JP2003514030A - 感染性因子に対する免疫応答を刺激するための組成物および方法 - Google Patents
感染性因子に対する免疫応答を刺激するための組成物および方法Info
- Publication number
- JP2003514030A JP2003514030A JP2001537983A JP2001537983A JP2003514030A JP 2003514030 A JP2003514030 A JP 2003514030A JP 2001537983 A JP2001537983 A JP 2001537983A JP 2001537983 A JP2001537983 A JP 2001537983A JP 2003514030 A JP2003514030 A JP 2003514030A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- immune response
- influenza
- mucoadhesive
- composition
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
本発明は、熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシンおよび抗原を使用して、感染性因子（特に、インフルエンザウイルス）に対する保護のために、粘膜付着抗原に対する免疫応答を安全に刺激するための経口組成物を提供する。本発明の組成物は、粘膜付着性または腸関連結合特性を有する抗原に使用する使用のために適切である。免疫応答を刺激する方法およびＩｇＡ抗体を誘起するための方法も、提供される。本発明はまた、少なくとも１種の有効量の粘膜付着抗原を哺乳動物に経口投与することによる、哺乳動物の免疫応答を惹起する方法を包含する。
Description
【０００１】
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、米国出願番号６０／１６０，
０２８（１９９９年１０月１８日出願）（本明細書中でその全体が参考として援
用される）に対する優先権の恩恵を主張する。
０２８（１９９９年１０月１８日出願）（本明細書中でその全体が参考として援
用される）に対する優先権の恩恵を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、感染性因子に対する免疫応答を刺激するための組成物および方法に
関する。具体的には、本発明は、感染性因子由来の少なくとも１種の粘膜付着抗
原および少なくとも１種の熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
エンテロトキシンを含有する経口組成物に関する。本発明の組成物および方法は
、インフルエンザに対して特に有用である。
関する。具体的には、本発明は、感染性因子由来の少なくとも１種の粘膜付着抗
原および少なくとも１種の熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
エンテロトキシンを含有する経口組成物に関する。本発明の組成物および方法は
、インフルエンザに対して特に有用である。
【０００３】
（発明の背景）
感染性疾患は、有意な罹患率および死亡率を全世界にわたって担う。感染性疾
患の処置は、しばしば、患者が感染し、そして既に感染の影響に苦しんだ後に開
始される。感染の有害な影響が生じる前に感染を予防するためのストラテジーを
開発する必要性が、長い間存在している。
患の処置は、しばしば、患者が感染し、そして既に感染の影響に苦しんだ後に開
始される。感染の有害な影響が生じる前に感染を予防するためのストラテジーを
開発する必要性が、長い間存在している。
【０００４】
感染性疾患の大部分は、粘膜表面を介してもたらされる。分泌免疫グロブリン
Ａ（ＩｇＡ）は、このような感染に対する防御の第１線として機能し、付着およ
び粘膜を通る移動を防ぎ、そして感染した上皮細胞内でのウイルス複製を阻害し
得る。
Ａ（ＩｇＡ）は、このような感染に対する防御の第１線として機能し、付着およ
び粘膜を通る移動を防ぎ、そして感染した上皮細胞内でのウイルス複製を阻害し
得る。
【０００５】
１つの特定の重要な感染性疾患は、インフルエンザである。インフルエンザは
、無防備な（例えば、非常に若年、非常に老年、および免疫易感染性個体）集団
における高い罹患率、および一般的な集団における有意な死亡率を示す、重篤な
ヒト疾患である（Ｇｌｅｚｅｎ Ｐ．Ｗ．（１９８２）Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｒ
ｅｖ．４：２５−４４）。毎年のインフルエンザの激増に関連する社会的経費お
よび経済的費用は高い（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎ
ｓ．「Ｎｅｗ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｇａｉｎｓｔ
ｉｎｆｌｕｅｎｚａ．」ＮＥＷ ＧＥＮＥＲＡＴＩＯＮ ＶＡＣＣＩＮＥＳ，
第２版（Ｌｅｖｉｎｅ Ｍ．Ｍ．ら編）．Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ．Ｉｎｃ
．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９７．５４５−５７０頁）。ホルマリン−不活性化
全ウイルスおよび分離−ウイルスの筋内（ｉ．ｍ．）ワクチンは、インフルエン
ザの蔓延および重症度を制御するために市販されている（Ｇｈｅｎｄｏｎ Ｙ．
（１９８９）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５７：３７−４５：Ｒｉｄ
ｄｉｏｕｇｈ Ｍ．Ａ．ら（１９８３）ＪＡＭＡ ２４９：３１８９−９５）。
これらの予防ワクチンは、インフルエンザを制御する際に重要であるが、予防ワ
クチンの効率および受容可能性を制限する多く欠点を有する。現在の市販のイン
フルエンザワクチンは、ウイルスチャレンジに対して保護性である、健康な成人
ヒトにおける血清抗体応答を誘導することが示されるが、この保護性免疫性は、
効力が可変である傾向にあり、そして比較的有効期間が短い（特に、高齢者およ
び胎児集団において）（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎ
ｓ（１９９７）５４５−７０頁；Ｇｈｅｎｄｏｎ Ｙ．（１９８９）Ａｄｖ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５７：３７−４５；Ｒｉｄｄｉｏｕｇｈ Ｍ．Ａ．
ら（１９８３）ＪＡＭＡ ２４９：３１８９−３１９５；Ｈｏｓｋｉｎｓ Ｔ．
Ｗ．（１９７９）Ｌａｎｃｅｔ ｉ：３３−３５：Ｐａｔｒｉａｒｃａ Ｐ．Ａ
．ら（１９８５）ＪＡＭＡ ２５３：１１３６−１１３９）。さらに、不活性化
全ウイルスおよび分割−ウイルスワクチンは、時々のみ、ＣＤ−８細胞障害性Ｔ
リンパ球（ＣＴＬ）応答を活性化することが公知であり、これは、抗原性改変体
に対して乏しい交差反応性しか有さず、そして乏しい分泌ＩｇＡ応答しか生じな
い（Ｇｌｅｚｅｎ Ｐ．Ｗ．（１９８２）Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｒｅｖ．４：２
５−４４；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ（１９９７
）５４５−５７０頁；Ｂｅｎｄｅｒ Ｂ．Ｓ．ら（１９９１）Ｉｍｍｕｎｏｌ．
７２：５１４−５１９；Ｈｏｓｋｉｎｓ，Ｔ．Ｗ．（１９７９）Ｌａｎｃｅｔ
ｉ：３３−５；Ｐａｔｒｉａｒｃａ Ｐ．Ａ．ら（１９８５）ＪＡＭＡ ２５３
：１１３６−３９；Ｐｏｗｅｒｓ Ｄ．Ｃ．（１９９３）Ｊ．Ａｍ．Ｇｅｒｉａ
ｔｒ．Ｓｏｃ．４１：１−５）。さらに、注射部位反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅ
ｎｉｃｉｔｙ）および微弱な免疫応答は、非常に若年のこどもにおいて問題であ
り得る（Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ Ｊ．Ｒ．ら（１９９４）Ｖａｃｃｉｎｅ １２：
１３９−４１；Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ Ｊ．Ｒ．ら（１９９１）Ｐｅｄｉａｔｒｉ
ｃｓ ８７：８２３−８２８）。主に、粘膜で活性なインフルエンザワクチンの
開発により、ワクチン効率および許容性を改善するための著しい努力が、現在求
められている（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ（１９
９７）５４５−５７０頁；Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆ
ｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：４２７６−４２７９；Ｄｅ Ｈａａｎ Ａ．ら（１
９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ １３：１５５−１６２；Ｏｈ Ｙ．ら（１９９８）Ｖ
ａｃｃｉｎｅ １０：５０６−５１１；Ｓａｎｔｉａｇｏ Ｎ．ら「Ｖｅｈｉｃ
ｌｅｓ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ」ｉｎ ＶＡＣＣＩＮＥ
ＤＥＳＩＧＮ：ＴＨＥ ＳＵＢＵＮＩＴ ＡＮＤ ＡＤＪＵＶＡＮＴ ＡＰＰ
ＲＯＡＣＨ．Ｐｏｗｅｌｌ Ｆ．Ｍ．およびＭ．Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ（編）．Ｐｌ
ｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９５．４１３−３８頁）。
、無防備な（例えば、非常に若年、非常に老年、および免疫易感染性個体）集団
における高い罹患率、および一般的な集団における有意な死亡率を示す、重篤な
ヒト疾患である（Ｇｌｅｚｅｎ Ｐ．Ｗ．（１９８２）Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｒ
ｅｖ．４：２５−４４）。毎年のインフルエンザの激増に関連する社会的経費お
よび経済的費用は高い（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎ
ｓ．「Ｎｅｗ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｇａｉｎｓｔ
ｉｎｆｌｕｅｎｚａ．」ＮＥＷ ＧＥＮＥＲＡＴＩＯＮ ＶＡＣＣＩＮＥＳ，
第２版（Ｌｅｖｉｎｅ Ｍ．Ｍ．ら編）．Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ．Ｉｎｃ
．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９７．５４５−５７０頁）。ホルマリン−不活性化
全ウイルスおよび分離−ウイルスの筋内（ｉ．ｍ．）ワクチンは、インフルエン
ザの蔓延および重症度を制御するために市販されている（Ｇｈｅｎｄｏｎ Ｙ．
（１９８９）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５７：３７−４５：Ｒｉｄ
ｄｉｏｕｇｈ Ｍ．Ａ．ら（１９８３）ＪＡＭＡ ２４９：３１８９−９５）。
これらの予防ワクチンは、インフルエンザを制御する際に重要であるが、予防ワ
クチンの効率および受容可能性を制限する多く欠点を有する。現在の市販のイン
フルエンザワクチンは、ウイルスチャレンジに対して保護性である、健康な成人
ヒトにおける血清抗体応答を誘導することが示されるが、この保護性免疫性は、
効力が可変である傾向にあり、そして比較的有効期間が短い（特に、高齢者およ
び胎児集団において）（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎ
ｓ（１９９７）５４５−７０頁；Ｇｈｅｎｄｏｎ Ｙ．（１９８９）Ａｄｖ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５７：３７−４５；Ｒｉｄｄｉｏｕｇｈ Ｍ．Ａ．
ら（１９８３）ＪＡＭＡ ２４９：３１８９−３１９５；Ｈｏｓｋｉｎｓ Ｔ．
Ｗ．（１９７９）Ｌａｎｃｅｔ ｉ：３３−３５：Ｐａｔｒｉａｒｃａ Ｐ．Ａ
．ら（１９８５）ＪＡＭＡ ２５３：１１３６−１１３９）。さらに、不活性化
全ウイルスおよび分割−ウイルスワクチンは、時々のみ、ＣＤ−８細胞障害性Ｔ
リンパ球（ＣＴＬ）応答を活性化することが公知であり、これは、抗原性改変体
に対して乏しい交差反応性しか有さず、そして乏しい分泌ＩｇＡ応答しか生じな
い（Ｇｌｅｚｅｎ Ｐ．Ｗ．（１９８２）Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｒｅｖ．４：２
５−４４；Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ（１９９７
）５４５−５７０頁；Ｂｅｎｄｅｒ Ｂ．Ｓ．ら（１９９１）Ｉｍｍｕｎｏｌ．
７２：５１４−５１９；Ｈｏｓｋｉｎｓ，Ｔ．Ｗ．（１９７９）Ｌａｎｃｅｔ
ｉ：３３−５；Ｐａｔｒｉａｒｃａ Ｐ．Ａ．ら（１９８５）ＪＡＭＡ ２５３
：１１３６−３９；Ｐｏｗｅｒｓ Ｄ．Ｃ．（１９９３）Ｊ．Ａｍ．Ｇｅｒｉａ
ｔｒ．Ｓｏｃ．４１：１−５）。さらに、注射部位反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅ
ｎｉｃｉｔｙ）および微弱な免疫応答は、非常に若年のこどもにおいて問題であ
り得る（Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ Ｊ．Ｒ．ら（１９９４）Ｖａｃｃｉｎｅ １２：
１３９−４１；Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ Ｊ．Ｒ．ら（１９９１）Ｐｅｄｉａｔｒｉ
ｃｓ ８７：８２３−８２８）。主に、粘膜で活性なインフルエンザワクチンの
開発により、ワクチン効率および許容性を改善するための著しい努力が、現在求
められている（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ Ｍ．Ｌ．およびＩ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓ（１９
９７）５４５−５７０頁；Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆ
ｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：４２７６−４２７９；Ｄｅ Ｈａａｎ Ａ．ら（１
９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ １３：１５５−１６２；Ｏｈ Ｙ．ら（１９９８）Ｖ
ａｃｃｉｎｅ １０：５０６−５１１；Ｓａｎｔｉａｇｏ Ｎ．ら「Ｖｅｈｉｃ
ｌｅｓ ｆｏｒ ｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ」ｉｎ ＶＡＣＣＩＮＥ
ＤＥＳＩＧＮ：ＴＨＥ ＳＵＢＵＮＩＴ ＡＮＤ ＡＤＪＵＶＡＮＴ ＡＰＰ
ＲＯＡＣＨ．Ｐｏｗｅｌｌ Ｆ．Ｍ．およびＭ．Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ（編）．Ｐｌ
ｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９５．４１３−３８頁）。
【０００６】
粘膜免疫ストラテジーは、筋肉内免疫によって生じるよりも広い免疫応答を提
供することによってインフルエンザワクチン接種の効率および期間を改善する手
段として広く試験されてきた（Ｏｈ Ｙら（１９９８）Ｖａｃｃｉｎｅ １０：
５０６〜５１１；Ｇａｌｌｉｃｈａｎ Ｗ．Ｓ．およびＫ．Ｌ．Ｒｏｓｅｎｔｈ
ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１８７９〜１８９０；Ｏｇｒａ
Ｐ．Ｌ．「Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ：ａｎ ｉ
ｎｔｒｏｄｕｃｔｏｒｙ ｏｖｅｒｖｉｅｗ」ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥ
、Ｋｉｙｏｎｏ Ｈら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，１９９６、第３〜１４頁；Ｎｏｖａｋ Ｍら（１９９５）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３７１Ｂ：１５８７〜１５９０：Ｓｔａａｔｓ Ｈ．Ｆ．お
よびＪ．Ｒ．ＭｃＧｈｅｅ「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｐｒ
ｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｖａｃｃ
ｉｎｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥ、Ｋｉｙｏ
ｎｏ Ｈ．ら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９
９６第１７〜３９頁）。最も通常に使用され、従って相当首尾良い、インフルエ
ンザワクチン接種のための粘膜免疫ストラテジーは、経鼻経路を介するものであ
る（Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．
６７：４２７６〜４２７９；Ｎｉｃｈｏｌ Ｋ．Ｌ．ら（１９９９）ＪＡＭＡ
２８２：１３７〜１４４；Ｒｕｄｉｎ Ａら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍ
ｕｎ．６６：３３９０〜３３９６；Ｔａｋａｓｅ Ｈら（１９９６）Ｖａｃｃｉ
ｎｅ １４：１６５１〜１６５６）。
供することによってインフルエンザワクチン接種の効率および期間を改善する手
段として広く試験されてきた（Ｏｈ Ｙら（１９９８）Ｖａｃｃｉｎｅ １０：
５０６〜５１１；Ｇａｌｌｉｃｈａｎ Ｗ．Ｓ．およびＫ．Ｌ．Ｒｏｓｅｎｔｈ
ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１８７９〜１８９０；Ｏｇｒａ
Ｐ．Ｌ．「Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ：ａｎ ｉ
ｎｔｒｏｄｕｃｔｏｒｙ ｏｖｅｒｖｉｅｗ」ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥ
、Ｋｉｙｏｎｏ Ｈら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ，１９９６、第３〜１４頁；Ｎｏｖａｋ Ｍら（１９９５）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３７１Ｂ：１５８７〜１５９０：Ｓｔａａｔｓ Ｈ．Ｆ．お
よびＪ．Ｒ．ＭｃＧｈｅｅ「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｐｒ
ｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｖａｃｃ
ｉｎｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥ、Ｋｉｙｏ
ｎｏ Ｈ．ら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９
９６第１７〜３９頁）。最も通常に使用され、従って相当首尾良い、インフルエ
ンザワクチン接種のための粘膜免疫ストラテジーは、経鼻経路を介するものであ
る（Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．
６７：４２７６〜４２７９；Ｎｉｃｈｏｌ Ｋ．Ｌ．ら（１９９９）ＪＡＭＡ
２８２：１３７〜１４４；Ｒｕｄｉｎ Ａら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍ
ｕｎ．６６：３３９０〜３３９６；Ｔａｋａｓｅ Ｈら（１９９６）Ｖａｃｃｉ
ｎｅ １４：１６５１〜１６５６）。
【０００７】
生の、風邪対応（ｃｏｌｄ−ａｄａｐｔｅｄ）インフルエンザウイルスワクチ
ンでの経鼻免疫、およびＬＴ（熱不安定性エンテロトキシン）およびＣＴＢ（コ
レラ毒素の非毒性サブユニットＢ）とともにインフルエンザ抗原を同時投与する
ことは、改善されたインフルエンザワクチン開発への実行可能なアプローチのよ
うである（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂ．Ｌ．およびＪ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ「Ｕ
ｓｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ ｅ
ｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ａｓ ａｎ ｏｒａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ」ＭＵＣＯＳ
ＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ，Ｋｉｙｏｎｏ Ｈら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６、第７３〜８７頁；Ｎｉｃｈｏｌ Ｋ．Ｌ
．ら（１９９９）ＪＡＭＡ ２８２：１３７〜１４４）。これらのアプローチは
、ヒトにおいて、局所的（唾液および気管上部）な抗原特異的ＩｇＡレベルを増
大することが示されており、そして市販のインフルエンザワクチンでの伝統的な
筋肉内免疫に比べて細胞性免疫応答を増大した。しかし、この生の、風邪対応イ
ンフルエンザウイルスワクチンは、高齢の患者では有効性に限界があることが示
されており、そして乳児においてはＣＴＬ刺激因子に欠しいことが示されている
（Ｍｂａｗｕｉｋｅ Ｉ．Ｎ．ら（１９９６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．５０：
１０５〜１１１；Ｔｒｅａｎｏｒ Ｊ．ら（１９９４）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉ
ｓ．１６９：４０２〜４０７）。毒性が、ヒトにおける、粘膜アジュバントとし
てのエンテロトキシンの使用に関する主な制限要因であった。
ンでの経鼻免疫、およびＬＴ（熱不安定性エンテロトキシン）およびＣＴＢ（コ
レラ毒素の非毒性サブユニットＢ）とともにインフルエンザ抗原を同時投与する
ことは、改善されたインフルエンザワクチン開発への実行可能なアプローチのよ
うである（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂ．Ｌ．およびＪ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ「Ｕ
ｓｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ ｅ
ｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ａｓ ａｎ ｏｒａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ」ＭＵＣＯＳ
ＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ，Ｋｉｙｏｎｏ Ｈら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６、第７３〜８７頁；Ｎｉｃｈｏｌ Ｋ．Ｌ
．ら（１９９９）ＪＡＭＡ ２８２：１３７〜１４４）。これらのアプローチは
、ヒトにおいて、局所的（唾液および気管上部）な抗原特異的ＩｇＡレベルを増
大することが示されており、そして市販のインフルエンザワクチンでの伝統的な
筋肉内免疫に比べて細胞性免疫応答を増大した。しかし、この生の、風邪対応イ
ンフルエンザウイルスワクチンは、高齢の患者では有効性に限界があることが示
されており、そして乳児においてはＣＴＬ刺激因子に欠しいことが示されている
（Ｍｂａｗｕｉｋｅ Ｉ．Ｎ．ら（１９９６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．５０：
１０５〜１１１；Ｔｒｅａｎｏｒ Ｊ．ら（１９９４）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉ
ｓ．１６９：４０２〜４０７）。毒性が、ヒトにおける、粘膜アジュバントとし
てのエンテロトキシンの使用に関する主な制限要因であった。
【０００８】
経口免疫は、長らく、ワクチン接種のための所望の標的であった。経鼻免疫と
同様、経口免疫は、強力な分泌型ＩｇＡ応答を誘導し、防御的細胞免疫応答を改
善し、そして有意な血清抗体応答も生じることが示されている（Ｔａｋａｓｅ
Ｈら（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４：１６５１〜１６５６；Ｂｅｂｅｄｅｔ
ｔｉ Ｒ，ら（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１０７〜１１８；
Ｇａｌｌｉｃｈａｎ Ｗ．Ｓ．およびＫ．Ｌ．Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ（１９９６）
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１８７９〜１８９０；Ｎｏｖａｋ Ｍら（１９９
５）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３７１Ｂ：１５８７〜１５９０；Ｋａ
ｔｚ Ｊ．Ｍ．ら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７５：３５２〜３
６３）。経口免疫についての分泌型ＩｇＡ応答は、泌尿器管および直腸管で最強
であり、そして経鼻免疫と比べた場合、上部気道、鼻咽頭および唾液の応答はい
くらか弱められたことがいくつかの動物モデルで示された（Ｒｕｄｉｎ Ａら（
１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：３３９０〜３３９６）。これらの
比較的弱い上部気道ＩｇＡ応答は、ヒトの系での場合であることが見出される場
合、進入の最初の様式が上部気道管を介するウイルス（例えばインフルエンザ）
に対して、ウイルスチャレンジに対して有効な防御を達成することに関して、問
題であるようである。しかし、他の研究では、十分な局所分泌型ＩｇＡ応答が存
在すること、そしてより重要なことには、初回抗原刺激を受けたＢ細胞およびＴ
細胞の気道上部への遊走が強力な防御免疫を誘導する証拠が存在することが示さ
れている（Ｔａｋａｓｅ Ｈら（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４：１６５１〜
１６５６；Ｋａｔｚ Ｊ．Ｍ．ら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７
５：３５２〜３６３）。さらに、経口免疫は、骨髄において記憶Ｂ細胞維持を促
進することが示されており、これは、ウイルスチャレンジに対する免疫の持続の
開発において重要であり得る要因である（Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ Ｒ．ら（１９９
８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９；１０７〜１１８）。しかし、多くの抗原
から強力な免疫応答を獲得するため、強力な粘膜アジュバントである、エンテロ
トキシンを、通常、同時投与しなければならない（Ｄｅ Ａｉｚｐｕｒｎａ Ｈ
．Ｊ．ら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：４４０〜４５１）。
同様、経口免疫は、強力な分泌型ＩｇＡ応答を誘導し、防御的細胞免疫応答を改
善し、そして有意な血清抗体応答も生じることが示されている（Ｔａｋａｓｅ
Ｈら（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４：１６５１〜１６５６；Ｂｅｂｅｄｅｔ
ｔｉ Ｒ，ら（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１０７〜１１８；
Ｇａｌｌｉｃｈａｎ Ｗ．Ｓ．およびＫ．Ｌ．Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ（１９９６）
Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１８７９〜１８９０；Ｎｏｖａｋ Ｍら（１９９
５）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３７１Ｂ：１５８７〜１５９０；Ｋａ
ｔｚ Ｊ．Ｍ．ら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７５：３５２〜３
６３）。経口免疫についての分泌型ＩｇＡ応答は、泌尿器管および直腸管で最強
であり、そして経鼻免疫と比べた場合、上部気道、鼻咽頭および唾液の応答はい
くらか弱められたことがいくつかの動物モデルで示された（Ｒｕｄｉｎ Ａら（
１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：３３９０〜３３９６）。これらの
比較的弱い上部気道ＩｇＡ応答は、ヒトの系での場合であることが見出される場
合、進入の最初の様式が上部気道管を介するウイルス（例えばインフルエンザ）
に対して、ウイルスチャレンジに対して有効な防御を達成することに関して、問
題であるようである。しかし、他の研究では、十分な局所分泌型ＩｇＡ応答が存
在すること、そしてより重要なことには、初回抗原刺激を受けたＢ細胞およびＴ
細胞の気道上部への遊走が強力な防御免疫を誘導する証拠が存在することが示さ
れている（Ｔａｋａｓｅ Ｈら（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４：１６５１〜
１６５６；Ｋａｔｚ Ｊ．Ｍ．ら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７
５：３５２〜３６３）。さらに、経口免疫は、骨髄において記憶Ｂ細胞維持を促
進することが示されており、これは、ウイルスチャレンジに対する免疫の持続の
開発において重要であり得る要因である（Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ Ｒ．ら（１９９
８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９；１０７〜１１８）。しかし、多くの抗原
から強力な免疫応答を獲得するため、強力な粘膜アジュバントである、エンテロ
トキシンを、通常、同時投与しなければならない（Ｄｅ Ａｉｚｐｕｒｎａ Ｈ
．Ｊ．ら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：４４０〜４５１）。
【０００９】
研究によって、経口的に免疫した抗原に対する免疫応答は、この抗原それ自体
が粘膜結合特性を有するかまたは、粘膜付着性のレクチンとの因子の化学的な結
合による粘膜結合特性、もしくはレセプター結合特性を有するように作製され得
る場合に有意に、より強力であることが示された（Ｈａｒｏｋｏｐａｋｉｓ Ｅ
．ら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：４２９９〜４３０４；Ｎｅ
ｕｔｒａ Ｍ．Ｒ．およびＪ．Ｋｒａｅｋｅｎｂｕｈｌ「Ａｎｔｉｇｅｎ ｕｐ
ｔａｋｅ ｂｙ Ｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｕｃｏｓａ
ｌ ｖａｃｃｉｎｅｓ」ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ
ら編、Ｏｇｒａ ＰＬ，ＭｃＧｈｅｅ ＪＲ編、Ｍｕｃｏｓａｌ Ｖａｃｃｉｎ
ｅｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９６：４１〜５
５．，Ｄｅ Ａｉｚｐｕｒｕａ Ｈ．Ｊ．およびＧ．Ｊ．Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏ
ｎｅｓ（１９８８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：４４０〜４５１；Ｃｚｅｒｋ
ｉｎｓｋｙ Ｃら（１９８９）Ｉｎｆｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．５７：１０７２〜１０
７７）。ＣＴＢは、これらの目的で用いられてある程度成功している（Ｄｅ Ａ
ｉｚｐｕｒｕａ Ｈ．Ｊ．およびＧ．Ｊ．Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓ（１９８
８）Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：４４０−４５１；Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ
．ら（１９８９）Ｉｎｆｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．５７：１０７２〜１０７７）。イン
フルエンザ血球凝集素（ＨＡ）は、インフルエンザウイルス由来の膜糖タンパク
質であり、赤血球を凝集させ、ウイルス付着およびエンベロープ融合を媒介する
。インフルエンザＨＡは、ノイラミン酸富化糖タンパク質に結合するが、ＬＴ−
Ｒ７２およびＬＴ−Ｋ６３は、ＧＭ１−ガングリオシド、ならびにガラクトース
含有糖タンパク質およびリポ多糖（リポポリサッカライド）に結合する（これら
のリガンドの全てが腸において遍在的に見出される）（Ｋｕｚｉｅｍｋｏ Ｇ．
Ｍ．ら（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：６３７５−６３８４；Ｐｒｉｔｃｈ
ｅｔｔ Ｔ．Ｊ．ら（１９８７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １６０：５０２−５０６：
Ｓａｎｇｌｅｒ Ｂ．Ｄ．（１９９２）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５６：６
２２−６４７）。
が粘膜結合特性を有するかまたは、粘膜付着性のレクチンとの因子の化学的な結
合による粘膜結合特性、もしくはレセプター結合特性を有するように作製され得
る場合に有意に、より強力であることが示された（Ｈａｒｏｋｏｐａｋｉｓ Ｅ
．ら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：４２９９〜４３０４；Ｎｅ
ｕｔｒａ Ｍ．Ｒ．およびＪ．Ｋｒａｅｋｅｎｂｕｈｌ「Ａｎｔｉｇｅｎ ｕｐ
ｔａｋｅ ｂｙ Ｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｕｃｏｓａ
ｌ ｖａｃｃｉｎｅｓ」ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ
ら編、Ｏｇｒａ ＰＬ，ＭｃＧｈｅｅ ＪＲ編、Ｍｕｃｏｓａｌ Ｖａｃｃｉｎ
ｅｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９６：４１〜５
５．，Ｄｅ Ａｉｚｐｕｒｕａ Ｈ．Ｊ．およびＧ．Ｊ．Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏ
ｎｅｓ（１９８８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：４４０〜４５１；Ｃｚｅｒｋ
ｉｎｓｋｙ Ｃら（１９８９）Ｉｎｆｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．５７：１０７２〜１０
７７）。ＣＴＢは、これらの目的で用いられてある程度成功している（Ｄｅ Ａ
ｉｚｐｕｒｕａ Ｈ．Ｊ．およびＧ．Ｊ．Ｒｕｓｓｅｌｌ−Ｊｏｎｅｓ（１９８
８）Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７：４４０−４５１；Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ
．ら（１９８９）Ｉｎｆｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．５７：１０７２〜１０７７）。イン
フルエンザ血球凝集素（ＨＡ）は、インフルエンザウイルス由来の膜糖タンパク
質であり、赤血球を凝集させ、ウイルス付着およびエンベロープ融合を媒介する
。インフルエンザＨＡは、ノイラミン酸富化糖タンパク質に結合するが、ＬＴ−
Ｒ７２およびＬＴ−Ｋ６３は、ＧＭ１−ガングリオシド、ならびにガラクトース
含有糖タンパク質およびリポ多糖（リポポリサッカライド）に結合する（これら
のリガンドの全てが腸において遍在的に見出される）（Ｋｕｚｉｅｍｋｏ Ｇ．
Ｍ．ら（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：６３７５−６３８４；Ｐｒｉｔｃｈ
ｅｔｔ Ｔ．Ｊ．ら（１９８７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １６０：５０２−５０６：
Ｓａｎｇｌｅｒ Ｂ．Ｄ．（１９９２）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５６：６
２２−６４７）。
【００１０】
複数の障害により、サブユニット抗原を使用する経口免疫が有意にチャレンジ
を起こすが、これは、多くによって、ワクチンの高度に所望の形態だと考えられ
ている。（Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９８）ＳＴＰ Ｐｈａｒｍａ
．Ｓｃｉ．８：４１−４６；Ｃｈａｌｌａｃｏｍｂｅ Ｓ．Ｊ．ら（１９９２）
Ｉｍｍｕｎｏｌ．７６：１６４−１６８；Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂ．Ｌ．および
Ｊ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ 「Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ
ｉ ｈｅａｔｌａｂｉｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ａｓ ａｎ ｏｒａｌ
ａｄｊｕｖａｎｔ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ，Ｋｉｙｏｎｏ
Ｈ．ら（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６．第
７３−８７頁）。強力な細胞免疫、より良好な交差保護、記憶、および分泌Ｉｇ
Ａ応答を引き起こすための経口ワクチン接種の能力が、要求されてきた（Ｔａｋ
ａｓｅ Ｈ．ら（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４：１６５１−１６５６；Ｂｅ
ｎｅｄｅｔｔｉ Ｒ．ら（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１０７
−１１８；Ｇａｌｌｉｃｈａｎ Ｗ．Ｓ．およびＫ．Ｌ．Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ（
１９９６）Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１８７９−１８９０：Ｍｅｉｔｉｎ
Ｃ．Ａ．ら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１
：１１１８７−１１１９１；Ｏａｒａ Ｐ．Ｌ．「Ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎ
ｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｏｒｖ ｏｖｅｒｖｉｅ
ｗ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ．ら（編）Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９６．第３−１４頁）が
、患者の快適さのさらなる利点は、過度に強調され得ない（Ｒａｈｍａｎ Ｓ．
ら（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．４８：８２３−８２６）
。
を起こすが、これは、多くによって、ワクチンの高度に所望の形態だと考えられ
ている。（Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９８）ＳＴＰ Ｐｈａｒｍａ
．Ｓｃｉ．８：４１−４６；Ｃｈａｌｌａｃｏｍｂｅ Ｓ．Ｊ．ら（１９９２）
Ｉｍｍｕｎｏｌ．７６：１６４−１６８；Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂ．Ｌ．および
Ｊ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ 「Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ
ｉ ｈｅａｔｌａｂｉｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ａｓ ａｎ ｏｒａｌ
ａｄｊｕｖａｎｔ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ，Ｋｉｙｏｎｏ
Ｈ．ら（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６．第
７３−８７頁）。強力な細胞免疫、より良好な交差保護、記憶、および分泌Ｉｇ
Ａ応答を引き起こすための経口ワクチン接種の能力が、要求されてきた（Ｔａｋ
ａｓｅ Ｈ．ら（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４：１６５１−１６５６；Ｂｅ
ｎｅｄｅｔｔｉ Ｒ．ら（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１０７
−１１８；Ｇａｌｌｉｃｈａｎ Ｗ．Ｓ．およびＫ．Ｌ．Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ（
１９９６）Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１８７９−１８９０：Ｍｅｉｔｉｎ
Ｃ．Ａ．ら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１
：１１１８７−１１１９１；Ｏａｒａ Ｐ．Ｌ．「Ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎ
ｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｏｒｖ ｏｖｅｒｖｉｅ
ｗ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ．ら（編）Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９６．第３−１４頁）が
、患者の快適さのさらなる利点は、過度に強調され得ない（Ｒａｈｍａｎ Ｓ．
ら（１９９３）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．４８：８２３−８２６）
。
【００１１】
噛むことができる丸剤の形態または口当たりが良い甘い液体処方物でのインフ
ルエンザワクチンの投与は、多くによって、子供における好ましい投与形態と考
えられており、そして臨床医の注射によりも安全である。生存可能な経口活性イ
ンフルエンザワクチンを開発する多くのアプローチが研究されており、これらの
アプローチには、インフルエンザ抗原を微粒子に処方すること、標的細胞がＰａ
ｙｅｒ’ｓ Ｐａｔｃｈに取りこむキャリアタンパク質に抗原を連結すること、
および粘膜活性アジュバンドで同時投与することを含む（Ｂａｒａｃｋｍａｎ
Ｊ．Ｄ．ら（１９９８）ＳＴＰ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．８：４１−４６：Ｍｅ
ｉｔｉｎ Ｃ．Ａ．ら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ９１：１１１８７−１１１９１；Ｈａｒｏｋｏｐａｋｉｓ Ｅ．ら（１９
９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｍｔ．６６：４２９９−４３０４：Ｎｅｕｔｒａ
Ｍ．Ｒ．およびＪ． Ｋｒａｅｋｅｎｂｕｈｌ 「Ａｎｔｉｇｅｎ ｕｐｔａｋ
ｅ ｂｙ Ｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｕｃｏｓａｌ ｖ
ａｃｃｉｎｅｓ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ
．ら，編） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６．第
４１−５５頁）。これらのアプローチの中で、この粘膜アジュバンド（主に、Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ加熱不安定エンテロトキシン（ＬＴ）およびコ
レラ毒素（ＣＴ））は、最も一般的に使用される（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂ．Ｌ
．およびＪ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ「Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ａｓ ａｎ ｏ
ｒａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＴＥＳ Ｋｉ
ｙｏｎｏ Ｈ．ら（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１
９９６．第７３−８７頁：Ｅｌｓｏｎ Ｃ．Ｏ．「Ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ
ａｓ ａ ｍｕｃｏｓａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡ
ＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ．ら（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９６．第５９−７２頁）。強力な免疫アジュバンドＬＴお
よびＣＴは、アジュバンド活性に有用である容量でヒトにおいて毒性であるが、
それ故、経口インフルエンザワクチンを開発するために有用ではない。
ルエンザワクチンの投与は、多くによって、子供における好ましい投与形態と考
えられており、そして臨床医の注射によりも安全である。生存可能な経口活性イ
ンフルエンザワクチンを開発する多くのアプローチが研究されており、これらの
アプローチには、インフルエンザ抗原を微粒子に処方すること、標的細胞がＰａ
ｙｅｒ’ｓ Ｐａｔｃｈに取りこむキャリアタンパク質に抗原を連結すること、
および粘膜活性アジュバンドで同時投与することを含む（Ｂａｒａｃｋｍａｎ
Ｊ．Ｄ．ら（１９９８）ＳＴＰ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．８：４１−４６：Ｍｅ
ｉｔｉｎ Ｃ．Ａ．ら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ９１：１１１８７−１１１９１；Ｈａｒｏｋｏｐａｋｉｓ Ｅ．ら（１９
９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｍｔ．６６：４２９９−４３０４：Ｎｅｕｔｒａ
Ｍ．Ｒ．およびＪ． Ｋｒａｅｋｅｎｂｕｈｌ 「Ａｎｔｉｇｅｎ ｕｐｔａｋ
ｅ ｂｙ Ｍ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｕｃｏｓａｌ ｖ
ａｃｃｉｎｅｓ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ
．ら，編） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９６．第
４１−５５頁）。これらのアプローチの中で、この粘膜アジュバンド（主に、Ｅ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ加熱不安定エンテロトキシン（ＬＴ）およびコ
レラ毒素（ＣＴ））は、最も一般的に使用される（Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂ．Ｌ
．およびＪ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ「Ｕｓｅ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ａｓ ａｎ ｏ
ｒａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡＣＣＩＮＴＥＳ Ｋｉ
ｙｏｎｏ Ｈ．ら（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１
９９６．第７３−８７頁：Ｅｌｓｏｎ Ｃ．Ｏ．「Ｃｈｏｌｅｒａ ｔｏｘｉｎ
ａｓ ａ ｍｕｃｏｓａｌ ａｄｊｕｖａｎｔ」ｉｎ ＭＵＣＯＳＡＬ ＶＡ
ＣＣＩＮＥＳ Ｋｉｙｏｎｏ Ｈ．ら（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ．１９９６．第５９−７２頁）。強力な免疫アジュバンドＬＴお
よびＣＴは、アジュバンド活性に有用である容量でヒトにおいて毒性であるが、
それ故、経口インフルエンザワクチンを開発するために有用ではない。
【００１２】
非毒性ＣＴのＢサブユニット（ＣＴＢ）は、全ＣＴに対する代替物として調査
されているが、研究によると、全ＣＴの少量が、ヒトのＣＴＢの能力を阻害する
、十分なアジュバンド能力に必要とされることが示された（Ｔａｍｕｒａ Ｓ．
ら（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１３３７−１３４４；Ｔａ
ｍｕｒａ Ｓ．ら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：９８１−９８８；
Ｔａｍｕｒａ Ｓ．ら（１９９４）Ｖａｃｃｉｎｅ １２：１０８３−１０８９
）。これらの研究のために、ＬＴおよびＣＴのＡＤＰリボシルトランスフェラー
ゼ活性は、アジュバンド活性に必要な成分として与えられた（Ｌｙｃｈｅ Ｎ．
ら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２２７７−８１）。
されているが、研究によると、全ＣＴの少量が、ヒトのＣＴＢの能力を阻害する
、十分なアジュバンド能力に必要とされることが示された（Ｔａｍｕｒａ Ｓ．
ら（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１３３７−１３４４；Ｔａ
ｍｕｒａ Ｓ．ら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：９８１−９８８；
Ｔａｍｕｒａ Ｓ．ら（１９９４）Ｖａｃｃｉｎｅ １２：１０８３−１０８９
）。これらの研究のために、ＬＴおよびＣＴのＡＤＰリボシルトランスフェラー
ゼ活性は、アジュバンド活性に必要な成分として与えられた（Ｌｙｃｈｅ Ｎ．
ら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２２７７−８１）。
【００１３】
経口投与される場合、免疫反応を安全に惹起する組成物を開発する必要性が、
当該分野において存在する。
当該分野において存在する。
【００１４】
本明細書中で引用される各文献は、その全体が参考として援用される。
【００１５】
（発明の要旨）
本発明は、哺乳動物における免疫応答を惹起する組成物を提供し、ここで、こ
の組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に少なくとも１つの粘膜付着抗原を
含む。
の組成物は、薬学的に受容可能なキャリア中に少なくとも１つの粘膜付着抗原を
含む。
【００１６】
本発明の組成物は、粘膜付着性または腸関連結合特性を有する抗原に使用する
使用のために適切である。このように、これらの抗原は、粘膜または消化管の感
染剤から誘導され得る。
使用のために適切である。このように、これらの抗原は、粘膜または消化管の感
染剤から誘導され得る。
【００１７】
本発明の組成物は、広範の病原に対して免疫応答を惹起するのに使用するため
に適切であり、これには、ウイルス、細菌、原生動物亜界、真菌および蠕虫が挙
げられるが、これらに限定されない。
に適切であり、これには、ウイルス、細菌、原生動物亜界、真菌および蠕虫が挙
げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
本発明は、特に、インフルエンザに対する免疫応答を刺激する場合の利用（特
に、インフルエンザウイルスの血球凝集素抗原を使用）を見出す。
に、インフルエンザウイルスの血球凝集素抗原を使用）を見出す。
【００１９】
本発明はまた、少なくとも１種の有効量の粘膜付着抗原を哺乳動物に経口投与
することによる、哺乳動物の免疫応答を惹起する方法を包含する。
することによる、哺乳動物の免疫応答を惹起する方法を包含する。
【００２０】
本発明はまた、粘膜または消化管の病原体に対する、哺乳動物の免疫応答を惹
起する方法を包含し、ここで、この粘膜付着抗原は、加熱不安定な変異Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシン（例えば、ＬＴ−Ｋ６３および／ま
たはＬＴ−Ｒ７２）と共に投与される。
起する方法を包含し、ここで、この粘膜付着抗原は、加熱不安定な変異Ｅｓｃｈ
ｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシン（例えば、ＬＴ−Ｋ６３および／ま
たはＬＴ−Ｒ７２）と共に投与される。
【００２１】
本発明の方法は、血球凝集素抗原の経口投与を介した、インフルエンザに対す
る免疫応答性の刺激を含む。
る免疫応答性の刺激を含む。
【００２２】
本発明はまた、少なくとも１種の有効量の粘膜付着抗原を哺乳動物に投与する
ことによる、鼻分泌物および唾液中の抗原特異的ＩｇＡ応答の刺激を含む。いく
つかの実施形態において、この粘膜付着抗原は、加熱不安定な変異Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシン（例えば、ＬＴ−Ｋ６３および／または
ＬＴ−Ｒ７２）と共に投与される。
ことによる、鼻分泌物および唾液中の抗原特異的ＩｇＡ応答の刺激を含む。いく
つかの実施形態において、この粘膜付着抗原は、加熱不安定な変異Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシン（例えば、ＬＴ−Ｋ６３および／または
ＬＴ−Ｒ７２）と共に投与される。
【００２３】
特定の実施形態において、哺乳動物のための経口インフルエンザ免疫原性組成
物が提供され、ここで、この免疫原性組成物は、有効量のインフルエンザ血球凝
集素および加熱不安定、変異Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシ
ンを含む。
物が提供され、ここで、この免疫原性組成物は、有効量のインフルエンザ血球凝
集素および加熱不安定、変異Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシ
ンを含む。
【００２４】
（発明の詳細な説明）
粘膜付着特性または消化管関連（ｇｕｔ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）結合特性を
全く有さない抗原は、非常に高い用量レベル以外で、ＬＴの非存在下でかまたは
可溶性抗原と可溶性ＬＴとの混合物としてのいずれかで、マウスにおいて経口送
達される場合、最小の免疫原性を有することが、発見された。穏やかな免疫応答
が、インフルエンザ抗原が妥当な用量レベルで経口送達される場合に示され得る
が、これらの抗原は、野生型のＬＴもしくはＣＴとアジュバント化された場合に
、実質的かつ広範な免疫応答を生じる（Ｋａｔｚ Ｊ．Ｍ．ら（１９９７）Ｊ．
Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７５：３５２〜３６３）。
全く有さない抗原は、非常に高い用量レベル以外で、ＬＴの非存在下でかまたは
可溶性抗原と可溶性ＬＴとの混合物としてのいずれかで、マウスにおいて経口送
達される場合、最小の免疫原性を有することが、発見された。穏やかな免疫応答
が、インフルエンザ抗原が妥当な用量レベルで経口送達される場合に示され得る
が、これらの抗原は、野生型のＬＴもしくはＣＴとアジュバント化された場合に
、実質的かつ広範な免疫応答を生じる（Ｋａｔｚ Ｊ．Ｍ．ら（１９９７）Ｊ．
Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７５：３５２〜３６３）。
【００２５】
本発明者らは、変異体ＬＴ毒素ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２（Ｂａｒａｃ
ｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：４２７６
〜４２７９）を研究した。これらの毒素は、インフルエンザ抗原と組み合わせて
経鼻送達された場合、ｗｔＬＴと同様のアジュバント性（ａｄｊｕｖａｎｔｉｃ
ｉｔｙ）を示すが、実質的に０まで減少したインビトロおよびインビボでの毒性
を示し、このことは、広範に適用可能な有効な経鼻インフルエンザワクチンを開
発する可能性を改善する（Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆ
ｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：４２７６〜４２７９；Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｍ．Ｍ．
ら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１２３〜１１３２）。さらに、
ＬＴ−Ｒ７２は、非常に低レベルのＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ活性を
示すが、なお強力な粘膜アジュバント活性を維持し、一方ＬＴ−Ｋ６３において
、ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ活性は、強力なアジュバント性にも関わ
らず検出不能である（Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｍ．Ｍ．ら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１８７：１１２３〜１１３２）。このデータは、ＡＤＰ−リボシルトラ
ンスフェラーゼ活性がアジュバント活性に関連しないかもしれずことを示し、こ
のことは、これらのアジュバントをヒトにおける経口投与に適切な非毒性粘膜ア
ジュバントにする（Ｆｒｅｙｔａｇ Ｌ．Ｃ．およびＪ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ
（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３６
：２１５〜２３６）。
ｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：４２７６
〜４２７９）を研究した。これらの毒素は、インフルエンザ抗原と組み合わせて
経鼻送達された場合、ｗｔＬＴと同様のアジュバント性（ａｄｊｕｖａｎｔｉｃ
ｉｔｙ）を示すが、実質的に０まで減少したインビトロおよびインビボでの毒性
を示し、このことは、広範に適用可能な有効な経鼻インフルエンザワクチンを開
発する可能性を改善する（Ｂａｒａｃｋｍａｎ Ｊ．Ｄ．ら（１９９９）Ｉｎｆ
ｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：４２７６〜４２７９；Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｍ．Ｍ．
ら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１２３〜１１３２）。さらに、
ＬＴ−Ｒ７２は、非常に低レベルのＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ活性を
示すが、なお強力な粘膜アジュバント活性を維持し、一方ＬＴ−Ｋ６３において
、ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ活性は、強力なアジュバント性にも関わ
らず検出不能である（Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｍ．Ｍ．ら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．１８７：１１２３〜１１３２）。このデータは、ＡＤＰ−リボシルトラ
ンスフェラーゼ活性がアジュバント活性に関連しないかもしれずことを示し、こ
のことは、これらのアジュバントをヒトにおける経口投与に適切な非毒性粘膜ア
ジュバントにする（Ｆｒｅｙｔａｇ Ｌ．Ｃ．およびＪ．Ｄ．Ｃｌｅｍｅｎｔｓ
（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３６
：２１５〜２３６）。
【００２６】
本発明の実施は、他のように示されない限り、当業者の範囲内にあるウイルス
学、免疫学、微生物学、分子生物学および組換えＤＮＡ技術の従来の方法を使用
する。このような技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；ＤＮＡ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＰＲＡＣＴＩ
ＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ、第１巻およびＩＩ巻（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編）；ＭＥ
ＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ．Ｋ
ａｐｌａｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｉｎｃ．）；ＨＡＮＤＢＯＯＫ
ＯＦ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、第Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ
．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；ならびにＦＵＮＤＡＭＥＮ
ＴＡＬ ＶＩＲＯＬＯＧＹ、第２版、第ＩおよびＩＩ巻（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ
およびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編）を参照のこと。
学、免疫学、微生物学、分子生物学および組換えＤＮＡ技術の従来の方法を使用
する。このような技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍ
ａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；ＤＮＡ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＰＲＡＣＴＩ
ＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ、第１巻およびＩＩ巻（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編）；ＭＥ
ＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ．Ｋ
ａｐｌａｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．Ｉｎｃ．）；ＨＡＮＤＢＯＯＫ
ＯＦ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、第Ｉ〜ＩＶ巻（Ｄ
．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；ならびにＦＵＮＤＡＭＥＮ
ＴＡＬ ＶＩＲＯＬＯＧＹ、第２版、第ＩおよびＩＩ巻（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ
およびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編）を参照のこと。
【００２７】
本明細書中にて使用される場合、用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、
単数および複数をいう。
単数および複数をいう。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、「粘膜付着（物）」とは、感染性因子に関連す
ることが見出される免疫原性化合物であって、その抗原が消化管関連結合特性も
しくは粘膜結合特性を有する粘膜および／または消化管の免疫原性化合物をいう
。
ることが見出される免疫原性化合物であって、その抗原が消化管関連結合特性も
しくは粘膜結合特性を有する粘膜および／または消化管の免疫原性化合物をいう
。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「粘膜」は、口、鼻の通路、膣および尿道の滑
らかな内層（ｌｕｂｒｉｃａｔｅｄ ｉｎｎｅｒ ｌｉｎｉｎｇ）をいい、そし
て「消化管」は、口から肛門に伸びる消化管をいう。
らかな内層（ｌｕｂｒｉｃａｔｅｄ ｉｎｎｅｒ ｌｉｎｉｎｇ）をいい、そし
て「消化管」は、口から肛門に伸びる消化管をいう。
【００３０】
有効量の本発明の組成物が、感染性因子による感染を予防もしくは改善するた
めに哺乳動物に投与される。本明細書中で使用される場合、疾患もしくは状態を
有する個体を処置することに関する句「有効量」は、不都合な効果（例えば、毒
性、刺激またはアレルギー応答）を伴うことなく、その疾患もしくは状態の処置
を達成しそして改善および／または除去するに十分な量か、あるいは感染性因子
による感染を予防するために十分な量を意味する。個々の需要は変化し得、そし
て投薬要求量のいくらかの変動が、有効量の処方物の最適な範囲を達成するため
に種々の型の哺乳動物にとって必要であるが、このような慣用的実験は、当業者
の範囲内である。ヒトの用量は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵ
ＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕ
ｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ．Ａ．、１９９０の第２７章、Ｋ
ａｔｏｃｓらにより教示されるような動物研究から容易に推定され得る。一般的
に、当業者により調整され得る有効量の処方物を提供するために必要な投薬量は
、レシピエントの年齢、健康、身体的状態、体重、疾患もしくは障害の型および
程度、処置の頻度、必要な場合は併用治療の性質、ならびに所望の効果の性質お
よび範囲を含む、いくつかの要因に依存して変化する（Ｎｉｅｓら、Ｃｈａｐｔ
ｅｒ ３、ＧＯＯＤＭＡＮ ＆ ＧＩＬＭＡＮ’Ｓ ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯ
ＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ、第９版、Ｈａ
ｒｄｍａｎら編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９６
）。約５〜約１００μｇの範囲の投薬量が、意図される。
めに哺乳動物に投与される。本明細書中で使用される場合、疾患もしくは状態を
有する個体を処置することに関する句「有効量」は、不都合な効果（例えば、毒
性、刺激またはアレルギー応答）を伴うことなく、その疾患もしくは状態の処置
を達成しそして改善および／または除去するに十分な量か、あるいは感染性因子
による感染を予防するために十分な量を意味する。個々の需要は変化し得、そし
て投薬要求量のいくらかの変動が、有効量の処方物の最適な範囲を達成するため
に種々の型の哺乳動物にとって必要であるが、このような慣用的実験は、当業者
の範囲内である。ヒトの用量は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵ
ＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕ
ｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ．Ａ．、１９９０の第２７章、Ｋ
ａｔｏｃｓらにより教示されるような動物研究から容易に推定され得る。一般的
に、当業者により調整され得る有効量の処方物を提供するために必要な投薬量は
、レシピエントの年齢、健康、身体的状態、体重、疾患もしくは障害の型および
程度、処置の頻度、必要な場合は併用治療の性質、ならびに所望の効果の性質お
よび範囲を含む、いくつかの要因に依存して変化する（Ｎｉｅｓら、Ｃｈａｐｔ
ｅｒ ３、ＧＯＯＤＭＡＮ ＆ ＧＩＬＭＡＮ’Ｓ ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯ
ＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ、第９版、Ｈａ
ｒｄｍａｎら編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９６
）。約５〜約１００μｇの範囲の投薬量が、意図される。
【００３１】
その組成物の１回を超える投与が必要とされ得ることもまた、意図される。投
与間の時間は、与えられる投与の数に依存する。例えば、２回の投与が与えられ
る場合、第１回は０月目に行われ得、そして第２回は１月目、２月目もしくは６
月目に行われ得；４回の投与が与えられる場合、それらはそれぞれ、０月目、１
月目、２月目および６月目に与えられ得る。あるいは、それらの投与は、１月間
隔で行われ得る。複数の投与間の時間は、当業者により容易に決定され得る。
与間の時間は、与えられる投与の数に依存する。例えば、２回の投与が与えられ
る場合、第１回は０月目に行われ得、そして第２回は１月目、２月目もしくは６
月目に行われ得；４回の投与が与えられる場合、それらはそれぞれ、０月目、１
月目、２月目および６月目に与えられ得る。あるいは、それらの投与は、１月間
隔で行われ得る。複数の投与間の時間は、当業者により容易に決定され得る。
【００３２】
本明細書中で使用される場合、用語「投与する」には、経皮、非経口、皮下、
筋肉内、経口および局所送達が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の
方法において、少なくとも１つの投与が経口であり、そして投与の好ましい経路
は経口である。本発明の組成物は、好ましくは、経口投与のために処方される。
筋肉内、経口および局所送達が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の
方法において、少なくとも１つの投与が経口であり、そして投与の好ましい経路
は経口である。本発明の組成物は、好ましくは、経口投与のために処方される。
【００３３】
開示される本発明の方法の意図される目的は、インフルエンザウイルスの感染
の回復である。回復は、例えば、インフルエンザに関連する感染の徴候および症
状の軽減によって決定され得る。インフルエンザに対する有効な免疫化は、血清
試験によりモニタリングされ得、ここで抗原特異的抗体が誘発される。このよう
な試験において、抗体は、慣用的な試験を使用して、被験体の血液、唾液および
鼻分泌物において検出され得る。好ましくは、本発明に従う処置は、インフルエ
ンザウイルスの同時的な減少／消失を伴う、抗原特異的抗インフルエンザ抗体の
出現を生じる。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物を用いる処置は、
インフルエンザウイルスの感染を予防し得る。本発明のいくつかの実施形態にお
いて、アッセイは、抗原特異的ＩｇＡ抗体の存在を検出し得る。
の回復である。回復は、例えば、インフルエンザに関連する感染の徴候および症
状の軽減によって決定され得る。インフルエンザに対する有効な免疫化は、血清
試験によりモニタリングされ得、ここで抗原特異的抗体が誘発される。このよう
な試験において、抗体は、慣用的な試験を使用して、被験体の血液、唾液および
鼻分泌物において検出され得る。好ましくは、本発明に従う処置は、インフルエ
ンザウイルスの同時的な減少／消失を伴う、抗原特異的抗インフルエンザ抗体の
出現を生じる。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物を用いる処置は、
インフルエンザウイルスの感染を予防し得る。本発明のいくつかの実施形態にお
いて、アッセイは、抗原特異的ＩｇＡ抗体の存在を検出し得る。
【００３４】
被験体に有効な投薬量の決定を助けるために、本明細書中に記載される血清ア
ッセイが使用され得る。免疫応答の十分な刺激は、免疫学的アッセイ（例えば、
酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、または血清、唾液および鼻分
泌物のような体液中の抗原特異的抗体を検出するための任意の他のアッセイ）に
よって決定され得る。本発明の組成物中の抗原の濃度と抗体力価との相関は、有
効な免疫応答を引き起こす組成物の能力における有効性の指数を提供する。
ッセイが使用され得る。免疫応答の十分な刺激は、免疫学的アッセイ（例えば、
酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、または血清、唾液および鼻分
泌物のような体液中の抗原特異的抗体を検出するための任意の他のアッセイ）に
よって決定され得る。本発明の組成物中の抗原の濃度と抗体力価との相関は、有
効な免疫応答を引き起こす組成物の能力における有効性の指数を提供する。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、免疫原性組成物に関する成句「免疫学的有効量
」とは、治療的または予防的免疫応答を引き起こすのに十分な量を意味する。
」とは、治療的または予防的免疫応答を引き起こすのに十分な量を意味する。
【００３６】
本明細書中で使用される場合、感染因子による感染に対する個体の処置に関す
る「予防的免疫応答」とは、予防的であり、そしてチャレンジの際に感染因子を
阻害する免疫応答を意味する。
る「予防的免疫応答」とは、予防的であり、そしてチャレンジの際に感染因子を
阻害する免疫応答を意味する。
【００３７】
本明細書中で使用される場合、予防的免疫応答に関する「阻害する」とは、感
染の影響が最小化されるかまたは排除されるように、感染因子での感染を軽減ま
たは排除することを意味する。
染の影響が最小化されるかまたは排除されるように、感染因子での感染を軽減ま
たは排除することを意味する。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、感染因子に感染した個体の処置に関する「治療
的免疫応答」とは、感染因子を回復しそして／または排除する免疫応答を意味す
る。
的免疫応答」とは、感染因子を回復しそして／または排除する免疫応答を意味す
る。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、個体に投与された免疫原性組成物の量に関する
成句「治療的有効量」とは、個体における治療的免疫応答を引き起こすのに十分
な量を意味する。
成句「治療的有効量」とは、個体における治療的免疫応答を引き起こすのに十分
な量を意味する。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、個体に投与された免疫原性組成物の量に関する
「予防的有効量」とは、個体における予防的免疫応答を引き起こすのに十分な量
を意味する。
「予防的有効量」とは、個体における予防的免疫応答を引き起こすのに十分な量
を意味する。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、「個体」とは、本発明の免疫原性組成物で処置
され得るヒトおよび非ヒト動物をいう。
され得るヒトおよび非ヒト動物をいう。
【００４２】
「粘膜または消化管の感染因子」としては、ウイルス、細菌、原生動物、真菌
および蠕虫が挙げられるが、これらに限定されない。ウイルスの非限定的な例と
しては、インフルエンザウイルスが挙げられる。
および蠕虫が挙げられるが、これらに限定されない。ウイルスの非限定的な例と
しては、インフルエンザウイルスが挙げられる。
【００４３】
本発明の粘膜付着抗原は、当該分野で公知の任意の手段によって調製され得る
。全病原体は、不活化され、殺され、超音波処理され、そして／または可溶化さ
れ、例えば、抗原が抽出される。本発明における使用のための抗原調製物は、従
来の方法を使用してさらに精製され得る。あるいは、抗原は、組換えＤＮＡ技術
によって産生され得、ここで、選択した抗原をコードする核酸配列は、続いて宿
主細胞に導入される発現ベクターに挿入される。組換えタンパク質の発現が行わ
れ、そして選択された抗原は、従来の方法によって宿主細胞から精製される。こ
のような方法としては、例えば、アンフィニティー精製、クロマトグラフィー、
および電気泳動が挙げられ得る。
。全病原体は、不活化され、殺され、超音波処理され、そして／または可溶化さ
れ、例えば、抗原が抽出される。本発明における使用のための抗原調製物は、従
来の方法を使用してさらに精製され得る。あるいは、抗原は、組換えＤＮＡ技術
によって産生され得、ここで、選択した抗原をコードする核酸配列は、続いて宿
主細胞に導入される発現ベクターに挿入される。組換えタンパク質の発現が行わ
れ、そして選択された抗原は、従来の方法によって宿主細胞から精製される。こ
のような方法としては、例えば、アンフィニティー精製、クロマトグラフィー、
および電気泳動が挙げられ得る。
【００４４】
経口組成物の形態は、カプセル、錠剤、液体、シロップ、懸濁液、エリキシル
、または当該分野で公知の経口投与の任意の他の処方物であり得る。さらに、本
発明の経口組成物は、当該分野で公知であり当該分野で使用される他の賦形剤と
組み合わされ得る。この組成物は、経口摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ
、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラートなどの形態であり得る
。ＬＴ−Ｋ６３またはＬＴ−Ｒ７２は、約１０μｇ〜１０ｍｇの全用量で使用さ
れ得る。アジュバントは、全処方物の約０．０１〜１％の全経口処方物の一部を
形成し得る。粘膜付着剤を含む賦形剤の用量は、アジュバントの用量より１００
〜１０００倍多くてもよい。治療的に有用な組成物中の粘膜付着抗原の量は、治
療的に有効な免疫応答または感染阻害免疫応答を引き起こすのに十分な量である
。
、または当該分野で公知の経口投与の任意の他の処方物であり得る。さらに、本
発明の経口組成物は、当該分野で公知であり当該分野で使用される他の賦形剤と
組み合わされ得る。この組成物は、経口摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ
、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラートなどの形態であり得る
。ＬＴ−Ｋ６３またはＬＴ−Ｒ７２は、約１０μｇ〜１０ｍｇの全用量で使用さ
れ得る。アジュバントは、全処方物の約０．０１〜１％の全経口処方物の一部を
形成し得る。粘膜付着剤を含む賦形剤の用量は、アジュバントの用量より１００
〜１０００倍多くてもよい。治療的に有用な組成物中の粘膜付着抗原の量は、治
療的に有効な免疫応答または感染阻害免疫応答を引き起こすのに十分な量である
。
【００４５】
これらの錠剤、トローチ、丸剤、カプセル剤などはまた、以下の成分を含み得
る：結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アカシア、ス
クロース、トウモロコシデンプン、ゼラチンなど）；賦形剤（リン酸カルシウム
、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムなど）；崩壊剤（例えば、トウモロコシ
デンプン、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、特定の複合シリケート、ア
ルギン酸など）；潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、ステアリ
ン酸マグネシウムなど）；甘味剤（例えば、スクロース、ラクトース、サッカリ
ンなど）または香料（例えば、ペパーミント、ウインターグリーン油、チェリー
香料、または当該分野で公知かつ使用されている他の任意の香料）。類似の型の
固形組成物もまた、軟らかく充填したゼラチンカプセルおよび硬く充填したゼラ
チンカプセルにおける、充填剤として使用される。投薬単位形態が、カプセルに
含まれる場合、組成物は、液体キャリアに存在し得る。
る：結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、アカシア、ス
クロース、トウモロコシデンプン、ゼラチンなど）；賦形剤（リン酸カルシウム
、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムなど）；崩壊剤（例えば、トウモロコシ
デンプン、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、特定の複合シリケート、ア
ルギン酸など）；潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、ステアリ
ン酸マグネシウムなど）；甘味剤（例えば、スクロース、ラクトース、サッカリ
ンなど）または香料（例えば、ペパーミント、ウインターグリーン油、チェリー
香料、または当該分野で公知かつ使用されている他の任意の香料）。類似の型の
固形組成物もまた、軟らかく充填したゼラチンカプセルおよび硬く充填したゼラ
チンカプセルにおける、充填剤として使用される。投薬単位形態が、カプセルに
含まれる場合、組成物は、液体キャリアに存在し得る。
【００４６】
種々の他の材料が、コーティングとして存在し得るか、さもなければ、その投
薬単位の物理的形態を改変し得る。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、セ
ラック、糖または両方でコーティングされ得る。
薬単位の物理的形態を改変し得る。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、セ
ラック、糖または両方でコーティングされ得る。
【００４７】
本発明の組成物を含むシロップまたはエリキシルはまた、甘味剤、保存剤（例
えば、メチルパラベンおよびプロピルパラベン）、色素、香料、乳化剤および／
または懸濁剤、ならびに希釈剤（例えば、水、エタノール、プロピレングリコー
ル、グリセリンおよび当該分野で公知かつ使用されるこれらの種々の組み合わせ
）を含み得る。
えば、メチルパラベンおよびプロピルパラベン）、色素、香料、乳化剤および／
または懸濁剤、ならびに希釈剤（例えば、水、エタノール、プロピレングリコー
ル、グリセリンおよび当該分野で公知かつ使用されるこれらの種々の組み合わせ
）を含み得る。
【００４８】
投薬単位は、好ましくは、純粋であり、そして優良製造規範（ＧＭＰ）条件下
で生成される。
で生成される。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態において、免疫原性量の少なくとも１つのインフル
エンザ赤血球凝集素抗原を、有効量の少なくとも１つの易熱性変異体Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシンと組み合わせて、インフルエンザウイ
ルスに対する免疫原性組成物を形成する。この組成物は、インフルエンザに対す
る免疫応答を誘発するために、哺乳動物（特に、ヒト）への投与に適切である。
より詳細には、ＩｇＡ特異的免疫応答が、インフルエンザに対して誘発され、そ
して抗インフルエンザＩｇＡ抗体が、この免疫原性組成物を受ける哺乳動物の唾
液および鼻内分泌物に見い出される。好ましくは、この組成物において使用され
るエンテロトキシンは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２またはその混合物である。
免疫原性組成物の投与は、好ましくは、経口投与を介する。
エンザ赤血球凝集素抗原を、有効量の少なくとも１つの易熱性変異体Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシンと組み合わせて、インフルエンザウイ
ルスに対する免疫原性組成物を形成する。この組成物は、インフルエンザに対す
る免疫応答を誘発するために、哺乳動物（特に、ヒト）への投与に適切である。
より詳細には、ＩｇＡ特異的免疫応答が、インフルエンザに対して誘発され、そ
して抗インフルエンザＩｇＡ抗体が、この免疫原性組成物を受ける哺乳動物の唾
液および鼻内分泌物に見い出される。好ましくは、この組成物において使用され
るエンテロトキシンは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２またはその混合物である。
免疫原性組成物の投与は、好ましくは、経口投与を介する。
【００５０】
（実施例）
（実施例１：）
（１．１．１ 使用されるインフルエンザ抗原）
精製された多価Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３（Ｈ３Ｎ２）およびＡ／Ｊｏ
ｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７（Ｈ１Ｎ１）ウイルス成分インフルエンザ抗原は、
Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｓｉｅｎａ．Ｉｔａｌｙによって提供された
。投薬は、以前に記載のように（Ｊｏｈａｎｎｓｅｎ Ｒ．ら（１９８５）Ｖａ
ｃｃｉｎｅ ３：２３５−２４０）、一元放射免疫拡散（ＳＲＩＤ）によってア
ッセイした場合のＨＡ含量に基づいた。ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２は、以
前に記載のように（Ｐｉｚｚａ Ｍ．ら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．１４：５１−６０）調製した。野生型ＬＴ（ｗｔＬＴ）は、Ｓｉｇｍａから
得た（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン、凍結乾燥粉
末、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ．ＵＳＡ）。全ての
免疫原性調製物を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中に処方した。ｉ．ｇ．
投与のために調製した免疫原は、１．５％ｗ／ｗの重炭酸ナトリウムを含んだ。
ｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７（Ｈ１Ｎ１）ウイルス成分インフルエンザ抗原は、
Ｃｈｉｒｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｓｉｅｎａ．Ｉｔａｌｙによって提供された
。投薬は、以前に記載のように（Ｊｏｈａｎｎｓｅｎ Ｒ．ら（１９８５）Ｖａ
ｃｃｉｎｅ ３：２３５−２４０）、一元放射免疫拡散（ＳＲＩＤ）によってア
ッセイした場合のＨＡ含量に基づいた。ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２は、以
前に記載のように（Ｐｉｚｚａ Ｍ．ら（１９９４）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．１４：５１−６０）調製した。野生型ＬＴ（ｗｔＬＴ）は、Ｓｉｇｍａから
得た（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン、凍結乾燥粉
末、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ．ＵＳＡ）。全ての
免疫原性調製物を、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中に処方した。ｉ．ｇ．
投与のために調製した免疫原は、１．５％ｗ／ｗの重炭酸ナトリウムを含んだ。
【００５１】
（１．２．１ 免疫およびサンプル収集）
１０匹の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ，
Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）のグループ（６〜１０週齢）を、表１、２および
３に従って免疫した。マウスを、各免疫の前に１２時間絶食させた。免疫は、１
ｍｇシリンジに繋いだ２０ゲージのステンレス鋼供給針を使用して、後大腿筋へ
のｉ．ｍ．（５０μｌ）注射または胃への直接的ｉ．ｇ．（２００μｌ）のいず
れかによって行った。動物を、免疫の間に麻酔しなかった。血液サンプルの収集
を、イソフロリン（ｉｓｏｆｌｕｏｒｉｎｅ）ガスを使用する軽度の麻酔後に、
マイクロヘマトクリットチューブを使用して、眼窩洞穿刺によって行った。血清
を、標準的な方法を使用して血液から分離した。唾液洗浄液（ＳＷ）サンプルを
、０．２×３．２ｃｍのセルロース吸着剤ウィック（ｗｉｃｋ）（Ａｍｅｒｉｃ
ａ Ｆｉｌｔｒｏｎａ．Ｒｉｃｈｍｏｎｄ．ＶＡ）の一端を、各々の免疫してい
ないマウスの口に１〜２分間配置し、唾液を吸着させることによって収集した。
次いで、抗体を、アッセイ前に、ＰＢＳ（４００μｌ）中に溶出した。鼻内洗浄
液サンプル（ＮＷ）を、塩酸ケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（４
ｍｇ／ｋｇ）の混合物で最初に動物を麻酔することによって収集した。動物を、
頭をわずかに下方に傾けて、背側横臥位に保持しながら、ＰＢＳ（６００μｌ）
を、小さいシリンジに連結したカテーテルを使用して鼻腔に挿入した。洗浄液を
、小さいチューブへの自然の（重力による）流れによって収集した。血清および
分泌サンプルを、アッセイまでに凍結（−７０℃）保存した。
Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）のグループ（６〜１０週齢）を、表１、２および
３に従って免疫した。マウスを、各免疫の前に１２時間絶食させた。免疫は、１
ｍｇシリンジに繋いだ２０ゲージのステンレス鋼供給針を使用して、後大腿筋へ
のｉ．ｍ．（５０μｌ）注射または胃への直接的ｉ．ｇ．（２００μｌ）のいず
れかによって行った。動物を、免疫の間に麻酔しなかった。血液サンプルの収集
を、イソフロリン（ｉｓｏｆｌｕｏｒｉｎｅ）ガスを使用する軽度の麻酔後に、
マイクロヘマトクリットチューブを使用して、眼窩洞穿刺によって行った。血清
を、標準的な方法を使用して血液から分離した。唾液洗浄液（ＳＷ）サンプルを
、０．２×３．２ｃｍのセルロース吸着剤ウィック（ｗｉｃｋ）（Ａｍｅｒｉｃ
ａ Ｆｉｌｔｒｏｎａ．Ｒｉｃｈｍｏｎｄ．ＶＡ）の一端を、各々の免疫してい
ないマウスの口に１〜２分間配置し、唾液を吸着させることによって収集した。
次いで、抗体を、アッセイ前に、ＰＢＳ（４００μｌ）中に溶出した。鼻内洗浄
液サンプル（ＮＷ）を、塩酸ケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（４
ｍｇ／ｋｇ）の混合物で最初に動物を麻酔することによって収集した。動物を、
頭をわずかに下方に傾けて、背側横臥位に保持しながら、ＰＢＳ（６００μｌ）
を、小さいシリンジに連結したカテーテルを使用して鼻腔に挿入した。洗浄液を
、小さいチューブへの自然の（重力による）流れによって収集した。血清および
分泌サンプルを、アッセイまでに凍結（−７０℃）保存した。
【００５２】
（１．２．２ ｉ．ｇ．免疫後の抗体応答に対するエンテロトキシン型および
用量の効果） 用量範囲研究を、Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡでのｉ．ｇ．免疫に
ついてのＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２に対する用量応答関係を決定するため
に実施した。１０匹のマウスの群を、表１に記載されるように、ｗｔＬＴ、ＬＴ
−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２の３つの用量レベルと組合せた２０μｇのＡ／Ｂｅ
ｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを用いるｉ．ｇ．経路によって免疫した。ｗｔＬ
Ｔで補助されたＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３を受けた群、および補助されて
いないＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ（ＨＡのみ）を受けた群を、比較
の目的のために含んだ。
用量の効果） 用量範囲研究を、Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡでのｉ．ｇ．免疫に
ついてのＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２に対する用量応答関係を決定するため
に実施した。１０匹のマウスの群を、表１に記載されるように、ｗｔＬＴ、ＬＴ
−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２の３つの用量レベルと組合せた２０μｇのＡ／Ｂｅ
ｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを用いるｉ．ｇ．経路によって免疫した。ｗｔＬ
Ｔで補助されたＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３を受けた群、および補助されて
いないＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ（ＨＡのみ）を受けた群を、比較
の目的のために含んだ。
【００５３】
【表１】
これらの結果を、図１および図２に示す。
【００５４】
（１．２．３ ＬＴ−Ｒ７２の２つの用量レベルでの抗体応答に対するＡ／Ｂ
ｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ用量の効果） 第二の用量範囲研究を、ＬＴ−Ｒ７２で補助された場合のｉ．ｇ．免疫につい
てのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡの最適用量を決定するために実施し
た。１０匹のマウスの群を、表２に記載されるように、１０μｇまたは１００μ
ＧのいずれかのＬＴ−Ｒ７２と組合せた３つの用量レベルのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ
８−９／９３ ＨＡを用いるｉ．ｇ．経路によって免疫した。補助されていない
Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡコントロール群（ＨＡのみ）を受けた群
を、比較の目的のために含んだ。
ｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ用量の効果） 第二の用量範囲研究を、ＬＴ−Ｒ７２で補助された場合のｉ．ｇ．免疫につい
てのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡの最適用量を決定するために実施し
た。１０匹のマウスの群を、表２に記載されるように、１０μｇまたは１００μ
ＧのいずれかのＬＴ−Ｒ７２と組合せた３つの用量レベルのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ
８−９／９３ ＨＡを用いるｉ．ｇ．経路によって免疫した。補助されていない
Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡコントロール群（ＨＡのみ）を受けた群
を、比較の目的のために含んだ。
【００５５】
【表２】
これらの結果を、図３および４に示す。
【００５６】
（１．２．４ ｉ．ｇ．およびｉ．ｍ．免疫の比較）
Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ単独で、またはＬＴと組合せたＡ
／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡのいずれかでｉ．ｇ．免疫されたマウ
スの血清抗体応答を、ｉ．ｍ．経路によって、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／
９７ ＨＡで免疫されたマウスと比較した。１０匹のマウスの群を、表３に記載
されるように、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ単独で、
または２つの用量レベルのｗｔＬＴ、ＬＴ−Ｋ６３またはＬＴ−Ｒ７２と組合せ
た２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡのいずれかを用いて、
ｉ．ｇ．経路によって免疫した。ｉ．ｍ．経路によって１μｇのＡ／Ｊｏｈａｎ
ｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡを受けた群を、比較の目的のために含んだ。
／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡのいずれかでｉ．ｇ．免疫されたマウ
スの血清抗体応答を、ｉ．ｍ．経路によって、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／
９７ ＨＡで免疫されたマウスと比較した。１０匹のマウスの群を、表３に記載
されるように、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ単独で、
または２つの用量レベルのｗｔＬＴ、ＬＴ−Ｋ６３またはＬＴ−Ｒ７２と組合せ
た２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡのいずれかを用いて、
ｉ．ｇ．経路によって免疫した。ｉ．ｍ．経路によって１μｇのＡ／Ｊｏｈａｎ
ｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡを受けた群を、比較の目的のために含んだ。
【００５７】
【表３】
これらの結果を、図５、６および７に示す。
【００５８】
（１．３．１ 抗体ＥＬＩＳＡ）
個々の動物からの血清サンプルを、コーティング抗原として適切なＡ／Ｂｅｊ
ｉｎｇ８−９／９３またはＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７を用いて以前記
載されたように、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンベースの比色定
量酵素連結イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、総抗ＨＡ Ｉｇ
（ＩｇＧおよびＩｇＡおよびＩｇＭ）力価に関してアッセイした（Ｈａｒｌｏｗ
Ｅ．およびＤ．Ｌａｎｅ「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：
Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９８８．５５３−６１２
頁）。Ａ４９０を、標準的なＥＬＩＳＡ読取装置を用いて測定した。この力価は
、０．５のＡ４９０を与える相互血清希釈を表し、そして並行でアッセイした血
清標準物質に対して正規化した。個々の動物からのＳＷおよびＮＷサンプルを、
コーティング抗原として適切なＡ／Ｂｅｊｉｎｇ８−９／９３またはＡ／Ｊｏｈ
ａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７を用いて以前に記載されたように、生物発光イムノソ
ルベントアッセイを用いて、ＨＡ特異的ＩｇＡ力価に関してアッセイした（Ｕｇ
ｏｚｚｏｌｉ Ｍ．ら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：５６３−５７１）。
ヤギ抗マウスＩｇＡビオチン結合体（ＥＹ Ｌａｂｓ、Ｓａｎ Ｍａｔｅｏ，Ｃ
Ａ）を使用して、交差反応性を減少するために精製マウスＩｇＧ（１ｍｇ／ｍｌ
，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）
を用いて前飽和させた。定量は、３ｓに対して積分された総発光を表す相対的な
光単位数（任意の単位）に基づいた。力価は、平均のバックグラウンドを越えた
、少なくとも２つの標準的な偏差におけるカットオフ値に対する相対的な光単位
のログから直線的に外挿したログの希釈値を表す。
ｉｎｇ８−９／９３またはＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７を用いて以前記
載されたように、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンベースの比色定
量酵素連結イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって、総抗ＨＡ Ｉｇ
（ＩｇＧおよびＩｇＡおよびＩｇＭ）力価に関してアッセイした（Ｈａｒｌｏｗ
Ｅ．およびＤ．Ｌａｎｅ「Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：
Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒ
ｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．１９８８．５５３−６１２
頁）。Ａ４９０を、標準的なＥＬＩＳＡ読取装置を用いて測定した。この力価は
、０．５のＡ４９０を与える相互血清希釈を表し、そして並行でアッセイした血
清標準物質に対して正規化した。個々の動物からのＳＷおよびＮＷサンプルを、
コーティング抗原として適切なＡ／Ｂｅｊｉｎｇ８−９／９３またはＡ／Ｊｏｈ
ａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７を用いて以前に記載されたように、生物発光イムノソ
ルベントアッセイを用いて、ＨＡ特異的ＩｇＡ力価に関してアッセイした（Ｕｇ
ｏｚｚｏｌｉ Ｍ．ら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌ．９３：５６３−５７１）。
ヤギ抗マウスＩｇＡビオチン結合体（ＥＹ Ｌａｂｓ、Ｓａｎ Ｍａｔｅｏ，Ｃ
Ａ）を使用して、交差反応性を減少するために精製マウスＩｇＧ（１ｍｇ／ｍｌ
，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）
を用いて前飽和させた。定量は、３ｓに対して積分された総発光を表す相対的な
光単位数（任意の単位）に基づいた。力価は、平均のバックグラウンドを越えた
、少なくとも２つの標準的な偏差におけるカットオフ値に対する相対的な光単位
のログから直線的に外挿したログの希釈値を表す。
【００５９】
（１．３．２ 胃内投与後の血清抗体応答）
血清抗体応答（図１）は、試験するエンテロトキシンのいずれかと組合わせて
Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物の大部分の場合で、未アジ
ュバントのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物に比較して、有
意に高かった。図１は、表１に示すように、単独（ＨＡのみ）またはエンテロト
キシンと組合わせてかのいずれかで、２０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９
／９３ ＨＡ抗原を用いて免疫したマウスの血清中での、平均抗Ａ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３ ＨＡ抗体力価を示す。星印は、その値が、ＨＡのみの群の値
よりも有意に高かった群（Ｐ≦０．０５）を示す。用量応答は、明確に示されな
かったが、１０μｇおよび１００μｇのＬＴ−Ｒ７２と組合わせてＡ／Ｂｅｉｊ
ｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた群は、ｗｔＬＴと組合わせてＡ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた群の血清抗体応答に対して比較可能であること
を、見出した。１つの群（１００μｇ ＬＴ−Ｋ６３の用量レベルにおける群７
）のみが、強いアジュバント効果を示さなかった。
Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物の大部分の場合で、未アジ
ュバントのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物に比較して、有
意に高かった。図１は、表１に示すように、単独（ＨＡのみ）またはエンテロト
キシンと組合わせてかのいずれかで、２０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９
／９３ ＨＡ抗原を用いて免疫したマウスの血清中での、平均抗Ａ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３ ＨＡ抗体力価を示す。星印は、その値が、ＨＡのみの群の値
よりも有意に高かった群（Ｐ≦０．０５）を示す。用量応答は、明確に示されな
かったが、１０μｇおよび１００μｇのＬＴ−Ｒ７２と組合わせてＡ／Ｂｅｉｊ
ｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた群は、ｗｔＬＴと組合わせてＡ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた群の血清抗体応答に対して比較可能であること
を、見出した。１つの群（１００μｇ ＬＴ−Ｋ６３の用量レベルにおける群７
）のみが、強いアジュバント効果を示さなかった。
【００６０】
より明確なアジュバント用量応答を、抗原特異的な唾液ＩｇＡ応答に見出した
（図２）。図２は、表１に示すように、単独（ＨＡのみ）またはエンテロトキシ
ンと組合わせてかのいずれかで、２０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９
３ ＨＡ抗原を用いて免疫したマウス群の、平均抗Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／
９３ ＨＡ ＳＷ ＩｇＡ抗体力価を示す。星印は、その値が、ＨＡのみの群の
値よりも有意に高かった群（Ｐ≦０．０５）を示す。有意により強い唾液ＩｇＡ
応答を、Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ単独を受けた動物に比較して、
１つのＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２アジュバント群以外の全てに対して示し
た。さらに、１００μｇのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて２０μｇ Ａ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３ ＨＡを胃内投与した動物は、１０μｇまたは２５μｇのｗｔ
ＬＴのいずれかを用いて胃内投与した動物よりも、有意に高い（Ｐ≦０．０５）
抗原特異的唾液ＩｇＡ応答を有することを見出した。
（図２）。図２は、表１に示すように、単独（ＨＡのみ）またはエンテロトキシ
ンと組合わせてかのいずれかで、２０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９
３ ＨＡ抗原を用いて免疫したマウス群の、平均抗Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／
９３ ＨＡ ＳＷ ＩｇＡ抗体力価を示す。星印は、その値が、ＨＡのみの群の
値よりも有意に高かった群（Ｐ≦０．０５）を示す。有意により強い唾液ＩｇＡ
応答を、Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ単独を受けた動物に比較して、
１つのＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２アジュバント群以外の全てに対して示し
た。さらに、１００μｇのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて２０μｇ Ａ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３ ＨＡを胃内投与した動物は、１０μｇまたは２５μｇのｗｔ
ＬＴのいずれかを用いて胃内投与した動物よりも、有意に高い（Ｐ≦０．０５）
抗原特異的唾液ＩｇＡ応答を有することを見出した。
【００６１】
（１．３．３ 胃内投与後の抗原特異的ＳＷ ＩｇＡ応答に対するエンテロト
キシン用量の比較） 抗原特異的血清抗体応答（図３）は、この動物を免疫したＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ
８−９／９３の用量レベルおよびＬＴ−Ｒ７２の用量レベルに関する、用量応答
傾向を示す。図３は、表２に示すように単独で投与した（ＨＡのみ）２０μｇ
ＨＡに対して比較した場合、１０μｇまたは１００μｇのいずれかのＬＴ−Ｒ７
２と組合わせた１、５、または２０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３
ＨＡで免疫したマウス血清中の、平均抗Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ Ｈ
Ａ抗体力価を示す。星印は、その値が、ＨＡのみの群の値よりも有意に異なる群
（Ｐ≦０．０５）を示す。血清抗体は、未アジュバントのコントロール群と比較
した場合、１０μｇまたは１００μｇのいずれかのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて２
０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを用いて胃内で免疫した動
物において有意により高かった（Ｐ≦０．０５）。試験した最も高い用量レベル
を受けた群（１００μｇ ＬＴ−Ｒ７２と組合わせた２０μｇのＡ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３）は、試験した全ての他の群よりも、有意により高い（Ｐ≦０
．０５）抗原特異的血清抗体応答を有した。
キシン用量の比較） 抗原特異的血清抗体応答（図３）は、この動物を免疫したＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ
８−９／９３の用量レベルおよびＬＴ−Ｒ７２の用量レベルに関する、用量応答
傾向を示す。図３は、表２に示すように単独で投与した（ＨＡのみ）２０μｇ
ＨＡに対して比較した場合、１０μｇまたは１００μｇのいずれかのＬＴ−Ｒ７
２と組合わせた１、５、または２０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３
ＨＡで免疫したマウス血清中の、平均抗Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ Ｈ
Ａ抗体力価を示す。星印は、その値が、ＨＡのみの群の値よりも有意に異なる群
（Ｐ≦０．０５）を示す。血清抗体は、未アジュバントのコントロール群と比較
した場合、１０μｇまたは１００μｇのいずれかのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて２
０μｇ用量のＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを用いて胃内で免疫した動
物において有意により高かった（Ｐ≦０．０５）。試験した最も高い用量レベル
を受けた群（１００μｇ ＬＴ−Ｒ７２と組合わせた２０μｇのＡ／Ｂｅｉｊｉ
ｎｇ８−９／９３）は、試験した全ての他の群よりも、有意により高い（Ｐ≦０
．０５）抗原特異的血清抗体応答を有した。
【００６２】
抗原特異的唾液ＩｇＡ応答（図４）は、１０μｇ ＬＴ−Ｒ７２と組合わせて
１μｇのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３を受けた群（群１２）を例外として、
血清抗体応答で見出した傾向と一致した。図４は、表２に示すように単独で投与
される（ＨＡのみ）２０μｇ ＨＡと比較した場合、１０μｇまたは１００μｇ
のいずれかのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて、１、５、または２０μｇ用量のＡ／Ｂ
ｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを用いて免疫したマウス群の、平均抗Ａ／Ｂｅ
ｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ ＳＷ ＩｇＡ抗体力価を示す。星印は、その値
が、ＨＡのみの群の値よりも有意に高かった群（Ｐ≦０．０５）を示す。１００
μｇのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて５μｇまたは２０μｇいずれかのＡ／Ｂｅｉｊ
ｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物は、未アジュバントのＡ／Ｂｅｉｊｉｎ
ｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物と比較して、有意ににより高い（Ｐ≦０．０
５）抗原特異的唾液ＩｇＡ応答を示した。
１μｇのＡ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３を受けた群（群１２）を例外として、
血清抗体応答で見出した傾向と一致した。図４は、表２に示すように単独で投与
される（ＨＡのみ）２０μｇ ＨＡと比較した場合、１０μｇまたは１００μｇ
のいずれかのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて、１、５、または２０μｇ用量のＡ／Ｂ
ｅｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを用いて免疫したマウス群の、平均抗Ａ／Ｂｅ
ｉｊｉｎｇ８−９／９３ ＨＡ ＳＷ ＩｇＡ抗体力価を示す。星印は、その値
が、ＨＡのみの群の値よりも有意に高かった群（Ｐ≦０．０５）を示す。１００
μｇのＬＴ−Ｒ７２と組合わせて５μｇまたは２０μｇいずれかのＡ／Ｂｅｉｊ
ｉｎｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物は、未アジュバントのＡ／Ｂｅｉｊｉｎ
ｇ８−９／９３ ＨＡを受けた動物と比較して、有意ににより高い（Ｐ≦０．０
５）抗原特異的唾液ＩｇＡ応答を示した。
【００６３】
（１．３．４ 抗原特異的血清の抗体応答におけるｉ．ｍ．およびｉ．ｇ．投
与の効果の比較） 血清での抗原特異的な抗体応答（図５）は、ＬＴで補助した２０μｇのＡ／Ｊ
ｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡでｉ．ｇ．免疫化したマウスについて、ｉ
．ｍ．免疫化したマウスと比較して等価または高かった。図５は、表３に示され
るように免疫化されたマウスの血清における、抗Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ
／９７ ＨＡ抗体の平均力価を示す。アスタリスクは、ｉ．ｍ．免疫化されたグ
ループの値よりも有意に異なる（Ｐ≦０．０５）値のグループを示す。２０μｇ
のＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ非補助（ＨＡのみ）または１０μ
ｇのＬＴ−Ｋ６３との組み合わせのいずれかでｉ．ｇ．免疫したマウスは、血清
での抗原特異的な抗体応答において、ｉ．ｍ．経路で免疫化したマウスと比較し
て有意に低かった（Ｐ≦０．０５）が、それにもかかわらず１０μｇのＬＴ−Ｋ
６３の存在下でのｉ．ｇ．免疫化は、非補助のＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／
９７ ＨＡを用いるｉ．ｇ．免疫化よりも１ログ（ｌｏｇ）高い抗体応答を生じ
た。１００μｇのＬＴ−Ｒ７２と組み合わせて２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓ
ｂｕｒｇ／９７ ＨＡを用いてｉ．ｇ．免疫化したマウスは、ｉ．ｍ．免疫化で
見出される応答よりも有意に（Ｐ≦０．０５）高い血清での免疫特異的抗体応答
を生じた。
与の効果の比較） 血清での抗原特異的な抗体応答（図５）は、ＬＴで補助した２０μｇのＡ／Ｊ
ｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡでｉ．ｇ．免疫化したマウスについて、ｉ
．ｍ．免疫化したマウスと比較して等価または高かった。図５は、表３に示され
るように免疫化されたマウスの血清における、抗Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ
／９７ ＨＡ抗体の平均力価を示す。アスタリスクは、ｉ．ｍ．免疫化されたグ
ループの値よりも有意に異なる（Ｐ≦０．０５）値のグループを示す。２０μｇ
のＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ非補助（ＨＡのみ）または１０μ
ｇのＬＴ−Ｋ６３との組み合わせのいずれかでｉ．ｇ．免疫したマウスは、血清
での抗原特異的な抗体応答において、ｉ．ｍ．経路で免疫化したマウスと比較し
て有意に低かった（Ｐ≦０．０５）が、それにもかかわらず１０μｇのＬＴ−Ｋ
６３の存在下でのｉ．ｇ．免疫化は、非補助のＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／
９７ ＨＡを用いるｉ．ｇ．免疫化よりも１ログ（ｌｏｇ）高い抗体応答を生じ
た。１００μｇのＬＴ−Ｒ７２と組み合わせて２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓ
ｂｕｒｇ／９７ ＨＡを用いてｉ．ｇ．免疫化したマウスは、ｉ．ｍ．免疫化で
見出される応答よりも有意に（Ｐ≦０．０５）高い血清での免疫特異的抗体応答
を生じた。
【００６４】
（１．３．５ 抗原特異的ＮＷ ＩｇＡ抗体応答に対する、ｉ．ｍ．およびｉ
．ｇ．投与の効果の比較） 図７は、抗原特異的ＮＷ ＩｇＡ抗体応答に対する、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂ
ｕｒｇ／９７ ＨＡのｉ．ｍ．およびｉ．ｇ．投与の効果の比較を示す。表３に
示されるように免疫されたマウスの、抗Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７
ＨＡ ＮＷ ＩｇＡ抗体の平均力価が示される。アスタリスクは、ｉ．ｍ．免疫
化グループの値よりも有意に高い（Ｐ≦０．０５）値のグループを示す。抗原特
異的ＮＷ ＩｇＡ応答は、ｗｔＬＴ．ＬＴ−Ｋ６３．またはＬＴ−Ｒ７２のいず
れかと組み合わせた２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡを用
いてｉ．ｇ．免疫化したマウスにおいてのみ有意であることが見出された。ｉ．
ｍ．免疫化、または２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ単独
でのｉ．ｇ．によって免疫化したマウスは、有意な抗原特異的ＮＷ ＩｇＡ応答
を生じなかった。エンテロトキシンの用量レベルまたは型の結果として、抗原特
異的ＩｇＡ応答における有意な差異は見出されなかった。
．ｇ．投与の効果の比較） 図７は、抗原特異的ＮＷ ＩｇＡ抗体応答に対する、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂ
ｕｒｇ／９７ ＨＡのｉ．ｍ．およびｉ．ｇ．投与の効果の比較を示す。表３に
示されるように免疫されたマウスの、抗Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７
ＨＡ ＮＷ ＩｇＡ抗体の平均力価が示される。アスタリスクは、ｉ．ｍ．免疫
化グループの値よりも有意に高い（Ｐ≦０．０５）値のグループを示す。抗原特
異的ＮＷ ＩｇＡ応答は、ｗｔＬＴ．ＬＴ−Ｋ６３．またはＬＴ−Ｒ７２のいず
れかと組み合わせた２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡを用
いてｉ．ｇ．免疫化したマウスにおいてのみ有意であることが見出された。ｉ．
ｍ．免疫化、または２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ単独
でのｉ．ｇ．によって免疫化したマウスは、有意な抗原特異的ＮＷ ＩｇＡ応答
を生じなかった。エンテロトキシンの用量レベルまたは型の結果として、抗原特
異的ＩｇＡ応答における有意な差異は見出されなかった。
【００６５】
（１．４．１ ＨＩアッセイ）
グループ毎にプールした血清サンプルを、Ｖｉｒａｌ ａｎｄ Ｒｉｃｋｅｔ
ｔｓｉａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）によって標
準的ＥＬＩＳＡを使用して、赤血球凝集阻害（ＨＩ）力価についてアッセイした
。このＨＩアッセイは、ＨＡ抗原の存在下でヤギの赤血球の凝集を阻害するサン
プル血清の能力に基づく。得られた力価は、完全な阻害のために必要とされる相
互希釈として表される（Ｈｉｅｒｈｏｌｚｅｒ Ｊ．Ｃ．およびＭ．Ｔ．Ｓｕｇ
ｇｓ（１９６９）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１８：８１６−８２３；Ｈｉ
ｅｒｈｏｌｚｅｒ Ｊ．Ｃ．ら（１９６９）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１
８：８２４−３３）。
ｔｓｉａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）によって標
準的ＥＬＩＳＡを使用して、赤血球凝集阻害（ＨＩ）力価についてアッセイした
。このＨＩアッセイは、ＨＡ抗原の存在下でヤギの赤血球の凝集を阻害するサン
プル血清の能力に基づく。得られた力価は、完全な阻害のために必要とされる相
互希釈として表される（Ｈｉｅｒｈｏｌｚｅｒ Ｊ．Ｃ．およびＭ．Ｔ．Ｓｕｇ
ｇｓ（１９６９）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１８：８１６−８２３；Ｈｉ
ｅｒｈｏｌｚｅｒ Ｊ．Ｃ．ら（１９６９）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１
８：８２４−３３）。
【００６６】
（１．４．２ 血清のＨＩ力価に対するｉ．ｍ．およびｉ．ｇ．投与の効果の
比較） 図６は、血清のＨＩ力価に対する、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ Ｈ
Ａのｉ．ｍ．およびｉ．ｇ．投与の効果の比較を示す。このデータは、表３で示
されるように免疫されたマウスのグループ由来のプールされた血清について示す
。１０μｇのｗｔＬＴ．または１００μｇのＬＴ−Ｒ７２のいずれかと組み合わ
せて、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡでｉ．ｇ．免疫し
たマウスについての血清のＨＩ力価は、効力について、ｉ．ｍ．免疫されたマウ
スに匹敵した。１μｇのｗｔＬＴ．１０μｇのＬＴ−Ｒ７９．または１００μｇ
のＬＴ−Ｋ６３のいずれかと組み合わせて、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂ
ｕｒｇ／９７ ＨＡを用いてｉ．ｇ．免疫化したマウスは、適度なＨＩ力価レベ
ルを生じた。有意なＨＩ力価は、単独または１０μｇのＬＴ−Ｋ６３と組み合わ
せてかのいずれかで、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡを
用いてｉ．ｇ．免疫化したマウスについては示されなかった。
比較） 図６は、血清のＨＩ力価に対する、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ Ｈ
Ａのｉ．ｍ．およびｉ．ｇ．投与の効果の比較を示す。このデータは、表３で示
されるように免疫されたマウスのグループ由来のプールされた血清について示す
。１０μｇのｗｔＬＴ．または１００μｇのＬＴ−Ｒ７２のいずれかと組み合わ
せて、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡでｉ．ｇ．免疫し
たマウスについての血清のＨＩ力価は、効力について、ｉ．ｍ．免疫されたマウ
スに匹敵した。１μｇのｗｔＬＴ．１０μｇのＬＴ−Ｒ７９．または１００μｇ
のＬＴ−Ｋ６３のいずれかと組み合わせて、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂ
ｕｒｇ／９７ ＨＡを用いてｉ．ｇ．免疫化したマウスは、適度なＨＩ力価レベ
ルを生じた。有意なＨＩ力価は、単独または１０μｇのＬＴ−Ｋ６３と組み合わ
せてかのいずれかで、２０μｇのＡ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡを
用いてｉ．ｇ．免疫化したマウスについては示されなかった。
【００６７】
（１．５．１ 統計値）
個々の動物由来の、ログ抗Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ８−９／９３および抗Ａ／Ｊｏ
ｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ血清Ｉｇ、唾液ＩｇＡ、ならびに鼻ＩｇＡの
力価を、Ｆｉｓｈｅｒ最小有意差手順（ｌｅａｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）（Ａｎｄｒｅｗｓ Ｈ．Ｐ．ら（１９８０）Ａｍ．Ｓｔ
ａｔｉｓｔｉｃｉａｎ ３４：１９５−１９９）を使用して分析した。比較の間
隔は、重複していない棒が平均間の５％よりも大きな統計学的有意性（Ｐ≦０．
０５）を意味するように示された。
ｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ ＨＡ血清Ｉｇ、唾液ＩｇＡ、ならびに鼻ＩｇＡの
力価を、Ｆｉｓｈｅｒ最小有意差手順（ｌｅａｓｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）（Ａｎｄｒｅｗｓ Ｈ．Ｐ．ら（１９８０）Ａｍ．Ｓｔ
ａｔｉｓｔｉｃｉａｎ ３４：１９５−１９９）を使用して分析した。比較の間
隔は、重複していない棒が平均間の５％よりも大きな統計学的有意性（Ｐ≦０．
０５）を意味するように示された。
【００６８】
上記の実験は、ｉ．ｇ．免疫化を使用し、そして変異体ＬＴ（これは、有意に
減少し（ＬＴ−Ｒ７２）、そして測定できないレベル（ＬＴ−Ｋ６３）のＡＤＰ
−リボシルトランスフェラーゼ活性を示す）で補助してインフルエンザＨＡ抗原
をマウス中に誘導する場合に、強力な抗原特異的血清抗体およびウイルス中和力
価（ＨＩ力価によって示される）が、ｉ．ｍ．ＩｇＡ応答に匹敵するか、または
これよりも強いことを実証する（Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｍ．Ｍ．ら（１９９８）Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１２３−１１３２）。
減少し（ＬＴ−Ｒ７２）、そして測定できないレベル（ＬＴ−Ｋ６３）のＡＤＰ
−リボシルトランスフェラーゼ活性を示す）で補助してインフルエンザＨＡ抗原
をマウス中に誘導する場合に、強力な抗原特異的血清抗体およびウイルス中和力
価（ＨＩ力価によって示される）が、ｉ．ｍ．ＩｇＡ応答に匹敵するか、または
これよりも強いことを実証する（Ｇｉｕｌｉａｎｉ Ｍ．Ｍ．ら（１９９８）Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１２３−１１３２）。
【００６９】
上記の実施例は本発明の例示であるが、添付の特許請求の範囲において規定さ
れる本発明の範囲を限定するようには意図されない。当業者は、本明細書中に記
載される組成物およびプロセスの利点を容易に理解し、そして本発明が適用され
得る方法を理解する。
れる本発明の範囲を限定するようには意図されない。当業者は、本明細書中に記
載される組成物およびプロセスの利点を容易に理解し、そして本発明が適用され
得る方法を理解する。
【図１】
図１は、胃内（ｉ．ｇ．）投与後の免疫原特異的血清抗体応答に際する、エン
テロトキシン用量の比較を示す。
テロトキシン用量の比較を示す。
【図２】
図２は、胃内投与後の抗原特異的唾液洗浄物（ＳＷ）ＩｇＡ応答に際する、エ
ンテロトキシン用量の比較を示す。
ンテロトキシン用量の比較を示す。
【図３】
図３は、胃内投与後の抗原特異的血清抗体応答に際する、ＨＡ用量の比較を示
す。
す。
【図４】
図４は、胃内投与後の抗原特異的唾液洗浄物（ＳＷ）ＩｇＡ応答に際する、Ｈ
Ａ用量の比較を示す。
Ａ用量の比較を示す。
【図５】
図５は、抗原特異的血清抗体応答に対する、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／
９７ＨＡの筋肉内投与および胃内投与の効果の比較を示す。
９７ＨＡの筋肉内投与および胃内投与の効果の比較を示す。
【図６】
図６は、血清ＨＩ力価に対する、Ａ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ＨＡの
筋肉内投与および胃内投与の効果の比較を示す。
筋肉内投与および胃内投与の効果の比較を示す。
【図７】
図７は、抗原特異的鼻洗浄物（ＮＷ）ＩｇＡ抗体応答に対する、Ａ／Ｊｏｈａ
ｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ＨＡの筋肉内投与および胃内投与の効果の比較を示す。
ｎｎｅｓｂｕｒｇ／９７ＨＡの筋肉内投与および胃内投与の効果の比較を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 パイン， サミュエル
アメリカ合衆国 カリフォルニア 94611，
オークランド， フェアマウント アベ
ニュー 298， アパートメント ナンバ
ー４
(72)発明者 オーヘイガン， デレック
アメリカ合衆国 カリフォルニア 94705，
バークレー， ウォルジー ストリート
2372
Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA06 BA03 BA44 CA04
DA33 MA02 MA52 NA14 ZB092
ZB352
4C085 AA04 BA55 CC05 CC08 DD22
GG08
Claims (12)
- 【請求項１】 哺乳動物において免疫応答を誘発するための組成物であって
、該組成物は、免疫原性量の、インフルエンザウイルスの少なくとも一種の粘膜
付着抗原、および少なくとも一種の熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉエンテロトキシンを含む、組成物。 - 【請求項２】 前記熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエ
ンテロトキシンが、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２からなる群より選択される
、請求項１に記載の組成物。 - 【請求項３】 前記粘膜付着抗原が、前記インフルエンザウイルスの赤血球
凝集素抗原を含む、請求項１に記載の組成物。 - 【請求項４】 哺乳動物において免疫応答を誘起する方法であって、該方法
は、該哺乳動物に、有効量の、インフルエンザウイルスの少なくとも一種の粘膜
付着抗原および熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロト
キシンを、経口投与する工程を包含する、方法。 - 【請求項５】 前記熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエ
ンテロトキシンが、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２からなる群より選択される
、請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 前記粘膜付着抗原が、前記インフルエンザウイルスの赤血球
凝集素抗原を含む、請求項４に記載の方法。 - 【請求項７】 哺乳動物の鼻分泌物または唾液において抗原特異的ＩｇＡを
誘起する方法であって、該方法は、該哺乳動物に、有効量の、インフルエンザウ
イルスの少なくとも一種の粘膜付着抗原および少なくとも一種の熱不安定性変異
体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシンを投与する工程を包含す
る、方法。 - 【請求項８】 前記粘膜付着抗原が、前記インフルエンザウイルスの赤血球
凝集素抗原を含む、請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 前記熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエ
ンテロトキシンが、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２からなる群より選択される
、請求項７に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記哺乳動物がヒトである、請求項７に記載の方法。
- 【請求項１１】 哺乳動物のための経口インフルエンザ免疫原性組成物であ
って、該組成物は、有効量のインフルエンザ赤血球凝集素および少なくとも一種
の熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシンを含み
、該熱不安定性変異体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉエンテロトキシンは、
ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２からなる群より選択される、組成物。 - 【請求項１２】 前記哺乳動物がヒトである、請求項１１に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US16002899P | 1999-10-18 | 1999-10-18 | |
| US60/160,028 | 1999-10-18 | ||
| PCT/US2000/041241 WO2001035993A2 (en) | 1999-10-18 | 2000-10-18 | Compositions and methods for stimulating an immune response against infectious agents |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003514030A true JP2003514030A (ja) | 2003-04-15 |
| JP2003514030A5 JP2003514030A5 (ja) | 2007-11-22 |
| JP4889175B2 JP4889175B2 (ja) | 2012-03-07 |
Family
ID=22575185
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001537983A Expired - Fee Related JP4889175B2 (ja) | 1999-10-18 | 2000-10-18 | 感染性因子に対する免疫応答を刺激するための組成物および方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20090130141A1 (ja) |
| EP (1) | EP1221970B1 (ja) |
| JP (1) | JP4889175B2 (ja) |
| CA (1) | CA2388054C (ja) |
| ES (1) | ES2462532T3 (ja) |
| WO (1) | WO2001035993A2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2680237C (en) | 2007-03-27 | 2018-11-06 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Constructs and libraries comprising antibody surrogate light chain sequences |
| AU2009228058A1 (en) | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Neutralizing molecules to viral antigens |
| WO2010132604A2 (en) | 2009-05-13 | 2010-11-18 | Sea Lane Biotechnologies, Llc | Neutralizing molecules to influenza viruses |
| WO2013016714A1 (en) | 2011-07-28 | 2013-01-31 | Sea Lane Biotechnologies | Sur-binding proteins against erbb3 |
| US9975956B2 (en) | 2011-12-22 | 2018-05-22 | I2 Pharmaceuticals, Inc. | Surrogate binding proteins which bind DR4 and/or DR5 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998042375A1 (en) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Chiron Corporation | Detoxified mutants of bacterial adp-ribosylating toxins as parenteral adjuvants |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6413523B1 (en) * | 1989-06-02 | 2002-07-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Pharmaceutical composition of escherichia coli heat-labile enterotoxin adjuvant and methods of use |
| US6019982A (en) * | 1994-08-26 | 2000-02-01 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Mutant enterotoxin effective as a non-toxic oral adjuvant |
| AU3189795A (en) * | 1994-09-28 | 1996-04-19 | Biocine S.P.A. | Mouse model for helicobacter pylori infection |
| EP0919243A1 (en) * | 1997-11-25 | 1999-06-02 | Duphar International Research B.V | Vaccine containing B subunits of heat-labile enterotoxin (LTB) of Escherichia coli as an adjuvant |
-
2000
- 2000-10-18 CA CA2388054A patent/CA2388054C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-10-18 EP EP00992122.2A patent/EP1221970B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-18 JP JP2001537983A patent/JP4889175B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-10-18 ES ES00992122.2T patent/ES2462532T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-10-18 WO PCT/US2000/041241 patent/WO2001035993A2/en active Application Filing
-
2008
- 2008-11-03 US US12/290,741 patent/US20090130141A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-11-06 US US13/669,914 patent/US20130315951A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998042375A1 (en) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Chiron Corporation | Detoxified mutants of bacterial adp-ribosylating toxins as parenteral adjuvants |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1221970A2 (en) | 2002-07-17 |
| US20130315951A1 (en) | 2013-11-28 |
| CA2388054C (en) | 2012-12-11 |
| JP4889175B2 (ja) | 2012-03-07 |
| WO2001035993A3 (en) | 2002-03-14 |
| WO2001035993A2 (en) | 2001-05-25 |
| ES2462532T3 (es) | 2014-05-23 |
| CA2388054A1 (en) | 2001-05-25 |
| US20090130141A1 (en) | 2009-05-21 |
| EP1221970B1 (en) | 2014-02-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| de Haan et al. | Nasal or intramuscular immunization of mice with influenza subunit antigen and the B subunit of Escherichia coli heat-labile toxin induces IgA-or IgG-mediated protective mucosal immunity | |
| EP0528859B1 (en) | Oral vaccine comprising antigen surface-associated with red blood cells | |
| US6372223B1 (en) | Influenza virus vaccine composition | |
| KR960003378B1 (ko) | 백신 제제 | |
| US7052701B2 (en) | Inactivated influenza virus vaccine for nasal or oral application | |
| US8182821B2 (en) | Flu vaccine admixture of mannan and flu antigen | |
| WO2005014038A1 (ja) | 粘膜免疫誘導アジュバントを含む新規ワクチン | |
| Larsen et al. | Immunization of pigs against influenza virus infection by DNA vaccine priming followed by killed-virus vaccine boosting | |
| JP2003526676A (ja) | ワクチン用のアジュバント | |
| US20130315951A1 (en) | Compositions and methods for stimulating an immune response against infectious agents | |
| Bastien et al. | Complete protection of mice from respiratory syncytial virus infection following mucosal delivery of synthetic peptide vaccines | |
| BR112012007552A2 (pt) | formulações de vacina com adjuvante | |
| Berstad et al. | Inactivated meningococci and pertussis bacteria are immunogenic and act as mucosal adjuvants for a nasal inactivated influenza virus vaccine | |
| JP2023091085A (ja) | 粘膜アジュバント | |
| Glück | Intranasal immunization against influenza | |
| JP2007505836A (ja) | 麻疹サブユニットワクチン | |
| US8535683B2 (en) | Intranasal or inhalational administration of virosomes | |
| ES2338382T3 (es) | Vacuna intranasal antigripal basada en virosomas. | |
| WO2008037033A1 (en) | Flu vaccine admixture of mannan and flu antigen | |
| TWI397419B (zh) | 病毒顆粒的鼻內或吸入給藥 | |
| PT721782E (pt) | Vacina contra a gripe contendo toxina da tosse convulsa | |
| US20080038294A1 (en) | Intranasal or inhalational administration of virosomes | |
| KR20140046143A (ko) | 안약형 백신의 신규 아쥬반트 | |
| JPWO2006019183A1 (ja) | 粘膜免疫、その感作剤を用いる粘膜ワクチン及び予防接種システム |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071002 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071002 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100915 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101213 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101220 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110105 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110411 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110810 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110905 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20111003 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111115 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111117 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20111212 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20111213 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20141222 Year of fee payment: 3 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |