヒトの骨膜（periosteum）細胞を溶解分離できることが示
された。さらに、種々のヒト細胞ラインにおける毒混合物の残りのテストで、コ
ラーゲンの変質が見られた。さらに、これらの効果から、これらは昆虫毒素を含
むことが説明できる。これらのフラクションの溶解可能な部分は、キイロショウ
ジョウバエ属のハエ（drosophila）、チストセラ（schistocera）およびバッタ
（locusta）の細胞ラインを破壊する。これらの予備実験の結果から、フラクシ
ョン１３〜４０の一つ以上のものは本発明の製薬成分として用いられ得る物質を
含んでいるとは思われないが、本発明から除外するわけではない。

【００７３】実施例２：本発明の製薬成分による腫瘍細胞の破壊活性腫瘍には多様多種の発病があるため、現在、包括的な治療法を提供するのは不
可能である。そのため、部分的な腫瘍だと判断された場合、まず手術による切除
が行われる。この観点における問題は、切除時に、不完全に除去された腫瘍組織
が空気に触れたら転移が起こるということである。この問題は、本発明の製薬成
分を手術による腫瘍の切除中に、切断した表面に適用することにより克服するこ
とができる。

【００７４】以下に示す一連の実験において、以下の腫瘍細胞のラインが用いられた。

【００７５】乳房癌混合細胞培養:この種の細胞は、１１人の女性患者から得られた腫瘍細胞
の混合物を培養することから始まり、１９８９年から長期間の培養および二次培
養が研究された。

【００７６】肺癌: ヴァイセンブルク（Weissenburg）病院の研究室における２つの細胞ライ
ン（一人の男性患者および一人の女性患者）で、１９８７年から長期間の培養お
よび二次培養が研究された。

【００７７】悪性黒色腫（Malig． Melanoma）:配列により、患者から得られた細胞と認識さ
れ、ここでも、１９９５年から長期間の培養および二次培養が研究された。

【００７８】前立腺腫:３人の患者の細胞培養の混合物、１９８８年から長期間の培養および
二次培養が研究された。現在まで、インヴィトロで治療上の成功は見られていな
い。

【００７９】子宮癌:２０００年８月から培養された５人の患者の細胞培養の混合物

【００８０】卵巣癌:２０００年８月から培養された３人の患者の細胞培養の混合物

【００８１】腺癌：２０００年８月から培養された３人の患者の細胞培養の混合物

【００８２】肝臓転移:小さい細胞気管支癌腫から始めた２人の患者の細胞培養混合物、２０
００年９月から培養

【００８３】肺転移:第一の腫瘍として乳房癌から始めた２人の患者の細胞培養混合物、２０
００年８月から培養

【００８４】ａ）全毒混合物の効果この実験シリーズの最初に、搾り取られたまま、または溶解された全毒混合物
、およびこれらの濃度に応じた活性を種々の細胞ラインで評価した。これらのテ
ストでは、毒の濃度を高くすると、消滅に必要な時間が減ったが、どのケースに
おいても、毒が全ての細胞培養を消滅させたため、満足な結果は得られなかった
。

【００８５】ヤリダマグモ属（Sicarius）のクモから得られた全毒混合物を正常な皮膚細胞
と黒色腫細胞とを混合した培養にのせたときの効果を図２に例として示す。培養
媒体としてＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓＦ−１２を用いた。細胞の残さを示す明るい点
と暗い点が所々に見られるだけである。全毒混合物を注入してから約１１時間後
の培養フラスコの底に残ったのはこれらだけである。

【００８６】ｂ）ヤリダマグモ属（Sicarius）のクモの毒混合物の異なる個々のフラクションの効果

【００８７】実験手順：細胞破壊物質を検出するために、全ての毒物混合物を実施例１で説明したよう
に、カラムクロマトグラフィで分別し、個々の成分の分子量は電気泳動により決
定した。個々のフラクション（平均４０）を、関連する細胞培養ライン上で比較
テストした。すなわち、対応する悪性腫瘍細胞との比較として、同じ条件で通常
の細胞ライン上でも行われた。この目的のために、各ケースごとに、腫瘍細胞を
正常な細胞の培養菌の一定の領域に導入した。その後、等張生理食塩水に溶解
したフラクションを、腫瘍細胞がある領域に適用（注入）し、比較として正常細
胞がある領域にも適用（注入）し、適用された細胞への効果を光学顕微鏡で観察
した。

【００８８】その後、個々のフラクション中の試験された約４０％の物質は、組織破壊活性
を持つことが観察された。さらに、これらの物質は腫瘍細胞で覆われた特異的な
領域をインヴィトロで、濃度に依存して溶解することができた。毒が通常の媒体
交換により洗い流された後、これらの領域は再成長した。培養の８分の１（１２
．５％）にのみ悪性細胞が見られた。

【００８９】ｃ）ヤリダマグモ属（Sicarius）のクモの毒混合物の異なるフラクションの組み合わせ効果上述したように、拮抗作用を持つ物質は、実質的にヒアルロニダーゼおよびホ
スホリパーゼタイプの酵素であることが判明した。

【００９０】これらのタイプの酵素は浸透酵素としても言及されることから、また特に、遺
伝子欠陥細胞に対する免疫補助剤として有機体中にホスホリパーゼが存在するた
め、酵素およびペプチドトキシンの組み合わせ物質をもちいた実験が行われた。
この目的のために、まず取り扱いが容易なフラクション１−１２を用いて実験を
行った。実験は、実施例２ｂ）で示したように行ったが、個々のフラクションの
代わりにフラクションの組み合わせを用いた。溶媒はここでも等張生理食塩水を
用いた。

【００９１】組み合わせ物質１を含む製薬成分：組み合わせ物質１は、１０重量％のSic．Enz．2と、１５重量％のSic．Tox．5
と、７５重量％の等張生理食塩水を含む。

【００９２】組み合わせ物質１（表４、実験５参照）の乳房組織細胞とともに培養した乳房
ガン細胞（mamma ca cells）に対する活性は、組み合わせ物質を乳房癌細胞に注
入した後、全ての乳房癌細胞が破壊され、正常な乳房組織細胞には影響を与えな
かった。さらに、組み合わせ物質１により溶解分離された領域は再成長したのが
観察された。

【００９３】組み合わせ物質１の分子構造および物理特性により、癌細胞は酵素に追跡され
、その自然の特性によって認識される。ペプチドトキシンは癌細胞に進入して、
癌細胞の伝染（communication）を破壊する（伝達物質の破壊）。それらの分子
構造により、ヤリダマグモ属（Sicarius）の毒素（Sicarius toxin）に存在す
るペプチドトキシンのほとんどは、タンパク質およびタンパク質化合物をそれそ
れ攻撃する。癌細胞は体自身のホスト／キャリアの免疫システムに対する興味深
い防衛メカニズムを発展させ、インターフェロン、腫瘍壊死ファクタおよび細胞
分裂等の媒体は必須の役割を果たす。これらの媒体は液体媒体中に存在するので
、溶液媒体中で用いられたペプチドトキシンの攻撃の最適な標的となる。本発明
のペプチドトキシンに激しく冒された癌細胞は増殖能力がなくなり、隣接する細
胞もペプチドトキシンに対する防御メカニズムを発展することができないという
証拠があるため、細胞間の相互的なコミュニケーションが破壊されたと考えるこ
とができる。

【００９４】組み合わせ物質１を含む製薬成分において、全体の組成に比べて酵素の量が大
きく増加した。

【００９５】組み合わせ物質２を含む製薬成分：組み合わせ物質２は、５重量％のSic．Enz．1と、５重量％のSic．Tox．3と、
９０重量％の等張ＮａＣｌ水溶液を含む。

【００９６】組み合わせ物質２を用いることにより、空間的に限定された一般的な細胞の破
壊が最適な方法で行われた。選択されたペプチドトキシンは、適用された組織を
破壊することができた。天然のタンパク質変質酵素の混合物は、ペプチドトキシ
ンの空間的および時間的な細胞破壊活性を制御する。

【００９７】乳房組織細胞培養中の乳房癌細胞における組み合わせ物質２の効果を図３およ
び図４に示す。図３に示す顕微鏡写真は、ＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓＦ−１２培地中
の正常な乳房組織細胞を示す。顕微鏡写真の左の半分は元々、タンパク質／酵素
の組み合わせにより破壊され、第二の培地に変えた後４８時間後に浄化された成
長している乳房癌を示す。正常な細胞は冒されず、残りの領域で成長し始める。
図４は、図３と同じ断面図であるが、注入後７２時間後のものである。その前は
空だった左側の領域（クロスの隣）に、正常な細胞が再成長し始めている。まず
、細胞の緩やかな集合ができ、その後本当の組織になる。

【００９８】これらの実施例は、除去すべき腫瘍の種類、大きさ、および局在化により組み
合わせ１または組み合わせ２を選択できることを示す。組み合わせ物質１および
２は、腫瘍の切除中に切断面に適用される。隣接する正常組織をできるだけ破壊
したくない手術では、組み合わせ１の利用が好適である。周囲の組織にはそれほ
ど注意しなくてよい場合には、組み合わせ物質２の利用が好適である。

【００９９】物質を混合する外科医は、腫瘍の種類および局在化によって、性質および量に
関して物質の組み合わせ３が加えられた表２および３を参照することができる。

【表２】 S 1 ＝ Sic．Enz．2 ＋ Sic．Tox．5 S 2 ＝ Sic．Enz．1 ＋ Sic．Tox．3 S 3 ＝ Sic．Enz．4 ＋ Sic．Enz．5．＋ Sic．Tox．6

【０１００】表３：等張生理食塩水中の溶液比（Ｍ／Ｖ）

【表３】

【０１０１】他の組み合わせ物質の活性モードを決定するための実験乳房癌細胞、肺癌細胞、黒色腫細胞、子宮癌細胞、卵巣癌細胞、腺癌細胞、気
管支癌腫の小さい細胞を最初の腫瘍としてこれから由来した肝臓転移、および乳
房癌を最初の腫瘍としてこれから由来した肺転移における他の物質の組み合わせ
の効果は、以下に示す表４から表１２に記載されている。実験は、上述したのと
同様に行った。これらの実験に用いられた物質の量は、ペプチドトキシン２ｍｇ
と、酵素２ｍｇ／０．９％生理食塩水１００ｍｌである。

【０１０２】図５および図６は、黒色腫細胞に表７に示した組み合わせ物質（Sic．Tox．2
＋Sic．Enz．4）を用いた効果を典型的に示す。この顕微鏡写真は、ＤＭＥＭ／
Ｈａｍ’ｓＦ−１２中で成長した肌細胞培養菌に、ペプチドトキシン／酵素の組
み合わせを注入してから３０分後に同じ個体から得た黒色腫細胞を種々の部位に
注入した領域を示す。顕微鏡写真の中心には、不規則な黒色腫細胞がまだ見られ
るが、これらの全ては毒の注入により溶解分離中である。個々の丸い正常な皮膚
細胞はペプチドトキシン／酵素混合物による攻撃を受けず、そのため、まだ目視
可能である。図６は、図５と同じ位置であるが、注入後３時間たったものである
。全ての腫瘍細胞が溶解分離されたことが明らかである。腫瘍の領域と正常な組
織の境界には、正常な肌細胞のみが見られ、元々腫瘍があった領域には正常な肌
細胞を見ることができる。

【０１０３】さらに、長期間の培養（インヴィトロで細胞層がより厚い）でも、酵素を高い
濃度で加えることにより、組織が毒に対して浸透しやすくなり、遺伝子欠陥細胞
を毒の影響を受けやすくでき、下の方の細胞層中の腫瘍組織の破壊が起こること
が判明した。

【０１０４】異なる組み合わせ物質を異なる細胞ラインに適用したときの影響の結果を表４
〜７に示す。

【０１０５】表４：乳房癌

【表４】

【０１０６】表５：乳房癌

【表５】

【０１０７】表６：肺癌

【表６】

【０１０８】表７：黒色腫細胞

【表７】

【０１０９】表８：５人の患者の子宮癌の混合細胞培養

【表８】

【０１１０】表９：３人の患者の卵巣癌の混合細胞培養

【表９】

【０１１１】表１０：３人の患者の腺癌の混合細胞培養

【表１０】

【０１１２】表１１：最初の腫瘍として気管支癌腫の小さい細胞から由来した肝臓転移。２人
の患者の混合細胞培養

【表１１】

【０１１３】表１２：最初の腫瘍として乳房癌腫から由来した肺転移。２人の患者の混合細胞
培養

【表１２】

【０１１４】実施例３酵素／ペプチドトキシンブロックテストペプチドトキシンおよび酵素の濃度を定め、ある酵素のフラクションが特定の
ペプチドトキシンのフラクションの影響を消すかを試すために、さらに実験を行
った。

【０１１５】実験手順：以下の表１３および１４に示す実験により、種々の皮膚細胞ラインから得られ
たPHA−stimulated細胞培養混合物と同様に、乳房組織細胞、乳房癌細胞、肌細
胞、幹細胞、肝臓細胞、肺細胞、および肺癌細胞を用いた。

【０１１６】試験する細胞に、酵素２ｍｇ／媒体（ＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓＦ−１２、約１．
２％のグルタミン、２．５％のペニシリン／ストレプトマイシン、および１０％
のウシの胎児の血清（fetal calf serum））１００ｍｌの溶液３ｍｌを加えた。
１２時間後、ペプチドトキシン溶液３ｍｌ（ペプチドトキシン２ｍｇ／０．９％
整理食塩水１００ｍｌ）を加えた。細胞培養フラスコ中に含まれる細胞への効果
を光学顕微鏡で観察した。ペプチドトキシンの中和／阻害が起これば、ペプチド
トキシンの効果が酵素によりすぐに消されるので、培養菌中に存在する細胞にお
けるペプチドトキシンの顕著な効果が起こらないことからその事実がわかる。そ
うでない場合は、細胞の破壊／溶解が起こる。

【０１１７】以下の表に示された結果からは、選択された濃度で上記で特定された細胞ライ
ンにおいて、特定の酵素はいつも特異的に同じペプチドトキシンを溶解分離する
ことが示される。そのため、これらの濃度の割合で上記の細胞ラインにこれらの
組み合わせを用いることは、ペプチドトキシンの空間的分配の広がりを避けるこ
とができるので有利である。しかしながら、酵素およびペプチドの濃度が変わり
、他の細胞ラインを用いた場合は結果は異なるものになるかもしれない。

【０１１８】表１３および１４：酵素／ペプチドトキシンブロックテスト

【表１３】

【表１４】

【０１１９】実施例４:ヘビ毒液（snake venom）ホスホリパーゼとの組み合わせさらなる実験により、個々のヤリダマグモ属（Sicarius）のクモの毒素には、
ヘビの毒混合物から得られた特異的なホスホリパーゼを拮抗剤として用いること
ができることが判明した。

【０１２０】ヘビの全毒混合物にもまた、ヒアルロニダーゼおよびホスホリパーゼタイプ（
例えばホスホリパーゼＡｌ、ホスホリパーゼＤ−Ｂ、ホスホリパーゼＥ）の酵素
が含まれることが知られている（ハンキンエーハー（Hankin E．H．）（１
８９９）：コブラ毒の血への作用（パスおよびバクテリア）（The action of co
bra poison on the blood（Path ＆ Bact．））。元々はパスおよびバクテリア
の２中、１８９７／ハンキンエーハー（Hankin E．H．）（１９００）：ヘ
ビの毒素および毒素ｐ．血清の溶血作用（The haemolytic action of snake tox
ins and toxic p． Sera）、４５０．薬学刊行物（Med． Gazette）／デニス
ゲーヴェーぺー（Dennys G．W．P．）（１９１６）：ヘビの毒素の実験およ
び重要なノート（Experiments with snake venoms and some important notes）
、薬学刊行物（Med． Gazette）／アルデシーレカー（Ardeshire K．）（１
９１８）：クサリヘビ（Echis carinata）にかまれた後の回復（Bite from Echi
s carinata−recovery （corr．）、薬学刊行物（Med． Gazette）／ヌーベルク
ローゼンベルク（Neuberg Rosenberg）（１９０７）：脂肪分解、癒着、およ
び溶血（Lipolyse、Agglutinationおよびhaemolysis）、ベーカーエルヴェ
ー（ B． kl． W．）／ラムおよびフンラー（Lamb and Hunler）（１９０４−１
９０７）：異なる種類の毒蛇の毒素の作用およびその神経システム（Actions of
venoms of different species of poisonous snakes and the nervous system
）、ランセット（Lancet）／リンデマンヴェー（Lindemann W．）（１８９８
）：マムシの有毒物の分泌の特徴（Uber die Sekretionserscheinungen der Gif
tdruse der Kreuzotter）、アルヒエフミクルアナト（Arch． f． mikr．
Anat．）、および自身の実験（ブルダエル（Burda R．）、リクターエル
（Richter R．）、シュロッテンロハーエー（Schrottenloher E．）、ヴィッ
クマンデー（Weickmann D．）（２００１）：単色の写真フィルムを用いた獣
の尾の毒中の酵素を可視で高速に照明する方法（Visueller Schnellnachweis fu
r Enzyme in Schlangengiften unter Zuhilfenahme eines Schwarzweissfilmes
）、印刷中））。

【０１２１】ヘビ毒液は大量に準備でき、その中に含まれる酵素の割合が高いため、ヘビ毒
素から得られた個々の酵素フラクションの拮抗作用をヤリダマグモ属（Sicarius
）の毒素で試した。これらの実験において、以下の結果が得られた。

【０１２２】表１５：酵素／ペプチドトキシンブロックテスト

【表１５】

【０１２３】「Sic．Tox．」は、それぞれ上記したとおりである。「AtractaspisEnz．1」は、アトラクタスピスビブロニー（Atractaspis bibro
nii）の毒から得られたＡタイプのホスホリパーゼを示す。「Bit．Phos．A2」は、黒い色の南アフリカ種のバイティスアリエタンス（Bit
is arietans）（可能で有れば異なる種類、前述したようにバイティスレイチェ
ンシス（Bitis lachensis））の毒素から得られたホスホリパーゼＡ２を意味す
る。「Bit．Phos．D」は、黒い色の南アフリカ種のバイティスアリエタンス（Biti
s arietans）（可能で有れば異なる種類、前述したようにバイティスレイチェン
シス（Bitis lachensis））の毒素から得られたホスホリパーゼＤを示す。「Vip．asp．Phos．A1」は、ヴァイペラアスピスジニケリ（Vipera aspis zin
nikeri）から得られたホスホリパーゼを意味する。

【０１２４】実施例５：他のヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモ種から得られたフラクションの実験シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）この場合、特に、シケイリウステステイチェス（Sicarius testaceus）の７２
ｋＤａのSic．Tox．1および１２４ｋＤａのSic．Tox．5と同様の乳房癌破壊特性
を持つ６９ｋＤａのシケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）の毒素がテストさ
れた。組み合わせのホスホリパーゼとして、２１〜２４ｍｌの後、カラムから溶
出したシケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）の酵素フラクションが用いられ
得る。これらのフラクションは、シケイリウステステイチェス（Sicarius testa
ceus）としても示される。

【０１２５】表１６：シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）の毒から得たフラクションを
乳房癌に適用

【表１６】

【０１２６】オオドクイトグモ（Loxosceles laeta）この場合、大規模肺癌細胞として特に、全毒混合物から得られた約９５ｋＤａ
のペプチドトキシン、およびホスホリパーゼとしては、３７〜４０ｍｌの後カラ
ムから溶出したオオドクイトグモ（Loxosceles laeta）の酵素フラクションが用
いられた。

【０１２７】表１７：オオドクイトグモ（Loxosceles laeta）の毒から得たフラクションを大きい肺癌細胞に適用

【表１７】

【０１２８】実施例６：Sic．Enz．2のSic．Tox．5に対する共同および時差的な拮抗作用上述したように、Sic．Enz．2は乳房癌細胞に選択的である（表４の組み合わ
せ物質１参照）。一方、Sic．Enz．2は、Sic．Tox．5のブロック剤としても示さ
れた（表１３参照）。しかし、表４および表１３は、２つの全く異なる実験に基
づく。

【０１２９】表４は、インヴィトロで腫瘍細胞を選択的に殺すための組み合わせを示す。こ
の場合、Sic．Enz．2は悪性の乳房癌細胞を見つけ、細胞壁をゆるめてペプチド
トキシンが届きやすいようにしてSic．Tox．5が進入して細胞を破壊するように
する。この目的のためには、細胞培養菌に加える直前に、２つの物質を混合する
。

【０１３０】表１３は用いられたのと同じ物質の組み合わせを示すが、これらは１２時間の
間隔を隔てて混合された（最初にSic．Enz．2、続いてSic．Tox．5）。

【０１３１】これらの実験の結果は、矛盾するものではない。実験５の組み合わせでは、表
４は、ここで示した表８の時間差で酵素／ペプチドブロック検査と比較できない
からである。この酵素／ペプチドブロック検査の条件で、Sic．Enz．2はSic．To
x．5に対する拮抗作用を持つことも明らかである。

【０１３２】実施例７：拮抗作用に関するさらなる実験一般的に、ヒアルロニダーゼおよびホスホリパーゼは一つの族／科の酵素であ
る（カントーレゲー（Cantore G．）、ベッティーニエス（Bettini S．）（
１９５８）：Contributo allo studio dell’azione farmocologica dell venen
o di L． tredecimguttatus Rossi、気管の筋糸への作用（Il Azione sulla mus
culatura bronchiale．）、リヴパラシット（Riv． parasit．）、１９：２９
７）。ここで、個々の構成物は変性させる物質の性質によって異なる活性モード
を持つ。

【０１３３】これまでのところ、これらのヒアルロニダーゼおよびホスホリパーゼは、浸透
性の酵素として記載されてきた（ハイツヨット（Heitz J．）、ノーメント
ベー（Norment B．）（１９７４）：ブラウンレクルーセ毒素中のアルカリ性の
ホスファターゼの活性特徴（Characteristics of an alkaline phosphatase act
ivity in brown recluse venom）、トキシコン（Toxicon）１２：１８１／Bernh
eimer A．、et al．（1985）：隔離されたイトグモ科のクモおよびコリネバク
テリア偽結核の毒物学比較（Comparative toxicology of Loxosceles reclusa a
nd Corynebacterium pseudotuberculosis）、サイエンス２２８：５９０−５９
１）。

【０１３４】本発明の骨格として、ここで用いられたこれらの酵素グループの個々の構成物
は、用いられるペプチドトキシンへの拮抗作用を持ち、そのため、ペプチドトキ
シンの時間的および空間的な分散を抑制する。

【０１３５】拮抗作用の証拠は、既に上述したように、電気泳動を用いた前／後比較による
物質の分子量の決定を通じて得られた。拮抗作用の場合、最初に現れていたペプ
チドトキシンのバンドが消滅している。

【０１３６】乳房癌および正常な乳房組織細胞の混合細胞培養菌に、マークされた乳房癌細
胞が豊富な領域に細いストリンジで、Sic．Tox．1を狙い加えたものを用いた実
験により、以下のことが判明した。

【０１３７】約１０時間の間、Sic．Tox．1は、注入した領域から円を描いて比較的均一に
分散した。この分散の間、正常な細胞および腫瘍の細胞の両方とも溶解された。
これらのプロセスは、倒立顕微鏡（inverted microscope）により容易に観察す
ることができる。上記の１０時間後、Sic．Tox．1の分散速度は著しく低下した
が、Sic．Tox．1の特異的な細胞への破壊効果は１日、２日、および７日後でも
、細胞破壊の領域が大きくなっていることから、倒立顕微鏡により観察された。

【０１３８】すでに表１３および１４に示すように、Sic．Tox．1は６つの異なるSic．enzy
mesに結合する。Sic．Enz．3を加えることにより、Sic．Tox．1の溶解効果は９
時間後に完全に止まった。媒体および細胞の溶解物の電気泳動からは７２ｋＤａ
のバンド（Sic．Tox．1の分子量）は見られなかった。

【０１３９】変形オクタロニー法（Ouchterlony）テストを用いて、Sic．Tox．1を用いたSi
c．Enz．3の「抗原／抗体効果」、つまりSic．Enz．3のSic．Tox．1への結合を
さらに明らかにした。さらに、Sic．Enz．3によるSic．Tox．1の中和により、溶
解分離された領域が再成長するのが見られた。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、シケイリウステステイチェス（Sicarius testaceus）およびシケイリ
ウスエスピー（Sicarius sp．）アルゼンチンから得られた全毒混合物のＳＤＳ
−ＰＡＧＥ電気泳動（５ｃｍ集合ゲル、１５ｃｍ分離ゲル、分子量１０〜２００
ｋＤａ）を示す図である。レーン１〜３は標準分子量、レーン４および５はシケ
イリウステステイチェス（Sicarius testaceus）から得られた全毒混合物、レー
ン６はシケイリウスエスピー（Sicarius sp．）アルゼンチンから得られた全毒
混合物である。

【図２】図２は、ヤリダマグモ属（シケイリウス、Sicarius）全毒混合物を悪性細胞と
正常皮膚細胞の混合培養土にのせた効果を示す図である。

【図３】図３は、本発明の成分（Sic．Tox．3＋Sic．Enz．1）を乳房組織に存在する乳
房癌細胞にのせて、注入から４８時間後の効果を示す光学顕微鏡写真を示す図で
ある。

【図４】図４は、図３と同じ領域であるが、物質の組み合わせ（Sic．Tox．3＋Sic．En
z．1）を注入してから７２時間後を示す図である。

【図５】図５は、本発明の成分（Sic．Tox．2＋Sic．Enz．4）の皮膚細胞培養土に存在
する黒色腫細胞上での選択的な活性を示す図である。

【図６】図６は、図５と同じ領域だが、注入３時間後を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｋ 37/48 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C084 AA02 AA03 AA19 AA22 DA35 DC22 DC25 MA02 NA14 ZB26 4C087 AA01 AA02 AA04 BB18 BB32 MA02 NA14 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】腫瘍の治療のための製薬成分であって、製薬的に効果的な量
の製薬成分が、ａ）少なくとも一つのペプチドトキシンと、ｂ）拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／または少なくとも一つの浸
透剤と、を含み、少なくとも前記ペプチドトキシンは、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの
毒から得られ、選択的に、前記拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤はヤリ
ダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から得られることを特徴とする製薬成分。
【請求項２】請求項１に記載の製薬成分であって、ヤリダマグモ科（Sica
riidae）のクモの毒から得られる一つ以上の他の成分をさらに含むことを特徴と
する製薬成分。
【請求項３】請求項１または２に記載の製薬成分であって、前記ペプチド
トキシンおよび前記拮抗作用を持つ物質および／または浸透剤は、ヤリダマグモ
属（Sicarius）、イトグモ科（Loxosceles）、ヤマシログモ科（Scytodes）、お
よび／またはドライムサクモ種（Drymusa spider species）から得られることを
特徴とする製薬成分。
【請求項４】請求項１乃至３いずれかに記載の製薬成分であって、前記ヤ
リダマグモ属（Sicarius）のクモ種は、シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni
）、シケイリウステステイチェス（Sicarius testaceus）、ヒラタヤマシログモ
（シケイリウスハーニ，Sicarius hahni）、およびシケイリウスアルボスピノサ
ス（Sicarius albospinosus）であって、前記イトグモ科（Loxosceles）のクモ
種は、ドクイトグモ（Loxosceles rufescens）、ドクイトグモ（Loxosceles rec
lusa）、およびオオドクイトグモ（Loxosceles laeta）であって、および／また
は、ヤマシログモ科（Scytodes）のクモ種は、ユカタヤマシログモ（サイトデス
トラシカ、Scytodes thoracica）、サイトデスルファ（Scytodes rufa）、およ
びサイトデスロンギプス（Scytodes longipes）であることを特徴とする製薬成
分。
【請求項５】請求項１乃至４いずれかに記載の製薬成分であって、前記拮
抗作用を持つ物質および／または前記浸透酵素は、ヤリダマグモ科（Sicariidae
）のクモとは異なる有機体から得られることを特徴とする製薬成分。
【請求項６】請求項１乃至５いずれかに記載の製薬成分であって、前記ペ
プチドトキシンとして、少なくとも一つのヘビの毒、好ましくはハブ（pit vipe
r）の毒のカプトプリルを含むことを特徴とする製薬成分。
【請求項７】請求項１乃至６いずれかに記載の製薬成分であって、前記拮
抗作用を持つ物質および／または前記浸透剤は、ヘビの毒、好ましくはコブラの
毒から得られた少なくとも一つのヒアルロニダーゼ、またはアトラクタスピスビ
ブロニー（Actrataspis bibronii）、バイティスアリエタンス（Bitis arietans
）、またはヴァイペラアスピスジニケリ（Vipera aspis zinnikeri）から得られ
た少なくとも一つのホスホリパーゼを含むことを特徴とする製薬成分。
【請求項８】請求項１乃至７いずれかに記載の製薬成分であって、前記拮
抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／または少なくとも一つの浸透剤は、
ホスホリパーゼまたはヒアルロニダーゼまたはこれらの組み合わせであることを
特徴とする製薬成分。
【請求項９】請求項１乃至８いずれかに記載の製薬成分であって、前記浸
透剤は、ホスホリパーゼであることを特徴とする製薬成分。
【請求項１０】請求項１乃至９いずれかに記載の製薬成分であって、前記
ペプチドトキシンおよび前記拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／また
は少なくとも一つの浸透剤は、フラクション分別法により前記クモから得られる
ことを特徴とする製薬成分。
【請求項１１】請求項１乃至１０いずれかに記載の製薬成分であって、前
記ペプチドトキシンおよび前記拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／ま
たは少なくとも一つの浸透剤は、ゲルクロマトグラフィ法、液体高速クロマトグ
ラフィ（ＨＰＬＣ）、親和クロマトグラフィ法、および／またはイオン交換クロ
マトグラフィ法により前記クモの毒から得られることを特徴とする製薬成分。
【請求項１２】請求項１乃至１１いずれかに記載の製薬成分であって、前
記ペプチドトキシンおよび前記拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／ま
たは少なくとも一つの浸透剤は、内径１．５ｃｍ、高さ５０ｃｍ、底部がテーパ状で１．５ｍｍのカラムを２０
ｍｌのゲルクロマトグラフィゲルＡｃＡ３４、マトリックス：３％アクリルアミ
ド／４％アガロース、フラクション範囲：２０〜３５０Ｄａ、カットオフリミッ
ト：７５０ｋＤａ、ビーズ直径：６０〜１４０μｍで充たし、シケイリウスオウェニ（Sicarius oweni）、シケイリウステステイチェス（Si
carius testaceus）、ヒラタヤマシログモ（シケイリウスハーニ，Sicarius hah
ni）、またはシケイリウスアルボスピノサス（Sicarius albospinosus）から得
たクモの毒を０．２５Ｍトリス／ＨＣｌ、ｐＨ６．５〜７．３、および１．９２
Ｍグリシンを含む蒸留および脱イオン化した水溶液中で均一な状態でゲルの上に
置き、毒の溶液がゲルを通過した後、０．２５Ｍトリス／ＨＣｌ、ｐＨ６．５〜７．
３、および１．９２Ｍグリシンを含む蒸留および脱イオン化した水１６５ｍをカ
ラム上に乗せ、最初の１５ｍｌの溶出液を捨て、フラクションを４ｍｌずつ回収
し、フラクション１、２、４、７、９、および１０でペプチドトキシンを得られ
、拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／または少なくとも一つの浸透剤
がフラクション３、５、６、８、１１、および１２で得られたことを特徴とする
製薬成分。
【請求項１３】請求項１乃至１２いずれかに記載の製薬成分であって、ク
モの毒の異なるフラクションから得られた前記ペプチドトキシンおよび前記拮抗
作用を持つ少なくとも一つの物質および／または少なくとも一つの浸透剤を含む
ことを特徴とする製薬成分。
【請求項１４】請求項１乃至１３いずれかに記載の製薬成分であって、前
記ペプチドトキシンおよび前記拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／ま
たは少なくとも一つの浸透剤は、充分な量存在し、ペプチドトキシンの腫瘍細胞
および前記拮抗作用を持つ物質および／または前記浸透剤に関する破壊効果が得
られることを特徴とする製薬成分。
【請求項１５】請求項１乃至１４いずれかに記載の製薬成分であって、前記量は、組織中での空間的および／または時間的に制御された分散を確保す
るように選択されたことを特徴とする製薬成分。
【請求項１６】請求項１乃至１５いずれかに記載の製薬成分であって、前
記ペプチドトキシンおよび前記拮抗作用を持つ少なくとも一つの物質および／ま
たは少なくとも一つの浸透剤の量は、治療対象の腫瘍に応じて選択されることを
特徴とする製薬成分。
【請求項１７】請求項１乃至１６いずれかに記載の製薬成分であって、従
来のキャリアおよび賦形剤および／またはさらなる活性試剤を含むことを特徴と
する製薬成分。
【請求項１８】請求項１乃至１７いずれかに記載の製薬成分であって、前
記従来のキャリアおよび賦形剤として、等張性溶液、プロテイン溶液、アミノ酸
溶液および／または生命殺傷性の溶液（biocidal solutions）、好ましくはリン
ガー液、０．９％ＮａＣｌ溶液、ヒトアルブミン溶液および／またはグルタミン
溶液を含み、前記さらなる活性試剤として活性物質（antibiotics）、抗真菌薬
（antimycotics）、抗結核剤（anti−tuberculosis agents）、坑寄生虫薬（ant
i−parasite agents）、アミノ酸、創傷回復促進酵素（enzymes promoting woun
d−healing）、有糸分裂（mitosis inhibitors）および／または細胞成長抑止剤
（cytostatics）を含むことを特徴とする製薬成分。
【請求項１９】請求項１乃至１８いずれかに記載の製薬成分であって、前記ペプチドトキシンおよび／または前記拮抗作用を持つ物質および／または
前記浸透剤の誘導体は、製薬製剤に含まれ、および／または前記ペプチドトキシ
ンおよび／または前記拮抗作用を持つ物質および／または前記浸透剤は、化学合
成または生物工学的な組み替え手順により準備され、これらの効果は、ヤリダマ
グモ科（Sicariidae）のクモの毒に含まれる毒に由来する前記毒、または前記拮
抗作用を持つ物質および／または前記浸透剤およびこれらの誘導体に対応するこ
とを特徴とする製薬成分。
【請求項２０】薬剤として効果的な量の少なくとも一つのペプチドトキシ
ンと、少なくとも一つの拮抗作用を持つ物質および／または少なくとも一つの浸
透剤を含む製薬成分を製造する方法であって、前記ペプチドトキシンは、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモの毒から由来
し、選択的に、前記拮抗作用を持つ物質および／または前記浸透剤は、ヤリダマ
グモ科（Sicariidae）のクモの毒から由来し、未精製のクモの毒混合物を本質的に既知の手法で準備し、同様に前記混合物を
分別して前記ペプチドトキシンおよび選択的に前記拮抗作用を持つ物質および／
または前記浸透剤、および選択的に他の物質をフラクションとして、可能であれ
ば互いに分離して取得し、前記ペプチドトキシンのフラクションを拮抗作用を持つ物質および／または浸
透剤を含む他のフラクション、または他の有機体から得られた拮抗作用を持つ物
質および／または浸透剤とをあわせ、製薬的に効果的な成分を得ることを特徴と
する製薬成分の製造方法。
【請求項２１】請求項２０に記載の方法であって、前記未精製のクモの毒
混合物は、ヤリダマグモ科（Sicariidae）のメスのクモから得られることを特徴
とする製薬成分の製造方法。
【請求項２２】請求項２０または２１に記載の方法であって、前記未精製
のクモの毒混合物は、手で搾り取ることにより得られることを特徴とする製薬成
分の製造方法。
【請求項２３】請求項２０乃至２２いずれかに記載の方法であって、前記
未精製のクモの毒混合物は、分別する前に均質化されることを特徴とする製薬成
分の製造方法。
【請求項２４】請求項２０乃至２３いずれかに記載の方法であって、製薬
成分にする処理の前に、前記フラクションは、急速冷凍され、さらに好ましくは
凍結乾燥されることを特徴とする製薬成分の製造方法。
【請求項２５】請求項１乃至１９いずれかに記載の製薬成分を薬剤に用い
ることを特徴とする方法。
【請求項２６】請求項１乃至１９いずれかに記載の製薬成分を腫瘍の病気
の治療および／または腫瘍の外科手術の間の補助治療として用いることを特徴と
する方法。
【請求項２７】拮抗作用を持つ物質とともに用いるペプチドトキシンであ
って、少なくとも前記ペプチドトキシンはヤリダマグモ科（Sicariidae）のクモ
毒から得られたことを特徴とするペプチドトキシン。