JP2003001097A - ナノサイズ脂質ベシクルの製造方法 - Google Patents
ナノサイズ脂質ベシクルの製造方法Info
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- JP2003001097A JP2003001097A JP2001190518A JP2001190518A JP2003001097A JP 2003001097 A JP2003001097 A JP 2003001097A JP 2001190518 A JP2001190518 A JP 2001190518A JP 2001190518 A JP2001190518 A JP 2001190518A JP 2003001097 A JP2003001097 A JP 2003001097A
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- producing
- emulsifier
- lipid vesicles
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Abstract
(57)【要約】
【課題】ＤＤＳの薬物キャリアーとして有用であり、ベ
シクルの内部に物質を高い包括率で内包させることがで
きる、ナノサイズ脂質ベシクルおよびその製法を提供す
る。 【解決手段】内容器１に入れられたコレステロールとレ
シチンを含む処理液２に、一次乳化剤としてソルビタン
エステルを配合し、水３を加え、超音波照射を行いなが
ら一次乳化を行い、前記処理液２から溶媒を留去し、こ
れに二次乳化剤としてソルビタンエステルのエチレンオ
キシド付加物を配合し二次乳化させて脂質ベシクルを製
造する。
シクルの内部に物質を高い包括率で内包させることがで
きる、ナノサイズ脂質ベシクルおよびその製法を提供す
る。 【解決手段】内容器１に入れられたコレステロールとレ
シチンを含む処理液２に、一次乳化剤としてソルビタン
エステルを配合し、水３を加え、超音波照射を行いなが
ら一次乳化を行い、前記処理液２から溶媒を留去し、こ
れに二次乳化剤としてソルビタンエステルのエチレンオ
キシド付加物を配合し二次乳化させて脂質ベシクルを製
造する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、癌治療や遺伝子治
療のためのＤＤＳ（脂質分子膜からなる閉鎖小胞体）に
おける、薬物キャリアとして有用なナノサイズ脂質ベシ
クルの製法およびナノサイズ脂質ベシクルに関するもの
である。
療のためのＤＤＳ（脂質分子膜からなる閉鎖小胞体）に
おける、薬物キャリアとして有用なナノサイズ脂質ベシ
クルの製法およびナノサイズ脂質ベシクルに関するもの
である。
【０００２】
【従来の技術】ＤＤＳに使用される非ウィルス性キャリ
アとしては、脂質膜成分の５０％以上（現実的にはほぼ
全て）が天然リン脂質よりなるリポソームであり、これ
らは逆相蒸発法あるいは超音波照射法などによって調製
されている。しかしながらこれらのリポソームは、リ
ポソーム内部への物質包括率が小さい、リポソームの
内水相容積が小さいため、遺伝子などのマクロ分子を包
括させ難い、リポソームの安定性が悪い、高価であ
る、などの問題があった。
アとしては、脂質膜成分の５０％以上（現実的にはほぼ
全て）が天然リン脂質よりなるリポソームであり、これ
らは逆相蒸発法あるいは超音波照射法などによって調製
されている。しかしながらこれらのリポソームは、リ
ポソーム内部への物質包括率が小さい、リポソームの
内水相容積が小さいため、遺伝子などのマクロ分子を包
括させ難い、リポソームの安定性が悪い、高価であ
る、などの問題があった。
【０００３】一方、物質包括率の大きいベシクルの製法
も提案されているが、従来の方法によって調製されるベ
シクルの粒径は、最小でもマイクロサイズのものであ
り、この粒径のベシクルではＤＤＳとして使用する場
合、メンブラン濾過による滅菌が出来ない、マクロファ
ージの攻撃を受け易いなどいくつかの問題点があり、満
足しうる状態にあるとは云えない。
も提案されているが、従来の方法によって調製されるベ
シクルの粒径は、最小でもマイクロサイズのものであ
り、この粒径のベシクルではＤＤＳとして使用する場
合、メンブラン濾過による滅菌が出来ない、マクロファ
ージの攻撃を受け易いなどいくつかの問題点があり、満
足しうる状態にあるとは云えない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的とすると
ころは、ベシクル内部に物質を高い包括率で内包させる
ことができる、ナノサイズ脂質ベシクルおよびその製法
を提供することにある。
ころは、ベシクル内部に物質を高い包括率で内包させる
ことができる、ナノサイズ脂質ベシクルおよびその製法
を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明におけるナノサイ
ズ脂質ベシクルの製法は、ベシクルを二段階乳化法に
よって調製する際に、従来ホモミキサーで行っていた一
次乳化の攪拌を超音波照射攪拌によって行う、脂質ベ
シクル成分を予め溶解させたヘキサンに水を加え、冷却
しながら超音波照射攪拌する、ベシクルの主成分とし
て人工脂質のソルビタンエステルを使用するものであ
る。さらにこのナノサイズ脂質ベシクルの製法をより有
効ならしめるため、ソルビタンエステル中にレシチン
やコレステロールなどの膜強化剤を添加してハイブリッ
ト型ベシクルにし、またそれらの膜強化剤の最適濃度を
採用している、ベシクルの内外における水溶液の容
量、二次乳化剤としてのソルビタンエステル・エチレン
オキシド付加物の最適濃度を採用し、従来の不安定であ
ったナノサイズ脂質ベシクルの安定性を飛躍的に向上し
たものである。
ズ脂質ベシクルの製法は、ベシクルを二段階乳化法に
よって調製する際に、従来ホモミキサーで行っていた一
次乳化の攪拌を超音波照射攪拌によって行う、脂質ベ
シクル成分を予め溶解させたヘキサンに水を加え、冷却
しながら超音波照射攪拌する、ベシクルの主成分とし
て人工脂質のソルビタンエステルを使用するものであ
る。さらにこのナノサイズ脂質ベシクルの製法をより有
効ならしめるため、ソルビタンエステル中にレシチン
やコレステロールなどの膜強化剤を添加してハイブリッ
ト型ベシクルにし、またそれらの膜強化剤の最適濃度を
採用している、ベシクルの内外における水溶液の容
量、二次乳化剤としてのソルビタンエステル・エチレン
オキシド付加物の最適濃度を採用し、従来の不安定であ
ったナノサイズ脂質ベシクルの安定性を飛躍的に向上し
たものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明の二段階乳化法によるナノ
サイズ脂質ベシクルの基本的な製法は、以下のとおりで
ある。ベシクルの主成分となるソルビタンオレイン酸モ
ノエステル（商品名「スパン８０」和光純薬製）と、予
めヘキサン中に溶解させたレシチンとコレステロール
を、ホモミキサーによって攪拌しながら少しずつ水を滴
下し、超音波ホモジナイザーを用いて超音波照射を繰り
返し、前記Ｗ／Ｏ型エマルションをフラスコに入れ減圧
下でヘキサンを除去し、このようにして調製されたＷ／
Ｌ型エマルション中に、ソルビタンオレイン酸モノエス
テルのエチレンオキシド付加物（商品名「ツィーン８
０」和光純薬製）の水溶液を攪拌混合したのち、遠心分
離すれば良い。
サイズ脂質ベシクルの基本的な製法は、以下のとおりで
ある。ベシクルの主成分となるソルビタンオレイン酸モ
ノエステル（商品名「スパン８０」和光純薬製）と、予
めヘキサン中に溶解させたレシチンとコレステロール
を、ホモミキサーによって攪拌しながら少しずつ水を滴
下し、超音波ホモジナイザーを用いて超音波照射を繰り
返し、前記Ｗ／Ｏ型エマルションをフラスコに入れ減圧
下でヘキサンを除去し、このようにして調製されたＷ／
Ｌ型エマルション中に、ソルビタンオレイン酸モノエス
テルのエチレンオキシド付加物（商品名「ツィーン８
０」和光純薬製）の水溶液を攪拌混合したのち、遠心分
離すれば良い。
【０００７】
【実施例１】図１は本実施例の一次乳化の工程を示す断
面図である。試験管、ビーカ等の内容器１にベシクルの
主成分となるソルビタンオレイン酸モノエステル（商品
名「スパン８０」和光純薬製）６６ｍｇと、予めｎ−ヘ
キサン１ｍｌ中に５ｍｇとなるように溶解させておいた
レシチン、コレステロールを必要な量（６ｍｇ，３ｍ
ｇ）とり、全量が３ｍｌとなるようにｎ−ヘキサンを加
えた処理液２を入れ、ホモミキサー（１５，０００ｒｐ
ｍ）で３０秒間攪拌する。その溶液をホモミキサーによ
って攪拌しながら、包括物質について所定の濃度に調製
した内水相となる水溶液３（０．１５ｍｌ）を少しずつ
滴下し（１分間）、その後、超音波ホモジナイザー４を
用いて超音波照射を行う。この超音波照射は、１５秒行
って１５秒休むというサイクルを３回繰り返した。内容
器１の外側に外容器５を設け、内容器１と外容器５の間
に氷水６を入れて処理液２を冷却することにより、超音
波照射による処理液２の温度上昇を抑え、処理液２中の
ｎ−ヘキサンが発火することを防止している。超音波ホ
モジナイザー４の出力は、内容器１に入れる処理液２の
量や目標とするベシクルの粒径によって適宜選択する
が、試験管程度の小規模な容器で２００ｎｍ以下のナノ
サイズを得るには、５０〜１４０Ｗ程度のものが適して
おり、特に１００ｎｍ以下の粒径を得るには８０〜１４
０Ｗ程度のものが適している。このようにして得られた
Ｗ／Ｏ型エマルションをナスフラスコに入れ、ロータリ
ーエバポレーターで減圧させてｎ−ヘキサンを除去し、
このようにして得たＷ／Ｌ型エマルション中に、ソルビ
タンオレイン酸モノエステルのエチレンオキシド付加物
水溶液［商品名「ツィーン８０」（１２ｍｇ／ｍｌ）和
光純薬製］３ｍｌを入れ、ホモミキサー（３０００ｒｐ
ｍ）を用いて攪拌したのち、遠心分離をして行ってナノ
サイズ脂質ベシクルを調製した。前記ナノベシクルの大
きさは、透過型電子顕微鏡によって観察を行い、その結
果前記ベシクルの平均粒径は４０〜１００ｎｍであるこ
とが確認された。
面図である。試験管、ビーカ等の内容器１にベシクルの
主成分となるソルビタンオレイン酸モノエステル（商品
名「スパン８０」和光純薬製）６６ｍｇと、予めｎ−ヘ
キサン１ｍｌ中に５ｍｇとなるように溶解させておいた
レシチン、コレステロールを必要な量（６ｍｇ，３ｍ
ｇ）とり、全量が３ｍｌとなるようにｎ−ヘキサンを加
えた処理液２を入れ、ホモミキサー（１５，０００ｒｐ
ｍ）で３０秒間攪拌する。その溶液をホモミキサーによ
って攪拌しながら、包括物質について所定の濃度に調製
した内水相となる水溶液３（０．１５ｍｌ）を少しずつ
滴下し（１分間）、その後、超音波ホモジナイザー４を
用いて超音波照射を行う。この超音波照射は、１５秒行
って１５秒休むというサイクルを３回繰り返した。内容
器１の外側に外容器５を設け、内容器１と外容器５の間
に氷水６を入れて処理液２を冷却することにより、超音
波照射による処理液２の温度上昇を抑え、処理液２中の
ｎ−ヘキサンが発火することを防止している。超音波ホ
モジナイザー４の出力は、内容器１に入れる処理液２の
量や目標とするベシクルの粒径によって適宜選択する
が、試験管程度の小規模な容器で２００ｎｍ以下のナノ
サイズを得るには、５０〜１４０Ｗ程度のものが適して
おり、特に１００ｎｍ以下の粒径を得るには８０〜１４
０Ｗ程度のものが適している。このようにして得られた
Ｗ／Ｏ型エマルションをナスフラスコに入れ、ロータリ
ーエバポレーターで減圧させてｎ−ヘキサンを除去し、
このようにして得たＷ／Ｌ型エマルション中に、ソルビ
タンオレイン酸モノエステルのエチレンオキシド付加物
水溶液［商品名「ツィーン８０」（１２ｍｇ／ｍｌ）和
光純薬製］３ｍｌを入れ、ホモミキサー（３０００ｒｐ
ｍ）を用いて攪拌したのち、遠心分離をして行ってナノ
サイズ脂質ベシクルを調製した。前記ナノベシクルの大
きさは、透過型電子顕微鏡によって観察を行い、その結
果前記ベシクルの平均粒径は４０〜１００ｎｍであるこ
とが確認された。
【０００８】このようにして得られた脂質ベシクルはそ
れ自体が新規なものである。すなわち、従来のリポソー
ムやマイクロサイズの脂質ベシクルと異なり、サイズは
１００ｎｍ程度又はそれ以下と小さく、さらにその内部
に物質を高い包括率で内包させることができる構造とな
っている。サイズは比較的均一であり、超音波照射の周
波数、強度、時間を変えることによってある程度調整で
きる。さらにメンブランろ過を行うことにより、滅菌処
理とともにそのサイズを２００ｎｍ以下のいわゆるナノ
サイズに（特に、超音波を十分に照射した場合は１００
ｎｍ以下に）そろえることができる。生理食塩水中での
安定性は良好であり、血清中においても投入時に３０％
程度の損傷がある他は安定に存在し続けている。さら
に、リンパ球にも良好に接触し、内包物質を機能させる
ことができた。
れ自体が新規なものである。すなわち、従来のリポソー
ムやマイクロサイズの脂質ベシクルと異なり、サイズは
１００ｎｍ程度又はそれ以下と小さく、さらにその内部
に物質を高い包括率で内包させることができる構造とな
っている。サイズは比較的均一であり、超音波照射の周
波数、強度、時間を変えることによってある程度調整で
きる。さらにメンブランろ過を行うことにより、滅菌処
理とともにそのサイズを２００ｎｍ以下のいわゆるナノ
サイズに（特に、超音波を十分に照射した場合は１００
ｎｍ以下に）そろえることができる。生理食塩水中での
安定性は良好であり、血清中においても投入時に３０％
程度の損傷がある他は安定に存在し続けている。さら
に、リンパ球にも良好に接触し、内包物質を機能させる
ことができた。
【０００９】
【実施例２】前記実施例において、ハイブリッド型ナノ
ベシクルの生成率を調べるため、ソルビタンオレイン酸
モノエステル、レシチン及びコレステロールの比率を変
化させて、その最適条件を調べた。トレーサーとして、
０．１％インジゴカルミン０．１５ｍｌを用いて、前記
と同様の二段階乳化法によって調製し、遠心分離、ゲル
フィルトレーションを行ったのち、分光光度計を用いて
６２０ｎｍでベシクル溶液０．５ｍｌに１０％ＳＤＳ
（物質名ドデシル硫酸ナトリウム）０．５ｍｌを加え良
く攪拌して吸光度を測定した。
ベシクルの生成率を調べるため、ソルビタンオレイン酸
モノエステル、レシチン及びコレステロールの比率を変
化させて、その最適条件を調べた。トレーサーとして、
０．１％インジゴカルミン０．１５ｍｌを用いて、前記
と同様の二段階乳化法によって調製し、遠心分離、ゲル
フィルトレーションを行ったのち、分光光度計を用いて
６２０ｎｍでベシクル溶液０．５ｍｌに１０％ＳＤＳ
（物質名ドデシル硫酸ナトリウム）０．５ｍｌを加え良
く攪拌して吸光度を測定した。
【００１０】これらの試験結果は図２に示したとおりで
あり、膜強化剤であるレシチンとコレステロールが含ま
れていない場合の生成率は約４０％となっており、レシ
チンとコレステロールの両者を併用することによって、
生成率の最大値は約７０％となっており、その配合比は
ソルビタンオレイン酸モノエステル１３２ｍｇ、レシチ
ン１２ｍｇ、コレステロール６ｍｇであった。レシチン
とコレステロールを全脂質に対して３〜１３％に調整す
ることにより、生成率を６０％以上に保つことができ
る。
あり、膜強化剤であるレシチンとコレステロールが含ま
れていない場合の生成率は約４０％となっており、レシ
チンとコレステロールの両者を併用することによって、
生成率の最大値は約７０％となっており、その配合比は
ソルビタンオレイン酸モノエステル１３２ｍｇ、レシチ
ン１２ｍｇ、コレステロール６ｍｇであった。レシチン
とコレステロールを全脂質に対して３〜１３％に調整す
ることにより、生成率を６０％以上に保つことができ
る。
【００１１】前記ナノベシクルの大きさは、透過型電子
顕微鏡によって観察を行い、その結果前記ベシクルの平
均粒径は４０〜１００ｎｍであることが確認された。
顕微鏡によって観察を行い、その結果前記ベシクルの平
均粒径は４０〜１００ｎｍであることが確認された。
【００１２】
【実施例３】ソルビタンオレイン酸モノエステル（商品
名「スパン８０」）１３２ｍｇにレシチン６．００ｍｇ
とコレステロール１２．０ｍｇを添加し、ｎ−ヘキサン
４．００ｍｌに溶解させて、マイクロホモジナイザーで
３０秒間攪拌した。次いで内水相となる包括物質の水溶
液を０．３０ｍｌ滴下しながら１分間攪拌したのち、超
音波ホモジナイザーによる超音波照射を行い、一次乳化
を行った。前記処理液をナスフラスコに入れ、ロータリ
ーエバポレーターで減圧してｎ−ヘキサンを除去した。
ここでソルビタンオレイン酸モノエステルのエチレンオ
キシド付加物水溶液（商品名「ツィーン８０」）４２．
０ｍｌを生理食塩水４．００ｍｌに溶解させた水溶液
（ＰＥＧ脂質ベシクルの調製の場合は、ここにＰＥＧ脂
質を必要量添加しておく）をナスフラスコに混ぜ、大き
なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの脂質の塊がなくなるくら
いまで、マイクロホモジナイザーで攪拌し二次乳化を行
った。その溶液をビーカに入れ、ホモミキサー（３００
０ｒｐｍ）を用いて攪拌したのち、遠心分離をして行っ
てナノサイズ脂質ベシクルを調製した。本発明に係る脂
質ベシクルの製造方法は、大小さまざまな規模で適用で
きるが、特に比較的小規模で簡易に実施するためには、
ソルビタンエステル１０〜１０００ｍｇ、ソルビタンエ
ステルのエチレンオキシド付加物１０〜５０ｍｇ、ベシ
クルの内水容量０．１〜１ｍｌ、外水容量１〜１０ｍｌ
の範囲に調整するのがよい。前記ナノベシクルの大きさ
は、透過型電子顕微鏡によって観察を行い、その結果前
記ベシクルの平均粒径は４０〜１００ｎｍであることを
確認した。
名「スパン８０」）１３２ｍｇにレシチン６．００ｍｇ
とコレステロール１２．０ｍｇを添加し、ｎ−ヘキサン
４．００ｍｌに溶解させて、マイクロホモジナイザーで
３０秒間攪拌した。次いで内水相となる包括物質の水溶
液を０．３０ｍｌ滴下しながら１分間攪拌したのち、超
音波ホモジナイザーによる超音波照射を行い、一次乳化
を行った。前記処理液をナスフラスコに入れ、ロータリ
ーエバポレーターで減圧してｎ−ヘキサンを除去した。
ここでソルビタンオレイン酸モノエステルのエチレンオ
キシド付加物水溶液（商品名「ツィーン８０」）４２．
０ｍｌを生理食塩水４．００ｍｌに溶解させた水溶液
（ＰＥＧ脂質ベシクルの調製の場合は、ここにＰＥＧ脂
質を必要量添加しておく）をナスフラスコに混ぜ、大き
なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの脂質の塊がなくなるくら
いまで、マイクロホモジナイザーで攪拌し二次乳化を行
った。その溶液をビーカに入れ、ホモミキサー（３００
０ｒｐｍ）を用いて攪拌したのち、遠心分離をして行っ
てナノサイズ脂質ベシクルを調製した。本発明に係る脂
質ベシクルの製造方法は、大小さまざまな規模で適用で
きるが、特に比較的小規模で簡易に実施するためには、
ソルビタンエステル１０〜１０００ｍｇ、ソルビタンエ
ステルのエチレンオキシド付加物１０〜５０ｍｇ、ベシ
クルの内水容量０．１〜１ｍｌ、外水容量１〜１０ｍｌ
の範囲に調整するのがよい。前記ナノベシクルの大きさ
は、透過型電子顕微鏡によって観察を行い、その結果前
記ベシクルの平均粒径は４０〜１００ｎｍであることを
確認した。
【００１３】
【発明の効果】これまでＤＤＳの研究に使用されている
脂質ベシクルは、ベシクルの脂質膜成分が天然リン脂質
よりなるリポソームであって、リポソーム内部への物質
包括率が小さいこと、リポソームの内水相容積が小さい
ため、遺伝子などのマクロ分子を包括しにくいこと、リ
ポソームの安定性が悪いなどの難点があり、また物質包
括率の大きいベシクル調製法も提案されているが、それ
らは最小でもマイクロサイズのものであり、この粒径の
ベシクルではＤＤＳに使用する場合、メンブラン濾過に
よる滅菌が出来ない、マクロファージの攻撃を受け易い
などの難点があった。本発明の製法によれば、ベシクル
の内部に物質を高い包括率で内包しうるナノサイズ脂質
ベシクルを調製することができ、このような小粒径のベ
シクルはメンブラン濾過によって簡単に滅菌することが
でき、また細胞と接触させる際に粒径が小さいため細胞
へのショックを柔らげることが可能となり、さらにはマ
クロファージの攻撃を回避し易いなどの特性を有してい
る。
脂質ベシクルは、ベシクルの脂質膜成分が天然リン脂質
よりなるリポソームであって、リポソーム内部への物質
包括率が小さいこと、リポソームの内水相容積が小さい
ため、遺伝子などのマクロ分子を包括しにくいこと、リ
ポソームの安定性が悪いなどの難点があり、また物質包
括率の大きいベシクル調製法も提案されているが、それ
らは最小でもマイクロサイズのものであり、この粒径の
ベシクルではＤＤＳに使用する場合、メンブラン濾過に
よる滅菌が出来ない、マクロファージの攻撃を受け易い
などの難点があった。本発明の製法によれば、ベシクル
の内部に物質を高い包括率で内包しうるナノサイズ脂質
ベシクルを調製することができ、このような小粒径のベ
シクルはメンブラン濾過によって簡単に滅菌することが
でき、また細胞と接触させる際に粒径が小さいため細胞
へのショックを柔らげることが可能となり、さらにはマ
クロファージの攻撃を回避し易いなどの特性を有してい
る。
【図１】本発明の第一の実施例における一次乳化を示す
断面図である。
断面図である。
【図２】全脂質に占めるレシチンとコレステロール割合
とベシクルの生成率の関係を示すグラフである。
とベシクルの生成率の関係を示すグラフである。
１．内容器
２．処理液
３．水（又は水溶液）
４．超音波ホモジナイザー
５．外容器
６．氷水
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 47/44 Ｂ０１Ｊ 19/10
Ｂ０１Ｊ 19/10 13/02 Ａ
// Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA20 GA11 HA17
4C076 AA18 AA66 AA67 AA95 DD46F
DD63 DD70 EE51 FF31 FF43
GG50
4G005 AA06 AB01 BB06 BB08 BB20
DB22X DC32W DE02X EA03
4G075 AA13 AA27 AA33 BB08 BD15
CA23
Claims (8)
- 【請求項１】一次乳化剤としてソルビタンエステルと溶
媒を含む処理液に水を加えて、超音波照射を行って乳化
させる工程と、前記処理が行われた処理液から溶媒を留
去し、これに二次乳化剤としてソルビタンエステルのエ
チレンオキシド付加物を配合し、乳化させる工程を含む
ことを特徴とする脂質ベシクルの製造方法。 - 【請求項２】コレステロールとレシチンを含む処理液の
溶剤にヘキサンを用い、これに一次乳化剤としてソルビ
タンエステルを配合し、水を加えて、超音波照射を行っ
て乳化させる工程と、前記処理が行われた処理液から溶
媒を留去し、その残液に二次乳化剤としてソルビタンエ
ステルのエチレンオキシド付加物を配合し、攪拌させて
乳化させる工程を含むことを特徴とする脂質ベシクルの
製造方法。 - 【請求項３】コレステロールとレシチンを含む処理液
に、一次乳化剤としてソルビタンエステルを配合し、水
を加えて、超音波照射を行って乳化させる工程と、前記
処理が行われた処理液から溶媒を留去し、二次乳化剤と
してソルビタンエステルのエチレンオキシド付加物を配
合して乳化させる工程を含み、ソルビタンエステル１０
〜１０００ｍｇ、ソルビタンエステルのエチレンオキシ
ド付加物１０〜５０ｍｇ、ベシクルの内水容量０．１〜
１ｍｌ、外水容量１〜１０ｍｌの範囲に調整したことを
特徴とする脂質ベシクルの製造方法。 - 【請求項４】一次乳化剤として、ソルビタンオレイン酸
モノエステルを用いることを特徴とする請求項１乃至請
求項３に記載の脂質ベシクルの製造方法。 - 【請求項５】二次乳化剤として、ソルビタンオレイン酸
モノエステルのエチレンオキシド付加物を用いる請求項
１乃至請求４に記載の脂質ベシクルの製造方法。 - 【請求項６】処理液を冷却しながら超音波照射を行って
一次乳化させる請求項１乃至請求項５に記載の脂質ベシ
クルの製造方法。 - 【請求項７】メンブランろ過を行い、粒径が２００ｎｍ
以下のナノサイズ脂質ベシクルを通過させる請求項１乃
至請求項６に記載の脂質ベシクルの製造方法。 - 【請求項８】請求項１乃至請求項７に記載の脂質ベシク
ルの製造方法により製造される脂質ベシクル。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001190518A JP2003001097A (ja) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | ナノサイズ脂質ベシクルの製造方法 |
| PCT/JP2002/006312 WO2003000291A1 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-24 | Lipid vesicles, process for producing lipid vesicles and method of immobilizing gene on lipid vesicles |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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