JP2003235595A - 光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法 - Google Patents
光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法Info
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- JP2003235595A JP2003235595A JP2002038670A JP2002038670A JP2003235595A JP 2003235595 A JP2003235595 A JP 2003235595A JP 2002038670 A JP2002038670 A JP 2002038670A JP 2002038670 A JP2002038670 A JP 2002038670A JP 2003235595 A JP2003235595 A JP 2003235595A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 光学活性ヒドロキシケトエステルを効率よく
製造する方法の提供。 【解決手段】 式（１） 【化１】 （式中、Ｒは、Ｃ1-6アルキル基を意味する。）で表さ
れる化合物に、ピキア（Pichia）属、クライシア（Kura
ishia）属、オガタエア（Ogataea）属、サッカロマイセ
ス（Saccharomyces）属又はヤマダザイマ（Yamadazym
a）属の各属に属する微生物の菌体及び／又は菌体処理
物を作用させることを特徴とする式（２） 【化２】 （式中、Ｒは、前記と同じ意味を表す。）で表される光
学活性ヒドロキシケトエステルの製造法。
製造する方法の提供。 【解決手段】 式（１） 【化１】 （式中、Ｒは、Ｃ1-6アルキル基を意味する。）で表さ
れる化合物に、ピキア（Pichia）属、クライシア（Kura
ishia）属、オガタエア（Ogataea）属、サッカロマイセ
ス（Saccharomyces）属又はヤマダザイマ（Yamadazym
a）属の各属に属する微生物の菌体及び／又は菌体処理
物を作用させることを特徴とする式（２） 【化２】 （式中、Ｒは、前記と同じ意味を表す。）で表される光
学活性ヒドロキシケトエステルの製造法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は光学活性ヒドロキシケト
エステルの製造法に関する。さらに詳しくは、コレステ
ロール低下剤であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の合
成中間体として有用な、（３Ｒ，６Ｅ）−７−［２−シ
クロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）キノリン
−３−イル］−３−ヒドロキシ−５−オキシ−６−ヘプ
テン酸エステルを容易に、効率よく製造する方法に関す
る。
エステルの製造法に関する。さらに詳しくは、コレステ
ロール低下剤であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の合
成中間体として有用な、（３Ｒ，６Ｅ）−７−［２−シ
クロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）キノリン
−３−イル］−３−ヒドロキシ−５−オキシ−６−ヘプ
テン酸エステルを容易に、効率よく製造する方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】特開平
１−２７９８６６号公報及び特開平８−１２７５８５号
公報には、光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法が
記載されている。しかし、これらの製造法は、多工程を
必要とすること等の理由から、より効率的な製造法が望
まれていた。
１−２７９８６６号公報及び特開平８−１２７５８５号
公報には、光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法が
記載されている。しかし、これらの製造法は、多工程を
必要とすること等の理由から、より効率的な製造法が望
まれていた。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、効率的な
光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法を見出すため
に鋭意検討した結果、特定の微生物を用いることによ
り、短工程で目的の光学活性ヒドロキシケトエステルが
製造されることを見出し、本発明を完成した。即ち、本
発明は、 式（１）
光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法を見出すため
に鋭意検討した結果、特定の微生物を用いることによ
り、短工程で目的の光学活性ヒドロキシケトエステルが
製造されることを見出し、本発明を完成した。即ち、本
発明は、 式（１）
【０００４】
【化３】
【０００５】（式中、Ｒは、Ｃ1-6アルキル基を意味す
る。）で表される化合物に、ピキア（Pichia）属、クラ
イシア（Kuraishia）属、オガタエア（Ogataea）属、サ
ッカロマイセス（Saccharomyces）属又はヤマダザイマ
（Yamadazyma）属の各属に属する微生物の菌体及び／又
は菌体処理物を作用させることを特徴とする式（２）
る。）で表される化合物に、ピキア（Pichia）属、クラ
イシア（Kuraishia）属、オガタエア（Ogataea）属、サ
ッカロマイセス（Saccharomyces）属又はヤマダザイマ
（Yamadazyma）属の各属に属する微生物の菌体及び／又
は菌体処理物を作用させることを特徴とする式（２）
【０００６】
【化４】
【０００７】（式中、Ｒは、前記と同じ意味を表す。）
で表される光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法に
関するものである。
で表される光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法に
関するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】まず、置換基における語句につい
て説明する。
て説明する。
【０００９】尚、本明細書中「ｎ」はノルマルを、
「ｉ」はイソを、「ｓ」はセカンダリーを、「ｔ」はタ
ーシャリーを、「ｃ」はシクロを意味する。
「ｉ」はイソを、「ｓ」はセカンダリーを、「ｔ」はタ
ーシャリーを、「ｃ」はシクロを意味する。
【００１０】Ｃ1-6アルキル基としては、直鎖、分枝及
び環状のアルキル基が含まれ、メチル基、エチル基、ｎ
−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｃ−プロピル基、ｎ−
ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル
基、ｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｃ−ペンチル基、
ｎ−ヘキシル基及びｃ−ヘキシル基等が挙げられる。
び環状のアルキル基が含まれ、メチル基、エチル基、ｎ
−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｃ−プロピル基、ｎ−
ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル
基、ｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｃ−ペンチル基、
ｎ−ヘキシル基及びｃ−ヘキシル基等が挙げられる。
【００１１】式（１）で表される化合物は、特開平６−
３２９６７９号公報記載の方法により製造することがで
きる。
３２９６７９号公報記載の方法により製造することがで
きる。
【００１２】本発明に用いられる微生物としては、ピキ
ア（Pichia）属、クライシア（Kuraishia）属、オガタ
エア（Ogataea）属、サッカロマイセス（Saccharomyce
s）属及びヤマダザイマ（Yamadazyma）属の各属に属す
る微生物が挙げられる。
ア（Pichia）属、クライシア（Kuraishia）属、オガタ
エア（Ogataea）属、サッカロマイセス（Saccharomyce
s）属及びヤマダザイマ（Yamadazyma）属の各属に属す
る微生物が挙げられる。
【００１３】ピキア（Pichia）属に属する微生物の具体
例としては、ピキア アノマラ（Pichia anomala）IFO
0963株、ATCC 20144株、IFO 0120株、IFO 0146株、IFO
0145株、IFO 0118株、IFO 0149株、IFO 0569株、ピキア
ペテルソニ（Pichia petersonii）IFO 1372株、ピキ
ア シルビコラ（Pichia silvicola）IFO 0807株、ピキ
ア カナデンシス（Pichia canadensis）IFO 0976株、
ピキア アングスタ（Pichia angusta）ATCC 26012株、
ピキア ナガニシイ（Pichia naganishii）IFO1670株、
ピキア ピペリ（Pichia pijperi）IFO 1290株及びピキ
ア トレハロフィラ（Pichia trehalophila）IFO 1683
株等が挙げられ、好ましくは、ピキアアノマラ（Pichia
anomala）IFO 0569株、ピキア アングスタ（Pichia a
ngusta）ATCC 26012株及びピキア ナガニシイ（Pichia
naganishii）IFO 1670株等が挙げられる。
例としては、ピキア アノマラ（Pichia anomala）IFO
0963株、ATCC 20144株、IFO 0120株、IFO 0146株、IFO
0145株、IFO 0118株、IFO 0149株、IFO 0569株、ピキア
ペテルソニ（Pichia petersonii）IFO 1372株、ピキ
ア シルビコラ（Pichia silvicola）IFO 0807株、ピキ
ア カナデンシス（Pichia canadensis）IFO 0976株、
ピキア アングスタ（Pichia angusta）ATCC 26012株、
ピキア ナガニシイ（Pichia naganishii）IFO1670株、
ピキア ピペリ（Pichia pijperi）IFO 1290株及びピキ
ア トレハロフィラ（Pichia trehalophila）IFO 1683
株等が挙げられ、好ましくは、ピキアアノマラ（Pichia
anomala）IFO 0569株、ピキア アングスタ（Pichia a
ngusta）ATCC 26012株及びピキア ナガニシイ（Pichia
naganishii）IFO 1670株等が挙げられる。
【００１４】クライシア（Kuraishia）属に属する微生
物の具体例としては、クライシアカプシュラタ（Kurais
hia capsulata）IFO 0974株及びIFO 0721株等が挙げら
れ、好ましくは、クライシア カプシュラタ（Kuraishi
a capsulata）IFO 0974株等が挙げられる。
物の具体例としては、クライシアカプシュラタ（Kurais
hia capsulata）IFO 0974株及びIFO 0721株等が挙げら
れ、好ましくは、クライシア カプシュラタ（Kuraishi
a capsulata）IFO 0974株等が挙げられる。
【００１５】オガタエア（Ogataea）属に属する微生物
の具体例としては、オガタエア ミヌタ（Ogataea minu
ta）IFO 0975株、IFO 1473株、オガタエア グルコザイ
マ（Ogataea glucozyma）IFO 1472株、オガタエア ヘ
ンリッシ（Ogataea henricii）IFO 1477株、オガタエア
ポリモルファ（Ogataea polymorpha）IFO 1475株及び
オガタエア ウィッケルハミ（Ogataea wickerhamii）I
FO 1706株等が挙げられ、好ましくは、オガタエア ウ
ィッケルハミ（Ogataea wickerhamii）IFO 1706株等が
挙げられる。
の具体例としては、オガタエア ミヌタ（Ogataea minu
ta）IFO 0975株、IFO 1473株、オガタエア グルコザイ
マ（Ogataea glucozyma）IFO 1472株、オガタエア ヘ
ンリッシ（Ogataea henricii）IFO 1477株、オガタエア
ポリモルファ（Ogataea polymorpha）IFO 1475株及び
オガタエア ウィッケルハミ（Ogataea wickerhamii）I
FO 1706株等が挙げられ、好ましくは、オガタエア ウ
ィッケルハミ（Ogataea wickerhamii）IFO 1706株等が
挙げられる。
【００１６】サッカロマイセス（Saccharomyces）属に
属する微生物の具体例としては、サッカロマイセス セ
レビジエ（Saccharomyces serevisiae）JCM 1818株、IF
O 565株、IFO 305株及びTPU 1924株等が挙げられ、好ま
しくは、TPU 1924株等が挙げられる。
属する微生物の具体例としては、サッカロマイセス セ
レビジエ（Saccharomyces serevisiae）JCM 1818株、IF
O 565株、IFO 305株及びTPU 1924株等が挙げられ、好ま
しくは、TPU 1924株等が挙げられる。
【００１７】ヤマダザイマ（Yamadazyma）属に属する微
生物の具体例としては、ヤマダザイマ ファリノサ（Ya
madazyma farinosa）IAM 4682株等が挙げられる。
生物の具体例としては、ヤマダザイマ ファリノサ（Ya
madazyma farinosa）IAM 4682株等が挙げられる。
【００１８】上記の菌株のうちサッカロマイセス セレ
ビジエ（Saccharomyces serevisiae） TPU 1924株以外
の菌株は全て公知の菌株であり、それぞれ、(財)発酵研
究所(IFO)、東京大学分子細胞生物学研究所(IAM)、理化
学研究所 微生物系統保存施設（JCM）及びアメリカン
タイプカルチャーコレクション(ATCC)から容易に入手す
ることができる。
ビジエ（Saccharomyces serevisiae） TPU 1924株以外
の菌株は全て公知の菌株であり、それぞれ、(財)発酵研
究所(IFO)、東京大学分子細胞生物学研究所(IAM)、理化
学研究所 微生物系統保存施設（JCM）及びアメリカン
タイプカルチャーコレクション(ATCC)から容易に入手す
ることができる。
【００１９】以下に、TPU 1924株の菌学的性質を示す。
形態学的性状
増殖法 ： 多極出芽
栄養細胞の形 ： タマゴ型、楕円、球
栄養細胞の大きさ： （４．０〜６．０）×（４．０〜８．０）μｍ
子嚢胞子の形成 ： 有
子嚢胞子の形 ： 球
子嚢の形成様式 ： 栄養細胞が直接子嚢になる
子嚢胞子の数 ： 認められない
ピンクのコロニー − 出芽細砲 ＋
レモン型細胞 − 有柄出芽 − 分裂胞子 −
菌糸状態 − 仮性菌糸体 − 菌子体隔壁 −
分節型分生子 − 射出分生子 − 対称型射出分生子 −
生理・生化学的性状
糖類発酵性試験
D-グルコース ＋ マルトース ＋ ラクトース nd
D-ガラクトース ＋ スクロース ＋ ラフィノース ＋
炭素化合物資化性試験
D-グルコース ＋ マルトース ＋ グリセロール w
D-ガラクトース ＋ α,α-トレハロース − meso-エリスリトール −
L-ソルボース − メチルα-D-グルコシド − D-ソルビトール −
D-グルコサミン − セロビオース − D-マンニトール −
D-リボース − メリビオース − myo-イノシトール −
D-キシロース − ラクトース − 2-ケト-D-グルコン酸 −
L-アラビノース − ラフィノース ＋ D-グルコン酸 −
L-ラムノース − メレチトース − D-グルクロン酸 −
スクロース ＋ DL-乳酸 ＋
窒素化合物資化性試験
硝酸 − エチルアミン − L-リジン −
カタベリン − D-グルコサミン − D-トリプトファン −
生育試験
0.01％シクロヘキシミド − 酸生成 −
37℃ ＋
糖の発酵性
D-グルコース ＋ マルトース ＋ ラクトース −
D-ガラクトース ＋ スクロース ＋ ラフィノース ＋
炭素化合物の資化性
D-グルコース ＋ ラフィノース ＋ リビトール −
D-ガラクトース ＋ 可溶性デンプン − D-マンニトール −
スクロース ＋ D-キシロース − コハク酸ソーダ −
マルトース ＋ L-アラビノース − クエン酸ソーダ −
セルビオース − D-リボース − イノシトール −
トレハロース − L-ラムノース −
ラクトース − エリスリトール −
窒素化合物資化試験
硝酸塩の資化性 −
エチルアミン・塩酸塩の資化性 −
カダベリン・2塩酸塩の資化性 −
ビタミン欠培地での生育 −
37℃での生育 ＋
サイクロヘキシミド100ｐｐｍ含有培地での生育 −
TPU 1924株は多極出芽で増殖し、栄養細胞が直接子嚢に
なり、ブドウ糖を強く醗酵、硝酸塩を資化しないことよ
り、 [Kurzman, C.P. and Fell. J.W.： The Yeasts，a
Taxonomic Study 4th Ed. Elsevier，1055 (1998)]で
はサッカロマイセス属に属する。さらに、エチルアミ
ン、カダベリンを資化しないこと、サイクロヘキシミド
に感受性であることから、サッカロマイセス・セレビシ
エ メイエン エックス ハンゼン (Saccharomyces cerev
isiae Meyen ex．Hansen )と同定した。本菌株は、独立
行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
にFERM P-18689として寄託されている。
なり、ブドウ糖を強く醗酵、硝酸塩を資化しないことよ
り、 [Kurzman, C.P. and Fell. J.W.： The Yeasts，a
Taxonomic Study 4th Ed. Elsevier，1055 (1998)]で
はサッカロマイセス属に属する。さらに、エチルアミ
ン、カダベリンを資化しないこと、サイクロヘキシミド
に感受性であることから、サッカロマイセス・セレビシ
エ メイエン エックス ハンゼン (Saccharomyces cerev
isiae Meyen ex．Hansen )と同定した。本菌株は、独立
行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
にFERM P-18689として寄託されている。
【００２０】本発明に用いられる微生物としては、更
に、上記の微生物の菌株に変異を生じさせて一層生産性
を向上させた菌株等の変異株、また、菌株の細胞中に存
在する、本反応に関与する遺伝子を切り出し、これを適
切なベクタ−例えばプラスミドに挿入し、このベクター
を用いて適当な異種宿主もしくは同種宿主を形質転換す
ることによる菌株等も含まれる。
に、上記の微生物の菌株に変異を生じさせて一層生産性
を向上させた菌株等の変異株、また、菌株の細胞中に存
在する、本反応に関与する遺伝子を切り出し、これを適
切なベクタ−例えばプラスミドに挿入し、このベクター
を用いて適当な異種宿主もしくは同種宿主を形質転換す
ることによる菌株等も含まれる。
【００２１】菌体及び／又は該菌体処理物の様態として
は、特に制限はないが、細胞を含有する培養液、培養上
清液、培養上清液又は、培養液から分離した菌体の処理
物、これから得た酵素、さらに、これらの酵素又は、酵
素含有物を常法によって、ポリアクリルアミド、カラギ
ーナンゲル等の担体に固定化したもの等、が挙げられ
る。
は、特に制限はないが、細胞を含有する培養液、培養上
清液、培養上清液又は、培養液から分離した菌体の処理
物、これから得た酵素、さらに、これらの酵素又は、酵
素含有物を常法によって、ポリアクリルアミド、カラギ
ーナンゲル等の担体に固定化したもの等、が挙げられ
る。
【００２２】前記の微生物を培養して本発明の光学活性
ヒドロキシケトエステルの製造法に用いる事が可能な菌
株を製造しようとする場合、基礎栄養培地として、この
発明の微生物が増殖し得るものであればいずれを使用し
てもよい。この培地は、窒素源として例えば硫安、硝酸
アンモニウム、ＮＺアミン、酵母エキス、ペプトン、肉
エキス、大豆抽出物等の１種類又は複数種類を含有す
る。また、この培地には必要に応じて炭素源として、麦
芽エキス、グルコ−ス、フルクトース、サッカロース、
デンプン、グリセリン、マニトール等を加えることがで
きる。この培地には無機塩類、例えばリン酸二カリウ
ム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム等を加えること
もでき、更に、イノシトール、パントテン酸、ニコチン
酸アミド、及びその他のビタミン類を必要に応じて添加
することができる。
ヒドロキシケトエステルの製造法に用いる事が可能な菌
株を製造しようとする場合、基礎栄養培地として、この
発明の微生物が増殖し得るものであればいずれを使用し
てもよい。この培地は、窒素源として例えば硫安、硝酸
アンモニウム、ＮＺアミン、酵母エキス、ペプトン、肉
エキス、大豆抽出物等の１種類又は複数種類を含有す
る。また、この培地には必要に応じて炭素源として、麦
芽エキス、グルコ−ス、フルクトース、サッカロース、
デンプン、グリセリン、マニトール等を加えることがで
きる。この培地には無機塩類、例えばリン酸二カリウ
ム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム等を加えること
もでき、更に、イノシトール、パントテン酸、ニコチン
酸アミド、及びその他のビタミン類を必要に応じて添加
することができる。
【００２３】培養は固体培地又は液体培地のいずれを用
いてもよく、振盪培養、通気・撹拌培養等により好気的
条件下で培養を行うのが好ましい。培養温度は菌が生育
する温度範囲内であればいずれの温度でもよいが、好ま
しくは４〜５０℃である。ｐＨは３〜１１の範囲であ
る。培養時間は、１〜１００時間である。
いてもよく、振盪培養、通気・撹拌培養等により好気的
条件下で培養を行うのが好ましい。培養温度は菌が生育
する温度範囲内であればいずれの温度でもよいが、好ま
しくは４〜５０℃である。ｐＨは３〜１１の範囲であ
る。培養時間は、１〜１００時間である。
【００２４】培養された微生物は、遠心分離等により分
離した菌体をそのまま、又は、菌体処理物として本発明
の製造法に用いることができる。
離した菌体をそのまま、又は、菌体処理物として本発明
の製造法に用いることができる。
【００２５】次に、式（１）で表される化合物に微生物
の菌体及び／又は菌体処理物を作用させることによる式
（２）で表される光学活性ヒドロキシケトエステルの製
造法について説明する。
の菌体及び／又は菌体処理物を作用させることによる式
（２）で表される光学活性ヒドロキシケトエステルの製
造法について説明する。
【００２６】本発明の製造法は、上記の培養方法により
培養された微生物の菌体及び／又は菌体処理物と、式
（１）で表される化合物と、反応媒体とを含む溶液を攪
拌することにより達成される。
培養された微生物の菌体及び／又は菌体処理物と、式
（１）で表される化合物と、反応媒体とを含む溶液を攪
拌することにより達成される。
【００２７】反応媒体としては、水、又は、アセトン、
アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホル
ムアミド等を含む水性液、例えば、水性緩衝液を用いる
ことができる。緩衝液としては、例えば、トリス−塩酸
緩衝液、リン酸カリウム緩衝液等を使用することができ
る。また、ケトン、エーテル、炭化水素、芳香族オレフ
ィン、ハロゲン化炭化水素、有機酸エステル、アルコー
ル、ニトリル等水と混合しない有機溶媒をも用いること
もできる。例えば、メチルブチルケトン、イソプロピル
エーテル、石油エーテル、ヘキサン、ヘプタン、シクロ
ヘキサン、四塩化炭素、クロロフォルム、二塩化メチレ
ン、トリクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレ
ン、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノール、ヘキサノー
ル、オクタノール等を使用することができる。また、そ
れらの有機溶媒の混合物を使うこともできるし、水を飽
和させた有機溶媒、水性緩衝液との二層系あるいは、ミ
セル、逆ミセル、エマルジョンとして反応させることも
できる。
アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホル
ムアミド等を含む水性液、例えば、水性緩衝液を用いる
ことができる。緩衝液としては、例えば、トリス−塩酸
緩衝液、リン酸カリウム緩衝液等を使用することができ
る。また、ケトン、エーテル、炭化水素、芳香族オレフ
ィン、ハロゲン化炭化水素、有機酸エステル、アルコー
ル、ニトリル等水と混合しない有機溶媒をも用いること
もできる。例えば、メチルブチルケトン、イソプロピル
エーテル、石油エーテル、ヘキサン、ヘプタン、シクロ
ヘキサン、四塩化炭素、クロロフォルム、二塩化メチレ
ン、トリクロロエタン、ベンゼン、トルエン、キシレ
ン、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノール、ヘキサノー
ル、オクタノール等を使用することができる。また、そ
れらの有機溶媒の混合物を使うこともできるし、水を飽
和させた有機溶媒、水性緩衝液との二層系あるいは、ミ
セル、逆ミセル、エマルジョンとして反応させることも
できる。
【００２８】式（１）で表される化合物の反応系中にお
ける濃度としては、反応を阻害しない程度であれば、反
応液中の菌体の濃度等により異なり特に限定されない
が、反応液に対して通常０．０００１〜１０質量％の範
囲、好ましくは０．００１〜５質量％の範囲である。
ける濃度としては、反応を阻害しない程度であれば、反
応液中の菌体の濃度等により異なり特に限定されない
が、反応液に対して通常０．０００１〜１０質量％の範
囲、好ましくは０．００１〜５質量％の範囲である。
【００２９】反応のｐＨとしては、２〜９、好ましくは
４〜８の範囲である。
４〜８の範囲である。
【００３０】反応の温度は、通常は４〜７０℃、好まし
くは１５〜５０℃である。
くは１５〜５０℃である。
【００３１】反応時間は、反応温度により変化するた
め、特定する事はできないが、例えば反応温度が３０℃
の場合は、１〜１００時間の範囲である。
め、特定する事はできないが、例えば反応温度が３０℃
の場合は、１〜１００時間の範囲である。
【００３２】上記反応を促進するために、ＮＡＤＨ、Ｎ
ＡＤＰＨ等の補酵素やグルコース、フルクトース、サッ
カロース、グリセリン、マンニトール等の炭素源を反応
系に加えることもできる。
ＡＤＰＨ等の補酵素やグルコース、フルクトース、サッ
カロース、グリセリン、マンニトール等の炭素源を反応
系に加えることもできる。
【００３３】補酵素としてＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ等を用
いる際の使用量としては、式（１）で表される化合物に
対して、１００万分の１当量〜１０当量、好ましくは１
万分の１当量〜２当量の範囲である。
いる際の使用量としては、式（１）で表される化合物に
対して、１００万分の１当量〜１０当量、好ましくは１
万分の１当量〜２当量の範囲である。
【００３４】反応で得られた光学活性ヒドロキシケトエ
ステルの採取方法としては、反応液を、酢酸エチル等の
有機溶媒で抽出し、カラムクロマトグラフィー、蒸留、
ＨＰＬＣなどの分離精製手段に供することにより光学活
性体を得ることができるが、分離精製手段は単独でまた
は複数の手段を組み合わせて利用できる。
ステルの採取方法としては、反応液を、酢酸エチル等の
有機溶媒で抽出し、カラムクロマトグラフィー、蒸留、
ＨＰＬＣなどの分離精製手段に供することにより光学活
性体を得ることができるが、分離精製手段は単独でまた
は複数の手段を組み合わせて利用できる。
【００３５】又、必要に応じて、遠心分離、フィルター
プレス、限外濾過などの通常の分離操作による微生物な
どの固形分の除去操作を行ってもよい。
プレス、限外濾過などの通常の分離操作による微生物な
どの固形分の除去操作を行ってもよい。
【００３６】
【実施例】以下、実施例により更に詳しく説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。尚、式
（１）で表される化合物（Ｒ＝エチル）は、特開平６−
３２９６７９号公報記載の方法に従って製造した。
本発明はこれらに限定されるものではない。尚、式
（１）で表される化合物（Ｒ＝エチル）は、特開平６−
３２９６７９号公報記載の方法に従って製造した。
【００３７】実施例１
ペプトン０．５％、酵母エキス０．３％、麦芽エキス
０．３％、グルコース１．０％、寒天１．５％の組成か
らなるｐＨが６．０である培地２．０ｍＬに、各種の菌
株を接種し、好気的条件下、３０℃で２４〜４８時間振
とう培養した。得られた培養液を遠心（3000rpm 5min 4
℃）した後、０．５ｍＬの生理食塩水で洗浄し、再度遠
心（3000rpm 5min 4℃）し、菌体を収集した。得られた
菌体に式（１）で表される化合物（Ｒ＝エチル）の１０
ｇ／Ｌのジメチルスルホキシド溶液０．０２ｍＬ、１０
０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）０．１ｍＬ
及び精製水０．８８ｍＬを加え、好気的条件下、３０℃
で２４時間激しく攪拌した。０．５ｍＬの酢酸エチルで
２回抽出し、溶媒を留去し、残査をＨＰＬＣを用いて分
析し、式（２）で表される光学活性ヒドロキシケトエス
テル（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）の収率を決定した。
０．３％、グルコース１．０％、寒天１．５％の組成か
らなるｐＨが６．０である培地２．０ｍＬに、各種の菌
株を接種し、好気的条件下、３０℃で２４〜４８時間振
とう培養した。得られた培養液を遠心（3000rpm 5min 4
℃）した後、０．５ｍＬの生理食塩水で洗浄し、再度遠
心（3000rpm 5min 4℃）し、菌体を収集した。得られた
菌体に式（１）で表される化合物（Ｒ＝エチル）の１０
ｇ／Ｌのジメチルスルホキシド溶液０．０２ｍＬ、１０
０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）０．１ｍＬ
及び精製水０．８８ｍＬを加え、好気的条件下、３０℃
で２４時間激しく攪拌した。０．５ｍＬの酢酸エチルで
２回抽出し、溶媒を留去し、残査をＨＰＬＣを用いて分
析し、式（２）で表される光学活性ヒドロキシケトエス
テル（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）の収率を決定した。
【００３８】ＨＰＬＣの分析条件を以下に示した。
カラム：キラルパック（CHIRALPAK）ＡＤ 内径４．６
ｍｍ 長さ２５ｃｍ（ダイセル化学工業（株））、溶離
液：n-ヘキサン／エタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、流
速：１ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度：室温、検出器：紫外
吸光光度計（測定波長２５４ｎｍ） （式（２）で表される光学活性ヒドロキシケトエステル
（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）のカラム温度３０℃における保
持時間は、２１．３分） 尚、以下に示す収率は、事前に作成した、式（２）で表
される光学活性ヒドロキシケトエステル（Ｒ＝エチル、
３Ｒ体）の検量線との比較から算出し、抽出ロスによる
補正を行った値で示した。（抽出効率が５０％であった
ため、２倍とした。） 結果を表１に示した。
ｍｍ 長さ２５ｃｍ（ダイセル化学工業（株））、溶離
液：n-ヘキサン／エタノール＝９５／５（ｖ／ｖ）、流
速：１ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度：室温、検出器：紫外
吸光光度計（測定波長２５４ｎｍ） （式（２）で表される光学活性ヒドロキシケトエステル
（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）のカラム温度３０℃における保
持時間は、２１．３分） 尚、以下に示す収率は、事前に作成した、式（２）で表
される光学活性ヒドロキシケトエステル（Ｒ＝エチル、
３Ｒ体）の検量線との比較から算出し、抽出ロスによる
補正を行った値で示した。（抽出効率が５０％であった
ため、２倍とした。） 結果を表１に示した。
【００３９】尚、表中の記号は、以下に示した微生物を
意味する。 Ａ：クライシア カプシュラタ（Kuraishia capsulat
a）IFO 0974株 Ｂ：オガタエア ウィッケルハミ（Ogataea wickerhami
i）IFO 1706株 Ｃ：ピキア アノマラ（Pichia anomala）IFO 0569株 Ｄ：ピキア アングスタ（Pichia angusta）ATCC 26012
株 Ｅ：ピキア ナガニシイ（Pichia naganishii）IFO 167
0株 Ｆ：サッカロマイセス セレビジエ（Saccharomyces se
revisiae）TPU 1924株 Ｇ：ヤマダザイマ ファリノサ（Yamadazyma farinos
a）IAM 4682株
意味する。 Ａ：クライシア カプシュラタ（Kuraishia capsulat
a）IFO 0974株 Ｂ：オガタエア ウィッケルハミ（Ogataea wickerhami
i）IFO 1706株 Ｃ：ピキア アノマラ（Pichia anomala）IFO 0569株 Ｄ：ピキア アングスタ（Pichia angusta）ATCC 26012
株 Ｅ：ピキア ナガニシイ（Pichia naganishii）IFO 167
0株 Ｆ：サッカロマイセス セレビジエ（Saccharomyces se
revisiae）TPU 1924株 Ｇ：ヤマダザイマ ファリノサ（Yamadazyma farinos
a）IAM 4682株
【００４０】
【表１】
表１．
──────────────────────────
微生物 （２）の収率（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）
──────────────────────────
Ａ １．０６％
Ｂ ０．９６％
Ｃ １．８６％
Ｄ １．５７％
Ｅ ２．０１％
Ｆ ５．８３％
Ｇ ０．８９％
──────────────────────────
【００４１】実施例２
ペプトン０．５％、酵母エキス０．３％、麦芽エキス
０．３％、グルコース１．０％の組成からなるｐＨが
６．０であるYM培地２．０ｍＬに、サッカロマイセス
セレビジエ（Saccharomyces serevisiae）TPU１９２４
菌株を接種し、好気的条件下、３０℃で２４時間振とう
培養した。得られた培養液を遠心（3000rpm 10min 4
℃）した後、０．５ｍＬの生理食塩水で洗浄し、再度遠
心（3000rpm 10min 4℃）し、菌体を収集した。2リッタ
ーの坂口フラスコで400ｍｌの培地から、遠心により5g
の湿菌体を得て、5mM-2メルカプトエタノールを含む25
ｍｌの0.1Mリン酸緩衝液に懸濁し、超音波処理を15分間
行い、３５００回転で１０分遠心後20ｍｌの無細胞抽出
液を得た。得られた無細胞抽出液50μｌ（1 ｍｌの培
養液に相当）に式（１）で表された化合物（Ｒ＝エチ
ル）の１０ｇ／Ｌのジメチルスルホキシド溶液０．０２
ｍＬ、23mgのグルコース、0.62 mgのNADP、0.59mgのNA
D、 2.4 mg（１７７Unit）のグルコース脱水素酵素、１
００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）０．１ｍ
Ｌ及び精製水０．８８ｍＬを加え、好気的条件下、３０
℃で２４時間激しく攪拌した。０．５ｍＬの酢酸エチル
で２回抽出し、溶媒を留去し（エバポレーターによって
乾固し、200μｌの酢酸エチルに溶解した）、残査をＨ
ＰＬＣを用いて分析し、式（２）で表される光学活性ヒ
ドロキシケトエステル（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）の収率を
決定した。収率20%で、5-ケト体が生成していた。
０．３％、グルコース１．０％の組成からなるｐＨが
６．０であるYM培地２．０ｍＬに、サッカロマイセス
セレビジエ（Saccharomyces serevisiae）TPU１９２４
菌株を接種し、好気的条件下、３０℃で２４時間振とう
培養した。得られた培養液を遠心（3000rpm 10min 4
℃）した後、０．５ｍＬの生理食塩水で洗浄し、再度遠
心（3000rpm 10min 4℃）し、菌体を収集した。2リッタ
ーの坂口フラスコで400ｍｌの培地から、遠心により5g
の湿菌体を得て、5mM-2メルカプトエタノールを含む25
ｍｌの0.1Mリン酸緩衝液に懸濁し、超音波処理を15分間
行い、３５００回転で１０分遠心後20ｍｌの無細胞抽出
液を得た。得られた無細胞抽出液50μｌ（1 ｍｌの培
養液に相当）に式（１）で表された化合物（Ｒ＝エチ
ル）の１０ｇ／Ｌのジメチルスルホキシド溶液０．０２
ｍＬ、23mgのグルコース、0.62 mgのNADP、0.59mgのNA
D、 2.4 mg（１７７Unit）のグルコース脱水素酵素、１
００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）０．１ｍ
Ｌ及び精製水０．８８ｍＬを加え、好気的条件下、３０
℃で２４時間激しく攪拌した。０．５ｍＬの酢酸エチル
で２回抽出し、溶媒を留去し（エバポレーターによって
乾固し、200μｌの酢酸エチルに溶解した）、残査をＨ
ＰＬＣを用いて分析し、式（２）で表される光学活性ヒ
ドロキシケトエステル（Ｒ＝エチル、３Ｒ体）の収率を
決定した。収率20%で、5-ケト体が生成していた。
【００４２】
【発明の効果】本発明によれば、光学活性ヒドロキシケ
トエステルを効率よく製造することができる。
トエステルを効率よく製造することができる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
(Ｃ１２Ｐ 17/12
Ｃ１２Ｒ 1:865）
Claims (8)
- 【請求項１】 式（１） 【化１】 （式中、Ｒは、Ｃ1-6アルキル基を意味する。）で表さ
れる化合物に、ピキア（Pichia）属、クライシア（Kura
ishia）属、オガタエア（Ogataea）属、サッカロマイセ
ス（Saccharomyces）属又はヤマダザイマ（Yamadazym
a）属の各属に属する微生物の菌体及び／又は菌体処理
物を作用させることを特徴とする式（２） 【化２】 （式中、Ｒは、前記と同じ意味を表す。）で表される光
学活性ヒドロキシケトエステルの製造法。 - 【請求項２】 微生物がピキア（Pichia）属に属する請
求項１記載の光学活性ヒドロキシケトエステルの製造
法。 - 【請求項３】 微生物がクライシア（Kuraishia）属に
属する請求項１記載の光学活性ヒドロキシケトエステル
の製造法。 - 【請求項４】 微生物がオガタエア（Ogataea）属に属
する請求項１記載の光学活性ヒドロキシケトエステルの
製造法。 - 【請求項５】 微生物がサッカロマイセス（Saccharomy
ces）属に属する請求項１記載の光学活性ヒドロキシケ
トエステルの製造法。 - 【請求項６】 微生物がヤマダザイマ（Yamadazyma）属
に属する請求項１記載の光学活性ヒドロキシケトエステ
ルの製造法。 - 【請求項７】 微生物がピキア アノマラ（Pichia ano
mala）、ピキア アングスタ（Pichia angusta）、ピキ
ア ナガニシイ（Pichia naganishii）、クライシア
カプシュラタ（Kuraishia capsulata）、オガタエア
ウィッケルハミ（Ogataea wickerhamii）、サッカロマ
イセス セレビジエ（Saccharomyces serevisiae）又は
ヤマダザイマ ファリノサ（Yamadazyma farinosa）で
ある請求項１記載の光学活性ヒドロキシケトエステルの
製造法。 - 【請求項８】 微生物がピキア アノマラ（Pichia ano
mala）IFO 0569株、ピキア アングスタ（Pichia angus
ta）ATCC 26012株、ピキア ナガニシイ（Pichia nagan
ishii）IFO 1670株、クライシア カプシュラタ（Kurai
shia capsulata）IFO 0974株、オガタエア ウィッケル
ハミ（Ogataea wickerhamii）IFO 1706株、サッカロマ
イセス セレビジエ（Saccharomyces serevisiae）TPU
1924株又はヤマダザイマ ファリノサ（Yamadazyma far
inosa）IAM 4682株である請求項７記載の光学活性ヒド
ロキシケトエステルの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002038670A JP3932926B2 (ja) | 2002-02-15 | 2002-02-15 | 光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002038670A JP3932926B2 (ja) | 2002-02-15 | 2002-02-15 | 光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003235595A true JP2003235595A (ja) | 2003-08-26 |
| JP3932926B2 JP3932926B2 (ja) | 2007-06-20 |
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|---|---|---|---|
| JP2002038670A Expired - Fee Related JP3932926B2 (ja) | 2002-02-15 | 2002-02-15 | 光学活性ヒドロキシケトエステルの製造法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3932926B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102373250A (zh) * | 2011-11-08 | 2012-03-14 | 张家港市信谊化工有限公司 | 阿伐他汀钙侧链中间体的制备方法 |
-
2002
- 2002-02-15 JP JP2002038670A patent/JP3932926B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| CN102373250A (zh) * | 2011-11-08 | 2012-03-14 | 张家港市信谊化工有限公司 | 阿伐他汀钙侧链中间体的制备方法 |
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