JP2003102473A

JP2003102473A - 核酸結合用磁性担体およびその製造方法

Info

Publication number: JP2003102473A
Application number: JP2001300418A
Authority: JP
Inventors: Mikio Kishimoto; 幹雄岸本; Yoshiaki Nishiya; 西矢　　芳昭
Original assignee: Toyobo Co Ltd; Hitachi Maxell Ltd
Current assignee: Maxell Holdings Ltd; Toyobo Co Ltd
Priority date: 2001-09-28
Filing date: 2001-09-28
Publication date: 2003-04-08

Abstract

(57)【要約】【課題】核酸の結合性と磁界による捕集性にすぐれ、
かつ磁界を除去した状態での分散性と結合核酸の溶離性
にすぐれ、もって核酸の単離性能にすぐれたシリカ被覆
磁性粒子からなる核酸結合用磁性担体を提供する。【解決手段】平均粒子サイズが０．１〜０．５μｍの
強磁性マグネタイト粒子をシリカで被覆処理したのち、
非酸化性ガス雰囲気中で加熱処理して、２．３９〜１
１．９４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステッド）の保磁
力と３０〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／
ｇ）の飽和磁化を有し、かつ平均粒子サイズが１〜１０
μｍの球状形状を有する核酸結合用磁性担体を製造す
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、核酸を含有する生
物材料から核酸を抽出または精製したり、核酸増幅産物
を精製するために用いられる、シリカで被覆された強磁
性マグネタイト粒子からなる核酸結合用磁性担体に関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】磁性担体を使用した核酸の単離には、生
親和性分子が共有結合し得る重合性シラン被膜で被覆し
た超常磁性酸化鉄粒子を使用する方法（特開昭６０−１
５６４号公報）、磁気粒子表面をニトロセルロースなど
のセルロース誘導体で被覆した磁性担体を用い、これに
ＤＮＡやＲＮＡの１本鎖核酸を特異的に結合させる方法
（国際出願公開番号Ｗ０８６／０５８１５）などが公知
である。

【０００３】また、ポリカチオン性支持体の磁気アミン
マイクロスフェア（磁性微小球）と負電荷を有する糖リ
ン酸塩主鎖をイオン結合させて、核酸の精製、分離、ハ
イブリダイゼーションを行う方法（特表平１−５０２３
１９号公報）、内部コアポリマー粒子とこれに均一に被
覆している磁気的に応答する金属酸化物／ポリマーコー
テイングとよりなる磁性応答粒子を使用して、純粋な生
物材料を単離する方法（特表平２−５０１７５３号公
報）なども公知である。

【０００４】しかし、上記公知の方法は、磁性粒子表面
に官能基が付加される場合が多く、核酸の特異的吸着に
よる分別や測定には有利であるが、核酸を非特異的に多
く吸着し、回収量も高くなる固相担体には不向きであ
る。

【０００５】一般に、核酸の単離のために、表面被覆し
た磁性粒子を固相担体とする場合、直径２０μｍ以上の
大きな粒子では、弱い磁界でも応答するが、沈降が速く
操作性に劣り、また比表面積が小さいため、核酸の結合
効率が低くなる。一方、直径０．１μｍ以下の小さな粒
子では、比表面積が大きいため、核酸などの結合効率が
向上し、かつ沈殿しにくく操作性も良好であるが、磁界
に対する応答性が低下し、磁界により担体を捕集するの
に大きな磁界が必要となる。

【０００６】このような観点より、最近になり、核酸を
非特異的に多く吸着し、回収量も高くなる固相担体とし
て、超常磁性金属酸化物をシリカ粒子からなる無機多孔
性壁物質で複合化した磁性シリカ粒子（特開平９−１９
２９２号公報、特開２００１−７８７６１号公報）や、
多磁区からなる金属または金属酸化物よりなる複数の芯
微粒子を珪素酸化物よりなる被膜または微粒子で被覆し
た磁性シリカ粒子（特開２０００−２５６３８８号公
報）などが提案されている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】これらの磁性シリカ粒
子は、その比表面積を特定範囲に設定したり、細孔直径
や細孔容積などを特定範囲に設定することで、核酸結合
用磁性担体として適した性能を得ようとしたものであ
り、核酸を非特異的に多く吸着し、回収量も高くなる固
相担体として、それなりの成果が期待されている。

【０００８】本発明は、上記の磁性シリカ粒子と同様
に、磁性粒子をシリカで被覆した構造の核酸結合用磁性
担体において、担体全体の粒子形状と磁気特性に着目
し、これらを規制して、核酸の結合性と磁界による捕集
性にすぐれ、かつ磁界を除去した状態での分散性と結合
核酸の溶離性にすぐれ、もって核酸の単離や精製の効率
を向上しうる核酸結合用磁性担体を得ることを目的とし
ている。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するため、鋭意検討した結果、磁性粒子として特
定粒子サイズの強磁性マグネタイト粒子を用い、この粒
子をシリカで被覆した構造の磁性担体であって、この担
体の粒子形状とともに、担体全体の保磁力と飽和磁化を
特定範囲に設定したときに、またこのような磁気特性の
設定のために、上記磁性粒子をシリカで被覆したのち特
定の加熱処理を施したり、さらにはシリカで被覆する際
に特定の手法を採用したときに、核酸の結合性と磁界に
よる捕集性にすぐれ、かつ磁界を除去した状態での分散
性と結合核酸の溶離性にすぐれた核酸結合用磁性担体が
得られ、核酸の単離や精製の効率を飛躍的に向上できる
ことを見い出し、本発明を完成するに至ったものであ
る。

【００１０】すなわち、本発明は、平均粒子サイズが
０．１〜０．５μｍの強磁性マグネタイト粒子がシリカ
で被覆されてなり、２．３９〜１１．９４ｋＡ／ｍ（３
０〜１５０エルステッド）の保磁力と３０〜６０Ａ・ｍ
²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／ｇ）の飽和磁化を有し、
かつ平均粒子サイズが１〜１０μｍの球状形状を有する
ことを特徴とする核酸結合用磁性担体に係るものであ
る。

【００１１】また、本発明は、平均粒子サイズが０．１
〜０．５μｍの強磁性マグネタイト粒子をシリカで被覆
処理したのち、非酸化性ガス雰囲気中で加熱処理して、
２．３９〜１１．９４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステ
ッド）の保磁力と３０〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６
０ｅｍｕ／ｇ）の飽和磁化を有し、かつ平均粒子サイズ
が１〜１０μｍの球状形状を有する核酸結合用磁性担体
を製造することを特徴とする核酸結合用磁性担体の製造
方法に係るものである。

【００１２】とくに、本発明は、上記の非酸化性ガス雰
囲気が、不活性ガス雰囲気、真空雰囲気または還元性ガ
ス雰囲気である上記構成の核酸結合用磁性担体の製造方
法、さらに上記の平均粒子サイズが０．１〜０．５μｍ
の強磁性マグネタイト粒子を水溶液中での酸化反応によ
り生成し、この強磁性マグネタイト粒子を乾燥させるこ
となく水を含んだ懸濁状態のままシリカで被覆処理する
上記構成の核酸結合用磁性担体の製造方法を、それぞ
れ、提供できるものである。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明の核酸結合用磁性担体にお
いて、保磁力は、核酸を結合させた磁性担体からの核酸
の分離性と密接な関係にある。すなわち、捕集する際に
印加された磁界により、磁性担体はある程度磁化される
ため、保磁力が大きくなると磁性担体間の凝集力が大き
くなり、磁性担体から核酸を溶離する際の磁性担体の分
散性が低下して、核酸の溶離性が低下し、結局、核酸の
単離性能が低下する。したがって、保磁力の値は、磁性
担体の捕集性などとも相関する適正な粒子サイズを勘案
したうえで、できるだけ小さい方が好ましい。

【００１４】本発明者らは、上記観点から、鋭意検討し
た結果、磁性担体の保磁力としては２．３９〜１１．９
４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステッド）の範囲内、と
くに好ましくは３．１９〜９．５６ｋＡ／ｍ（４０〜１
２０エルステッド）の範囲内であれば、磁性担体の捕集
性などとともに、磁性担体間の凝集力の低下により磁性
担体の分散性に非常に好結果が得られることを見い出し
た。

【００１５】また、本発明者らは、このような低い保磁
力を実現するには、第一に、磁性粒子として強磁性マグ
ネタイト粒子を使用するのが有効であること、また第二
に、この強磁性マグネタイト粒子の表面をシリカで被覆
処理したのち、非酸化性ガス雰囲気中で加熱処理を行っ
て、強磁性マグネタイト粒子の結晶性と結晶子サイズを
最適化するのがさらに有効であることを見い出した。

【００１６】つぎに、飽和磁化は、核酸を結合した磁性
担体の捕集性と密接に関係し、この飽和磁化が大きいほ
ど、磁界に対する応答性が向上し、磁性担体を懸濁液中
から捕集する際に、短時間で効率良く捕集できる。つま
り、飽和磁化の値は、核酸の結合性能を考慮したうえ
で、できるだけ大きい方が望ましい。

【００１７】本発明者らは、上記観点から、鋭意検討し
た結果、磁性担体の飽和磁化としては、３０〜６０Ａ・
ｍ²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／ｇ）の範囲内、とくに
好ましくは３５〜５０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３５〜５０ｅｍ
ｕ／ｇ）の範囲内にあるのがよいことを見い出した。つ
まり、磁性担体の飽和磁化を上記範囲内に設定すると核
酸の結合性と磁性担体の捕集性にともに好結果が得られ
る。飽和磁化が３０Ａ・ｍ²／ｋｇ未満となると、磁界
に対する応答性が低下して、捕集性が劣化し、６０Ａ・
ｍ²／ｋｇを超えてしまうと、シリカの被覆量が不足し
て、シリカの均一形成が困難になるため、核酸の結合性
能が低下する。

【００１８】また、本発明者らは、このような高い飽和
磁化を実現するには、第一に、磁性粒子として強磁性マ
グネタイト粒子を用いるのが有効であること、第二に、
この強磁性マグネタイト粒子の表面をシリカで均一に被
覆して、磁化を持たないシリカの含有量を極力少なくす
ることが有効であること、さらに第三に、このようにシ
リカ被覆したのち、非酸化性ガス雰囲気中で加熱処理を
行って、強磁性マグネタイト粒子の結晶性を向上させる
のが有効であることを見い出した。すなわち、これらの
手段により、磁性担体の保磁力を前記範囲内に維持しな
がら、磁性担体の飽和磁化を上記範囲内に容易に設定す
ることが可能となる。

【００１９】つぎに、磁性担体の粒子サイズについて
は、平均粒子サイズとして、１〜１０μｍの範囲、とく
に２〜５μｍの範囲にあるのが最適であることを見い出
した。平均粒子サイズが１０μｍより大きいと、磁性担
体粒子が沈降しやすく、また比表面積が小さくなるた
め、核酸の結合性能が低下する。また、平均粒子サイズ
が１μｍより小さくなると、磁界に対する応答性が低下
して、磁界による磁性担体の捕集性が低下することにな
る。

【００２０】本発明の核酸結合用磁性担体において、核
酸の結合性／磁性担体の捕集性と、核酸の溶離性／磁性
担体の分散性とは、磁性担体の上記粒子サイズのみにて
達成されるのではなく、前記した２．３９〜１１．９４
ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステッド）の保磁力と３０
〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／ｇ）の飽和
磁化を同時に満たすことにより、はじめて、達成できる
ものである。つまり、これらの特性をすべて満たすこと
により、核酸の抽出や精製、あるいは核酸増幅産物の精
製に、最適な磁性担体となるのである。

【００２１】つぎに、シリカ被覆の対象となる磁性粒子
について、説明する。本発明者の一人は、これまで磁気
記録媒体用磁性粒子の開発を長年行ってきており、その
経験に基づいて、各種の磁性粒子につき、核酸結合用磁
性担体としての適合性を検討してきた。これまで検討し
た主な磁性粒子は、磁気記録の分野で一般に使用されて
いる、マグヘマイト粒子（γ−Ｆｅ₂Ｏ₃）、マグネタ
イト粒子（Ｆｅ₃Ｏ₄）、マンガン亜鉛フェライト粒子
（Ｍｎ_1-xＺｎ_xＦｅ₂Ｏ₄）、金属鉄粒子（α−Ｆ
ｅ）、鉄−コバルト合金粒子（ＦｅＣｏ）、バリウムフ
ェライト粒子（ＢａＦｅ₁₂Ｏ₁₉）などである。ただし、
これらの粒子組成は、結晶構造を維持する範囲で上記化
学量論的組成から外れていてもよい。

【００２２】これらの磁性粒子をシリカで被覆し、核酸
単離用としての性能を調べた。最初に、磁性粒子の粒子
形状は粒状ないし楕円状であるのがよく、磁気記録媒体
に通常使用されている針状や板状では、シリカで被覆し
たのちも形状異方性により高い保磁力を発現し、好まし
くない。したがって、板状粒子として知られるバリウム
フェライト粒子は、本発明の用途に適さない。

【００２３】つぎに、金属鉄や鉄−コバルト合金粒子な
どの金属磁性粒子は、高飽和磁化が得られ、かつ粒子形
状を粒状ないし楕円状にすることにより、強磁性酸化物
粒子より低い保磁力を得ることができる。しかしなが
ら、これらの金属磁性粒子は、水分に対して不安定であ
り、水に長時間浸漬すると飽和磁化が低下するため、水
媒体中での核酸単離を目的とした本発明の用途には適さ
ない。また、マンガン亜鉛フェライト粒子は、低い保磁
力が得られやすい反面、鉄のみからなる強磁性酸化鉄粒
子に比べて、飽和磁化が低いという欠点がある。

【００２４】これらの観点より、本発明に適用する磁性
粒子としては、マグヘマイト粒子とマグネタイト粒子
（Ｆｅ₃Ｏ₄）が特性的に最もバランスがとれており、
その中でも、とくに、マグネタイト粒子は、マグヘマイ
ト粒子よりも飽和磁化が１５％程度大きく、かつ保磁力
も低く、本発明の目的に最適であることを見い出した。
また、本発明者の一人は、これまで記録用磁性材料の開
発に長年携わってきた経験から、上記マグネタイト粒子
の保磁力と飽和磁化は、見かけの粒子サイズよりも、粒
子の結晶性や結晶子サイズに依存するという知見を得て
いる。

【００２５】このように、本発明においては、シリカ被
覆の対象となる磁性粒子にマグネタイト粒子（Ｆｅ₃Ｏ
₄）を用い、とくにこの粒子として以下の方法で生成で
きる平均粒子サイズが０．１〜０．５μｍのマグネタイ
ト粒子を用い、シリカ被覆後の平均粒子サイズが前記し
た１〜１０μｍの範囲内となり、かつシリカ被覆後の保
磁力および飽和磁化が前記範囲内となるようにした磁性
担体が、核酸結合用としてすぐれた性能を発揮すること
を見い出したものである。ただし、本発明において、シ
リカ被覆の対象となる磁性粒子として、上記マグネタイ
ト粒子の一部をマグヘマイト粒子（γ−Ｆｅ₂Ｏ₃）に
置換する、つまりマグネタイト粒子にマグヘマイト粒子
を一部混合した磁性粒子を使用するなどの適宜の変更態
様をとることも、場合により、可能である。

【００２６】本発明において、上記のマグネタイト粒子
は、以下のように生成できる。硫酸第一鉄（ＦｅＳＯ₄
・６Ｈ₂Ｏ）を溶解した２価のＦｅイオン水溶液に、Ｎ
ａＯＨ水溶液を滴下して、水酸化第一鉄〔Ｆｅ（ＯＨ）
₂〕を析出する。つぎに、この水酸化第一鉄の懸濁液の
ＰＨを９〜１０に調整したのち、空気を吹き込んで酸化
することにより、マグネタイト粒子を成長させる。上記
懸濁液のＰＨが９より小さいと、マグネタイトの析出が
遅くなり、１０より大きいと、ゲーサイト（α−ＦｅＯ
ＯＨ）が生成しやすくなる。

【００２７】空気吹き込み速度と懸濁液の保持温度は、
マグネタイト粒子の粒子サイズに大きく影響する。通
常、空気吹き込み速度が大きくなると、マグネタイトの
結晶成長が速くなり、粒子サイズが小さくなり、空気吹
き込み速度が小さすぎたり大きすぎたりすると、マグネ
タイト以外の粒子が混在析出しやすい。また、保持温度
が高くなるほど、マグネタイトが結晶成長しやすくな
り、粒子サイズが大きくなり、保持温度が低すぎると、
ゲーサイト（α−ＦｅＯＯＨ）粒子が生成しすい。この
ため、空気吹き込み速度は、１００〜４００リットル／
時間の範囲とし、懸濁液の保持温度は、５０〜９０℃の
範囲とするのが望ましい。

【００２８】本発明においては、上記のような水溶液中
での酸化反応により、平均粒子サイズが０．１〜０．５
μｍの強磁性マグネタイト粒子を生成し、これを十分に
水洗したのち、シリカで被覆処理する。その際、上記水
洗後、乾燥させることなく、水を含んだ懸濁状態のまま
シリカで被覆処理するのが望ましい。これは、乾燥状態
のものを使用するよりも、分散性が良好となり、またシ
リカに対する濡れ性も良くなり、シリカを均一に被覆す
ることができるからである。

【００２９】最初に、水洗した未乾燥状態の強磁性マグ
ネタイト粒子の懸濁液に、ケイ酸ナトリウム（水ガラ
ス）を添加して、溶解させる。ケイ酸ナトリウムの添加
量は、シリカ（ＳｉＯ₂）に換算して、マグネタイト粒
子に対し６０〜１２０重量％、とくに７０〜１１０重量
％とするのが好ましい。ケイ酸ナトリウムの添加量が少
なすぎると、大きな飽和磁化が得られやすい反面、マグ
ネタイト粒子を均一に被覆することが困難になり、また
上記添加量が多すぎると、飽和磁化が低下して、磁性担
体としたときに、磁界に対する応答性が低下する。

【００３０】上記の懸濁液とは別に、有機溶媒に乳化剤
として界面活性剤を溶解した溶液を調製する。有機溶媒
は、水に対する溶解度の低いものが好ましく、たとえ
ば、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン、イ
ソヘキサン、シクロヘキサン、酢酸エチル、酢酸ブチル
などが好ましく用いられる。また、界面活性剤は、ソル
ビタン脂肪酸エステル系の界面活性剤、たとえば、ソル
ビタンモノステアレート、ソルビタンモノラウレート、
ソルビタンモノパルミレート、ソルビタンモノオレー
ト、ソルビタントリオレートなどが好ましく用いられ
る。

【００３１】つぎに、この界面活性剤を溶解した溶液
に、上記ケイ酸ナトリウムを溶解した強磁性マグネタイ
ト粒子の懸濁液を混合し、ホモミキサー、ホモジナイザ
ーなどの強力な攪拌機を用いて攪拌し、Ｗ／Ｏ型のエマ
ルジョンを調製する。攪拌は、攪拌機の能力にもよる
が、通常は、１〜３０分程度の撹拌時間とするのがよ
い。攪拌時間が短すぎると、均一サイズのエマルジョン
粒子を得にくくなり、逆に長すぎると、攪拌エネルギー
により強磁性マグネタイト粒子とシリカが反応して、本
発明の目的とするのとは異なる構造の粒子が生成しやす
い。

【００３２】このようにして調製されるエマルジョン粒
子は、有機溶媒中で強磁性マグネタイト粒子とケイ酸ナ
トリウム水溶液が界面活性剤により包み込まれたような
構造を有している。このエマルジョン粒子の懸濁液を、
ついで、アンモニウム塩を溶解した水溶液に滴下する。
ケイ酸ナトリウム水溶液はアルカリ性のため、ケイ酸ナ
トリウムはアルカリ領域で水に溶解しているが、中性領
域では不溶性となる。このため、アンモニウム塩を溶解
した水溶液に滴下して中和すると、ケイ酸ナトリウムは
シリカとなって析出し、その結果、強磁性マグネタイト
粒子の粒子表面が上記析出シリカの被膜で覆われた、球
状粒子が生成する。

【００３３】このシリカ析出工程において、エマルジョ
ン粒子の懸濁液をアンモニウム塩水溶液に少しづつ滴下
し、上記析出を徐々に行わせるのが望ましい。滴下時間
は、１０分〜３時間が好ましい。短すぎると、シリカ被
膜に欠陥が生じたり、表面に凹凸が生じやすくなり、長
すぎると、特性上とくに問題とならないが、作業時間が
長くなり、メリットが少ない。アンモニウム塩として
は、硫酸塩や炭酸塩などが好ましく、具体的には、炭酸
アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、硫酸アンモニウ
ムなどが好適なものとして使用できる。

【００３４】このように生成される粒子は、純水で十分
に水洗したのち、ろ過し、空気中、適宜の温度で乾燥す
る。この状態の粒子は、平均粒子サイズが１〜１０μｍ
の球状粒子で、強磁性マグネタイト粒子がシリカで被覆
された構造を有している。この球状粒子の保磁力や飽和
磁化などの磁気特性は、その後の加熱処理により大きく
変化し、加熱処理条件を適正に選択することにより、前
記した最適の保磁力および飽和磁化に容易に設定するこ
とができる。

【００３５】すなわち、水溶液中での酸化反応により生
成したマグネタイト粒子は、見掛けの粒子サイズが同じ
でも、結晶性や結晶子サイズが異なり、この結晶性や結
晶子サイズはその後の加熱処理にてさらに変化する。上
記球状粒子の保磁力や飽和磁化などの磁気特性は、この
ような結晶性や結晶子サイズに大きく依存しており、こ
れらを制御することにより、所望の磁気特性に設定でき
る。

【００３６】なお、上記の「結晶子サイズ」は、１個の
マグネタイト粒子を構成する個々の結晶のサイズを意味
し、Ｘ線回折による回折ピークの半値幅から求めること
ができる。また、上記の「結晶性」は、これを定量的に
求めることは困難であるが、Ｘ線回折や電子線回折によ
り定性的に求めることができる。

【００３７】本発明において、加熱処理は、非酸化性ガ
ス雰囲気中で行われる。これは、空気中や酸素ガス中な
どの酸化性ガス雰囲気中で加熱処理した場合、シリカ被
覆層の微細な欠陥などを通して酸素が侵入し、マグネタ
イト粒子が酸化されて、飽和磁化の低いマグヘマイト
（γ−Ｆｅ₂Ｏ₃）や、さらには非磁性のヘマタイト
（α−Ｆｅ₂Ｏ₃）になるおそれがあるためである。

【００３８】非酸化性ガス雰囲気とは、不活性ガス雰囲
気、真空雰囲気または還元性ガス雰囲気である。不活性
ガスには窒素ガスやアルゴンガスなどが、還元性ガスに
は水素ガス、一酸化炭素ガス、都市ガスなどがある。な
お、還元性ガス雰囲気中での加熱処理では、過度に還元
されて金属状態にまで還元されるのを防止するため、水
蒸気を含ませながら加熱処理するのが望ましい。

【００３９】加熱処理条件としては、処理温度が通常２
００〜８００℃、処理時間が、上記の処理温度によって
異なるが、通常１〜１０時間であるのがよい。処理温度
が低すぎたり処理時間が短すぎると、十分な処理効果が
得られず、また、処理温度が高すぎたり処理時間が長す
ぎると、シリカ被覆粒子間で焼結が生じ、粒子の凝集体
が発生しやすくなるため、いずれも好ましくない。

【００４０】上記の範囲内で、処理温度を高くするほ
ど、また処理時間を長くするほど、結晶性が向上し、結
晶子が成長する。一般に、結晶性が向上すると飽和磁化
と保磁力はともに増加し、結晶子が成長すると飽和磁化
は増加するが、保磁力は低下する傾向にある。核酸単離
用の磁性担体には、既述のとおり、低い保磁力と大きな
飽和磁化を有しているのが望ましい。結晶性と結晶子サ
イズは、マグネタイト粒子の生成条件によっても異なる
ため、加熱処理条件も、マグネタイト粒子の生成条件と
の兼ね合いで、最適の条件が選択される。

【００４１】このように加熱処理を施すことにより、強
磁性マグネタイト粒子がシリカで被覆された、平均粒子
サイズが１〜１０μｍの球状粒子で、２．３９〜１１．
９４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステッド）の保磁力
と、３０〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／
ｇ）の飽和磁化を有する磁性担体が得られる。本発明
は、このように製造される磁性担体を、核酸を抽出また
は精製し、あるいは核酸増幅産物を精製するための核酸
結合用磁性担体としたものである。

【００４２】本発明の核酸結合用磁性担体を使用して、
核酸を単離、精製するには、公知の方法に準じて、たと
えば、上記の磁性担体と核酸を含有する材料とさらに
核酸抽出溶液を混合して、上記の磁性担体に核酸を結合
する工程、核酸を結合した上記の磁性担体を磁界を用
いて懸濁液から分離する工程、分離した磁性担体から
核酸を溶離する工程などにより、行うことができる。

【００４３】上記の工程では、磁性担体と核酸を含有
する材料とさらに核酸抽出溶液との均一混合のために、
たとえば、市販のボルテックスミキサーが用いられ、ま
た混合チューブを軽く転倒攪拌したり振とうする方式な
どが採用される。これにより核酸は磁性担体表面のシリ
カ被覆層に結合する。

【００４４】上記の工程は、磁石を使用して、実施す
る。磁石には、たとえば、磁束密度が約３００ガウス程
度の磁石を用いることができる。具体的には、核酸を結
合した磁性担体の懸濁液を含むチューブに磁石を近づ
け、上記の磁性担体をチューブ側壁に集めて、核酸抽出
溶液などの液と分離する。

【００４５】上記の工程においては、上記のように分
離した核酸を結合した磁性担体を、たとえば、約７０％
のエタノール水溶液にて数回洗浄したのち、乾燥する。
その後、滅菌水やＴＥ緩衝液などの低イオン濃度の溶液
を添加することにより、上記の磁性担体に結合した核酸
を溶離する。

【００４６】以上のように、本発明においては、特定の
強磁性マグネタイト粒子を使用し、これをシリカで表面
被覆して、その粒子サイズ、保磁力および飽和磁化を最
適化する構成としたことにより、核酸の結合性と磁界に
よる捕集性にすぐれ、かつ磁界を除去した状態での分散
性と結合核酸の溶離性にすぐれた核酸結合用磁性担体が
得られ、これによれば多量の核酸を非特異的に効率良く
抽出または精製でき、また核酸増幅産物を効率良く精製
することができる。

【００４７】

【実施例】以下に、本発明の実施例を記載して、より具
体的に説明する。ただし、本発明はこれらの実施例にの
み限定されるものではない。なお、強磁性マグネタイト
粒子とこれをシリカ被覆した磁性担体の粒子サイズは、
いずれも、透過型電子顕微鏡写真上、約３００個の粒子
サイズを測定して、その平均粒子サイズから求めたもの
である。

【００４８】実施例１＜強磁性マグネタイト粒子の生成＞１００ｇの硫酸第一
鉄（ＦｅＳＯ₄・６Ｈ₂Ｏ）を１，０００ｃｃの純水に
溶解した。この硫酸第一鉄と等倍モルになるように、２
８．８ｇの水酸化ナトリウムを５００ｃｃの純水に溶解
した。硫酸第一鉄水溶液を攪拌しながら、１時間かけて
水酸化ナトリウム水溶液を滴下し、水酸化第一鉄の沈殿
物を生成した。滴下終了後、攪拌しながら、水酸化第一
鉄の沈殿物を含む懸濁液の温度を８５℃まで昇温したの
ち、２００リットル／時間の速度で、エアーポンプを使
用して空気を吹き込みながら、８時間酸化し、強磁性マ
グネタイト粒子を生成した。この粒子は、ほぼ球形であ
り、平均粒子サイズは約０．２８μｍであった。

【００４９】＜強磁性マグネタイト粒子のシリカ被覆処
理＞上記の強磁性マグネタイト粒子の懸濁液を、純水に
より十分に水洗したのち、乾燥させることなく、懸濁液
の全重量が４６８ｇになるように、純水を加えた。この
懸濁液に７０ｇのケイ酸ナトリウムを溶解した。これと
は別に、１，５００ｃｃのヘキサンに界面活性剤として
２２．５ｇのソルビタンモノラウレートを溶解した。こ
の界面活性剤の溶液と、上記のケイ酸ナトリウムを溶解
したマグネタイト粒子の懸濁液とを混合し、ホモミキサ
ーを使用して、１０分間攪拌分散し、エマルジョン分散
液を調製した。１，０００ｇの硫酸アンモニウムを４，
５００ｃｃの純水に溶解し、この溶液を攪拌しながら、
これに上記のエマルジョン分散液を約１時間かけて滴下
した。その後さらに２時間攪拌を行って中和反応させ、
強磁性マグネタイト粒子を包含するシリカ被膜を析出さ
せた。

【００５０】＜シリカ被覆処理後の加熱処理＞強磁性マ
グネタイト粒子を上記のようにシリカ被覆処理したの
ち、純水で十分に水洗し、ろ過後、空気中、６０℃で８
時間乾燥した。つぎに、このシリカ被覆強磁性マグネタ
イト粒子の結晶性や粒子を構成する結晶子のサイズを制
御して、所望の磁気特性を得るために、管状炉を使っ
て、窒素ガス気流中、６００℃で２時間加熱処理した。
このように加熱処理したのち、窒素ガスを流しながら、
室温まで冷却し、目的とする核酸結合用磁性担体を取り
出した。図１は、この核酸結合用磁性担体の電子顕微鏡
写真（倍率：１，０００倍）を示したものである。この
粒子は、平均粒子サイズが約５μｍの球状形状であり、
磁気特性としては、保磁力が５．１８ｋＡ／ｍ（６５エ
ルステッド）で、飽和磁化が４７．１Ａ・ｍ²／ｋｇ
（４７．１ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５１】実施例２強磁性マグネタイト粒子の生成工程において、水酸化第
一鉄の沈殿物を含む懸濁液の温度を８５℃から６０℃に
変更した以外は、実施例１と同様にして、平均粒子サイ
ズが０．１３μｍの強磁性マグネタイト粒子を生成し
た。この強磁性マグネタイト粒子を用い、実施例１と同
様にして、シリカ被覆処理および加熱処理を行い、核酸
結合用磁性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイ
ズが約４μｍの球状で、保磁力が６．５３ｋＡ／ｍ（８
２エルステッド）、飽和磁化が４５．３Ａ・ｍ²／ｋｇ
（４５．３ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５２】実施例３強磁性マグネタイト粒子の生成工程において、水酸化第
一鉄の沈殿物を含む懸濁液の温度を８５℃から９８℃に
変更した以外は、実施例１と同様にして、平均粒子サイ
ズが０．４２μｍの強磁性マグネタイト粒子を生成し
た。この強磁性マグネタイト粒子を用い、実施例１と同
様にして、シリカ被覆処理および加熱処理を行い、核酸
結合用磁性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイ
ズが約７μｍの球状で、保磁力が３．６６ｋＡ／ｍ（４
６エルステッド）、飽和磁化が４７．５Ａ・ｍ²／ｋｇ
（４７．５ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５３】実施例４強磁性マグネタイト粒子のシリカ被覆処理工程におい
て、強磁性マグネタイト粒子の懸濁液へのケイ酸ナトリ
ウムの溶解量を７０ｇから５８ｇに変更した以外は、実
施例１と同様にして、シリカ被覆処理を行い、その後、
実施例１と同様にして、加熱処理を行い、核酸結合用磁
性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイズが約４
μｍの球状で、保磁力が５．４１ｋＡ／ｍ（６８エルス
テッド）、飽和磁化が５１．２Ａ・ｍ²／ｋｇ（５１．
２ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５４】実施例５強磁性マグネタイト粒子のシリカ被覆処理工程におい
て、強磁性マグネタイト粒子の懸濁液へのケイ酸ナトリ
ウムの溶解量を７０ｇから９０ｇに変更した以外は、実
施例１と同様にして、シリカ被覆処理を行い、その後、
実施例１と同様にして、加熱処理を行い、核酸結合用磁
性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイズが約６
μｍの球状で、保磁力が４．８６ｋＡ／ｍ（６１エルス
テッド）、飽和磁化が４０．３Ａ・ｍ²／ｋｇ（４０．
３ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５５】実施例６シリカ被覆処理後の加熱処理工程において、窒素ガス気
流中での熱処理条件を６００℃，２時間から８００℃、
２時間に変更した以外は、実施例１と同様にして、加熱
処理を行い、核酸結合用磁性担体を得た。この磁性担体
は、平均粒子サイズが約５μｍの球状で、保磁力が２．
６３ｋＡ／ｍ（３３エルステッド）、飽和磁化が４７．
８Ａ・ｍ²／ｋｇ（４７．８ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５６】実施例７シリカ被覆処理後の加熱処理工程において、窒素ガス気
流中での熱処理条件を６００℃，２時間から４００℃、
２時間に変更した以外は、実施例１と同様にして、加熱
処理を行い、核酸結合用磁性担体を得た。この磁性担体
は、平均粒子サイズが約５μｍの球状で、保磁力が８．
３６ｋＡ／ｍ（１０５エルステッド）、飽和磁化が４
３．０Ａ・ｍ²／ｋｇ（４３．０ｅｍｕ／ｇ）であっ
た。

【００５７】実施例８シリカ被覆処理後の加熱処理工程において、ガスの種類
として窒素ガスの代わりにアルゴンガスを使用した以外
は、実施例１と同様にして、加熱処理を行い、核酸結合
用磁性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイズが
約５μｍの球状で、保磁力が５．３３ｋＡ／ｍ（６７エ
ルステッド）、飽和磁化が４７．９Ａ・ｍ²／ｋｇ（４
７．９ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５８】実施例９シリカ被覆処理後の加熱処理工程において、ガスの種類
として窒素ガスの代わりに水素ガスを使用し、かつ加熱
処理条件を６００℃，２時間から３００℃，２時間とし
た以外は、実施例１と同様にして、加熱処理を行い、核
酸結合用磁性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サ
イズが約５μｍの球状で、保磁力が４．０６ｋＡ／ｍ
（５１エルステッド）で、飽和磁化が５０．３Ａ・ｍ²
／ｋｇ（５０．３ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００５９】実施例１０強磁性マグネタイト粒子として、市販の乾燥状態のもの
を用いた。平均粒子サイズは０．２６μｍ、保磁力は
８．７６ｋＡ／ｍ（１１０エルステッド）、飽和磁化は
８３．５Ａ・ｍ²／ｋｇ（８３．５ｅｍｕ／ｇ）であっ
た。このマグネタイト粒子７８ｇに純水を加え、全体の
重量を４６８ｇにし、これに７０ｇのケイ酸ナトリウム
を加え、超音波分散機により分散して、ケイ酸ナトリウ
ムを溶解したマグネタイト粒子の懸濁液とした。これ以
外は、実施例１と同様にシリカ被覆処理を行い、さらに
加熱処理条件を４００℃，２時間とした以外は、実施例
１と同様に加熱処理を行い、核酸結合用磁性担体を得
た。この磁性担体は、平均粒子サイズが約６μｍの球状
で、保磁力が９．５５ｋＡ／ｍ（１２０エルステッ
ド）、飽和磁化が４０．１Ａ・ｍ²／ｋｇ（４０．１ｅ
ｍｕ／ｇ）であった。

【００６０】実施例１１強磁性マグネタイト粒子をシリカ被覆処理したのち、純
水で十分に水洗し、ろ過後、空気中、６０℃で８時間乾
燥し、その後の加熱処理を省いた以外は、実施例１と同
様にして、核酸結合用磁性担体を得た。この磁性担体
は、平均粒子サイズが約５μｍの球状で、保磁力が７．
８０ｋＡ／ｍ（９８エルステッド）、飽和磁化が３８．
８Ａ・ｍ²／ｋｇ（３８．８ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００６１】実施例１２強磁性マグネタイト粒子をシリカ被覆処理したのち、純
水で十分に水洗し、ろ過後、空気中、６０℃で８時間乾
燥し、その後の加熱処理を省いた以外は、実施例５と同
様にして、核酸結合用磁性担体を得た。この磁性担体
は、平均粒子サイズが約６μｍの球状で、保磁力が８．
７６ｋＡ／ｍ（１１０エルステッド）、飽和磁化が３
２．８Ａ・ｍ²／ｋｇ（３２．８ｅｍｕ／ｇ）であっ
た。

【００６２】比較例１シリカ被覆処理後の加熱処理工程において、ガスの種類
として窒素ガスの代わりに空気を使用した以外は、実施
例１と同様にして、加熱処理を行い、核酸結合用磁性担
体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイズが約５μｍ
の球状で、保磁力が１０．７５ｋＡ／ｍ（１３５エルス
テッド）、飽和磁化が２５．３Ａ・ｍ²／ｋｇ（２５．
３ｅｍｕ／ｇ）であった。なお、この加熱処理工程で、
マグネタイト粒子は酸化され、マグヘマイト（γ−Ｆｅ
₂Ｏ₃）に変化していた。

【００６３】比較例２シリカ被覆する強磁性酸化鉄粉末として、市販の乾燥状
態のマグヘマイト（γ−Ｆｅ₂Ｏ₃）粒子を用いた。平
均粒子サイズは０．２１μｍ、保磁力は１０．７５ｋＡ
／ｍ（１３５エルステッド）、飽和磁化は７４．２Ａ・
ｍ²／ｋｇ（７４．２ｅｍｕ／ｇ）であった。このマグ
ヘマイト粒子７８ｇに純水を加え、全体の重量を４６８
ｇにし、これに７０ｇのケイ酸ナトリウムを加え、超音
波分散機により分散し、ケイ酸ナトリウムを溶解したマ
グヘマイト粒子の懸濁液とした。これ以外は、実施例１
と同様にシリカ被覆処理を行い、さらに、実施例１と同
様に加熱処理を行い、核酸結合用磁性担体を得た。この
磁性担体は、平均粒子サイズが約５μｍの球状で、保磁
力が１２．７４ｋＡ／ｍ（１６０エルステッド）、飽和
磁化が３４．０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３４．０ｅｍｕ／ｇ）
であった。

【００６４】比較例３強磁性マグネタイト粒子のシリカ被覆処理工程におい
て、強磁性マグネタイト粒子の懸濁液へのケイ酸ナトリ
ウムの溶解量を７０ｇから１２０ｇに変更した以外は、
実施例１と同様にして、シリカ被覆処理を行い、その
後、実施例１と同様にして、加熱処理を行い、核酸結合
用磁性担体を得た。この磁性担体は、平均粒子サイズが
約６μｍの球状で、保磁力が４．５４ｋＡ／ｍ（５７エ
ルステッド）で、飽和磁化が２９．８Ａ・ｍ²／ｋｇ
（２９．８ｅｍｕ／ｇ）であった。

【００６５】比較例４強磁性マグネタイト粒子をシリカ被覆処理したのち、純
水で十分に水洗し、ろ過後、空気中、６０℃で８時間乾
燥し、その後の加熱処理工程を省いた以外は、比較例３
と同様にして、核酸結合用磁性担体を得た。この磁性担
体は、平均粒子サイズが約６μｍの球状で、保磁力が
７．１７ｋＡ／ｍ（９０エルステッド）、飽和磁化が２
０．４Ａ・ｍ²／ｋｇ（２０．４ｅｍｕ／ｇ）であっ
た。

【００６６】以上の実施例および比較例で得た各核酸結
合用磁性担体について、表１に、シリカ被覆のために用
いた強磁性酸化鉄粒子の種類、平均粒子サイズおよびシ
リカ被覆時の初期状態（水を含んだ懸濁状態であるか、
または乾燥状態であるか）、シリカ被覆時のシリカ添加
量（対磁性粒子）ならびに加熱処理条件を、まとめて示
した。また、表２に、上記の各核酸結合用磁性担体の平
均粒子サイズ、保磁力および飽和磁化を、まとめて示し
た。なお、表１中、「ＭＴ」は強磁性マグネタイト粒
子、「ＭＨ」は強磁性マグヘマイト粒子、「Ｎ₂」は窒
素ガス、「Ａｒ」はアルゴンガス、「Ｈ₂」は水素ガ
ス、「Ａｉｒ」は空気である。

【００６７】

【００６８】

【００６９】つぎに、上記の実施例および比較例で得た
各核酸結合用磁性担体について、下記の抽出試験によ
り、生物試料より核酸を抽出回収し、その回収性能を調
べた。結果は、表３に示されるとおりであった。

【００７０】（Ａ）抽出試験用試剤（イ）核酸結合用磁性担体（シリカ被覆強磁性粒子）を
０．２ｍｇ／ｍｌになるように滅菌水に分散させ、分散
液を調製した。（ロ）核酸を単離するための生物試料として、大腸菌
〔ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＪＭ１０９（東
洋紡績、宝酒造、インビトロジェンなどより販売されて
いる）〕を３ｍＬＴＢ培地／試験管にて３７℃で２０
時間培養した菌体を用いた。（ハ）核酸抽出用溶液として、カオトロピック物質を含
む緩衝液であるバッファーＡ〔７Ｍグアニジン塩酸塩
（ナカライテスク社）、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（シ
グマ社）、ｐＨ７．５〕を用いた。（ニ）洗浄液として、カオトロピック物質を含む緩衝液
であるバッファーＡ〔７Ｍグアニジン塩酸塩（ナカライ
テスク社）、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（シグマ
社）、ｐＨ７．５〕を用した。（ホ）高濃度の塩を除去するための試剤として、７０％
エタノール溶液と、アセトン溶液を使用した。（ヘ）核酸結合用磁性担体に結合した核酸を回収するた
めの溶離液として、滅菌水を使用した。

【００７１】（Ｂ）抽出試験方法（１）菌体濁度（ＯＤ６６０）を測定し、１．５ｃｃ用
エッペンドルフチューブにてＯＤ６６０；１．０の菌体
を遠心分離により調製した。つぎに、核酸抽出用溶液
１，０００μｌを注入し、混合した。（２）その後、核酸結合用磁性担体の分散液２０μｌを
加えた。（３）約２分毎に混合しながら、室温で１０分間放置し
た。（４）１．５ｃｃ用エッペンドルフチューブの形状に合
った磁石スタンドに上記チューブを設置することによ
り、核酸結合用磁性担体を磁石側のチューブ側に集め
た。（５）フィルターチップで溶液を吸引し、排出した。（６）チューブを磁石スタンドより取りはずし、グアニ
ジン塩酸塩を含む洗浄液を１ｃｃ注入した。（７）核酸結合用磁性担体と十分混合したのち、再度、
磁石スタンドに設置し、上記と同様にして溶液を廃棄し
た。（８）洗浄操作を再度繰り返した。（９）１ｃｃの７０％エタノールで上記と同様の方法に
より、核酸を結合した磁性担体を洗浄し、高濃度のグア
ニジン塩酸塩を取り除いた。（10）再度、１ｃｃの７０％エタノールと１ｃｃアセト
ンで洗浄した。（11）約５６℃のヒートブロックに上記チューブを設置
し、約１０分間放置して、チューブ内および核酸結合用
磁性担体内のアセトンを完全に蒸発させて除去した。（12）上記方法で核酸を結合した核酸結合用磁性担体
に、１００μｌの滅菌水を加え、約５６℃のヒートブロ
ックに上記チューブを設置し、２分毎に混合操作しなが
ら１０分間放置した。（13）つぎに、磁石スタンドに設置し、回収する溶液を
フィルターチップで吸引し、別の新しいチューブに移し
た。通常、回収量は７０μｌ程度とした。保存する場合
は、−７０℃で行った。（14）このように回収した核酸について、吸光度計によ
り、その吸光度（ＯＤ２６０ｎｍ）を測定して、核酸
の濃度を求めた。これに回収容量をかけて、核酸回収量
とした。

【００７２】

【００７３】上記の表１〜表３の結果から、強磁性マグ
ネタイト粒子をシリカで被覆して、平均粒子サイズが１
〜１０μｍの球状とし、かつ保磁力を２．３９〜１１．
９４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステッド）、飽和磁化
を３０〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／ｇ）
とした実施例１〜１２の各核酸結合用磁性担体は、核酸
の結合性／磁性担体の磁界による捕集性と、磁性担体の
分散性／核酸の溶離性とを両立できるので、核酸の単離
性能にすぐれていることがわかる。

【００７４】とくに、シリカ被覆後に加熱処理を施した
実施例１〜９の各核酸結合用磁性担体は、上記加熱処理
を施さない実施例１１，１２の核酸結合用磁性担体に比
べ、核酸の単離性能によりすぐれている。これは、上記
の加熱処理によって保磁力と飽和磁化がより好適な値と
なり、また上記の加熱処理によってシリカの表面物性が
核酸をより単離しやすくなるように変化するためと思わ
れる。

【００７５】また、上記の実施例１〜９の各核酸結合用
磁性担体は、水溶液中での酸化反応により生成した強磁
性マグネタイト粒子を乾燥させないで水を含んだ懸濁状
態のままシリカで被覆処理しているため、乾燥状態の強
磁性マグネタイト粒子を用いてシリカで被覆処理した実
施例１０の核酸結合用磁性担体に比べて、核酸の単離性
能によりすぐれている。これは、上記水を含んだ懸濁状
態のままシリカで被覆処理するようにしたことにより、
マグネタイト粒子の分散性が良好となり、またマグネタ
イト粒子表面とシリカの馴染みが良好になり、その結
果、シリカ被覆後の粒子サイズ分布が良くなり、またシ
リカ被覆表面が滑らかになり、核酸をより結合しやす
く、また溶離しやすくなるためと思われる。

【００７６】

【発明の効果】以上のように、本発明は、特定粒子サイ
ズの強磁性マグネタイト粒子をシリカで被覆して、特定
粒子サイズの球状形状であって、かつその保磁力と飽和
磁化を特定範囲に設定したことにより、またこのような
磁気特性の設定のために、上記磁性粒子をシリカで被覆
したのち非酸化性ガス雰囲気中で加熱処理したことによ
り、さらにはシリカで被覆する際に水溶液中での酸化反
応により生成した強磁性マグネタイト粒子を乾燥させな
いで水を含んだ懸濁状態のままシリカで被覆処理したこ
とにより、核酸の結合性と磁界による捕集性にすぐれ、
かつ磁界を除去した状態での分散性と結合核酸の溶離性
にすぐれ、これにより核酸の単離や精製の効率を飛躍的
に向上しうる核酸結合用磁性担体を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で製造した核酸結合用磁性担体の電子
顕微鏡写真（倍率：１，０００倍）を示したものであ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者西矢芳昭福井県敦賀市東洋町10番24号東洋紡績株式会社敦賀バイオ研究所内Ｆターム(参考） 4B024 AA19 CA01 CA11 HA20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】平均粒子サイズが０．１〜０．５μｍの
強磁性マグネタイト粒子がシリカで被覆されてなり、
２．３９〜１１．９４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステ
ッド）の保磁力と３０〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６
０ｅｍｕ／ｇ）の飽和磁化を有し、かつ平均粒子サイズ
が１〜１０μｍの球状形状を有することを特徴とする核
酸結合用磁性担体。
【請求項２】平均粒子サイズが０．１〜０．５μｍの
強磁性マグネタイト粒子をシリカで被覆処理したのち、
非酸化性ガス雰囲気中で加熱処理して、２．３９〜１
１．９４ｋＡ／ｍ（３０〜１５０エルステッド）の保磁
力と３０〜６０Ａ・ｍ²／ｋｇ（３０〜６０ｅｍｕ／
ｇ）の飽和磁化を有し、かつ平均粒子サイズが１〜１０
μｍの球状形状を有する核酸結合用磁性担体を製造する
ことを特徴とする核酸結合用磁性担体の製造方法。
【請求項３】非酸化性ガス雰囲気は、不活性ガス雰囲
気、真空雰囲気または還元性ガス雰囲気である請求項２
に記載の核酸結合用磁性担体の製造方法。
【請求項４】平均粒子サイズが０．１〜０．５μｍの
強磁性マグネタイト粒子を水溶液中での酸化反応により
生成し、この強磁性マグネタイト粒子を乾燥させること
なく水を含んだ懸濁状態のままシリカで被覆処理する請
求項２または３に記載の核酸結合用磁性担体の製造方
法。