JP2003125781A - 天然皮革製品の判定法 - Google Patents
天然皮革製品の判定法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 天然皮革製品を科学的に高精度で同定するた
めの方法を提供する。 【解決手段】天然皮革製品試験片の表面皮膜を、物理的
処理により除去する工程、該試験片を細切する工程、細
切した試験片へ、コラゲナーゼを作用させる工程、試験
片からＤＮＡを抽出する工程、抽出したＤＮＡを鋳型と
して、予測される動物種由来の種特異的プライマーを用
いたポリメラーゼチェインリアクションにより種特異的
ＤＮＡ断片を増幅する工程、増幅されたＤＮＡを分析す
る工程を含む、天然皮革製品の判定方法。
めの方法を提供する。 【解決手段】天然皮革製品試験片の表面皮膜を、物理的
処理により除去する工程、該試験片を細切する工程、細
切した試験片へ、コラゲナーゼを作用させる工程、試験
片からＤＮＡを抽出する工程、抽出したＤＮＡを鋳型と
して、予測される動物種由来の種特異的プライマーを用
いたポリメラーゼチェインリアクションにより種特異的
ＤＮＡ断片を増幅する工程、増幅されたＤＮＡを分析す
る工程を含む、天然皮革製品の判定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、天然皮革製品が由
来する動物種を判定する方法に関する。
来する動物種を判定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】革を製品の全部または一部に用いたかば
ん、手袋、上衣、ズボン、スカート、ドレス、コート及
びプルオーバー、カーディガン、その他セーターについ
ては家庭用品品質表示法に天然皮革の種類もしくは材料
の種類についての表示方法が記載されている。皮革の種
類によって価値が異なるために、正しい表示を求める消
費者だけではなく、生産、流通に関係する者からも皮革
の種類を科学的に証明できる方法が求められている。し
かしながら、現在主に行われている同定方法は光学顕微
鏡もしくは電子顕微鏡による表面および断面の観察が殆
どであり、その他の方法として有効な同定方法はないの
が現状である。
ん、手袋、上衣、ズボン、スカート、ドレス、コート及
びプルオーバー、カーディガン、その他セーターについ
ては家庭用品品質表示法に天然皮革の種類もしくは材料
の種類についての表示方法が記載されている。皮革の種
類によって価値が異なるために、正しい表示を求める消
費者だけではなく、生産、流通に関係する者からも皮革
の種類を科学的に証明できる方法が求められている。し
かしながら、現在主に行われている同定方法は光学顕微
鏡もしくは電子顕微鏡による表面および断面の観察が殆
どであり、その他の方法として有効な同定方法はないの
が現状である。
【０００３】現在皮革の判定法として日本、海外共に規
格化されているものはない。また、同定方法として明文
化されているものも少なく、殆どが動物種によって異な
る皮革の構造的特徴や、皮革の性質が記載されているだ
けである。
格化されているものはない。また、同定方法として明文
化されているものも少なく、殆どが動物種によって異な
る皮革の構造的特徴や、皮革の性質が記載されているだ
けである。
【０００４】皮革の顕微鏡による外観観察は、元々皮自
体に外観的特徴が少ないこともあり、熟練した専門家で
なければ同定する事は難しい。皮革の同定は光学顕微鏡
や電子顕微鏡によって毛穴の大きさ、数、形状、配列の
仕方、また銀面の凹凸、断面構造、物理的性質（硬さや
手触り）を総合的にとらえ、専門家が経験を元に判断す
る。しかし、製品となっている革は、通常鞣や染色など
の強い処理を受けるために外観や色つやが変化し、同定
をより困難なものとする。人工皮革や合成皮革などの人
工的に天然皮革に似せて生産されているものから、型押
し革と呼ばれる牛床革や豚皮などの表面を加熱加圧する
ことによって他の革に似せる技術もある。このようなも
のになると専門家でさえも材料となっている動物種を同
定することは難しい。国内には専門家が少ないことと、
外観観察による同定は人間の感覚と経験に基づく判断と
なることから、科学的な方法が求められている。
体に外観的特徴が少ないこともあり、熟練した専門家で
なければ同定する事は難しい。皮革の同定は光学顕微鏡
や電子顕微鏡によって毛穴の大きさ、数、形状、配列の
仕方、また銀面の凹凸、断面構造、物理的性質（硬さや
手触り）を総合的にとらえ、専門家が経験を元に判断す
る。しかし、製品となっている革は、通常鞣や染色など
の強い処理を受けるために外観や色つやが変化し、同定
をより困難なものとする。人工皮革や合成皮革などの人
工的に天然皮革に似せて生産されているものから、型押
し革と呼ばれる牛床革や豚皮などの表面を加熱加圧する
ことによって他の革に似せる技術もある。このようなも
のになると専門家でさえも材料となっている動物種を同
定することは難しい。国内には専門家が少ないことと、
外観観察による同定は人間の感覚と経験に基づく判断と
なることから、科学的な方法が求められている。
【０００５】近年、様々な分野で生物種を同定すること
を目的として、ＤＮＡを用いる同定方法が利用されてい
る。これは生物種ごとに特異的であるＤＮＡ配列を利用
するものであり、この特異的な配列を確認することは生
物種を同定する方法として充分な科学的な根拠があると
認知されている。
を目的として、ＤＮＡを用いる同定方法が利用されてい
る。これは生物種ごとに特異的であるＤＮＡ配列を利用
するものであり、この特異的な配列を確認することは生
物種を同定する方法として充分な科学的な根拠があると
認知されている。
【０００６】微量試料中の目的とする配列を簡易的に確
認する方法として、ＰＣＲ反応にて所望の配列を増幅さ
せ、これを電気泳動法にて確認する方法が採用されてい
る。しかしながら、ＤＮＡはＤＮＡseの働きや熱によっ
て分解されやすく、また物理的にも弱く剪断されやす
い。このため高感度の測定のためには、試料中に保存さ
れている比較的分解されづらい塩基配列を選ぶこと、出
来るだけＤＮＡに影響を与えずに試料からＤＮＡを抽出
することが重要になる。
認する方法として、ＰＣＲ反応にて所望の配列を増幅さ
せ、これを電気泳動法にて確認する方法が採用されてい
る。しかしながら、ＤＮＡはＤＮＡseの働きや熱によっ
て分解されやすく、また物理的にも弱く剪断されやす
い。このため高感度の測定のためには、試料中に保存さ
れている比較的分解されづらい塩基配列を選ぶこと、出
来るだけＤＮＡに影響を与えずに試料からＤＮＡを抽出
することが重要になる。
【０００７】皮革材料や製品は、製品となるまで様々な
処理を受けることから、試料中のＤＮＡ量が非常に少な
くなり、また損傷を受けることも多い。皮革処理の例と
して、一般的な銀付きクロム革の処理工程を挙げると以
下のごとくなる。 １．原料となる皮は、通常塩漬けされている。 ２．水漬けし生皮の状態に戻す。 ３．フレッシング（皮の裏面の肉や脂肪を取り除く）。 ４．石灰漬け・脱毛。 ５．分割（厚さを調節するため２層に分割する）。 ６．脱灰。 ７．ピックリング（皮をなめしに適した酸性にする）。 ８．クロム鞣し ９．シェービング（裏面を削って厚さを均一にする）。 １０．中和（酸性のクロム鞣し皮を染色・加脂に適する
よう中和する）。 １１．染色。 １２．加脂（目的に応じた柔らかさを与えるため油剤を
加える）。 １３．水絞り・セッティング（革を延ばす）。 １４．乾燥（一旦乾かして染料、加脂剤を革に固着させ
る）。 １５．味入れ（ステーキングしやすいよう適度に水分を
与える）。 １６．ステーキング（革を揉みほぐし柔らかくする）。 １７．張り革・乾燥（革を平らに乾燥させる）。 １８．塗装・つや出し。
処理を受けることから、試料中のＤＮＡ量が非常に少な
くなり、また損傷を受けることも多い。皮革処理の例と
して、一般的な銀付きクロム革の処理工程を挙げると以
下のごとくなる。 １．原料となる皮は、通常塩漬けされている。 ２．水漬けし生皮の状態に戻す。 ３．フレッシング（皮の裏面の肉や脂肪を取り除く）。 ４．石灰漬け・脱毛。 ５．分割（厚さを調節するため２層に分割する）。 ６．脱灰。 ７．ピックリング（皮をなめしに適した酸性にする）。 ８．クロム鞣し ９．シェービング（裏面を削って厚さを均一にする）。 １０．中和（酸性のクロム鞣し皮を染色・加脂に適する
よう中和する）。 １１．染色。 １２．加脂（目的に応じた柔らかさを与えるため油剤を
加える）。 １３．水絞り・セッティング（革を延ばす）。 １４．乾燥（一旦乾かして染料、加脂剤を革に固着させ
る）。 １５．味入れ（ステーキングしやすいよう適度に水分を
与える）。 １６．ステーキング（革を揉みほぐし柔らかくする）。 １７．張り革・乾燥（革を平らに乾燥させる）。 １８．塗装・つや出し。
【０００８】さらに仕上げの段階では、皮革表面上にコ
ーティングを行う。コーティング処理としては、ベース
コート、ミドルコートによって、皮革を被覆し、傷を隠
す。また、トップコート剤の浸透を抑える。トップコー
トは表面の色落ちを防止し、感触、光沢などを調整す
る。
ーティングを行う。コーティング処理としては、ベース
コート、ミドルコートによって、皮革を被覆し、傷を隠
す。また、トップコート剤の浸透を抑える。トップコー
トは表面の色落ちを防止し、感触、光沢などを調整す
る。
【０００９】かかる過酷な処理のため天然皮革製品中の
ＤＮＡの判定可能な量を抽出するのは非常に困難なもの
となっている。またＤＮＡを少量抽出したとしても、変
性を受けたものであることが多く、一般の試料に使用さ
れるような強い処理を受けていない試料、例えば肉種判
定等のＤＮＡ同定法に用いるプライマーを使用しても、
強い処理を受けている皮革を同定する際には使用できな
い。例えば、ＤＮＡ解析による肉種判定法（松永孝光
ら，平成９年度畜産物需要開発調査研究事業報告書，p1
31-137，農畜産業振興事業団）に使用されているプライ
マーは、皮革のＤＮＡによる同定法では使用できなかっ
た。上記のような事情から、現在までＤＮＡ配列を利用
した皮革材料の判定方法は全く知られていない。
ＤＮＡの判定可能な量を抽出するのは非常に困難なもの
となっている。またＤＮＡを少量抽出したとしても、変
性を受けたものであることが多く、一般の試料に使用さ
れるような強い処理を受けていない試料、例えば肉種判
定等のＤＮＡ同定法に用いるプライマーを使用しても、
強い処理を受けている皮革を同定する際には使用できな
い。例えば、ＤＮＡ解析による肉種判定法（松永孝光
ら，平成９年度畜産物需要開発調査研究事業報告書，p1
31-137，農畜産業振興事業団）に使用されているプライ
マーは、皮革のＤＮＡによる同定法では使用できなかっ
た。上記のような事情から、現在までＤＮＡ配列を利用
した皮革材料の判定方法は全く知られていない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、天然皮革製
品を科学的に高精度で同定するための方法を提供するこ
とを目的とする。より詳しくは、本発明は天然皮革製品
から操作可能な量のＤＮＡを抽出する方法、および抽出
されたＤＮＡに基づき天然皮革製品が由来する動物種を
判定する方法、および該方法に有用な、動物種に特異的
なプライマーを提供することを目的とする。
品を科学的に高精度で同定するための方法を提供するこ
とを目的とする。より詳しくは、本発明は天然皮革製品
から操作可能な量のＤＮＡを抽出する方法、および抽出
されたＤＮＡに基づき天然皮革製品が由来する動物種を
判定する方法、および該方法に有用な、動物種に特異的
なプライマーを提供することを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本願発明は、天然皮革製
品試験片の表面皮膜を、物理的処理により除去する工
程、該試験片を細切する工程、細切した試験片へ、コラ
ゲナーゼを作用させる工程、試験片からＤＮＡを抽出す
る工程を含む、天然皮革製品からＤＮＡを抽出する方法
を提供する。本発明の方法によって、従来不可能である
とされていた天然皮革製品から、ＰＣＲ反応等の従来公
知の方法により操作可能な量のＤＮＡの抽出が可能とな
った。
品試験片の表面皮膜を、物理的処理により除去する工
程、該試験片を細切する工程、細切した試験片へ、コラ
ゲナーゼを作用させる工程、試験片からＤＮＡを抽出す
る工程を含む、天然皮革製品からＤＮＡを抽出する方法
を提供する。本発明の方法によって、従来不可能である
とされていた天然皮革製品から、ＰＣＲ反応等の従来公
知の方法により操作可能な量のＤＮＡの抽出が可能とな
った。
【００１２】本発明はさらに天然皮革製品試験片の表面
皮膜を、物理的処理により除去する工程、該試験片を細
切する工程、細切した試験片へ、コラゲナーゼを作用さ
せる工程、試験片からＤＮＡを抽出する工程、抽出した
ＤＮＡを鋳型として、予測される動物種由来の種特異的
プライマーを用いたＰＣＲ反応により種特異的ＤＮＡ断
片を増幅する工程、増幅されたＤＮＡを分析する工程を
含む、天然皮革製品の判定方法を提供する。
皮膜を、物理的処理により除去する工程、該試験片を細
切する工程、細切した試験片へ、コラゲナーゼを作用さ
せる工程、試験片からＤＮＡを抽出する工程、抽出した
ＤＮＡを鋳型として、予測される動物種由来の種特異的
プライマーを用いたＰＣＲ反応により種特異的ＤＮＡ断
片を増幅する工程、増幅されたＤＮＡを分析する工程を
含む、天然皮革製品の判定方法を提供する。
【００１３】本発明の方法によって、適当なプライマー
を用いればウシ、ブタ革製品のみならず、ヒツジ、ヤ
ギ、ウマ、シカ、オーストリッチ、ヘビ、ワニ、トカゲ
等、様々な動物種由来の天然皮革製品の判定を行うこと
が可能となった。種特異的プライマーとしては、以下に
説明する本発明のウシ種判定用プライマーおよびブタ種
判定用プライマーが特に好適に用いられる。本発明の方
法において、用いるプライマーは特に種特異性が高くか
つ配列がよく保存されている部位に由来するものである
必要がある。例えば公知のヒツジ種用プライマーやヤギ
種用プライマーを用いることができる。
を用いればウシ、ブタ革製品のみならず、ヒツジ、ヤ
ギ、ウマ、シカ、オーストリッチ、ヘビ、ワニ、トカゲ
等、様々な動物種由来の天然皮革製品の判定を行うこと
が可能となった。種特異的プライマーとしては、以下に
説明する本発明のウシ種判定用プライマーおよびブタ種
判定用プライマーが特に好適に用いられる。本発明の方
法において、用いるプライマーは特に種特異性が高くか
つ配列がよく保存されている部位に由来するものである
必要がある。例えば公知のヒツジ種用プライマーやヤギ
種用プライマーを用いることができる。
【００１４】ここで「天然皮革製品」とは、なめし処理
を施された天然皮全てを含み、染色処理、表面コーティ
ング処理の有無を問わない。また、最終製品の形に縫製
されたものおよび最終製品製造のための材料として供給
される皮革の両方を含むものとする。
を施された天然皮全てを含み、染色処理、表面コーティ
ング処理の有無を問わない。また、最終製品の形に縫製
されたものおよび最終製品製造のための材料として供給
される皮革の両方を含むものとする。
【００１５】本発明はさらに、ウシ種判定用プライマー
として有用なusi F284(配列番号１）および usi R457
(配列番号２）を提供する。本発明のウシ種判定用プラ
イマーで増幅される増幅産物のサイズは１７５ｂｐであ
る。本発明はさらにブタ種判定用プライマーとしてbuta
F284(配列番号３)およびbutaR457(配列番号４）を提供
する。本発明のブタ種判定用プライマーで増幅される増
幅産物のサイズは１７４ｂｐである。
として有用なusi F284(配列番号１）および usi R457
(配列番号２）を提供する。本発明のウシ種判定用プラ
イマーで増幅される増幅産物のサイズは１７５ｂｐであ
る。本発明はさらにブタ種判定用プライマーとしてbuta
F284(配列番号３)およびbutaR457(配列番号４）を提供
する。本発明のブタ種判定用プライマーで増幅される増
幅産物のサイズは１７４ｂｐである。
【００１６】本発明のプライマーは、ＤＮＡの保存性が
比較的良いとされているミトコンドリアＤＮＡ中におい
て、変異率が高く、生物種ごとに特有の配列を持ってい
るとされるチトクロムb遺伝子の配列を利用して、独自
に設計したものであり、非常に高い種特異性を示す。
比較的良いとされているミトコンドリアＤＮＡ中におい
て、変異率が高く、生物種ごとに特有の配列を持ってい
るとされるチトクロムb遺伝子の配列を利用して、独自
に設計したものであり、非常に高い種特異性を示す。
【００１７】本発明のプライマーは本発明の天然皮革製
品の判定方法のごとき、非常に高い種特異性の要求され
る判定において特に好適に用いられるが、その他、例え
ば生肉の判定等、比較的損傷を受けない状態にてＤＮＡ
試料を採取でき、したがってさほど高い種特異性が要求
されないＤＮＡ判定においても、好適に用いることがで
きる。
品の判定方法のごとき、非常に高い種特異性の要求され
る判定において特に好適に用いられるが、その他、例え
ば生肉の判定等、比較的損傷を受けない状態にてＤＮＡ
試料を採取でき、したがってさほど高い種特異性が要求
されないＤＮＡ判定においても、好適に用いることがで
きる。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明の方法において、判定対象
の天然皮革製品の試験片の表面皮膜を物理的処理により
除去する。ここで表面皮膜とは、皮革製品のいわゆるト
ップコートをいい、感触、光沢などを調整するために皮
革製品の最も付与される層である。革製品にはその用
途、目的により様々な材質のトップコートが施されてい
るが、本発明の方法においては、トップコートの材質、
厚みにかかわらず、最初にこれを除去する。
の天然皮革製品の試験片の表面皮膜を物理的処理により
除去する。ここで表面皮膜とは、皮革製品のいわゆるト
ップコートをいい、感触、光沢などを調整するために皮
革製品の最も付与される層である。革製品にはその用
途、目的により様々な材質のトップコートが施されてい
るが、本発明の方法においては、トップコートの材質、
厚みにかかわらず、最初にこれを除去する。
【００１９】本明細書において「物理的処理により除去
する」とは、薬品等を使用せずに表面皮膜を除去するこ
とを言い、具体的には皮膜が容易に剥がせる場合には、
適当な大きさに裁断した試験片の表面皮膜を例えばピン
セット等によりつまみ、これを剥がせばよい。表面皮膜
が容易に剥がすことのできないものである場合には、や
すり等で削り取ってもよい。
する」とは、薬品等を使用せずに表面皮膜を除去するこ
とを言い、具体的には皮膜が容易に剥がせる場合には、
適当な大きさに裁断した試験片の表面皮膜を例えばピン
セット等によりつまみ、これを剥がせばよい。表面皮膜
が容易に剥がすことのできないものである場合には、や
すり等で削り取ってもよい。
【００２０】次いで試験片を細切する。細切はハサミ、
ナイフ等、常套の手段により行えばよい。細切片の大き
さは限定的ではないが、例えばハサミで約２×２ｃｍ、
約２００ｍｇ程度の試験片を細切する場合に、１５〜３
０分間程度切断操作を行えばよい。
ナイフ等、常套の手段により行えばよい。細切片の大き
さは限定的ではないが、例えばハサミで約２×２ｃｍ、
約２００ｍｇ程度の試験片を細切する場合に、１５〜３
０分間程度切断操作を行えばよい。
【００２１】得られた細切試験片から、ＤＮＡを抽出す
る。ＤＮＡ抽出操作において、細切試験片をまず界面活
性剤等を含有するＤＮＡ抽出用液中へ分散させる。ここ
で用いるＤＮＡ抽出液としてはタンパク質分解酵素が含
有されていないものであれば特に限定的ではないが、界
面活性剤であるSDSやポリエチレングリコール、およびE
DTA、DTTを含有するものが例示され、市販のものがいず
れも好適に用いられる。
る。ＤＮＡ抽出操作において、細切試験片をまず界面活
性剤等を含有するＤＮＡ抽出用液中へ分散させる。ここ
で用いるＤＮＡ抽出液としてはタンパク質分解酵素が含
有されていないものであれば特に限定的ではないが、界
面活性剤であるSDSやポリエチレングリコール、およびE
DTA、DTTを含有するものが例示され、市販のものがいず
れも好適に用いられる。
【００２２】判定対象である天然皮革製品の種類や、染
色等の施された処理により、ＤＮＡ抽出液が染料で濃色
に汚染される場合がある。かかる場合にはＤＮＡ抽出液
を投入した後遠心分離し、上清を交換して再度細切試験
片を分散させる操作を抽出液の色が充分薄いものとなる
まで繰り返した後に次の操作へ移せば良い。
色等の施された処理により、ＤＮＡ抽出液が染料で濃色
に汚染される場合がある。かかる場合にはＤＮＡ抽出液
を投入した後遠心分離し、上清を交換して再度細切試験
片を分散させる操作を抽出液の色が充分薄いものとなる
まで繰り返した後に次の操作へ移せば良い。
【００２３】ＤＮＡ抽出液中へ分散させた細切試験片
へ、コラゲナーゼを作用させる。コラゲナーゼとして
は、市販のものがいずれも好適に用いられ、例えば、カ
ニ由来のコラゲナーゼ（C-C Biotech Corporation製)な
どが好適に用いられる。
へ、コラゲナーゼを作用させる。コラゲナーゼとして
は、市販のものがいずれも好適に用いられ、例えば、カ
ニ由来のコラゲナーゼ（C-C Biotech Corporation製)な
どが好適に用いられる。
【００２４】コラゲナーゼによる処理は、これに限定さ
れないがコラゲナーゼを投入した後３７℃で１０〜２０
時間、ゆっくり攪拌しながらインキュベーションする。
作用させるコラゲナーゼ量は限定的ではなく、試験片の
種類や状態によって適宜選択すればよい。例えば５０ｍ
ｇの細切試験片に対してコラゲナーゼ１０ユニットを１
０〜２０時間作用させればよい。コラゲナーゼを作用さ
せた後、細切試験片が溶解しているかどうかを目視確認
する。コラゲナーゼ１０ユニットによる処理によって試
験片が溶解していない場合には、さらに１０ユニットの
コラゲナーゼを追加して同様の処理を繰り返せばよい。
れないがコラゲナーゼを投入した後３７℃で１０〜２０
時間、ゆっくり攪拌しながらインキュベーションする。
作用させるコラゲナーゼ量は限定的ではなく、試験片の
種類や状態によって適宜選択すればよい。例えば５０ｍ
ｇの細切試験片に対してコラゲナーゼ１０ユニットを１
０〜２０時間作用させればよい。コラゲナーゼを作用さ
せた後、細切試験片が溶解しているかどうかを目視確認
する。コラゲナーゼ１０ユニットによる処理によって試
験片が溶解していない場合には、さらに１０ユニットの
コラゲナーゼを追加して同様の処理を繰り返せばよい。
【００２５】コラゲナーゼ処理により、目視で細切試験
片がＤＮＡ抽出液中へ１／３程度溶解したことが確認さ
れたら、試料を攪拌し、遠心分離により不溶物を沈殿さ
せる。得られる上清から、常套の方法、例えば当業者に
よく知られたフェノールとクロロホルムを用いた方法に
よりＤＮＡを単離、精製する。
片がＤＮＡ抽出液中へ１／３程度溶解したことが確認さ
れたら、試料を攪拌し、遠心分離により不溶物を沈殿さ
せる。得られる上清から、常套の方法、例えば当業者に
よく知られたフェノールとクロロホルムを用いた方法に
よりＤＮＡを単離、精製する。
【００２６】こうして天然皮革製品試験片より単離した
ＤＮＡを鋳型とし、種特異的プライマーを用い、ＰＣＲ
反応により種特異的ＤＮＡ断片を増幅させる。ウシ種由
来の天然皮革製品の判定のためには、配列番号１および
２の本発明のウシ種判定用プライマーが、そしてブタ種
由来の天然皮革製品の判定のためには、配列番号３およ
び４のブタ用プライマーが特に好適に用いられる。
ＤＮＡを鋳型とし、種特異的プライマーを用い、ＰＣＲ
反応により種特異的ＤＮＡ断片を増幅させる。ウシ種由
来の天然皮革製品の判定のためには、配列番号１および
２の本発明のウシ種判定用プライマーが、そしてブタ種
由来の天然皮革製品の判定のためには、配列番号３およ
び４のブタ用プライマーが特に好適に用いられる。
【００２７】ＰＣＲ反応は、当業者には良く知られてい
る方法であり、ＤＮＡの目的とする一部分のみを大量に
増幅させる方法である。種特異的プライマーを用いてＰ
ＣＲ反応を行えば、使用したプライマーがハイブリダイ
ズし得る配列を有する鋳型ＤＮＡのみが増幅され、他の
種由来の鋳型ＤＮＡは増幅されない。したがって、種特
異的プライマーを用いてＰＣＲ反応を行い、得られるＰ
ＣＲ増幅物を解析することによって、試験片が由来する
種の判定が可能となる。
る方法であり、ＤＮＡの目的とする一部分のみを大量に
増幅させる方法である。種特異的プライマーを用いてＰ
ＣＲ反応を行えば、使用したプライマーがハイブリダイ
ズし得る配列を有する鋳型ＤＮＡのみが増幅され、他の
種由来の鋳型ＤＮＡは増幅されない。したがって、種特
異的プライマーを用いてＰＣＲ反応を行い、得られるＰ
ＣＲ増幅物を解析することによって、試験片が由来する
種の判定が可能となる。
【００２８】ＰＣＲ反応の一般的手法については当業者
には良く知られており、一般的な教科書等にも記載され
ている。ＰＣＲ反応としては以下の実施例１に記載した
方法のみならず、いずれの公知の方法、あるいはそのい
かなる改変方法を用いて行ってもよい。
には良く知られており、一般的な教科書等にも記載され
ている。ＰＣＲ反応としては以下の実施例１に記載した
方法のみならず、いずれの公知の方法、あるいはそのい
かなる改変方法を用いて行ってもよい。
【００２９】ＰＣＲ反応により得られるＤＮＡ増幅物を
次いで解析する。ＤＮＡ断片の解析は公知のいずれの方
法によって行ってもよく、例えば当業者に良く知られた
アガロースゲル電気泳動法を用いて、蛍光物質で標識し
たＤＮＡ増幅物の電気泳動を行い、紫外線照射によって
これを検出すればよい。
次いで解析する。ＤＮＡ断片の解析は公知のいずれの方
法によって行ってもよく、例えば当業者に良く知られた
アガロースゲル電気泳動法を用いて、蛍光物質で標識し
たＤＮＡ増幅物の電気泳動を行い、紫外線照射によって
これを検出すればよい。
【００３０】本発明の方法は、従来経験に基づいて行わ
れていた天然皮革製品の同定にあたって科学的手法を導
入することが可能とするものである。本発明の方法は、
誰が行っても同一の結果が得られる、客観的な判定方法
である。本明細書ではウシ種判定用、ブタ種判定用の２
種類のプライマーのみを示したが、他の適当な種特異的
プライマーを用いれば、その他の皮革の判定も可能とな
る。以下実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
れていた天然皮革製品の同定にあたって科学的手法を導
入することが可能とするものである。本発明の方法は、
誰が行っても同一の結果が得られる、客観的な判定方法
である。本明細書ではウシ種判定用、ブタ種判定用の２
種類のプライマーのみを示したが、他の適当な種特異的
プライマーを用いれば、その他の皮革の判定も可能とな
る。以下実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例１】本発明のプライマーの種特異性を確認する
ために、ＤＮＡの抽出が比較的簡単な生肉（豚肉と牛
肉）からＤＮＡを抽出し、これらを鋳型とし、本発明の
プライマーを用いてＰＣＲ反応を行った。
ために、ＤＮＡの抽出が比較的簡単な生肉（豚肉と牛
肉）からＤＮＡを抽出し、これらを鋳型とし、本発明の
プライマーを用いてＰＣＲ反応を行った。
【００３１】生肉からのＤＮＡ抽出
試薬等は生化学用もしくは特級を使用した。また、使用
試薬、水、容器及び器具については全て滅菌済みのもの
を使用した。 １．豚肉および牛肉試料をそれぞれ200mg取り、エッペ
ンドルフテストチューブ2.0mlに投入した。 ２．DNA extraction buffer(DEB)（400mM Tris-HCl pH
8.0, 60mM EDTA, 1% SDS,0.1% PEG-400, 5mM DTT）を１
mlと、10U プロテイナーゼ Kを投入し、50℃で３時間以
上インキュベーションした。 ３．インキュベーション後の試料を撹拌し、12000rpm,
5分間遠心分離した。上清を別のチューブに移し、300μ
lのフェノールを加え、１５分間混合した。 ４．ここへ300μlのクロロホルムを加え、さらに５分間
混合した。 ５．2000rpm, １分間遠心分離した。上清を別のチュー
ブに移し、0℃で15分間保冷した。 ６．次いで13000rpm, 5分間遠心分離し、上清をＤＮＡ
回収用フィルター、Microcon-100を用いて精製した。 得られたＤＮＡ試料を30μlの10mM Tris-HCl(pH8.0)に
溶解して、ＰＣＲ反応に供した。
試薬、水、容器及び器具については全て滅菌済みのもの
を使用した。 １．豚肉および牛肉試料をそれぞれ200mg取り、エッペ
ンドルフテストチューブ2.0mlに投入した。 ２．DNA extraction buffer(DEB)（400mM Tris-HCl pH
8.0, 60mM EDTA, 1% SDS,0.1% PEG-400, 5mM DTT）を１
mlと、10U プロテイナーゼ Kを投入し、50℃で３時間以
上インキュベーションした。 ３．インキュベーション後の試料を撹拌し、12000rpm,
5分間遠心分離した。上清を別のチューブに移し、300μ
lのフェノールを加え、１５分間混合した。 ４．ここへ300μlのクロロホルムを加え、さらに５分間
混合した。 ５．2000rpm, １分間遠心分離した。上清を別のチュー
ブに移し、0℃で15分間保冷した。 ６．次いで13000rpm, 5分間遠心分離し、上清をＤＮＡ
回収用フィルター、Microcon-100を用いて精製した。 得られたＤＮＡ試料を30μlの10mM Tris-HCl(pH8.0)に
溶解して、ＰＣＲ反応に供した。
【００３２】ＰＣＲ反応
・プライマーの特異性の確認
本発明の各プライマー、即ちウシ種用プライマーusiF27
6及びusiR459（配列番号１および２）およびブタ種用プ
ライマーbutaF284及びbutaR459(配列番号３および４）
を用いた。増幅産物のサイズはウシ種 175bp、ブタ種
174bpである。上記で得られた各ＤＮＡ試料を鋳型と
し、以下のＰＣＲ反応プロトコルにて各プライマーを用
いて増幅させた。 ＰＣＲ反応液 滅菌水 38.2μl 10×ＰＣＲ緩衝液 5μl 10mM dNTP混合物 1.5μl プライマー 各1μl 50mM MgCl2 1.5μl Tween 20(1%w/v) 0.5μl ＤＮＡ試料 1μl PLATINUM Taq ＤＮＡ ポリメラーゼ 0.5μl(2.5ユニ
ット) ＰＣＲ反応には、インビトロジェン（株）のポリメラー
ゼおよびその付属試薬を使用した。また、ネガティブコ
ントロールとして、ＤＮＡ試料の代わりに１μｌの10mM
Tris-HCl(pH8.0)を投入したものを用いて同様に以下の
ＰＣＲサイクルに供した。
6及びusiR459（配列番号１および２）およびブタ種用プ
ライマーbutaF284及びbutaR459(配列番号３および４）
を用いた。増幅産物のサイズはウシ種 175bp、ブタ種
174bpである。上記で得られた各ＤＮＡ試料を鋳型と
し、以下のＰＣＲ反応プロトコルにて各プライマーを用
いて増幅させた。 ＰＣＲ反応液 滅菌水 38.2μl 10×ＰＣＲ緩衝液 5μl 10mM dNTP混合物 1.5μl プライマー 各1μl 50mM MgCl2 1.5μl Tween 20(1%w/v) 0.5μl ＤＮＡ試料 1μl PLATINUM Taq ＤＮＡ ポリメラーゼ 0.5μl(2.5ユニ
ット) ＰＣＲ反応には、インビトロジェン（株）のポリメラー
ゼおよびその付属試薬を使用した。また、ネガティブコ
ントロールとして、ＤＮＡ試料の代わりに１μｌの10mM
Tris-HCl(pH8.0)を投入したものを用いて同様に以下の
ＰＣＲサイクルに供した。
【００３３】ＰＣＲ反応条件
94℃ 5分間
94℃ 30秒間，64℃ 30秒間，72℃ 30秒間 35サイ
クル 94℃ 30秒間 64℃ 30秒間 72℃ 7分間 ＰＣＲ反応は、HYBAID PCR SPRINT temperature cyclin
g systemを使用して上記温度サイクルを実施した。
クル 94℃ 30秒間 64℃ 30秒間 72℃ 7分間 ＰＣＲ反応は、HYBAID PCR SPRINT temperature cyclin
g systemを使用して上記温度サイクルを実施した。
【００３４】ＰＣＲ反応終了後、得られたＰＣＲ産物を
1.8%アガロースS（（株）ニッポンジーン）のゲルを用
いた電気泳動により分析した。電気泳動条件は、100V、
25分間とした。分子量マーカーとして、Ready-Load 100
bp DNA ladderを同時に電気泳動にかけた。電気泳動
後、常套法により各バンドの位置を観察した。結果を図
１に示す。
1.8%アガロースS（（株）ニッポンジーン）のゲルを用
いた電気泳動により分析した。電気泳動条件は、100V、
25分間とした。分子量マーカーとして、Ready-Load 100
bp DNA ladderを同時に電気泳動にかけた。電気泳動
後、常套法により各バンドの位置を観察した。結果を図
１に示す。
【００３５】図１において、左より
１．分子量マーカー
２．牛肉由来ＤＮＡ×ウシ種判定用プライマー
３．豚肉由来ＤＮＡ×ブタ種判定用プライマー
４．豚肉由来ＤＮＡ×ウシ種判定用プライマー
５．牛肉由来ＤＮＡ×ブタ種判定用プライマー
６．ネガティブコントロール×ウシ種判定用プライマー
７．ネガティブコントロール×ウシ種判定用プライマー
８．分子量マーカー
を示す。
【００３６】図１より、牛肉より抽出したＤＮＡ試料
は、ウシ種判定用プライマーを用いた場合にのみ増幅物
が検出され、ブタ種判定用プライマーを用いた場合は増
幅されなかったことがわかる。同様に、豚肉より抽出し
たＤＮＡ試料では、ブタ種判定用プライマーを用いた場
合にのみ増幅物が検出され、ウシ種のプライマーを用い
た場合は増幅されなかった。これらのことより、本発明
のプライマーを用いて試料ＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ反
応を行い、得られるＰＣＲ産物を解析すれば、試料の由
来がウシ種およびブタ種のいずれであるかを特異的に区
別し得ることを確認した。
は、ウシ種判定用プライマーを用いた場合にのみ増幅物
が検出され、ブタ種判定用プライマーを用いた場合は増
幅されなかったことがわかる。同様に、豚肉より抽出し
たＤＮＡ試料では、ブタ種判定用プライマーを用いた場
合にのみ増幅物が検出され、ウシ種のプライマーを用い
た場合は増幅されなかった。これらのことより、本発明
のプライマーを用いて試料ＤＮＡを鋳型としてＰＣＲ反
応を行い、得られるＰＣＲ産物を解析すれば、試料の由
来がウシ種およびブタ種のいずれであるかを特異的に区
別し得ることを確認した。
【００３７】
【実施例２】上記本発明のプライマーを用いて、本発明
の方法により天然皮革製品のＤＮＡを判定した。試薬等
は生化学用もしくは特級を使用した。また、使用する試
薬や水、使用するチューブ、チップ、容器は可能なもの
については全て滅菌済みを使用した。牛革および豚革製
品の２×２ｃｍの試験片を用いた。 １．各試験片表面の表面皮膜であるトップコート層を剥
がし、残渣をやすりで削り取った。 ２．各試験片をそれぞれハサミで15分間程度切り刻み、
細切した。 ３．試料をそれぞれ50mg取り、2.0ｍｌ容のエッペンド
ルフテストチューブへ投入した。 ４．ＤＮＡ extraction buffer(DEB)（400mM Tris-HCl
pH8.0, 60mM EDTA, 1% SDS, 0.1% PEG-400, 5mM DTT）
を１ml投入した。室温で数回振到攪拌したところ、液中
へ染料が溶け出したため、12000rpm, 5分間遠心分離
し、上清を500μl捨てた後、再度DEBを500μl投入し、
室温で数回振到攪拌した。 ５．コラゲナーゼ（Crab hepatpancreas由来、C-Cバイ
オテク社 CCB301-1)10ユニットを投入し、37℃で12時
間、ゆっくり攪拌しながらインキュベーションした。イ
ンキュベーション後に試料を観察したところ、全体が溶
けていなかったため再度10ユニットのコラゲナーゼを追
加し、12時間インキュベーションした。
の方法により天然皮革製品のＤＮＡを判定した。試薬等
は生化学用もしくは特級を使用した。また、使用する試
薬や水、使用するチューブ、チップ、容器は可能なもの
については全て滅菌済みを使用した。牛革および豚革製
品の２×２ｃｍの試験片を用いた。 １．各試験片表面の表面皮膜であるトップコート層を剥
がし、残渣をやすりで削り取った。 ２．各試験片をそれぞれハサミで15分間程度切り刻み、
細切した。 ３．試料をそれぞれ50mg取り、2.0ｍｌ容のエッペンド
ルフテストチューブへ投入した。 ４．ＤＮＡ extraction buffer(DEB)（400mM Tris-HCl
pH8.0, 60mM EDTA, 1% SDS, 0.1% PEG-400, 5mM DTT）
を１ml投入した。室温で数回振到攪拌したところ、液中
へ染料が溶け出したため、12000rpm, 5分間遠心分離
し、上清を500μl捨てた後、再度DEBを500μl投入し、
室温で数回振到攪拌した。 ５．コラゲナーゼ（Crab hepatpancreas由来、C-Cバイ
オテク社 CCB301-1)10ユニットを投入し、37℃で12時
間、ゆっくり攪拌しながらインキュベーションした。イ
ンキュベーション後に試料を観察したところ、全体が溶
けていなかったため再度10ユニットのコラゲナーゼを追
加し、12時間インキュベーションした。
【００３８】６．目視判定にて試料のおよそ１／３が溶
解したことを確認し、次いで試料を撹拌し、12000rpm,
5分間遠心分離した。上清を別のチューブに移し、300μ
lのフェノールを加え、１５分間混合した。 ７．300μlのクロロホルムを加え、５分間混合した。 ８．2000rpm, １分間遠心分離した。上清を別のチュー
ブに移し、0℃で15分間保冷した。 ９．13000rpm, 5分間遠心分離し、上清をMicrocon-100
(宝酒造(株））を用いて精製してＤＮＡを得た。 ＤＮＡを30μlの10mM Tris-HCl(pH8.0)へ懸濁して、Ｐ
ＣＲ反応に供した。
解したことを確認し、次いで試料を撹拌し、12000rpm,
5分間遠心分離した。上清を別のチューブに移し、300μ
lのフェノールを加え、１５分間混合した。 ７．300μlのクロロホルムを加え、５分間混合した。 ８．2000rpm, １分間遠心分離した。上清を別のチュー
ブに移し、0℃で15分間保冷した。 ９．13000rpm, 5分間遠心分離し、上清をMicrocon-100
(宝酒造(株））を用いて精製してＤＮＡを得た。 ＤＮＡを30μlの10mM Tris-HCl(pH8.0)へ懸濁して、Ｐ
ＣＲ反応に供した。
【００３９】・ウシ及びブタの革の同定
ウシ革及びブタ革から上記の方法でＤＮＡを抽出したも
のを鋳型として、ＰＣＲによりＤＮＡを増幅した。ＰＣ
Ｒ反応は実施例１と同様にして行った。また、ネガティ
ブコントロールとしてDNA抽出物に代えてTris-HClバッ
ファーを投入した。得られたＰＣＲ産物を次いで実施例
１と同様にして電気泳動によって分離した。結果を図２
に示す。図２は、左のレーンより順に １. 分子量マーカー ２．牛革由来ＤＮＡ×ウシ種判定用プライマー ３．豚革由来ＤＮＡ×ブタ種判定用プライマー ４．豚革由来ＤＮＡ×ウシ種判定用プライマー ５．牛革由来ＤＮＡ×ブタ種判定用プライマー ６．ネガティブコントロール×ウシ種判定用プライマー ７．ネガティブコントロール×ブタ種判定用プライマー ８．分子量マーカー である。
のを鋳型として、ＰＣＲによりＤＮＡを増幅した。ＰＣ
Ｒ反応は実施例１と同様にして行った。また、ネガティ
ブコントロールとしてDNA抽出物に代えてTris-HClバッ
ファーを投入した。得られたＰＣＲ産物を次いで実施例
１と同様にして電気泳動によって分離した。結果を図２
に示す。図２は、左のレーンより順に １. 分子量マーカー ２．牛革由来ＤＮＡ×ウシ種判定用プライマー ３．豚革由来ＤＮＡ×ブタ種判定用プライマー ４．豚革由来ＤＮＡ×ウシ種判定用プライマー ５．牛革由来ＤＮＡ×ブタ種判定用プライマー ６．ネガティブコントロール×ウシ種判定用プライマー ７．ネガティブコントロール×ブタ種判定用プライマー ８．分子量マーカー である。
【００４０】図２から明かなように、ウシ革試験片より
抽出したＤＮＡは、ウシ種判定用プライマーを用いた場
合にのみ増幅され、ブタ種判定用プライマーでは増幅さ
れなかった。一方、ブタ革試験片より抽出したＤＮＡ
は、ブタ種判定用プライマーを用いた場合にのみ増幅さ
れ、ウシ種判定用プライマーでは増幅されなかった。
抽出したＤＮＡは、ウシ種判定用プライマーを用いた場
合にのみ増幅され、ブタ種判定用プライマーでは増幅さ
れなかった。一方、ブタ革試験片より抽出したＤＮＡ
は、ブタ種判定用プライマーを用いた場合にのみ増幅さ
れ、ウシ種判定用プライマーでは増幅されなかった。
【００４１】
【比較例１】皮革を肉からのＤＮＡ抽出方法と同様の操
作で処理してＤＮＡを抽出した。即ち、実施例２と同じ
牛及び豚革試験片をそれぞれ200mg取り、2.0ｍｌ容のエ
ッペンドルフテストチューブ2.0mlに投入した。次いで
ＤＮＡ extraction buffer(DEB)（400mM Tris-HCl pH8.
0, 60mM EDTA, 1% SDS, 0.1% PEG-400, 5mM DTT）を１m
lと、10U プロテイナーゼ Kを投入し、50℃で３時間以
上インキュベーションした。インキュベーション後、実
施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、抽出したＤＮＡを
本発明のプライマーを用いたＰＣＲ反応に供し、これを
電気泳動にかけた。電気泳動の結果、ブタ、ウシともに
生肉のＤＮＡは抽出され、測定可能であったが、ウシ、
ブタ共に皮革由来のＤＮＡは検出されなかった。
作で処理してＤＮＡを抽出した。即ち、実施例２と同じ
牛及び豚革試験片をそれぞれ200mg取り、2.0ｍｌ容のエ
ッペンドルフテストチューブ2.0mlに投入した。次いで
ＤＮＡ extraction buffer(DEB)（400mM Tris-HCl pH8.
0, 60mM EDTA, 1% SDS, 0.1% PEG-400, 5mM DTT）を１m
lと、10U プロテイナーゼ Kを投入し、50℃で３時間以
上インキュベーションした。インキュベーション後、実
施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、抽出したＤＮＡを
本発明のプライマーを用いたＰＣＲ反応に供し、これを
電気泳動にかけた。電気泳動の結果、ブタ、ウシともに
生肉のＤＮＡは抽出され、測定可能であったが、ウシ、
ブタ共に皮革由来のＤＮＡは検出されなかった。
【００４２】
<110> 財団法人日本紡績検査協会
Japan Spinners Inspecting Foundation
<120> 天然皮革製品の判定法
<130> 179951
<160> 4
<210> SEQ ID NO: １
<211> 23
<212> DNA
<213> cattle
<400> ATATGCACGT AGGACGAGGC TTA
<210> SEQ ID NO: 2
<211> 23
<212> DNA
<213> cattle
<400> GACTAAATTT GTGCCGATGT ATG
<210> SEQ ID NO: 3
<211> 20
<212> DNA
<213> pig
<400> TCATCCACGT AGGCCGAGGC
<210> SEQ ID NO: 4
<211> 21
<212> DNA
<213> pig
<400> TACGAGGTCT GTTCCGATATA AG
【図１】 本発明の実施例１の結果を示す、電気泳動結
果の写真である。
果の写真である。
【図２】 本発明の実施例２の結果を示す、電気泳動結
果の写真である。
果の写真である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 1/28 Ｇ
Ｆターム(参考） 2G045 AA29 DA12 DA13 FB02 FB05
2G052 AA35 AB20 AD12 AD32 AD46
EB11 EB13 EC02 ED14 ED17
FB02 GA22 JA09
4B024 AA11 CA01 CA20 HA11
4B063 QA18 QQ02 QQ42 QR16 QR32
QR62 QS14 QS16 QS25
Claims (7)
- 【請求項１】 天然皮革製品試験片の表面皮膜を、物理
的処理により除去する工程、該試験片を細切する工程、
細切した試験片へ、コラゲナーゼを作用させる工程、試
験片からＤＮＡを抽出する工程を含む、天然皮革製品か
らＤＮＡを抽出する方法。 - 【請求項２】 天然皮革製品試験片の表面皮膜を、物理
的処理により除去する工程、該試験片を細切する工程、
細切した試験片へ、コラゲナーゼを作用させる工程、試
験片からＤＮＡを抽出する工程、抽出したＤＮＡを鋳型
として、予測される動物種由来の種特異的プライマーを
用いたポリメラーゼチェインリアクションにより種特異
的ＤＮＡ断片を増幅する工程、増幅されたＤＮＡを分析
する工程を含む、天然皮革製品の判定方法。 - 【請求項３】 天然皮革製品が、ウシ、ブタ、ヒツジま
たはヤギ由来のものである、請求項１または２記載の方
法。 - 【請求項４】 種特異的プライマーが、usiF276(配列番
号１)およびusiR459(配列番号２）であり、ウシ由来天
然皮革製品を判定するための方法である、請求項２記載
の方法。 - 【請求項５】 種特異的プライマーが、butaF284(配列
番号３)およびbutaR457(配列番号４）であり、ブタ由来
天然皮革製品を判定するための方法である、請求項２記
載の方法。 - 【請求項６】 usiF276(配列番号１)およびusiR459(配
列番号２）で示される、ウシ種判定用プライマー。 - 【請求項７】 butaF284(配列番号３)およびbutaR457
(配列番号４）で示されるブタ種判定用プライマー。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001325068A JP3896272B2 (ja) | 2001-10-23 | 2001-10-23 | 天然皮革製品の判定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001325068A JP3896272B2 (ja) | 2001-10-23 | 2001-10-23 | 天然皮革製品の判定法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003125781A true JP2003125781A (ja) | 2003-05-07 |
| JP3896272B2 JP3896272B2 (ja) | 2007-03-22 |
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ID=19141697
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011024439A (ja) * | 2009-07-22 | 2011-02-10 | Tokyo Metropolitan Government | サンプル核酸の調製方法 |
| RU2454664C1 (ru) * | 2011-03-15 | 2012-06-27 | Татьяна Ильинична Гурьянова | Способ распознавания натуральной кожи и кожеподобных материалов |
| CN105823721A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-08-03 | 依波精品（深圳）有限公司 | 一种手表皮革表带的检测方法 |
| WO2016157250A1 (ja) * | 2015-03-30 | 2016-10-06 | 国立大学法人神戸大学 | 動物種鑑別方法及び装置 |
| CN109490274A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-19 | 齐鲁工业大学 | 一种用于研究酶在皮革中单向传质的实验装置及使用方法 |
| US20200087851A1 (en) * | 2018-09-17 | 2020-03-19 | Furs Ltd. | System and method for the production and treatment of fur, skin, and leather commodities |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6154431B2 (ja) * | 2015-06-03 | 2017-06-28 | 一般財団法人日本皮革研究所 | 皮革の動物種を判定する方法 |
-
2001
- 2001-10-23 JP JP2001325068A patent/JP3896272B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| RU2454664C1 (ru) * | 2011-03-15 | 2012-06-27 | Татьяна Ильинична Гурьянова | Способ распознавания натуральной кожи и кожеподобных материалов |
| WO2016157250A1 (ja) * | 2015-03-30 | 2016-10-06 | 国立大学法人神戸大学 | 動物種鑑別方法及び装置 |
| CN107532196A (zh) * | 2015-03-30 | 2018-01-02 | 国立大学法人神户大学 | 动物物种的鉴定方法和装置 |
| JPWO2016157250A1 (ja) * | 2015-03-30 | 2018-02-15 | 国立大学法人神戸大学 | 動物種鑑別方法及び装置 |
| CN112924699A (zh) * | 2015-03-30 | 2021-06-08 | 国立大学法人神户大学 | 动物物种的鉴定方法 |
| CN107532196B (zh) * | 2015-03-30 | 2021-07-27 | 国立大学法人神户大学 | 动物物种的鉴定方法 |
| CN105823721A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-08-03 | 依波精品（深圳）有限公司 | 一种手表皮革表带的检测方法 |
| US20200087851A1 (en) * | 2018-09-17 | 2020-03-19 | Furs Ltd. | System and method for the production and treatment of fur, skin, and leather commodities |
| CN109490274A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-19 | 齐鲁工业大学 | 一种用于研究酶在皮革中单向传质的实验装置及使用方法 |
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