JP2003012701A - 酵母由来の新規多糖体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】キャンディダ・ボイディニが生産する新規な多
糖体を提供する。 【解決手段】キャンディダ・ボイディニを高濃度培養或
いは一日以上の長期間培養し、得られた培養液から所望
の多糖体を分離する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な多糖体、特
に酵母由来の新規な多糖体に関する。より具体的には、
キャンディダ属ボイディニ種に属する酵母が産生する新
規な多糖体に関する。

【０００２】

【従来の技術】微生物や植物細胞を培養すると、培養液
が粘調になったり、ｐＨの変化でゲル状になる等の現象
が見出される場合がある。この現象は、該微生物や該植
物細胞が、細胞外に多糖体を産生していることに起因し
ている場合が多い。そこで、そのような多糖体の性質を
食品や医薬品、香粧品などの幅広い分野で利用しようと
いう試みが既になされている。具体的には、多糖体に特
徴的な分子構造および化学的性質から、増粘剤・レオロ
ジー改良剤・保湿剤・整腸剤・制癌剤等の用途が知られ
ている。たとえば、デキストラン・キサンタンガム・プ
ルランなどをその代表例として挙げることができる。

【０００３】微生物の一種である酵母もまた、菌体外に
多糖体を分泌する事が多数報告されている。たとえば、
Annales de Microbiologie誌（Vol.40, pp245-253, 199
0）では、そのような例として、Aureobasidium属、Cand
ida属、Cryptococcus属、Hansenula属、Lipomyces属、R
hinocladiella属、Rhodotorula属、Bullera属、Sporobo
lomyces属、Trichosporon属に属する菌株が挙げられて
いる。また、ポリマーのタイプとしては、マンナン型、
グルカン型、グルコマンナン型、ガラクトマンナン型、
フォスフォマンナン型等が知られている。

【０００４】キャンディダ属ボイディニ種（Candida bo
idinii）に属する酵母は、メタノールなどの安価な炭素
源を原料として、タンパク質やアルデヒド類などの有用
物質を生産するための酵母宿主としてしばしば利用され
てきたが、多糖体を産生することは知られていなかっ
た。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、キャ
ンディダ属ボイディニ種に属する酵母が生産し得る新規
な多糖体を提供することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、キャンデ
ィダ属ボイディニ種に属する酵母が多糖体を産生するこ
とを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明者
らは、該酵母を液体培地中で培養した場合、本酵母が菌
体外に多糖体を蓄積することを見出し、さらに好ましく
は、高濃度（たとえば、乾菌体重量で５ｇ／Ｌ以上）条
件下で培養したり、一日以上の長期間培養（連続培養も
含む）を行うと、本酵母が菌体外に多糖体を著量蓄積す
ることを見出し、本発明を完成させた。

【０００７】即ち、本発明は以下のとおりである。 ［１］下記の特徴を有する新規多糖体。 １）水に可溶。エタノール、メタノール、アセトン、エ
ーテル、酢酸エチル、及び、ベンゼンに不溶。 ２）構成単糖が、実質的にグルコース、マンノース及び
グルコサミンからなる。 ３）グルコースとマンノースの構成比が、１：（０．７
〜４．５）。 ［２］構成単糖として、非還元末端マンノース、１→２
結合マンノース、１→６結合マンノース、１→２および
１→６結合マンノース、非還元末端グルコース又は１→
６結合グルコースを含むことを特徴とする［１］記載の
新規多糖体。 ［３］ 非還元末端マンノースに対する他の構成単糖の
平均組成比が、下記ａ）〜ｆ）の何れかを満足すること
を特徴とするおよび［２］記載の新規多糖体。 ａ）非還元末端マンノース；１．０ ｂ）１→２結合マンノース；７．４ ｃ）１→６結合マンノース；３．６ ｄ）１→２および１→６結合マンノース；２．８ ｅ）非還元末端グルコース；２．７ ｆ）１→６結合グルコース；１．６ ［４］キャンディダ属ボイディニ種（Candida boidini
i）に属する酵母が産生することを特徴とする［１］か
ら［３］の何れか一項に記載の新規多糖体。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明におけるキャンディダ属ボ
イディニ種に属する酵母とは、該多糖体を産生するもの
であれば特に制限はないが、特にキャンディダ属ボイデ
ィニ種Ｓ２ＡＯＵ−１株、または、その派生株を好適な
例として挙げることができる。また、近年は遺伝子組換
え技術を用いてキャンディダ属ボイディニ種を改変する
ことも比較的容易になっており、そのような遺伝子組換
えキャンディダ属ボイディニ種も本発明のキャンディダ
属ボイディニ種に属する酵母に含まれるものとする。

【０００９】このようなキャンディダ属ボイディニ種に
属する酵母の代表例としては、ＭＴ−４０５４４株を挙
げることができる。尚、本菌株は、平成９年５月１日よ
り特許手続き上の微生物寄託の国際的承認に関する条約
に基づいて、受託番号：ＦＥＲＭ−BＰ−５９３６とし
て茨城県つくば市東１丁目１番１号中央第6の独立行政
法人・産業技術総合研究所・特許生物寄託センターに寄
託されている。

【００１０】キャンディダ属ボイディニ種に属する酵母
に該多糖体を産生させるためには、通常の有機、および
／または、無機成分を含有する液体培地中で該微生物を
培養すればよい。培養するための液体培地の組成は、キ
ャンディダ属ボイディニ種に属する酵母が円滑に生育
し、かつ、目的の多糖体が培養液中に産生される限り特
に限定されるものではない。炭素源としては、メタノー
ル、グリセロール、エタノール、グルコースなどを好適
な例として挙げることができる。窒素源としては、各種
ペプトン、コーンスティープリカー、酵母エキス、硫酸
アンモニウムなどの有機体、あるいは、無機体窒素源を
一つあるいは組み合わせて用いることができる。また、
マグネシウム、ナトリウム、カリウムなどの金属の塩類
（リン酸塩、硫酸塩、塩酸塩）、微量金属や各種ビタミ
ン類、核酸関連物質、アンモニアや苛性ソーダ等のｐＨ
調整剤などを培地に添加することができる。

【００１１】本発明の方法に使用される培養液を得るた
めの液体培養の方法および培養条件、培養期間には特に
制限はない。具体的な培養条件は概ね以下のとおりであ
る。培養温度は１５℃から３５℃、好ましくは、２５℃
から３０℃である。液体培養中の培養液のｐＨは本酵母
が生育できるｐＨであれば特に制限はされないが、通常
ｐＨ２から８、より好ましくは、ｐＨ４から７の範囲で
ある。培養期間は通常１日から６０日間程度、好ましく
は３日から４０日間程度であり、連続培養状態の液から
酵母菌体と上清液を分離する際は特に培養期間は限定さ
れない。

【００１２】こうして得られた培養液から目的とする多
糖体を分離するためには、該培養液中の菌体およびその
他の夾雑物を遠心分離またはろ過で除去した後、得られ
た上清液または濾過液にアセトンやエタノール、メタノ
ールなどの親水性の有機溶媒を添加し該多糖体を不溶化
させたのち、濾別・乾燥させればよい。また、親水性の
有機溶媒を添加する前に、または、濾別した沈殿物を再
度水に溶解した後に、活性炭、ゲルろ過、各種高分子
膜、陽イオン交換樹脂、陰イオン交換樹脂、あるいは、
透析などの操作により塩類や他の不純成分を除去した後
に、前述の不溶化・濾別・乾燥の操作を行っても良い。

【００１３】このようにして得られた多糖体は、実施例
において詳細に示すような溶解性試験、酸や酵素による
部分分解分析、メチル化分析、分子量測定に供すること
により、その諸性質を明かにすることができる。

【００１４】溶解性試験は、本実施例においては、該多
糖体を任意に選んだ溶媒と混合し、目視で該多糖体が確
認できない場合にのみ溶解性があると判定したが、これ
に限定されるものではなく、方法並びに判定条件の違い
によってその結果が変動することがある。

【００１５】酸や酵素による部分分解分析は、本実施例
においては、塩酸並びにプルラナーゼによる部分分解処
理を代表的な例として採用したが、これに限定されるも
のではなく、方法並びに分析条件の違いによってその測
定結果が変動することがある。

【００１６】メチル化分析は、本実施例においては、粉
末ＮａＯＨ法によって行い、生成したメチル化多糖を加
水分解して各単糖に分解した後、還元アセチル化し、部
分メチル化糖アルコールのアセチル誘導体（部分メチル
化アルジトールアセテート）の形にして、ガスクロマト
グラフィー分析（以下、ＧＣ）、並びに、ガスクロマト
グラフィー／マススペクトル分析（以下、ＧＣ／ＭＳ）
に供したが、これに限定されるものではなく、方法並び
に分析条件の違いによってその測定結果が変動すること
がある。特に、本実施例において示したメチル化分析
は、工程数が比較的多く、また、洗浄操作や抽出操作を
含むため、本発明者らの経験によれば少なくとも１０％
程度の測定誤差を見込む必要がある。

【００１７】分子量測定は、本実施例においては、プル
ランを分子量とするＧＰＣ分析を代表的な例として採用
したが、これに限定されるものではなく、方法、分子量
マーカー、並びに分析条件の違いによってその測定結果
が変動することがある。

【００１８】また、本発明における新規多糖体とは、キ
ャンディダ属ボイディニ種に属する酵母が産生する多糖
体であるが、該酵母を培養している間や培養液から該多
糖体を精製する際に物理的または化学的な作用により断
片化された多糖体も含まれるものとする。また、その利
用目的によっては、酵素処理などを行うことにより、人
為的に断片化して利用する場合もあり、そのような多糖
体も本発明に含まれるものとする。

【００１９】すなわち、本発明は、キャンディダ属ボイ
ディニ種に属する酵母を培養し、その培養液中に産生さ
れ、かつ、下記の特徴を有する新規多糖体を提供する。
但し、分析方法並びに分析条件の違いによってその分析
結果が変動することもあるため、下記の２）〜４）の特
徴は、あくまでも平均的な姿である。 １）水に可溶。エタノール、メタノール、アセトン、エ
ーテル、酢酸エチル、及び、ベンゼンに不溶。 ２）構成単糖が、実質的にグルコースとマンノースから
なり、かつ、グルコースとマンノーの構成比が、１：
（０．７〜４．５）。 ３）構成単糖として、非還元末端マンノース、１→２結
合マンノース、１→６結合マンノース、１→２および１
→６結合マンノース、非還元末端グルコース、１→６結
合グルコースを含む。 ４）非還元末端マンノースに対する他の構成単糖の平均
組成比が、 ａ）非還元末端マンノース；１．０ ｂ）１→２結合マンノース；７．４ ｃ）１→６結合マンノース；３．６ ｄ）１→２および１→６結合マンノース；２．８ ｅ）非還元末端グルコース；２．７ ｆ）１→６結合グルコース；１．６ 本発明における新規多糖体は、食品や医薬品、香粧品な
どの幅広い分野で利用することができる。具体的には、
増粘剤・レオロジー改良剤・保湿剤・整腸剤・制癌剤等
の用途を挙げることができる。

【００２０】

【実施例】以下、実施例を示して本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。

【００２１】実施例１ ５００ｍｌ容のバッフル付三角フラスコ３本のそれぞれ
に［表１］に示す組成の液体培地を８０ｍｌ入れ、高圧
蒸気滅菌した。キャンディダ属ボイディニ種に属する酵
母AOU-1株を接種し、２７℃で２日間振とう培養を行っ
た。

【００２２】

【表１】培地組成 ───────────────────────── グルコース ２０．０ｇ／Ｌ イーストナイトロゲンベース １．７ｇ／Ｌ 酵母エキス ５．０ｇ／Ｌ 硫酸アンモニウム ５．０ｇ／Ｌ ｐＨ ６．５ ─────────────────────────

【００２３】次に、［表２］に示す組成の培地５Ｌを入
れて高圧蒸気滅菌した１０Ｌ容ジャーファーメンターに
前記で得られた培養液２４０ｍｌ（フラスコ３本分）を
接種し、温度２７℃、通気量５Ｌ／分間、回転数５００
ｒｐｍで、アンモニア水を用いてｐＨを６．０に保ちな
がら、１４日間培養した。追加炭素源としてはメタノー
ルを用いた。

【００２４】

【表２】培地組成 ───────────────────── グリセロール ３０．０ｇ／Ｌ コーンスティープリカー ３０．０ｇ／Ｌ Ｋ２ＨＰＯ４ １．０ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ／Ｌ ＮａＣｌ ０．１ｇ／Ｌ 硫酸アンモニウム ５．０ｇ／Ｌ メタノール １５．０ｍｌ／Ｌ ─────────────────────

【００２５】上記培養終了後、培養終了液を遠心処理
（９、０００×ｇ、５分間）し、酵母菌体を一次除去し
た後、その一部（５０ｍＬ）を５Ｌの１０ｍＭ酢酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ６．０）に対する透析処理に４回供
した。続いて、得られた透析内液を１０ｍＭの酢酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ６．０）で予め平衡化した東ソー社
製のトヨパール６５０Ｍを担体とするカラムクロマトグ
ラフィーに供し、７００ｍＬの１０ｍＭの酢酸ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ６．０）で溶離させた。この溶離液を滅
菌水で予め洗浄したキュノ（株）製のゼータプラスフィ
ルターＢｉｏＣａｐ６０Ｓ（粒子径０．２〜０．５μ
ｍ）でろ過処理した。得られたろ液に等容量のメタノー
ルを加え、４℃にて一晩放置後、遠心処理（９、０００
×ｇ、３０分間）を行って沈殿物を集めた。この沈殿物
を１００ｍＬの水に溶解した後、武田薬品工業製の活性
炭（白鷺）を１ｇ加えて、室温で１時間かく拌後、ろ過
操作により該溶解液より活性炭を除去して、活性炭処理
液を得た。この溶液に等容量のメタノールを加え、４℃
にて一晩放置後、遠心処理（２５、０００×ｇ、３０分
間）を行って沈殿物を集めた。得られた沈殿物を凍結乾
燥処理して、白色不定形の乾燥物１ｇを得た。尚、上記
の操作は４連で実施したが、いずれの場合においてもほ
ぼ同様の結果が得られた。該乾燥物５０ｍｇと各種溶媒
（純水、エタノール、メタノール、アセトン、エーテ
ル、酢酸エチル、ベンゼン）５ｍＬを混合し、５０℃に
て１０分間激しく混和させた。混和処理後、純水中には
該乾燥物を目視で確認できなかったが、他の溶媒中では
該乾燥物を目視で確認することができた。すなわち、純
水以外の溶媒に該乾燥物は溶解しなかった。

【００２６】実施例２ 実施例１で得られた乾燥物１ｍｇと１Ｎ硫酸１ｍＬを混
合し、１００℃で６時間加水分解処理を行った。処理液
を減圧乾固させた後、適当量の純水に溶解して、以下の
条件でＨＰＬＣ分析を行い、中性糖並びにアミノ糖の分
析を行った。その結果、中性糖としてはグルコース及び
マンノース、アミノ糖としてはグルコサミンが検出され
た。すなわち、本乾燥物は、多糖体であることが確認さ
れた。また、以下の［表３］に各糖のモル比率について
記した。 ａ）中性糖の分析条件 カラム：東ソー TSK-gel Sugar AXG 4.6mm×150mm カラム温度：７０℃ 移動相：0.5Ｍ ホウ酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．７） 移動相流速：０．４ｍL／分 ポストカラム標識： 反応試薬：１％アルギニン／３％ホウ酸 反応試薬流速：０．５ｍL／分 反応温度：１５０℃ 検出器：分光蛍光光度計 検出波長：ＥＸ．３２０ｎｍ、ＥＭ．４３０ｎｍ ｂ）アミノ糖の分析条件 カラム：東ソー TSK-gel SCX 6mm×150mm カラム温度：６０℃ 移動相：0.04Ｍ ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
６） 移動相流速：０．３ｍL／分 ポストカラム標識： 反応試薬：１％アルギニン／３％ホウ酸 反応試薬流速：０．５ｍL／分 反応温度：１５０℃ 検出器：分光蛍光光度計 検出波長：ＥＸ．３２０ｎｍ、ＥＭ．４３０ｎｍ

【００２７】

【表３】

【００２８】実施例３ 実施例１で得られた乾燥物１．８ｍｇと１Ｎ塩酸１００
μＬを混合し、７５℃で４時間加水分解処理を行った。
処理液を減圧乾固させた後、適当量の純水に溶解して、
以下の条件でアミンカラム分析を行った結果、本乾燥物
由来の８種類のピークが観察された。それぞれの部分分
解物のピーク画分を分取した後、実施例２に記載した中
性糖の分析を実施し、グルコースとマンノースの組成比
を求めた。［表４］に示された結果より、本多糖体のグ
ルコースとマンノースの構成比は、１：（０．７〜４．
５）であった。 ａ）アミンカラム分析条件 カラム：旭化成 Asahipak NHP-50 25cm×4.6mmI.D. カラム温度：３０℃ 移動相：純水／アセトニトリル 移動相流速：０．５ｍｌ／分 検出器：示差屈折計

【００２９】

【表４】

【００３０】実施例４ 実施例１で得られた乾燥物１．８ｍｇと緩衝液１００μ
Ｌ、並びに、Klebsiella pnemoniae由来のプルラナーゼ
溶液５０μL（２０ｍユニット含有）を混合し、３７℃
で１６時間加水分解処理を行った。処理液を１００℃に
て５分間の加熱処理を行った後、適当量の純水に溶解し
て、実施例３に記載の条件でアミンカラム分析を行った
結果、本乾燥物由来の４種類のピークが観察された。そ
れぞれの部分分解物のピーク画分を分取した後、実施例
２に記載した中性糖の分析を実施し、グルコースとマン
ノースの組成比を求めた。［表５］に示された結果よ
り、本多糖体のグルコースとマンノースの構成比は、
１：（３．１〜４．２）であった。

【００３１】

【表５】

【００３２】実施例５ 実施例１で得られた乾燥物１．８ｍｇとＤＭＳＯ６００
μＬを混合し、室温で３時間かく拌した。続いて、粉末
のＮａＯＨを４０ｍｇ添加し、室温で３０分間かく拌し
た。次に、ヨウ化メチルを３００μＬ添加し、室温で３
０分間かく拌した。得られたヨウ化メチル処理液を、フ
ァルマシア社製のセファデックスＬＨ−２０を担体と
し、クロロホルムを溶離液とするカラムクロマトグラフ
ィー（１ｃｍ×２０ｃｍ）に供し、溶離液を１ｍｌずつ
分取した。オルシノール硫酸法を用いたＴＬＣ分析によ
り、メチル化多糖化画分を確認した後、該画分全てを混
合し、さらに、これを乾固させた。メチル化多糖化画分
の乾固残さを９０％ギ酸水溶液１ｍＬに溶解し、１００
℃で６時間加熱処理を行った後、これを乾固させた。該
乾固残さを２Ｎトリフルオロ酢酸１ｍＬに溶解し、１０
０℃で６時間加熱処理を行った後、これを再び乾固させ
た。次に、該乾固残さを少量の純水で３回洗浄した後、
ＮａＢＨ₄１０ｍｇ及び５００μＬの純水と混合し、一
晩室温で放置した。適当量の酢酸を加えて過剰のＮａＢ
Ｈ₄を分解した後、減圧乾固した。この乾固残さを２ｍ
Ｌのメタノールで５回洗浄した後、無水酢酸５００μＬ
及びピリジン５００μＬに溶解し、１００℃で４時間加
熱処理を行った。これを再び乾固させた後、２ｍＬのク
ロロホルムを用いて抽出操作を行った。該クロロホルム
相に対して純水１ｍＬを用いた脱塩処理を５回、続いて
無水硫酸ナトリウム１ｇを用いた脱水処理を１回実施し
た後、該クロロホルム相を再び乾固させた。乾固残さを
適当量のクロロホルムに再溶解して、以下に示した条件
にてＧＣ分析及びＧＣ／ＭＳ分析に供した。その結果、
部分メチル化アルジトールアセテートの主要なピークと
して６種類が観察され、それぞれのピークのマススペク
トルを標準マススペクトルと照らし合わせることによ
り、各ピークを同定した。さらに、ＧＣ分析で得られた
各ピークの面積並びに各ピークの炭素数より、部分メチ
ル化アルジトールアセテートの組成比を求めた。これら
の結果を［表６］にまとめた。これより、本多糖体は、
構成単糖として、非還元末端マンノース、１→２結合マ
ンノース、１→６結合マンノース、１→２および１→６
結合マンノース、非還元末端グルコース、１→６結合グ
ルコースを含むことが判明した。さらに、非還元末端マ
ンノースに対する他の構成単糖の平均組成比は、 ａ）非還元末端マンノース；１．０ ｂ）１→２結合を含むマンノース；７．４ ｃ）１→６結合を含むマンノース；３．６ ｄ）１→２および１→６結合を含むマンノース；２．８ ｅ）非還元末端グルコース；２．７ ｆ）１→６結合を含むグルコース；１．６ であることが判明した。 ａ）ＧＣ分析条件 装置：Hewlett-Packerd HP5890A カラム 液相：SP-2380（スペルコジャパン） タイプ：Fused silica capillary 25m×0.25 mmI.D. キャリアーガス：Ｈｅ カラム温度：１００℃、１分→［２０℃／分］→２３０
℃→１５分間保持→［４０℃／分］→２７５℃→１０分
間保持 注入口温度：２７０℃ 検出モード：ＦＩＤ 検出器温度：２７０℃ 注入量：１μＬ 注入モード：spilitless ｂ）ＧＣ／ＭＳ分析条件 装置：Hewlett-Packerd HP5890A ガスクロマトグラフ 日本電子 JMS DX-303 質量分析計 データ処理：日本電子 JMA DA5000 データ処理システ
ム ＧＣ部： 装置：Hewlett-Packerd HP5890A ガスクロマトグラフ カラム 液相：SP-2380（スペルコジャパン） タイプ：Fused silica capillary 25m×0.25 mmI.D. キャリアーガス：Ｈｅ カラム温度：１００℃、１分→［２０℃／分］→２３０
℃→１５分間保持→［４０℃／分］→２７５℃→１０分
間保持 注入口温度：２７０℃ 注入量：１μＬ 注入モード：spilitless ＭＳ部： イオン化方式：ＥＩ 電子加速電圧：７０Ｖ イオン化電流：３００μＡ イオン化温度：２５０℃ イオン化加速電圧：３．０ｋＶ 多段電子増倍管電圧：１．３ｋＶ 走査速度：1sec/scan（m/z10〜500） 走査間隔：1sec

【００３３】

【表６】

【００３４】実施例６ 昭和電工製のShoudex Pulluanを５０ｍＭのリン酸バッ
ファーに溶解し、以下に示す条件にてＧＰＣ分析に供し
た。［表７］に示したように各スタンダードの分子量と
溶出量(ｍＬ)の関係より検量線を作成した。次に実施例
１で得られた乾燥物１ｍｇを５０ｍＭのリン酸バッファ
ーに溶解し、同様の条件にて、ＧＰＣ分析（計３回）に
供し、上述の検量線より分子量を算出したところ、平均
分子量が２７０ｋダルトンのピークが確認された。［表
８］に分析結果を示す。 ａ）ＧＰＣ分析条件 分析装置：Waters 741Data Module 検出器：Toso RI-8 (Differential Refractometer) カラム：YMC-diol S-5 200A カラムサイズ：8.0mm×50.0cm 溶媒：0.05Mリン酸buffer pH6.8 流速：１ｍＬ／分

【００３５】

【表７】

【００３６】

【表８】

【００３７】実施例７ 実施例１で得られた乾燥物３ｇを純水１００ｍＬに溶解
した後、酢酸溶液でｐＨ４．０に調整した。新日本化学
工業製のスミチームＡＣＨ２０ｍｇを該溶液に加えて、
５０℃にて３時間処理した後、凍結乾燥を行った。該凍
結乾燥物１ｍｇを５０ｍＭのリン酸バッファーに溶解
し、実施例６と同様の条件にて、ＧＰＣ分析に供したと
ころ、平均分子量が２７０ｋダルトン、７４ｋダルトン
及び３８ｋダルトンの３種類のピークが確認された。ま
た、３種類のピークの濃度比は、２７０ｋダルトン：７
４ｋダルトン：３８ｋダルトン＝１００：６７：２２で
あった。

【００３８】

【発明の効果】本発明の多糖体は、新規の多糖体であ
り、各種産業分野において広く適応が可能である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１３年７月１０日（２００１．７．１
０）

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項３

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００７

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００７】即ち、本発明は以下のとおりである。 ［１］下記の特徴を有する新規多糖体。 １）水に可溶。エタノール、メタノール、アセトン、エ
ーテル、酢酸エチル、及び、ベンゼンに不溶。 ２）構成単糖が、実質的にグルコース、マンノース及び
グルコサミンからなる。 ３）グルコースとマンノースの構成比が、１：（０．７
〜４．５）。 ［２］構成単糖として、非還元末端マンノース、１→２
結合マンノース、１→６結合マンノース、１→２および
１→６結合マンノース、非還元末端グルコース又は１→
６結合グルコースを含むことを特徴とする［１］記載の
新規多糖体。 ［３］ 非還元末端マンノースに対する他の構成単糖の
平均組成比が、下記ａ）〜ｆ）の何れかを満足すること
を特徴とする［１］および［２］記載の新規多糖体。 ａ）非還元末端マンノース；１．０ ｂ）１→２結合マンノース；７．４ ｃ）１→６結合マンノース；３．６ ｄ）１→２および１→６結合マンノース；２．８ ｅ）非還元末端グルコース；２．７ ｆ）１→６結合グルコース；１．６ ［４］キャンディダ属ボイディニ種（Candida boidini
i）に属する酵母が産生することを特徴とする［１］か
ら［３］の何れか一項に記載の新規多糖体。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 安楽城 正 千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社 内 (72)発明者 高橋 均 千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社 内 (72)発明者 吉谷 敏 千葉県茂原市東郷1144 三井化学株式会社 内 (72)発明者 加藤 暢夫 京都府京都市左京区北白川追分町 京都大 学内 (72)発明者 阪井 康能 京都府京都市左京区北白川追分町 京都大 学内 (72)発明者 坂本 正弘 京都府京都市左京区北白川追分町 京都大 学内 Ｆターム(参考） 4B064 AF21 BA16 BE01 BG01 BH07 BH20 CA06 CD06 CE03 CE06 CE07 CE09 CE16 DA10 4C090 AA01 AA04 BA01 BA91 BB12 BB14 BB17 BB53 BC17 BD02 BD03 CA42 DA03 DA07 DA09 DA23 DA26 DA27

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記の特徴を有する新規多糖体。１）水
   に可溶。エタノール、メタノール、アセトン、エーテ
   ル、酢酸エチル、及び、ベンゼンに不溶。 ２）構成単糖が、実質的にグルコース、マンノース及び
   グルコサミンからなる。 ３）グルコースとマンノースの構成比が、１：（０．７
   〜４．５）。
2. 【請求項２】 構成単糖として、非還元末端マンノー
   ス、１→２結合マンノース、１→６結合マンノース、１
   →２および１→６結合マンノース、非還元末端グルコー
   ス又は１→６結合グルコースを含むことを特徴とする請
   求項１記載の新規多糖体。
3. 【請求項３】 非還元末端マンノースに対する他の構成
   単糖の平均組成比が、下記ａ）〜ｆ）の何れかを満足す
   ることを特徴とするおよび請求項２記載の新規多糖体。 ａ）非還元末端マンノース；１．０ ｂ）１→２結合マンノース；７．４ ｃ）１→６結合マンノース；３．６ ｄ）１→２および１→６結合マンノース；２．８ ｅ）非還元末端グルコース；２．７ ｆ）１→６結合グルコース；１．６
4. 【請求項４】 キャンディダ属ボイディニ種（Candida
   boidinii）に属する酵母が産生することを特徴とする請
   求項１から請求項３の何れか一項に記載の新規多糖体。