JP2003055061A - リン酸カルシウム系セラミック多孔体 - Google Patents
リン酸カルシウム系セラミック多孔体Info
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- JP2003055061A JP2003055061A JP2001246615A JP2001246615A JP2003055061A JP 2003055061 A JP2003055061 A JP 2003055061A JP 2001246615 A JP2001246615 A JP 2001246615A JP 2001246615 A JP2001246615 A JP 2001246615A JP 2003055061 A JP2003055061 A JP 2003055061A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 薬剤の保持性に優れた薬剤徐放担体または細
胞付着性の高い細胞培養担体を構成するリン酸カルシウ
ム系セラミック多孔体を提供することを提供すること。 【解決手段】 ５μｍ以下の気孔を有し、かつ表面が負
に帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体として
のリン酸カルシウム系セラミック多孔体。気孔率が５５
〜９０％であり、連通する気孔径５０〜１０００μｍの
マクロ気孔と５μｍ以下のミクロ気孔を有し、かつ面が
負に帯電していることを特徴とする、細胞培養用担体と
してのリン酸カルシウム系セラミック多孔体。
胞付着性の高い細胞培養担体を構成するリン酸カルシウ
ム系セラミック多孔体を提供することを提供すること。 【解決手段】 ５μｍ以下の気孔を有し、かつ表面が負
に帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体として
のリン酸カルシウム系セラミック多孔体。気孔率が５５
〜９０％であり、連通する気孔径５０〜１０００μｍの
マクロ気孔と５μｍ以下のミクロ気孔を有し、かつ面が
負に帯電していることを特徴とする、細胞培養用担体と
してのリン酸カルシウム系セラミック多孔体。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、薬剤徐放担体また
は細胞培養担体として用いられるリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体に関する。
は細胞培養担体として用いられるリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体に関する。
【０００２】
【従来の技術】局在する炎症や腫瘍等に対する薬物治療
では、例えば、抗癌剤や抗生物質等が使用されている。
しかし、これらの薬剤は重篤な副作用を有するものが多
く、また、全身投与しても患部に作用する量は極めて少
量となる。このため、薬剤を患部に選択的かつ適量を投
与する方法が検討されている。そこで、薬剤を生体内患
部に埋入して薬剤を徐放させるための担体が提案されて
いる。
では、例えば、抗癌剤や抗生物質等が使用されている。
しかし、これらの薬剤は重篤な副作用を有するものが多
く、また、全身投与しても患部に作用する量は極めて少
量となる。このため、薬剤を患部に選択的かつ適量を投
与する方法が検討されている。そこで、薬剤を生体内患
部に埋入して薬剤を徐放させるための担体が提案されて
いる。
【０００３】薬剤徐放担体としては、これまで生体適合
性の優れたリン酸カルシウム系セラミック多孔体が検討
されている。しかし、リン酸カルシウム系セラミック多
孔体に薬剤を物理的に保持させるのでは、薬剤の徐放特
性の持続性が極めて悪いため、リン酸カルシウム系セラ
ミック多孔体と有機材料とを複合することが検討されて
いる。
性の優れたリン酸カルシウム系セラミック多孔体が検討
されている。しかし、リン酸カルシウム系セラミック多
孔体に薬剤を物理的に保持させるのでは、薬剤の徐放特
性の持続性が極めて悪いため、リン酸カルシウム系セラ
ミック多孔体と有機材料とを複合することが検討されて
いる。
【０００４】例えば、特許第２８４２６４７号には、多
孔質リン酸カルシウム多孔体の孔内に薬剤を含有させる
とともに、リン酸カルシウム多孔体全体を有機高分子化
合物でコーティングした薬剤徐放性顆粒が開示されてい
る。また、特許第２７６７１５２号には、緻密質セラミ
ック体の孔に、リン脂質により形成した薬剤含有リポソ
ームを保持した薬剤含有セラミック体が開示されてい
る。
孔質リン酸カルシウム多孔体の孔内に薬剤を含有させる
とともに、リン酸カルシウム多孔体全体を有機高分子化
合物でコーティングした薬剤徐放性顆粒が開示されてい
る。また、特許第２７６７１５２号には、緻密質セラミ
ック体の孔に、リン脂質により形成した薬剤含有リポソ
ームを保持した薬剤含有セラミック体が開示されてい
る。
【０００５】また、近年、細胞培養等に代表される組織
工学への取組みが注目され、骨軟骨の欠損部の修復への
応用が期待されている。現在、骨髄細胞あるいは軟骨細
胞を初期培養した後、多孔質セラミックを担体として２
次培養し、骨あるいは軟骨形成の検討が多くなされてい
る。
工学への取組みが注目され、骨軟骨の欠損部の修復への
応用が期待されている。現在、骨髄細胞あるいは軟骨細
胞を初期培養した後、多孔質セラミックを担体として２
次培養し、骨あるいは軟骨形成の検討が多くなされてい
る。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述し
た特許第２８４２６４７号に開示された薬剤徐放性顆粒
は、担体であるリン酸カルシウム顆粒に薬剤を含有させ
た後、凍結乾燥し、さらに有機高分子化合物をコーティ
ングするものであるため、適用症例に対する薬剤を容易
に担体に保持させることができないという問題がある。
また、特許第２７６７１５２号に開示された薬剤含有セ
ラミック体は、薬剤含有リポソームを緻密質セラミック
の孔に保持させるものであるため、孔を有する緻密質セ
ラミック体を準備する必要があり、かつ、セラミック体
の大きさ、形状、薬剤の含有量が制限されてしまう。
た特許第２８４２６４７号に開示された薬剤徐放性顆粒
は、担体であるリン酸カルシウム顆粒に薬剤を含有させ
た後、凍結乾燥し、さらに有機高分子化合物をコーティ
ングするものであるため、適用症例に対する薬剤を容易
に担体に保持させることができないという問題がある。
また、特許第２７６７１５２号に開示された薬剤含有セ
ラミック体は、薬剤含有リポソームを緻密質セラミック
の孔に保持させるものであるため、孔を有する緻密質セ
ラミック体を準備する必要があり、かつ、セラミック体
の大きさ、形状、薬剤の含有量が制限されてしまう。
【０００７】更に、初期培養した細胞を多孔質セラミッ
ク表面で培養させる場合、セラミック表面に細胞が付着
することが最も重要である。しかし、このような多孔質
セラミックの表面は、サブミクロンの凹凸により細胞の
付着性を向上させるのみであり、細胞外皮膜の電気的作
用を考慮したものではない。そのため、細胞の付着性は
不十分である。
ク表面で培養させる場合、セラミック表面に細胞が付着
することが最も重要である。しかし、このような多孔質
セラミックの表面は、サブミクロンの凹凸により細胞の
付着性を向上させるのみであり、細胞外皮膜の電気的作
用を考慮したものではない。そのため、細胞の付着性は
不十分である。
【０００８】本発明は、上記問題点を解決するためにな
され、薬剤の保持性に優れた薬剤徐放担体または細胞付
着性の高い細胞培養担体を構成するリン酸カルシウム系
セラミック多孔体を提供することを目的とする。
され、薬剤の保持性に優れた薬剤徐放担体または細胞付
着性の高い細胞培養担体を構成するリン酸カルシウム系
セラミック多孔体を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するた
め、本発明は、５μｍ以下の気孔を有し、かつ表面が負
に帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体として
のリン酸カルシウム系セラミック多孔体を提供する。
め、本発明は、５μｍ以下の気孔を有し、かつ表面が負
に帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体として
のリン酸カルシウム系セラミック多孔体を提供する。
【００１０】また、本発明は、気孔率が５５〜９０％で
あり、連通する気孔径５０〜１０００μｍのマクロ気孔
と５μｍ以下のミクロ気孔を有し、かつ表面が負に帯電
していることを特徴とする、細胞培養用担体としてのリ
ン酸カルシウム系セラミック多孔体を提供する。
あり、連通する気孔径５０〜１０００μｍのマクロ気孔
と５μｍ以下のミクロ気孔を有し、かつ表面が負に帯電
していることを特徴とする、細胞培養用担体としてのリ
ン酸カルシウム系セラミック多孔体を提供する。
【００１１】リン酸カルシウム系セラミック多孔体は、
焼成した後、不活性気体雰囲気にて冷却し、粉砕もしく
は切断し、保管されたものであることが望ましい。
焼成した後、不活性気体雰囲気にて冷却し、粉砕もしく
は切断し、保管されたものであることが望ましい。
【００１２】
【発明の実施の形態】以下、本発明について、より詳細
に説明する。
に説明する。
【００１３】ＨＡＰ（ヒドロキシアパタイト）に代表さ
れるリン酸カルシウム系セラミックは、生体適合性が高
く、骨欠損部などに充填する場合、その周辺に直接新生
骨を形成することが知られている。その中でも、特に、
β−ＴＣＰは、生体適合性、骨形成に優れているうえ、
生体吸収性にも優れ、骨欠損部などに充填する場合、経
時的に自家骨に置換するという特徴がある。
れるリン酸カルシウム系セラミックは、生体適合性が高
く、骨欠損部などに充填する場合、その周辺に直接新生
骨を形成することが知られている。その中でも、特に、
β−ＴＣＰは、生体適合性、骨形成に優れているうえ、
生体吸収性にも優れ、骨欠損部などに充填する場合、経
時的に自家骨に置換するという特徴がある。
【００１４】本発明において、好ましく使用されるβ−
ＴＣＰ多孔体は、メカノケミカル法で作製したβ−ＴＣ
Ｐ粉末を原料とし、気孔率５０〜９０％、連通する気孔
径５０〜１０００μｍと５μｍ以下の気孔を有するもの
であることがよい。
ＴＣＰ多孔体は、メカノケミカル法で作製したβ−ＴＣ
Ｐ粉末を原料とし、気孔率５０〜９０％、連通する気孔
径５０〜１０００μｍと５μｍ以下の気孔を有するもの
であることがよい。
【００１５】なお、β−ＴＣＰは、一般に、骨伝導能と
生体吸収性の２つの性質を併せ有するが、その合成プロ
セスにより、その性能は左右される。即ち、メカノケミ
カル法により合成されたβ−ＴＣＰ多孔体が、最も骨補
填材として優れていると言える。
生体吸収性の２つの性質を併せ有するが、その合成プロ
セスにより、その性能は左右される。即ち、メカノケミ
カル法により合成されたβ−ＴＣＰ多孔体が、最も骨補
填材として優れていると言える。
【００１６】また、リン酸カルシウム系セラミック多孔
体の気孔性状は、多孔体内部への細胞の進入などに寄与
する５０〜１０００μｍの気孔と、生体内での吸収を効
率良く行わせる５μｍ以下の気孔とを有することが必要
である。
体の気孔性状は、多孔体内部への細胞の進入などに寄与
する５０〜１０００μｍの気孔と、生体内での吸収を効
率良く行わせる５μｍ以下の気孔とを有することが必要
である。
【００１７】なお、本発明において好適に用いられるβ
−ＴＣＰは、β−ＴＣＰ粉末を焼成した後、Ｎ２、Ａｒ
などの不活性気体雰囲気で冷却し、粉砕もしくは切断し
て、保管されるものであるため、β−ＴＣＰ粒子表面は
極めて活性が高く、負に帯電している。このようなβ−
ＴＣＰを主成分として含む多孔体は、その負に帯電した
部分が薬剤を強く吸着し、また細胞を培養するのに適し
ているので、薬剤徐放担体または細胞培養担体として非
常に優れている。
−ＴＣＰは、β−ＴＣＰ粉末を焼成した後、Ｎ２、Ａｒ
などの不活性気体雰囲気で冷却し、粉砕もしくは切断し
て、保管されるものであるため、β−ＴＣＰ粒子表面は
極めて活性が高く、負に帯電している。このようなβ−
ＴＣＰを主成分として含む多孔体は、その負に帯電した
部分が薬剤を強く吸着し、また細胞を培養するのに適し
ているので、薬剤徐放担体または細胞培養担体として非
常に優れている。
【００１８】このβ−ＴＣＰ多孔体の表面電位を確認す
るため、０．００１Ｍ／ＬのＫＣｌ水溶液を流動液と
し、２３〜２４℃にて流動法によるゼータ電位を測定し
た。その結果、ゼータ電位は−７ｍＶとなり、β−ＴＣ
Ｐ多孔体表面が負に帯電していることを確認した。
るため、０．００１Ｍ／ＬのＫＣｌ水溶液を流動液と
し、２３〜２４℃にて流動法によるゼータ電位を測定し
た。その結果、ゼータ電位は−７ｍＶとなり、β−ＴＣ
Ｐ多孔体表面が負に帯電していることを確認した。
【００１９】なお、表面分析などによっても明確ではな
いが、β−ＴＣＰ多孔体表面のリン酸イオンは、通常の
雰囲気では、水分を直ちに吸着し、β−ＴＣＰ多孔体表
面に数個から数１０個もの水分子の層が形成されてしま
うが、不活性気体雰囲気であれば、水分子の吸着数を１
〜２分子に抑制することができ、それによってβ−ＴＣ
Ｐ多孔体表面の活性を維持することができる。また、β
−ＴＣＰ多孔体の気孔率を高くすることなどにより、β
−ＴＣＰ多孔体の表面積を増大することができるので、
β−ＴＣＰ多孔体の相対的な表面活性を増加させること
が可能である。
いが、β−ＴＣＰ多孔体表面のリン酸イオンは、通常の
雰囲気では、水分を直ちに吸着し、β−ＴＣＰ多孔体表
面に数個から数１０個もの水分子の層が形成されてしま
うが、不活性気体雰囲気であれば、水分子の吸着数を１
〜２分子に抑制することができ、それによってβ−ＴＣ
Ｐ多孔体表面の活性を維持することができる。また、β
−ＴＣＰ多孔体の気孔率を高くすることなどにより、β
−ＴＣＰ多孔体の表面積を増大することができるので、
β−ＴＣＰ多孔体の相対的な表面活性を増加させること
が可能である。
【００２０】リン酸カルシウム系セラミック多孔体の粒
径は、薬剤徐放担体として使用する場合には、０．５μ
ｍ〜５ｍｍであることが望ましい。また、特に、この薬
剤徐放担体を経血管療法に使用する場合、カテーテルの
内径が１ｍｍであるため、その粒径は、０．５μｍ〜３
００μｍであることが望ましく、薬剤徐放担体としての
顆粒が腫瘍組織に近い血管に留まることが理想的であ
る。
径は、薬剤徐放担体として使用する場合には、０．５μ
ｍ〜５ｍｍであることが望ましい。また、特に、この薬
剤徐放担体を経血管療法に使用する場合、カテーテルの
内径が１ｍｍであるため、その粒径は、０．５μｍ〜３
００μｍであることが望ましく、薬剤徐放担体としての
顆粒が腫瘍組織に近い血管に留まることが理想的であ
る。
【００２１】リン酸カルシウム系セラミック多孔体の粒
径が１μｍ程度の場合、マクロファージ等の巨細胞に貧
食されやすく、腫瘍組織近傍の細胞により選択的に貧食
されるといわれている。
径が１μｍ程度の場合、マクロファージ等の巨細胞に貧
食されやすく、腫瘍組織近傍の細胞により選択的に貧食
されるといわれている。
【００２２】リン酸カルシウム系セラミック多孔体を薬
剤徐放性骨補填材として使用する場合、骨形成の足場と
して作用する必要があるため、顆粒のみならずブロック
体もしくは円柱体などの形状とすることも出来る。
剤徐放性骨補填材として使用する場合、骨形成の足場と
して作用する必要があるため、顆粒のみならずブロック
体もしくは円柱体などの形状とすることも出来る。
【００２３】なお、リン酸カルシウム系セラミック多孔
体内に保持させる薬剤は、特に制限するものではなく、
抗生物質、合成抗菌剤、抗悪性腫瘍剤、抗癌剤、免疫能
増強剤、抗ウィルス剤抗真菌剤、免疫療法剤、細胞賦活
用薬、ホルモン剤、解熱鎮痛消炎剤、骨形成因子などが
ある。
体内に保持させる薬剤は、特に制限するものではなく、
抗生物質、合成抗菌剤、抗悪性腫瘍剤、抗癌剤、免疫能
増強剤、抗ウィルス剤抗真菌剤、免疫療法剤、細胞賦活
用薬、ホルモン剤、解熱鎮痛消炎剤、骨形成因子などが
ある。
【００２４】薬剤をリン酸カルシウム系セラミック多孔
体内に保持させる方法は、特に限定するものではない
が、薬剤が液状、粉末状などの場合、緩衝液などに薬剤
を溶解し、希釈して、この溶液に担体となるリン酸カル
シウム系セラミック多孔体を浸漬するなどの手法が容易
である。
体内に保持させる方法は、特に限定するものではない
が、薬剤が液状、粉末状などの場合、緩衝液などに薬剤
を溶解し、希釈して、この溶液に担体となるリン酸カル
シウム系セラミック多孔体を浸漬するなどの手法が容易
である。
【００２５】また、骨補填材としての骨形成能を向上さ
せるため、骨形成因子のＢＭＰ（Bone Morphogenetic P
rotein）、ＦＧＦ（Fibroblast Growth Factor）、ＴＧ
Ｆ−β（Transforming Growth Factor−β）、ＩＧＦ
（Insulin - like Growth Factor）、ＰＤＧＦ（Platel
et - Derived Growth Factor）、ＶＥＧＦ（Vascular E
ndothelial cell Growth Factor）などを保持させるこ
とも可能である。
せるため、骨形成因子のＢＭＰ（Bone Morphogenetic P
rotein）、ＦＧＦ（Fibroblast Growth Factor）、ＴＧ
Ｆ−β（Transforming Growth Factor−β）、ＩＧＦ
（Insulin - like Growth Factor）、ＰＤＧＦ（Platel
et - Derived Growth Factor）、ＶＥＧＦ（Vascular E
ndothelial cell Growth Factor）などを保持させるこ
とも可能である。
【００２６】このように、骨形成因子を保持したリン酸
カルシウム系セラミック多孔体を骨補填材として用いる
ことにより、リン酸カルシウム系セラミック多孔体単独
で補填するより、骨形成を促進することが出来る。
カルシウム系セラミック多孔体を骨補填材として用いる
ことにより、リン酸カルシウム系セラミック多孔体単独
で補填するより、骨形成を促進することが出来る。
【００２７】また、リン酸カルシウム系セラミック多孔
体を細胞培養担体として使用する場合、細胞が浸入可能
なように連通する、気孔径５０〜１０００μｍの気孔と
気孔径５μｍ以下の気孔を有することが好ましい。
体を細胞培養担体として使用する場合、細胞が浸入可能
なように連通する、気孔径５０〜１０００μｍの気孔と
気孔径５μｍ以下の気孔を有することが好ましい。
【００２８】本発明に用いられるリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体の表面は、負に帯電しているため、培養
細胞の外皮膜に存在するタンパク質と静電気的に吸着
し、早期に表面における分化活動を開始させることが出
来る。
ラミック多孔体の表面は、負に帯電しているため、培養
細胞の外皮膜に存在するタンパク質と静電気的に吸着
し、早期に表面における分化活動を開始させることが出
来る。
【００２９】また、未だ十分には解明されているとは言
えないが、負に帯電した多孔体表面では、正に帯電した
多孔体表面もしくは電気的に中性な多孔体表面に比べ、
細胞が増殖しやすいとの報告がなされている。
えないが、負に帯電した多孔体表面では、正に帯電した
多孔体表面もしくは電気的に中性な多孔体表面に比べ、
細胞が増殖しやすいとの報告がなされている。
【００３０】細胞の培養方法は、特に制限されるもので
はないが、所望の細胞を１０〜１４日間、１５％のＦＢ
Ｓ（Fetal bovine serum)を含有するＭＥＭ培地にて、
初期培養を行い、培養された細胞を、補填するリン酸カ
ルシウム系セラミック多孔体に播種し、１０ｎＭのデキ
サメタゾン（dexamethasone）、１０ｍＭのβ−グリセ
リンリン酸（glycerophosphate）、および５０μｇ／ｍ
ｌのアスコルビン酸の存在下で培養し、培養細胞複合リ
ン酸カルシウムとすることもできる。
はないが、所望の細胞を１０〜１４日間、１５％のＦＢ
Ｓ（Fetal bovine serum)を含有するＭＥＭ培地にて、
初期培養を行い、培養された細胞を、補填するリン酸カ
ルシウム系セラミック多孔体に播種し、１０ｎＭのデキ
サメタゾン（dexamethasone）、１０ｍＭのβ−グリセ
リンリン酸（glycerophosphate）、および５０μｇ／ｍ
ｌのアスコルビン酸の存在下で培養し、培養細胞複合リ
ン酸カルシウムとすることもできる。
【００３１】下記式（１）により表わされる抗生物質と
してのゲンタマイシンや、下記式（２）により表わされ
る抗癌剤としてのドキソルビシンに代表されるように、
薬剤には多くの極性基を有するものが多い。その薬剤の
有する極性基と、負に帯電し、活性の高い状態が保たれ
ているリン酸カルシウム表面とが電気的に吸着する。特
に、緩衝液により薬剤の希薄溶液とした場合、比較的強
く電気的に吸着することが可能である。
してのゲンタマイシンや、下記式（２）により表わされ
る抗癌剤としてのドキソルビシンに代表されるように、
薬剤には多くの極性基を有するものが多い。その薬剤の
有する極性基と、負に帯電し、活性の高い状態が保たれ
ているリン酸カルシウム表面とが電気的に吸着する。特
に、緩衝液により薬剤の希薄溶液とした場合、比較的強
く電気的に吸着することが可能である。
【００３２】
【化１】
硫酸ゲンタマイシンＣ１：Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ１＝ＮＨＣ
Ｈ３ 硫酸ゲンタマイシンＣ２：Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝ＮＨ２ 硫酸ゲンタマイシンＣ１ａ：Ｒ１＝Ｈ、Ｒ３＝ＮＨ２
Ｈ３ 硫酸ゲンタマイシンＣ２：Ｒ１＝ＣＨ３、Ｒ２＝ＮＨ２ 硫酸ゲンタマイシンＣ１ａ：Ｒ１＝Ｈ、Ｒ３＝ＮＨ２
【化２】
【００３３】以下、本発明の実施例を示し、本発明の構
成および効果をより具体的に説明する。
成および効果をより具体的に説明する。
【００３４】［実施例１］原料とするβ−ＴＣＰ粉末
を、以下のようにメカノケミカル法により作製した。即
ち、炭酸カルシウム粉末とリン酸水素カルシウム２水和
物粉末を１：２のモル比になるように秤量し、純水を加
えてスラリーを調製した。これをポールミルにて約２４
時間磨砕し、反応させた後、乾燥し、７５０〜９００℃
で焼成して、β−ＴＣＰ粉末を得た。
を、以下のようにメカノケミカル法により作製した。即
ち、炭酸カルシウム粉末とリン酸水素カルシウム２水和
物粉末を１：２のモル比になるように秤量し、純水を加
えてスラリーを調製した。これをポールミルにて約２４
時間磨砕し、反応させた後、乾燥し、７５０〜９００℃
で焼成して、β−ＴＣＰ粉末を得た。
【００３５】このようにして得られたβ−ＴＣＰ粉末を
用いて、次のようにして、多孔質顆粒を作製した。即
ち、得られたβ−ＴＣＰ粉末に純水、解膠剤、ポリオキ
シエチレンアルキルエーテル系あるいはポリオキシエチ
レンアルキルフェニルエーテル系の界面活性剤を所定量
加えた。これをミキサーなどで混合し、発泡させ、乾燥
し、１０００〜１１００℃で焼成した後、Ｎ２雰囲気下
にて、３時間後に１００℃以下になるように冷却した。
用いて、次のようにして、多孔質顆粒を作製した。即
ち、得られたβ−ＴＣＰ粉末に純水、解膠剤、ポリオキ
シエチレンアルキルエーテル系あるいはポリオキシエチ
レンアルキルフェニルエーテル系の界面活性剤を所定量
加えた。これをミキサーなどで混合し、発泡させ、乾燥
し、１０００〜１１００℃で焼成した後、Ｎ２雰囲気下
にて、３時間後に１００℃以下になるように冷却した。
【００３６】これにより、５０〜８０％の気孔率、５０
〜１０００μｍ及び５μｍ以下の気孔分布を有するβ−
ＴＣＰ多孔体が作製された。さらに、このβ−ＴＣＰ多
孔体を粉砕して顆粒を得た。なお、顆粒の粒径は５００
〜１０００μｍとした。
〜１０００μｍ及び５μｍ以下の気孔分布を有するβ−
ＴＣＰ多孔体が作製された。さらに、このβ−ＴＣＰ多
孔体を粉砕して顆粒を得た。なお、顆粒の粒径は５００
〜１０００μｍとした。
【００３７】このβ−ＴＣＰ多孔体顆粒の表面電位を確
認するため、０．００１Ｍ／ＬのＫＣｌ水溶液を流動液
とし、２３〜２４℃にて流動法によるゼータ電位を測定
した。その結果、ゼータ電位は−７ｍＶとなり、β−Ｔ
ＣＰ多孔体表面が負に帯電していることを確認した。
認するため、０．００１Ｍ／ＬのＫＣｌ水溶液を流動液
とし、２３〜２４℃にて流動法によるゼータ電位を測定
した。その結果、ゼータ電位は−７ｍＶとなり、β−Ｔ
ＣＰ多孔体表面が負に帯電していることを確認した。
【００３８】次に、薬剤としてゲンタマイシンを用い、
これを溶媒キャスト法により、以下のようにβ−ＴＣＰ
多孔体に吸着させた。即ち、まず薬剤としてのゲンタマ
イシンをリン酸緩衝液に溶解した。次いで、得られた溶
液にβ−ＴＣＰ顆粒を浸漬した後、乾燥することで、β
−ＴＣＰ多孔体顆粒表面もしくは気孔内に、ゲンタマイ
シンを吸着させた。このようにして、本実施例に係る薬
剤徐放性β−ＴＣＰを得た。
これを溶媒キャスト法により、以下のようにβ−ＴＣＰ
多孔体に吸着させた。即ち、まず薬剤としてのゲンタマ
イシンをリン酸緩衝液に溶解した。次いで、得られた溶
液にβ−ＴＣＰ顆粒を浸漬した後、乾燥することで、β
−ＴＣＰ多孔体顆粒表面もしくは気孔内に、ゲンタマイ
シンを吸着させた。このようにして、本実施例に係る薬
剤徐放性β−ＴＣＰを得た。
【００３９】この薬剤徐放性β−ＴＣＰを、骨髄炎を伴
う疾患の病巣掻爬部に、別途作製された骨補填材として
のβ−ＴＣＰと併用することで、骨形成・自家骨置換に
加え、骨髄炎を沈静化させる作用をも発揮することが出
来た。また、抗生剤を局所投与しているため、全身投与
に比べ、副作用が少ないという効果も発揮された。
う疾患の病巣掻爬部に、別途作製された骨補填材として
のβ−ＴＣＰと併用することで、骨形成・自家骨置換に
加え、骨髄炎を沈静化させる作用をも発揮することが出
来た。また、抗生剤を局所投与しているため、全身投与
に比べ、副作用が少ないという効果も発揮された。
【００４０】［実施例２］平均粒径が２０μｍであるこ
とを除き、実施例１と同じ形態のβ−ＴＣＰ多孔質顆粒
を作製し、用いた。薬剤は、抗癌剤として硫酸ドキソル
ビシンを用いた。
とを除き、実施例１と同じ形態のβ−ＴＣＰ多孔質顆粒
を作製し、用いた。薬剤は、抗癌剤として硫酸ドキソル
ビシンを用いた。
【００４１】硫酸ドキソルビシンを生理食塩水に溶解し
た溶液に、β−ＴＣＰ多孔質顆粒を浸漬し、乾燥して、
薬剤をβ−ＴＣＰ多孔質顆粒表面に吸着させた。なお、
必要に応じて、含浸した顆粒を凍結乾燥してもよい。
た溶液に、β−ＴＣＰ多孔質顆粒を浸漬し、乾燥して、
薬剤をβ−ＴＣＰ多孔質顆粒表面に吸着させた。なお、
必要に応じて、含浸した顆粒を凍結乾燥してもよい。
【００４２】このようにして得た薬剤徐放性β−ＴＣＰ
は、物理的もしくは生理的に、血管の病巣部に近い部位
に留まり、薬剤を徐放することが可能であった。
は、物理的もしくは生理的に、血管の病巣部に近い部位
に留まり、薬剤を徐放することが可能であった。
【００４３】［実施例３］ブロック状β−ＴＣＰ多孔体
であることを除いて、実施例１と同様に作製したβ−Ｔ
ＣＰ多孔体に、骨成長因子として、骨形成蛋白質（ＢＭ
Ｐ：Bone Morphogenetic Protein）、繊維芽細胞増殖因
子（ＦＧＦ：Fibroblast Growth Factor）、トランスフ
ォーミング増殖因子（ＴＧＦ−β：Transforming Growt
h Factor−β）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ：Insu
lin−like Growth Factor）、血小板由来増殖因子（Ｐ
ＤＧＦ：Platelet Derived Growth Factor）、血管内皮
細胞増殖因子(ＶＥＧＦ:Vascular Endothelial Growth
Factor）を複合させた。
であることを除いて、実施例１と同様に作製したβ−Ｔ
ＣＰ多孔体に、骨成長因子として、骨形成蛋白質（ＢＭ
Ｐ：Bone Morphogenetic Protein）、繊維芽細胞増殖因
子（ＦＧＦ：Fibroblast Growth Factor）、トランスフ
ォーミング増殖因子（ＴＧＦ−β：Transforming Growt
h Factor−β）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ：Insu
lin−like Growth Factor）、血小板由来増殖因子（Ｐ
ＤＧＦ：Platelet Derived Growth Factor）、血管内皮
細胞増殖因子(ＶＥＧＦ:Vascular Endothelial Growth
Factor）を複合させた。
【００４４】成長因子の複合方法は、特に限定されるも
のではないが、緩衝液などに溶解した成長因子をβ−Ｔ
ＣＰ多孔体にしみ込ませるなどの方法により行うことが
出来る。
のではないが、緩衝液などに溶解した成長因子をβ−Ｔ
ＣＰ多孔体にしみ込ませるなどの方法により行うことが
出来る。
【００４５】成長因子は、骨形成を促進させるため、本
実施例に係るβ−ＴＣＰ多孔体は、骨成長因子を担架さ
せていない骨補填材としてのβ−ＴＣＰに比べ、骨欠損
部が大きい症例などにも良好な骨形成を得ることが出来
る。そのため、悪性腫瘍など病巣掻爬部が大きい疾患に
おいて、従来、人工骨では骨形成が劣るため、自家骨が
用いられていた適用、もしくは人工関節などが強いられ
ていた適用などにおいても、良好な骨形成が得られた。
実施例に係るβ−ＴＣＰ多孔体は、骨成長因子を担架さ
せていない骨補填材としてのβ−ＴＣＰに比べ、骨欠損
部が大きい症例などにも良好な骨形成を得ることが出来
る。そのため、悪性腫瘍など病巣掻爬部が大きい疾患に
おいて、従来、人工骨では骨形成が劣るため、自家骨が
用いられていた適用、もしくは人工関節などが強いられ
ていた適用などにおいても、良好な骨形成が得られた。
【００４６】［実施例４］円盤状β−ＴＣＰ多孔体であ
ることを除いて、実施例１と同様にして作製したβ−Ｔ
ＣＰ多孔体に、骨髄細胞を複合させて骨補填材を得た。
この骨補填材により骨欠損部を補填した。
ることを除いて、実施例１と同様にして作製したβ−Ｔ
ＣＰ多孔体に、骨髄細胞を複合させて骨補填材を得た。
この骨補填材により骨欠損部を補填した。
【００４７】事前に患者の骨髄を採取し、１０〜１４日
間、１５％のＦＢＳを含有するＭＥＭ培地にて初期培養
を行い、β−ＴＣＰ多孔体に細胞を播種し、１０ｎＭの
dexamethasone、１０ｍＭのβ−glycerophosphate、５
０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸の存在下で培養し、骨髄
細胞複合β−ＴＣＰ多孔体として補填した。
間、１５％のＦＢＳを含有するＭＥＭ培地にて初期培養
を行い、β−ＴＣＰ多孔体に細胞を播種し、１０ｎＭの
dexamethasone、１０ｍＭのβ−glycerophosphate、５
０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸の存在下で培養し、骨髄
細胞複合β−ＴＣＰ多孔体として補填した。
【００４８】なお、必要に応じて、骨成長因子などを担
架させることも可能である。
架させることも可能である。
【００４９】骨髄細胞は骨形成を促進させるため、本実
施例に係る骨髄細胞複合β−ＴＣＰ多孔体は、骨髄細胞
を培養していない骨補填材としてのβ−ＴＣＰに比べ、
骨欠損部が大きい症例などにも良好な骨形成が得られ
た。そのため、悪性腫瘍など病巣掻爬部が大きい疾患に
おいて、従来、人工骨では骨形成が劣るため、自家骨が
用いられていた適用、もしくは、人工関節などが強いら
れていた適用などにおいても、良好な骨形成が得られ
た。
施例に係る骨髄細胞複合β−ＴＣＰ多孔体は、骨髄細胞
を培養していない骨補填材としてのβ−ＴＣＰに比べ、
骨欠損部が大きい症例などにも良好な骨形成が得られ
た。そのため、悪性腫瘍など病巣掻爬部が大きい疾患に
おいて、従来、人工骨では骨形成が劣るため、自家骨が
用いられていた適用、もしくは、人工関節などが強いら
れていた適用などにおいても、良好な骨形成が得られ
た。
【００５０】特に、骨髄細胞を初期培養する際、骨芽細
胞のみを選択的に培養することで、より骨形成を促進さ
せることができた。また、骨芽細胞の働きにより、β−
ＴＣＰを吸収する破骨細胞の働きも活性化するため、早
期の自家骨置換が得られた。
胞のみを選択的に培養することで、より骨形成を促進さ
せることができた。また、骨芽細胞の働きにより、β−
ＴＣＰを吸収する破骨細胞の働きも活性化するため、早
期の自家骨置換が得られた。
【００５１】ここで、以上説明した本発明のリン酸カル
シウム系セラミック多孔体およびその製造方法につい
て、以下に付記する。
シウム系セラミック多孔体およびその製造方法につい
て、以下に付記する。
【００５２】（１）５μｍ以下の気孔を有し、かつ表面
が負に帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体と
してのリン酸カルシウム系セラミック多孔体。
が負に帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体と
してのリン酸カルシウム系セラミック多孔体。
【００５３】（２）リン酸カルシウム系セラミック多孔
体表面の負に帯電した部位に、薬剤成分が電気的に吸着
してなることを特徴とするリン酸カルシウム系セラミッ
ク多孔体。
体表面の負に帯電した部位に、薬剤成分が電気的に吸着
してなることを特徴とするリン酸カルシウム系セラミッ
ク多孔体。
【００５４】（３）気孔率が５５〜９０％であり、連通
する気孔径５０〜１０００μｍのマクロ気孔と５μｍ以
下のミクロ気孔を有し、かつ表面が負に帯電しているこ
とを特徴とする、細胞培養用担体としてのリン酸カルシ
ウム系セラミック多孔体。
する気孔径５０〜１０００μｍのマクロ気孔と５μｍ以
下のミクロ気孔を有し、かつ表面が負に帯電しているこ
とを特徴とする、細胞培養用担体としてのリン酸カルシ
ウム系セラミック多孔体。
【００５５】（４）リン酸カルシウム系セラミック多孔
体が、メカノケミカル法により合成されたβ−リン酸三
カルシウム粉末を焼成してなるβ−リン酸三カルシウム
多孔体であることを特徴とするリン酸カルシウム系セラ
ミック多孔体。
体が、メカノケミカル法により合成されたβ−リン酸三
カルシウム粉末を焼成してなるβ−リン酸三カルシウム
多孔体であることを特徴とするリン酸カルシウム系セラ
ミック多孔体。
【００５６】（５）リン酸カルシウム系セラミック多孔
体が、焼成した後、不活性気体雰囲気にて冷却し、粉砕
もしくは切断し、保管されたものであることを特徴とす
るリン酸カルシウム系セラミック多孔体。
体が、焼成した後、不活性気体雰囲気にて冷却し、粉砕
もしくは切断し、保管されたものであることを特徴とす
るリン酸カルシウム系セラミック多孔体。
【００５７】（６）リン酸カルシウム系セラミック粉末
に、純水、解膠剤、および界面活性剤からなる添加剤を
所定量加える工程と、前記添加剤が加えられたリン酸カ
ルシウム系セラミック粉末を混合し、発泡し、乾燥する
工程と、乾燥した混合物を１０００〜１１００℃で焼成
する工程と、前記焼成体を不活性雰囲気中で冷却する工
程とを具備することを特徴とするリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体の製造方法。
に、純水、解膠剤、および界面活性剤からなる添加剤を
所定量加える工程と、前記添加剤が加えられたリン酸カ
ルシウム系セラミック粉末を混合し、発泡し、乾燥する
工程と、乾燥した混合物を１０００〜１１００℃で焼成
する工程と、前記焼成体を不活性雰囲気中で冷却する工
程とを具備することを特徴とするリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体の製造方法。
【００５８】（７）上記（６）のリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体に薬剤を吸着させる工程を具備すること
を特徴とする薬剤徐放性多孔体の製造方法。
ラミック多孔体に薬剤を吸着させる工程を具備すること
を特徴とする薬剤徐放性多孔体の製造方法。
【００５９】（８）上記（６）のリン酸カルシウム系セ
ラミック多孔体に細胞を培養して複合する工程を具備す
ることを特徴とする細胞複合多孔体の製造方法。
ラミック多孔体に細胞を培養して複合する工程を具備す
ることを特徴とする細胞複合多孔体の製造方法。
【００６０】
【発明の効果】以上、詳細に説明したように、本発明に
よれば、薬剤の保持性に優れた薬剤徐放担体もしくは細
胞付着性の高い細胞培養担体を構成するリン酸カルシウ
ム系セラミック多孔体を提供することができる。
よれば、薬剤の保持性に優れた薬剤徐放担体もしくは細
胞付着性の高い細胞培養担体を構成するリン酸カルシウ
ム系セラミック多孔体を提供することができる。
フロントページの続き
Ｆターム(参考） 4B029 AA21 BB11 CC03 CC10
4C081 AB02 AB03 AB04 AC03 BB06
BB09 CD27 CD28 CD29 CD34
CE01 CE02 CF011 CF021
DA11 DB05 DB06 DC14 EA05
EA11
4G019 FA03 FA13 GA04
Claims (3)
- 【請求項１】５μｍ以下の気孔を有し、かつ表面が負に
帯電していることを特徴とする、薬剤徐放担体としての
リン酸カルシウム系セラミック多孔体。 - 【請求項２】気孔率が５５〜９０％であり、連通する気
孔径５０〜１０００μｍのマクロ気孔と５μｍ以下のミ
クロ気孔を有し、かつ表面が負に帯電していることを特
徴とする、細胞培養用担体としてのリン酸カルシウム系
セラミック多孔体。 - 【請求項３】前記リン酸カルシウム系セラミック多孔体
が、焼成した後、不活性気体雰囲気にて冷却し、粉砕も
しくは切断し、保管されたものであることを特徴とする
請求項１または２に記載のリン酸カルシウム系セラミッ
ク多孔体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001246615A JP2003055061A (ja) | 2001-08-15 | 2001-08-15 | リン酸カルシウム系セラミック多孔体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001246615A JP2003055061A (ja) | 2001-08-15 | 2001-08-15 | リン酸カルシウム系セラミック多孔体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003055061A true JP2003055061A (ja) | 2003-02-26 |
Family
ID=19076123
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001246615A Withdrawn JP2003055061A (ja) | 2001-08-15 | 2001-08-15 | リン酸カルシウム系セラミック多孔体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003055061A (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004284933A (ja) * | 2003-03-25 | 2004-10-14 | Mamoru Aizawa | 繊維状リン酸カルシウム |
| JP2005172475A (ja) * | 2003-12-08 | 2005-06-30 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | バイオアッセイプレート及びそれを用いたバイオアッセイ方法 |
| WO2006030782A1 (ja) | 2004-09-14 | 2006-03-23 | Japan Science And Technology Agency | セラミック粒子群およびその製造方法並びにその利用 |
| JP2006075581A (ja) * | 2004-08-11 | 2006-03-23 | Olympus Corp | 生体組織補填材および生体組織補填体 |
| JP2006101986A (ja) * | 2004-10-01 | 2006-04-20 | Olympus Corp | 球状セラミックス粒子の製造方法、細胞の播種方法および生体組織補填体の製造方法 |
| JP2007508075A (ja) * | 2003-10-16 | 2007-04-05 | セントロ ナショナル デ インヴェスティゲーションズ シエンティフィカス（セーイーエネセー）． | 骨移植物のための複合生体材料 |
| JP2008532539A (ja) * | 2005-03-16 | 2008-08-21 | ロビオ システムズ リミテッド | 細胞の実体の成熟および輸送システム |
| JP2011110200A (ja) * | 2009-11-26 | 2011-06-09 | Pilot Corporation | 人工耳小骨 |
| JP2014236673A (ja) * | 2013-06-06 | 2014-12-18 | オリンパス株式会社 | 骨形成促進剤とその製造方法 |
| JP2015154809A (ja) * | 2014-02-20 | 2015-08-27 | 学校法人東京理科大学 | 人工骨およびその製造方法 |
| JP2018174929A (ja) * | 2017-04-11 | 2018-11-15 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 哺乳動物細胞の培養のための培養液添加剤 |
| WO2020065753A1 (ja) * | 2018-09-26 | 2020-04-02 | オリンパス株式会社 | 薬物投与体、薬物投与システム、および薬物投与方法 |
-
2001
- 2001-08-15 JP JP2001246615A patent/JP2003055061A/ja not_active Withdrawn
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004284933A (ja) * | 2003-03-25 | 2004-10-14 | Mamoru Aizawa | 繊維状リン酸カルシウム |
| JP2007508075A (ja) * | 2003-10-16 | 2007-04-05 | セントロ ナショナル デ インヴェスティゲーションズ シエンティフィカス（セーイーエネセー）． | 骨移植物のための複合生体材料 |
| JP2005172475A (ja) * | 2003-12-08 | 2005-06-30 | Mitsubishi Rayon Co Ltd | バイオアッセイプレート及びそれを用いたバイオアッセイ方法 |
| JP2006075581A (ja) * | 2004-08-11 | 2006-03-23 | Olympus Corp | 生体組織補填材および生体組織補填体 |
| EP1808411A1 (en) * | 2004-09-14 | 2007-07-18 | Japan Science and Technology Agency | Ceramic particle group and method for production thereof and use thereof |
| WO2006030782A1 (ja) | 2004-09-14 | 2006-03-23 | Japan Science And Technology Agency | セラミック粒子群およびその製造方法並びにその利用 |
| EP1808411A4 (en) * | 2004-09-14 | 2011-11-02 | Japan Science & Tech Agency | PARTICULATE CERAMIC GROUP, PROCESS FOR PRODUCING THE SAME, AND USE THEREOF |
| US8153255B2 (en) | 2004-09-14 | 2012-04-10 | Japan Science And Technology Agency | Ceramic particle group comprising sintered particles of hydroxyapatite |
| JP2006101986A (ja) * | 2004-10-01 | 2006-04-20 | Olympus Corp | 球状セラミックス粒子の製造方法、細胞の播種方法および生体組織補填体の製造方法 |
| JP2008532539A (ja) * | 2005-03-16 | 2008-08-21 | ロビオ システムズ リミテッド | 細胞の実体の成熟および輸送システム |
| JP2011110200A (ja) * | 2009-11-26 | 2011-06-09 | Pilot Corporation | 人工耳小骨 |
| JP2014236673A (ja) * | 2013-06-06 | 2014-12-18 | オリンパス株式会社 | 骨形成促進剤とその製造方法 |
| JP2015154809A (ja) * | 2014-02-20 | 2015-08-27 | 学校法人東京理科大学 | 人工骨およびその製造方法 |
| JP2018174929A (ja) * | 2017-04-11 | 2018-11-15 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 哺乳動物細胞の培養のための培養液添加剤 |
| WO2020065753A1 (ja) * | 2018-09-26 | 2020-04-02 | オリンパス株式会社 | 薬物投与体、薬物投与システム、および薬物投与方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20081104 |