JP2003505519A - 多座結合を介した多量体画像化剤の標的化 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、診断画像化用の造影剤に関する。特に、本発明は、内因性タンパク質または他の生理学的に関連した部位に結合すると改良された緩和特性を示す新規多量体化合物に関する。これらの化合物は、以下からなる：ａ）２種またはそれ以上の画像向上部分（ＩＥＭ）（または信号発生部分）であって、該部分は、複数のサブユニットを含有する；ｂ）２種またはそれ以上の標的結合部分（ＴＢＭ）であって、該部分は、インビボ局在化および多量体硬直化を与える；ｃ）上記部分の結合用の足場骨組み；およびｄ）該ＩＥＭを該足場に結合するための任意のリンカー。本発明はまた、これらの化合物を含有する薬学的組成物およびこれらの化合物および組成物を使用して、診断画像化中のコントラストを増大する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の技術分野） 本発明は、診断画像化用の造影剤に関する。特に、本発明は、生理学的に関連
した標的（例えば、タンパク質）に対する改良された親和性および結合時に驚く
ほどに改良された緩和率を示す新規多量体化合物に関する。これらの化合物は、
以下を含有する： ａ）２種またはそれ以上の画像向上部分（「ＩＥＭ」）； ｂ）２種またはそれ以上の標的結合部分（「ＴＢＭ」）であって、インビボ局
在化および多量体硬直化を与える； ｃ）上記部分の結合用の足場骨組み（「足場」）； ｄ）該ＩＥＭを該足場に結合するための任意のリンカー（「リンカー」）。

【０００２】 本発明はまた、これらの化合物を含有する薬学的組成物ならびにこれらの化合
物および組成物を使用して画像化中のコントラストを増大する方法に関する。

【０００３】 （発明の背景） 診断画像化技術（例えば、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線、核放射性医薬品
の画像化、紫外−可視−赤外光の画像化、および超音波）は、何年にもわたって
、医学診断で使用されている。それに加えて、この画像の解像度を改良するかま
たは高めるために、または特定の診断情報を提供するために、コントラスト媒体
が使用されている。ある場合（例えば、超音波を使った画像化）では、コントラ
スト媒体の導入が新しい。

【０００４】 このコントラスト媒体は、効果的であるために、その画像化技術で使用される
電磁放射線の波長を妨害しなければならず、変性信号を生じるのに組織の物理的
特性を変えなければならず、または放射性医薬品の場合では、放射線自体の発生
源を与えなければならない。ＭＲＩおよび光学画像化法は、化学環境に感受性で
ある複雑な信号を生じる点で、画像化様式のうちでは独特である。Ｘ線または放
射性核種剤からの信号は、これらの試薬が血漿中で遊離していようと、タンパク
質または他の標的に結合していようと、または骨の内部に捕捉されていようと、
同じであるものの、ＭＲＩおよび光学画像化用のある種の造影剤は、種々の生理
学的な環境において、異なる信号特性を有する。光学染料（ｏｐｒｉｃａｌ ｄ
ｙｅ）は、結合すると、その吸光度、反射率、蛍光、燐光、化学発光、散乱、ま
たは他のスペクトル特性の変化を示し得る。この造影剤は、信号変化が観察でき
るように、十分に感受性であって、十分に高い濃度で存在することが重要である
。

【０００５】 （ＩＥＭの数を高めることによりコントラストを改良する試み） 画像化の過程で信号の十分な改良が観察されるように、標的化剤は、有意義な
濃度の画像化部分を標的に送達すべきである。十分な感度を達成することは、特
に、十分な信号を生じるのに１０〜１０００マイクロモル（μＭ）の範囲の濃度
の画像向上部分が必要である場合、ＭＲＩには有意な問題である。この問題は、
標的化剤に対して、所望の標的が低濃度で存在している場合、さらに複雑となり
得る。例えば、μＭ未満の濃度で存在している生体レセプター標的を画像化する
ためには、十分な画像コントラストをもたらすために、その標的部位において、
さらに高い信号の増大が必要である。高いコントラストは、以下を使用すること
により、取り組まれている：（１）高い局所濃度の造影剤を提供するための薬剤
送達ビヒクル；（２）単一造影剤中の複数のＩＥＭ［例えば、Ｍａｒｔｉｎ Ｖ
．Ｖ．ら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，６：ｐｐ．６１６〜２３（１９９
５）；Ｓｈｕｋｌａ，Ｒ．ら、Ｍａｇ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．，３５：ｐｐ．９
２８〜９３１（１９９６）；Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｉｎｖｅｓ
ｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３３：ｐｐ．７７９〜７９７（１９９８）］；または（３
）信号増大特性を改良した規定構造の特定のＩＥＭ。理想的な標的造影剤は、Ｉ
ＥＭを効率的に結合して改良された信号増大特性を示すべきである。

【０００６】 多数の画像向上部分を造影剤に組み込むために、高い濃度の低分子量造影剤が
、適当な薬剤送達ビヒクル（例えば、重合したビヒクルまたはリポソーム）にパ
ッケージングされている［Ｂｕｌｔｅ Ｊ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ
．Ｉｍａｇｉｎｇ，９：ｐｐ．３２９〜３３５（１９９９）］。残念なことに、
これらの物質は、標的に向けることが困難である。

【０００７】 この画像向上部分の数を多くするために、研究者は、例えば、複数のＩＥＭと
共に、重合体、デンドリマー、および有機化合物を作り出した。ＭＲＩ用の多数
のＩＥＭ（例えば、Ｇｄ（ＩＩＩ）キレート）を、重合体［Ｓｃｈｕｈｍａｎｎ
−Ｇｉａｍｐｉｅｒｉ，Ｇ．ら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄ．，２６：ｐｐ．９
６９〜９７４（１９９１）；Ｃｏｒｏｔ，Ｃ．ら、Ａｃｔａ Ｒａｄ．，３８：
Ｓ４１２ ｐｐ．９１〜９９（１９９７）］およびデンドリマー［Ｊａｃｑｕｅ
ｓ，Ｖ．ら、Ｊ．Ａｌｌｏｙｓ Ｃｍｉｏｄ．，２４９：ｐｐ．１７３〜１７７
（１９９７）；Ｍａｒｇｅｒｕｍ，Ｌ．Ｄ．ら、Ｊ．Ａｌｌｏｙｓ Ｃｏｍｐｄ
.，２４９：ｐｐ．１８５〜１９０（１９９７）；Ｔｏｔｈ，Ｅ．ら、Ｃｈｅｍ
．Ｅｕｒ．Ｊ．，２：ｐｐ．１６０７〜１６１５（１９９６）］に共有結合でき
る。重合体試薬は、典型的には、広範囲で複雑な分子量分布を有する種の混合物
を含有する。それらの不均一な特性は、試薬の性能に悪影響を与え、そして特性
付けを困難にする。さらに、複数のＩＥＭと共にＴＢＭを選択的に導入すること
は、合成的に困難である。従って、造影剤として使用する明確な均一分子であっ
て、標的において十分な画像の増大をもたらすことができるものが必要とされて
いる。

【０００８】 デンドリマー（例えば、「星形デンドリマー」または「カスケード重合体」）
は、理論的に、多くのＩＥＭが共有結合できる単一の高分子量種を与える。［Ｆ
ｉｓｃｈｅｒ，Ｍ．ら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ.，Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｑ.，３８
／７：ｐｐ．８８４〜９０５（１９９９）； Ｗｅｉｎｅｒ，Ｅ．Ｃ．ら、Ｍａ
ｑ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ.，３１：ｐｐ．１〜８（１９９４）］。しかしながら
、デンドリマーは、重合体試薬と同様に、特に組織特異的な標的基を選択的に導
入するとき、重要な合成の問題がある。

【０００９】 有機分子は、複数の画像向上部分と共に合成されている。この種のＭＲＩ造影
剤は、本明細書中では、「多量体キレート」または「多量体」と呼ばれており、
典型的には、２個〜１２個のＩＥＭを含有する。［Ｓｈｕｋｌａ，Ｒ．ら、Ｍａ
ｇ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ.，３５：ｐｐ．９２８〜９３１（１９９６）； Ｓｈｕ
ｋｌａ，Ｒ．Ｂ．ら、Ａｃｔａ Ｒａｄｉｏｌ.，４１２：ｐｐ．１２１〜１２
３（１９９７）；Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄ
ｉｏｌ.，３３：ｐｐ．７７９〜７９７（１９９８）］。多量体キレートの利点
には、以下がある：（１）多量体キレートは、重合体およびデンドリマーとは異
なり、単一のサイズおよび構造を有する点で、均一な分子である；（２）多量体
キレートは、容易に合成でき、精製できる；そして（３）標的基は、容易に組み
込むことができる。残念なことに、多量体キレートがＭＲＩ信号強度を向上する
性能は、期待はずれな程に低かった。これは、プロトン緩和速度の増大（すなわ
ち、「緩和率（ｒｅｌａｘｉｖｉｔｙ）」）（これは、信号の増大と相関してい
る）は、ＩＥＭの数が多くなるにつれて、低くなる。従って、標的において、さ
らに高い信号増大を達成するために、ＩＥＭの数が多くなるときにもその緩和率
が低くならない造影剤が必要とされている。

【００１０】 （造影剤の回転を少なくすることによりコントラストを向上する試み） 回転運動を制限することにより、非標的多量体ＭＲＩ造影剤の緩和率を高める
試みがなされている。回転運動を制限する試みは、以下に焦点を当てている：（
１）分子の屈曲性を少なくすること；または（２）標的に結合することによって
回転運動を制限すること。

【００１１】 例えば、非標的試薬を、複数のＧｄ（ＩＩＩ）キレートが結合した剛性の骨組
みと共に合成した［Ｓｈｕｋｌａ，Ｒ．ら、Ｍａｇ． Ｒｅｓｏｎ． Ｍｅｄ．，
３５：ｐｐ．９２８〜９３１（１９９６）；Ｓｈｕｋｌａ，Ｒ．Ｂ．ら、Ａｃｔ
ａ Ｒａｄｉｃｌ．，４１２：ｐｐ．１２１〜１２３（１９９７）； Ｒａｎｇａ
ｎａｔｈａｎ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ． Ｒａｄｉｏｌ．，３３：ｐｐ．７
７９〜７９７（１９９８）；Ｊａｃｑｕｅｓ，Ｖ．ら、Ｊ．Ａｌｌｏｙｓ Ｃｍ
ｐｄ．，２４９：ｐｐ．１７３〜１７７（１９９７）］。しかしながら、これら
の構造には、いくつかの欠点がある。まず第一に、２個より多いキレートを含有
する試薬について達成されたＧｄ（ＩＩＩ）イオン１個あたりの緩和率は、単一
キレート（例えば、ＭＳ−３２５）について観察されるものより低かった。従っ
て、局所キレート運動は、依然として、さらに少なくできた。第二に、これらの
試薬は、標的化されていない。さらに重要なことに、たとえそれらが標的化され
ても、剛性の多量体骨組みは、この造影剤が標的に結合しているかどうかとは無
関係に、その信号の増大が著しいので、不要な背景信号を著しく増大させる。従
って、標的に結合したときにだけ標的の画像を増大する造影剤が必要とされてい
る。

【００１２】 単一のＩＥＭの回転運動は、非共有結合標的が結合すると、効果的に制限でき
、その結果、標的結合形状に対して緩和率は、５〜１０倍程度増大する［米国特
許第４，８８０，００８号］。この緩和率の増大は、その標的に共有結合するＩ
ＥＭについて観察されたものと同程度であるかまたはそれより良好である［Ｓｃ
ｈｍｉｅｄｌ，Ｕ．，Ｏｇａｎ，Ｍ．，Ｐａａｊａｎｅｎ，Ｈ．，Ｍａｒｏｔｔ
ｉ，Ｍ．，Ｃｒｏｏｋｓ，Ｌ．Ｅ．，Ｂｒｉｔｏ，Ａ．Ｃ．，ａｎｄ Ｂｒａｓ
ｃｈ，Ｒ．Ｃ． Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ（１９８７）１６２：ｐｐ．２０５〜２１
０；Ｏｇａｎ，Ｍ．Ｄ．，Ｓｃｈｍｉｅｄｌ，Ｕ．，Ｍｏｓｅｌｅｙ，Ｍ．Ｅ．
，Ｇｒｏｄｄ，Ｗ．，Ｐａａｊａｎｅｎ，Ｈ．，ａｎｄ Ｂｒａｓｃｈ，Ｒ．Ｃ
．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．（１９８７ ２２：ｐｐ．６６５〜７１１］。
この効果を利用する試薬の例には、肝臓タンパク質標的造影剤Ｇｄ−ＥＯＢ Ｄ
ＴＰＡ［Ｒｕｎｇｅ Ｖ．Ｍ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｄｉａｇｎ．Ｉｍａｇｉｎｇ
３８：ｐｐ．２０７〜３０（１９９７）］およびＧｄ−ＢＯＰＴＡ［Ｋｉｒｃ
ｈｉｎ Ｍ．Ａ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３３：ｐｐ．７９８〜８
０９（１９９８）］またはアルブミン標的剤ＭＳ−３２５［Ｌａｕｆｆｅｒ，Ｒ
．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７：ｐｐ．５２９〜５３８（１９９８）］
およびＭＰ−２２６９［Ｈｏｆｍａｎ Ｍａｒｋ Ｂ．Ｍ．ら、Ａｃａｄａｄｅ
ｍｉｃ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，Ｓ（ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ２０６〜Ｓ２０９（１
９９８）］がある。血清アルブミンに非共有結合した結果として、約７倍の緩和
率（ＭＳ−３２５（４７ｍＭ^-1ｓ^-1））の増大が、報告された［Ｌａｕｆｆｅｒ
，Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７：ｐｐ．５２９−５３８（１９９８
）］。

【００１３】

【化６】 この単量体造影剤ＭＳ−３２５（これは、図１で示した化学構造を有する）は
、アルブミンに結合すると、信号向上の増大を示す。この錯体は、結合すると、
未結合状態よりも遅い速度で回転し、その結果、大きい緩和率が生じる。しかし
ながら、驚くべきことに、標的造影剤（例えば、ＭＳ−３２５）に複数のＩＥＭ
を添加すると、この多量体構造の個々のガドリニウム中心における緩和率が低下
するので、コントラストをさらに増大することができなかった。例えば、４個の
Ｇｄ（ＩＩＩ）イオンを有するアルブミン標的多量体は、単一のＧｄ（ＩＩＩ）
を含有するＭＳ−３２５に対する４７ｍＭ^-1ｓ^-1の緩和率と比較して、Ｇａ（Ｉ
ＩＩ）１個あたり９〜１３ｍＭ^-1ｓ^-1の分子緩和率しか示さなかった［Ｍａｒｔ
ｉｎ Ｖ．Ｖ.ら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，６：ｐｐ．６１６〜２３
（１９９５）］。それゆえ、標的化多量体キレートの緩和率は、典型的には、Ｇ
ｄ（ＩＩＩ）１個あたり、類似の標的化単一キレートについて観察されたものよ
りもずっと低い。

【００１４】 （理論的根拠） 表１は、２個のフェニル環を含有する標的結合基が存在しているにもかかわら
ず、ＩＥＭ１個あたりの緩和率がＩＥＭの数の増加につれて低くなるので、全緩
和率を向上するためには、ＩＥＭの数を増やすだけでは不十分であることを立証
している。表１を理解するためには、標的結合ＭＲＩ造影剤がその可能な最大緩
和率を達成できる範囲を規定することが重要である。特定の造影剤に対するこの
最大緩和率は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のような標的に結合するときの分
子の緩和率（Ｒ１_bound）とほぼ等しい。

【００１５】

【数１】 は、標準セットの条件（例えば、特定の標的またはタンパク質濃度、薬剤濃度、
温度など）下で結合した全ての種に対する平均緩和率の正規化基準であって、こ
れは、各々の種の結合した集団により、計量される。従って、

【００１６】

【数２】 は、正規化した量であるので、緩和率の比較は、

【００１７】

【数３】 を比較することにより、結合状態にある異なる分子の間で行うこことができる。

【００１８】

【数４】 を比較すると、標的に対するそれらの親和性とは無関係に、化合物を比較する便
利な方法が得られる。

【００１９】 平均

【００２０】

【数５】 を計算するには、遊離キレートの緩和率（Ｒ１_free）だけでなく、観察した緩和
率（Ｒ１_obs）、および典型的には標的（例えば、ＨＳＡ）の４．５％を含有す
る標的溶液に対する試薬の結合割合を測定する必要がある。Ｒ１_obsは、Ｒ１_{fre e} およびＲ１_boundのモル分率（ｘ）重量平均である：

【００２１】

【化７】 一連のアルブミン標的造影剤の化学構造および結合緩和率を、図１で示す。こ
のセットの化合物では、単一のＩＥＭ（すなわち、ＭＳ−３２５）を有する化合
物は、複数のＩＥＭを含有する一連の多量体と比較されるが、全ての化合物には
、同じジフェニルシクロヘキシルアルブミンＴＢＭおよびメチレンホスフェート
基が存在している。

【００２２】 （表１．一連のアルブミン標的造影剤の化学構造および結合緩和率。そのジフ
ェニルシクロヘキシル標的結合部分は（ＴＢＭ）は一定のままである）

【００２３】

【表１】 図２は、表１で示した同じデータのグラフである。ＩＥＭ１個あたりの

【００２４】

【数６】 （この場合、Ｇｄ（ＩＩＩ））は、２０ＭＨｚにおいて、ＩＥＭの数に対してプ
ロットされている。

【００２５】 （図２．単一のジフェニルシクロヘキシルタンパク質結合基を含有する一連の
多量体造影剤に対する（ガドリニウム１個あたりの）結合緩和率のプロット、こ
の多量体のサイズが大きくなるにつれて、そのデータは、ガドリニウム１個あた
りの緩和率が低くなることを示している）

【００２６】

【化８】 表１および図２の分子では、そのガドリニウムキレート（ＩＥＭ）、メチレン
ホスフェート基およびジフェニルシクロヘキシル基（ＴＢＭ）の構造は、共に、
一定のままである。表１および図２のデータは、キレート化した常磁性金属イオ
ンの数が多くなるにつれて、金属イオン１個あたりの緩和率は小さくなることを
示している。Ｇｄ（ＩＩＩ）キレートの数は、１個（ＭＳ−３２５）から４個ま
で変わるが、ＩＥＭの数が４倍増加するにもかかわらず、その全緩和率は、約５
０％しか高くならない。この全緩和率の穏やかな上昇は、Ｇｄ（ＩＩＩ）イオン
１個あたりの緩和率が低下した結果である。Ｇｄ（ＩＩＩ）１個あたりの

【００２７】

【数７】 は、この造影剤が結合しているにもかかわらず、４７ｍＭ^-1ｓ^-1から１４．９ｍ
Ｍ^-1ｓ^-1へと低下することに注目せよ。この低下は、局所キレート運動が原因で
あり、この運動は、驚くべきことに、この単一ＴＢＭ中に複数の芳香環があるに
もかかわらず、ＩＥＭの数と共に高くなる。

【００２８】 明らかに、キレート部分の数を多くすると、また、少なくとも、ガドリニウム
キレート化の部位の近くで、その分子の回転自由度が高くなる。その緩和率の低
下は、そのサイズが１多量体分子あたり２個のキレート化ガドリニウムイオンを
超えて大きくなるにつれて、特に著しい。例えば、Ｍ８−０３の場合、ガドリニ
ウム１個あたりの全緩和率は、約１５ｍＭ^-1ｓ^-1にすぎず、これは、ＭＳ−３２
５について観察されたものの約３分の１である。この化合物Ｍ８−０３に対する
全緩和率は、従って、たった６０ｍＭ^-1ｓ^-1であり、これは、４倍のＩＥＭが存
在しているものの、ＭＳ−３２５の数のちょうど１．３倍である。明らかに、緩
和率がこのように穏やかに上昇するからといって、インビボＭＲ画像化用にこの
ような試薬を開発する合成の複雑性および費用が高くなるのを正当化するもので
はない。それゆえ、複数の画像向上部分を単一の標的結合部分と単に組み合わせ
ても、緩和率の見合った上昇は起こらない。それゆえ、ＩＥＭの数が多くなると
きでも各キレートでの緩和率が維持される多量体ＭＲＩ造影剤を合成することが
必要とされている。

【００２９】 全般的に、標的結合造影剤の固定化は、単一キレート（例えば、ＭＳ−３２５
）に対する緩和率を高める際に著しく効果的であり得るが、多量体キレートには
、むしろ効果的ではない。すなわち、各キレート部位での緩和率を高めるために
は、この分子に対する全体的な回転相関時間を短くすると共に、各キレート部位
での局所キレート運動を少なくする必要がある。依然として、画像化中において
、さらに効果的な信号の増大が生じるように、標的結合多量体造影剤を効率的に
固定化する機構が必要とされている。

【００３０】 特定の標的における信号コントラストを改良する方法が必要とされている。こ
の問題は、（１）ＩＥＭの数を多くすることにより、または（２）この分子の屈
曲性を少なくすることにより、取り組まれている。ＩＥＭの数を多くすることは
、これらの造影剤のサイズおよび構造が均一ではなく、合成上の困難を引き起こ
し、標的にするのが困難であり、またはＩＥＭ数の増加と共に比例的にコントラ
ストが高まらないので、成功していない。この屈曲性を少なくすることは、剛性
造影剤が未結合の場合に高い背景を生じるので、成功していない。単一のＴＢＭ
を介して標的に多量体を結合することでは、屈曲性を少なくするためだけでなく
、緩和率を著しく高めるためにも、十分でない。従って、その標的に結合したと
きにのみ、この分子の屈曲性を同時に少なくしつつ、ＩＥＭの数を多くすること
により、特定の標的でのコントラストを向上させることが必要とされている。

【００３１】 （発明の要旨） 本発明は、インビボ造影剤の有効性を大きく向上させる機構を提供する。もし
、多量体造影剤が、未結合状態において屈曲性であり（その結果、低い緩和率お
よび弱い信号が生じる）、結合状態において屈曲性が少ない（その結果、高い緩
和率および強力な信号が生じる）なら、標的におけるノイズに対するコントラス
ト（信号）を大きく向上させることが可能である。すなわち、この多量体造影剤
を未結合状態よりも結合状態において剛性にすることは、結合状態において高い
緩和率を維持しつつ未結合状態での背景を最小にするので、さらに重要である。
このような試薬は、２個またはそれ以上の別個の座（ｌｏｃｕｓ）での非共有結
合相互作用により、タンパク質または他の特定の標的に結合する。多座結合は、
この試薬に２個またはそれ以上のＴＢＭを取り込むことにより達成され、その各
々は、この標的上の１個またはそれ以上の部位に対して一定の親和性を有する。

【００３２】 さらに具体的には、本発明は、同時に、１）その標的に対する結合を誘発する
（それゆえ、特異性を与える）ために、２）この標的に数個のＩＥＭを係留する
ために、および３）それにより、この複数のＩＥＭ構造を剛性にするために、複
数のＩＥＭ（「多量体」）を有する造影剤と標的との間の「多座」非共有結合相
互作用を使用することに関する。本発明の重要な局面は、この造影剤が、未結合
状態よりも結合状態において、屈曲性が低いことにある。この造影剤の標的に対
する結合は、その金属イオン（画像化原子ベクトル）の全体的な回転相関時間を
高めることにより、すなわち、回転運動を制限することにより、金属キレートＩ
ＥＭの緩和率および信号強度を高める。多座結合は、一般的に、また、キレート
運動が起こる局所部位において、結合状態での複数のキレート構造の屈曲性を少
なくしつつ、さらに、緩和率の増大を可能にする。未結合状態でのこの分子の屈
曲性は、剛性構造がこれらのキレートに結合し、そして結合状態と未結合状態と
の間の剛性の差がない、以前に記述した多量体ＭＲＩ薬剤よりも特に有利となる
。［Ｒａｎｇａｎａｔｈａｎ，Ｒ．Ｓ．ら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，３
３：ｐｐ．７７９〜７９７（１９９８）］。多量体キレートに対する多座結合の
概念は、図３で模式的に示されている。

【００３３】 （図３．多座相互作用を介して標的に結合した代表的な多量体造影剤の重要な
成分を示す模式図）

【００３４】

【化９】 １）複数の別個のＴＢＭは、標的に対する結合を促進する（それゆえ、特異性
および改良された親和性を与える）。これらのＴＢＭは、同一であっても、異な
っていてもよい。

【００３５】 ２）標的に結合するとき、ＴＢＭは、足場に沿ったいくつかの位置で、この多
量体構造を係留し、それにより、この複数のキレート構造を剛性にする。

【００３６】 ３）緩和率は、溶液中で遊離しているときよりも、結合しているときに、大き
く高められ、それにより、特定の標的の画像化コントラストを向上させる。

【００３７】 画像コントラストを向上することに加えて、本発明は、合成上の利点を与える
。合成的に剛性にした化学的な骨組み（例えば、縮合環または錯体大環状分子）
は、多座結合によって標的に結合すると固定化および剛性化が起こるので、必要
ではない。従って、化学的な骨組み構造には、制限が少ない。追加的な利点には
、以下が挙げられる： ａ）多座結合は、タンパク質の親和性を高め、そして単一の相互作用と比較し
て、より大きな標的特異性を与える［Ｋｒａｍｅｒ，Ｒ．Ｈ．ａｎｄ Ｋａｒｐ
ｅｎ，Ｊ．Ｗ.，Ｎａｔｕｒｅ，３９５：ｐｐ．７１０〜７１３（１９９８）；
Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ.，９５：
ｐｐ．１０４３７〜１０４４２（１９９８）； Ｒａｏ，Ｊ．ら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，２８０：ｐｐ．７０８〜７１１（１９９８）； Ｍａｎｎ，Ｄ．Ａ．ら、Ｊ
．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ.，１２０：ｐｐ．１０，５７５〜１０，５８２（１
９９８）；Ｓｐｅｖａｋ，Ｗ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ.，３９：ｐｐ．１０
１８〜１０２０.（１９９６）； Ｌｅｅ，Ｒ．Ｔ．ら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｃｉｐｈｙｓ.，２９９：ｐｐ．１２９〜１３６（１９９２）］。

【００３８】 ｂ）多座結合は、この薬剤が標的から解離する速度を遅くする。この薬剤が結
合したままである時間を長くすると、診断利用時間が長くなる。

【００３９】 ｃ）多座結合は、この複数キレート構造の屈曲性を低くし、その局所キレート
運動を少なくし、それゆえ、各金属中心での緩和率を向上させる。この造影剤の
結合状態での剛性化は、その遊離分子と比較して、結合したときにだけ起こり、
さらに大きい画像コントラストが生じる。この遊離分子は、その結合形状と比較
して、比較的に小さい信号変化を誘発する；逆に、この遊離分子により誘発され
た信号と比べて、結合形状で誘発された信号の間では、驚く程に大きい差を得る
ことができる。この結合状態および非結合状態の両方で剛性である造影剤は、こ
の特性を欠いている。

【００４０】 ｄ）この信号強度の結合依存性の変化はまた、結合に伴って信号強度の変化が
起こり得る他の画像化様式（例えば、光学画像化）にも適用できる。この信号強
度は、結合の際に、高くなってもよいし、低くなってもよい。いくつかの場合に
は、この分子の剛性と相関させるために、低くした信号が示される［Ｒｉｍｅｔ
，Ｏ．，Ｃｈａｕｖｅｔ，Ｍ．，Ｄｅｌｌ’Ａｍｉｃｏ，Ｍ．，Ｎｏａｔ，Ｇ．
，ａｎｄ Ｂｏｕｒｄｅａｕｘ，Ｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９５
）２２８：ｐｐ．５５〜５９］。他の場合では、信号は、結合すると、高くなる
［Ｓｕｄｌｏｗ Ｇ．，Ｂｉｒｋｅｔｔ Ｄ．Ｊ．，ａｎｄ Ｗａｄｅ Ｄ．
Ｎ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１２：ｐｐ．１０５２〜６１（１９７６）；
Ｓｕｄｌｏｗ Ｇ．，Ｂｉｒｋｅｔｔ Ｄ．Ｊ．，ａｎｄ Ｗａｄｅ Ｄ．Ｎ．
Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１：ｐｐ．８２４〜３２（１９７５）；Ｋａｎ
ｅ Ｃ．Ｄ．ａｎｄ Ｂｅｒｎｌｏｈｒ，Ｄ．Ａ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
２３３：ｐｐ．１９７〜２０４；Ｌａｋｏｗｉｃａ，Ｊ．Ｒ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌ
ｅｓ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ Ｐｌｅｎ
ｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ ｐｐ．２１１〜２１３（１９８３
）］。多座結合は、単一のＴＢＭしか有しない任意の造影剤と比較して、非常に
低い信号強度（従って、非常に高い信号コントラスト）または非常に高い強度の
いずれかを生じ得る。いずれの場合においても、標的部位での信号強度の変化は
、造影剤の結合の結果として、向上した信号コントラストを生じる。

【００４１】 本発明の多座結合造影剤は、ＩＥＭ、複数のＩＥＭが直接または任意のリンカ
ーを介して結合した足場、および少なくとも２個の別個のＴＢＭを含有する。こ
れらのＴＢＭは、同一であっても、異なっていてもよい。いくつかの場合には、
この足場は、実際に、ＩＥＭまたはＩＥＭの一部を含有し、例えば、ある種のキ
レート化部分はまた、この足場または足場の一部として、役立ち得る。

【００４２】 これらの多量体／多座結合化合物は、これらのＩＥＭの局所運動が制限される
点、および多量体構造に沿った数個の別個の座で標的に少なくとも２個のＴＢＭ
が標的に共有結合することにより、結合緩和率が非常に高くなる点で、独特であ
る。これらの相互作用により、この多量体は、「擬似環状（ｐｓｅｕｄｏ−ｃｙ
ｃｌｉｃ）」様式または「ジッパー様」の様式で、この標的タンパク質に結合で
きるようになる。この種の結合は、驚くべきことに、ＴＢＭ、足場、および個々
のＩＥＭを含むこの多量体全体にわたる屈曲性を低くする。それゆえ、キレート
を含むＩＥＭに対しては、この緩和率が各ＩＥＭで高くなるので、局所キレート
運動は少なくなり、多量体では、著しく増大したＭＲＩ信号が観察される。この
増大は、本発明の造影剤が、単一のＴＢＭを介して結合する（それゆえ、標的部
位に「擬似環化」または「ジッパー」されない）従来のものと異なる。コントラ
ストは、多量体／多座結合構造を使うと、それらがまた未結合状態で比較的に低
い信号を生じるので、さらに増大する。

【００４３】 本発明は、特に、この多量体／多座結合造影剤に対する複数の結合部位が存在
している用途において、全ての標的ＭＲＩ用途および光学用途（生体構造（例え
ば、血清アルブミン）および他の診断上関連した標的（例えば、血餅）に対する
画像向上剤の標的化を含む）に極めて大きな有用性を有する。これらの結合部位
は、同一である必要はなく、この造影剤上のＴＢＭにより同時に結合するのに十
分に近接していればよい。

【００４４】 （発明の詳細な説明） 本明細書中で記述した発明をさらに完全に理解できるように、以下の詳細な説
明を述べる。

【００４５】 一般的に使用される化学略語のうち、本願で明白に規定していないものは、Ｔ
ｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｓｔｙｌｅ Ｇ
ｕｉｄｅ；Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．（１９９７）またはＪｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙで見出され得る；Ｇｕ
ｉｄｅｌｉｎｅｓ ｔｏ Ａｕｔｈｏｒｓ（２０００年５月に改訂）（著作権
Ｃ ２０００ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ）もまた
、ｈｔｔｐ：／／ｐｕｂｓ．ａｃｓ．ｏｒｇ／ｉｎｓｔｒｕｃｔ／ｊｏｃｅａｈ
．ｐｄｆ．で入手できる。

【００４６】 本明細書中で引用した刊行物は、本明細書中で参考として援用される。

【００４７】 本願の目的上、ＤＴＰＡは、式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれか１個の構造を意味
する：

【００４８】

【化１０】 本明細書中で使用する「特異的親和性」との用語は、その造影剤が、他の成分
よりも相当に大きい程度まで特定の生体成分に取り込まれるか、保持されるか、
または結合される能力を意味する。この特性を有する造影剤は、「標的」成分に
「標的化」されると言われる。この特性を欠いている造影剤は、「非特異的」薬
剤と言われる。

【００４９】 本明細書中で使用する「緩和率」との用語は、常磁性イオン１ミリモル（ｍＭ
）濃度あたり、１／Ｔ₁または１／Ｔ₂のいずれかの量の増加を意味し、ここで、
Ｔ₁は、水のプロトンまたは他の画像化核または分光核（水以外の分子で見られ
るプロトンを含めて）の縦緩和時間（すなわち、スピン−格子緩和時間）であり
、そしてＴ₂は、横緩和時間（すなわち、スピン−スピン緩和時間）である。緩
和率の単位は、ｍＭ^-1ｓ^-1である。

【００５０】 本明細書中で使用する「開放配位部位」との用語は、一般に、水分子または溶
媒分子で占められる金属キレート上の部位を意味する。

【００５１】 本明細書中での目的のための「形成定数」との用語は、その化合物の形成を示
す反応に対する平衡定数として定義される。

【００５２】 本明細書中での目的のための「多量体」との用語は、２種以上のＩＥＭを含有
する造影剤またはそのサブユニットとして定義される。

【００５３】 本明細書中での目的のための「多座」との用語は、造影剤の「足場」（以下で
定義する）へのＴＢＭ共有結合の２種またはそれ以上の位置を意味する。

【００５４】 本明細書中での目的のための「多座結合」との用語は、２種以上の異なるＴＢ
Ｍと標的との非共有結合相互作用を意味する。これらの非共有結合相互作用は、
互いに無関係であり、特に、疎水性相互作用、親水性相互作用、双極子−双極子
相互作用、π積み重ね（ｐｉ−ｓｔａｃｋｉｎｇ）相互作用またはルイス酸−塩
基相互作用であり得る。

【００５５】 本明細書中での目的のための「擬似環状構造」との用語は、２個のＴＢＭを介
して、２個の異なる座で、標的に対する非共有結合相互作用によって結合した造
影剤を意味する（図４を参照）。

【００５６】 （図４．多座結合構造の代表例）

【００５７】

【化１１】 本明細書中での目的のための「ジッパー構造」との用語は、３個またはそれ以
上のＴＢＭを介して、３個以上の異なる座で、標的に対する非共有結合相互作用
によって結合した造影剤を意味する（図４を参照）。

【００５８】 本発明は、標的に結合したときの屈曲性の減少に続いて、診断画像化でのコン
トラストを増大する新規化合物に関する。これらの化合物は、以下を含有する： ａ）２種以上の画像向上部分（「ＩＥＭ」）； ｂ）２種以上の標的結合部分（「ＴＢＭ」）であって、インビボ局在化および
多量体剛性化を与える標的結合部分； ｃ）上記部分の結合用の足場骨組み（「足場」）； ｄ）ＩＥＭを足場に結合するための任意のリンカー（「リンカー」）。

【００５９】 本発明と共に使用しようと考えている診断画像化技術には、ＭＲＩおよび紫外
−可視−赤外光画像化が挙げられるが、これらに限定されない。

【００６０】 （画像向上部分（「ＩＥＭ」）） 本発明によれば、ＩＥＭは、画像化中に信号を生じるかまたはコントラストを
向上させるのに使用される化学物質または物質であり得る。それに加えて、ＩＥ
ＭまたはＩＥＭの一部は、必要に応じて、足場または足場の一部として使用され
得、小さい標的化機能を有し得る。

【００６１】 このＩＥＭは、有機分子、金属イオンまたはキレートを含有し得る。ＩＥＭの
多くの例が記述されている［Ｂｏｎｎｅｍａｉｎ，Ｂ．Ｊ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇ
ｅｔ．，６：ｐｐ．１６７〜７４（１９９８）；Ｓｗａｎｓｏｎ，Ｄ．Ｐ．ら、
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ：Ｒ
ａｄｉｏｐａｑｕｅ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ｍｅｄｉａ，Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ Ａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｍａｇ
ｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ ａｎｄ Ｕｌｔｒａｓｏｕ
ｎｄ，ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．，（１９９０）；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｉ
．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３０：ｐｐ．１２３〜４０（１９９８）］。

【００６２】 特に有用なＩＥＭは、１個以上の環式または非環式の有機キレート化剤（これ
は、１個以上の金属イオンと錯化されている）を有する生理学的に適合性の金属
キレートである。任意の画像化に好ましい金属イオンには、１３、２１〜３１、
３９〜４２、４４〜５０または５７〜８３の原子番号を有するものが挙げられる
。ＭＲＩに好ましい金属イオンには、２１〜２９、４２、４４または５７〜８３
の原子番号を有するもの、さらに好ましくは、２１〜２９、４２、４４または５
７〜８３の原子番号を有する金属イオンの常磁性形態が挙げられる。特に好まし
い常磁性金属イオンは、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ および
ＩＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｄｙ（ＩＩＩ）、Ｔｂ（ＩＩＩおよ
びＩＶ）、Ｈｏ（ＩＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩＩ）、Ｐｒ（ＩＩＩ）およびＥｕ（ＩＩ
およびＩＩＩ）からなる群から選択される。最も好ましいものは、Ｇｄ（ＩＩＩ
）である。

【００６３】 もし、ＩＥＭが金属キレートであるなら、それは、この画像化剤が身体を通っ
ている間（標的組織に結合している間を含めて）、任意の著しい程度まで解離し
てはならない。遊離金属イオンの著しい解離は、毒性を生じ得、これは、一般に
、受容できない。

【００６４】 一般に、金属キレートの毒性の程度は、排出前のインビボでのその解離度と関
係している。毒性は、一般に、遊離金属イオンの量と共に高くなり、すなわち、
毒性濃度の遊離金属イオンが生じないように、高い形成定数が好ましい。少なく
とも１０¹⁵Ｍ^-1、または少なくとも１０¹⁶Ｍ^-1、または少なくとも１０¹⁷Ｍ^-1、
または少なくとも１０¹⁹Ｍ^-1、または少なくとも１０²⁰Ｍ^-1、または少なくとも
１０²²Ｍ^-1、または少なくとも１０²⁴Ｍ^-1またはそれ以上の形成定数が、特に好
ましい。もし、金属イオンの解離速度が非常に遅いなら、低い形成定数（すなわ
ち、少なくとも１０¹⁰Ｍ^-1）を有する錯体が十分であり得る。

【００６５】 毒性は、この錯体中の開放配位部位の数の関数でもある。一般に、水配位部位
が少ない程、このキレート化剤が常磁性金属を解離する傾向が低くなる。従って
、好ましくは、この錯体は、２個、１個または０個の開放配位部位を含む。２個
より多い開放部位が存在すると、一般に、インビボでの金属イオンの放出による
毒性が受容できない程に高くなる。

【００６６】 緩和率Ｒ₁およびＲ₂（それぞれ、金属イオン１ｍＭあたりの１／Ｔ₁または１
／Ｔ₂の上昇として定義される）は、造影剤が分光核または画像化核の緩和速度
を高める能力を測定している。緩和率の単位は、ｍＭ^-1ｓ^-1である。臨床的なＭ
ＲＩの最も一般的な形態（水プロトンＭＲＩ）については、緩和率は、そのキレ
ート化配位子に結合した常磁性イオンが依然として水交換用の１個以上の開放配
位部位を有するとき、より高くなる（Ｒ．Ｂ．Ｌａｕｆｆｅｒ，Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，８７：ｐｐ．９０１〜９２７（１９８７））。しかしなが
ら、これは、この金属キレートの安定性（これは、一般に、開放配位部位の数が
増えるにつれて、少なくなる）および上記毒性と均衡を保たなければならない。
従って、好ましくは、鉄キレート、Ｆｅ（ＩＩ）またはＦｅ（ＩＩＩ）以外、こ
の錯体は、１個または２個の開放配位部位だけを含む。Ｇｄ（ＩＩＩ）について
は、１個または２個の開放配位部位が最も好ましい。

【００６７】 ＭＲＩ画像を効果的に向上させるために、この錯体は、その分光核の緩和速度
、すなわち、緩和率、１／Ｔ₁（縦、すなわち、スピン−格子）および／または
１／Ｔ₂（横、すなわち、スピン−スピン）を大きくできなければならない。こ
の分光核は、好ましくは、水プロトンであるが、他の一般的な分光核には、³¹Ｐ
、¹³Ｃ、²³Ｎａ、¹⁹Ｆおよび水以外の分子内で見られるプロトンが挙げられる。
この分光核は、ＩＥＭ、ＴＢＭ、他の生体分子または注入バイオマーカーを含み
得る。

【００６８】 ＭＲＩ造影剤の場合、緩和率（１／Ｔ₁または１／Ｔ₂）の上昇は、一般に、こ
の造影剤の常磁性イオンと緩和を受ける核（例えば、水分子中の水素原子）との
間の双極子−双極子相互作用により起こる。２個の双極子により規定されるベク
トル（すなわち、常磁性イオンおよび水の水素原子により規定されるベクトル）
が回転する速度が遅くなる場合、この双極子相互作用の効率（すなわち、緩和率
）が向上することは公知である（Ｒ．Ｂ．Ｌａｕｆｆｅｒ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｒｅｖｉｅｗｓ，８７：ｐｐ．９０１〜９２７（１９８７））。

【００６９】 このベクトルが回転的に１ラジアン拡散するのにかかる時間は、「回転相関時
間」と呼ばれる；この回転相関時間の逆数は、「回転速度」である。一般に、大
きい分子は、溶液中において、小さい分子よりもゆっくりと回転する。緩和率を
大きくする１方法は、小分子造影剤と高分子との間で非共有結合付加物を形成す
ることである。付加物を形成することにより、この双極子ベクトルの回転相関時
間は、おそらく、この高分子のものと同じになる。しかしながら、この小分子は
、依然として、１本以上の軸の周りで回転できる（いわゆる「局所キレート運動
」）。この双極子ベクトルの回転相関時間は、次いで、この局所キレート運動お
よび高分子付加物の包括的運動の関数である。高分子の非共有結合付加物は、そ
の高分子それ自体のものと等しいかまたはそれより短い回転相関時間を有する；
この局所キレート運動が少なくなる程、この非共有結合付加物の回転相関時間は
、この高分子のものに近づく。

【００７０】 ＭＲＩ造影剤の場合、緩和率の上昇は、一般に、この造影剤の金属イオンと緩
和を受ける核（例えば、水の水素原子）との間の双極子−双極子相互作用により
起こる。双極子−双極子相互作用を介して組織核の１／Ｔ₁または１／Ｔ₂値を大
きくすることに加えて、ＭＲＩ剤は、それらの臨床目的への使用および価値を高
める２つの他の磁気特性に影響を与えることができる： １）高い磁気感受性の金属キレート（特に、Ｄｙ、Ｇｄ、ＴｂまたはＨｏのキ
レート）を含有するＩＥＭは、微視的な磁気感受性勾配を作製することにより、
組織ＭＲＩ信号強度を変えることができる（Ａ．Ｖｉｌｌｒｉｎｇｅｒら、Ｍａ
ｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．，６：ｐｐ．１６４〜１７４（１９８８））。この
用途には、キレート上の開放配位部位は必要ではない。

【００７１】 ２）金属（例えば、ＴｍまたはＤｙ）キレートを含有するＩＥＭはまた、分光
核の共鳴振動数をシフトするのに使用できる。この分光核は、好ましくは、水プ
ロトンであるが、他の一般的な分光核には、³¹Ｐ、¹³Ｃ、²³Ｎａ、¹⁹Ｆおよび水
以外の分子内で見られるプロトンが挙げられる。この分光核は、この造影剤、標
的または水を含有し得る。ここで、用いる核および戦略に依存して、０個〜３個
の開放配位部位が使用され得る。

【００７２】 本発明の種々の実施形態にて、ＩＥＭ部分として、種々のキレート化配位子が
使用され得る。このようなキレート化配位子には、以下が挙げられるが、これら
に限定されない：ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）およびその誘導体；
１，４，７−トリアザシクロノナン；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデ
カン（Ｃｙｃｌｅｎ）およびその誘導体；１，４，７，１０−テトラアザシクロ
ドデカン−１，７−ビス（酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）（ＤＯ２Ａ−ｔ−ブ
チルエステル）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−
トリス（酢酸ｔ−ブチルエステル）（ＤＯ３Ａ−ｔ−ブチルエステル）；１，４
，７−トリス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１，４，７−テトラアザシク
ロドデカン（ＤＯ３−ｔ−ＢＯＣ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデ
カン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）およびその誘導体；１，４，７，
１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス（メチレンホ
スホン酸）（ＤＯＴＰ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，
４，７，１０−ａ，ａ’，ａ”，ａ’”−テトラキス（メチル酢酸）（ＤＯＴＭ
Ａ）；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；１，４，８，１１−テトラアザシ
クロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）；エチレンビス−（
２−ヒドロキシ−フェニルグリシン）（ＥＨＰＧ）およびその誘導体（５−Ｃｌ
−ＥＨＰＧ、５−Ｂｒ−ＥＨＰＧ、５−Ｍｅ−ＥＨＰＧ、５−ｔ−Ｂｕ−ＥＨＰ
Ｇ、および５−ｓｅｃ−Ｂｕ−ＥＨＰＧを含む）；ベンゾジエチレントリアミン
五酢酸（ベンゾ−ＤＴＰＡ）およびその誘導体（ジベンゾ−ＤＴＰＡ、フェニル
−ＤＴＰＡ、ジフェニル−ＤＴＰＡ、ベンジル−ＤＴＰＡおよびジベンジルＤＴ
ＰＡを含む）；ビス−２（ヒドロキシベンジル）−エチレン−ジアミン二酢酸（
ＨＢＥＤ）およびその誘導体；少なくとも３個（さらに好ましくは、少なくとも
６個）の炭素原子を含有しかつ少なくとも２個のヘテロ原子（Ｏおよび／または
Ｎ）を含有する種類の大環化合物のクラスであって、該大環化合物は、１個の環
、またはそのヘテロ原子環元素で一緒に結合した２個または３個の環を含有し得
る（例えば、ベンゾ−ＤＯＴＡ、ジベンゾ−ＤＯＴＡおよびベンゾ−ＮＯＴＡ（
この場合、ＮＯＴＡは、１，４−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−三酢
酸である）、ベンゾ−ＴＥＴＡ、ベンゾ−ＤＯＴＭＡ、ベンゾ−ＴＥＴＭＡ（こ
の場合、ＴＥＴＭＡは、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１
，４，８，１１−（メチル四酢酸）である））；１，３−プロピレンジアミン四
酢酸（ＰＤＴＡ）およびトリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）の誘導体
；および１，５，１０−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリス（２，３−ジヒドロキシベンゾ
イル）アミノメチルベンゼン（ＭＥＣＡＭ）の誘導体。

【００７３】 ＭＲＩ試薬に適当な多くのキレート化配位子が当該技術分野で公知である。こ
れらの金属キレートはまた、他の形態の生体画像化（例えば、光学画像化）に使
用できる。実際には、最近では、一連の蛍光検出可能なＭＲＩ造影剤が記述され
ている［Ｈｕｂｅｒ，Ｍ．Ｍ．ら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，９
：ｐｐ．２４２〜２４９（１９９８）］。ＭＲＩ画像化のために好ましいＩＥＭ
には、常磁性ガドリニウムキレート、例えば、ガドリニウムジエチレントリアミ
ン五酢酸（ＧｄＤＴ３Ａ）、ガドリニウムテトラアミン１，４，７，１０−テト
ラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’−四酢酸（ＧｄＤＯＴＡ）およ
びガドリニウム１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三
酢酸（ＧｄＤＯＴＡ）が挙げられる。ある種の用途では、Ｇｄ（ＩＩＩ）を他の
金属で置き換え得ることは、当該技術分野で公知である。本発明で使用するのに
好ましいキレート剤には、ＤＴＰＡがある。本発明で考慮される代表的なキレー
ト剤およびキレート化基の例は、ＷＯ９８／１８４９６、ＷＯ８６／０６６０５
、ＷＯ９１／０３２００、ＷＯ９５／２８１７９、ＷＯ９６／２３５２６、ＷＯ
９７／３６６１９、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０１４７３、ＰＣＴ／ＵＳ９８／２０１
８２および米国特許第４，８９９，７５５号で記述されており、これらの全ての
内容は、本明細書中で参考として援用されている。

【００７４】 （標的結合部分（「ＴＢＭ」）） 本発明によれば、この造影剤の第二成分は、２個またはそれ以上の標的結合部
分（ＴＢＭ）である。化合物（１）のＴＢＭは、（１）この造影剤をタンパク質
または他の標的に結合できるようにし、そして（２）結合状態でのその分子の屈
曲性を減らす。これにより、画像化する部位において、高い濃度の画像化剤が生
じ、結合状態での緩和率が高まる。血管の血液プール画像化には、血清アルブミ
ンが好ましい標的である。他のタンパク質標的には、α酸糖タンパク質、フィブ
リノーゲン、フィブリンおよびコラーゲンが挙げられるが、これらに限定されな
い。血餅を画像化するには、フィブリンが好ましい標的である。このＴＢＭは、
従って、適当なタンパク質に対する特異性および高い結合親和性を達成するよう
に選択しなければならない。ＨＳＡは、血清中において高濃度（約０．６ｍＭ）
で存在しており、合理的に高い親和性を有する広範囲の分子を結合するので、血
液プール造影剤に好ましい標的血漿タンパク質である。ＨＳＡは、心臓血管の画
像化に特に好ましい標的である。

【００７５】 広範囲の親油性または両親媒性のＴＢＭが、種々の標的（ヒト血清アルブミン
（ＨＳＡ）を含めて）に効率的に結合する。これらには、４個〜２００個の炭素
原子を有する芳香族の飽和または不飽和脂肪族基が挙げられるが、これらに限定
されず、各炭素は、必要に応じて、酸素、窒素、ハロゲン、イオウ、または炭素
を共有結合できる他の原子で置換または置き換えられている。特異性が高い他の
タンパク質標的に結合するには、しばしば、特別な標的基が必要である。十分に
高い親和性および特異性の標的基は、現代的な技術（例えば、組合せ化学、高出
力スクリーニング、ファージ表示、指数関数的な濃縮によるリガンドの全身展開
（ＳＥＬＥＸ）および他の方法（これらは、例えば、米国特許第５，４７５，０
９６号、第５，５９５，８７７号および第５，２７０，１６３号で記述されてお
り、その内容は、本明細書中で参考として援用されている））を使用して同定さ
れ得る［Ｇｏｌｄら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６４：ｐｐ．
７６３〜７９７（１９９５）を参照］。

【００７６】 ＴＢＭを標的（例えば、ＨＳＡまたはフィブリン）に結合する程度は、種々の
平衡結合法により評価できる。例えば、ＨＳＡへの結合は、限外濾過により測定
できる。限外濾過を使用する典型的な結合測定では、その標的基は、ｐＨ７．４
の緩衝液中の４．５％重量／容量のＨＳＡと混合される。この試料は、３０ｋＤ
ａの分子量のカットオフフィルター（Ｍｉｉｌｉｐｏｒｅ Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ
ＭＣ Ｌｏｗ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｃｅｌｌｕｌｏｓ
ｅ ３０ＫＤａ ｍｏｌ．ｗｔ．ｃｕｔｏｆｆ ｃａｔａｌｏｇ ＃ＵＦＣ３Ｌ
ＴＫ００）を備えた市販の遠心分離装置に装填され、これは、この標的基を浸透
できるが、ＨＳＡを浸透できない。この試料容量の小部分（５〜１０％）は、こ
のカットオフフィルターを通って、２０分間にわたって、２０００×ｇで、遠心
分離することにより濾過され、この試料中の未結合標的基の濃度は、その濾液中
で測定される。

【００７７】 フィブリンへの結合を測定するために、マイクロタイタープレートのウェルに
おいて、フィブリン塊が形成され得、これは、この標的基と接触され得る。平衡
を確立するのに十分なインキュベーション時間の後、その上澄み液は、吸引によ
り除去される（不溶なフィブリンは、ゲル化塊として、このウェルの底部に結合
したままである）。次いで、この上澄み液中の未結合標的基の濃度が測定される
。

【００７８】 両方の方法では、結合した標的基の濃度は、最初に存在していた全標的基濃度
と結合アッセイに続く未結合標的基濃度との間の差として、決定される。その結
合比は、結合した標的基の濃度を全標的基の濃度で割った値である。好ましくは
、この造影剤の少なくとも１０％、さらに好ましくは、少なくとも５０％、さら
により好ましくは、少なくとも８０％、さらにより好ましくは、少なくとも９０
％は、生理学的に関連した濃度の薬剤および標的で、所望標的に結合される。さ
らに好ましくは、この造影剤の少なくとも９２％、さらにより好ましくは、少な
くとも９４％、最も好ましくは、９６％以上は、この限外濾過またはマイクロタ
イタープレート法に従って、この標的に結合される。

【００７９】 フィブリン結合ペプチドを含有する標的結合部分に関連したそれ以上の詳細に
ついては、ＢＩＮＤＩＮＧ ＭＯＩＥＴＩＥＳ ＦＯＲ ＦＩＢＲＩＮの表題で
ＤＹＸ−０１０．０Ｐｒｖとして確認された米国仮特許出願第６０／１４６，４
２５号および米国仮特許出願第６０／１４６，４１４号（これは、同日（１９９
９年７月２９日）に出願され、本特許出願が優先権を主張している）；およびそ
れらの継続出願を参照せよ（これらの全ての内容は、本明細書中で参考として援
用されている）。

【００８０】 これらのＴＢＭは、その標的の性質および結合の特定必要条件に依存して、非
常に多様であり得る。有用なＴＢＭの例には、薬剤、親油性または両親媒性の有
機分子、ポルフィリン、レセプターリガンド、ステロイド、脂質、ホルモン、ペ
プチド、オリゴヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの化学的に変性した
型）、炭水化物、または画像化するのが望ましい特定の組織内の１種またはそれ
以上の成分に対して十分に高い親和性で結合するのが公知の他の生体分子または
基質が挙げられる。ある実施形態では、１個のＴＢＭは、標的に対して、他のも
のよりも高い親和性を有し得、この場合、この高い親和性のＴＢＭは、「一次」
ＴＢＭと呼ばれている。それゆえ、この一次ＴＢＭよりも結合親和性が低い他の
全てのＴＢＭは、「二次」と呼ばれている。

【００８１】 さらに好ましいＴＢＭには、血清、間質空間（細胞間の流体）または細胞内空
間にあるタンパク質と可逆的に結合するものがある。特定の標的に結合する多く
の生体分子または基質が使用できるものの、タンパク質に結合するものは、最も
有用である。

【００８２】 二次ＴＢＭは、一次ＴＢＭと同一または異なり得る。二次ＴＢＭの数は、１個
〜１０個またはそれ以上で変わり得る。必要な二次ＴＢＭの正確な数は、その標
的に対するＴＢＭの特異性および標的に対するＴＢＭの親和性に依存している。
二次ＴＢＭにより得られる追加の結合相互作用は、この錯体を束縛して各キレー
ト部位での回転相関時間を短くするのに十分でなければならない。得られる高い
緩和率は、その画像のコントラストを十分に高める。この標的に対する二次ＴＢ
Ｍの結合相互作用および親和性は、標的への一次ＴＢＭの初期結合が標的認識に
必要な特異性を与え得るので、一次標的ＴＢＭにより要求されるよりも特異性が
低くなり得る。ある場合には、この標的は、樹状結合部位を含み得、この場合、
２個の同じＴＢＭが好ましい。

【００８３】 本願で記述した造影剤用の標的は、広範囲かつ多様である。この標的は、任意
の身体隔室、細胞、臓器または組織またはそれらの成分であり得る。好ましい標
的には、診断用および治療用に妥当なもの、すなわち、病気に関連したものがあ
る。特に好ましい標的には、体液に関連したもの、特に、血液、血漿、リンパ液
および中枢神経系の流体に関連したものがある。他の好ましい標的には、高濃度
で存在するかある種のリガンドに対して多数の結合部位を有するかいずれかのタ
ンパク質がある。複数の結合部位があれば、１個またはそれ以上の二次ＴＢＭに
対して接触できる。このような標的タンパク質のうちには、酵素および糖タンパ
ク質が挙げられる。

【００８４】 （ＩＥＭおよびＴＢＭの結合用の足場） 本発明は、図５で描写するように、その多量体造影剤に対して、第三成分（す
なわち、ＩＥＭおよびＴＢＭが結合し得る化学的な骨組みまたは「足場」構造体
）を提供する。この足場は、２個またはそれ以上のＩＥＭが直接的にまたはリン
カーを介して異なる位置で結合して多量体／多座結合成分を形成し得る２個また
はそれ以上のＴＢＭ間の化学的な骨組みである。これらの足場構造体を含む新規
化合物は、これらのＴＢＭが数個（少なくとも２個）の別個の座で標的に非共有
結合することにより、その局所キレート運動を制限する。この多量体造影剤は、
「擬似環状」または「ジッパー様」の様式で標的を結合して、２個またはそれ以
上の座において、相互作用を生じる。この種の結合は、この多量体造影剤の構造
（その結合基、足場および個々のＩＥＭを含めて）全体にわたって、剛性を生じ
る。

【００８５】 一般に、足場構造体は、非常に多様な有機構造体であり、これは、１個〜１０
個の繰り返し単量体サブユニットを含有し得る。この足場は、開放鎖状（ｏｐｅ
ｎ ｃｈａｉｎｅｄ）または環状のいずれかであり得る。ＴＢＭは、この構造体
の内部または末端に共有結合される。あらゆる場合において、この分子を標的に
束縛するために、少なくとも２個の別個のＴＢＭが存在しなければならない。こ
れらのＴＢＭは、同一である（同質）か異なっている（異質）かいずれかであり
得る。異質ＴＢＭは、その標的に対して、異なるまたは類似のいずれかの結合親
和性を示し得る。

【００８６】 開放鎖状の足場および環状の足場の両方もまた、ＩＥＭの結合用の支持構造体
を提供する。ＩＥＭの数は、２個〜約１２個で変わり得る。これらのＩＥＭは、
ＴＢＭと共に点在され得、これらのＩＥＭは、直鎖状足場構造体の少なくとも２
個の異なる位置で、必要に応じてリンカーを介して、この構造体の内部または末
端のいずれかに結合され得る。これらのＩＥＭは、同一である（同質）か異なっ
ている（異質）かいずれかであり得る。異質ＩＥＭは、異なるコントラスト発生
性能または類似のコントラスト発生性能のいずれかを示し得る。

【００８７】 開いた鎖の足場のセット内では、標準技術を使用して、多くの種類の構造体が
合成できる。特に有利なものは、この構造全体にわたって規則的な繰り返しヘテ
ロ原子を有する足場である。ヘテロ原子は、一般に、ＩＥＭまたはＴＢＭの簡単
な結合を可能にする。特に好ましい実施形態には、オリゴマーアルキレンアミン
足場がある。これらのオリゴマーアルキレンアミン足場は、分枝状または直鎖状
のいずれかであり得る。すなわち、これらの構造体は、規則正しく間隔を開けた
ＩＥＭおよびＴＢＭを有する直鎖状の骨組みを有し得るか、またはその化学的な
骨組みは、ＩＥＭおよび／またはＴＢＭの基が足場上の単一部位から発出し得る
か、いずれかである。これらの足場はまた、ヘテロ原子（例えば、酸素（アルコ
ール）または窒素（アミン））で終わり得る。開放鎖状の足場（分枝状および直
鎖状の両方）の特に好ましい実施形態は、末端アルコールまたは末端アミンを有
する。

【００８８】 図５は、多量体の多座結合の一例を示し、この場合、その足場部分、ＩＥＭ、
ＴＢＭ、および（任意の）リンカーは、明白に描写されている。分枝したリンカ
ーを有する多量体の他の例は、図６で図示されている。この場合もやはり、その
足場部分、ＩＥＭ、ＴＢＭ、および（任意の）リンカーは、明白に描写されてい
る。図６では、２個のＴＢＭは、ポリアミン足場に結合したペプチドであるが、
これらの成分は、決して、本発明の範囲を限定するものではない。

【００８９】

【化１２】

【００９０】

【化１３】 繰り返しアミン下部構造体を有する直鎖状足場の一般的な構造は、式（Ｖ）で
示されている：

【００９１】

【化１４】 ここで、ｍは、１〜１０で変わり得、そしてｎは、２〜１０で変わり得る。好ま
しくは、ｍは、１〜２、２〜４、４〜６、６〜８、または８〜約１０である。好
ましくは、ｎは、２〜４、４〜６、６〜８、または８〜約１０である。

【００９２】 繰り返しアミン下部構造体および末端酸素（これは、エーテル結合ＴＢＭの形
成を可能にする）を有する直鎖状足場の一般的な構造は、式（ＶＩ）で示されて
いる：

【００９３】

【化１５】 ここで、ｍは、１〜約１０で変わり得、そしてｎは、２〜１０で変わり得る。好
ましくは、ｍは、１〜２、２〜４、４〜６、６〜８、または８〜約１０である。
好ましくは、ｎは、２〜４、４〜６、６〜８、または８〜約１０である。

【００９４】 足場構造体は、アミンを有する繰り返し下部構造体には限定されず、また、末
端酸素または窒素を含有する構造体にも限定されない。この足場は、必要に応じ
て、リンカーを介して、ＩＥＭおよびＴＢＭの剣豪を可能にする任意の繰り返し
下部構造体を含有し得る。この足場を含有する炭素原子は、必要に応じて、酸素
、窒素、イオウ、リンおよびハロゲンから選択されるヘテロ原子により、置換ま
たは置き換えられ得る。この足場はまた、短鎖炭化水素（１個〜１０個の炭素原
子）のような置換基を含有し得る。これらの炭化水素側鎖は、必要に応じて、酸
素、窒素、イオウ、リンおよびハロゲンから選択されるヘテロ原子により、置換
または置き換えられ得る。それゆえ、これらの足場は、多くの通例の有機基（例
えば、ホスホジエステル、カーバメート、硫酸塩およびスルホニル）を含有し得
る。同様に、この足場構造体に結合した置換基はまた、多くの通例の有機基（例
えば、ホスホジエステル、カーバメート、硫酸塩、スルホニルおよびアミノ酸）
を含有し得る。

【００９５】 図７は、直鎖状および分枝状のポリアミン足場のいくつかの例証的な例を、こ
れらの足場を含有する造影剤の対応する例と共に、示す。図８は、オリゴマー足
場の例を、これらの足場を含有する造影剤の対応する例と共に、提供する。ヘテ
ロ原子を含有する足場は、ヘテロ原子が、必要に応じて、リンカーを介して、Ｉ
ＥＭおよびＴＢＭの簡単な結合を可能にするので、本発明の好ましい１実施形態
である。

【００９６】

【化１６】

【００９７】

【化１７】 この足場の他の好ましい実施形態には、その足場の骨格がインビボで容易に分
解されるものがある。生体分解性の造影剤は、例えば、哺乳動物の体内で生じる
酵素により分解できる足場構造体を有する。好ましくは、この足場は、酵素によ
り特異的に分解できる１個またはそれ以上の生体分解性基を含有する。特に好ま
しい生体分解性足場には、ヒトの酵素で分解し得るものがある。広範囲の酵素活
性が存在していることが公知であるために、これらの生体分解性基の正確な構造
は、変化する。この生体分解性基の特に好ましい実施形態には、カルボニル、エ
ステル、ジエステル、ホスフェート、ジホスフェート、ホスホジエステル、無水
物、スルホニル基、硫酸塩およびカルバメートが挙げられるが、これらに限定さ
れない。このような生体分解性足場は、この多量体造影剤の急速な代謝を可能に
し、そして毒性の機会を少なくする。多量体用の生体分解性足場の一例は、図９
で示されている。この場合、この足場は、２個の末端アルコールを含有する分子
の存在下にて、２個のカルボン酸の縮合から形成される。このような縮合反応に
特異的な反応条件は、当該技術分野で周知である。

【００９８】 （図９．生分解性足場の例）

【００９９】

【化１８】 それに加えて、この生分解性基は、ｐＨまたは温度が変化すると、または超音
波または光エネルギーを加えると、開裂し得る。このような基は、プロドラッグ
の文献で周知である。［Ｋｒａｔｚ，Ｆ．，Ｂｅｙｅｒ，Ｕ．、およびＳｃｈｕ
ｔｔｅ Ｍ．Ｔ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ
Ｓｙｓｔ．１６：ｐｐ．２４５〜８８（１９９９）；Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ，Ｔ．
Ｊ．，Ｇｏｍｅｒ，Ｃ．Ｊ．，Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，Ｂ．Ｗ．，Ｊｏｒｉ，Ｇ．
，Ｋｅｓｓｅｌ，Ｄ．，Ｋｏｒｂｅｌｉｋ，Ｍ．，Ｍｏａｎ，Ｊ．，およびＰｅ
ｎｇ，Ｑ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９０：ｐｐ．８８９〜９０
５（１９９８）；Ｗａｎｇ，Ｗ．，Ｊｉａｎｇ，Ｊ．，Ｂａｌｌａｒｄ，Ｃ．Ｅ
．，ａｎｄ Ｗａｎｇ，Ｂ．Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．５：ｐｐ．２６５
〜８７（１９９９））。

【０１００】 金属イオンをキレート化する環式エレメトを含有する足場は、本発明の好まし
い実施形態の他のセットである。この足場内だけでなく別のＩＥＭ（これは、足
場に結合している）でガドリニウムをキレート化するかまたはガドリニウムにキ
レート化に備えたＩＥＭ含有足場は、さらに好ましい。このような足場の例は、
図１０で示されている。

【０１０１】 （図１０．足場としてガドリニウム錯体の一部を使用した多量体の例）

【０１０２】

【化１９】 開放鎖式基および環式基に足場を分類したが、このことは、これらの基が相互
に相容れないことを暗示しない。運動を束縛する環式エレメントを組み込んだ広
範囲の開放鎖状の足場が考慮される。この足場の環式部分は、ホモ環式（ｈｏｍ
ｏｃｙｃｌｉｃ）またはヘテロ環式（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）の環であり得
る。それゆえ、これらの環は、例えば、シクロプロピル環のように、非常に束縛
され得るか、またはシクロヘキシル環のような立体配置的にそれ程束縛されてい
ない環であり得る。

【０１０３】 この足場の開放鎖状部分および環式部分の両方は、必要に応じて、酸素、窒素
、イオウ、リンおよびハロゲンから選択されるヘテロ原子により、置換または置
き換えられ得る。この足場はまた、短鎖炭化水素（１個〜１０個の炭素原子）の
ような置換基を含有し得る。これらの炭化水素側鎖は、必要に応じて、酸素、窒
素、イオウ、リンおよびハロゲンから選択されるヘテロ原子により、置換または
置き換えられ得る。それゆえ、これらの足場は、その足場の開放鎖状部分および
環式部分の両方において、多くの通例の有機基を含有し得る。一部の例には、カ
ルボニル、エステル、ジエステル、ホスフェート、ホスホジエステル、無水物、
スルホニル基、硫酸塩およびカーバメートが挙げられるが、これらに限定されな
い。

【０１０４】 これらの環はまた、通例の生体環式化合物（例えば、炭水化物）を含有し得る
。これらの環式エレメントの好ましい実施形態には、多環式（例えば、デカリン
（ｄｅｃａｌｉｎ）のヘテロ環式誘導体）が挙げられる。他の例には、３個〜７
個の原子を含有する炭素環式環（ここで、４個までの原子は、必要に応じて、Ｏ
、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）₂およびＮＨからなる群から選択される部
分で置換される）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの環は、必要
に応じて、メチル基およびそれらの誘導体、アルキル基、アルケニル基またはア
ルキニル基で置換され、これらは、２個〜１００個の炭素を含有し、ここで、１
０個までの炭素は、必要に応じて、酸素、窒素、イオウ、リンおよびハロゲンか
ら選択されるヘテロ原子で置換されるか、またはＯ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、
Ｓ（Ｏ）₂およびＮＨから選択される部分で置き換えられる。ちょうど、ある種
の足場（例えば、アミノ酸ベースの足場）がＴＢＭを含有し得るように、これら
の足場は、同様に、ＩＥＭを含有し得る。これらのＩＥＭは、任意の有機分子、
金属イオンまたはキレートであり得る。好ましい実施形態には、環式ＩＥＭを有
するものがあり、金属キレートである環式ＩＥＭは、さらに好ましい。このよう
な上記鎖式および環式の組合せ足場の特定の例は、これらの足場を含有する造影
剤の対応する例と共に、図１１で示されている。

【０１０５】 （図１１．環式エレメントを有する足場の例）

【０１０６】

【化２０】 （任意のリンカー） 本発明の特定の実施形態の造影剤は、ＩＥＭが足場に結合される任意のリンカ
ーにより、特徴付けられる。その画像向上部分（ＩＥＭ）および標的結合部分（
ＴＢＭ）は、本明細書中の他の箇所で、記述されている。このリンカー部分（Ｌ
）は、単結合または多重結合により共有結合した１個〜３０個の炭素原子を含有
する任意のサブユニットであり得、ここで、この炭素原子の１０個までは、Ｏ、
Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＨまたはＩで置換され得る。このリンカーは、こ
れらのＩＥＭを足場に連結するように機能する。リンカーの例には、直鎖または
分枝鎖のアルカン、アルケンまたはアルキンが挙げられ、これらは、必要に応じ
て、官能基（例えば、カルボニル、エーテル、アミド、アミン、尿素、チオエー
テル、アリール、ホスフェート、スルホンアミドなど）で置換されている。特定
の実施形態の好ましいリンカーは、２個またはそれ以上の官能性化学基を統合し
、その一方は、この足場に結合され、その他方は、これらのＩＥＭに結合される
。

【０１０７】 これらの官能性化学基は、同一または異なり得る。該官能基の例には、ケトン
、エステル、アミド、エーテル、カーボネート、スルホンアミド、アルカン、ア
ルケン、アルキンおよびカルバメートが挙げられるが、これらに限定されない。
リンカーを調製するのに好ましいある種の試薬の例には、アミノ酸（特に、グリ
シン、アラニン、セリン、ホモセリン、スレオニン、チロシン、システイン、ア
ミノフェニルアラニン、リジン、オルニチン、２，４−ジアミノ酪酸、ジアミノ
プロピオン酸、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸およびグルタミン酸）、ジ
オール（特に、エチレングリコール）、二ハロゲン化物（特に、二塩化エチレン
）、２−メルカプトエタノール、２−アミノエタノール、１，２−ジアミノエタ
ノール、ジカルボン酸（特に、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、コハク酸、フマ
ル酸、グルタル酸およびアジピン酸）、および他の二官能性、三官能性および多
官能性の低分子がある。

【０１０８】 さらに他のリンカーは、尿素、アセタール、ケタール、ダブルエステル（ｄｏ
ｕｂｌｅ ｅｓｔｅｒ）、カルボニル、チオ尿素、スルホン、チオエステル、エ
ステル、エーテル、ジスルフィド、ラクトン、イミン、ホスホリルまたはホスホ
ジエステル結合；置換されたまたは非置換基の飽和または不飽和アルキル鎖；単
一アミノ酸または異なる複数のアミノ酸の直鎖状、分枝状または環式のアミノ酸
鎖（例えば、フィブリン結合部分のＮ−末端またはＣ−末端の伸長部）；マロン
酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸およびピメリン酸；カプロン酸；単純ジ
アミンおよびジアルコールであり得るが、これらに限定されない。

【０１０９】 好ましくは、このリンカーの分子量は、十分に規定される。これらの分子量は
、１００未満から１０００より高いサイズの範囲であり得る。好ましくは、この
リンカーの分子量は、２００未満であり、さらに好ましくは、１００未満である
。それに加えて、本発明の画像化剤のための排出の効率的な経路を与えるように
、インビボで生分解性であるリンカーを利用するのが望まれ得る。このリンカー
内でのそれらの位置に依存して、このような生分解性の官能基には、エステル、
ジエステル、アミド、ホスホエステル、エーテル、アセタールおよびケタール官
能基を挙げることができる。

【０１１０】 一般に、この金属キレートまたは他のＩＥＭをリンカーに結合しリンカーをＴ
ＢＭに結合するには、公知方法が使用できる。例えば、ＷＯ９５／２８９６７、
ＷＯ９８／１８４９６、ＷＯ９８／１８４９７を参照のこと。本発明は、このキ
レートを任意の部位で結合することを考慮しているが、但し、この金属キレート
は、毒性をできるだけ少なくするために、その金属にしっかりと結合する性能を
保持している。ある種のリンカーの例は、図１２で示されているが、簡単にする
ために、水素原子は省略している。

【０１１１】 （図１２．複数の連結点を有するリンカーの例）

【０１１２】

【化２１】 （多座結合相互作用に関連したコントラストの向上） 本発明は、その異なる実施形態において、標的が結合した多量体キレート構造
において、全ての常磁性金属（例えば、ガドリニウム）中心の平均緩和率を高め
る。表１および表２で示した例は、単一のＴＢＭのみを介した複数のＩＥＭ構造
体の標的結合が、同程度の単一ＩＥＭ構造体について観察されるのと同じ程度ま
で、Ｇｄ（ＩＩＩ）１個あたりの平均結合緩和率を高めるのに十分ではないこと
を説明している。単一のＴＢＭを介した結合は、この多量体の全体的な回転相関
時間を遅くするものの、個々の金属（例えば、ガドリニウム）キレートは、明ら
かに、依然として、むしろ妨げのない様式で、自由に回転する。この過剰な運動
は、各金属中心での緩和率を低下させる。驚くべきことに、このことは、この多
量体が２個の芳香環を有するＴＢＭを含有しているときでも、正しいことが分か
っている。ＰＣＴ ＷＯ９６／２３５２６では、ＭｃＭｕｒｒｙらは、単一のＩ
ＥＭを有する造影剤のアルブミン結合緩和率が、非平面配向で、２個またはそれ
以上の芳香環を含む血漿タンパク質結合部分（ＰＰＢＭ）を使用することにより
、高められることを教示している。表１で図示しているように、このようなＴＢ
Ｍ（ジフェニルシクロヘキシル）を使用すると、単一のＩＥＭの場合（ＭＳ−３
２５）には、優れた緩和率の向上が得られるが、驚くべきことに、その多量体ア
ナログについては、ＩＥＭ１個あたりのアルブミン結合緩和率は低い。標的多量
体の緩和率をさらに高めるためには、これらのキレート化基およびキレート化イ
オンの局所運動は、少なくしなければならない。

【０１１３】 本発明は、多座結合相互作用およびそれに付随した可撓性の低下の結果として
、高い緩和率を示す標的多量体を記述する。標的に結合する際のＩＥＭ１個あた
りの緩和率が、著しく低下しないように位置付けて２個またはそれ以上のＴＢＭ
を導入すると、多くの場合、結合状態での造影剤に対するＩＥＭ１個あたりの緩
和率が単一ＩＥＭで以前に観察されたものと類似しているように、緩和率は著し
く高められる（７〜８倍の向上）ことが分かった。ＩＥＭ１個あたりの緩和率の
向上は、標的結合多量体構造（結合したＩＥＭを含めて）の屈曲性の低下が原因
である。結合時の緩和率の増大は、典型的には、１．５倍以上である。好ましい
画像解像度は、少なくとも２または３倍の緩和率上昇の成果である。さらに好ま
しい緩和率の上昇は、４倍、５倍および６倍である。さらに好ましい緩和率の上
昇は、７〜８倍、９〜１０倍または１０倍以上である。２０ＭＨｚおよび３７℃
での好ましい緩和率は、ＩＥＭ１個あたり、少なくとも１０ｍＭ^-1ｓ^-1であり、
さらに好ましくは、ＩＥＭ１個あたり、少なくとも１５ｍＭ^-1ｓ^-1であり、さら
に好ましくは、ＩＥＭ１個あたり、少なくとも２５ｍＭ^-1ｓ^-1であり、さらに好
ましくは、ＩＥＭ１個あたり、少なくとも３０ｍＭ^-1ｓ^-1であり、さらに好まし
くは、ＩＥＭ１個あたり、少なくとも３５ｍＭ^-1ｓ^-1であり、最も好ましくは、
ＩＥＭ１個あたり、少なくとも４０ｍＭ^-1ｓ^-1である。好ましくは、この造影剤
の緩和率は、全体として、２０ＭＨｚおよび３７℃で、６０ｍＭ^-1ｓ^-1より高い
。

【０１１４】 以下のデータは、多座結合により生じるコントラストの向上を説明するのに役
立つ。複数ＴＢＭの利点は、表２で示した３つの具体的な比較で、明らかである
。この表では、本発明の化合物は、少なくとも２個のＩＥＭおよび少なくとも２
個のＴＢＭを含有する。本発明の化合物は、単一のＩＥＭまたは単一のＴＢＭの
みを有する化合物と比較される。この比較は、本発明の化合物について、ＩＥＭ
１個あたりの高い緩和率を立証する。この表での測定に関して、その標的は、ヒ
ト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。まず第一に、Ｍ８−０４とＭ８−０５分子
との比較により、ＴＢＭの数を一定のままにしつつＩＥＭの数を多くすると、そ
れに対応して、全緩和率の上昇が起こることが立証される。具体的には、この比
較により、少なくとも２個のＴＢＭがその分子内で存在していて十分に間隔を置
いて配置されているという条件で、Ｇｄ（ＩＩＩ）１個あたりの緩和率の相応の
損失なしで、ＩＥＭを添加できることが立証される。

【０１１５】 Ｍ８−０４およびＭ８−０５化合物の両方は、２個のＴＢＭを含有し、その各
々は、ベンゾ縮合シクロペンチル基、フェニル基およびアルキル置換フェニル基
を含有する。これらの２個のＴＢＭは、ＩＥＭ（この場合、ＤＴＰＡ部分）の数
が２個から４個まで増加するとき、各ＩＥＭ部位でのＧｄ（ＩＩＩ）１個あたり
の緩和率が同じままである（２０ＭＨｚにて、３２対３２．７ｍＭ^-1ｓ^-1）よう
に、その分子を束縛するのに明らかに十分である。結果的に、その分子に対する
全緩和率は、ＩＥＭの数が２倍になるのに呼応して、２倍になる（２個のＩＥＭ
に対して６４ｍＭ^-1ｓ^-1対４個のＩＥＭに対して１３１ｍＭ^-1ｓ^-1）。 （表２．多座結合による緩和率の上昇）

【０１１６】

【表２】 第二に、Ｍ８−０６とＭ８−０５分子とを比較すると、ＩＥＭの数を一定に保
ってＴＢＭの数を多くすると、これらのＴＢＭが十分に間隔を置いて配置されて
いるという条件で、ＩＥＭ１個あたりの緩和率が上昇することが立証される。両
分子では、これらのＴＢＭは、同じ構造を有し、そのＩＥＭ構造は、同じガドリ
ニウムキレート化ＤＴＰＡ部分である。しかしながら、このＭ８−０６化合物は
、単一のＴＢＭのみを含有するのに対して、このＭ８−０５化合物は、２つのＴ
ＢＭを含む。このＭ８−０５化合物の２つのＴＭＢは、ガドリニウム１個あたり
の緩和率が２０ＭＨｚで２７．０ｍＭ^-1ｓ^-1から３２．７ｍＭ^-1ｓ^-1まで上昇す
るので、この分子を効果的に束縛する。それゆえ、ＴＢＭの数を多くすると、こ
れらのＴＢＭが十分に間隔を置いて配置されているという条件で、ＩＥＭ１個あ
たりの緩和率が高くなる。

【０１１７】 第三に、Ｍ８−０７分子とＭ８−０８分子とを比較すると、この場合もやはり
（表２を参照のこと）、ＩＥＭの数を一定に保って十分に間隔を開けたＴＢＭの
数を多くすると、ＩＥＭ１個あたりの緩和率が上昇することが立証される。両分
子では、これらのＴＢＭは、同じアルキル置換ビフェニル構造を有し、そして両
方の化合物は、同じ数のＩＥＭを有し、そのＩＥＭ構造は、同じガドリニウム−
ＤＴＰＡ部分である。それらの核構造体（足場）はまた、Ｍ８−０７分子および
Ｍ８−０８分子の両方について、同じテトラアミンである。Ｍ８−０７化合物は
、単一のＴＢＭおよび４個のＩＥＭを含有するのに対して、Ｍ８−０８化合物は
、２個のＴＢＭおよび４個のＩＥＭを含有する。この場合もやはり、Ｍ８−０８
化合物中の２個のＴＢＭは、ガドリニウム１個あたりの結合緩和率がＨＳＡの存
在下にて２０ＭＨｚで１６．０ｍＭ^-1ｓ^-1から４４．１ｍＭ^-1ｓ^-1まで上昇する
ので、この分子をさらに効果的に束縛する。結果的に、この計算によって、その
分子に対する全緩和率は、ＴＢＭの数が２倍になるのに呼応して、２倍を超えて
増える（１個のＴＢＭに対する６４．０ｍＭ^-1ｓ^-1から２個のＴＢＭに対する１
７６．５ｍＭ^-1ｓ^-1まで２．７５倍の上昇）ことが明らかとなる。他方、化合物
Ｍ８−０７およびＭ８−０８に対する遊離緩和率は、同程度であり、すなわち、
それぞれ、２０ＭＨｚにおいて、９．２ｍＭ^-1ｓ^-1および１０．３ｍＭ^-1ｓ^-1で
ある。化合物Ｍ８−０７およびＭ８−０８に対するＲ１_bound：Ｒ１_freeの比は
、それぞれ、１．７および４．３であり、このことは、Ｍ８−０８化合物が、標
的と背景との間で良好なコントラスト向上をもたらすことを示している。化合物
Ｍ８−０８はまた、ＨＳＡ親和性を高め、従って、Ｍ８−０７と比較して、さら
に高い標的特異性を生じたので、この多座結合多量体から生じるコントラストの
向上は、１個のＴＢＭを有する多量体よりもずっと優れているはずである。

【０１１８】 最後に、この表はまた、化合物Ｍ８−０９およびＭ８−１０のデータを含む。
これらのデータは、単一のＴＢＭおよび複数のＩＥＭに対して典型的な緩和率を
与えるように、含められている。Ｍ８−０９分子とＭ８−１０分子とを比較する
と、また、ＩＥＭの数が３倍増えても緩和率は２倍上昇するにすぎないので、あ
る種のＴＢＭを有する分子にＩＥＭを単に添加しても、全緩和率は比例的には上
昇しないことが立証されている。

【０１１９】 それゆえ、この分子を２つの別個の部位で束縛することは、その分子の全体と
しての緩和率だけでなく、その造影剤内の局所キレート化領域の緩和率も高める
のに役立つ（すなわち、その回転相関時間を短くする）。これらのＴＢＭは、十
分な距離だけ分離できるはずであるが、しかしながら、その結果、それらは、そ
の全分子が標的に結合するとき、この分子の可撓性を効果的に低くする。この結
果、４個までのＩＥＭを添加しても実質的に低下しない

【０１２０】

【数８】 （ＩＥＭ１個あたり）の値が得られる。この多座結合は、驚くべきことに、その
全多量体キレート構造全体にわたって、屈曲性を制限する。それゆえ、キレート
を含有するＩＥＭについては、局所キレート運動は、多座結合に従って少なくな
る。結果として、単一のＴＢＭのみを介して結合し標的部位に「擬似環化」また
は「ジッパー化」されない類似の多量体キレート化合物についての向上と比較し
て、著しく高いＭＲＩ信号が観察される。これらの多量体／多座結合構造はまた
、未結合状態において、剛性分子構造を有する造影剤より小さい信号を生じるの
で、また、それらは、標的に対する結合親和性を向上させるので、コントラスト
の向上は、さらに大きくなる。簡単に言えば、現在記述している発明は、ＩＥＭ
１個あたりの緩和率が多座結合相互作用（複数のＴＢＭ）の結果としてＩＥＭを
添加しても低くならない（結果的に、コントラストを向上させる）化合物、組成
物、およびそれらの使用方法を提供する。

【０１２１】 （用途） 血液プール画像化は、多くの潜在的な診断利益および治療利益を有する。循環
系の詳細な画像は、例えば、動脈瘤、塞栓症または血栓症および他の血餅、およ
び血流が制限された領域（例えば、動脈硬化症の環状動脈に存在している領域）
の早期発見を可能にする情報を提供できる。高い解像度の血液プール画像化でさ
らに正確に診断され得る他の一般的な循環器系統の病気には、糖尿病に付随した
循環器系統の欠陥、心臓病、リンパ水腫、末梢血管病、レイノー現象、静脈炎お
よび血管内面に対する他の傷害、心雑音、拡張蛇行静脈および心臓弁の障害から
起こる他の病気、および血管炎がある。また、特定の標的に向けられる造影剤は
、好中球欠乏から起こる好中球減少症のような疾患を改善できる。それに加えて
、ＭＲ、光学、および他の形態の画像化は、全身麻酔下での外科的な切開および
カテーテル挿入が必要な現在の技術よりも観血性が少ない。

【０１２２】 本明細書中の開示に従って調製されたＭＲＩおよび光学造影剤は、従来のＭＲ
Ｉおよび光学造影剤と同じ様式で使用され得る。血栓を画像化するとき、背景の
血液および組織と比較した血栓のコントラストを高めるために、ある種のＭＲ技
術およびパルスシーケンスが好まれ得る。これらの技術には、血液を黒っぽくし
ようとする黒色血液血管造影シーケンス（例えば、高速スピンエコーシーケンス
およびフロースポイルド（ｆｌｏｗ−ｓｐｏｉｌｅｄ）勾配エコーシーケンス）
が挙げられるが、これらに限定されない。これらの方法には、また、フローイン
ディペンデント技術（これは、コントラストを向上させた血栓と血液および組織
との間のＴ₁差によるコントラストの差高める）、例えば、血栓と背景組織との
間のコントラストを大きくする反転回復（ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ−ｒｅｃｏｂｅｒ
ｙ）作製または飽和回復（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ−ｒｅｃｏｖｅｒｙ）作製シー
ケンスが挙げられる。Ｔ₂技術を準備する方法もまた、有用であることが証明さ
れ得る。最後に、磁化移動技術の準備もまた、本発明の試薬と共に、コントラス
トを向上し得る。

【０１２３】 これらの組成物は、ヒトまたは動物モデルの系に静脈投与するように適合され
た薬学的組成物として、通例の手順に従って、処方され得る。典型的には、静脈
投与用の組成物は、無菌で等張性の緩衝水溶液である。必要な場合、この組成物
はまた、注射部位での苦痛を和らげるために、可溶化剤および局所麻酔剤（例え
ば、リグノカイン）を含有し得る。一般に、それらの成分は、別々に供給される
か、例えば、凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、単位投薬形状で共
に混合されるか、いずれかである。この組成物は、活性単位で活性薬剤の量を表
示している密閉容器（例えば、アンプルまたはサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ））で
保存され得る。この組成物は、注入で投与する場合、無菌の薬学的等級の「注入
水」または生理食塩水を含有する注入ビンで分配できる。この組成物を注射で投
与する場合、無菌の注入水または生理食塩水のアンプルが提供され得、それらの
成分が投与前に混合され得るようにする。

【０１２４】 本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な
塩を、任意の薬学的に受容可能な成分、賦形剤、担体、アジュバントまたはビヒ
クルと共に含有する。

【０１２５】 この高い緩和率の多座造影剤は、好ましくは、注射可能組成物の形態で、患者
に投与される。このＭＲＩ造影剤を投与する方法は、好ましくは、非経口的であ
り、これは、静脈内、動脈内、くも膜下腔内、間質内または腔内であることを意
味する。本発明の薬学的組成物は、他の診断剤または治療剤と類似の様式で、ヒ
トを含めた哺乳動物に投与できる。投与する用量および投与様式は、患者の年齢
、体重、性別、状態および遺伝的な要因を含めた種々の因子に依存しており、最
終的には、種々の投薬量の実験的な定量に引き続いて医療担当者により決定され
、その後、本明細書中で記述した画像化が行われる。一般に、診断感度または治
療効能に必要な投薬量は、約０．００１〜５０，０００μｇ／患者の体重１ｋｇ
、好ましくは、０．０１μｇ／患者の体重１ｋｇと２５．０μｇ／患者の体重１
ｋｇの間の範囲である。その最適用量は、本発明の開示に従って、経験的に決定
される。

【０１２６】 本発明の１実施形態での数種の高い緩和率の多座組成物の合成および使用は、
以下の実施例において、さらに例示する。以下の実施例で含まれる特定のパラメ
ータは、本発明の方法を説明する目的であり、いずれの様式でも、本発明の範囲
を制限するものではない。多数の実施形態および特徴が上で記述されているもの
の、記述した実施形態および特徴の改良および変形は、本発明の精神または添付
の特許請求の範囲の範囲のいずれかから逸脱することなく行われ得ることを、当
業者は理解している。

【０１２７】 （実施例） （実施例１ 緩和率の測定方法） 本発明の化合物を、０．４７Ｔｅｓｌａ（２０ＭＨｚ Ｈ−１のＬａｒｍｏｒ
周波数）および３７℃で操作するＢｒｕｋｅｒ ＮＭＳ−１２０ Ｍｉｎｉｓｐ
ｅｃ ＮＭＲ分光計を使用して、緩和率を評価した。水プロトンのＴ₁は、この
機器のソフトウェアを使用して、反転回復パルスシーケンスにより決定した。緩
和率は、４個の個々の試料を調製することにより、標的（典型的には、４．５％
ＨＳＡ）の存在下にて、決定した。第一のものは、リン酸緩衝化生理食塩水（Ｐ
ＢＳ）中で、４．５％のＨＳＡだけを含有しており、他の３個は、ＰＢＳ中の４
．５％のＨＳＡに加えて、それぞれ、約２０、３０および４０μＭのＧｄ（ＩＩ
Ｉ）を含有していた。これらの試料を、３７℃で、少なくとも１５分間インキュ
ベートして、Ｔ₁の測定を行う前に、温度平衡を確保する。これらの試料のＧｄ
（ＩＩＩ）含量は、誘導的に結合した血漿−質量スペクトル（ＩＣＰ−ＭＳ）に
より、決定する。（Ｇｄ（ＩＩＩ）イオン１個あたりの）緩和率は、Ｇｄ（ＩＩ
Ｉ）濃度（ｍＭ）に対して緩和速度（１／Ｔ₁）（ｓ^-1）をプロットすることに
より、決定する。このデータに対して直線的に適合した勾配は、緩和率となる。
標的なしでの化合物の緩和率はまた、標的が存在しないこと以外は、類似の様式
で決定される。

【０１２８】 これらの条件下で標的に結合した種の濃度は、例えば、限外濾過または平衡透
析を使用して、別の実験で決定される。標的に結合した種の量の知見、標的の存
在下での緩和率および標的がないときの緩和率により、本明細書中で記述した平
均結合緩和率を計算することが可能となる。

【０１２９】 （実施例２ 本発明のフィブリン結合造影剤を試験する実験モデル） これらの実施例で記述するように、高い緩和率および血餅（血栓）画像化に対
する特異性を有する造影剤は、血餅中のフィブリンと循環しているフィブリノー
ゲンとを区別できる。それにより、種々の進行段階の血栓症の感度が高く効果的
な発見を行うことができる。それは、初期および後期の血栓形成の存在または不
在を診断するのに使用できる。

【０１３０】 使用され得る１動物モデルには、頸静脈が締め付けられたウサギ頸静脈血餅モ
デルがある。この静脈は、２つの位置で締め付けられ、それらの締め付け部分の
間のウサギの血液は、取り除かれる。これらの締め付け部分間の静脈には、ヒト
フィブリノーゲン、ウサギ赤血球およびトロンビンが添加されて、ヒトフィブリ
ンを含む血餅を発生させる。この血餅は、典型的には、３０分間そのままにする
。

【０１３１】 ウサギ頸静脈モデルでは、典型的な機械は、３６／５／３０度でスポイルド勾
配（ＳＰＧＲ）ＭＲＩを使用する１．５Ｔｅｓｌａである。あるいは、１．５Ｔ
ｅｓｌａ機械を使って、３Ｄ ＧＲＥ ４４／１０／３０度画像化方法が使用さ
れ得る。あるいは、１．５Ｔｅｓｌａを使って、ＩＲ ２０００／１０／７００
方法が使用され得る。

【０１３２】 （実施例３ 実施例化合物：合成） 本発明の好ましい実施形態は、図１３で示した化学構造を有するＭＲＩ画像化
用の造影剤である。

【０１３３】

【化２２】 図１３の造影剤は、ＩＥＭとして役立つ４個のＤＴＰＡ−Ｇｄ分子を含む。こ
れらのＩＥＭは、一連の繰り返しアミドを含有するリンカーを介して、エチレン
ジアミン足場に結合される。これらのＴＢＭは、フィブリンに対して高い親和性
を示す２個のペプチドである。これらのペプチドは、２個のシステイン残基間で
ジスルフィド結合を形成することによって、環化し得る。これらのＴＢＭは、オ
キシム結合およびアミド結合を介して、この足場に結合される。

【０１３４】 フィブリンのＤＤ（Ｅ）アミノ酸フラグメントへのプロトタイプ血栓剤の結合
は、３７℃、１０μＭの造影剤、２．５ｍｇ／ｍＬのフィブリン、５０ｍＭのＴ
ｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＣａ²⁺、ｐＨ７．４で、５１％結合さ
れる。結合した化合物の緩和率は、２０ＭＨｚおよび３７℃で測定すると、１０
１．４ｍＭ^-1ｓ^-1であり、これは、Ｇｄキレート１個あたり、２５．４ｍＭ^-1ｓ ^-1 である。この遊離造影剤は、６７．７ｍＭ^-1ｓ^-1の緩和率を有し、これは、Ｇ
ｄキレート１個あたり、１６．９ｍＭ^-1ｓ^-1である。この試薬の緩和率は、結合
すると、非常に高くなる。プロトタイプＭＲ剤としての血栓ペプチド多量体の合
成は、図１４で記述されている。特定のペプチドおよび造影剤が示されているも
のの（Ｍ８−１１）、当業者は、この化合物において、他のペプチドで置き換え
られ得ること、およびこの化合物で使用されるペプチドが同じである必要はない
ことを理解する。

【０１３５】

【化２３】 （実験部分） （ジＤｄｅ−テトラアミンの合成） テトラアミン（Ｆｌｕｋａ）（１．５０ｍＬ）を、３０ｍＬのＥｔＯＨ中で、
Ｄｄｅ−ＯＨ（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ）（４．０ｇ）と反応させた。その透明
な淡黄色溶液を、１６時間還流した。この反応が完結した後、その反応混合物を
減圧下で濃縮して、乾燥残留物を得た。この残留物を、２５０ｍＬのエーテルお
よび２Ｎ ＨＣｌ溶液に溶解した。その淡黄色の酸性水層を分離し、１２のｐＨ
に達するまで５０％ＮａＯＨ溶液を加え、次いで、ＥｔＯＡｃで逆抽出した。そ
のＥｔＯＡｃ層をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、そして濾過した。
その濾液を減圧下で蒸発させて、淡黄色の塊状固形物（２．９ｇ）を得、これを
、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２：３）およびＥｔＯＡｃ／（１％ＮＨ₄ＯＨを含む
ＭｅＯＨ）（２：３）を使用するフラッシュシリカカラム上で精製して、所望生
成物（２．３ｇ）として、純粋な淡黄色の固形物を得た。

【０１３６】

【化２４】 （ジＤｄｅ−テトラアミン ジ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）₂の合成） Ｂｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨ．ＤＣＨＡ（４．８５ｇ）を、１２ｍＬの２
Ｍ Ｈ₂ＳＯ₄と共に、６０ｍＬのＥｔＯＡｃに懸濁した。そのフラスコを振盪し
、そのＥｔＯＡｃ層を分離した。その水層をＥｔＯＡｃで逆抽出した。このＥｔ
ＯＡｃ層を合わせ、ブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そして濾過し
た。その濾液を減圧下で蒸発させ、得られた固形物を乾燥して、白色結晶固形物
として、３．２３ｇの所望のＢｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨ遊離酸を得た。

【０１３７】

【化２５】 遊離酸としてのＢｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（１．５２ｇ）を、０℃で、
１５ｍＬのＤＣＭに溶解した。それに、ＨＯＡｔ（０．６８ｇ）およびＤＩＥＡ
（０．３５ｍＬ）を添加し、その透明溶液を０℃で攪拌させた。次いで、この溶
液に、上記から得られたジＤｄｅ−テトラアミンを添加し、続いて、ＨＡＴＵ（
１．９０ｇ）および２ｍｍｏｌのＴＥＡを添加した。無水ＤＭＦ（５ｍｌ）を添
加し、その反応系を３６時間攪拌した。それらの溶媒を減圧下で蒸発させ、その
残留物を１５０ｍＬのＥｔＯＡｃに吸収して、１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ₃
、ブラインで洗浄し、次いで、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、そして減圧下
で蒸発させて、白色固形物（１．９２ｇ）を得た。この固形物を、ＥｔＯＡｃ（
５％ＭｅＯＨ）を使用するフラッシュシリカカラムクロマトグラフィーで精製し
て、白色固形物（１．３ｇ）として、所望生成物を得た。

【０１３８】

【化２６】 （ジ−Ｄｄｅ−テトラアミン−ジＤｐｒ．ＨＣｌ塩の合成） ジＤｄｅ−テトラアミン−ジＤｐｒ（ＢＯＣ）₂を、４０ｍＬの４Ｎ ＨＣｌ
／ジオキサンに溶解し、そして１０時間攪拌した。その懸濁液を冷エーテルで倍
散し、そして減圧下で蒸発させて、多量の白色固形物を得た。この固形物を高真
空ポンプで乾燥して、ＨＣｌ塩形状（１．０９ｇ）で、所望生成物を得た。 ＭＳ：ｍ／ｚ ６４７．３（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１３９】 （ジＤｄｅ−ジＤｐｒ−テトラ−ＧｌｙＤＴＰＡ−ＯｔＢｕの合成） Ｇｌｙ−ＤＴＰＡペンタ−ｔ−ブチルエステル（Ｇｌｙ−ＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢ
ｕ）（２．３７ｇ）を、０℃で、１０ｍＬのＤＭＦに吸収させた。ＨＯＡｔ（０
．４１ｇ）およびＤＩＥＡ（０．５２ｍＬ）を添加し、その溶液を０℃で攪拌し
た。上で得たジ−Ｄｄｅ−テトラアミン−ジＤｐｒ塩（０．３９ｇ）を３ｍＬの
ＤＭＦに溶解し、そしてＤＩＥＡ（０．１３ｍＬ）を添加した。この混合物に、
追加ＤＩＥＡ（０．０９ｍＬ）と共に、ＨＡＴＵ（１．１４ｇ）を添加した。そ
の黄色の溶液を３６時間攪拌した。それらの溶媒を減圧下で除去し、その残留物
をＥｔＯＡｃに吸収した。その有機層を、１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ₃、ブ
ラインで洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₃で乾燥し、濾過し、そして減圧下で蒸発させて
、淡黄色の固形物（３．１５ｇ）を得た。その粗生成物を、Ｐｒｅｐ ＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ［Ｃ−４，ＡＣＮ／Ｈ₂Ｏ］上でさらに精製した。所望化合物を含有する
画分をプールし、そして凍結乾燥して、白色固形物を得た（１．０１ｇ）。 ＭＳ：ｍ／ｚ １２４４．４（Ｍ＋３Ｈ）³⁺；９３３．９（Ｍ＋４Ｈ）⁴⁺。

【０１４０】 （テトラアミン−テトラ−ＣＮ−ＧｌｙＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕの合成） ジＤｄｅ−テトラアミン−ジＤｐｒ−テトラ−ＧｌｙＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕ（
０．３８ｇ）を、ＤＭＦ中の８ｍｌの２％ｖ／ｖヒドラジンに溶解し、そして室
温で１０分間攪拌した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、その残留物をＣＨ₃
ＣＮに吸収し、そしてＰｒｅｐ−ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ｃ−４，ＡＣＮ／Ｈ₂Ｏ］上
で精製した。所望化合物を含有する画分をプールし、そして凍結乾燥して、白色
固形物（０．２５ｇ）を得た。 ＭＳ：ｍ／ｚ １７０２．１（Ｍ＋２Ｈ）²⁺；１１３５．１（Ｍ＋３Ｈ）³⁺。

【０１４１】 （ジ−ＭｅＯ−トリチル−ＡｏＡ−テトラ−Ｇｌｙ−ＤＰＴＡ−Ｏ−Ｂｕの
合成） テトラアミン−テトラ−Ｇｌｙ−ＤＰＴＡ−Ｏ−ｔＢｕ（９８ｍｇ）を、０℃
で、３ｍＬのＤＭＦに溶解した。ＴＥＡ（９μＬ）と共に、メトキシトリチルア
ミノオキシ酢酸スクシンイミドエステル（ＭｅＯ−Ｔｒｔ−ＡｏＡ−ＯＳｕ）（
２９ｍｇ）を添加し、そして一晩攪拌し、ＭｅＯＨを添加し、それらの溶媒を蒸
発させ、その残留物をＤＣＭで抽出し、１０％クエン酸水溶液、ブラインで洗浄
し、そして無水ＭｇＳＯ₄で乾燥した。その生成物を、Ｐｒｅｐ ＲＰ−ＨＰＬ
Ｃ［Ｃ−４，ＡＣＮ／Ｈ₂Ｏ］上でさらに精製した。所望生成物を有する画分を
プールし、そして凍結乾燥して、白色固形物（８７ｍｇ）を得た。 ＭＳ：ｍ／ｚ ２０４７．５（Ｍ＋２Ｈ）²⁺；１３６５．４（Ｍ＋３Ｈ）³⁺。

【０１４２】 （ＡｏＡ−テトラ−ＧｌｙＤＴＰＡ−ＯＨの合成） ジ−ＭｅＯトリチル−ＡｏＡ−テトラ−ＧｌｙＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕ（８５ｍ
ｇ）を、１０ｍＬのＣＨ₃Ｃｌ／チオアニソール／ＤＣＭ／ＴＩＳ（６４／１６
／１６／４）に溶解し、そして０℃で、３時間攪拌した。ＴＩＳは、（ｉＰｒ） ₃ ＳｉＨである。この反応混合物を２０ｍＬの水で希釈し、そしてエーテルで抽
出した。その水層を、Ｐｒｅｐ ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ｃ−４，ＡＣＮ／ＮＨ₄ＯＡ
ｃ］上でさらに精製した。その生成物を単離し、そして凍結乾燥して、白色固形
物（２９ｍｇ）を得た。 ＭＳ：ｍ／ｚ １２１４．４（Ｍ＋２Ｈ）²⁺；８０９．５（Ｍ＋３Ｈ）³⁺。

【０１４３】 （ＳＬＰＣＤＹＹＧＴＣＬＤ−ＮＨ₂の酸化） ＮａＰｉ緩衝液（ｐＨ＝６．８）中のペプチドｃ［ＳＬＰＣＤＹＹＧＴＣＬＤ
−ＮＨ₂］１０ｍＭを、ＮａＩＯ₄（２０ｍＭ）と反応させた。その酸化をエチレ
ングリコールでクエンチした。その反応系をＣ−１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリ
ッジ上で精製した。この生成物を、０．１％ＴＦＡを含有する８０％ＣＨ₃ＣＮ
で溶出した。それらの溶媒を真空カートリッジ中で除去し、所望生成物であるα
−Ｎ−グリオキシリル−ｃ［ＬＰＣＤＹＹＧＴＣＬＤ−ＮＨ₂］を凍結乾燥して
、白色粉末を得た。 ＭＳ：ｍ／ｚ １３１５．５（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１４４】 （化学選択的な連結−最終アセンブリ：Ｍ８−１１の合成） α−Ｎ−グリオキシリル−ｃ［ＬＰＣＤＹＹＧＴＣＬＤ−ＮＨ₂］（１３．２
ｍｇ）およびＡｏＡ−テトラＤＰＴＡ−ＯＨ（１２．３ｍｇ）を、２２℃で、２
０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．６）中で反応させた。この反応系を、
Ｓｅｍｉ−Ｐｒｅｐ ＲＰ−ＨＰＬＣ［Ｃ−１８，ＣＨ₄ＣＨ／５ｍｍ ＮＨ₄Ｏ
Ａｃ］上で精製した。この物質を、標準的な手法に従って、そのガドリニウム錯
体に転化した［例えば、Ｌａｕｆｆｅｒ Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２
０７：ｐｐ．５２９〜３８（１９９８）を参照のこと］。 ＭＳ：ｍ／ｚ １６７４．６（Ｍ＋３Ｈ）³⁺；１２５６．３（ｍ＋４Ｈ）⁴⁺。

【０１４５】 （実施例４：トリエチレンテトラアミン足場を使った造影剤の合成） ジ−Ｄｄｅ−テトラアミン−ジＤｐｒおよび上記手順を使用して、ジアミノ−
ＢＯＣ置換エタンリンカーおよびＧｌｙ−ＤＴＰＡ−ＯｔＢｕ ＩＥＭの置換と
共に、そのトリエチレンテトラアミン足場に、上記の種々のキレートを結合し得
る。これらのキレートは、同一または異なり得、同種のキレート造影剤または異
種キレートを有する造影剤を生成する。

【０１４６】 （実施例５：Ｍ８−０７の合成）

【０１４７】

【化２７】 ４−メシチル安息香酸（０．７ｇ）およびトリエチレンテトラアミン（４．２
６ｇ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍＬ）溶液に、ＨＯＢｔ（０．８９ｇ、５．８３ｍ
ｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．７４ｇ）を添加した。この混合物を、室温で一晩攪
拌した。得られた沈殿物を濾過し、その溶媒を減圧下で除去して、黄色のオイル
を得た。この反応混合物を、Ｃ４カラム上のＰｒｅｐ−ＨＰＬＣ（溶離液：０．
１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ）に供して、白色泡状物（０．６３ｇ）として、
このモノアミンのＴＦＡ塩を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）３６９．１（Ｍ⁺）。

【０１４８】 上記モノアミン（０．６３ｇ）のエーテル（１００ｍＬ）およびＴＨＦ（１０
０ｍＬ）溶液に、室温で、ＬＡＨ（１．３０ｇ）をゆっくりと添加した。この混
合物を２時間還流し、次いで、室温で一晩攪拌した。この混合物に、水を滴下し
て、ＬＡＨをクエンチした。得られた沈殿物を濾過により除去し、その溶媒を減
圧下で除去して、無色のオイルを得た。この反応混合物を、Ｃ４カラム上のＰｒ
ｅｐ−ＨＰＬＣ（溶離液：０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ）に供して、白色
泡状物（１８０ｍｇ）として、ＴＦＡアミン塩を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）３５４．４（Ｍ⁺）。

【０１４９】 このＴＦＡアミン塩（１８０ｍｇ）およびジイソプロピルエチルアミン（２８
７ｍｇ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、Ｇｌｙ−ＤＴＰＡ−ＯｔＢｕ（１．８８
ｇ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）溶液、ＨＯＢｔ（３７０ｍｇ）およびＤＩＣ（３
０１ｍｇ）を添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌した。その溶媒を減圧下
で除去して、黄色のオイルを得た。この反応混合物を、Ｃ４カラム上のＰｒｅｐ
−ＨＰＬＣ（溶離液：０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ）に供して、白色固形
物（０．３６ｇ）として、粗生成物を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）１７１９．４（Ｍ²⁺）、１１４７．２（Ｍ³⁺）。

【０１５０】 この白色固形物（０．１９ｇ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（４．５ｍＬ）およびアニソール
（４．５ｍＬ）溶液に、４．５ｍＬの１２Ｎ ＨＣｌを滴下した。この混合物を
、室温で３時間攪拌した。この混合物に、４０ｍＬの水を添加し、そしてエーテ
ルで３回洗浄した。この水溶液を凍結乾燥して、粗生成物を得、これを、Ｃ１８
カラム上のＰｒｅｐ−ＨＰＬＣ（溶離液：１００ｍＭ ＡｃＯＮＨ₄／ＣＨ₃ＣＮ
）に供して、白色固形物（５０ｍｇ）を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）１１５８．６（Ｍ²⁺）、７７２．８（Ｍ³⁺）。

【０１５１】 この物質を、標準的な方法に従って、そのガドリニウム錯体に転化した（例え
ば、Ｌａｕｆｆｅｒ Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２０７：５２９〜３８
頁（１９９８）を参照）。

【０１５２】 （実施例６：Ｍ８−０８の合成）

【０１５３】

【化２８】 （４−メシチル安息香酸） メシチルホウ酸（１０ｇ）および４−ブロモ安息香酸（１２．９ｇ）の１−プ
ロパノール（１５０ｍＬ）およびＤＭＥ（２００ｍＬ）溶液に、トリフェニルホ
スフィン（０．１２８ｇ）、２Ｍ炭酸ナトリウム溶液（３７ｍＬ）および水（３
０ｍＬ）を添加した。この混合物に、窒素雰囲気下にて、酢酸パラジウム（８２
ｍｇ）を添加した。この混合物を一晩加熱還流した。その熱源を取り除いた後、
１００ｍＬの水を添加し、そして室温まで冷却しつつ、２．５時間攪拌した。黒
くなった混合物を１５０ｍＬの酢酸エチルで希釈し、その２相を分離した。その
有機層を、ＴＬＣ（Ｒ_f＝０．５５、溶離液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＣＨ₃ＯＨ＝５）によ
って４−ブロモ安息香酸が完全に除去されたことが示されるまで、飽和重炭酸ナ
トリウム溶液で数回洗浄した。この溶液を、２００ｍＬの１Ｎ ＮａＯＨ溶液で
３回抽出した。合わせた水層に、ｐＨ３になるまで、約５０ｍＬの１２Ｎ ＨＣ
ｌを添加した。得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥して、白色固
形物（８．８１ｇ）として、４−メシチル安息香酸を得た。 Ｒ_f＝０．７５（溶離液：ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＣＨ₃ＯＨ＝５）¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）：δ １．９９７（ｓ，６Ｈ）， ２
．３４０（ｓ，３Ｈ）， ６．９６１（ｓ，２Ｈ）， ７．２７４（ｄ，Ｊ＝８
．１Ｈｚ，２Ｈ）， ８．１７７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）。

【０１５４】 ４−メシチル安息香酸（１．５ｇ）およびトリエチレンテトラアミン（０．４
３ｇ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（６０ｍＬ）溶液に、ＨＯＢｔ（０．９６ｇ）およびＤＩＣ
（０．７９ｇ）を添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌した。得られた沈殿
物を濾過し、そして乾燥して、白色固形物（１．４５ｇ）を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）５９１．３（Ｍ⁺）。

【０１５５】 この白色固形物（０．４５ｇ）のエーテル（２０ｍＬ）およびＴＨＦ（８０ｍ
Ｌ）溶液に、室温で、ＬＡＨ（０．３３ｇ）をゆっくりと添加した。この混合物
を２時間還流し、次いで、室温で一晩攪拌した。この混合物に、水を滴下して、
ＬＡＨをクエンチした。得られた沈殿物を濾過により除去し、その溶媒を減圧下
で除去して、淡黄色のオイルを得た。この反応混合物をＣ４カラムのＰｒｅｐ−
ＨＰＬＣ（溶離液：０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ）に投入して、白色固形
物（１４０ｍｇ）として、そのＴＦＡ塩を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）５６４．６（Ｍ⁺）。

【０１５６】 このＴＦＡ塩（５０ｍｇ）およびジイソプロピルエチルアミン（３８ｍｇ）の
ＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液に、Ｇｌｙ−ＤＴＰＡ−ＯｔＢｕ（１９３ｍｇ）のＣＨ ₂ Ｃｌ₂（３０ｍＬ）溶液、ＨＯＢｔ（３７．５ｍｇ）およびＤＩＣ（３１ｍｇ）
を添加した。この混合物を、室温で一晩攪拌した。その溶媒を減圧下で除去して
、褐色のオイルを得た。この反応混合物を、Ｃ４カラムのＰｒｅｐ−ＨＰＬＣ（
溶離液：０．１％ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ／ＣＨ₃ＣＮ）に投入して、淡黄色固形物として
、粗生成物を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）１８２４．２（Ｍ²⁺）， １２１６．３（Ｍ³⁺）， ９
１２．５（Ｍ⁴⁺）。

【０１５７】 この淡黄色固形物（０．５８ｇ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）およびアニソール（
５ｍＬ）溶液に、１０ｍＬの１２Ｎ ＨＣｌを滴下した。この混合物を、室温で
３時間攪拌した。この混合物に、４０ｍＬの水を添加し、得られた混合物をエー
テルで３回洗浄した。この水溶液を凍結乾燥して、粗生成物を得、これを、Ｃ１
８カラム分取用ＨＰＬＣ（溶離液：１００ｍＭ ＡｃＯＮＨ₄／ＣＨ₃ＣＮ）に投
入して、白色固形物（１１ｍｇ）を得た。 ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）１２６３．２（Ｍ²⁺）， ８４２．４（Ｍ³⁺）， ６３
２．２（Ｍ⁴⁺）。

【０１５８】 この物質を、標準的な手法に従って、そのガドリニウム錯体に転化した［例え
ば、Ｌａｕｆｆｅｒ Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２０７：ｐｐ．５２９
〜３８（１９９８）を参照］。

【０１５９】 （実施例７：２個の同じＴＢＭを含有するＨＳＡ結合多量体の一般的な合成
）

【０１６０】

【化２９】 ４個のｔ−ブチルエステル保護ＤＴＰＡを含有するジアミンを、ジメチルホル
ムアミド（０．７５ｍＬ）に溶解した。ＲＣＯ₂Ｈ（３当量）（これは、ＴＢＭ
を含む種々のカルボン酸を表す）、ＤＩＣ（０．０５２ｍＬ、３．３当量）およ
びＨＯＢｔ（０．０５１ｇ、３．３当量）を添加した。ＤＩＥＡ（０．１０５ｍ
Ｌ、６当量）を滴下する前に、この反応混合物を０℃まで冷却した。この反応混
合物を、室温で、全体で８．５時間攪拌した。この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希
釈し、そして０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ₃およびブラインで洗浄した。
その有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、その残留溶媒を減圧下で除去して、ｔ−ブチ
ルエステル保護中間体を得た。この生成物をＤＣＭにとり、０℃でＨＣｌを添加
し、そして３時間攪拌した。この溶媒をエバポレートして、白色固形物を得、こ
れをＧｄＣｌ₃（４当量）およびＮａＯＨ（１２当量）と反応させて、最終生成
物を得た。

【０１６１】 これらのＴＢＭの構造および質量スペクトルデータと共に、この方法に従って
合成した２個の同じＴＢＭを有する化合物のリストは、表３に列挙している。

【０１６２】 （表３． ２個の同じＴＢＭを有する多座造影剤）

【０１６３】

【表３】 （実施例８：２個の異なるＴＢＭを含有するＨＳＡ結合多量体の一般的な合
成）

【０１６４】

【化３０】 ４個のｔ−ブチルエステル保護ＤＴＰＡを含有するＣＢｚ保護モノアミンを、
ジメチルホルムアミド（０．７５ｍＬ）に溶解した。Ｒ¹ＣＯ₂Ｈ（１．５当量）
（これは、ＴＢＭ１を含む種々のカルボン酸を表す）、ＤＩＣ（０．０５２ｍＬ
、１．５当量）およびＨＯＢｔ（０．０５１ｇ、１．５当量）を添加した。ＤＩ
ＥＡ（０．１０５ｍＬ、６当量）を滴下する前に、この反応混合物を０℃まで冷
却した。この反応混合物を、室温で、全体で８．５時間攪拌した。

【０１６５】 この反応混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨ
ＣＯ₃およびブラインで洗浄した。その有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、その残留
溶媒を減圧下で除去した。

【０１６６】 この化合物をＥｔＯＡｃに溶解し、そして水素化した（５％ Ｐｄ−Ｃ）。こ
の触媒を濾過することに続いて、その生成物を第二のカルボン酸（Ｒ²ＣＯ₂Ｈ、
１．５当量）（これは、ＴＢＭ２を含む種々のカルボン酸を表す）、ＤＩＣ（０
．０５２ｍＬ、１．５当量）およびＨＯＢｔ（０．０５１ｇ、１．５当量）と反
応させた。この反応混合物を、室温で、全体で８．５時間攪拌した。この反応混
合物をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、そして０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ₃および
ブラインで洗浄した。その有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、その残留溶媒を減圧下
で除去した。その生成物をＤＣＭに再懸濁し、０℃で、ＨＣｌを添加し、この反
応系を３時間攪拌した。その溶媒をエバポレートして、白色固形物を得、これを
、ＧｄＣｌ₃（４当量）およびＮａＯＨ（１２当量）と反応させて、最終生成物
を得た。

【０１６７】 ＴＢＭ１およびＴＢＭ２の構造と共に、この方法に従って合成した化合物のリ
ストは、表４に列挙している。この一般的な合成スキームの「Ｒ¹」は、ＴＢＭ
１に対応しており、この一般的な合成スキームの「Ｒ²」は、ＴＢＭ２に対応し
ていることに注目せよ。

【０１６８】 （表４． ２個の異なるＴＢＭを有する多座造影剤）

【０１６９】

【表４】 （実施例９：Ｍ８−０１の合成）

【０１７０】

【化３１】 １，２−ジ（Ｂｏｃ−アミノ）−３−ヒドロキシプロパン（１．０当量）およ
びジフェニルシクロヘキシルホスホロアミダイト（１．１当量）をテトラヒドロ
フランに溶解し（１．５ｍＬ／ｍｍｏｌのホスホロアミダイト）、そしてモレキ
ュラーシーブと共に３０分間攪拌した。この混合物に、室温で、テトラゾール（
１．２当量）を添加した。この混合物を４５分間攪拌し、³¹Ｐ ＮＭＲによって
、この反応の完結が示された。この混合物に、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキ
シド（１．２当量）を添加した。この反応混合物を、³¹Ｐ ＮＭＲによってこの
反応の完結が示されるまで、約１時間攪拌した。得られた沈殿物およびモレキュ
ラーシーブを濾過により除去し、次いで、その濾液に、塩化メチレンを添加した
。この溶液を、チオ硫酸ナトリウム溶液、重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化
ナトリウムで連続的に洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして
減圧下で濃縮した。得られた淡黄色のオイルに、メタノール中の２Ｍアンモニア
を添加した。この混合物を一晩攪拌し、次いで、その溶媒を減圧下にて除去した
。この反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノ
ール溶離液）により精製して、ホスホジエステルを得た。

【０１７１】 このホスホジエステルを、トリフルオロ酢酸および塩化メチレン中で攪拌する
ことにより脱保護し、その後、この混合物を凍結乾燥して、そのジアミン−ジフ
ェニルシクロヘキシル−ホスホジエステルを得た。このジアミンを、塩化メチレ
ン中の各４当量のＧｌｙ−ＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕ、ＥＤＣおよびＨＯＢｔと共に
一晩攪拌して、そこに、ジイソプロピルエチルアミンを添加して、そのｐＨを上
げた。濃縮した反応混合物を、分取用逆相ＨＰＬＣにより精製した。その２個の
ＤＴＰＡ単位のｔｅｒｔ−ブチルエステルを、４：１：１の塩酸：アニソール：
塩化メチレン中で攪拌することにより切断し、引き続いて、通常の様式で、Ｇｄ
Ｃｌ₃を使って、そのＤＴＰＡ−ガドリニウムキレートを形成した［例えば、Ｌ
ａｕｆｆｅｒ Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７：ｐｐ．５２９〜５３
８（１９９８）を参照］。

【０１７２】 （実施例１０：Ｍ８−０２の合成）

【０１７３】

【化３２】 ベンジルオキシメチレン−Ｎ−Ｂｏｃ−アジリジン（２．８２ｇ）（これは、
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ベンジル−セリンから調製した）およびＮ，Ｎ”−ジＢｏｃ−
ジエチレントリアミン（３．９ｇ）を、ｔｅｒｔ−ブタノールを還流しつつ、２
時間攪拌し、その後、溶媒を減圧下にて除去し、その残渣をフラッシュクロマト
グラフィー（メタノールおよび塩化メチレン溶離液）により精製して、４．５４
ｇの物質を得た。Ｂｏｃ水素と芳香族水素との比は、¹Ｈ ＮＭＲスペクトルの
積分により検証した。このトリＢｏｃ保護テトラアミンベンジルエーテル（３．
８ｇ）を、１０％炭素担持パラジウム１．０ｇと共に、酢酸エチル中の７％酢酸
７０ｍＬに溶解した。この反応混合物を、水素雰囲気下にて、４８ｐｓｉで、１
６時間置いた。減圧下にて、この反応混合物から、溶媒をストリッピングし、そ
の残渣をフラッシュクロマトグラフィー（メタノールおよび塩化メチレン溶離液
）により精製して、３．６ｇを得た。得られたアルコールおよびジフェニルシク
ロヘキシルホスホロアミダイトを、上で述べた条件（テトラゾール、ｔｅｒｔ−
ブチルヒドロペルオキシド、メタノール中のアンモニア）を使用して反応させて
、対応するホスホジエステルを得た。

【０１７４】 このホスホジエステル（５０ｍｇ）の３個のＢｏｃ基を、１．０ｍＬのＴＦＡ
および１．０ｍＬのＤＣＭ中で３時間攪拌することにより除去し、その後、この
混合物を凍結乾燥して、このトリアミン５４ｍＬを得た。このトリアミンを１．
０ｍＬの塩化メチレンに溶解し、そして２．０ｍＬの塩化メチレン中に各６当量
のＧｌｙ−ＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕ、ＥＤＣおよびＨＯＢｔを含有する溶液に滴下
し、そこに、ＤＩＥＡを添加して、そのｐＨを９．０に調節した。濃縮した反応
混合物を、分取用ＨＰＬＣ（Ｃ−４カラム、２０ｍＬ／分、２５分間にわたる３
０：７０のアセトニトリル：水〜１００：０の勾配に次いで、１０分間保持する
）により精製した。この化合物の分子量は、質量スペクトルにより検証した。４
：１：１の塩酸：アニソール：塩化メチレン中で５時間攪拌することにより、こ
れらのＤＴＰＡサブユニットのｔｅｒｔ−ブチルエステルを切断して、そのカル
ボン酸を露出させ、その後、その溶液から減圧下で溶媒をストリッピングし、水
に溶解し、そして凍結乾燥した。これらのＤＴＰＡ−ガドリニウムキレートは、
通常の様式で、ＧｄＣｌ₃を使って容易に形成した［例えば、Ｌａｕｆｆｅｒ
Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７：ｐｐ．５２９〜３８（１９９８）を
参照］。

【０１７５】 （実施例１１：Ｍ８−０３の合成）

【０１７６】

【化３３】 ５０ｍＬのアセトニトリル中のブロモ酢酸ベンジル（１１ｍＬ）を、５０ｍＬ
のアセトニトリルおよび１９ｍＬのトリエチルアミン中のＮ，Ｎ”−ジＢｏｃ−
ジエチレントリアミン（１４ｇ）に添加し、そして２時間攪拌し、その後、減圧
下にて、溶媒を除去し、その残渣を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン
／酢酸エチル溶離液）により精製して、１１ｇの物質を得た。この物質の全てを
トリフルオロ酢酸および塩化メチレンの１：１混合物中で攪拌した後、その溶液
から減圧下で溶媒をストリッピングし、水とエーテルとの間で分配し、そして凍
結乾燥することにより、この化合物の２個のＢｏｃ保護基を除去して、９．２ｇ
の物質を得た。Ｇｌｙ−ＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕ、ＤＩＣおよびＨＯＢｔ（各２．
２当量）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中にて、４５分間攪拌し、次いで、
このトリアミン（１．０ｇ）を、そのビス（アンモニウムトリフルオロ酢酸塩）
としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解し、反応容器に添加し、そのｐＨを
、ジイソプロピルエチルアミンの添加により、９．０に調節した。

【０１７７】 １２時間攪拌した後、その溶液を水で希釈し、そして酢酸エチルで抽出し、そ
れを、クエン酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび飽和塩化ナトリウムの水溶液で連
続的に洗浄した。この酢酸エチル溶液を減圧下にて濃縮し、そしてフラッシュク
ロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル溶離液）にかけて、８４５ｍｇの物質
を得、これは、質量スペクトルにより、このテトラマーであることが確認された
。１０ｍＬのヘキサン、９ｍＬのメタノールおよび１ｍＬのトリエチルアミンに
溶解したこの物質８００ｍｇを、水素雰囲気下にて、３時間にわたって、２０％
炭素担持パラジウムで水素化し、その後、この溶液をＣｅｌｉｔｅを通して濾過
し、そして減圧下にて濃縮することにより、そのベンジル基を除去した。このカ
ルボン酸（７５０ｍｇ）を、ＥＤＣおよびＨＯＢｔ（各１．２当量）と共に、塩
化メチレン中で、３０分間攪拌し、そのジアミン−ジフェニルシクロヘキシル−
ホスホジエステル（これは、Ｍ８−０１の合成において、上で記述した）（８０
ｍｇ）を塩化メチレンに溶解し、そしてカルボン酸溶液に添加し、そのｐＨを、
ジイソプロピルエチルアミンの添加により、９．０に調節した。数時間後、この
混合物を濃縮し、そして分取用ＨＰＬＣ（Ｃ−４カラム、２０ｍＬ／分、２５分
間にわたる３０：７０のアセトニトリル：水〜１００：０の勾配に次いで、１０
分間保持する）により精製して、１５０ｍｇの物質を得、その分子量は、質量ス
ペクトルにより、検証した。４：１：１の塩酸：アニソール：塩化メチレン中で
５時間攪拌することにより、これらのＤＴＰＡサブユニットのｔｅｒｔ−ブチル
エステルを切断して、そのカルボン酸を露出させ、その後、その溶液から減圧下
で溶媒をストリッピングし、水に溶解し、そして凍結乾燥した（９０ｍｇを得た
）。これらのＤＴＰＡ−ガドリニウムキレートは、通常の様式で、ＧｄＣｌ₃を
使って容易に形成した［例えば、Ｌａｕｆｆｅｒ Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏ
ｇｙ，２０７：ｐｐ．５２９〜３８（１９９８）を参照］。

【０１７８】 （実施例１２：Ｍ８−０９の合成）

【０１７９】

【化３４】 （１Ｒ−２Ｓ）−（＋）−シス−１−アミノ−２−インダノール（１５ｇ）の
塩化メチレン（９０ｍＬ）懸濁液に、ジイソプロピルエチルアミン（３５ｍＬ）
を添加し、次いで、臭化ベンジル（１７．２ｇ）を添加した。この混合物を一晩
攪拌した。この溶液を水で洗浄し、そして０．１Ｎ ＨＣｌ溶液で２回抽出し、
その合わせた水層のｐＨを８まで上げ、その水層をＣＨ₂Ｃｌ₂で４回抽出した。
合わせた有機層を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過
し、そして濃縮して、１−ベンジルアミノ−２−インダノール（１５．６２ｇ）
を得、その分子量は、質量スペクトル（Ｍ^-について、ｍ／ｅ＝２３９．９５）
により、確認した。１−ベンジルアミノ−２−インダノール（１０．５ｇ）およ
びトリエチルアミン（９．２ｍＬ）の塩化メチレン（２５０ｍＬ）溶液に、塩化
４−ブチルベンゾイル（９．１ｍＬ）を滴下した。この混合物を４時間攪拌し、
次いで、減圧下で濃縮した。

【０１８０】 その残渣を酢酸エチルに溶解し、そして水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し
、濾過し、減圧下で濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／
酢酸エチル溶離液）により精製して、１−パラ−ブチルベンゾイル−１−ベンジ
ルアミノ−２−インダノール（１２．７ｇ）を得た：

【０１８１】

【数９】 １−パラ−ブチルベンゾイル−１−ベンジルアミノ−２−インダノール（１．２
６ｇ）およびＤＴＰＡホスホロアミダイト（２．９９ｇ）をテトラヒドロフラン
（５ｍＬ）に溶解し、そしてモレキュラーシーブと共に３０分間攪拌し、その後
、テトラゾール（２６５ｍｇ）を添加し、この混合物を４５分間攪拌した。

【０１８２】 ³¹Ｐ ＮＭＲにより、この反応の完結が明らかとなり、そしてその混合物に、
ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（０．４３３ｍＬ）を添加し、その反応混
合物を、³¹Ｐ ＮＭＲによってこの反応の完結が明らかとなるまで、１時間攪拌
した。得られた沈殿物およびモレキュラーシーブを濾過により除去し、次いで、
その濾液に、塩化メチレンを添加した。この溶液を、チオ硫酸ナトリウム溶液、
重炭酸ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウムで連続的に洗浄し、そして硫酸
ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。得られた淡黄色のオイ
ルに、メタノール中の２Ｍアンモニアを添加した。この混合物を一晩攪拌し、次
いで、その溶媒を減圧下で除去した。この反応混合物を、フラッシュクロマトグ
ラフィー（酢酸エチル／メタノール溶離液）により精製して、白色固形物として
、そのホスホジエステル付加物を得た：¹³ＰＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ⁸）δ ０．２
８；ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）１１６５．７５（Ｍ⁺）。

【０１８３】 塩化メチレンに溶解し１２Ｎ塩酸で処理することにより、これらのＤＴＰＡサ
ブユニットのｔｅｒｔ−ブチルエステルを切断して、そのカルボン酸を露出させ
た。数時間後、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加することにより、そのｐＨを
１．５に調節し、得られた白色沈殿物を濾過し、そして塩酸溶液で２回洗浄した
（ｐＨ＝１．５）。この沈殿物を４８時間凍結乾燥して、細かい白色粉末として
、この生成物を得た：ＬＣ−ＭＳ：（ｍ／ｅ）８８５．１５（Ｍ⁺）。これらの
ＤＴＰＡ−ガドリニウムキレートは、通常の様式で、ＧｄＣｌ₃を使って容易に
形成した［例えば、Ｌａｕｆｆｅｒ Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７
：ｐｐ．５２９〜３８（１９９８）を参照］。

【０１８４】 （実施例１３：Ｍ８−１０の合成）

【０１８５】

【化３５】 ３−ブチン−１−オール（１０ｇ）を、エーテル（２５０ｍＬ）中にて、３，
４−ジヒドロピラン（１２ｇ）およびトシル酸（ｔｏｓｉｃ ａｃｉｄ）（２０
ｍｇ）と共に、１２時間攪拌し、その後、この溶液を減圧下で濃縮し、その残渣
を酢酸エチルと水との間で分配した。その有機溶液を飽和塩化ナトリウム溶液で
洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濃縮して、そのＤＨＰ保護アルコール
（１８．７ｇ）に濃縮し、それを、さらに特性付けまたは精製することなく、使
用した。このＤＨＰ−アルコール（１８．７ｇ）をエーテル（６５ｍＬ）に溶解
し、そして−７５℃まで冷却し、その後、その温度を維持しつつ、ブチルリチウ
ム（５０．５ｍＬの２．０Ｍ溶液）を滴下し、その後、パラホルムアルデヒド（
３．５ｇ）を添加した。４時間後、この溶液を室温まで暖めて、水（１００ｍＬ
）を添加した。その水層を捨て、その有機層を減圧下にて濃縮して、オイルを得
、これを、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン溶離液）によ
り精製して、５−ＴＨＰ−２−ペンチン−１，５−オール（１３ｇ）を得、その
構造を、¹Ｈ ＮＭＲにより確認した。

【０１８６】 このアルキノール（２．０ｇ）を、通常の方法により、まず、そのメシレート
（８８２ｍｇの塩化メシル、１．６ｍＬのトリエチルアミン、塩化メチレン）に
転化し、次いで、そのヨウ化物（６．２ｇのヨウ化ナトリウム、無水アセトン）
に転化した。このヨードアルキン（１．２ｇ）を、８ｍＬのアセトニトリル中に
て、トリＢｏｃ−シクレン（２００ｍｇ）および炭酸ナトリウム（２００ｍｇ）
と共に、１．５時間攪拌し、その後、この混合物から、減圧下での濃縮により、
溶媒をストリッピングし、そしてフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／
ヘキサン溶離液）により精製し、その付加物（２４０ｍｇ）の同定は、¹Ｈ Ｎ
ＭＲおよびＬＣ−ＭＳにより検証した。この付加物（２４０ｍｇ）を、４：２：
１の酢酸：テトラヒドロフラン：水（１２ｍＬ）中、４０℃で６時間攪拌するこ
とにより、連続的にＴＨＰで脱保護し、その後、その反応系を、水および酢酸エ
チルで希釈し、そして有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および塩化ナトリウ
ムで連続的に抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そのアルコール（２５０ｍｇ）
まで濃縮した。上記Ｍ８−０１の合成で記述した標準的なホスホロアミダイト化
学反応（テトラゾール、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、アンモニア／メ
タノール）により、このアルコールのホスホジエステルおよび１−パラ−ブチル
ベンゾイル−１−ベンジルアミノ−２−インダノールを合成した。

【０１８７】 このサイクレン上の３個のＢｏｃ保護基を、酸（塩化メチレン中のトリフルオ
ロ酢酸）で処理することにより除去し、得られた３種のアミンを、上記の標準的
な方法（ＨＡＴＵ／ＨＯＡｔ、ジイソプロピルエチルアミン、塩化メチレン）を
使用して、Ｇｌｙ−ＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕで、それらのアミドに転化した。４：
１：１の塩酸：アニソール：塩化メチレン中で５時間攪拌することにより、これ
らのＤＴＰＡサブユニットのｔｅｒｔ−ブチルエステルを切断して、そのカルボ
ン酸を露出させ、その後、その溶液から減圧下で溶媒をストリッピングし、水に
溶解し、そして凍結乾燥した。これらのＤＴＰＡ−ガドリニウムキレートは、通
常の様式で、ＧｄＣｌ₃を使って容易に形成した［例えば、Ｌａｕｆｆｅｒ Ｒ
．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７：ｐｐ．５２９〜３８（１９９８）を参
照］。

【０１８８】 （実施例１４：Ｍ８−０６の合成）

【０１８９】

【化３６】 エチレンジアミンを、Ｎ−Ｂｏｃ−グリシンメチルエステルおよびＮ−Ｂｏｃ
−セリンメチルエステルと連続的に反応させて、そのジアミンを形成した。その
遊離アルコールおよび１−パラ−ブチルベンゾイル−１−ベンジルアミノ−２−
インダノールを、上述の方法（テトラゾール、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキ
シド、アンモニア／メタノール）により、そのホスホジエステルに転化した。プ
ロパン酸ベンジル−（３−アミノ−２−アミノメチル−２−メチル）および２当
量のＧｌｙ−ＤＴＰＡ−Ｏ−ｔＢｕを、上記条件（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ、ジイソプ
ロピルエチルアミン、塩化メチレン）を使用して反応させて、対応するジアミド
を形成した。このジアミド２当量を、そのエチレンジアミン誘導体と反応させて
、テトラマーを形成した。４：１：１の塩酸：アニソール：塩化メチレン中で５
時間撹拌することによって、これらのＤＴＰＡサブユニットのｔｅｒｔ−ブチル
エステルを開裂して、そのカルボン酸を暴露し、その後、その溶液から真空下で
溶媒をストリッピングし、水に溶解し、そして凍結乾燥した。これらのＤＴＰＡ
−ガドリニウムキレートを、通常の様式で、ＧｄＣｌ₃を使って容易に形成した
［例えば、Ｌａｕｆｆｅｒ，Ｒ．Ｂ．ら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，２０７：ｐｐ．
５２９〜３８（１９９８）を参照］。

【０１９０】 （実施例１５：Ｍ８−０４の合成）

【０１９１】

【化３７】 エチレンジアミンおよび２当量のＮ−Ｂｏｃ−セリンメチルエステルを反応さ
せて、そのジアミドを形成した。このジアミドを、さらに反応させて、上で描写
したジホスフェート誘導体を形成した。これらのＴＢＭを、図示した合成スキー
ムに従って、そして上記実施例１４で述べた方法を使用して、結合させ脱保護し
た。

【０１９２】 （実施例１６：Ｍ８−０５の合成）

【０１９３】

【化３８】 この合成での出発物質として使用されるジアミドのジホスフェート誘導体は、
実施例１５で示したＭ８−０４の合成での中間体と同じである。これらのＴＢＭ
を、図示した合成スキームに従って、そして上記実施例１４で述べた方法を使用
して、結合させ脱保護した。

【０１９４】 （実施例１６−ウサギの頸静脈モデルにより測定したＭ８−１１の結合） 図１５は、実施例１で示したアッセイを使用して実験で得られた画像のカラー
写真である。この実験は、注射前、対照非標的Ｇｄ−ＤＴＰＡ化合物の注射、実
施例３で示したＭ８−１１の注射、Ｍ８−１１の用量の３回注射、および配列Ｌ
ＰＣＤＹＹＧＴＣＬＤ（一文字アミノ酸形式）の過剰ペプチド（これは、標的に
対してこの造影剤のＴＢＭと競争する）の注射での画像を示す。このＴＢＭがな
い造影剤は結合しないので、そしてその結合は、過剰なペプチドの存在下にて、
逆になるので、血餅は、Ｍ８−１１により、特異的に画像化される。

【０１９５】

【化３９】 （実施例１６：近赤外光学画像化剤）

【０１９６】

【化４０】 近赤外蛍光画像化剤Ｍ８−２４は、光学画像化に適当なＩＥＭ（「Ｒ」）を含
有する。この試薬は、（ＷＯ２０００／１６８１０で開示されているように）、
この蛍光染料の対応するカルボン酸誘導体から調製される。このカルボン酸誘導
体は、実施例１３で示した合成工程の条件に従って、そのジアミドのジホスフェ
ート誘導体に結合される。実施例１３では、この類似工程は、このジアミンのジ
ホスフェート誘導体にＧｌｙ−ＤＴＰＡ ＴＢＭを結合してＭ８−０４を形成す
ることである。このアルブミン標的赤外造影剤は、例えば、眼科的な血管造影法
、皮膚の癌の診断で使用される。上で示した光学造影剤は、ＭＲＩ血液プール剤
について挙げた用途のいずれかに使用され得る。さらに、当業者は、このような
光学画像化剤のＩＥＭが、染料の異なるカルボン酸誘導体を置換することにより
、変えられ得ることを理解する。この試薬は、従って、特定の実験規準（例えば
、特定の励起波長）に適合するように仕立てられ得る。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年７月２９日（２００２．７．２９）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【化１】 ここで、各ｍは、独立して、１および８を含めた１〜８の整数であり； 各Ａは、独立して、Ｏ、ＣＨ_２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、ＮＨ、ＮＲ、およびＣＨ
Ｒからなる群から選択され； Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_１０直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_１０直鎖または分枝
鎖アルケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は
、必要に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換され；そして ｎは、２および１０を含めた２〜１０の整数である、 造影剤。

【化２】 ここで、ｍは、１および１０を含めた１〜１０の整数であり； ｎは、２および１０を含めた２〜１０の整数であり； ｏは、０または１であり； ｐは、０または１であり； 各Ａは、独立して、Ｏ、ＣＨ_２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、ＮＨ、ＮＲおよびＣＨＲ
からなる群から選択され；そして 各Ｂは、独立して、ＣＨおよびＮからなる群から選択され；そして Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_１０直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_１０直鎖または分枝
鎖アルケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は
、必要に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換される、 造影剤。

【化３】 ここで、ｍは、１および１０を含めた１〜１０の整数であり； ｎは、２および１０を含めた２〜１０の整数であり； ｏは、０または１であり； ｐは、０または１であり； 各Ａは、独立して、Ｏ、ＣＨ_２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、ＮＨ、ＮＲ、およびＣＨ
Ｒからなる群から選択され；そして Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_１０直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_１０直鎖または分枝
鎖アルケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は
、必要に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換される、 造影剤。

【化４】 ｍおよびｎは、独立して、整数であり、ここで、 ｍは、０および３を含めた０〜３の整数であり、 ｎは、０および２を含めた０〜２の整数であり、 各Ａは、独立して、ＮＨ、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ_２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、Ｃ＝Ｎ
Ｒ、およびＣＨＲからなる群から選択され、ここで： Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_１０直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_１０直鎖または分枝
鎖アルケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は
、必要に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換される、 造影剤。

【化５】 ここで、ＴＢＭがペプチドである、造影剤。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 マックマリー， トーマス ジェイ． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01890， ウィンチェスター， ボナド ロード ４ (72)発明者 デュマ， ステファン アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02139， ケンブリッジ， ハーバード ストリート ナンバー102 321 (72)発明者 コロヅィー， アンドリュー アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01890， ウィンチェスター， エス． ボーダー ロード 390 (72)発明者 アメディオ， ジョン アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02038， フランクリン， カールス ド ライブ 30 (72)発明者 キャラバン， ピーター アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02141， ケンブリッジ， コロンビア ストリート 357， アパートメント １ (72)発明者 シャング， シャオダ アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01810， アンドーバー， インウッド レーン ４ (72)発明者 ナイアー， シュリクマー アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02421， レキシントン， キャンドルウ ィック クローズ １ Ｆターム(参考） 4C085 HH07 JJ01 KA09 KA26 LL01

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 多座標的ＭＲＩ造影剤であって、該造影剤は、以下： 足場； 該足場にその異なる原子において共有結合している、少なくとも２個のＴＢＭ
   ； 少なくとも２個のＩＥＭであって、ここで、該ＩＥＭの各々は、該足場に共有
   結合しているか、または介在するリンカーに共有結合しているかの、いずれかで
   あり、該リンカーは、次に、該足場に共有結合している、ＩＥＭ； を含有し、ここで、 各ＩＥＭは、常磁性金属イオンのキレートまたは光学染料を含有し； 各ＴＢＭは、該足場の原子または該リンカーのいずれかに共有結合しており；
   そして 各ＴＢＭは、標的に対する親和性を有する、 造影剤。
2. 【請求項２】 次式を有する、請求項１に記載の多座造影剤であって： （ＴＢＭ）_q−Ｓ−［Ｌ_m−ＩＥＭ_n］_p ここで、 ＴＢＭは、標的結合部分であり、Ｓは、足場であり、Ｌは、リンカーであり、
   ＩＥＭは、画像向上部分であり、そして ｑ、ｍ、ｎおよびｐは、全て、独立した整数であり、ここで、 ｑは、２および６を含めた２〜６の整数であり、 各ｍは、独立して、０または１であり、 各ｎは、独立して、２および４を含めた２〜４の整数であり、 ｐは、２および４を含めた２〜４の整数であり、そして ここで、各ＴＢＭは、直接の化学結合により、Ｓに共有結合しており、 各Ｌは、もし存在するなら、直接の化学結合により、少なくとも１つのＩＥＭ
   に共有結合しており、 各Ｌは、もし存在するなら、直接の化学結合により、Ｓに共有結合しており、
   そして 少なくとも２個のＴＢＭは、該足場の異なる原子に結合している、 造影剤。
3. 【請求項３】 前記足場が、オリゴアルキレンアミンであり、前記ＩＥＭが
   、ジエチレントリアミンまたはテトラアザシクロドデカンから誘導され、そして
   少なくとも１０¹⁵Ｍ^-1のＫ_fを有し、前記ＴＢＭが、ペプチドを含み、そして該
   足場の窒素原子に共有結合しており、そして該ＩＥＭの各々が、直接的にかまた
   は介在するリンカーを介してかのいずれかで、該ＴＢＭとは異なる該足場の窒素
   原子と共有結合している、請求項１または２に記載の多座ＭＲＩ造影剤。
4. 【請求項４】 以下の構造（ＩＸ）を有する、請求項３に記載の多座造影剤
   であって： 【化１】 ここで、各ｍは、独立して、１および８を含めた１〜８の整数であり； 各Ａは、独立して、Ｏ、ＣＨ₂、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、ＮＨ、ＮＲ、およびＣＨ
   Ｒからなる群から選択され；そして Ｒは、Ｃ₁〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アル
   ケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は、必要
   に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換され；そして ｎは、２および１０を含めた２〜１０の整数である、 造影剤。
5. 【請求項５】 以下の構造（ＶＩＩＩ）を有する、請求項２に記載の多座造
   影剤であって： 【化２】 ここで、ｍは、１および１０を含めた１〜１０の整数であり； ｎは、２および１０を含めた２〜１０の整数であり； ｏは、０または１であり； ｐは、０または１であり； 各Ａは、独立して、Ｏ、ＣＨ₂、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、ＮＨ、ＮＲおよびＣＨＲ
   からなる群から選択され；そして 各Ｂは、独立して、ＣＨおよびＮからなる群から選択され；そして Ｒは、Ｃ₁〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アル
   ケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は、必要
   に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換される、 造影剤。
6. 【請求項６】 以下の構造（Ｘ）を有する、請求項５に記載の多座造影剤で
   あって： 【化３】 ここで、ｍは、１および１０を含めた１〜１０の整数であり； ｎは、２および１０を含めた２〜１０の整数であり； ｏは、０または１であり； ｐは、０または１であり； 各Ａは、独立して、Ｏ、ＣＨ₂、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、ＮＨ、ＮＲ、およびＣＨ
   Ｒからなる群から選択され；そして Ｒは、Ｃ₁〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アル
   ケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は、必要
   に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換される、 造影剤。
7. 【請求項７】 請求項２に記載の多座造影剤であって、該造影剤は、以下： ａ）２種またはそれ以上の画像向上部分（ＩＥＭ）； ｂ）２種またはそれ以上の標的結合部分（ＴＢＭ）； ｃ）該ＴＢＭおよびＩＥＭが結合する足場；ならびに ｄ）該ＩＥＭを該足場に結合するための任意のリンカー、 を含有し、ここで、該足場は、式（ＸＩＩ）の構造を含む： 【化４】 ｍおよびｎは、独立して、整数であり、ここで、 ｍは、０および３を含めた０〜３の整数であり、 ｎは、０および２を含めた０〜２の整数であり、 各Ａは、独立して、ＮＨ、ＮＲ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ₂、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＮＨ、Ｃ＝Ｎ
   Ｒ、およびＣＨＲからなる群から選択され、ここで： Ｒは、Ｃ₁〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₀直鎖または分枝鎖アル
   ケニルまたはアルキニルであり、そして、ここで、４個までの炭素原子は、必要
   に応じて、ハロゲン、Ｏ、ＮまたはＳで置換される、 造影剤。
8. 【請求項８】 Ａが、Ｃ＝ＯまたはＯである、請求項４、５、６または７に
   記載の造影剤。
9. 【請求項９】 前記ＴＢＭがペプチドを含み、該ペプチドが、血栓、フィブ
   リン、またはその可溶性フラグメントに対して親和性を有する、請求項４、５、
   ６、または７に記載の造影剤。
10. 【請求項１０】 前記ＩＥＭが、ジエチレントリアミンおよびテトラアザシ
    クロドデカンの誘導体の、常磁性金属イオンキレートからなる群から選択され、
    各キレートが、少なくとも１０¹⁵Ｍ^-1のＫ_fを有する、請求項４、５、６、また
    は７に記載の多座ＭＲＩ造影剤。
11. 【請求項１１】 前記ＩＥＭが、ジエチレントリアミン五酢酸と常磁性金属
    イオンとのキレートである、請求項１０に記載の造影剤。
12. 【請求項１２】 式（ＸＩＩＩ）の構造を有する、多座造影剤であって： 【化５】 ここで、ＴＢＭがペプチドである、造影剤。
13. 【請求項１３】 標的の診断医療画像化の方法であって： （ａ）請求項１に記載の造影剤を投与する工程； （ｂ）該造影剤を該標的に結合させる工程；および （ｃ）該標的を、該造影剤の存在下で画像化する工程、 を包含する、方法。
14. 【請求項１４】 各ＩＥＭが、常磁性金属イオンのキレートを含有し、そし
    て前記造影剤の緩和率は、前記標的の存在下で、該標的の非存在下での緩和率よ
    り少なくとも２倍大きい、請求項１に記載の標的の、磁気共鳴画像化の方法。
15. 【請求項１５】 前記緩和率が、前記標的の存在下で、ＩＥＭ１個あたり、
    少なくとも１０ｍＭ^-1ｓ^-1である、請求項１４に記載のＭＲ画像化の方法。
16. 【請求項１６】 前記緩和率が、前記標的の存在下で、ＩＥＭ１個あたり、
    少なくとも１５ｍＭ^-1ｓ^-1である、請求項１４に記載のＭＲ画像化の方法。
17. 【請求項１７】 前記緩和率が、前記標的の存在下で、ＩＥＭ１個あたり、
    少なくとも２０ｍＭ^-1ｓ^-1である、請求項１４に記載のＭＲ画像化の方法。
18. 【請求項１８】 前記緩和率が、前記標的の存在下で、ＩＥＭ１個あたり、
    少なくとも２５ｍＭ^-1ｓ^-1である、請求項１４に記載のＭＲ画像化の方法。
19. 【請求項１９】 前記緩和率が、前記標的の存在下で、ＩＥＭ１個あたり、
    少なくとも３０ｍＭ^-1ｓ^-1である、請求項１４に記載のＭＲ画像化の方法。
20. 【請求項２０】 請求項１３に記載のＭＲ画像化の方法であって、ここで、
    前記標的は、タンパク質、多糖類、細胞、流体、糖タンパク質または血栓であり
    、そして前記投与する工程が、ヒトまたは動物の被験体への注射である、方法。