JP2003259810A

JP2003259810A - 分画大豆蛋白の製造方法

Info

Publication number: JP2003259810A
Application number: JP2002061087A
Authority: JP
Inventors: Nobuo Sagi; 信雄鷺; Tadahisa Shimoda; 忠久下田; Shinpei Morita; 紳平森田; Toshio Kiriyama; 俊夫桐山; Akira Takakura; 晃高蔵; Kiyozou Asada; 起代蔵浅田; Ikunoshin Kato; 郁之進加藤
Original assignee: Society for Techno Innovation of Agriculture Forestry and Fisheries
Current assignee: Society for Techno Innovation of Agriculture Forestry and Fisheries
Priority date: 2002-03-06
Filing date: 2002-03-06
Publication date: 2003-09-16

Abstract

(57)【要約】【課題】１１Ｓ塩基性サブユニットを高純度に含むこ
とのできる分画大豆蛋白の製造方法を提供する。【解決手段】１１Ｓ酸性サブユニットと１１Ｓ塩基性
サブユニットが解離した大豆蛋白溶液を酵素分解（１５
％トリクロル酢酸溶液可溶性蛋白の割合が１５〜３５
％）し、固液分離して沈殿画分を分取する。該酵素分解
は、固定化プロテアーゼを使用し、７０℃〜１００℃で
行うのがよく、固液分離は酵素分解された溶液にアルコ
ールを添加して該アルコール濃度を１５〜５２容量％に
調整して行うのがよい。また、上記サブユニットが解離
した状態は溶液を還元状態で処理するかまたは／及び加
熱処理することにより行うことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は１１Ｓ塩基性サブユ
ニットを高純度に含むことのできる分画大豆蛋白の製造
方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】大豆蛋白には７Ｓ蛋白、１１Ｓ蛋白、Ａ
ＳＰ（ＡｃｉｄＳｅｎｓｉｔｉｖｅＰｒｏｔｅｉｎ）
などが含まれている。このうち、１１Ｓ蛋白はさらに１
１Ｓ酸性サブユニットと１１Ｓ塩基性サブユニットから
構成されており、両サブユニットを分画製造する方法は
以下のような方法が知られている。すなわち特開２００
０−１９１６９４号公報「大豆の１１Ｓグロブリンより
サブユニットを分画・調製する方法及びその製品」に
は、１１Ｓグロブリンを、１５０℃（水蒸気圧のゲージ
圧で約４kｇｆ／ｃｍ²）以上の水蒸気と接触させて、酸
性サブユニット画分と塩基性サブユニット画分を分画す
る方法が開示されている。また特開昭６３−０３６７４
８号公報「大豆グリシニンよりサブユニットを分離して
調整する方法」には、大豆タンパク質の主要成分である
グリシニンを還元剤の存在下で加熱して酸性サブユニッ
ト画分と塩基性サブユニット画分に分離して、各サブユ
ニットをモノマーとして得る大豆グリニシンより酸性サ
ブユニットと塩基性サブユニットを分離調製する方法が
開示されている。

【０００３】これらはいずれも一旦大豆蛋白から１１Ｓ
蛋白を分離した後に、サブユニットを分画するものであ
り、１１Ｓ蛋白を分離する過程を経ずに直接サブユニッ
トを得る方法には次のものがあるにすぎない。すなわち
特開平９−０２３８２１号公報「大豆１１Ｓグロブリン
塩基性サブユニットの分離方法」には、大豆の分散液を
加熱処理することにより、大豆に含まれる蛋白質及び油
脂を水相に溶出させ、溶出させた油滴に蛋白質中の大豆
１１Ｓグロブリン塩基性サブユニットを凝縮させた後、
該塩基性サブユニットが凝縮した油滴を水相から分離す
る大豆１１Ｓグロブリン塩基性サブユニットの分離方法
が開示されている。特開平９−０２５２９６号公報「大
豆１１Ｓグロブリン塩基性サブユニットの分離方法」に
は、大豆の分散液に、油脂を加えて乳化し、水相に分散
させた油滴に、加熱処理により大豆から溶出させた蛋白
質中の１１Ｓグロブリン塩基性サブユニットを凝縮させ
た後、該塩基性サブユニットが凝縮した油滴を水相から
分離する、大豆１１Ｓグロブリン塩基性サブユニットの
分離方法が開示されている。これらは、１１Ｓ塩基性サ
ブユニットの疎水性を利用したもので油脂成分の存在を
必須とする方法である。

【０００４】他方、大豆たん白の酵素分解について古く
から多くの研究が行われて来た。このうち、釘宮らはβ
コングリシニンのみや、グリシニンのみを選択的に酵素
分解する方法を提案した（特開平９−３１３１１０号公
報、同３１３１１１号公報）が、サブユニットのレベル
の分画蛋白を得ることまでは教えない。また一般には低
分子ペプチドはアルコールで沈殿しにくいためか、蛋白
を酵素分解後エタノール分画することも寡聞にして行わ
れていないと思われる。また、蛋白に固定化酵素を作用
させる実用的適用は、一般に油脂の分野に比べて遅れて
おり、固定化プロテアーゼの新たな用途の開発が探求さ
れている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者は、１１Ｓ蛋
白の塩基性サブユニットには必須アミノ酸や分枝アミノ
酸が多く含まれ栄養的価値が高く血中コレステロール低
下作用などの生理活性が期待できることに着目し、かか
る塩基性サブユニットを、７Ｓ蛋白と１１Ｓ蛋白の分画
工程を必要とすることなく、また油脂の使用も必須とす
ることなく、分取することを目的とする。副次的には、
固定化プロテアーゼの分野に新たな用途を提供すること
を目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者等は前記目的を
解決するため鋭意研究を行う中で、７Ｓ蛋白なども共存
する系にあっても、１１Ｓ蛋白は、極性アミノ酸が多く
水に溶け易い酸性サブユニットと、疎水性アミノ酸が多
く水に溶けにくい塩基性サブユニットとに解離する状態
にできること、解離した塩基性サブユニットは酸性サブ
ユニットに比べて酵素による分解を受けにくく、酵素分
解を軽度にとどめれば、固液分離を容易に行うことがで
き、塩基性サブユニットの純度に優れた画分を沈殿画分
として得られることの知見を得て、本発明に到達した。

【０００７】又、酵素分解を軽度にとどめるには、固定
化プロテアーゼを有利に用いることができ、特に耐熱性
の強い酵素を高温で作用させる有用性が発揮できること
を見出した。即ちこの発明は、１１Ｓ酸性サブユニット
と１１Ｓ塩基性サブユニットが解離した大豆蛋白溶液を
酵素分解（１５％トリクロル酢酸溶液可溶性蛋白の割合
が１５〜３５％）し、固液分離して沈殿画分を分取する
ことを特徴とする分画大豆蛋白の製造方法であり、酵素
分解に固定化プロテアーゼを使用する態様、酵素分解が
７０℃〜１００℃で行われる態様、及び、固液分離が、
酵素分解された溶液にアルコールを添加して該アルコー
ル濃度を１５〜５２容量％に調整して行われる態様が好
ましい。

【０００８】

【発明の実施の形態】以下この発明の実施の形態を詳細
に説明する。この発明において、大豆蛋白溶液中１１Ｓ
酸性サブユニットと１１Ｓ塩基性サブユニットに解離さ
せることは、分離した１１Ｓ蛋白について両サブユニッ
トを解離する公知の技術に準じて実施できる。即ち、大
豆蛋白溶液は１１Ｓ蛋白以外に７Ｓ蛋白など他の画分を
含んでいても、溶液を還元条件下で処理するか、または
／及び加熱処理することにより両サブユニットに解離さ
せることができる。従い原料大豆は、育種や遺伝子操作
等で１１Ｓを豊富にした大豆はもちろん、１１Ｓ蛋白以
外に７Ｓ蛋白などを含む最も普通の大豆を用いることが
できる。また、大豆蛋白溶液には、油脂が存在する必要
がないので、丸大豆だけでなく脱脂した大豆を原料とし
て、水抽出して得た豆乳や、それを等電点沈殿させて分
離し中和して蛋白溶液としたものも利用できる。また市
販の分離大豆蛋白を水に溶解させて利用することもでき
る。

【０００９】還元条件下で処理する態様としては、亜硫
酸ナトリウム、アスコルビン酸、メルカプトエタノール
などの還元剤を大豆蛋白溶液に添加する方法や、電解還
元装置などを利用して電気的還元状態に処理する方法、
など公知の方法を利用することができる。加熱処理は、
通常７０℃〜２１０℃で１秒〜６０分、間接加熱、直接
蒸気吹き込み加熱など利用することができるが、好まし
くは１２０℃〜１６０℃で１秒〜６０秒の直接蒸気吹き
込み加熱、最適には、１３５℃〜１５５℃で１秒〜６０
秒の直接蒸気吹き込み加熱がよい。本発明の酵素分解に
用いる大豆蛋白溶液のたん白濃度は３−１０％の範囲が
望ましい。濃度が薄すぎると実用的でないばかりか塩基
性サブユニットが酵素により分解されやすくなって好ま
しくない。また濃度が高過ぎると重合が生じやすいのか
固液分離の際に他の未分解ペプチドの沈殿量も増し、１
１Ｓ塩基性サブユニットを高純度で得がたくなる。

【００１０】酵素分解は、過度に行わないことが重要で
あり、分解が進みすぎると１１Ｓ塩基性サブユニットの
画分の分解も進んで、このサブユニットを含む画分を効
率よく得ることが困難になる。具体的酵素分解の程度は
１５％トリクロル酢酸（ＴＣＡ）溶液に可溶性の蛋白の
割合が１５〜３５％、好ましくは１５〜３０％にとどめ
るのがよい。本発明に用いる酵素は、動物、植物、微生
物由来などの起源は問わず、また、酸性プロテアーゼ、
アルカリ性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、これらの
１種又は２種以上のくみ合わせも可能である。酵素はま
たエキソプロテアーゼよりはエンドプロテアーゼが分画
性能上より適当であるが、エキソプロテアーゼが混在し
た粗酵素や酵素でも使用できる。酵素反応は、溶液を加
熱して酵素を失活させるかまたは固定化酵素と分離する
ことにより停止するが、反応の制御は、固定化プロテア
ーゼを用いると比較的容易に行うことができる。特に、
固定化耐熱性プロテアーゼを用い７０℃〜１００℃で酵
素反応を行なう態様が本発明に好適である。

【００１１】この理由の一つは、ペプチドやアミノ酸を
製造する多くのプロテアーゼの用法では、フリーの(固
定化していない)酵素が基質の重量に対して１％〜５％
添加されるのが一般的である。しかし、そのような酵素
使用量では本発明に対しては酵素反応を非常に短時間に
する必要が有り制御が困難である。むしろ固定化酵素な
ら基質に対して０．０１％といった低い濃度にする事が
出来、あまり分解を受けない状態で１１Ｓ塩基性サブユ
ニットを収量良く得る事が出来ることによる。そして一
般にプロテアーゼの活性は、フリーの状態に比べて固定
化すると活性が多少低下するので、上記のように過度に
ならないように酵素分解するにはむしろ適しており、酵
素反応の程度を制御しやすい利点がある。すなわち使用
する酵素量を非常に少なくし大豆たん白の分解し易い部
分のみを消化し、分解を受け難い１１Ｓの塩基性サブユ
ニットを得ることができる。

【００１２】そして、固定化酵素による分解の場合に
は、菌による腐敗を防ぐため高温で作用させるのがよ
い。高温の使用に適した耐熱性のエンドプロテアーゼと
しては「ＰｆｕＰｒｏｔｅａｓｅＳ」（宝酒造株式
会社）が例示される。この耐熱性プロテアーゼはＢａｃ
ｉｌｌｕｓ属細菌にＰｙｒｏｃｏｃｃｕｓｆｕｒｉ
ｏｓｕｓのプロテアーゼ遺伝子を導入し生産された酵素
であり、至適ｐHが６〜８である。固定化の手段は公知
の方法を用いることが出来るが、繰り返し使用するには
化学的結合が好ましい。何故なら、大豆蛋白を酵素分解
して沈殿画分を固定化酵素と分離しなければならないか
らである。

【００１３】また固定化酵素の担体は公知のものを使用
でき、粒子状、膜状、中空糸状等適切な形状のものを選
択すればよい。担体は例えば「ＴＯＹＯＮＩＴＥ２０
０−Ａ」が例示される。該「トヨナイト（Ｔｏｙｏｎｉ
ｔｅ）」は、カオリン鉱物を塩酸酸性のもとで水熱処理
した後、それを造粒、焼成して得られる酵素固定化用多
孔質セラミックス系担体であり、番手「２００−A」は
粒子の表面をアミノ基で修飾したものである。固定化酵
素を使用する場合は、目的の１１Ｓ塩基性サブユニット
が沈殿するため、固定化酵素を用いて連続酵素分解が進
むにつれて沈殿が増加するので、溶出する７Ｓ画分と１
１Ｓ酸性画分から固定化酵素と沈殿画分を分離し、要す
れば更に篩別などして１１Ｓ塩基性サブユニット画分を
採取する。かかる操作を繰り返す所謂バッチ式の連続作
業が出来る。

【００１４】また酵素が耐熱性であると、固定化されて
いないと大豆蛋白溶液に混在した酵素を失活させること
が困難である。換言すれば、固定化されていることによ
り、耐熱性酵素を分解された大豆蛋白から酵素の混在な
しに容易に分離することが可能である。又、固定化酵素
を用いて連続的にカラムなどで処理する場合に、反応時
間を指標として酵素と分解された大豆蛋白溶液を分離で
きるので分解の程度の制御が容易である。酵素分解する
溶液のｐＨは用いる酵素の作用範囲内で実施するが、中
和による塩の生成などを考慮すると中性範囲での実施が
好ましい。大豆蛋白溶液の酵素処理ののち、酵素を失活
させるかまたは酵素を除いた後に、沈殿画分と上澄を固
液分離し、１１Ｓ塩基性サブユニットに富む沈殿画分を
分取する。

【００１５】ただしこの沈殿画分が蛋白中１１Ｓ塩基性
サブユニットを５０％以上、好ましくは７０％以上含む
ためには、用いる大豆蛋白溶液が予め１１Ｓ蛋白のみを
単離したものであれば、単なる遠心分離の分離手段でよ
いが、大豆蛋白溶液が１１Ｓ蛋白の他の７Ｓ蛋白などを
含む場合の固液分離は、極性有機溶媒を加えて分画する
ことが好ましい。それら有機溶媒はメタノール、プロパ
ノール、アセトン等も使用できるが、食品用としてはエ
タノールが好適である。アルコールの濃度は、大豆蛋白
溶液のアルコール濃度が１５〜５２％、好ましくは１５
〜５０％にすることが適当であり（単位は容量％）、こ
の場合、アルコール濃度が低いと１１Ｓ塩基性サブユニ
ットだけを分離することが困難となり、アルコール濃度
が高いと１１Ｓ塩基性サブユニット以外の大豆蛋白（７
Ｓ蛋白、酸性沈殿蛋白）も沈殿してしまいやはり１１Ｓ
塩基性サブユニットを分離することが困難になる。

【００１６】好適に分画された上澄画分は、７Ｓ蛋白と
酵素消化されたあるいは部分消化された大豆たん白が主
成分であり、該画分も食用に供することができる。分離
手段は上記遠心分離以外に濾過、膜分離など公知の手段
を用いてもよい。この沈殿画分は電気泳動だけでみて一
般に高い純度であることがわかる。上記１１Ｓ塩基性サ
ブユニットの５０％や７０％という純度はＮ末端アミノ
酸分析の価から求めることができる。分子量は電気泳動
やＴＮＢＳ法による平均分子量で求めることができ、通
常の大豆に含まれる既知の５種類の塩基性サブユニット
のアミノ酸配列より得られる理論的分子量、Ｂ２（２
０，４６４）、Ｂ１ａ（２０，３０６）、Ｂ１ｂ（２
０，５９４）、Ｂ４（１９，０３２）、Ｂ３（２０，６
０８）と対比して純度を検定できる。

【００１７】本発明により得られる沈殿画分は、疎水性
アミノ酸が分離大豆蛋白の３１％に比べて有意に増加
し、ロイシン、イソロイシン、ヴァリンなど分岐鎖アミ
ノ酸の量も増加したものである。以上のようにして得ら
れた沈殿画分は必要に応じて乾燥し、粉末状の１１Ｓ塩
基性サブユニットとすることができる。乾燥方法は、公
知の手段を利用することが出来るが、例えば、アルコー
ル沈殿画分のアルコールを蒸散させて得るか、蛋白濃度
を５〜15％に調製して噴霧乾燥などすることができる。

【００１８】

【実施例】以下、実施例により本発明の実施態様を説明
するが、例示は当然単なる説明であって、発想思想の内
包・外延とは直接関係の無いものである。実施例１市販の分離大豆（フジプロテインテクノロジー社販売の
「フジプロ−Ｒ」。以下「ＳＰＩ」という）の水溶液
（固形分濃度５％）に０．１２％（対ＳＰＩ重量）の亜
硫酸ナトリウムを添加し１４０℃で蒸気吹き込みによる
直接加熱を１０秒間行った溶液３００重量部を、前記固
定化「ＰｆｕＰｒｏｔｅａｓｅＳ」２２．８重量部
（ＳＰＩ１００ｇ当たりフリー酵素として９５０ユニッ
ト量）を用いて、回転ドラム型リアクター内で接触させ
ｐＨはアルカリを加えて６．９に維持し、７０℃の条件
で３ｈｒ反応を行った。反応後の蛋白質の１５％ＴＣＡ
溶液に対する溶解率は２４％であった。この反応溶液に
攪拌しながらエタノールを加えて全体のエタノール濃度
を２０％に調整し、５，０００ｒｐｍ、２０分遠心分離
によって上清画分及び沈澱画分に分け、沈澱画分は２０
％エタノールに分散させ再度遠心分離によって、上清画
分と沈殿画分（「２０％ｐｐｔ」。固形物としての収率
は５．３％）に分離した。

【００１９】上記２つの上清区分は、合わせてから更に
エタノールを加えて全体のエタノール濃度を５０％に調
整の後、５，０００ｒｐｍ、２０分遠心分離によって上
清及び沈澱物に分け、沈澱物を５０％エタノールに分散
させ再度遠心分離した（この沈澱画分を「５０％ｐｐ
ｔ」という。固形物としての収率は５．２％）。なお、
固定化「ＰｆｕＰｒｏｔｅａｓｅＳ」の製造は次の
方法によった。即ち、粒径２ｍｍのＴＯＹＯＮＩＴＥ２
００−Ａ（東洋電化工業（株）製）８００ｇに２．５％
（ｖ／ｖ）濃度のグルタルアルデヒド２，０００ｍｌを
加え、室温で１時間反応後、蒸留水で洗浄した。Ｐｆｕ
ＰｒｏｔｅａｓｅＳ溶液（宝酒造（株）製）（５２
６ｍｇ）４４ｍｌと０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．
５）７５６ｍｌを担体に加え、室温で１時間振とうし
た。更に２５％（ｖ／ｖ）濃度のグルタルアルデヒド１
６ｍｌを加え、室温で１時間振とうした後、上清を除い
た。担体に０．９％（ｖ／ｖ）濃度のグルタルアルデヒ
ドを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）１，２０
０ｍｌを加え、室温で３０分間振とうした。次いで０．
５ＭＮａＣｌで洗浄した後、０．１Ｍトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ８．０）を加え、室温で１時間反応ささせ
た。０．２５％（ｗ／ｖ）のホウ素化水素ナトリウム溶
液８００ｍｌを加え、室温で５分反応させた。担体を
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で洗浄し固定化Ｐ
ｆｕＰｒｏｔｅａｓｅＳを得た。

【００２０】実施例１で得られた沈殿の分析結果：上記
２０％ｐｐｔについて、Ｎ末端よりアミノ酸配列をアミ
ノ酸シークエンサーにかけて調べた結果、１段目Ｇｌ
ｙ、２段目Ｉｌｅ，Ｖａｌ、３段目Ｇｌｕ，Ａｓｐ、４
段目Ｇｌｕ、５段目Ａｓｎ，Ｔｈｒと決定された。これ
は１１Ｓ塩基性サブユニットのＢ２，Ｂ１ａ，Ｂ１ｂが
Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ，及びＢ４と
Ｂ３がＧｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−と完
全に一致した。また１段目のＧｌｙの回収量は２９７ピ
コモルで使用した量の７８％であった。そのアミノ酸配
列を検討すると既知のＢＳの一次構造と２０段目まで一
致した。

【００２１】上記２つの沈殿画分（２０％ｐｐｔと５０
％ｐｐｔ）を、ＳＤＳ電気泳動により分析した結果、い
ずれも未分解の１１Ｓ塩基性サブユニット成分（以下
「ＢＳ」という）を主とする画分であり（図１）、２０
％ｐｐｔも５０％ｐｐｔも分子量２０，０００であるこ
とを示した。またゲル濾過ＨＰＬＣによる分析でもほぼ
純粋なＢＳであることが示された。２０％ｐｐｔの平均
分子量をＴＮＢＳ（トリニトロベンゼンスルフォン酸）
試薬との反応による分析方法で調べた結果、２．０３ｘ
１０⁴であり、ｃＤＮＡの配列より得られる各１１Ｓ塩
基性サブユニットＢ２：２０，４６４、Ｂ１ａ：２０，
３０６、Ｂ１ｂ：２０，５９４、Ｂ４：１９，０３２、
Ｂ３：２０，６０８に良く一致した。以上の結果より２
０％エタノール沈殿画分は１１Ｓ塩基性サブユニットが
酵素消化を受けずに得られたと判断した。なお表２に示
した様に、沈殿画分は疎水性アミノ酸が約４０％とＳＰ
Ｉの３１％に比べて有意に増加しており、ロイシン、イ
ソロイシン、ヴァリンなど分岐鎖アミノ酸の量増加、グ
ルタミン酸の減少が観察された。

【００２２】表２１１Ｓ塩基性サブユニットのアミノ酸組成単位：重量％ ─────────────────────────────────── アミノ酸２０％エタノール沈殿画分ＳＰＩ ─────────────────────────────────── Ａｓｘ１１．５９（１２．７１）１２．２０（１１．８８）Ｔｈｒ４．９８（３．８５）３．７４（３．６０）Ｓｅｒ５．８２（６．２８）５．９０（５．１３）Ｇｌｘ１３．４０（１４．１６）２０．０３（２０．２０）Ｇｌｙ４．６０（３．５５）４．４２（４．０８）Ａｌａ５．６２（５．０６）４．５０（４．０４）Ｃｙｓ１．１２（１．０２）１．４２（１．４１）Ｖａｌ５．６５（７．９４）３．３１（４．８３）Ｍｅｔ１．８１（１．１９）１．７９（１．２４）Ｉｌｅ４．８４（４．９８）２．９６（４．６６）Ｌｅｕ１０．０８（９．７７）７．４４（７．７９）Ｔｙｒ４．０５（４．９０）４．００（３．７９）Ｐｈｅ５．０２（５．９０）４．９０（５．６８）Ｌｙｓ５．７５（３．９８）６．１３（６．０８）Ｈｉｓ３．２２（２．０６）３．８７（２．７１）Ａｒｇ７．０８（７．９８）７．６８（７．６９）Ｐｒｏ５．３７（４．６７）５．７０（５．１８） ─────────────────────────────────── カッコ内は理論量％であり、サブユニットＢ２：２０，
４６４、Ｂ１ａ：２０，３０６、Ｂ１ｂ：２０，５９
４、Ｂ４：１９，０３２、Ｂ３：２０，６０８が等量存
在するものとして重量％で計算した。

【００２３】比較例１〜３実施例１と同条件で分離大豆たんぱく質（ＳＰＩ）溶液
の前処理（亜硫酸ナトリウムの添加と加熱）及び酵素分
解を行ない、２０％エタノール濃度で実施するかわり
に、エタノール濃度５５％、６０％または６５％のエタ
ノール濃度にて実施し、再度同濃度のアルコールで洗浄
することにより、沈殿画分を得た。それぞれ比較例１〜
３とする。遠心分離後のそれぞれの沈殿収率は５０．６
％、５６．３％および７０．７％であり、いずれもＳＤ
Ｓ電気泳動による分析で１１Ｓ・ＢＳ以外にも多くのサ
ブユニットが含まれていて、１１Ｓ・ＢＳとしての純度
はかなり低いものであった。

【００２４】実施例２分離大豆たんぱく質（ＳＰＩ）溶液（固形分濃度５％）
を１４０℃で１０分間蒸気加熱した後、「プロチンＡ１
０ＬＦ」（大和化成製）を０．５％添加して５０℃にて
２０分間酵素分解した。比較として酵素を４％添加して
５０℃にて５ｈｒ酵素分解した。この間にｐＨは７．０
から６．３に変化した。反応後の溶液を９５℃、１０分
加熱し酵素を失活させた。反応の途中サンプルをＨＰＬ
Ｃ及びＳＤＳ電気泳動により分析したところ本例の沈殿
画分は実施例１の沈殿画分に比べて多少不純物が多いも
のの、ＢＳに富むものであった。比較は反応初期（５分
後）から１１Ｓ・ＢＳの消失が認められた。

【００２５】

【発明の効果】本発明により、１１Ｓ塩基性サブユニッ
トを主成分とするポリペプチドが得られたものである。
耐熱性エンドプロテアーゼを利用して高温で酵素分解で
きるので、連続カラム処理が無菌的に可能になった。本
発明は、７Ｓ蛋白と１１Ｓ蛋白の分画工程を必要とする
ことなく、また油脂の使用も必須とすることなく、大豆
蛋白溶液から１１Ｓ蛋白の塩基性サブユニットに富んだ
分画蛋白を得ることができた。この分画蛋白は必須アミ
ノ酸や分枝アミノ酸が多く含まれ栄養的価値が高く血中
コレステロール低下作用などの生理活性が期待される。

【図面の簡単な説明】

【図１】は実施例１で用いたＳＰＩ，２０％エタノール
沈殿時及び５０％エタノール沈殿時に分取した沈殿画分
の蛋白の電気泳動図である。

【図２】は比較例１〜３で分取した沈殿画分の蛋白の電
気泳動図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者桐山俊夫茨城県守谷市松前台４丁目２−３守谷ハイツ202号 (72)発明者高蔵晃滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号寳酒造株式会社中央研究所内 (72)発明者浅田起代蔵滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号寳酒造株式会社中央研究所内 (72)発明者加藤郁之進滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号寳酒造株式会社中央研究所内Ｆターム(参考） 4B018 MD20 ME04 MF01 MF12 4B064 AG01 CA21 CA32 CB06 CC06 DA10

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】１１Ｓ酸性サブユニットと１１Ｓ塩基性
サブユニットが解離した大豆蛋白溶液を酵素分解（１５
％トリクロル酢酸溶液可溶性蛋白の割合が１５〜３５
％）し、固液分離して沈殿画分を分取することを特徴と
する分画大豆蛋白の製造方法。
【請求項２】酵素分解に固定化プロテアーゼが使用さ
れる請求項１記載の製造方法。
【請求項３】酵素分解が７０℃〜１００℃で行われる
請求項１または２記載の製造方法。
【請求項４】固液分離が、酵素分解された溶液にアル
コールを添加して溶液のアルコール濃度を１５〜５２容
量％に調整して行われる請求項１記載の製造方法。