JP2003002843A - 組織特異的トランスポーター阻害剤 - Google Patents
組織特異的トランスポーター阻害剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 患者の食事療法によるＱＯＬ低下を防ぐこと
ができる、消化管において非吸収性の組織特異的トラン
スポーター阻害剤や、かかる阻害剤を有効成分とする組
織機能不全疾患治療薬及び慢性腎不全進行抑制治療薬を
提供すること。 【解決手段】 構造的修飾した活性残基が膜貫通型トラ
ンスポーターとの相互作用に優れていると期待される超
分子構造ポリロタキサンに、オリゴペプチドトランスポ
ーター１のリガンドであるジペプチドを導入し、消化管
において非吸収性の組織特異的トランスポーター阻害剤
を作製する。
ができる、消化管において非吸収性の組織特異的トラン
スポーター阻害剤や、かかる阻害剤を有効成分とする組
織機能不全疾患治療薬及び慢性腎不全進行抑制治療薬を
提供すること。 【解決手段】 構造的修飾した活性残基が膜貫通型トラ
ンスポーターとの相互作用に優れていると期待される超
分子構造ポリロタキサンに、オリゴペプチドトランスポ
ーター１のリガンドであるジペプチドを導入し、消化管
において非吸収性の組織特異的トランスポーター阻害剤
を作製する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、組織特異的トラン
スポーターが認識するリガンド構造と、膜組織を透過で
きない高分子分子構造とをもつ組織特異的トランスポー
ター機能阻害剤、及びかかる組織特異的トランスポータ
ー機能阻害剤を有効成分とする組織機能不全疾患治療薬
又は慢性腎不全進行抑制治療薬等に関する。
スポーターが認識するリガンド構造と、膜組織を透過で
きない高分子分子構造とをもつ組織特異的トランスポー
ター機能阻害剤、及びかかる組織特異的トランスポータ
ー機能阻害剤を有効成分とする組織機能不全疾患治療薬
又は慢性腎不全進行抑制治療薬等に関する。
【０００２】
【従来の技術】現在、透析患者は増加傾向にあり、将
来、糖尿病から透析療法に移行する患者の数を合わせる
と莫大な数にのぼることが予想されており、透析療法に
かかる医療費は１兆円を遙かに越えることが推定されて
いる。これらのことから、腎疾患を発症させない予防医
学及び腎不全を透析に至らせない保存期治療が重要とさ
れている。慢性腎不全患者における腎障害の有効な治療
法は確立しておらず、現在までのところ、低タンパク食
事療法やＡＣＥ阻害薬のような抗高血圧薬の投与が行わ
れている（Am. J. Cardiol. 59, 66A-71A, 1987、Am.
J. Kidney. 20, 443-57, 1992、BMJ 304, 216-20, 199
2、Ann. Intern. Med. 124, 627-32, 1996）。上記低タ
ンパク食療法は慢性腎不全の進行を抑制するための有効
な手段とされ、現在広く実施されているが、食事制限は
患者のquality of life（ＱＯＬ）やコンプライアンス
の問題を抱えているため、タンパク質の経口吸収を抑制
する等の新しい治療戦略が求められている。最近、高脂
血症治療の新しい戦略として、小腸に存在する胆汁酸ト
ランスポーターを阻害することによってコレステロール
の生合成を抑制するということが報告され注目を集めて
いる（J. Pharmacol. Exp.Ther. 293, 315-20, 200
0）。これと同様に、タンパク質の消化管吸収を特異的
な阻害剤によって抑制することが可能であると期待され
る。
来、糖尿病から透析療法に移行する患者の数を合わせる
と莫大な数にのぼることが予想されており、透析療法に
かかる医療費は１兆円を遙かに越えることが推定されて
いる。これらのことから、腎疾患を発症させない予防医
学及び腎不全を透析に至らせない保存期治療が重要とさ
れている。慢性腎不全患者における腎障害の有効な治療
法は確立しておらず、現在までのところ、低タンパク食
事療法やＡＣＥ阻害薬のような抗高血圧薬の投与が行わ
れている（Am. J. Cardiol. 59, 66A-71A, 1987、Am.
J. Kidney. 20, 443-57, 1992、BMJ 304, 216-20, 199
2、Ann. Intern. Med. 124, 627-32, 1996）。上記低タ
ンパク食療法は慢性腎不全の進行を抑制するための有効
な手段とされ、現在広く実施されているが、食事制限は
患者のquality of life（ＱＯＬ）やコンプライアンス
の問題を抱えているため、タンパク質の経口吸収を抑制
する等の新しい治療戦略が求められている。最近、高脂
血症治療の新しい戦略として、小腸に存在する胆汁酸ト
ランスポーターを阻害することによってコレステロール
の生合成を抑制するということが報告され注目を集めて
いる（J. Pharmacol. Exp.Ther. 293, 315-20, 200
0）。これと同様に、タンパク質の消化管吸収を特異的
な阻害剤によって抑制することが可能であると期待され
る。
【０００３】本発明者らは、以前、摂取されたタンパク
質が、消化管内でアミノ酸とオリゴペプチドにまで分解
し、小腸から吸収されることや、かかる吸収が小腸上皮
細胞刷子縁膜に存在する特異的なトランスポーターによ
って行われることを報告している（Pharm. Res. 13, 96
3-77, 1996）。上記分解されたアミノ酸は複数のトラン
スポーターによって輸送されるが、オリゴペプチドはＰ
ＥＰＴ１等のオリゴペプチドトランスポーターによって
輸送され、ジペプチド又はトリペプチド特異的に吸収さ
れる（J. Biol. Chem. 270, 6456-63, 1995）。小腸に
おけるタンパク質の消化産物の吸収は、アミノ酸よりも
ペプチドの方が高いことが知られている（Gastroentero
logy 113, 332-40, 1997）。以上のことから、ＰＥＰＴ
１阻害剤は、食餌中のタンパク質の吸収を抑制すること
ができ、食事療法によってＱＯＬが低下している患者に
とって有用であると考えられる。
質が、消化管内でアミノ酸とオリゴペプチドにまで分解
し、小腸から吸収されることや、かかる吸収が小腸上皮
細胞刷子縁膜に存在する特異的なトランスポーターによ
って行われることを報告している（Pharm. Res. 13, 96
3-77, 1996）。上記分解されたアミノ酸は複数のトラン
スポーターによって輸送されるが、オリゴペプチドはＰ
ＥＰＴ１等のオリゴペプチドトランスポーターによって
輸送され、ジペプチド又はトリペプチド特異的に吸収さ
れる（J. Biol. Chem. 270, 6456-63, 1995）。小腸に
おけるタンパク質の消化産物の吸収は、アミノ酸よりも
ペプチドの方が高いことが知られている（Gastroentero
logy 113, 332-40, 1997）。以上のことから、ＰＥＰＴ
１阻害剤は、食餌中のタンパク質の吸収を抑制すること
ができ、食事療法によってＱＯＬが低下している患者に
とって有用であると考えられる。
【０００４】１９９４年以降、ウサギ、ヒト及びラット
の小腸からＰＥＰＴ１遺伝子がクローニングされ（J. B
iol. Chem. 270, 6456-63, 1995、Nature 368, 563-6,
1994、J. Pharma. Exp. Ther. 275, 1631-7, 1995、Bio
chim. Biophys. Acta, 1305,34-8, 1996）、ＰＥＰＴ１
を介した輸送研究が急速に発展してきた。上記ラット小
腸由来のＰＥＰＴ１遺伝子は本発明者らが初めてクロー
ニングし（Biochim.Biophys. Acta, 1305, 34-8, 199
6）、免疫組織化学的手法により小腸上皮細胞刷子縁膜
側に局在していることを明らかにしている（FEBS Lett.
392, 25-9, 1996）。また、ＰＥＰＴ１は、β−ラクタ
ム系抗生物質などのペプチド類似構造を有する化合物の
みならず（Pharm. Res. 13, 963-77, 1996）、分子内に
ペプチド結合を持たない抗ウイルス薬バラシクロビル
（valacyclovir） などの化合物も認識し、輸送するこ
とが報告されている（Biochem. Biophys. Res. Commun.
250, 246-51, 1998、J. Clin. Invest. 101, 2761-7,
1998、J. Biol. Chem. 273,20-2, 1998）。以上のよう
にＰＥＰＴ１は幅広い基質認識性を示すが、その分子認
識性については未だ解明されておらず、現在のところ、
ＰＥＰＴ１の基質認識には部分的構造のみならず分子全
体の認識が関与しているのではないかと考えられてい
る。一方、腎臓からクローニングされたＰＥＰＴ２（Bi
ochim. Biophys.Acta, 1235, 461-6, 1995、Biochim. B
iophys. Acta, 1280, 173-7, 1996、Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 93, 284-9, 1996）は、腎臓の近位尿細管上
皮細胞刷子縁膜側に局在しているが、ＰＥＰＴ１と類似
した基質認識性を有しており、オリゴペプチドやペプチ
ド様化合物の再吸収に働いている。また、寄与は小さい
が上記ＰＥＰＴ１は腎臓においても発現していることが
知られている（Am. J. Physiol. 276, F658-65, 1999）
が、ＰＥＰＴ２の小腸における発現は認められていな
い。
の小腸からＰＥＰＴ１遺伝子がクローニングされ（J. B
iol. Chem. 270, 6456-63, 1995、Nature 368, 563-6,
1994、J. Pharma. Exp. Ther. 275, 1631-7, 1995、Bio
chim. Biophys. Acta, 1305,34-8, 1996）、ＰＥＰＴ１
を介した輸送研究が急速に発展してきた。上記ラット小
腸由来のＰＥＰＴ１遺伝子は本発明者らが初めてクロー
ニングし（Biochim.Biophys. Acta, 1305, 34-8, 199
6）、免疫組織化学的手法により小腸上皮細胞刷子縁膜
側に局在していることを明らかにしている（FEBS Lett.
392, 25-9, 1996）。また、ＰＥＰＴ１は、β−ラクタ
ム系抗生物質などのペプチド類似構造を有する化合物の
みならず（Pharm. Res. 13, 963-77, 1996）、分子内に
ペプチド結合を持たない抗ウイルス薬バラシクロビル
（valacyclovir） などの化合物も認識し、輸送するこ
とが報告されている（Biochem. Biophys. Res. Commun.
250, 246-51, 1998、J. Clin. Invest. 101, 2761-7,
1998、J. Biol. Chem. 273,20-2, 1998）。以上のよう
にＰＥＰＴ１は幅広い基質認識性を示すが、その分子認
識性については未だ解明されておらず、現在のところ、
ＰＥＰＴ１の基質認識には部分的構造のみならず分子全
体の認識が関与しているのではないかと考えられてい
る。一方、腎臓からクローニングされたＰＥＰＴ２（Bi
ochim. Biophys.Acta, 1235, 461-6, 1995、Biochim. B
iophys. Acta, 1280, 173-7, 1996、Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 93, 284-9, 1996）は、腎臓の近位尿細管上
皮細胞刷子縁膜側に局在しているが、ＰＥＰＴ１と類似
した基質認識性を有しており、オリゴペプチドやペプチ
ド様化合物の再吸収に働いている。また、寄与は小さい
が上記ＰＥＰＴ１は腎臓においても発現していることが
知られている（Am. J. Physiol. 276, F658-65, 1999）
が、ＰＥＰＴ２の小腸における発現は認められていな
い。
【０００５】ヒトにおいて、β−ラクタム系抗生物質で
あり、ＰＥＰＴ１の基質であるcefadroxil（ＣＤＸ）の
バイオアベイラビリティー（ＢＡ）が、同様にＰＥＰＴ
１によって認識されるβ−ラクタム系抗生物質であるce
phalexin（ＣＥＸ）の同時投与によって低下するという
ことが報告されている（Eur. J. Clin. Pharmacol. 41,
179-83, 1991）。バイオアベイラビリティーの指標と
してのＡＵＣ（Area Under the plasma concentration
Curve）がＣＥＸによって低下したメカニズムにはＣＤ
Ｘの小腸での吸収と腎臓での再吸収阻害の両方が含まれ
る。腎臓からの再吸収は、主にオリゴペプチドトランス
ポーター（ＰＥＰＴ２）を介して行われ、両化合物とも
ＰＥＰＴ２の基質になることが知られている（Biochim.
Biophys.Acta, 1235, 461-6, 1995）。従って、ＣＥＸ
によって引き起こされたＣＤＸのＢＡの低下は、ＰＥＰ
Ｔ１及びＰＥＰＴ２を介したＣＤＸの輸送をＣＥＸが阻
害したことによるものであることが説明できる。腎臓に
存在するＰＥＰＴ２の阻害が生体にどのような影響を及
ぼすかは明らかにされていないが、慢性腎不全の食事療
法という観点からはＰＥＰＴ１を介した直接の吸収阻害
に限定したほうが望ましいと考えられる。しかし、ＰＥ
ＰＴ１及びＰＥＰＴ２は、非常に類似した基質認識性を
示すため、ＰＥＰＴ１を特異的に認識するような阻害剤
の開発は困難であるとされていた。
あり、ＰＥＰＴ１の基質であるcefadroxil（ＣＤＸ）の
バイオアベイラビリティー（ＢＡ）が、同様にＰＥＰＴ
１によって認識されるβ−ラクタム系抗生物質であるce
phalexin（ＣＥＸ）の同時投与によって低下するという
ことが報告されている（Eur. J. Clin. Pharmacol. 41,
179-83, 1991）。バイオアベイラビリティーの指標と
してのＡＵＣ（Area Under the plasma concentration
Curve）がＣＥＸによって低下したメカニズムにはＣＤ
Ｘの小腸での吸収と腎臓での再吸収阻害の両方が含まれ
る。腎臓からの再吸収は、主にオリゴペプチドトランス
ポーター（ＰＥＰＴ２）を介して行われ、両化合物とも
ＰＥＰＴ２の基質になることが知られている（Biochim.
Biophys.Acta, 1235, 461-6, 1995）。従って、ＣＥＸ
によって引き起こされたＣＤＸのＢＡの低下は、ＰＥＰ
Ｔ１及びＰＥＰＴ２を介したＣＤＸの輸送をＣＥＸが阻
害したことによるものであることが説明できる。腎臓に
存在するＰＥＰＴ２の阻害が生体にどのような影響を及
ぼすかは明らかにされていないが、慢性腎不全の食事療
法という観点からはＰＥＰＴ１を介した直接の吸収阻害
に限定したほうが望ましいと考えられる。しかし、ＰＥ
ＰＴ１及びＰＥＰＴ２は、非常に類似した基質認識性を
示すため、ＰＥＰＴ１を特異的に認識するような阻害剤
の開発は困難であるとされていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】腎不全による透析患者
は増加傾向にあり、また糖尿病から透析療法に移行する
患者数を合わせると膨大な数となり、それにかかる医療
費は将来１兆円を超えることが推測される。このような
状況下では、腎疾患を発症させない予防医学及び腎不全
を透析に至らせない保存期治療が重要である。本発明の
課題は、患者の食事療法によるＱＯＬ低下を防ぐことが
できる、消化管において非吸収性の組織特異的トランス
ポーター阻害剤や、かかる阻害剤を有効成分とする組織
機能不全疾患治療薬及び慢性腎不全進行抑制治療薬を提
供することにある。
は増加傾向にあり、また糖尿病から透析療法に移行する
患者数を合わせると膨大な数となり、それにかかる医療
費は将来１兆円を超えることが推測される。このような
状況下では、腎疾患を発症させない予防医学及び腎不全
を透析に至らせない保存期治療が重要である。本発明の
課題は、患者の食事療法によるＱＯＬ低下を防ぐことが
できる、消化管において非吸収性の組織特異的トランス
ポーター阻害剤や、かかる阻害剤を有効成分とする組織
機能不全疾患治療薬及び慢性腎不全進行抑制治療薬を提
供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するためには、ＰＥＰＴ２への認識を回避すること
ができる、消化管非吸収性ＰＥＰＴ１阻害剤の使用が有
効であると考え、また、高分子化合物は、一般的に消化
管から吸収されないことから、ＰＥＰＴ１認識性を有す
る高分子化合物を設計することにより、ＰＥＰＴ１を選
択的に阻害することが可能になるのではないかと考え
た。そこで、構造的修飾を施した活性残基が膜貫通型ト
ランスポーターとの相互作用に優れていると期待され
る、超分子構造ポリロタキサン（ＰＲＸ）に着目し、上
記ＰＥＰＴ１のリガンドであるジペプチド（Ｖａｌ−Ｌ
ｙｓ）を超分子構造ＰＲＸに導入した化合物を作製し、
鋭意研究した結果、上記化合物によりタンパク質の吸収
を抑制し、さらにタンパク質摂取制限が必要となる慢性
腎不全の進行を抑制することが可能であることを見い出
し、本発明を完成するに至った。
解決するためには、ＰＥＰＴ２への認識を回避すること
ができる、消化管非吸収性ＰＥＰＴ１阻害剤の使用が有
効であると考え、また、高分子化合物は、一般的に消化
管から吸収されないことから、ＰＥＰＴ１認識性を有す
る高分子化合物を設計することにより、ＰＥＰＴ１を選
択的に阻害することが可能になるのではないかと考え
た。そこで、構造的修飾を施した活性残基が膜貫通型ト
ランスポーターとの相互作用に優れていると期待され
る、超分子構造ポリロタキサン（ＰＲＸ）に着目し、上
記ＰＥＰＴ１のリガンドであるジペプチド（Ｖａｌ−Ｌ
ｙｓ）を超分子構造ＰＲＸに導入した化合物を作製し、
鋭意研究した結果、上記化合物によりタンパク質の吸収
を抑制し、さらにタンパク質摂取制限が必要となる慢性
腎不全の進行を抑制することが可能であることを見い出
し、本発明を完成するに至った。
【０００８】すなわち本発明は、組織特異的トランスポ
ーターが認識するリガンド構造と、膜組織を透過できな
い高分子分子構造とをもつことからなることを特徴とす
る組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求項１）
や、膜組織を透過できない高分子分子構造が、超分子構
造であることを特徴とする請求項１記載の組織特異的ト
ランスポーター機能阻害剤（請求項２）や、超分子構造
が、多数の環状分子に線状分子が貫通し、該線状分子の
両末端を嵩高い置換基でキャップしたロタキサン化合物
であることを特徴とする請求項２記載の組織特異的トラ
ンスポーター機能阻害剤（請求項３）や、環状分子が、
シクロデキストリンであることを特徴とする請求項３記
載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求項
４）や、線状分子が、ポリエチレングリコールであるこ
とを特徴とする請求項３又は４記載の組織特異的トラン
スポーター機能阻害剤（請求項５）や、嵩高い置換基
が、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラ
ニンであることを特徴とする請求項３〜５のいずれか記
載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求項
６）や、膜組織を透過できない高分子分子構造が、α−
シクロデキストリン構造であることを特徴とする請求項
1記載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求
項７）や、組織特異的トランスポーターが認識するリガ
ンドが、有機アニオン性物質、有機カチオン性物質、又
はペプチド性物質であることを特徴とする請求項１〜７
のいずれか記載の組織特異的トランスポーター機能阻害
剤（請求項８）や、組織特異的トランスポーターが、小
腸特異的トランスポーターであることを特徴とする請求
項１〜８のいずれか記載の組織特異的トランスポーター
機能阻害剤（請求項９）や、小腸特異的トランスポータ
ーが、オリゴペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ
１）であることを特徴とする請求項９記載の組織特異的
トランスポーター機能阻害剤（請求項１０）や、オリゴ
ペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ１）が認識する
ペプチド性物質が、バリルリジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ）で
あることを特徴とする請求項１０記載の組織特異的トラ
ンスポーター機能阻害剤（請求項１１）に関する。
ーターが認識するリガンド構造と、膜組織を透過できな
い高分子分子構造とをもつことからなることを特徴とす
る組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求項１）
や、膜組織を透過できない高分子分子構造が、超分子構
造であることを特徴とする請求項１記載の組織特異的ト
ランスポーター機能阻害剤（請求項２）や、超分子構造
が、多数の環状分子に線状分子が貫通し、該線状分子の
両末端を嵩高い置換基でキャップしたロタキサン化合物
であることを特徴とする請求項２記載の組織特異的トラ
ンスポーター機能阻害剤（請求項３）や、環状分子が、
シクロデキストリンであることを特徴とする請求項３記
載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求項
４）や、線状分子が、ポリエチレングリコールであるこ
とを特徴とする請求項３又は４記載の組織特異的トラン
スポーター機能阻害剤（請求項５）や、嵩高い置換基
が、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラ
ニンであることを特徴とする請求項３〜５のいずれか記
載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求項
６）や、膜組織を透過できない高分子分子構造が、α−
シクロデキストリン構造であることを特徴とする請求項
1記載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤（請求
項７）や、組織特異的トランスポーターが認識するリガ
ンドが、有機アニオン性物質、有機カチオン性物質、又
はペプチド性物質であることを特徴とする請求項１〜７
のいずれか記載の組織特異的トランスポーター機能阻害
剤（請求項８）や、組織特異的トランスポーターが、小
腸特異的トランスポーターであることを特徴とする請求
項１〜８のいずれか記載の組織特異的トランスポーター
機能阻害剤（請求項９）や、小腸特異的トランスポータ
ーが、オリゴペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ
１）であることを特徴とする請求項９記載の組織特異的
トランスポーター機能阻害剤（請求項１０）や、オリゴ
ペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ１）が認識する
ペプチド性物質が、バリルリジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ）で
あることを特徴とする請求項１０記載の組織特異的トラ
ンスポーター機能阻害剤（請求項１１）に関する。
【０００９】また本発明は、請求項１〜１１のいずれか
記載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤を有効成
分とすることを特徴とする組織機能不全疾患治療薬（請
求項１２）や、請求項１〜１１のいずれか記載の組織特
異的トランスポーター機能阻害剤がタンパク質の吸収抑
制剤であって、該抑制剤を有効成分とすることを特徴と
する慢性腎不全進行抑制治療薬（請求項１３）に関す
る。
記載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤を有効成
分とすることを特徴とする組織機能不全疾患治療薬（請
求項１２）や、請求項１〜１１のいずれか記載の組織特
異的トランスポーター機能阻害剤がタンパク質の吸収抑
制剤であって、該抑制剤を有効成分とすることを特徴と
する慢性腎不全進行抑制治療薬（請求項１３）に関す
る。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の組織特異的トランスポー
ター機能阻害剤としては、組織特異的トランスポーター
が認識するリガンド構造と、膜組織を透過できない高分
子分子構造とをもち、上記組織特異的トランスポーター
の機能を阻害するものであればどのようなものでもよい
が、生理的に安定した構造をとるものが好ましい。組織
としては、小腸、腎臓、脳、肝臓、胎盤、膵臓、肺、
胃、卵巣、精巣、脾臓、大腸、骨格筋、気道、骨髄、前
立腺、心臓、子宮、脊髄、副腎、甲状腺等の組織を例示
することができ、また、かかる組織において特異的に発
現するトランスポーターとしては、表１〜３に示される
トランスポーターを具体的に挙げることができるがこれ
らに限定されるものではない。
ター機能阻害剤としては、組織特異的トランスポーター
が認識するリガンド構造と、膜組織を透過できない高分
子分子構造とをもち、上記組織特異的トランスポーター
の機能を阻害するものであればどのようなものでもよい
が、生理的に安定した構造をとるものが好ましい。組織
としては、小腸、腎臓、脳、肝臓、胎盤、膵臓、肺、
胃、卵巣、精巣、脾臓、大腸、骨格筋、気道、骨髄、前
立腺、心臓、子宮、脊髄、副腎、甲状腺等の組織を例示
することができ、また、かかる組織において特異的に発
現するトランスポーターとしては、表１〜３に示される
トランスポーターを具体的に挙げることができるがこれ
らに限定されるものではない。
【００１１】
【表１】
【表２】
【表３】
【００１２】上記膜組織を透過できない高分子分子構造
としては、小腸、腎臓、脳、肝臓、胎盤、膵臓、肺、
胃、卵巣、精巣、脾臓、大腸、骨格筋、気道、骨髄、前
立腺、心臓、子宮、脊髄、副腎、甲状腺等の生体膜組織
から、透過できない又は透過しにくい高分子構造をとる
ものであればどのようなものでもよく、例えば、多数の
環状分子に線状分子が貫通し、該線状分子の両末端を嵩
高い置換基でキャップしたポリロタキサン化合物等の超
分子構造や、α−シクロデキストリンを含む誘導体若し
くは包接構造などを具体的に挙げることができる。上記
環状分子としては、例えば、シクロデキストリン、α，
β，又はγ−シクロデキストリン、クラウンエーテル、
サイクロフラクタン等の分子を具体的に挙げることがで
きるがこれらに特に限定されるものではない。また、線
状分子としては、ポリエチレングリコール、ポリプロピ
レングリコール、若しくはポリエチレングリコールとポ
リプロピレングリコールとの共重合体、ポリアミノ酸、
多糖類等の分子を例示することができるが、嵩高い置換
基の導入が行えるポリエチレングリコールなどが好まし
い。嵩高い置換基としては、上記環状分子の脱離を防止
するものであればどのようなものでもよく、例えば、Ｎ
−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン、
アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニ
ン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、セリン、スレ
オニン、チロシン、システイン、リシン、アルギニン、
ヒスチジンのいずれかの単位若しくはこれらの誘導体、
複数の単位からなるオリゴペプチド等を具体的に挙げる
ことができるが特に制限されるものではない。
としては、小腸、腎臓、脳、肝臓、胎盤、膵臓、肺、
胃、卵巣、精巣、脾臓、大腸、骨格筋、気道、骨髄、前
立腺、心臓、子宮、脊髄、副腎、甲状腺等の生体膜組織
から、透過できない又は透過しにくい高分子構造をとる
ものであればどのようなものでもよく、例えば、多数の
環状分子に線状分子が貫通し、該線状分子の両末端を嵩
高い置換基でキャップしたポリロタキサン化合物等の超
分子構造や、α−シクロデキストリンを含む誘導体若し
くは包接構造などを具体的に挙げることができる。上記
環状分子としては、例えば、シクロデキストリン、α，
β，又はγ−シクロデキストリン、クラウンエーテル、
サイクロフラクタン等の分子を具体的に挙げることがで
きるがこれらに特に限定されるものではない。また、線
状分子としては、ポリエチレングリコール、ポリプロピ
レングリコール、若しくはポリエチレングリコールとポ
リプロピレングリコールとの共重合体、ポリアミノ酸、
多糖類等の分子を例示することができるが、嵩高い置換
基の導入が行えるポリエチレングリコールなどが好まし
い。嵩高い置換基としては、上記環状分子の脱離を防止
するものであればどのようなものでもよく、例えば、Ｎ
−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン、
アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニ
ン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、ア
スパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、セリン、スレ
オニン、チロシン、システイン、リシン、アルギニン、
ヒスチジンのいずれかの単位若しくはこれらの誘導体、
複数の単位からなるオリゴペプチド等を具体的に挙げる
ことができるが特に制限されるものではない。
【００１３】本発明において組織特異的トランスポータ
ーに認識されるリガンドとしては、有機アニオン性物
質、有機カチオン性物質、ペプチド性物質、アミノ基を
有する物質等の物質を具体的に挙げることができ、例え
ば、小腸に特異的に発現するトランスポーターであるオ
リゴペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ１）に認識
されるリガンドとしては、ジペプチド、トリペプチド等
のオリゴペプチドや、その構成アミノ酸残基に修飾を施
した誘導体、セファドロキシル、セフチブテン等のβ−
ラクタム抗生物質、カプトプリル等のＡＣＥ阻害剤、抗
がん剤のベスタチン、抗ウイルス薬のバラシクロビルな
どを具体的に挙げることができるが、これらに限定され
るものではない。
ーに認識されるリガンドとしては、有機アニオン性物
質、有機カチオン性物質、ペプチド性物質、アミノ基を
有する物質等の物質を具体的に挙げることができ、例え
ば、小腸に特異的に発現するトランスポーターであるオ
リゴペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ１）に認識
されるリガンドとしては、ジペプチド、トリペプチド等
のオリゴペプチドや、その構成アミノ酸残基に修飾を施
した誘導体、セファドロキシル、セフチブテン等のβ−
ラクタム抗生物質、カプトプリル等のＡＣＥ阻害剤、抗
がん剤のベスタチン、抗ウイルス薬のバラシクロビルな
どを具体的に挙げることができるが、これらに限定され
るものではない。
【００１４】本発明により提供される、組織機能不全疾
患治療薬としては前記組織特異的トランスポーター機能
阻害剤を、慢性腎不全進行抑制治療薬としてはタンパク
質の吸収を抑制する組織特異的トランスポーター機能阻
害剤を有効成分として含有するものを挙げることがで
き、これら治療薬は、経口、静脈内、腹腔内、鼻腔内、
皮内、皮下、筋肉内等により投与することができる形状
のものが好ましい。投与すべき有効量は、治療薬の種類
・組成、投与方法、患者の年齢や体重等を考慮して適宜
決定することができ、これらを１日あたり１〜数回投与
することが好ましい。また、経口投与する場合、通常、
製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与される。
この際、製剤に用いることができる担体としては、製剤
分野において常用され、かつ本発明の組織特異的トラン
スポーター機能阻害剤と反応しない物質が用いられる。
経口投与の仕方は、食事と同時に、或いは食事の前に予
め投与しておくことができる。
患治療薬としては前記組織特異的トランスポーター機能
阻害剤を、慢性腎不全進行抑制治療薬としてはタンパク
質の吸収を抑制する組織特異的トランスポーター機能阻
害剤を有効成分として含有するものを挙げることがで
き、これら治療薬は、経口、静脈内、腹腔内、鼻腔内、
皮内、皮下、筋肉内等により投与することができる形状
のものが好ましい。投与すべき有効量は、治療薬の種類
・組成、投与方法、患者の年齢や体重等を考慮して適宜
決定することができ、これらを１日あたり１〜数回投与
することが好ましい。また、経口投与する場合、通常、
製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与される。
この際、製剤に用いることができる担体としては、製剤
分野において常用され、かつ本発明の組織特異的トラン
スポーター機能阻害剤と反応しない物質が用いられる。
経口投与の仕方は、食事と同時に、或いは食事の前に予
め投与しておくことができる。
【００１５】また、剤型としては、錠剤、カプセル剤、
顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリ
ーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等を具体的に
例示することができ、これらの製剤は常法に従って調製
され、特に液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当
な媒体に溶解又は懸濁する形態とすることもできる。ま
た錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよ
い。注射剤の場合には、本発明のペプチド修飾高分子を
水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水
あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤
や保存剤を添加してもよい。またこれらの製剤は、治療
上価値のある他の成分を含有していてもよい。
顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリ
ーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等を具体的に
例示することができ、これらの製剤は常法に従って調製
され、特に液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当
な媒体に溶解又は懸濁する形態とすることもできる。ま
た錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよ
い。注射剤の場合には、本発明のペプチド修飾高分子を
水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水
あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤
や保存剤を添加してもよい。またこれらの製剤は、治療
上価値のある他の成分を含有していてもよい。
【００１６】本発明の組織特異的トランスポーター機能
阻害剤は、組織機能不全疾患又は慢性腎不全の症状改善
用食品素材として、プリン、クッキー、パン、ケーキ、
ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷
菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば
等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉
練り製品や、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュー
ス、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロ
ン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、みそ、しょう油、
ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、豆
腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ
等の各種総菜へ配合し、機能性食品として摂取すること
もできる。
阻害剤は、組織機能不全疾患又は慢性腎不全の症状改善
用食品素材として、プリン、クッキー、パン、ケーキ、
ゼリー、煎餅などの焼き菓子、羊羹などの和菓子、冷
菓、チューインガム等のパン・菓子類や、うどん、そば
等の麺類や、かまぼこ、ハム、魚肉ソーセージ等の魚肉
練り製品や、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、ジュー
ス、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、煎茶、ウーロ
ン茶、スポーツ飲料等の各種飲料や、みそ、しょう油、
ドレッシング、マヨネーズ、甘味料等の調味類や、豆
腐、こんにゃく、その他佃煮、餃子、コロッケ、サラダ
等の各種総菜へ配合し、機能性食品として摂取すること
もできる。
【００１７】
【実施例】本発明の好適な実施例について以下に説明す
るが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。 実施例１［ポリロタキサン（ＰＲＸ）の合成；図１参
照］ １−１（ポリエチレングリコールとα−シクロデキスト
リンからなる擬ポリロタキサンの調製） α−シクロデキストリン（α−ＣＤ）飽和水溶液（１０
０ｇ／６００ｍｌ）に超音波をかけながら、両末端をア
ミノ化したポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＢＡ，Ｍ
ｎ＝４０００）の水溶液（９．１４ｇ／８５ｍｌ）を滴
下した。約１時間超音波にあてながら撹拌後、一晩放置
した。その後、遠心分離により沈殿物を回収し、６０℃
減圧下にて乾燥し、シクロデキストリンにポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ）が貫通した線状分子である擬ポリ
ロタキサン７８．１３ｇを調製した。
るが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。 実施例１［ポリロタキサン（ＰＲＸ）の合成；図１参
照］ １−１（ポリエチレングリコールとα−シクロデキスト
リンからなる擬ポリロタキサンの調製） α−シクロデキストリン（α−ＣＤ）飽和水溶液（１０
０ｇ／６００ｍｌ）に超音波をかけながら、両末端をア
ミノ化したポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＢＡ，Ｍ
ｎ＝４０００）の水溶液（９．１４ｇ／８５ｍｌ）を滴
下した。約１時間超音波にあてながら撹拌後、一晩放置
した。その後、遠心分離により沈殿物を回収し、６０℃
減圧下にて乾燥し、シクロデキストリンにポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ）が貫通した線状分子である擬ポリ
ロタキサン７８．１３ｇを調製した。
【００１８】１−２（末端キャップ剤の調製）
α−ＣＤの脱離を防止する嵩高い置換基としてＮ−ベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｚ−Ｌ
−Ｐｈｅ、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を表す）を
導入するために、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅのカルボキシル基の活
性化を行った。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳ
ｕ）３８．４６ｇ（０．３３ｍｏｌ）、及びＺ−Ｌ−Ｐ
ｈｅ１００ｇ（０．３３ｍｏｌ）を、ジオキサン８５０
ｍｌ中に溶解させた。次に、氷冷下にてＮ，Ｎ’−ジシ
クロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）６８．９０ｇ
（０．３３ｍｏｌ）を加え約一時間撹拌した。その後、
冷蔵庫に一晩放置した。生じた沈殿物を除去後、上澄み
液を減圧濃縮し、得られた濃縮液をジエチルエーテル中
で再沈殿した。生じた沈殿物を常温で減圧乾燥後回収
し、ジクロロメタンおよび石油エーテルを用いて再結晶
した後、試料をろ過して減圧乾燥し、白色針状結晶のＺ
−Ｌ−Ｐｈｅのスクシンイミドエステル（Ｚ−Ｌ−Ｐｈ
ｅ−ＯＳｕ）１０５．８４ｇ（０．２６ｍｏｌ）を得
た。
ジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン（Ｚ−Ｌ
−Ｐｈｅ、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を表す）を
導入するために、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅのカルボキシル基の活
性化を行った。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳ
ｕ）３８．４６ｇ（０．３３ｍｏｌ）、及びＺ−Ｌ−Ｐ
ｈｅ１００ｇ（０．３３ｍｏｌ）を、ジオキサン８５０
ｍｌ中に溶解させた。次に、氷冷下にてＮ，Ｎ’−ジシ
クロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）６８．９０ｇ
（０．３３ｍｏｌ）を加え約一時間撹拌した。その後、
冷蔵庫に一晩放置した。生じた沈殿物を除去後、上澄み
液を減圧濃縮し、得られた濃縮液をジエチルエーテル中
で再沈殿した。生じた沈殿物を常温で減圧乾燥後回収
し、ジクロロメタンおよび石油エーテルを用いて再結晶
した後、試料をろ過して減圧乾燥し、白色針状結晶のＺ
−Ｌ−Ｐｈｅのスクシンイミドエステル（Ｚ−Ｌ−Ｐｈ
ｅ−ＯＳｕ）１０５．８４ｇ（０．２６ｍｏｌ）を得
た。
【００１９】１−３（Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕを用いた
ポリロタキサンの合成） 実施例１−１で得られた擬ポリロタキサン２４．３ｇ
（０．６８ｍｍｏｌ）、及び実施例１−２で得られたＺ
−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ２８．８ｇ（７２ｍｍｏｌ）を、
ジメチルスルフォキシド３０ｍｌに加え、不均一状態で
約４．５日間撹拌した。なお、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ
（−ＯＳｕ）と擬ポリロタキサン末端アミノ基（−ＮＨ
2）とのモル比は、５０：１の割合で行った。反応後、
大量のエーテル中に投じ、生じた白色沈殿を減圧乾燥後
回収した。未反応のＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ、α−Ｃ
Ｄ、及びＰＥＧ−ＢＡを取り除くため、アセトンおよび
水によりそれぞれ３回ずつ洗浄操作を行った。最終的に
得られた試料を６０℃減圧下にて乾燥し、擬ポリロタキ
サンの両末端を嵩高い置換基でキャップしたポリロタキ
サン（白色粉末）１３ｇを得た。なお、合成したポリロ
タキサンの構造解析は1ＨＮＭＲスペクトル測定（Varia
n社製；３００ＭＨｚ ＦＴ−ＮＭＲ）により行った。
ポリロタキサンの合成） 実施例１−１で得られた擬ポリロタキサン２４．３ｇ
（０．６８ｍｍｏｌ）、及び実施例１−２で得られたＺ
−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ２８．８ｇ（７２ｍｍｏｌ）を、
ジメチルスルフォキシド３０ｍｌに加え、不均一状態で
約４．５日間撹拌した。なお、Ｚ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ
（−ＯＳｕ）と擬ポリロタキサン末端アミノ基（−ＮＨ
2）とのモル比は、５０：１の割合で行った。反応後、
大量のエーテル中に投じ、生じた白色沈殿を減圧乾燥後
回収した。未反応のＺ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＯＳｕ、α−Ｃ
Ｄ、及びＰＥＧ−ＢＡを取り除くため、アセトンおよび
水によりそれぞれ３回ずつ洗浄操作を行った。最終的に
得られた試料を６０℃減圧下にて乾燥し、擬ポリロタキ
サンの両末端を嵩高い置換基でキャップしたポリロタキ
サン（白色粉末）１３ｇを得た。なお、合成したポリロ
タキサンの構造解析は1ＨＮＭＲスペクトル測定（Varia
n社製；３００ＭＨｚ ＦＴ−ＮＭＲ）により行った。
【００２０】実施例２［ペプチドトランスポーターに認
識されるジペプチドの合成］ ペプチドトランスポーターに認識されるジペプチドアナ
ログの一つであるバリルリジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ：Ｖ
Ｋ）誘導体をＡｂｅらの手法（Bioconjugate Chem. 10,
24-31, 1999）に従い合成した（図２参照）。
識されるジペプチドの合成］ ペプチドトランスポーターに認識されるジペプチドアナ
ログの一つであるバリルリジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ：Ｖ
Ｋ）誘導体をＡｂｅらの手法（Bioconjugate Chem. 10,
24-31, 1999）に従い合成した（図２参照）。
【００２１】２−１（Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂ
ｚ）−Ｏｔ−Ｂｕの合成） 第３ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）−Ｖａｌ（２．
１７ｇ，１０ｍｍｏｌ）、ε−ベンジルオキシカルボニ
ルリジン−ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩［Ｌｙｓ−
（Ｃｂｚ）−Ｏｔ−Ｂｕ・ＨＣＬ（３．３７ｇ，１０ｍ
ｍｏｌ）］、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯ
Ｂｔ）（４．１３ｇ，２０ｍｍｏｌ）、及びジメチルア
ミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１．９３ｇ，１０ｍｍｏ
ｌ）を、それぞれ８０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、０℃にて３０分撹拌を行
った。その後、水溶性カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ・
ＨＣｌ）（１．９３ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加えて更に０
℃で２時間撹拌した後、室温にて４時間撹拌して酢酸エ
チルで希釈した。酢酸エチルで希釈した溶液を、０．６
Ｍ クエン酸水溶液（１００ｍｌ）、水（１００ｍ
ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）、
水（１００ｍｌ）、１０％ 食塩水（１００ｍｌ）にて
順次洗浄を行った。その結果、得られた油層を硫酸ナト
リウムで乾燥させ、減圧濃縮後、カラムクロマトグラフ
ィー（ＳｉＯ2，７５：１のクロロホルム−メタノー
ル）で精製した。溶出ピークを薄層クロマトグラフィー
より確認し、得られた最初の画分を減圧濃縮・減圧乾燥
して非結晶白色粉末のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂ
ｚ）−Ｏｔ−Ｂｕを得た（３．６ｇ，収率：６６％）。
ｚ）−Ｏｔ−Ｂｕの合成） 第３ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）−Ｖａｌ（２．
１７ｇ，１０ｍｍｏｌ）、ε−ベンジルオキシカルボニ
ルリジン−ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩［Ｌｙｓ−
（Ｃｂｚ）−Ｏｔ−Ｂｕ・ＨＣＬ（３．３７ｇ，１０ｍ
ｍｏｌ）］、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯ
Ｂｔ）（４．１３ｇ，２０ｍｍｏｌ）、及びジメチルア
ミノピリジン（ＤＭＡＰ）（１．９３ｇ，１０ｍｍｏ
ｌ）を、それぞれ８０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、０℃にて３０分撹拌を行
った。その後、水溶性カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ・
ＨＣｌ）（１．９３ｇ，１０ｍｍｏｌ）を加えて更に０
℃で２時間撹拌した後、室温にて４時間撹拌して酢酸エ
チルで希釈した。酢酸エチルで希釈した溶液を、０．６
Ｍ クエン酸水溶液（１００ｍｌ）、水（１００ｍ
ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）、
水（１００ｍｌ）、１０％ 食塩水（１００ｍｌ）にて
順次洗浄を行った。その結果、得られた油層を硫酸ナト
リウムで乾燥させ、減圧濃縮後、カラムクロマトグラフ
ィー（ＳｉＯ2，７５：１のクロロホルム−メタノー
ル）で精製した。溶出ピークを薄層クロマトグラフィー
より確認し、得られた最初の画分を減圧濃縮・減圧乾燥
して非結晶白色粉末のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂ
ｚ）−Ｏｔ−Ｂｕを得た（３．６ｇ，収率：６６％）。
【００２２】２−２（Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−
Ｂｕ・ＨＣｌの合成） 実施例２−１で得られたＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂ
ｚ）−Ｏｔ−ＢｕのＣｂｚ基を接触還元法で脱保護し
た。Ｈ2ガス存在下で、酢酸１５０ｍｌ中にＢｏｃ−Ｖ
ａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｏｔ−Ｂｕを溶解した後、パ
ラジウムカーボン（３００ｍｇ）を加え３日間撹拌し
た。パラジウムカーボンをろ過にて取り除き、溶液を減
圧濃縮し、濃縮液をイオン交換クロマトグラフィーにか
けた。イオン交換体としてDiaion WA-30（ＨＣｌ ｆｏ
ｒｍ）を使用し、展開溶媒はメタノール−水（１０：
１）で行った。溶液を減圧濃縮した後、トルエンを用い
て共沸し、白色固体のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−
Ｂｕ・ＨＣｌを得た（２．２ｇ，収率：５１％）。
Ｂｕ・ＨＣｌの合成） 実施例２−１で得られたＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂ
ｚ）−Ｏｔ−ＢｕのＣｂｚ基を接触還元法で脱保護し
た。Ｈ2ガス存在下で、酢酸１５０ｍｌ中にＢｏｃ−Ｖ
ａｌ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｏｔ−Ｂｕを溶解した後、パ
ラジウムカーボン（３００ｍｇ）を加え３日間撹拌し
た。パラジウムカーボンをろ過にて取り除き、溶液を減
圧濃縮し、濃縮液をイオン交換クロマトグラフィーにか
けた。イオン交換体としてDiaion WA-30（ＨＣｌ ｆｏ
ｒｍ）を使用し、展開溶媒はメタノール−水（１０：
１）で行った。溶液を減圧濃縮した後、トルエンを用い
て共沸し、白色固体のＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−
Ｂｕ・ＨＣｌを得た（２．２ｇ，収率：５１％）。
【００２３】実施例３［Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサ
ン結合体の合成；図３参照］ ３−１（Ｎ，Ｎ−ジカルボニルイミダゾールによるポリ
ロタキサン中の水酸基の活性化） 実施例１で得られたポリロタキサン２００ｍｇ（−Ｏ
Ｈ：３ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、ジメチルスルフォキ
シド（ＤＭＳＯ）１０ｍｌに溶解させた。完全に溶解
後、Ｎ，Ｎ−ジカルボニルイミダゾール（ＣＤＩ）を１
０００ｍｇ（６．２ｍｍｏｌ）投じ、撹拌を続けた。３
時間後、エーテル中での再沈殿より未反応のＣＤＩを除
去し、ＣＤＩ活性化ポリロタキサン（ＣＤＩ−ＰＲＸ）
３７４ｍｇを得た。なお、全水酸基全てに導入した場合
を１００％として、上記ＣＤＩ−ＰＲＸの活性化率は３
０％であった。
ン結合体の合成；図３参照］ ３−１（Ｎ，Ｎ−ジカルボニルイミダゾールによるポリ
ロタキサン中の水酸基の活性化） 実施例１で得られたポリロタキサン２００ｍｇ（−Ｏ
Ｈ：３ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、ジメチルスルフォキ
シド（ＤＭＳＯ）１０ｍｌに溶解させた。完全に溶解
後、Ｎ，Ｎ−ジカルボニルイミダゾール（ＣＤＩ）を１
０００ｍｇ（６．２ｍｍｏｌ）投じ、撹拌を続けた。３
時間後、エーテル中での再沈殿より未反応のＣＤＩを除
去し、ＣＤＩ活性化ポリロタキサン（ＣＤＩ−ＰＲＸ）
３７４ｍｇを得た。なお、全水酸基全てに導入した場合
を１００％として、上記ＣＤＩ−ＰＲＸの活性化率は３
０％であった。
【００２４】３−２（ポリロタキサンへのＶａｌ−Ｌｙ
ｓの導入） 上記ＣＤＩ−ＰＲＸ２００ｍｇ（−ＯＨ：１．８ｍｍｏ
ｌ）を窒素雰囲気下にてＤＭＳＯ２ｍｌに溶解させ、実
施例２で得られたＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−Ｂｕ
・ＨＣｌを１３００ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ
−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を７００
μｌ（３．５ｍｍｏｌ）加えて２４時間撹拌した。その
後、ヒドロキエチルカルバモイル（ＨＥＣ）基をポリロ
タキサンへ導入し、水に対する溶解性を向上させるた
め、アミノエタノール（ＡＭＥｔ）を２ｍｌ（３３ｍｍ
ｏｌ）加え、２４時間攪拌した。撹拌後、分画分子量１
０００の透析膜を用い、水中にて透析を行った。透析終
了後、凍結乾燥を行いＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−
Ｂｕを導入したポリロタキサン（ＰＲＸ）を回収した。
この回収物を氷冷下、ジクロロメタン（ＤＣＭ）７ｍｌ
及びトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）３ｍｌの混合溶液中に
溶解し、１時間撹拌してＢｏｃ基およびＯｔ−Ｂｕ基を
除去した。その後、エーテル中での再沈殿を繰り返して
サンプルを洗浄し、減圧乾燥して白色固体のＶａｌ−Ｌ
ｙｓ−ポリロタキサン結合体（１１３ｍｇ）を得た。ま
た、上記と同様の方法により、表４及び表５に示す量の
各試薬を用いて、他の６種類のＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロ
タキサン結合体（ＶＫ−ＰＲＸ：化１）と２種類のＶａ
ｌ−Ｌｙｓ−α−ＣＤ（ＶＫ−α−ＣＤ）を合成した。
ｓの導入） 上記ＣＤＩ−ＰＲＸ２００ｍｇ（−ＯＨ：１．８ｍｍｏ
ｌ）を窒素雰囲気下にてＤＭＳＯ２ｍｌに溶解させ、実
施例２で得られたＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−Ｂｕ
・ＨＣｌを１３００ｍｇ（３．３ｍｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ
−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を７００
μｌ（３．５ｍｍｏｌ）加えて２４時間撹拌した。その
後、ヒドロキエチルカルバモイル（ＨＥＣ）基をポリロ
タキサンへ導入し、水に対する溶解性を向上させるた
め、アミノエタノール（ＡＭＥｔ）を２ｍｌ（３３ｍｍ
ｏｌ）加え、２４時間攪拌した。撹拌後、分画分子量１
０００の透析膜を用い、水中にて透析を行った。透析終
了後、凍結乾燥を行いＢｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｏｔ−
Ｂｕを導入したポリロタキサン（ＰＲＸ）を回収した。
この回収物を氷冷下、ジクロロメタン（ＤＣＭ）７ｍｌ
及びトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）３ｍｌの混合溶液中に
溶解し、１時間撹拌してＢｏｃ基およびＯｔ−Ｂｕ基を
除去した。その後、エーテル中での再沈殿を繰り返して
サンプルを洗浄し、減圧乾燥して白色固体のＶａｌ−Ｌ
ｙｓ−ポリロタキサン結合体（１１３ｍｇ）を得た。ま
た、上記と同様の方法により、表４及び表５に示す量の
各試薬を用いて、他の６種類のＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロ
タキサン結合体（ＶＫ−ＰＲＸ：化１）と２種類のＶａ
ｌ−Ｌｙｓ−α−ＣＤ（ＶＫ−α−ＣＤ）を合成した。
【００２５】
【表４】
【表５】
【００２６】
【化１】
【００２７】実施例４［Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサ
ン結合体のキャラクタリゼーション］ ４−１（Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合体中のα
−ＣＤ貫通数およびヒドロキエチルカルバモイル基導入
数の算出） 上記７種類のＶＫ−ＰＲＸ中のα−ＣＤ貫通数（α−Ｃ
Ｄ／ＰＲＸ）を1ＨＮＭＲスペクトルの積分値から算出
した。その結果を表６に示す。
ン結合体のキャラクタリゼーション］ ４−１（Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合体中のα
−ＣＤ貫通数およびヒドロキエチルカルバモイル基導入
数の算出） 上記７種類のＶＫ−ＰＲＸ中のα−ＣＤ貫通数（α−Ｃ
Ｄ／ＰＲＸ）を1ＨＮＭＲスペクトルの積分値から算出
した。その結果を表６に示す。
【００２８】
【表６】
【００２９】４−２（アミノ酸分析法によるＶＫ−ＰＲ
Ｘ及びＶＫ−α−ＣＤ中のＶａｌ−Ｌｙｓ導入数の定
量） 実施例３により得られた７種類のＶＫ−ＰＲＸ及び２種
類のＶＫ−α−ＣＤをそれぞれ、６Ｎ ＨＣｌに少量
（１〜２ｍｇ）溶解させ、Ｎ2置換を行った。次に１１
０℃にて約２２時間加熱分解させた。ＨＣｌを完全に除
去後、０．０２ＮＨＣｌ（２〜４ｍｌ）にて希釈しサン
プルとした。この作製したサンプルをアミノ酸分析計
（日立アミノ酸分析形；Ｌ−８５００Ａ）により定量し
た。かかるアミノ酸分析法により得られたＶＫ−ＰＲＸ
又はＶＫ−α−ＣＤの両末端におけるＰｈｅ残基とＶａ
ｌ残基との組成から、ＶＫ−ＰＲＸ又はＶＫ−α−ＣＤ
の１分子あたりのＶａｌ−Ｌｙｓ数（Ｖａｌ−Ｌｙｓ／
ＶＫ−ＰＲＸ又はＶａｌ−Ｌｙｓ／ＶＫ−α−ＣＤ）を
以下の２つの式を用いて算出した（表６及び表７）。な
お、かかる２つの式は次のように導いた。また、表６中
のＡＭＥｔ／ＰＲＸと表７中のＡＭＥｔ／α−ＣＤは、
ＶＸ−ＰＲＸ又はＶＫ−α−ＣＤ中に導入されたアミノ
エタノール（ＡＭＥｔ）分子数を、プロトン核磁気共鳴
（1Ｈ−ＮＭＲ）スペクトル上に観察されるアミノエタ
ノール由来のメチレンピークとα−ＣＤ中のアノマー位
のメチンピークとの積分値の比から算出した。
Ｘ及びＶＫ−α−ＣＤ中のＶａｌ−Ｌｙｓ導入数の定
量） 実施例３により得られた７種類のＶＫ−ＰＲＸ及び２種
類のＶＫ−α−ＣＤをそれぞれ、６Ｎ ＨＣｌに少量
（１〜２ｍｇ）溶解させ、Ｎ2置換を行った。次に１１
０℃にて約２２時間加熱分解させた。ＨＣｌを完全に除
去後、０．０２ＮＨＣｌ（２〜４ｍｌ）にて希釈しサン
プルとした。この作製したサンプルをアミノ酸分析計
（日立アミノ酸分析形；Ｌ−８５００Ａ）により定量し
た。かかるアミノ酸分析法により得られたＶＫ−ＰＲＸ
又はＶＫ−α−ＣＤの両末端におけるＰｈｅ残基とＶａ
ｌ残基との組成から、ＶＫ−ＰＲＸ又はＶＫ−α−ＣＤ
の１分子あたりのＶａｌ−Ｌｙｓ数（Ｖａｌ−Ｌｙｓ／
ＶＫ−ＰＲＸ又はＶａｌ−Ｌｙｓ／ＶＫ−α−ＣＤ）を
以下の２つの式を用いて算出した（表６及び表７）。な
お、かかる２つの式は次のように導いた。また、表６中
のＡＭＥｔ／ＰＲＸと表７中のＡＭＥｔ／α−ＣＤは、
ＶＸ−ＰＲＸ又はＶＫ−α−ＣＤ中に導入されたアミノ
エタノール（ＡＭＥｔ）分子数を、プロトン核磁気共鳴
（1Ｈ−ＮＭＲ）スペクトル上に観察されるアミノエタ
ノール由来のメチレンピークとα−ＣＤ中のアノマー位
のメチンピークとの積分値の比から算出した。
【００３０】
【表７】
【００３１】Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ＡＭＥｔ−ＲＸは、一分
子あたりＰｈｅ残基を二分子有するので、測定するサン
プル中に存在するＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合
体のモル数（ｎRX）は、サンプル中のＰｈｅ残基のモル
数をｎPheとすると式（１）となる。
子あたりＰｈｅ残基を二分子有するので、測定するサン
プル中に存在するＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合
体のモル数（ｎRX）は、サンプル中のＰｈｅ残基のモル
数をｎPheとすると式（１）となる。
【数１】
また、Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合体一分子あ
たりのＶａｌ−Ｌｙｓ導入数（ＮVal-Lys）は、Ｖａｌ
残基のモル数をｎValとし、Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタ
キサン結合体のモル数をｎRXとすると式（２）となる。
たりのＶａｌ−Ｌｙｓ導入数（ＮVal-Lys）は、Ｖａｌ
残基のモル数をｎValとし、Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタ
キサン結合体のモル数をｎRXとすると式（２）となる。
【数２】
【００３２】実施例５［ＨｅＬａ−ｈＰＥＰＴ１細胞を
用いた高分子ＰＥＰＴ１阻害剤に対する基質認識性の検
討］ 実施例４で得られたＶＫ−ＰＲＸ、及びその構成成分で
あるＶＫ−α−ＣＤのＰＥＰＴ１への認識性の検討を目
的として、ｈＰＥＰＴ１安定発現ＨｅＬａ（ＨｅＬａ−
ｈＰＥＰＴ１）細胞を用いて[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取
り込みに対する阻害効果を検討した。文献（Int. J. Ca
ncer. 88, 274-80, 2000）記載の方法で作製したＨｅＬ
ａ−ｈＰＥＰＴ１細胞、又はＨｅＬａ−ｐｃＤＮＡ（Ｍ
ｏｃｋ）細胞を、マルチディッシュ（Nunc社製）に１０
6細胞／ウエルで細胞を播種し、３７℃で５％ ＣＯ2下
インキュベーター（ヒラサワ社製）で４日間培養した。
培養液は１０％ ＦＣＳ（Gibco Laboratories社製）、
２ｍＭ Ｌ−グルタミン、及び１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８を
含むＤＭＥＭ（Dulbecco's modified Eagle's medium；
Gibco Laboratories社製）を用いた。培養後、培養液を
吸引し、各細胞を３７℃のHanks' balanced salt solut
ion（ＨＢＳＳ；０．９５２ｍＭ ＣａＣｌ2、５．３６
ｍＭ ＫＣｌ、０．４４１ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、０．８１２
ｍＭ ＭｇＳＯ4、１３６．７ｍＭ ＮａＣｌ、０．３８
５ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、２５ｍＭ Ｄ−グルコース、１０
ｍＭ ＭＥＳ：ｐＨ６．０）１ｍｌで３回洗浄後、５分
間プレインキュベーションした。その後、図４及び表８
に示す濃度の各阻害剤と、[3Ｈ（Ｇ）]Ｇｌｙ−Ｓａｒ
（４７６ｎＭ）とを含むＨＢＳＳを２５０μｌ加え、３
７℃で取り込み反応を開始させた。阻害剤ＶＫ−ＰＲＸ
（Ｎｏ．１〜６）の濃度は最大溶解濃度を５００μＭ以
下で調製し、フィルターを用いて濾過したものを用いて
取り込み反応を行った。なお、開始時に各ディッシュ内
から反応溶液を１０μｌのミニバイアルに分取し、液体
シンチレーションカクテル（Clear-solＩ、Nacalai tes
que社製）を４ｍｌ加えて液体シンチレーションカウン
ター（LSC-5100、Aloka Co. Ltd.社製）にて反応溶液中
の放射活性を測定した。反応開始から２分後に各ディッ
シュ中の反応溶液を吸引して取り除き、細胞を氷冷ＨＢ
ＳＳ（ＨＥＰＥＳ：ｐＨ７．４）１ｍｌで３回洗うこと
により反応を停止させた。その後、各ディッシュに５Ｎ
ＮａＯＨを２５０μｌ加えて細胞を可溶化させ(２時間
以上)、５Ｎ ＨＣｌを２５０μｌ加えて中和させた後、
全量をミニバイアルに入れ液体シンチレーションカクテ
ル（Clear-solＩ、Nacalai tesque社製）を４ｍｌ加え
て細胞に取り込まれた放射活性を測定した。
用いた高分子ＰＥＰＴ１阻害剤に対する基質認識性の検
討］ 実施例４で得られたＶＫ−ＰＲＸ、及びその構成成分で
あるＶＫ−α−ＣＤのＰＥＰＴ１への認識性の検討を目
的として、ｈＰＥＰＴ１安定発現ＨｅＬａ（ＨｅＬａ−
ｈＰＥＰＴ１）細胞を用いて[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取
り込みに対する阻害効果を検討した。文献（Int. J. Ca
ncer. 88, 274-80, 2000）記載の方法で作製したＨｅＬ
ａ−ｈＰＥＰＴ１細胞、又はＨｅＬａ−ｐｃＤＮＡ（Ｍ
ｏｃｋ）細胞を、マルチディッシュ（Nunc社製）に１０
6細胞／ウエルで細胞を播種し、３７℃で５％ ＣＯ2下
インキュベーター（ヒラサワ社製）で４日間培養した。
培養液は１０％ ＦＣＳ（Gibco Laboratories社製）、
２ｍＭ Ｌ−グルタミン、及び１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８を
含むＤＭＥＭ（Dulbecco's modified Eagle's medium；
Gibco Laboratories社製）を用いた。培養後、培養液を
吸引し、各細胞を３７℃のHanks' balanced salt solut
ion（ＨＢＳＳ；０．９５２ｍＭ ＣａＣｌ2、５．３６
ｍＭ ＫＣｌ、０．４４１ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、０．８１２
ｍＭ ＭｇＳＯ4、１３６．７ｍＭ ＮａＣｌ、０．３８
５ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4、２５ｍＭ Ｄ−グルコース、１０
ｍＭ ＭＥＳ：ｐＨ６．０）１ｍｌで３回洗浄後、５分
間プレインキュベーションした。その後、図４及び表８
に示す濃度の各阻害剤と、[3Ｈ（Ｇ）]Ｇｌｙ−Ｓａｒ
（４７６ｎＭ）とを含むＨＢＳＳを２５０μｌ加え、３
７℃で取り込み反応を開始させた。阻害剤ＶＫ−ＰＲＸ
（Ｎｏ．１〜６）の濃度は最大溶解濃度を５００μＭ以
下で調製し、フィルターを用いて濾過したものを用いて
取り込み反応を行った。なお、開始時に各ディッシュ内
から反応溶液を１０μｌのミニバイアルに分取し、液体
シンチレーションカクテル（Clear-solＩ、Nacalai tes
que社製）を４ｍｌ加えて液体シンチレーションカウン
ター（LSC-5100、Aloka Co. Ltd.社製）にて反応溶液中
の放射活性を測定した。反応開始から２分後に各ディッ
シュ中の反応溶液を吸引して取り除き、細胞を氷冷ＨＢ
ＳＳ（ＨＥＰＥＳ：ｐＨ７．４）１ｍｌで３回洗うこと
により反応を停止させた。その後、各ディッシュに５Ｎ
ＮａＯＨを２５０μｌ加えて細胞を可溶化させ(２時間
以上)、５Ｎ ＨＣｌを２５０μｌ加えて中和させた後、
全量をミニバイアルに入れ液体シンチレーションカクテ
ル（Clear-solＩ、Nacalai tesque社製）を４ｍｌ加え
て細胞に取り込まれた放射活性を測定した。
【００３３】また、上記培養後における細胞タンパク質
量を測定するために、培養後の細胞を可溶化後、Bio-Ra
d Protein Assay試薬（Bio-Rad Co.社製）を加えた後、
５９５ｎｍの吸光度を測定した。なお、標準物質として
はＢＳＡ（bovine serum albumin）を用いた。以上の結
果から、細胞内への[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量
［cell/medium ratio（μｌ／ｍｇ・ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）］を式（３）により求めた。その結果を図４及び表
８に示す。なお、図４中のコントロールの値は、阻害剤
非存在下で取り込み反応を行った結果を示す。これらの
ことから、ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．１，２，４，６）によ
り[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みが有意に減少するこ
とがわかった。また、ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）及びＶ
Ｋ−α−ＣＤを用いた場合においても、濃度依存的に[3
Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みが阻害されることがわか
った。しかし、Ｖａｌ−Ｌｙｓが結合していないα−Ｃ
Ｄでは、有意な阻害効果は認められなかった。
量を測定するために、培養後の細胞を可溶化後、Bio-Ra
d Protein Assay試薬（Bio-Rad Co.社製）を加えた後、
５９５ｎｍの吸光度を測定した。なお、標準物質として
はＢＳＡ（bovine serum albumin）を用いた。以上の結
果から、細胞内への[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込み量
［cell/medium ratio（μｌ／ｍｇ・ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）］を式（３）により求めた。その結果を図４及び表
８に示す。なお、図４中のコントロールの値は、阻害剤
非存在下で取り込み反応を行った結果を示す。これらの
ことから、ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．１，２，４，６）によ
り[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みが有意に減少するこ
とがわかった。また、ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）及びＶ
Ｋ−α−ＣＤを用いた場合においても、濃度依存的に[3
Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みが阻害されることがわか
った。しかし、Ｖａｌ−Ｌｙｓが結合していないα−Ｃ
Ｄでは、有意な阻害効果は認められなかった。
【００３４】
【数３】
【００３５】
【表８】
【００３６】実施例６［高分子ＰＥＰＴ１阻害剤のプレ
インキュベーションの効果］ ＶＫ−α−ＣＤをポリロタキサン化したときのＰＥＰＴ
１への認識性の変化を検討することを目的として、ＶＫ
−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）及びＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）
で細胞をあらかじめプレインキュベーションしたときの
[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みへの影響をｈＰＥＰＴ
１安定発現ＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ｈＰＥＰＴ１）を
用いて検討した。図５に示す濃度の各阻害剤存在下又は
非存在下で３０分間プレインキュベーションし（白いボ
ックス）、反応溶液を除去した後、同じ濃度の阻害剤と
[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒ（４７６ｎＭ）とを含むＨＢＳＳ
中で取り込み反応を行う以外は、実施例５の方法と同様
に行い[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みに対する阻害効
果を測定した（黒いボックス）。その結果を図５に示
す。なお、図中のＭｏｃｋはＨｅＬａ−ｐｃＤＮＡ３細
胞による取り込みを示す。このことから、ＶＫ−ＰＲＸ
（Ｎｏ．７）又はＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）のプレイ
ンキュベーションの有無によって、[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａ
ｒの取り込みに変化がみられた。ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．
７）では有意な取り込みの減少が認められたのに対し
て、ＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）では有意な取り込みの
増加が認められた。また、ＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）
を超分子化したＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）の方がより強
い阻害効果がみられたが、Ｖａｌ−Ｌｙｓが結合してい
ないα−ＣＤによる阻害効果は認められなかった。
インキュベーションの効果］ ＶＫ−α−ＣＤをポリロタキサン化したときのＰＥＰＴ
１への認識性の変化を検討することを目的として、ＶＫ
−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）及びＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）
で細胞をあらかじめプレインキュベーションしたときの
[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みへの影響をｈＰＥＰＴ
１安定発現ＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ−ｈＰＥＰＴ１）を
用いて検討した。図５に示す濃度の各阻害剤存在下又は
非存在下で３０分間プレインキュベーションし（白いボ
ックス）、反応溶液を除去した後、同じ濃度の阻害剤と
[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒ（４７６ｎＭ）とを含むＨＢＳＳ
中で取り込み反応を行う以外は、実施例５の方法と同様
に行い[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａｒの取り込みに対する阻害効
果を測定した（黒いボックス）。その結果を図５に示
す。なお、図中のＭｏｃｋはＨｅＬａ−ｐｃＤＮＡ３細
胞による取り込みを示す。このことから、ＶＫ−ＰＲＸ
（Ｎｏ．７）又はＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）のプレイ
ンキュベーションの有無によって、[3Ｈ]Ｇｌｙ−Ｓａ
ｒの取り込みに変化がみられた。ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．
７）では有意な取り込みの減少が認められたのに対し
て、ＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）では有意な取り込みの
増加が認められた。また、ＶＫ−α−ＣＤ（Ｎｏ．２）
を超分子化したＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）の方がより強
い阻害効果がみられたが、Ｖａｌ−Ｌｙｓが結合してい
ないα−ＣＤによる阻害効果は認められなかった。
【００３７】実施例７［セファドロキシル（ＣＤＸ）の
体内動態変動によるＶＫ−ＰＲＸの吸収抑制効果の評
価］ 最近、腎臓のグルコーストランスポーター阻害剤である
Ｔ−１０９５が、ＳＴＺラット（Streptozotocin-induc
ed diabetic rats）における高血糖状態を改善すること
が報告されている（Metabolism, 49, 990-5, 2000）。
このことは、トランスポーター機能を抑制し生理活性物
質の移行を制御することによって、病態を改善すること
が可能となることを示唆するものであり、新たなドラッ
グターゲットとしても期待されている。また、ヒトにお
いて、ＰＥＰＴ１の基質である、β−ラクタム系抗生物
質であるセファドロキシル［ＣＤＸ：cefadroxil（化
２）］のバイオアベイラビリティーが、β−ラクタム系
抗生物質であるセファレキシン［ＣＥＸ：cephalexin
（化３）］の同時投与によって低下することが報告され
ている（Eur. J. Clin. Pharmacol. 41, 179-83, 199
1）。この報告は、ＰＥＰＴ１を介したＣＤＸの消化管
吸収を、同じくＰＥＰＴ１の基質であるＣＥＸが抑制し
たことを示すものである。そこで、ラットを用いてＰＥ
ＰＴ１阻害剤によるＣＤＸの吸収抑制効果を検討した。
体内動態変動によるＶＫ−ＰＲＸの吸収抑制効果の評
価］ 最近、腎臓のグルコーストランスポーター阻害剤である
Ｔ−１０９５が、ＳＴＺラット（Streptozotocin-induc
ed diabetic rats）における高血糖状態を改善すること
が報告されている（Metabolism, 49, 990-5, 2000）。
このことは、トランスポーター機能を抑制し生理活性物
質の移行を制御することによって、病態を改善すること
が可能となることを示唆するものであり、新たなドラッ
グターゲットとしても期待されている。また、ヒトにお
いて、ＰＥＰＴ１の基質である、β−ラクタム系抗生物
質であるセファドロキシル［ＣＤＸ：cefadroxil（化
２）］のバイオアベイラビリティーが、β−ラクタム系
抗生物質であるセファレキシン［ＣＥＸ：cephalexin
（化３）］の同時投与によって低下することが報告され
ている（Eur. J. Clin. Pharmacol. 41, 179-83, 199
1）。この報告は、ＰＥＰＴ１を介したＣＤＸの消化管
吸収を、同じくＰＥＰＴ１の基質であるＣＥＸが抑制し
たことを示すものである。そこで、ラットを用いてＰＥ
ＰＴ１阻害剤によるＣＤＸの吸収抑制効果を検討した。
【００３８】
【化２】
【００３９】
【化３】
【００４０】７〜８週齢のＳＤ（Sprague-Dawley）系ラ
ット （雄性；日本ＳＬＣ社製）に５０ｍｇ／ｋｇのネ
ンブタール（ダイナボット（株）社製）を腹腔内投与し
て麻酔し、背位固定後、頸静脈及び大腿静脈（瞬時静注
時のみ）にカニュレーション［シリコンチューブ 内径
×外径（０．５×１）］を施し、さらに、その先端を皮
下に通し頚背部から貫通後、切開部を縫合した。その
後、かかる動物を一晩（約１８時間）絶食させ、各薬剤
を経口ゾンデ針により経口投与、あるいは、大腿静脈投
与した。各薬剤投与後、経時的にカニュレーションチュ
ーブから血液４００μｌを採取し、以下の方法で血漿中
におけるＣＤＸ濃度を測定し、式（４）又は式（５）、
式（６）、式（７）及び式（８）により、各パラメータ
ーを算出してWinNonlin（Scientific Consulting Inc.
社製）のコンパートメントモデル解析法により解析した
（辻 彰 編集、わかりやすい生物薬剤学，廣川書店，
１７８−１８８，１９９６）。
ット （雄性；日本ＳＬＣ社製）に５０ｍｇ／ｋｇのネ
ンブタール（ダイナボット（株）社製）を腹腔内投与し
て麻酔し、背位固定後、頸静脈及び大腿静脈（瞬時静注
時のみ）にカニュレーション［シリコンチューブ 内径
×外径（０．５×１）］を施し、さらに、その先端を皮
下に通し頚背部から貫通後、切開部を縫合した。その
後、かかる動物を一晩（約１８時間）絶食させ、各薬剤
を経口ゾンデ針により経口投与、あるいは、大腿静脈投
与した。各薬剤投与後、経時的にカニュレーションチュ
ーブから血液４００μｌを採取し、以下の方法で血漿中
におけるＣＤＸ濃度を測定し、式（４）又は式（５）、
式（６）、式（７）及び式（８）により、各パラメータ
ーを算出してWinNonlin（Scientific Consulting Inc.
社製）のコンパートメントモデル解析法により解析した
（辻 彰 編集、わかりやすい生物薬剤学，廣川書店，
１７８−１８８，１９９６）。
【００４１】上記採取した血液４００μｌを同量の生理
食塩水で置換し、１．５ｍｌのマイクロチューブに分注
して遠心分離（１２０００ｒｐｍ、５分間、４℃）を行
い血漿を取り出した。血漿１５０μｌを１．５ｍｌのマ
イクロチューブに移し、さらに同量のアセトニトリルを
加え除蛋白処理し、遠心（１２０００ｒｐｍ、５分間、
４℃）後、上清２５０μｌを１．５ｍｌのマイクロチュ
ーブに移し蒸発乾固し、以下のＨＰＬＣ条件にて再構築
した。カラムはTSKgel ODS-80Ts（東洋ソーダ社製）
を、ポンプ、紫外・可視光検出器、インテリジェントオ
ートサンプラー、及びカラムオーブンは880-PU、875-U
V、AS-1555-10、及びCo-1565（全て日本分光（株）社
製）を、インテグレーターはChromatopac C-R3A（島津
製作所（株）社製）を使用した。また、カラム温度３５
℃で、移動相に７％のアセトニトリル（０．１Ｍの酢酸
緩衝液（ｐＨ３．０）及び０．０１Ｍの１−ペンタンス
ルホン酸ナトリウムを含む）を用いて、流速０．９ｍｌ
／ｍｉｎで分離溶出し、波長２４０ｎｍで検出し、血漿
中におけるＣＤＸ濃度を求めた。
食塩水で置換し、１．５ｍｌのマイクロチューブに分注
して遠心分離（１２０００ｒｐｍ、５分間、４℃）を行
い血漿を取り出した。血漿１５０μｌを１．５ｍｌのマ
イクロチューブに移し、さらに同量のアセトニトリルを
加え除蛋白処理し、遠心（１２０００ｒｐｍ、５分間、
４℃）後、上清２５０μｌを１．５ｍｌのマイクロチュ
ーブに移し蒸発乾固し、以下のＨＰＬＣ条件にて再構築
した。カラムはTSKgel ODS-80Ts（東洋ソーダ社製）
を、ポンプ、紫外・可視光検出器、インテリジェントオ
ートサンプラー、及びカラムオーブンは880-PU、875-U
V、AS-1555-10、及びCo-1565（全て日本分光（株）社
製）を、インテグレーターはChromatopac C-R3A（島津
製作所（株）社製）を使用した。また、カラム温度３５
℃で、移動相に７％のアセトニトリル（０．１Ｍの酢酸
緩衝液（ｐＨ３．０）及び０．０１Ｍの１−ペンタンス
ルホン酸ナトリウムを含む）を用いて、流速０．９ｍｌ
／ｍｉｎで分離溶出し、波長２４０ｎｍで検出し、血漿
中におけるＣＤＸ濃度を求めた。
【００４２】
【数４】
なお、式中のＣは血漿中におけるＣＤＸの濃度を、Ｆは
吸収率を、Ｄは投与量を、ｋａは吸収速度定数を、ｋｅ
は消失速度定数を、Ｖｄは分布容積を、ｔは薬剤投与し
てから血液を採取した時間をそれぞれ表す。
吸収率を、Ｄは投与量を、ｋａは吸収速度定数を、ｋｅ
は消失速度定数を、Ｖｄは分布容積を、ｔは薬剤投与し
てから血液を採取した時間をそれぞれ表す。
【００４３】
【数５】
なお、式中のαは分布相の傾きを、βは消失相の傾き
を、Ｖ1は中枢コンパートメントの分布容積をそれぞれ
表す。
を、Ｖ1は中枢コンパートメントの分布容積をそれぞれ
表す。
【００４４】
【数６】
なお、式中のＡＵＣは血漿中薬物濃度−時間曲線下面積
を、Ｃ6は薬物投与６時間後の血漿中濃度をそれぞれ表
す。
を、Ｃ6は薬物投与６時間後の血漿中濃度をそれぞれ表
す。
【００４５】
【数７】
なお、式中のＣＬは全身クリアランスを、Ｄｏｓｅは薬
物投与量をそれぞれ表す。
物投与量をそれぞれ表す。
【００４６】
【数８】
【００４７】７−１（ラットを用いたＣＤＸのＰＥＰＴ
１を介した輸送に対するＣＥＸの阻害効果） ヒトにおいて、ＰＥＰＴ１の基質であるＣＤＸのバイオ
アベイラビリティーが、β−ラクタム系抗生物質である
ＣＥＸの同時投与によって低下するということが報告さ
れている（Eur. J. Clin. Pharmacol., 41, 179-83, 19
91）。ＶＫ−ＰＲＸのＰＥＰＴ１阻害効果を明らかにす
ることを目的とし、薬剤として２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ
Ｘ（○）、５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）、又は、２．５
ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ及び４５ｍｇ／ｋｇのＣＥＸ（▲）
をそれぞれ前記ラットに経口投与し、実施例７記載の方
法によりラットにおけるＣＤＸの吸収をＣＥＸが抑制す
るかどうかを検討した。なお、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ
Ｘ及び４５ｍｇ／ｋｇのＣＥＸ（▲）においては、ＣＤ
Ｘの投与３０分前にＣＥＸをラットに経口投与した。上
記各ラットにおける体内動態の各パラメーターは、ＣＤ
Ｘの血中濃度推移をもとに式（４）、式（６）、式
（７）及び式（８）を用いて算出し、評価した。その結
果を図６及び表９に示す。なお、図及び表に示す値は、
３〜４回の個別の実験により求められた平均値±Ｓ．
Ｅ．Ｍ．を表す。ＣＤＸを２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ
／ｋｇで経口投与したときの結果から、ＡＵＣ0-∞及び
Ｃｍａｘに飽和現象が認められた。さらに、ＣＤＸを
２．５ｍｇ／ｋｇ投与したときの吸収率が８６％と十分
なものであった。ＣＤＸは生体内で安定であることを含
めて、ＰＥＰＴ１を介した吸収活性を評価するマーカー
化合物としてＣＤＸが適切であるということが示され
た。また、ＣＥＸ（４５ｍｇ／ｋｇ）の前投与後にＣＤ
Ｘ（２．５ｍｇ／ｋｇ）を投与したとき、ＣＤＸ単独投
与時と比較して血漿中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ
0-∞）は約３０％減少し、吸収速度定数（ｋａ）は２．
４２から１．５３ｈｒ-1に、最高血漿中濃度（Ｃｍａ
ｘ）は０．８から０．５μｇ／ｍｌにそれぞれ有意に減
少した。以上の結果から、ヒトにおいての報告がラット
で再現された。
１を介した輸送に対するＣＥＸの阻害効果） ヒトにおいて、ＰＥＰＴ１の基質であるＣＤＸのバイオ
アベイラビリティーが、β−ラクタム系抗生物質である
ＣＥＸの同時投与によって低下するということが報告さ
れている（Eur. J. Clin. Pharmacol., 41, 179-83, 19
91）。ＶＫ−ＰＲＸのＰＥＰＴ１阻害効果を明らかにす
ることを目的とし、薬剤として２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ
Ｘ（○）、５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）、又は、２．５
ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ及び４５ｍｇ／ｋｇのＣＥＸ（▲）
をそれぞれ前記ラットに経口投与し、実施例７記載の方
法によりラットにおけるＣＤＸの吸収をＣＥＸが抑制す
るかどうかを検討した。なお、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ
Ｘ及び４５ｍｇ／ｋｇのＣＥＸ（▲）においては、ＣＤ
Ｘの投与３０分前にＣＥＸをラットに経口投与した。上
記各ラットにおける体内動態の各パラメーターは、ＣＤ
Ｘの血中濃度推移をもとに式（４）、式（６）、式
（７）及び式（８）を用いて算出し、評価した。その結
果を図６及び表９に示す。なお、図及び表に示す値は、
３〜４回の個別の実験により求められた平均値±Ｓ．
Ｅ．Ｍ．を表す。ＣＤＸを２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ
／ｋｇで経口投与したときの結果から、ＡＵＣ0-∞及び
Ｃｍａｘに飽和現象が認められた。さらに、ＣＤＸを
２．５ｍｇ／ｋｇ投与したときの吸収率が８６％と十分
なものであった。ＣＤＸは生体内で安定であることを含
めて、ＰＥＰＴ１を介した吸収活性を評価するマーカー
化合物としてＣＤＸが適切であるということが示され
た。また、ＣＥＸ（４５ｍｇ／ｋｇ）の前投与後にＣＤ
Ｘ（２．５ｍｇ／ｋｇ）を投与したとき、ＣＤＸ単独投
与時と比較して血漿中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ
0-∞）は約３０％減少し、吸収速度定数（ｋａ）は２．
４２から１．５３ｈｒ-1に、最高血漿中濃度（Ｃｍａ
ｘ）は０．８から０．５μｇ／ｍｌにそれぞれ有意に減
少した。以上の結果から、ヒトにおいての報告がラット
で再現された。
【００４８】
【表９】
【００４９】７−２（ＶＫ−ＰＲＸタイプによる吸収抑
制効果の変化） 次に、薬剤として５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸのみ（○）、又
は、１０ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＫ［０．１％のポリア
クリル酸ナトリウム（ＰＡＮＡ）塩水に懸濁したＶＫ−
ＰＲＫ］及び５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）を用いて、前
記ラットに経口投与し、実施例７記載の方法によりラッ
トにおけるＣＤＸの吸収をＶＫ−ＰＲＸが抑制するかど
うかを検討した。なお、上記ＶＫ−ＰＲＫは、５ｍｇ／
ｋｇのＣＤＸ（●）を投与する３０分前に投与した。そ
の際、ＣＤＸの血中濃度推移をもとに式（４）、式
（６）、式（７）及び式（８）を用いて体内動態の各パ
ラメーターを算出し、評価した。ＶＫ−ＰＲＫ（Ｎｏ．
２）を用いた場合の結果を図７及び表１０に、ＶＫ−Ｐ
ＲＫ（Ｎｏ．７）を用いた場合の結果を図８及び表１１
に示す。なお、図に示す値は２〜４回の個別の実験によ
り求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を、表に示す値は３
回の個別の実験により求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．
を表す。ＶＫ−ＰＲＫ（Ｎｏ．２）あるいはＶＫ−ＰＲ
Ｋ（Ｎｏ．７）をＣＤＸと同時投与したが、どちらもＣ
ＤＸ単独投与時と比較してＡＵＣ0-∞に有意な差は認め
られなかった。また、その他のパラメーターについても
同様に有意な差は認められなかった。これらは、上記Ｃ
ＤＸ（５ｍｇ／ｋｇ）の投与量では、既に消化管吸収に
飽和が生じているためＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．２）の効果
が検出しにくい条件であったことが考えられる。
制効果の変化） 次に、薬剤として５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸのみ（○）、又
は、１０ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＫ［０．１％のポリア
クリル酸ナトリウム（ＰＡＮＡ）塩水に懸濁したＶＫ−
ＰＲＫ］及び５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）を用いて、前
記ラットに経口投与し、実施例７記載の方法によりラッ
トにおけるＣＤＸの吸収をＶＫ−ＰＲＸが抑制するかど
うかを検討した。なお、上記ＶＫ−ＰＲＫは、５ｍｇ／
ｋｇのＣＤＸ（●）を投与する３０分前に投与した。そ
の際、ＣＤＸの血中濃度推移をもとに式（４）、式
（６）、式（７）及び式（８）を用いて体内動態の各パ
ラメーターを算出し、評価した。ＶＫ−ＰＲＫ（Ｎｏ．
２）を用いた場合の結果を図７及び表１０に、ＶＫ−Ｐ
ＲＫ（Ｎｏ．７）を用いた場合の結果を図８及び表１１
に示す。なお、図に示す値は２〜４回の個別の実験によ
り求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を、表に示す値は３
回の個別の実験により求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．
を表す。ＶＫ−ＰＲＫ（Ｎｏ．２）あるいはＶＫ−ＰＲ
Ｋ（Ｎｏ．７）をＣＤＸと同時投与したが、どちらもＣ
ＤＸ単独投与時と比較してＡＵＣ0-∞に有意な差は認め
られなかった。また、その他のパラメーターについても
同様に有意な差は認められなかった。これらは、上記Ｃ
ＤＸ（５ｍｇ／ｋｇ）の投与量では、既に消化管吸収に
飽和が生じているためＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．２）の効果
が検出しにくい条件であったことが考えられる。
【００５０】
【表１０】
【００５１】
【表１１】
【００５２】７−３（ＶＫ−ＰＲＸ投与量とその効果）
実施例７記載の方法と同様に、５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸの
み（○）、１０ｍｇ／ｋｇのＣＥＸ及び５ｍｇ／ｋｇの
ＣＤＸ（▲）、又は、５．７ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＫ
（Ｎｏ．２）及び５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）を同時に
ラットに経口投与し、体内動態の各パラメーターを算出
し、評価した。その結果を図９及び表１２に示す。な
お、図及び表に示す値は２〜４回の個別の実験により求
められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。１０ｍｇ／ｋｇ
のＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．２）をＣＤＸと同時に投与した
場合（図７及び表１０）と同様に、５．７ｍｇ／ｋｇの
ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．２）をＣＤＸと同時投与しても、
ＣＤＸ単独投与時と比較してＡＵＣ0-∞に有意な差は認
められなかった。また、その他のパラメーターについて
も同様に有意な差は認められなかった。
み（○）、１０ｍｇ／ｋｇのＣＥＸ及び５ｍｇ／ｋｇの
ＣＤＸ（▲）、又は、５．７ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＫ
（Ｎｏ．２）及び５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）を同時に
ラットに経口投与し、体内動態の各パラメーターを算出
し、評価した。その結果を図９及び表１２に示す。な
お、図及び表に示す値は２〜４回の個別の実験により求
められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。１０ｍｇ／ｋｇ
のＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．２）をＣＤＸと同時に投与した
場合（図７及び表１０）と同様に、５．７ｍｇ／ｋｇの
ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．２）をＣＤＸと同時投与しても、
ＣＤＸ単独投与時と比較してＡＵＣ0-∞に有意な差は認
められなかった。また、その他のパラメーターについて
も同様に有意な差は認められなかった。
【００５３】
【表１２】
【００５４】７−４（懸濁化剤によるＶＫ−ＰＲＸ効果
の影響） 次に各薬剤を懸濁化剤である０．１％のポリアクリル酸
ナトリウム（ＰＡＮＡ）塩水に懸濁した場合（図１０）
と、懸濁しない場合（図１１）とのＶＫ−ＰＲＸの効果
の違いを調べるために、１０ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＫ
（Ｎｏ．７）及び２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）、又
は、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸのみを経口投与し、各ラ
ットにおける体内動態の各パラメーターを実施例７記載
の方法と同様に算出し、評価した。なお、ＶＫ−ＰＲＫ
の経口投与はＣＤＸ投与３０分前に行った。ＰＡＮＡに
懸濁した場合の結果を図１０及び表１３に、懸濁してい
ない場合を図１１及び表１４に示す。なお、図１０、図
１１及び表１４に示す値は４回の、表１３に示す値は３
回の個別の実験により求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．
を表す。これらの結果から、ＶＫ−ＰＲＫ（Ｎｏ．７）
を懸濁化剤に溶解させＣＤＸと同時投与しても、ＣＤＸ
単独投与時と比較してＡＵＣ0-∞に有意な差が認められ
ず、その他のパラメーターについても同様に有意な差が
認められなかった。一方、ＰＡＮＡに懸濁させずに同じ
条件でＶＫ−ＰＲＫを投与したときＡＵＣ0-∞は有意に
減少することがわかった。さらに、ＶＫ−ＰＲＫの同時
投与によってｋａは２．４２から１．７５ｈｒ-1に、Ｃ
ｍａｘは０．８から０．６４μｇ／ｍｌにそれぞれ有意
に減少し、Ｔｍａｘは０．９５から１．１８ｈｒに有意
に延長していた。しかし、消失速度定数（ｋｅ）につい
ては有意な差は認められなかった。
の影響） 次に各薬剤を懸濁化剤である０．１％のポリアクリル酸
ナトリウム（ＰＡＮＡ）塩水に懸濁した場合（図１０）
と、懸濁しない場合（図１１）とのＶＫ−ＰＲＸの効果
の違いを調べるために、１０ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＫ
（Ｎｏ．７）及び２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸ（●）、又
は、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸのみを経口投与し、各ラ
ットにおける体内動態の各パラメーターを実施例７記載
の方法と同様に算出し、評価した。なお、ＶＫ−ＰＲＫ
の経口投与はＣＤＸ投与３０分前に行った。ＰＡＮＡに
懸濁した場合の結果を図１０及び表１３に、懸濁してい
ない場合を図１１及び表１４に示す。なお、図１０、図
１１及び表１４に示す値は４回の、表１３に示す値は３
回の個別の実験により求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．
を表す。これらの結果から、ＶＫ−ＰＲＫ（Ｎｏ．７）
を懸濁化剤に溶解させＣＤＸと同時投与しても、ＣＤＸ
単独投与時と比較してＡＵＣ0-∞に有意な差が認められ
ず、その他のパラメーターについても同様に有意な差が
認められなかった。一方、ＰＡＮＡに懸濁させずに同じ
条件でＶＫ−ＰＲＫを投与したときＡＵＣ0-∞は有意に
減少することがわかった。さらに、ＶＫ−ＰＲＫの同時
投与によってｋａは２．４２から１．７５ｈｒ-1に、Ｃ
ｍａｘは０．８から０．６４μｇ／ｍｌにそれぞれ有意
に減少し、Ｔｍａｘは０．９５から１．１８ｈｒに有意
に延長していた。しかし、消失速度定数（ｋｅ）につい
ては有意な差は認められなかった。
【００５５】
【表１３】
【００５６】
【表１４】
【００５７】７−５（ＶＫ−ＰＲＸの前投与の有効性）
また、ＶＫ−ＰＲＸの前投与の有効性についても調べて
みた。２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸと１０ｍｇ／ｋｇＶＫ
−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）とを同時に経口投与した場合
（●）、又は、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸのみを経口投
与した場合（○）の体内動態の各パラメーターを、実施
例７記載の方法と同様に算出し、評価した。その結果を
図１２及び表１５に示す。なお、図に示す値は３回の、
表に示す値は４回の個別の実験により求められた平均値
±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。その結果、ＣＤＸと同時にＶＫ
−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）を投与したものは、ＣＤＸ単独投
与時のものと比較してＡＵＣ0-∞に有意な差は認められ
なかった。しかしながら、ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）を
前投与し、３０分後にＣＤＸを投与した場合（図１１及
び表１４）では、ＡＵＣ0-∞に有意な減少が認められ、
また、前投与の有無に関わらずｋａの有意な減少が認め
られた。
みた。２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸと１０ｍｇ／ｋｇＶＫ
−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）とを同時に経口投与した場合
（●）、又は、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸのみを経口投
与した場合（○）の体内動態の各パラメーターを、実施
例７記載の方法と同様に算出し、評価した。その結果を
図１２及び表１５に示す。なお、図に示す値は３回の、
表に示す値は４回の個別の実験により求められた平均値
±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。その結果、ＣＤＸと同時にＶＫ
−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）を投与したものは、ＣＤＸ単独投
与時のものと比較してＡＵＣ0-∞に有意な差は認められ
なかった。しかしながら、ＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）を
前投与し、３０分後にＣＤＸを投与した場合（図１１及
び表１４）では、ＡＵＣ0-∞に有意な減少が認められ、
また、前投与の有無に関わらずｋａの有意な減少が認め
られた。
【００５８】
【表１５】
【００５９】実施例８［ＶＫ−ＰＲＸの静注後のＣＤＸ
体内動態への影響］ ＶＫ−ＰＲＸは高分子化合物であることから、消化管吸
収を受けないものと考えられる。しかし、経口投与した
ＣＥＸがＣＤＸの排泄を促進することも知られており、
ＶＫ−ＰＲＸがＣＤＸのＡＵＣ0-∞を低下させた作用が
必ずしも吸収性低下のみでは説明できない。一方、ＣＤ
Ｘは腎臓からの再吸収に非線形性があることが知られて
いる（Drug Metab. Dispos. 21, 215-7, 1993、Drug Me
tab. Dispos. 22, 447-50, 1994）。また、その再吸収
にはオリゴペプチドトタンスポーターが関与している。
そこで、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸを瞬間静注し、同時
に１０ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）［生理食
塩水に溶解したＶＫ−ＰＲＫ］を経口投与したラット
（○）におけるＣＤＸのクリアランス（ＣＬ：腎排泄）
に対する影響を、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸを瞬間静注
したラット（●）と比較するため、実施例７記載の方法
で体内動態の各パラメーターを算出し、評価した（図１
３及び表１６）。なお、図及び表に示す値は３回の個別
の実験により求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。
その結果、ＶＫ−ＰＲＸの投与によってＣＤＸの血漿中
濃度推移は変化せず、前記ＡＵＣ0-∞変化は腎の排泄・
再吸収過程ではなく、消化管吸収への影響であることが
明らかとなった。また、既にＰＲＸに担持されたペプチ
ドの物理的安定性が向上することが明らかにされており
（Pharm. Res. 16, 1331-1343, 1999）、得られた結果
はＶＫ−ＰＲＸが消化管吸収を受けないかあるいは吸収
されにくい化合物であることを支持するものである。以
上の結果から、高分子ＰＥＰＴ１阻害剤が非吸収性化合
物としてＰＥＰＴ１を介した吸収を阻害することが明ら
かとなった。この結果は、ＰＥＰＴ１を介した蛋白質の
吸収抑制へと繋がるものである。
体内動態への影響］ ＶＫ−ＰＲＸは高分子化合物であることから、消化管吸
収を受けないものと考えられる。しかし、経口投与した
ＣＥＸがＣＤＸの排泄を促進することも知られており、
ＶＫ−ＰＲＸがＣＤＸのＡＵＣ0-∞を低下させた作用が
必ずしも吸収性低下のみでは説明できない。一方、ＣＤ
Ｘは腎臓からの再吸収に非線形性があることが知られて
いる（Drug Metab. Dispos. 21, 215-7, 1993、Drug Me
tab. Dispos. 22, 447-50, 1994）。また、その再吸収
にはオリゴペプチドトタンスポーターが関与している。
そこで、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸを瞬間静注し、同時
に１０ｍｇ／ｋｇのＶＫ−ＰＲＸ（Ｎｏ．７）［生理食
塩水に溶解したＶＫ−ＰＲＫ］を経口投与したラット
（○）におけるＣＤＸのクリアランス（ＣＬ：腎排泄）
に対する影響を、２．５ｍｇ／ｋｇのＣＤＸを瞬間静注
したラット（●）と比較するため、実施例７記載の方法
で体内動態の各パラメーターを算出し、評価した（図１
３及び表１６）。なお、図及び表に示す値は３回の個別
の実験により求められた平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を表す。
その結果、ＶＫ−ＰＲＸの投与によってＣＤＸの血漿中
濃度推移は変化せず、前記ＡＵＣ0-∞変化は腎の排泄・
再吸収過程ではなく、消化管吸収への影響であることが
明らかとなった。また、既にＰＲＸに担持されたペプチ
ドの物理的安定性が向上することが明らかにされており
（Pharm. Res. 16, 1331-1343, 1999）、得られた結果
はＶＫ−ＰＲＸが消化管吸収を受けないかあるいは吸収
されにくい化合物であることを支持するものである。以
上の結果から、高分子ＰＥＰＴ１阻害剤が非吸収性化合
物としてＰＥＰＴ１を介した吸収を阻害することが明ら
かとなった。この結果は、ＰＥＰＴ１を介した蛋白質の
吸収抑制へと繋がるものである。
【００６０】
【表１６】
【００６１】
【発明の効果】本発明の組織特異的トランスポーター阻
害剤は、小腸から吸収されない、又は吸収されにくいた
め、小腸からの栄養物の吸収を特異的に低下させること
により組織機能不全疾患又は腎不全の患者の食事療法に
よるＱＯＬ低下を防ぐことができる。また、かかる組織
特異的トランスポーター阻害剤は、腎疾患等の組織疾患
を発症させない予防医学及び腎不全を透析に至らせない
保存期治療に有用である。
害剤は、小腸から吸収されない、又は吸収されにくいた
め、小腸からの栄養物の吸収を特異的に低下させること
により組織機能不全疾患又は腎不全の患者の食事療法に
よるＱＯＬ低下を防ぐことができる。また、かかる組織
特異的トランスポーター阻害剤は、腎疾患等の組織疾患
を発症させない予防医学及び腎不全を透析に至らせない
保存期治療に有用である。
【図１】ポリロタキサンの合成手順を示す図である。
【図２】ペプチドトランスポーターに認識されるバリル
リジン誘導体の合成手順を示す図である。
リジン誘導体の合成手順を示す図である。
【図３】本発明の組織特異的トランスポーター阻害剤で
あるＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合体の合成手順
を示す図である。
あるＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン結合体の合成手順
を示す図である。
【図４】ＨｅＬａ−ｈＰＥＰＴ１細胞による[3Ｈ]Ｇｌ
ｙ−Ｓａｒの取り込みに対するＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロ
タキサンの阻害効果を示す図である。
ｙ−Ｓａｒの取り込みに対するＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロ
タキサンの阻害効果を示す図である。
【図５】ＨｅＬａ−ｈＰＥＰＴ１細胞による[3Ｈ]Ｇｌ
ｙ−Ｓａｒの取り込みに対するＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロ
タキサン又はＶａｌ−Ｌｙｓ−α−サイクロデキストリ
ンの前投与に対する効果を示す図である。
ｙ−Ｓａｒの取り込みに対するＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロ
タキサン又はＶａｌ−Ｌｙｓ−α−サイクロデキストリ
ンの前投与に対する効果を示す図である。
【図６】ラットへのセファキシレンの投与又は非投与後
におけるセファドロキシルの血漿中濃度経時変化の結果
を示す図である。
におけるセファドロキシルの血漿中濃度経時変化の結果
を示す図である。
【図７】ラットへのＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン
（Ｎｏ．２）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
（Ｎｏ．２）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
【図８】ラットへのＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
【図９】ラットにＣＤＸと、セファレキシン又はＶａｌ
−Ｌｙｓ−ポリロタキサン（Ｎｏ．２）とを投与したと
きの血漿中におけるセファドロキシルの濃度経時変化の
結果を示す図である。
−Ｌｙｓ−ポリロタキサン（Ｎｏ．２）とを投与したと
きの血漿中におけるセファドロキシルの濃度経時変化の
結果を示す図である。
【図１０】ラットへのＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
【図１１】ラットへのＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
【図１２】ラットへのＶａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
（Ｎｏ．７）の投与又は非投与後におけるセファドロキ
シルの血漿中濃度経時変化の結果を示す図である。
【図１３】ラットにＣＤＸを瞬間静注し、それと同時に
Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン（Ｎｏ．７）を経口投
与した時の血漿中におけるセファドロキシルの濃度経時
変化の結果を示す図である。
Ｖａｌ−Ｌｙｓ−ポリロタキサン（Ｎｏ．７）を経口投
与した時の血漿中におけるセファドロキシルの濃度経時
変化の結果を示す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 13/12
43/00 １０５ 43/00 １０５
(72)発明者 由井 伸彦
石川県能美郡辰口町松が岡４−103
(72)発明者 大谷 亨
石川県石川郡鶴来町明島町夕108−１
(72)発明者 宮本 賢一
徳島県徳島市中洲町２−38−502
Ｆターム(参考） 4C076 AA95 CC16 CC17 CC41 CC47
EE23 EE39
4C084 AA02 AA17 NA05 NA14 ZA662
ZA812 ZB212
4C086 AA01 AA02 EA20 FA02 MA01
MA04 NA05 NA14 ZA66 ZA81
ZB21
Claims (13)
- 【請求項１】 組織特異的トランスポーターが認識する
リガンド構造と、膜組織を透過できない高分子分子構造
とをもつことからなることを特徴とする組織特異的トラ
ンスポーター機能阻害剤。 - 【請求項２】 膜組織を透過できない高分子分子構造
が、超分子構造であることを特徴とする請求項１記載の
組織特異的トランスポーター機能阻害剤。 - 【請求項３】 超分子構造が、多数の環状分子に線状分
子が貫通し、該線状分子の両末端を嵩高い置換基でキャ
ップしたロタキサン化合物であることを特徴とする請求
項２記載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤。 - 【請求項４】 環状分子が、シクロデキストリンである
ことを特徴とする請求項３記載の組織特異的トランスポ
ーター機能阻害剤。 - 【請求項５】 線状分子が、ポリエチレングリコールで
あることを特徴とする請求項３又は４記載の組織特異的
トランスポーター機能阻害剤。 - 【請求項６】 嵩高い置換基が、Ｎ−ベンジルオキシカ
ルボニル−Ｌ−フェニルアラニンであることを特徴とす
る請求項３〜５のいずれか記載の組織特異的トランスポ
ーター機能阻害剤。 - 【請求項７】 膜組織を透過できない高分子分子構造
が、α−シクロデキストリン構造であることを特徴とす
る請求項1記載の組織特異的トランスポーター機能阻害
剤。 - 【請求項８】 組織特異的トランスポーターが認識する
リガンドが、有機アニオン性物質、有機カチオン性物
質、又はペプチド性物質であることを特徴とする請求項
１〜７のいずれか記載の組織特異的トランスポーター機
能阻害剤。 - 【請求項９】 組織特異的トランスポーターが、小腸特
異的トランスポーターであることを特徴とする請求項１
〜８のいずれか記載の組織特異的トランスポーター機能
阻害剤。 - 【請求項１０】 小腸特異的トランスポーターが、オリ
ゴペプチドトランスポーター１（ＰＥＰＴ１）であるこ
とを特徴とする請求項９記載の組織特異的トランスポー
ター機能阻害剤。 - 【請求項１１】 オリゴペプチドトランスポーター１
（ＰＥＰＴ１）が認識するペプチド性物質が、バリルリ
ジン（Ｖａｌ−Ｌｙｓ）であることを特徴とする請求項
１０記載の組織特異的トランスポーター機能阻害剤。 - 【請求項１２】 請求項１〜１１のいずれか記載の組織
特異的トランスポーター機能阻害剤を有効成分とするこ
とを特徴とする組織機能不全疾患治療薬。 - 【請求項１３】 請求項１〜１１のいずれか記載の組織
特異的トランスポーター機能阻害剤がタンパク質の吸収
抑制剤であって、該抑制剤を有効成分とすることを特徴
とする慢性腎不全進行抑制治療薬。
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