JP2003212889A - キトサンオリゴ糖の製造方法及びキトサンオリゴ糖アルコール体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 原料に由来する部分アセチル化キトオリゴ糖
などの不純物を効率よく除去することができると共に製
造過程におけるキトサンオリゴ糖の着色を防止すること
ができ、高純度のキトサンオリゴ糖及びキトサンオリゴ
糖アルコール体を効率よく製造できる方法を提供する。 【解決手段】 キトサン加水分解物をイオン交換クロマ
トグラフィーに供して重合度別にキトサンオリゴ糖を分
画した後、各キトサンオリゴ糖画分を活性炭処理するこ
とにより部分アセチル化キトオリゴ糖を選択的に除去す
る。また、キトサン加水分解物を還元処理した後、イオ
ン交換クロマトグラフィーに供して重合度別にキトサン
オリゴ糖アルコール体を分画し、分画した各キトサンオ
リゴ糖アルコール体画分を活性炭処理することにより部
分アセチル化キトオリゴ糖アルコール体を選択的に除去
する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、高純度のキトサン
オリゴ糖及びキトサンオリゴ糖アルコール体を効率よく
製造する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】Ｄ−グルコサミンがβ−１，４結合した
オリゴ糖であるキトサンオリゴ糖は様々な生理活性を有
し、飲食品、医薬品、化粧品等への利用が提案されてい
る。例えば、本出願人は、キトサンオリゴ糖を有効成分
として含有する肝機能障害予防改善剤（特開平１０−２
８７５７２号公報）、抗糖尿病剤（特開平１１−２９４
８４号公報）、抗酸化剤（特開２０００−２４８２７６
号公報）等を開示している。

【０００３】キトサンオリゴ糖は、工業的にはカニやエ
ビ等の甲殻類の殻に含まれるキチンの脱アセチル化物で
あるキトサンを酸又は酵素で加水分解して製造されてい
る。このキトサンの加水分解物は重合度の異なる様々な
キトサンオリゴ糖の混合物であり、これをカラムクロマ
トグラフィーや溶剤分画等の方法によって分画すること
により、キトビオース、キトトリオース、キトテトラオ
ース、キトペンタオース、キトヘキサオース等の重合度
の異なるキトサンオリゴ糖を得ることができる。

【０００４】また、キトサンオリゴ糖は分子内に遊離ア
ミノ基及び還元性アルデヒド基を有し、特に水溶液状態
で着色・褐変しやすいため、キトサンオリゴ糖を水素還
元して、そのアルデヒド基をアルコールに変換すること
により、安定性を高めた還元キトサンオリゴ糖も提案さ
れている（特開平１−７９１９４号公報）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記従
来の方法によって精製されたキトサンオリゴ糖は、通常
９８％程度の純度であり、本発明者らが、キトサンオリ
ゴ糖をＨＰＬＣ法（示差屈折検出）で分析したところ、
原料（キトサン）に由来する不純物が混入していること
が明らかとなった。例えば、キトトリオースは１分子中
に３モルのアミノ基を有しているが、イオン交換クロマ
トグラフィーで分離したキトトリオース画分には、１分
子中に３モルのアミノ基及び１モルのアセチル基を有す
るモノアセチルキトテトラオースや、１分子中に３モル
のアミノ基と２モルのアセチル基を有するジアセチルキ
トペンタオースが不純物として見い出された。

【０００６】このような現象が起こる理由は、脱アセチ
ル化度の測定方法（コロイド滴定法）が厳密な測定方法
ではないため、脱アセチル化度１００％のキトサンであ
っても実際は微量のアセチル基が残存しており、キトサ
ンを加水分解することにより、キトサンオリゴ糖だけで
なく上記のような部分アセチル化キトオリゴ糖も生成し
てしまうためである。この部分アセチル化キトオリゴ糖
はイオン交換クロマトグラフィーやゲル濾過クロマトグ
ラフィーで除去することは困難であり、研究用試薬、医
薬品や化粧品原料等として高純度（純度９９％以上）の
キトサンオリゴ糖が必要とされる場合には特に問題とな
る。

【０００７】また、還元キトサンオリゴ糖（本発明にお
いてはキトサンオリゴ糖アルコール体という。）におい
ては、原料となるキトサンオリゴ糖の純度の問題に加え
て、還元率の問題から更に純度の低いもの（通常、純度
９５％程度）しか製造することができなかった。

【０００８】更に、上述したようにキトサンオリゴ糖は
比較的不安定な物質であるため、キトサンオリゴ糖やキ
トサンオリゴ糖アルコール体を製造する過程で着色しや
すいという問題もあった。

【０００９】一方、Ｄ−グルコサミン塩酸塩を出発物質
としたキトビオース、キトテトラオース及びキトヘキサ
オースの化学合成法も報告されている（丸山ら：島津評
論，51，303-311，1995）が、グリコシル化反応の前後
でアミノ基の保護・脱保護の工程が必要であるなど工業
的生産方法としては適していない。

【００１０】したがって、本発明の目的は、原料に由来
する部分アセチル化キトオリゴ糖などの不純物を効率よ
く除去することができると共に製造過程におけるキトサ
ンオリゴ糖の着色を防止することができ、高純度のキト
サンオリゴ糖及びキトサンオリゴ糖アルコール体を効率
よく製造できる方法を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明のキトサンオリゴ糖の製造方法は、キトサン
を加水分解する工程と、キトサン加水分解物をイオン交
換クロマトグラフィーに供して重合度別にキトサンオリ
ゴ糖を分画する工程と、分画した各キトサンオリゴ糖画
分を活性炭処理して部分アセチル化キトオリゴ糖を除去
する工程とを含むことを特徴とする。

【００１２】本発明のキトサンオリゴ糖の製造方法によ
れば、キトサン加水分解物をイオン交換クロマトグラフ
ィーに供して重合度別にキトサンオリゴ糖を分画した
後、活性炭処理することにより、部分アセチル化キトオ
リゴ糖を効率よく除去することができる。

【００１３】上記キトサンオリゴ糖の製造方法において
は、前記キトサン加水分解物に含まれる塩類が固形分当
たり１０質量％未満になるまで脱塩した後、イオン交換
クロマトグラフィーを行なうことが好ましい。この態様
によれば、各重合度のキトサンオリゴ糖をより良好に分
離することができる。

【００１４】また、キトサン加水分解物をイオン交換ク
ロマトグラフィーに供して重合度別にキトサンオリゴ糖
を分画した後、各キトサンオリゴ糖画分を脱塩すること
が好ましい。この態様によれば、より灰分の少ないキト
サンオリゴ糖を得ることができる。

【００１５】更に、前記脱塩を、ＮａＣｌ阻止率が５
５．０〜９９．５％の逆浸透膜を用いて行なうことが好
ましい。この態様によれば、短時間で効率よく脱塩で
き、脱塩処理工程におけるキトサンオリゴ糖の着色や褐
変を防止することができる。

【００１６】また、本発明のキトサンオリゴ糖アルコー
ル体の製造方法は、キトサンを加水分解する工程と、キ
トサン加水分解物を還元処理する工程と、還元処理した
キトサン加水分解物をイオン交換クロマトグラフィーに
供して重合度別にキトサンオリゴ糖アルコール体を分画
する工程と、分画した各キトサンオリゴ糖アルコール体
画分を活性炭処理して部分アセチル化キトオリゴ糖アル
コール体を除去する工程とを含むことを特徴とする。

【００１７】本発明のキトサンオリゴ糖アルコール体の
製造方法によれば、キトサン加水分解物を還元処理した
後、イオン交換クロマトグラフィーに供することによ
り、製造過程におけるキトサンオリゴ糖の着色や褐変を
防止することができる。また、キトサン加水分解物の還
元処理物をイオン交換クロマトグラフィーに供して重合
度別にキトサンオリゴ糖アルコール体を分画した後、活
性炭処理することにより、部分アセチル化キトオリゴ糖
アルコール体を効率よく除去することができる。

【００１８】上記キトサンオリゴ糖アルコール体の製造
方法においては、前記還元処理を、キトサン加水分解物
に含まれるキトサンオリゴ糖ミクスチャーに対して、そ
の２０質量％以上の水素化ホウ素ナトリウムを用いて行
なうことが好ましい。この態様によれば、キトサンオリ
ゴ糖の還元率を９９．９％以上に向上することができ、
より高純度のキトサンオリゴ糖アルコール体を得ること
ができる。

【００１９】また、前記還元処理したキトサン加水分解
物に含まれる塩類が固形分当たり１０質量％未満になる
まで脱塩した後、イオン交換クロマトグラフィーを行な
うことが好ましい。この態様によれば、各重合度のキト
サンオリゴ糖アルコール体をより良好に分離することが
できる。

【００２０】更に、還元処理したキトサン加水分解物を
イオン交換クロマトグラフィーに供して重合度別にキト
サンオリゴ糖アルコール体を分画した後、各キトサンオ
リゴ糖アルコール体画分を脱塩することが好ましい。こ
の態様によれば、より灰分の少ないキトサンオリゴ糖ア
ルコール体を得ることができる。

【００２１】更にまた、前記脱塩を、ＮａＣｌ阻止率が
５５．０〜９９．５％の逆浸透膜を用いて行なうことが
好ましい。この態様によれば、短時間で効率よく脱塩す
ることができる。

【００２２】

【発明の実施の形態】本発明のキトサンオリゴ糖の製造
方法は、キトサンを加水分解する工程と、キトサン加水
分解物をイオン交換クロマトグラフィーに供して重合度
別にキトサンオリゴ糖を分画する工程と、分画した各キ
トサンオリゴ糖画分を活性炭処理して部分アセチル化キ
トオリゴ糖を除去する工程とを含む。以下、キトサンオ
リゴ糖の製造方法の各工程について説明する。

【００２３】・キトサンを加水分解する工程 本発明において、原料として用いられるキトサンは、例
えばキチンを熱濃アルカリ処理する方法等の常法に従っ
て脱アセチル化することにより調製することができる
が、市販のものを用いることもできる。キトサンの脱ア
セチル化度は８０〜１００％が好ましい。なお、上述し
たようにアセチル化度の測定方法の問題により、脱アセ
チル化度１００％のキトサンであっても微量のアセチル
基が残存している。

【００２４】キトサンの加水分解は、酸加水分解や酵素
分解等の公知の方法によって行なうことができる（Dist
ler, J. J. et al: Method Carbohydr. Chem., 1, 305-
309,1962、Izume, M. et al: Agric. Biol. Chem., 51,
1189-1191, 1987）。

【００２５】例えば、キトサンを酸加水分解する場合
は、キトサンに、その質量の１０〜１００倍量の酸を加
え、４０〜９０℃で１〜１２０時間反応させた後、濾過
して不溶物を除去し、酸を除去又はアルカリで中和する
ことによりキトサン加水分解物を調製することができ
る。上記酸としては、例えば、塩酸、酢酸、ギ酸、硫
酸、リン酸等を用いることができる。

【００２６】また、キトサンを酵素分解する場合は、キ
トサンに希酸を加えて溶解した後、所定量のキトサン分
解酵素（キトサナーゼ、Ｄ−グルコサミニダーゼ等）を
加えて酵素反応を行ない、酵素失活させた後、反応液を
濾過して不溶物を除去し、ｐＨを中性に調整することに
よりキトサン加水分解物を調製することができる。

【００２７】上記酵素は市販の酵素を用いることがで
き、例えば「キトサナーゼ−ＲＤ」（商品名、ピアス株
式会社製、Bacillus sp. PI-7S由来）、「キトサナー
ゼ」（商品名、シグマアルドリッチ株式会社製、Strept
omyces griseus由来）等を用いることができる。

【００２８】上記のようにして得られるキトサン加水分
解物に含まれるキトサンオリゴ糖は、通常、重合度２〜
８程度の混合物、すなわちキトビオース、キトトリオー
ス、キトテトラオース、キトペンタオース、キトヘキサ
オース、キトヘプタオース、キトオクタオース等の混合
物である。

【００２９】・キトサン加水分解物をイオン交換クロマ
トグラフィーに供して重合度別にキトサンオリゴ糖を分
画する工程 上記のようにして調製したキトサン加水分解物を、常法
に従ってイオン交換クロマトグラフィーに供し、キトサ
ンオリゴ糖を重合度別に分画する。

【００３０】本発明においては、例えばキトサンを酸加
水分解してアルカリで中和した場合など、キトサン加水
分解物が大量の塩類を含む場合は、キトサン加水分解物
に含まれる塩類が固形分当たり１０質量％未満、より好
ましくは５．０質量％以下になるまで予め脱塩してから
イオン交換クロマトグラフィーに供することが好まし
い。これにより、イオン交換クロマトグラフィーの分離
能を向上することができる。なお、本発明でいう塩類と
は、キトサンを加水分解する際に用いた無機酸や有機酸
を中和することにより生じる塩（後述のキトサンオリゴ
糖アルコール体の製造方法においては、還元処理により
生じる塩も含む。）を意味する。

【００３１】脱塩の方法は公知の方法を採用できるが、
電気透析法は効率が悪く、またキトサンオリゴ糖の着色
や褐変を生じやすいため、ＮａＣｌ阻止率が５５．０〜
９９．５％の逆浸透膜（以下、ＲＯ膜という。）を用い
て行なうことが好ましい。ＲＯ膜を用いることにより、
効率よく脱塩することができ、キトサンオリゴ糖の着色
や褐変も防止できる。

【００３２】イオン交換クロマトグラフィーは、例え
ば、Uchida et al: Chitin and Chitosan, edited by S
kjak-braek, G., Anthonsen, T. and Sandford, P., p3
73-382, 1989, Elsevier Applied Science, London and
Ney York等に記載された方法で行なうことができる。
すなわち、キトサン加水分解物を、強酸性イオン交換樹
脂（例えば「AG50W×8（H⁺ form, 200-400 mesh）」
（商品名、Bio Rad Ｌaboratories製）、「Dowex 50W×
4（H⁺ form，200-400 mesh）」（商品名、ダウケミカル
カンパニー製）等）を充填したカラムに展開し、０〜
５．５Ｎの塩酸で濃度勾配溶出することにより、重合度
の小さいキトサンオリゴ糖から順に溶出され、重合度別
にキトサンオリゴ糖を分画することができる。また、各
キトサンオリゴ糖画分に含まれる塩酸はエバポレーショ
ンして除去、又はアルカリで中和しておくことが好まし
い。なお、アルカリで中和した場合、後述する活性炭処
理の前あるいは後に前記と同様にＲＯ膜を用いて脱塩す
ることが好ましい。

【００３３】・分画した各キトサンオリゴ糖画分を活性
炭処理して部分アセチル化キトオリゴ糖を除去する工程 前記工程で得られた各キトサンオリゴ糖画分には、原料
に由来する不純物、すなわち部分アセチル化キトオリゴ
糖が含まれている。この部分アセチル化キトオリゴ糖
は、各画分に含まれるキトサンオリゴ糖と１分子中のア
ミノ基数が同一であり、分子量もほとんど同一であるた
め、イオン交換クロマトグラフィーやゲル濾過クロマト
グラフィー等で分離除去することは困難であるが、活性
炭処理することにより、効率よく除去することができ
る。なお、キトサン加水分解物を分画せずにそのまま活
性炭処理した場合は、疎水性色素や中分子オリゴ糖（分
子量数千）等の他の不純物が優先して活性炭に吸着され
るため、部分アセチル化キトオリゴ糖を除去することは
できない。

【００３４】活性炭処理は、各キトサンオリゴ糖画分
に活性炭を加えて撹拌する、各キトサンオリゴ糖画分
を活性炭を充填したカラムに通すことにより行なうこと
ができる。例えば、上記の方法は、各キトサンオリゴ
糖画分に含まれるオリゴ糖（キトサンオリゴ糖及び部分
アセチル化キトオリゴ糖をいう。以下同じ。）の質量に
対して、５０〜２００％、より好ましくは５０〜１００
％の活性炭を加えて、１０〜９０℃で０．５〜５０時間
撹拌した後、濾過して濾液を回収すればよい。

【００３５】本発明で用いられる活性炭は、飲食品の製
造に使用可能な活性炭であれば特に制限なく用いること
ができるが、医薬・酒造の脱色精製に使用されるタイプ
のものが好ましく用いられる。市販品としては、例えば
「タケコール５０ＷＲ」、「精製白鷺」（いずれも商品
名、武田薬品工業製）等を用いることができる。

【００３６】本発明のキトサンオリゴ糖の製造方法によ
れば、製造過程におけるキトサンオリゴ糖の着色を防止
できると共に部分アセチル化キトオリゴ糖を簡単な操作
で除去することができ、高純度（示差屈折検出によるＨ
ＰＬＣ法において９９％以上）のキトサンオリゴ糖を効
率よく得ることができる。

【００３７】次に、本発明のキトサンオリゴ糖アルコー
ル体の製造方法について説明するが、前記キトサンオリ
ゴ糖の製造方法で説明した方法と基本的に同じ操作を行
なう工程については、説明を省略するか簡単に説明する
に留める。

【００３８】・キトサンの加水分解工程 本工程は、前記キトサンオリゴ糖の製造方法で説明した
方法と同じであるので説明を省略する。

【００３９】・キトサン加水分解物を還元処理する工程 キトサン加水分解物を還元処理する方法は、公知の方法
を採用できるが、本発明においては、以下の理由から水
素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ₄）を用いる方法が好
ましく採用される。

【００４０】水素化ホウ素ナトリウムは、キトサンオ
リゴ糖のアミノ基には作用せず、還元末端に特異的な還
元剤であり、取り扱いが簡単で安価である。

【００４１】還元処理の条件が温和で、キトサンオリ
ゴ糖のグリコシル結合の加水分解が起こる危険性がな
い。

【００４２】還元処理後にホウ酸ナトリウム塩として
除去することができ、また、万一微量に残存しても安全
性が高い。

【００４３】水素化ホウ素ナトリウムを用いた還元処理
は、例えばCampbell, B. J. et al:J. Chromatogr., 62
2, 137-146（1993）に記載された方法に従って行なうこ
とができる。すなわち、キトサンを加水分解した反応液
をｐＨ７〜９に調整して所定量の水素化ホウ素ナトリウ
ムを加え、減圧下、１０〜４０℃で３〜１８時間還元反
応を行なった後、ｐＨ３〜６に調整して反応を停止すれ
ばよい。本発明においては、還元率を高く（９９．９％
以上）するために、キトサン加水分解物に含まれるキト
サンオリゴ糖ミクスチャーに対して、その２０質量％以
上の水素化ホウ素ナトリウムを用いることが好ましい。
水素化ホウ素ナトリウムの使用量が上記より少ないと、
還元率が低下（９８％程度）してしまうため好ましくな
い。なお、本発明でいうキトサンオリゴ糖ミクスチャー
とは、キトサンを加水分解することにより生じるグルコ
サミン及びキトサンオリゴ糖の混合物を意味する。

【００４４】このように、キトサン加水分解物をそのま
ま還元処理することにより、後工程（イオン交換クロマ
トグラフィー、脱塩等）での着色や褐変を防止できる。

【００４５】・還元処理したキトサン加水分解物をイオ
ン交換クロマトグラフィーに供して重合度別にキトサン
オリゴ糖アルコール体を分画する工程 本工程は、前記キトサンオリゴ糖の製造方法で説明した
方法と同様の方法で行なうことができる。すなわち、還
元処理したキトサン加水分解物を、例えば、上記の強酸
性イオン交換樹脂を充填したカラムに展開し、０〜５．
５Ｎの塩酸で濃度勾配溶出することにより、重合度の小
さいキトサンオリゴ糖アルコール体から順に溶出され、
重合度別にキトサンオリゴ糖アルコール体を分画するこ
とができる。なお、各キトサンオリゴ糖アルコール体画
分に含まれる塩酸はエバポレーションして除去、又はア
ルカリで中和しておくことが好ましい。

【００４６】本発明においては、例えばキトサンを酸加
水分解してアルカリで中和したキトサン加水分解物を還
元処理した場合や、キトサン加水分解物に含まれるキト
サンオリゴ糖ミクスチャーに対して、その１０質量％以
上の還元剤（水素化ホウ素ナトリウム）を用いて還元処
理を行なった場合など、キトサン加水分解物の還元処理
物が大量の塩類を含む場合は、キトサン加水分解物の還
元処理物に含まれる塩類が固形分当たり１０質量％未
満、より好ましくは５．０質量％以下になるまで予め脱
塩してからイオン交換クロマトグラフィーに供すること
が好ましい。これにより、イオン交換クロマトグラフィ
ーの分離能を向上することができる。特に、還元剤とし
て水素化ホウ素ナトリウムを用いた場合に生じるホウ酸
ナトリウムが大量に含まれる場合、その溶出ピークがキ
トビイトールの溶出ピークと重なるため、できる限り除
去しておくことが好ましい。

【００４７】脱塩の方法は、公知の方法を採用できる
が、電気透析法による脱塩は効率が悪く非常に時間がか
かるため、前記と同様にＮａＣｌ阻止率が５５．０〜９
９．５％のＲＯ膜を用いて行なうことが好ましい。

【００４８】また、イオン交換クロマトグラフィーによ
り分画した各キトサンオリゴ糖アルコール体画分に含ま
れる塩酸をアルカリで中和した場合、後述する活性炭処
理の前あるいは後に前記と同様にＲＯ膜を用いて脱塩す
ることが好ましい。

【００４９】・分画した各キトサンオリゴ糖アルコール
体画分をそれぞれ活性炭処理して部分アセチル化キトオ
リゴ糖アルコール体を除去する工程 前記工程で得られる各キトサンオリゴ糖アルコール体画
分には、部分アセチル化キトオリゴ糖に由来する不純
物、すなわち部分アセチル化キトオリゴ糖アルコール体
が含まれている。この部分アセチル化キトオリゴ糖アル
コール体は、各画分に含まれるキトサンオリゴ糖アルコ
ール体と１分子中のアミノ基数が同一であり、分子量も
ほとんど同一であるため、イオン交換クロマトグラフィ
ーやゲル濾過クロマトグラフィーで分離除去することは
困難であるが、活性炭処理することにより、効率よく除
去することができる。

【００５０】活性炭処理は、前記キトサンオリゴ糖の製
造方法で説明した方法と同様の方法で行なうことができ
る。例えば、各キトサンオリゴ糖アルコール体画分に活
性炭を加えて撹拌することにより活性炭処理を行なう場
合は、各キトサンオリゴ糖アルコール体画分に含まれる
オリゴ糖アルコール体（キトサンオリゴ糖アルコール体
及び部分アセチル化キトオリゴ糖アルコール体をいう。
以下同じ。）の質量に対して、５０〜２００％、より好
ましくは５０〜１００％の活性炭を加えて、１０〜６０
℃で０．５〜４８時間撹拌した後、濾過して濾液を回収
すればよい。

【００５１】本発明のキトサンオリゴ糖アルコール体の
製造方法によれば、製造過程におけるキトサンオリゴ糖
の着色を防止できると共に部分アセチル化キトオリゴ糖
アルコール体を簡単な操作で除去することができ、従来
に比べてより高純度のキトサンオリゴ糖アルコール体を
効率よく得ることができる。

【００５２】なお、本発明の方法により製造されたキト
サンオリゴ糖及びキトサンオリゴ糖アルコール体は遊離
体であっても塩を形成していてもよい。塩としては、例
えば塩酸塩、乳酸塩、酢酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、ア
スコルビン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、アジピン酸
塩、グルコン酸塩、酒石酸塩等が挙げられるが、特に最
終製品の塩形態を限定するものではない。また、最終製
品の形態は、特に制限されず、必要に応じて溶液、ペー
スト、粉末等を選択できる。

【００５３】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
する。 実施例１（キトサンオリゴ糖の製造） 脱アセチル化度（以下ＤＡＣと略す。）８８．５％のキ
トサン２００ｇを、濃塩酸２Ｌを用いて８０℃で１時間
加水分解した後、反応液を冷却し、蒸留水２Ｌを加え、
不溶物をブフナー濾過器で除去した。得られた濾液をエ
バポレーターで減圧濃縮乾固して塩酸を除去し、キトサ
ン加水分解物９６ｇを得た。

【００５４】このキトサン加水分解物を１Ｌの水に溶解
して、イオン交換クロマトグラフィーに供し、キトサン
オリゴ糖を分画した。具体的には、上記キトサン加水分
解物の水溶液をイオン交換樹脂（商品名「Dowex 50W×
4，H⁺ form，200-400 mesh」、ダウケミカルカンパニー
製、以下同じ。）を充填した２５Ｌ容カラムに通して、
キトサンオリゴ糖を吸着させた後、カラムの２倍容の脱
イオン水で洗浄した。その後、０〜４Ｎの塩酸による濃
度勾配溶出を行ない、２．５Ｌずつフラクションコレク
ターで分取し、キトサンオリゴ糖をニンヒドリン発色法
（５７０ｎｍ）で検出した。その分離クロマトグラムを
図１に示す。

【００５５】図１に示されるように、キトサン加水分解
物をイオン交換クロマトグラフィーに供することによ
り、グルコサミン、キトビオース、キトトリオース、キ
トテトラオースが重合度別に分画されていることが分か
る。

【００５６】そして、図１に示す分画番号４５〜５１の
フラクションを回収して、減圧濃縮乾固して塩酸を除去
し、キトビオースに相当する画分を得た。

【００５７】このキトビオースに相当する画分の一部を
脱イオン水に溶解して、以下の条件でＨＰＬＣ分析を行
なった（なお、以下の例において、キトサンオリゴ糖及
びキトサンオリゴ糖アルコール体の純度は、特に断りの
ない限り、この条件で測定した。）。

【００５８】カラム：Shodex製の商品名「Asahipak NH2
P-50 4E」（4.6mm ID×250mm L） 移動相：ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ／５Ｍ ＣＨ₃ＣＯＯＫ（vo
l）＝７０／３０／０．２５ 温度：３５℃ 流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ 検出：示差屈折（ＲＩ）及び紫外部（２１０ｎｍ） その結果を図２に示す。図２に示されるように、ＲＩで
検出されたメインピークは、標準品の溶出時間（Ｒ.Ｔ.
＝７．４分）と一致することからキトビオースと判断し
た。しかしながら、Ｒ.Ｔ.が１３．５分の付近に認めら
れるピークは、アセチル基に由来するＵＶ（２１０ｎ
ｍ）吸収を持っていることから、部分アセチル化キトオ
リゴ糖であると判断した。この部分アセチル化キトオリ
ゴ糖は、原料キトサンに残存していたアセチル基が原因
で生成したものである。

【００５９】そこで、上記のキトビオースに相当する画
分の一部を脱イオン水に溶解して、オリゴ糖に対して質
量比で５０％の活性炭（商品名「タケコール５０Ｗ
Ｒ」、武田薬品工業製、以下同じ。）を添加して１時間
撹拌した後、活性炭を除去して得られた濾液について、
上記と同様の条件でＨＰＬＣ分析した。その結果を図３
に示す。

【００６０】図３に示されるように、活性炭処理するこ
とにより、部分アセチル化キトオリゴ糖が選択的に除去
されていることが分かる。この活性炭処理により、キト
ビオースの純度を９９％以上に精製することができた
（活性炭処理前の純度は６７％）。なお、活性炭処理前
後におけるキトビオースの回収率は９２．８％であっ
た。

【００６１】実施例２（脱塩方法） ・ＲＯ膜による脱塩 実施例１に準じてキトサン加水分解物を調製してイオン
交換カラムクロマトグラフィーに供し、キトサンオリゴ
糖を重合度別に分離した。そして、キトトリオースに相
当する画分を回収し、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ５．
５に調整して、中和液４０Ｌ（キトトリオース３５０
ｇ、ＮａＣｌ ５．３ｋｇ含有）を得た。

【００６２】この中和液を実施例１と同様にして活性炭
処理した後、ＲＯ膜を用いて脱塩を行なった。具体的に
は、ＲＯ膜装置（商品名「メンブレンマスター RUW-
7」、日東電工株式会社製）に、塩阻止率９３％のＲＯ
膜モジュール（商品名「NTR-729HG（２インチ）」、日
東電工株式会社製）を１本セットして、操作圧力２．０
ＭＰａ、循環流量６．０Ｌ／ｍｉｎ、温度１８℃の条件
下で、原液タンクに透過液量と同量の水を加えながら原
液（濃縮液）量を一定に保持するダイアフィルトレーシ
ョン方式で脱塩を行なった。

【００６３】そして、透過液量が２００Ｌになった時点
で脱塩を終了し、ｐＨ調整後、凍結乾燥してキトトリオ
ース塩酸塩の粉末（純度９９．７％）を得た。この粉末
の灰分（ＮａＣｌが主成分）を分析したところ０．０５
質量％であった。

【００６４】・電気透析膜による脱塩 上記と同様にして中和液（キトトリオース３５０ｇ、Ｎ
ａＣｌ ５．３ｋｇ含有）を調製して活性炭処理を行な
った。その一部（５Ｌ）を「セレミオン電気透析装置DS
-0」（商品名、旭硝子株式会社製）を用いて脱塩した。
なお、イオン交換膜として「AMV」及び「CMV」（商品
名、旭硝子株式会社製）をそれぞれ２０枚用い、循環流
量３．５Ｌ／ｍｉｎ、電圧１５Ｖに設定した。

【００６５】そして、脱塩液の電流値が０．３Ａとなっ
た時点で電気透析を終了し、ｐＨ調整後、凍結乾燥して
キトトリオース塩酸塩の粉末（純度９９．８％）を得
た。この粉末について灰分を分析したところ１．６質量
％であった。

【００６６】以上の結果から、ＲＯ膜を用いることによ
り、キトサン加水分解物を効率よく脱塩できることが分
かる。また、ＲＯ膜で脱塩して得られたキトトリオース
塩酸塩は白色で着色が認められなかったのに対して、電
気透析膜で脱塩して得られたものは着色（淡黄色）が認
められた。

【００６７】実施例３（キトサンオリゴ糖アルコール体
の製造） ＤＡＣ ８８．５％のキトサン２００ｇを、実施例１と
同様の方法で加水分解し、減圧濃縮乾固してキトサン加
水分解物９６ｇを得た。

【００６８】このキトサン加水分解物を５Ｌの水に溶解
して、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ７．５に調整し、還
元剤としてＮａＢＨ₄（関東化学株式会社製、以下同
じ。）を４．８ｇ（キトサン加水分解物に含まれるキト
サンオリゴ糖ミクスチャーに対して５．０質量％の量）
添加して、室温、減圧下で６時間撹拌して還元処理を行
ない、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０に調整して反応を停止
した。

【００６９】このキトサン加水分解物の還元処理物（水
溶液）をイオン交換クロマトグラフィーに供し、キトサ
ンオリゴ糖アルコール体を分画した。具体的には、上記
還元処理物（水溶液）をイオン交換樹脂を充填した２５
Ｌ容カラムに通して、キトサンオリゴ糖アルコール体を
吸着させた後、カラムの２倍容の脱イオン水で洗浄し
た。その後、０〜４Ｎの塩酸による濃度勾配溶出を行な
い、２．５Ｌずつフラクションコレクターで分取し、キ
トサンオリゴ糖アルコール体をニンヒドリン発色法（５
７０ｎｍ）で検出した。

【００７０】そして、キトトリイトールに相当するフラ
クションを回収し、エバポレーターで減圧濃縮乾固して
塩酸を除去した。この画分の一部を少量の脱イオン水に
溶解して、実施例１に記載した条件でＨＰＬＣ分析を行
なった。その結果を図４に示す。

【００７１】図４に示されるように、ＲＩで検出された
メインピークは標準品のＲ.Ｔ.（９．６分）と一致する
ため、キトトリイトールと判断した。しかしながら、
Ｒ.Ｔ.が１４．８分と１７．３分付近に認められるピー
クはアセチル基に由来するＵＶ（２１０ｎｍ）吸収を持
っていることから、部分アセチル化キトオリゴ糖アルコ
ール体であると判断した。この部分アセチル化キトオリ
ゴ糖アルコール体は、原料キトサンを加水分解した際に
生じる部分アセチル化キトオリゴ糖に由来するものであ
る。

【００７２】そこで、上記のキトトリイトールに相当す
る画分の一部を脱イオン水に溶解して、オリゴ糖アルコ
ール体に対して質量比で５０％の活性炭を添加して１時
間撹拌した後、活性炭を除去して得られた濾液につい
て、上記と同様の条件でＨＰＬＣ分析を行なった。その
結果を図５に示す。

【００７３】図５に示されるように、活性炭処理するこ
とにより部分アセチル化キトオリゴ糖アルコール体が選
択的に除去されていることが分かる。この活性炭処理に
より、キトトリイトールの純度を９９％以上に精製する
ことができた（活性炭処理前の純度は６２％）。なお、
活性炭処理前後におけるキトトリイトールの回収率は８
７．７％であった。

【００７４】実施例４（還元処理工程の順番） ＤＡＣ ９９．８％のキトサン４０ｇを、水４Ｌに分散
させて撹拌しながら酢酸を加えて溶解させた（ｐＨ５．
０）。この溶液に、キトサナーゼ（商品名「キトサナー
ゼ−ＲＤ」、ピアス株式会社製、以下同じ。）を４０Ｕ
加え、５５℃で２４時間反応させた。酵素を失活させて
濾過して不溶物を除去した後、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液で
ｐＨ７．５に調整してキトサン加水分解物（水溶液）を
得た。

【００７５】このキトサン加水分解物（水溶液）の半分
を用いて還元処理を行なった。具体的には、還元剤とし
てＮａＢＨ₄を１．０ｇ（キトサン加水分解物に含まれ
るキトサンオリゴ糖ミクスチャーに対して５．０質量％
の量）添加して、室温、減圧下で６時間撹拌して還元処
理を行ない、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０に調整して反応
を停止した。

【００７６】このキトサン加水分解物の還元処理物（水
溶液）をイオン交換クロマトグラフィーに供し、キトサ
ンオリゴ糖アルコール体を分画した。具体的には、上記
還元処理物（水溶液）をイオン交換樹脂を充填した１Ｌ
容カラムに通して、キトサンオリゴ糖アルコール体を吸
着させた後、カラムの２倍容の脱イオン水で洗浄した。
その後、０〜４Ｎの塩酸による濃度勾配溶出を行ない、
７０ｍＬずつフラクションコレクターで分取し、キトサ
ンオリゴ糖アルコール体をニンヒドリン発色法（５７０
ｎｍ）で検出した。

【００７７】そして、キトテトライトールに相当する画
分を回収し、エバポレーターで減圧濃縮乾固して過剰な
塩酸を除去した後、脱イオン水を加えて溶解し、実施例
３と同様にして活性炭処理を行なった。そして、ｐＨ調
整後、凍結乾燥してキトテトライトール塩酸塩の粉末
（純度９９．９％、以下サンプル１という）０．５５ｇ
を得た。

【００７８】一方、残りの半分のキトサン加水分解物を
還元処理せずに上記と同様にイオン交換カラムに供して
分画して、キトテトラオースに相当する画分を回収し
た。エバポレーターで減圧濃縮乾固して過剰な塩酸を除
去した後、脱イオン水を加えて溶解し、オリゴ糖に対し
て５．０質量％の量のＮａＢＨ₄を添加して、上記と同
様にして還元処理を行ない、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０
に調整して反応を停止した。

【００７９】この反応液を、電気透析機（商品名「マイ
クロアシライザー」、旭化成株式会社）を用いて脱塩し
た。なお、イオン交換膜（カートリッジ膜）は「ＡＣ−
１２０−１０」（商品名、旭化成株式会社製）を使用し
た。

【００８０】得られた脱塩液を活性炭処理した後、ｐＨ
調整して凍結乾燥してキトテトライトール塩酸塩の粉末
（純度９９．９％、以下サンプル２という）０．５０ｇ
を得た。

【００８１】得られた各サンプルを１０％（ｗ／ｖ）と
なるように脱イオン水に溶解し、着色度（ＯＤ３５０ｎ
ｍを指標）を測定したところ、サンプル１の着色度は
０．５３、サンプル２の着色度は１．５８であった。な
お、還元剤由来のホウ酸ナトリウム（ＮａＢＯ₂）をク
ルクミン法で定量したところ、サンプル１には検出され
なかったが、サンプル２には２５０ｐｐｍのホウ酸ナト
リウムが検出された。

【００８２】以上の結果から、キトサン加水分解物を還
元処理した後、イオン交換クロマトグラフィーに供し、
キトサンオリゴ糖アルコール体を分画することにより、
キトサンオリゴ糖の着色を防止できることが分かる。ま
た、電気透析では、ホウ酸ナトリウムを効率よく除去で
きないことが分かる。

【００８３】実施例５（脱塩方法） ＤＡＣ８５.６％のキトサン２０ｋｇを、濃塩酸２００
Ｌを用いて８０℃で１時間加水分解した後、反応液を冷
却し、２００Ｌの蒸留水を加えて不溶物をフィルタープ
レス濾過機で除去した。得られた濾液を減圧濃縮乾固し
て塩酸を除去し、キトサン加水分解物１３ｋｇを得た。

【００８４】このキトサン加水分解物に水１００Ｌを加
えて溶解し、６Ｎ ＮａＯＨを用いてｐＨ７．６に調整
した後、ＮａＢＨ₄を６５０ｇ（キトサン加水分解物に
含まれるキトサンオリゴ糖ミクスチャーに対して５．０
質量％の量）を添加して室温、減圧下で６時間撹拌して
還元処理を行ない、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ５．５に調整し
て反応を停止した。

【００８５】このキトサン加水分解物の還元処理物（水
溶液、１３０ｇオリゴ糖／Ｌ）の半分を用いてＲＯ膜装
置で脱塩した。具体的には、キトサン加水分解物の還元
処理物（水溶液）５０Ｌを、塩阻止率５５％のＲＯ膜モ
ジュール（商品名「SU-610（４インチ）」、東レ株式会
社製）を２本セットした装置（商品名「FVY-1002型」、
東レ株式会社製）の原液タンクに投入し、操作圧力０．
３ＭＰａ、循環流量１０Ｌ／ｍｉｎ、温度２４℃の条件
下でダイアフィルトレーション方式で脱塩を行なった。

【００８６】透過液量が０、４０、８０、１２０Ｌの時
点で原液タンク内（濃縮液）からサンプリングして、キ
トサンオリゴ糖アルコール体をニンヒドリン法で定量
し、ホウ酸ナトリウムをクルクミン法で定量した。その
結果を表１に示す。

【００８７】

【表１】

【００８８】表１から、１２分間の処理で、キトサンオ
リゴ糖アルコール体に対するホウ酸ナトリウムの比率
（100×b/a）は６．５％から０．０８％に減少している
ことが分かる。また、脱塩処理による溶液の着色は全く
起こらなかった。

【００８９】次に、脱塩処理したキトサン加水分解物の
還元処理物（水溶液）の一部（２．５Ｌ）をイオン交換
樹脂を充填した２５Ｌ容カラムに通して、キトサンオリ
ゴ糖アルコール体を吸着させた後、カラムの２倍容の脱
イオン水で洗浄した。その後、０〜４Ｎの塩酸による濃
度勾配溶出を行ない、２．５Ｌずつフラクションコレク
ターで分取した。各フラクションに含まれるキトサンオ
リゴ糖アルコール体をニンヒドリン発色法（５７０ｎ
ｍ）で検出し、グルコサミニイトール、キトビイトー
ル、キトトリイトール、キトテトライトールの順に溶出
し、重合度別に分離していることを確認した。

【００９０】そして、キトビイトールに相当する画分を
回収し、減圧濃縮乾固して塩酸を除去し、粉末６４ｇを
得た。この粉末を脱イオン水１Ｌに溶解し、活性炭３２
ｇを加えて２時間撹拌した後、活性炭を除去した。得ら
れた濾液のｐＨを４．５に調整後、凍結乾燥して白色粉
末５４．４ｇを得た（活性炭処理による回収率８５
％）。この粉末を実施例１に記載した条件でＨＰＬＣ分
析を行なったところ、キトビイトールの純度は１００％
であった。

【００９１】一方、上記キトサン加水分解物の還元処理
物（水溶液）の一部（５Ｌ）を「セレミオン電気透析装
置DS-0」（商品名、旭硝子株式会社製）を用いて脱塩を
行ない、上記と同様にしてキトサンオリゴ糖アルコール
体及びホウ酸ナトリウムを定量した。なお、イオン交換
膜として「AMV」及び「CMV」（商品名、旭硝子株式会社
製）をそれぞれ２０枚用い、循環流量３．５Ｌ／ｍｉ
ｎ、電圧１５Ｖに設定した。その結果を表２に示す。

【００９２】

【表２】

【００９３】表２から、キトサンオリゴ糖アルコール体
に対するホウ酸ナトリウムの比率（100×b/a）は１８０
分経過しても１．１％であることが分かる（ホウ酸ナト
リウムの８４％を除去）。更に、３００分まで脱塩処理
を継続しても電流値は０．３Ａ以下にならず、これ以上
は脱塩できないものと判断した。また、溶液の着色が若
干認められた。

【００９４】以上の結果から、ＲＯ膜を用いることによ
り、キトサン加水分解物の還元処理物を効率よく脱塩で
きることが分かる。

【００９５】実施例６（脱塩の有無による分離能の差） ＤＡＣ ９９．８％のキトサン４ｇを、水４００ｍＬに
分散させて撹拌しながら酢酸を加えて溶解させた（ｐＨ
５．０）。この溶液に、キトサナーゼを４Ｕ加え、５５
℃で２４時間反応させた後、酵素を失活させて濾過して
不溶物を除去した後、ｐＨを７．５に調整してキトサン
加水分解物（水溶液）を得た。

【００９６】このキトサン加水分解物（水溶液）にＮａ
ＢＨ₄を０．４ｇ（キトサン加水分解物に含まれるキト
サンオリゴ糖ミクスチャーに対して１０質量％の量）添
加して、室温、減圧下で６時間撹拌して還元処理を行な
い、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０に調整して反応を停止し
た。

【００９７】得られたキトサン加水分解物の還元処理物
（水溶液）の半分を、電気透析機（商品名「マイクロア
シライザー」、旭化成株式会社製）を用いて脱塩した。
なお、イオン交換膜（カートリッジ膜）は、商品名「AC
-120-10」（旭化成株式会社製）を用いた。

【００９８】次に、この脱塩液（塩類（主にホウ酸ナト
リウム）の含量は５質量％）をイオン交換クロマトグラ
フィーに供し、キトサンオリゴ糖アルコール体を分画し
た。具体的には、上記脱塩液をイオン交換樹脂を充填し
た１００ｍＬ容カラムに通してキトサンオリゴ糖アルコ
ール体を吸着させた後、カラムの２倍容の脱イオン水で
洗浄した。その後、０〜４Ｎの塩酸による濃度勾配溶出
を行ない、１０ｍＬずつフラクションコレクターで分取
し、キトサンオリゴ糖アルコール体をニンヒドリン発色
法（５７０ｎｍ）で検出した。その分離クロマトグラム
を図６に示した。

【００９９】図６から、キトサンオリゴ糖アルコール体
は重合度別に分離されており、ホウ酸ナトリウムのピー
クは、キトビイトールのピークと完全に分離しているこ
とが分かる。

【０１００】そして、キトトライトールに相当する画分
を回収し、減圧濃縮乾固して塩酸を除去し、粉末２３０
ｍｇを得た。この粉末を脱イオン水１００ｍＬに溶解
し、活性炭２３０ｍｇを加えて１時間撹拌した後、活性
炭を除去した。得られた濾液のｐＨを４．５に調整後、
凍結乾燥して、白色粉末２１４ｍｇを得た（活性炭処理
による回収率９３％）。この粉末を実施例１に記載した
条件でＨＰＬＣ分析を行なったところ、キトトライトー
ルの純度は１００％であった。

【０１０１】一方、得られたキトサン加水分解物の還元
処理物（水溶液）を、脱塩を行なわずにそのままイオン
交換クロマトグラフィーに供し、キトサンオリゴ糖アル
コール体を分画した。その分離クロマトグラムを図７に
示した。なお、イオン交換クロマトグラフィーは上記と
同様にして行なった。

【０１０２】図７に示すように、キトビイトール、キト
トリイトール、キトテトライトール相互の分離性が不良
であることが分かる。また、ホウ酸ナトリウムのピーク
の一部がキトビイトールのピークと重なっていることが
分かる。

【０１０３】以上の結果から、キトサン加水分解物の還
元処理物に含まれる塩類が固形分当たり１０質量％以上
の状態でイオン交換クロマトグラフィーを行なった場
合、各キトサンオリゴ糖アルコール体の分離性の低下や
ホウ酸ナトリウムの混入の問題が発生することが分か
る。

【０１０４】実施例７ ＤＡＣ １００％のキトサン３０ｇを、水３Ｌに分散さ
せて撹拌しながら酢酸を加えて溶解させた（ｐＨ５．
０）。この溶液に、キトサナーゼを１５Ｕ加え、５５℃
で２４時間反応して酵素を失活させた後、濾過して不溶
物を除去し、キトサン加水分解物（水溶液）を得た。

【０１０５】このキトサン加水分解物（水溶液）を１Ｎ
ＮａＯＨ水溶液でｐＨ７．５に調整した後、３分割し
て、各々にＮａＢＨ₄を１．０ｇ、１．５ｇ、及び２．
０ｇ（キトサン加水分解物に含まれるキトサンオリゴ糖
ミクスチャーに対して、それぞれ１０、１５、及び２０
質量％の量）加え、室温、減圧下で６時間撹拌して還元
処理を行ない、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ４．０に調整して反
応を停止した。

【０１０６】各還元処理物（水溶液）を脱塩した後（キ
トサン加水分解物の還元処理物に含まれる塩類は固形分
当たり１〜３質量％）、各々２００ｍＬ容のイオン交換
カラムに供し、０〜４Ｎの塩酸による濃度勾配溶出を行
ない、キトペンタイトールに相当する画分を回収した。
エバポレーターで過剰な塩酸を除去後、活性炭処理し、
ｐＨ調整して凍結乾燥してキトペンタイトール塩酸塩の
粉末を、それぞれ４２ｍｇ、４６ｍｇ、及び４０ｍｇ得
た。

【０１０７】これらの粉末中に残存する未還元体（キト
ペンタオース）の含量をソモジーネルソン法により測定
した。その結果を表３に示す。

【０１０８】

【表３】

【０１０９】表３から、キトサン加水分解物に含まれる
キトサンオリゴ糖ミクスチャーに対して２０質量％以上
の量のＮａＢＨ₄を用いることにより、９９．９％以上
の還元率を達成できることが分かる。

【０１１０】なお、上記の各キトペンタイトール塩酸塩
を実施例１に記載した条件でＨＰＬＣ分析を行なったと
ころ、純度１００％であった。これは、ＨＰＬＣ法では
還元体と未還元体の分離できないためである。

【０１１１】

【発明の効果】以上説明したように、本発明のキトサン
オリゴ糖の製造方法によれば、キトサンの加水分解物を
イオン交換クロマトグラフィーに供して重合度別にキト
サンオリゴ糖を分画した後、活性炭処理をすることによ
り、イオン交換クロマトグラフィーで除去することが困
難な部分アセチル化キトオリゴ糖を効率よく除去するこ
とができ、高純度のキトサンオリゴ糖を効率よく調製す
ることができる。

【０１１２】また、本発明のキトサンオリゴ糖アルコー
ル体の製造方法によれば、キトサン加水分解物を還元処
理した後に、イオン交換クロマトグラフィーに供して重
合度別にキトサンオリゴ糖アルコール体を分画すること
により、製造過程におけるキトサンオリゴ糖の着色や褐
変を防止することができる。そして、イオン交換クロマ
トグラフィーに供して重合度別にキトサンオリゴ糖アル
コール体を分画した後に、活性炭処理をすることによ
り、部分アセチル化キトオリゴ糖アルコール体を効率よ
く除去することができ、高純度のキトサンオリゴ糖アル
コール体を効率よく調製することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 キトサン加水分解物をイオン交換クロマトグ
ラフィーにより分画した結果を示す図である。

【図２】 キトサン加水分解物をイオン交換クロマトグ
ラフィーにより分画して得られたキトビオース画分をＨ
ＰＬＣ分析した結果を示す図である。

【図３】 キトサン加水分解物をイオン交換クロマトグ
ラフィーにより分画して得られたキトビオース画分を活
性炭処理したものをＨＰＬＣ分析した結果を示す図であ
る。

【図４】 キトサン加水分解物の還元処理物をイオン交
換クロマトグラフィーにより分画して得られたキトトリ
イトール画分をＨＰＬＣ分析した結果を示す図である。

【図５】 キトサン加水分解物の還元処理物をイオン交
換クロマトグラフィーにより分画して得られたキトトリ
イトール画分を活性炭処理したものをＨＰＬＣ分析した
結果を示す図である。

【図６】 キトサン加水分解物の還元処理物を脱塩して
からイオン交換クロマトグラフィーにより分画した結果
を示す図である。

【図７】 キトサン加水分解物の還元処理物を脱塩せず
にイオン交換クロマトグラフィーにより分画した結果を
示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０８Ｂ 37/08 Ｃ０８Ｂ 37/08 Ａ Ｆターム(参考） 4C057 AA05 AA10 AA12 BB01 BB04 CC04 DD01 JJ09 4C090 AA04 BA47 BC27 CA12 CA13 CA14 CA21 CA31 CA34 DA23 DA26 DA27 4D006 GA03 KA72 KB11 KB12 PB20 PB27 PC11 PC42 4D017 AA07 BA04 CA03 CA17 CB01

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 キトサンを加水分解する工程と、キトサ
   ン加水分解物をイオン交換クロマトグラフィーに供して
   重合度別にキトサンオリゴ糖を分画する工程と、分画し
   た各キトサンオリゴ糖画分を活性炭処理して部分アセチ
   ル化キトオリゴ糖を除去する工程とを含むことを特徴と
   するキトサンオリゴ糖の製造方法。
2. 【請求項２】 前記キトサン加水分解物に含まれる塩類
   が固形分当たり１０質量％未満になるまで脱塩した後、
   イオン交換クロマトグラフィーを行なう、請求項１に記
   載のキトサンオリゴ糖の製造方法。
3. 【請求項３】 キトサン加水分解物をイオン交換クロマ
   トグラフィーに供して重合度別にキトサンオリゴ糖を分
   画した後、各キトサンオリゴ糖画分を脱塩する、請求項
   １又は２に記載のキトサンオリゴ糖の製造方法。
4. 【請求項４】 前記脱塩を、ＮａＣｌ阻止率が５５．０
   〜９９．５％の逆浸透膜を用いて行なう、請求項２又は
   ３に記載のキトサンオリゴ糖の製造方法。
5. 【請求項５】 キトサンを加水分解する工程と、キトサ
   ン加水分解物を還元処理する工程と、還元処理したキト
   サン加水分解物をイオン交換クロマトグラフィーに供し
   て重合度別にキトサンオリゴ糖アルコール体を分画する
   工程と、分画した各キトサンオリゴ糖アルコール体画分
   を活性炭処理して部分アセチル化キトオリゴ糖アルコー
   ル体を除去する工程とを含むことを特徴とするキトサン
   オリゴ糖アルコール体の製造方法。
6. 【請求項６】 前記還元処理を、キトサン加水分解物に
   含まれるキトサンオリゴ糖ミクスチャーに対して、その
   ２０質量％以上の水素化ホウ素ナトリウムを用いて行な
   う、請求項５に記載のキトサンオリゴ糖アルコール体の
   製造方法。
7. 【請求項７】 前記還元処理したキトサン加水分解物に
   含まれる塩類が固形分当たり１０質量％未満になるまで
   脱塩した後、イオン交換クロマトグラフィーを行なう、
   請求項５又は６に記載のキトサンオリゴ糖アルコール体
   の製造方法。
8. 【請求項８】 還元処理したキトサン加水分解物をイオ
   ン交換クロマトグラフィーに供して重合度別にキトサン
   オリゴ糖アルコール体を分画した後、各キトサンオリゴ
   糖アルコール体画分を脱塩する、請求項５〜７のいずれ
   か一つに記載のキトサンオリゴ糖アルコール体の製造方
   法。
9. 【請求項９】 前記脱塩を、ＮａＣｌ阻止率が５５．０
   〜９９．５％の逆浸透膜を用いて行なう、請求項７又は
   ８に記載のキトサンオリゴ糖アルコール体の製造方法。