JP2002543382A

JP2002543382A - 分析過程においてサンプルの光学特性の変化を検出する方法及びデバイス

Info

Publication number: JP2002543382A
Application number: JP2000614021A
Authority: JP
Inventors: カレアブー−サレ; パトリックフェレ; アランルソー
Original assignee: スタゴーアンテルナショナール
Priority date: 1999-04-23
Filing date: 2000-04-21
Publication date: 2002-12-17
Also published as: EP1173748B1; DE60005813T2; ATE251746T1; ES2208312T3; DK1173748T3; EP1173748A1; FR2792725A1; PT1173748E; US6665061B1; FR2792725B1; DE60005813D1; WO2000065332A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、第１周波数範囲で放射する第１の光源（ＳＬ₁）から生じる第１光パルスを使用する第１の濁度測定と、第２周波数範囲で放射する第２の光源（ＳＬ₂）から生ずる第２光パルスに応じて送信される強度の第２の測定と、オプションとしてサンプルの蛍光を決定することと、を１ｍｓ〜１０ｍｓの間の範囲に亘る時間内に実行する方法に関する。本発明は止血分析だけではなく生物学的な分析過程にも応用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、化学的及び／若しくは生物学的分析過程の間に得られる比色変化の
ようなサンプルの光学特性を検出する方法とデバイスに関する。

【０００２】

【従来の技術】

本発明は特に、バクテリア若しくはイースト菌が生物学的物質内に存在するか
否かの検出に利用される。本発明は、国際公開番号第ＷＯ９６／２９４２７号に記載の如き生物学的分析
プロセスにおけるこの種の検出に、唯一ではないが、特に適しており、該プロセ
スは以下の工程からなる“ゲル上の”分離フェーズを含む。

【０００３】 −遠心分離管内の、事前に遠心分離管内に入れられたゲル化システムの上にサ
ンプルを入れる過程。該システムはサンプル内に存在する微生物をサイズにより
分離するべく設計されており、微生物の育成に好都合である培養媒体および検出
可能な光測定変化を生じ得る反応試薬を含む。 −ゲル化システムのサンプル内に存在する微生物の移動を誘発し、その育成を
促進するべく管の中身を水抽出する過程。

【０００４】 −前記光計測変化の検出を経て、該システム内に微生物が存在するか否かを示
す過程。現在まで、この検出は視覚的に実施されてきており、従ってこの種の検出に固
有の全ての欠点が含まれる。本発明は他の分野、特に止血においても適用され得る。すなわち、本発明は、
セルビオ（Ｓｅｒｂｉｏ）社の名義で出願されている米国特許第４，９１８，９
８４号に記載されている血液凝固時間を測定する方法で使われ得て、血漿サンプ
ルの凝固時間の決定に関する濃度的な測定を含む。この実施例において、これら
２つの測定は、サンプルを入れた透明な容器の両側面の片方に発光デバイス、他
方に光学的帯域通過フィルタを正面に配置した光検出器、を含むデバイスの提供
で達成される。ここで、光検出器は電子処理回路に結合される。

【０００５】続いて、このデバイスを改良するために、さらに以下が与えられる。 −第１に、白熱ランプ（発光デバイス）によって放射される光ビームの経路へ
連続的に与えられ得る所定数の可動式光フィルタを含むフィルタリングデバイス
。 −第２に、フィルタの移動と同時に光検出器によって与えられる測定信号のサ
ンプルを取ることができて、且つ、サンプリングの間に使用されるフィルタに対
応する識別子に各サンプルを関連せしめるサンプリング回路。

【０００６】理論的には、この解決案は、フィルタの各波長範囲に対して検出されるビーム
の変化をリアルタイムで追従することが可能である。実際は、主にフィルタのランオフ周期があるために満足な結果を得ることがで
きない。該周期は比較的長く維持され（減じられ得ることはない）、周期的な１
回のサンプリングにおよそ２秒を要する結果となる。この周期性及び検出された
信号の時間シフトに注目すれば、これらの信号の間でなされる比較はあいまいに
なり、いずれにしても、屈曲位置に関する誤差は比較的重要なままである。更に
、電気機械的部材により導かれるために、この解決方法は、比較的高価であり、
メンテナンスにも比較的費用がかかる。

【０００７】従って、本発明の目的は、遅鈍および費用のかかる機械的部品およびメンテナ
ンスの課題を解決することである。

【０００８】

【発明の概要】

従って、本発明は、メンテナンスの不要な静的なタイプの方法に関し、およそ
１ミリ秒からおよそ１０ミリ秒のタイマーの比較的短い時間に以下の過程を含む
一連の動作を実行することからなる。すなわち、 −光波が第１周波数範囲に含まれ、第１の光電子光源によって放射される第１
入射光パルスにサンプルを露出する第１露出過程と、 −該入射パルスの軸に略位置している第１の光電子光学的な検出器によって前
記サンプルを通過した後の該パルスから送信される光強度の濁度測定を行う第１
測定過程と、 −メモリ内にこの第１の測定の結果を保存する過程と、 −第１と実質的に同じ入射を有し、第２の光電子光源によって放射され、光波
長が第２周波数範囲に含まれている第２入射光パルスへサンプルを露出する過程
と、 −該サンプル通過後の該第２パルスの光強度の該第１検出器によって濁度測定
を行う第２測定過程と、 −この第２測定の結果を該メモリに保存する過程と、を実行することから成る。

【０００９】利点として、該光パルスの持続時間は、ミリ秒の１０分の１から数ミリ秒であ
り得る。加えて、この方法は、該過程の間若しくはその後において該メモリに保存され
た結果の分析を含む。利点として該検出器は、サンプルの蛍光が測定できるスペ
クトログラフィック（spectrophotographic）のタイプであり得る。

【００１０】この蛍光測定は加えて、サンプルの光学拡散特性を考慮に入れた比濁分析に活
用され得る。従って、バクテリアの存在が確認された場合には、検出器によって測定される
サンプルの光学特性変化を利用する真理値表を生成できるようになる。ここから
バクテリア個体群のサイズの情報を導き出し、 −わずかにより高い量のバクテリアが蛍光によって表わされ、 −バクテリアの増加が蛍光の減少を生じ、該サンプルは透明になり、 −大量のバクテリアは、比濁測定によって検出される得る不透明で且つ非蛍
光性の状態を生成する、ことが理解される。

【００１１】これらの手順によって、実質的に同時（極めて短い測定時間）に様々な測定が
同じ条件下で実行され、非常に信頼できるものである。加えて、測定結果の解釈
は、非常にランダムで誤りであるネガティブな結果にはもはやなり得ない。本発明の方法を実行するデバイスの一実施例は、後述され、添付の図面に関し
て非限定的な実施例として与えられる。

【００１２】

【発明の実施の形態】

図１乃至４に示される例において、分析されるサンプル１は透明な容器２、例
えば試験管に入れられ、該試験管は入射光線を放射するシステムを含む光学的据
え付けの軸に対して垂直に、中心に置かれる。該入射光線は、第１に、光ファイ
バによって構成された光ガイド４及び５の２つのそれぞれによって管２の近くに
位置している伝送ヘッド３に結合された２つの光源ＳＬ₁、ＳＬ₂を少なくとも含
み、第２に、ヘッド３の軸に対して垂直に、中心におかれた伝送ヘッド７に、光
ガイド６によって結合された第３光源ＳＬ₃を含む。破線によって表わされる少
なくとも１つの追加の光源ＳＬ₄は、対応する導波路を用いて伝送ヘッド３に結
合され得る。

【００１３】光源ＳＬ₁、ＳＬ₂、及び、ＳＬ₄は、光放射がそれぞれフィルタＦ₁、Ｆ₂、Ｆ₄ 、によってフィルタリングされる発光ダイオードによって構成され、Ｆ₁、Ｆ₂、
Ｆ₄はそれぞれ光源ＳＬ₁のための赤（６００ｎｍと７００ｎｍの間）のフィルタ
、光源ＳＬ₂のための緑（５５０ｎｍと６５０ｎｍの間）のフィルタである。同
様に光源ＳＬ₃は、ダイオードＤ₃及び赤のフィルタＦ₃を含む。

【００１４】ダイオードＤ₁乃至Ｄ₄は、マイクロプロセッサＭＰによって制御され、例えば
１０ｍｓの測定時間の間の２ｍｓの連続的な光パルスを伝送する。該デバイスは、さらに、少なくとも１つの検出回路ＤＯを含み、この例では、
ヘッド３の反対側に位置する管２の側面にある伝送ヘッド３の軸に置かれている
２つのファイバそれぞれによって受信ヘッド３’に結合された２つの回路ＤＯ₁
とＤＯ₂とを含む。

【００１５】ダイオードＤ₁乃至Ｄ₄の放射時間中に測定サンプルを取り、それらに識別子を
割り当てるために、フィルタに関連するフォトダイオードをそれぞれ含む検出器
ＤＯ₁とＤＯ₂とがマイクロプロセッサによって制御される。検出器ＤＯ₁とＤＯ₂とによって生成される該測定信号は、マイクロプロセッサ
ＭＰに適用される前に、アナログ／デジタル変換機Ａ／Ｎによってデジタル化さ
れる。

【００１６】もちろん、マイクロプロセッサＭＰは、キーボード／スクリーンコンソールＣ
Ｅ、例えばＲＳ２３２タイプのターミナルである入出力ターミナルＴＥＳ、及び
メモリ装置ＭＥＭのような周辺装置に結合する。図２に示される実施例において、検出器ＤＯは分光測光法の検出器のタイプで
ある検出器ＤＯ₁とＤＯ₂とに置き代わり得る。ＤＯは、無限に光ビームを投影す
るレンズＯＦを含み、該光ビームはヘッド３によって生成されるか、又は、フィ
ルタＦ₄によるプリズム若しくは格子のような拡散素子ＥＤ上に、ヘッド７によ
って生成される光の拡散を経て得られる。

【００１７】従って、素子ＥＤによって拡散された光は、マイクロプロセッサＭＰによって
制御されるＣＣＤタイプのバーのような感光性素子ＥＰのバーによって検出され
る。この装置によって、サンプルを通過する若しくは後者の拡散による光のスペク
トルを得られるようになり、さらに（入射光の波長に対してシフトされる波長の
ピークを示す）サンプルの蛍光を決定する。

【００１８】図２は、ヘッド３から得られ、サンプルを通過する入射光線（ピークＰ₁）と
、蛍光を経て放射される光（ピークＰ₂）と、の間の約５０ｎｍのシフトを示す
波長による光強度の図表である。本発明は、蛍光を測定する分光測光法の検出器のようなものの製造方法に全く
制限されるものではない。

【００１９】実際、光源ＳＬ₁乃至ＳＬ₄、及び検出器ＤＯ₁、ＤＯ₂に関連するフィルタの適
切な組み合わせを使用することで、多数回の測定を行うことが可能である。従って、蛍光を測定するために、光源ＳＬ₁、ＳＬ₂、ＳＬ₄のうちの１つに結
合することが可能であり、例えば、光源ＳＬ₄、ローパスフィルタＦ₄は、緑の光
を強調するが、青い光を通過させず、例えば蛍光により生成された青い光を通過
させるハイパスフィルタを装備している検出器ＤＯ₂のような検出器を提供する
。

【００２０】図３に示された図（波長ｎｍの関数としての光強度Ｉ）は、 −光源ＳＬ₄の発光ダイオードの電気パルスへの応答Ｒ₁と、 −発光ダイオードに関するローパスフィルタＰＢの曲線と、 −サンプル通過後に検出器ＤＯ₂へ伝送され、周波数が蛍光による青を相殺
する光（曲線Ｒ₂）と、 −蛍光によって生成される青い光を通過させる検出器ＤＯ₂に関連するハイ
パスフィルタＰＨの曲線と、を示している。

【００２１】従って、検出器ＤＯ₁は、濁度測定及び比濁測定を実行する単一のフォトダイ
オードから成りうる。前述の如く、マイクロプロセッサＭＰは、例えば約１０ｍｓの非常に短い測定
時間Ｔの間に約２ｍｓの短い継続時間の３つの光パルスｄをそれぞれが含む測定
シーケンスの連続を制御する。該３つのパルスは、第１パルスＩＬ₁が光源ＳＬ₁ によって生成され、第２パルスＩＬ₂が光源ＳＬ₂によって生成され、第３パルス
ＩＬ₃は光源ＳＬ₃によって生成される（図４）。

【００２２】これらの３つの光パルスがマイクロプロセッサＭＰに制御される間、検出器Ｄ
Ｏは３つのそれぞれの測定サンプル、すなわち、 −光源ＳＬ₁（波長５９０ｎｍ）から生じて伝送される赤い光の強度ＩＴ₁、
及び −蛍光により伝送され、波長が入射光に関して例えば５０ｎｍシフトされる
光の強度ＩＦ₁、を決定する第１サンプルＥ₁と、 −できる限り５４０ｎｍである波長の光源ＳＬ₂から得られて伝送される光
強度ＩＴ、及び −蛍光によって伝送される光強度、を決定する第２サンプルＥ₂と、光源ＳＬ₃による蛍光に続く拡散された光強度を決定（比濁測定）可能にする
第３のサンプルＥ₃と、を取る。これらの様々な測定は、例えば色原体基質上のバクテリアの酵素分泌物の効果の
下で、光学特性の多様性及び特にサンプルの色の変化を、誤った負値を得るリス
クなく比較的正確に決定することを可能にし、 −バクテリアの量が少ない時、重要な蛍光信号が得られ、 −バクテリアの量が多い時、蛍光の減少に対してサンプルは透明のままであ
り、 −大量のバクテリアが存在する時は、サンプルは不透明になって入射光放射
を拡散し、この比濁分析的信号が優勢になり、 −２つの光源ＳＬ₁とＳＬ₂とによって検出される光強度は両方ともサンプル
の色、従ってバクテリア数のサイズとは反対に変化することが理解される。

【００２３】図５は、３つの測定される値の論理状態を考慮に入れた真理値表の簡略化され
た実施例を示す。すなわち、下の閾値Ｓ_-よりも小さい測定値に対応する状態−
１、下の閾値Ｓ_-と上の閾値Ｓ₊との間の測定値に対応する状態０と、上の閾値Ｓ ₊ よりも大きい測定値に対応する状態＋１とである。閾値Ｓ₊とＳ_-とを適切に選択するとすぐに、パラメータＬＢ、ＬＶ、Ｎ及びＦ
の値が０になることを同時に検出することによって、サンプルの色の変化の検出
が得られることは明らかである。

【００２４】好都合にも、前述のものと同様のデバイスは、本発明の出願人の名義で１９９
８年６月１０日に出願されたフランス国特許出願第９８０７４８４号に記載され
て、図６に図示されているタイプの自動止血分析デバイスを装備できるであろう
。このデバイスは、それぞれが分析される液体サンプルを含むことを目的とする
複数の透明なくぼみＣをもたらす。これらのくぼみＣは支持板Ｂへ固定されて、
板Ｂの切り込みステーション23、ピペット・ステーション24、図１に示されるタ
イプのデバイスと共に装備される検出ステーション25、及び、使用されたくぼみ
Ｃに合わせられた板Ｂの回復ステーション26へ連続的に働く。

【００２５】ピペット・ステーション24は、上方に移動することが可能な垂直ピペット30に
よって供給される。このピペット30は、垂直スピンドル32の周りを回転して、取
りつけられるアーム31の一端に固定されて、回転によってピペット24、洗浄領域
33、及び２つのサンプリング領域34、35、へと連続的にもたらされることを可能
にする。

【００２６】サンプリング領域34、35は、２つのサーボモータによって制御される２つの垂
直スピンドル37、38の周りを回転できる２つの円形コンベアＣＲ₁、ＣＲ₂それぞ
れによって運ばれる容器Ｒ₁、Ｒ₂の経路に配置される。回転コンベアの１つＣＲ ₁ は、サンプルの入った容器Ｒ₁を含み、もう一方のＣＲ₂は実行される分析で使
用され得る反応性試薬に割り当てられる容器Ｒ₂を含むことを目的とする。

【００２７】プロセッサＰは、連続した以下の工程を含むピペット・シーケンスを制御する
。 −ピペット30をあらかじめ洗浄し、 −円形コンベアＣＲ₁の容器Ｒ₁の１つに含まれるサンプルを取り出し、 −これをピペット・ステーション24に位置するくぼみＣへ注入し、 −ピペット30を洗浄し、 −円形コンベアＣＲ₂の容器Ｒ₂の１つに含まれる反応性試薬をサンプリング
し、 −この反応性試薬をくぼみＣへ注入し、既に記載したような測定シーケンスの少なくとも１つのシーケンスを始動さ
せ、色の変化、または、サンプルの１つ若しくはいくつかの成分の量的な評価を
検出する。

【００２８】事前の実行可能性の研究は、本発明のデバイスが尿の伝染病および生物学的サ
ンプリングにおけるマイコバクテリウムの検出を除去するための尿のバクテリア
の急速な局地化の優れた結果を得たことを示した。この研究の間に実施される試験は、与えられた基質を含み、且つ、キャピラリ
管によって構成された寸法を減じられた露出ゾーンにおいて試験されるサンプル
の微生物の濃度を提供するように考案された２種類の異なる管、すなわち −マイコバクテリウムがゲルの沈殿を経た攪拌の後に濃縮されたキャピラリ
管を含む登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」マイコバクト（ｍｙｃｏｂａｃｔ）
管と、 −水分抽出を経て微生物が浸透するゲル状フェーズを含むキャピラリ管を含
む登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」ウリ（Ｕｒｉ）タイプと、に含まれるサンプルに関する。Ａ）原理１）登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」マイコバクト管で、本発明のデバイス
によって作られる記録上のゲルの効果は、ゲル状の０．５ｍｌの栄養分を含む媒
体を入れた管を使用する精製システムにおける一連の試験によって研究されてき
た。

【００２９】蛍光は、本発明に適合するパイロット生産デバイスで読み込まれ、参照デバイ
スとして使われて、スクリーン上に結果の曲線を表示することができるようにプ
ログラムされたマイクロプロセッサに連結されている。これらの試験は、ゲルがある場合には色の変化の読み取りは非常により容易で
あり、より高度であることを示した。

【００３０】蛍光Ｆは、色の変化に平行して読み取られ、スタート時の蛍光に対する色の変
化時に読み取られる蛍光の割合（Ｒ＝Ｆｔｘ／Ｆｔ０）によって算出される蛍光
の増加（ΔＦ）は、ゲルの存在下（ｍΔＦ＞３．８）ではより高く且つより高度
であり、ゲルの不在下（ｍΔＦ＞２．９）では接種原（１０⁶及び１０⁴ＵＦＣ／
ｍｌ）に関わりない。

【００３１】２）登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」ウリで、バクテリアの濃縮は、ゲルフ
ェーズを入れた管のキャピラリ部上での水分抽出によって確実化される。Ｂ）読み出しウィンドウ２つのタイプの管の読み出しウィンドウの決定は、管の底から始めてキャピラ
リ管の頂部まで実行される約１００の蛍光測定、比濁測定、及び濁度測定に起因
する。

【００３２】登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」ウリ管で、読み出しウィンドウは比濁分析
によって境界を決定される。図７に示される如く、管の底は第１の比濁ピークに
よって表わされ、キャピラリ管の先端は、廃棄物質がある場合の比濁分析の減少
、若しくは、廃棄物質がない場合のサンプル／ゲルのインタフェースに対する蛍
光の減少によって表わされる。

【００３３】登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」マイコバクト管（図８）で、ゲル／サンプ
ルの界面がないとき読み出しウィンドウの端部がない。従って、読み出される蛍
光および比濁分析値は、それらの位置にかかわりなく最大である。図７及び図８において、ＶＢは総体評価を示し、Ｔは比濁分析値を表わし、ＶＢＴは読み出しウィンドウ内の総体比濁分析値の読み出しを示し、Ｆ１は読み出しウィンドウの開始を表わし、Ｆ２は読み出しウィンドウの終わりを表わす。Ｃ）精製化システムの研究精製化システムの研究は、マイコバクテリウム存在下で読み取りデバイスのパ
ラメータの漸進的変化に関する。

【００３４】１）接種原および基質濃度にかかわりなく、比濁分析がマイコバクテリウムの
成長によって漸進的に変化しないことが観察される。２）比濁分析の増加は、以下にリンクする。すなわち、 −その門の成長の速度：比濁分析の変化はその門とは関わり無く遅れる。 −接種原の大きさ：接種原がわずかである時に比濁分析の変化は非常に遅れ
る。マイコバクテリウム・カンサシー（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）門では１０⁶ＵＦＣ
／ｍｌで４日の遅れがあり、この門に対して１０⁴ＵＦＣ／ｍｌで８日の遅れが
ある。同様のことがヒト型結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）門にも適用
される（それぞれ６日及び９日の遅れ）。

【００３５】 −基質濃度：基質濃度が減少する時にＮの変化が非常に弱くて遅れる。マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）門では、この増加は２２．
７ｍｇ／ｌの基質濃度では５日で表われ、１１．３５ｍｇ／ｌの濃度では１１日
で表われる。従って、バクテリア繁殖が遅れていることを示す比濁分析増加は以下の如く現
われる。すなわち、このパラメータは、精製化システムにほとんど関係がないの
である。

【００３６】３）蛍光に関しては、蛍光の増加ΔＦは以下に依存する。すなわち、 −門の成長速度：これは成長に比例する。 −接種原：接種原が大きい時に、非常に激しく進む。 −基質濃度：低ＣＭＩ（ＣＭＩ２０ｍｇ／ｌ）のヒト型結核菌門、及び、マ
イコバクテリウム・カンサシー門で基質濃度が減じられた時、より進む。これら
の成長は基質によって成長が遅らせられる。ここで最適な基質濃度は１１ｍｇ／
ｌである。

【００３７】 −３７°Ｃでの試験標本管の安定性：試験標本管Ｆの増加（ΔＦ）は累進的
である。試験管の蛍光の増加は、試験がポジティブになるような、同じ状況下で
生み出された試験標本管の蛍光の増加より大きいことが必要となる。読み取りを
簡単にするために、試験管及び試験標本管のそれぞれに関して蛍光の増加を算出
するよりも、蛍光Ｆの比率（試験）／蛍光（試験標本）を算出するほうがより好
ましい。

【００３８】該試験は比率が１．５５より大きい時、ポジティブである。比率が１．４と１
．５５の間である時、繁殖が制限され、この場合、より長い期間培養することが
必要である。蛍光の決定は、認識できるもの（１．５から３．０の比率）で、且つ進行性が
あり、若しくは、ゆっくりと成長するマイコバクテリウム・ゼノフィー（Ｍ．ｘ
ｅｎｏｐｉ）門及びヒト型結核菌門では特に、ミジット（ＭＧＩＴ）管の蛍光よ
り実に進行性がある。

【００３９】蛍光の決定は、このようにマイコバクテリウムの呼吸の活動の、高度で認識で
きる検出を可能とする。デバイスの読み取りでは、特にヒト型結核菌門の成長を
抑制する基質濃度を減じることを可能にする。Ｄ）過負荷がかけられたサンプリングのシステム試験は、マイコバクテリウム
が存在しない時及びする時の、読み出しデバイスのパラメータの漸進的変化を決
定することができる。

【００４０】マイコバクテリウムが存在しない場合、以下が観測された。 −４５°Ｃ及び３７°Ｃでの基質の安定性は、サンプリング・システム（ｎ
＝３）及び、精製化システムにおいて同様である。 −蛍光は、次第に、そして精製化システムと類似の方法で増加する。試験標
本管に関するサンプリング試験標本管の比率Ｆは、１．３未満である。

【００４１】 −比濁分析は、サンプリングにおける廃棄物質の存在を反映する。 −マイコバクテリウムが存在する場合、過負荷がかけられたサンプリングの
蛍光比は、参照としてバッファ標本試験管及び以前と同じ閾値を取り、約１１ｍ
ｇ／ｌの基質を含む管において決定される。平均の検出遅延はバッファにおける
ものより短いことが観測される。それにもかかわらず、特にヒト型結核菌では、
多量の廃棄物質の存在が遅延させ、且つ、カラー・ピンクおよび蛍光の出現を示
すと考えられる。

【００４２】従って、デバイスによる蛍光の決定は、類似した遅延の過負荷をかけられたサ
ンプリングでのマイコバクテリウムの検出を可能として、他のパラメータには本
質的に影響がない。Ｅ）結論結論として、本発明のデバイスは、・水分抽出なしに管を使用することによって、・蛍光を表わす基質濃度を減らすことによって、登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」マイコバクト管の読み出しに使われ得る。

【００４３】正しく色の変化を表示するために初めに選択された濃度は、特にヒト型結核
菌門の成長を妨げるか若しくは遅延させる。しかしながら、検出の方法を簡単化することによって、・読み取りウインドウの範囲を定めることは必要でない。

【００４４】・蛍光は、マイコバクテリウムの活動の目印としての全ての関心のあるも
のの中で唯一のパラメータである。・示される総蛍光値は、キャピラリ管を横切る経路の間で読み出される最
大値であって、キャピラリ内のその局地化とは独立している。・蛍光の検出は充分である：無色の非蛍光性の派生物の出現にリンクされ
るＦは、蛍光性のピンクの派生物の生成の際に、毎日及び毎週の動的な読み出し
を停止するので、破壊されることはない。

【００４５】・読み出しは、試験される管と同じ条件下で培養されたバッファ・タイプ
のサンプル管を参照として取ることによって実行される。かかるタイプのサンプ
ル管のＦ値の試験をされるべき管の蛍光の比率の解釈は、３７°Ｃでの２ヶ月の
培養に対する蛍光の漸進的変化、従って、この温度における基質の不安定性、の
緩和を可能とする。

【００４６】・デバイス上の蛍光の測定が色の変化の量的で高度な判定を可能として、
オペレータから独立した結果を与える。・デバイスの調整は、蛍光ファイバに制限される：ポジティブ制御の使用
に対する較正、及び、登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」マイコバクト管の使用
への制御である。

【図面の簡単な説明】

【図１】反応性試薬の存在下でのサンプルの光学特性の変化を検出するデバイスの原理
を示す図である。

【図２】図１のデバイスで使用される分光側光検出器を形成するダイアグラムを示す図
である。

【図３】サンプルの蛍光の単純化された検出の原理を示す図である。

【図４】一定の測定期間における図１のデバイスによって実行される測定シーケンスの
時間ダイアグラムの図である。

【図５】デバイスによってなされる測定の結果を利用するために用いられる真理値表で
ある。

【図６】生化学的止血分析を実行するために本発明による検出デバイスを使用する自動
分析デバイスを表す図である。

【図７】登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」ウリ管の場合の本発明に適合する読み出し
デバイスによって検出される値を表わす曲線である。

【図８】登録商標「ＳＣＲＥＥＮＧＥＬ」マイコバクト管の場合の本発明に適合する
読み出しデバイスによって検出される値を表わす曲線である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ルソーアランフランス国エフ−75004 パリブールヴァールアンリキャトル 37 Ｆターム(参考） 2G043 AA01 BA17 CA03 EA01 EA13 HA05 JA03 KA05 KA08 LA01 2G045 AA01 AA15 AA28 BB20 CA25 CA26 CB03 FA11 FA26 FA29 GC10 GC15 2G058 CB08 CD11 CE08 ED03 GA02 GE04 2G059 AA02 AA05 BB04 BB13 CC16 DD11 EE02 EE07 EE12 FF11 GG02 GG03 GG08 HH02 JJ02 JJ05 JJ06 KK01 KK03 KK04 MM05 MM09 MM10 PP01

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】分析されるサンプルの光学特性の変化を検出する方法であって
、 −第１光電子光源（ＳＬ₁）によって放射され且つ光波が第１周波数範囲に
含まれる第１入射光パルス（ＩＬ₁）にサンプルを露出する第１露出ステップと
、 −光強度が前記第１パルスから送られた前記第１入射パルス（ＩＬ₁）の軸
に実質的に位置する光電子検出器（ＤＯ）によって、前記サンプルを通過した後
において測定する第１濁度測定ステップと、 −前記第１測定結果をメモリ（ＭＥＭ）に記憶するステップと、 −第２光電子光源（ＳＬ₂）によって放射され且つ光波が第２周波数範囲に
含まれる、前記第１露出ステップと実質的に同じ入射を有する第２入射光パルス
（ＩＬ₂）に前記サンプルを露出する第２露出ステップと、 −前記サンプルを通過した後において前記第２パルスから送られた強度を測
定する第２測定ステップと、 −前記メモリに記憶された結果を分析するステップと、を少なくとも含む動作シーケンスを約１ミリ秒から約１０ミリ秒の比較的短時間
になすことを特徴とする光学特性の変化を検出する方法。
【請求項２】連続した動作シーケンス及び前記シーケンスの結果の比較分析
を行うステップを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】前記光パルス（ＩＬ₁，ＩＬ₂）の前記継続時間は、１ミリ秒の
約１／１０から数ミリ秒までであることを特徴とする請求項１又は２記載の方法
。
【請求項４】前記第１測定ステップ２回のうちの１回の間に、前記サンプル
の蛍光の測定を行うステップを更に含むことを特徴とする請求項１乃至３のうち
の１に記載の方法。
【請求項５】第３光パルス（ＩＬ₃）に前記サンプルを露出するステップと
、第３比濁測定ステップとを更に含むことを特徴とする請求項１乃至４のうちの
１に記載の方法。
【請求項６】前記測定は、複数の検出器を用いて実施され且つ前記検出器の
うちの１つは蛍光測定に使用されることを特徴とする請求項１乃至５のうちの１
に記載の方法。
【請求項７】前記蛍光測定は、緑色光を透過するが青色光を通過させないロ
ーパスフィルタによって前記入射光パルスの１つをフィルタリングすることと、
蛍光によって発生する青色光を通過させるハイパスフィルタによって前記パルス
に応答して送られる光をフィルタリングすることとの結合によって得られること
を特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項８】第３パルス（ＩＬ₃）は他の２つの入射光パルスと垂直に配向
され、前記測定は所与の検出器（ＤＯ）によって実施されることを特徴とする請
求項５記載の方法。
【請求項９】前記測定は、分光測光法であることを特徴とする請求項８記載
の方法。
【請求項１０】前記結果の前記分析は、前もって記憶された真理値表を援用
してなされることを特徴とする請求項１乃至９のうちの１に記載の方法。
【請求項１１】 −分析されるサンプル（１）を入れた透明容器（２）に中心
合わせされた伝送ヘッド（３）に、第１光学ガイド（４）によって使用された第
１波長範囲内の光線を放射する第１光源（ＳＬ₁）と、 −前記伝送ヘッド（３）に与えられた第２波長範囲内の光線を放射する少な
くとも１つの第２光源（ＳＬ₂）と、 −前記伝送ヘッド（３）の反対側に位置する前記容器の側面の位置で、前記
伝送ヘッド（３）の軸に配置された少なくとも１つの光電子検出器（ＤＯ）と、 −前記動作シーケンスを制御するために前記光源（ＳＬ₁，ＳＬ₂）及び前記
検出器（ＤＯ）を制御し且つ前記検出器によって実施される前記測定の前記結果
を分析するようにプログラムされているマイクロプロセッサ（ＭＰ）と、を含むことを特徴とする請求項１乃至１０のうちの１に記載の方法を実行するデ
バイス。
【請求項１２】光源（ＳＬ₁，ＳＬ₂）は、各々、発光ダイオード（Ｄ₁，Ｄ₂ ）及び光学フィルタ（Ｆ₁，Ｆ₂）を含むことを特徴とする請求項１１記載のデバ
イス。
【請求項１３】前記検出器（ＤＯ）は、分光測光法の検出器であることを特
徴とする請求項１１又は１２記載のデバイス。
【請求項１４】前記第１ヘッド（３）の軸に対して垂直な透明な容器（２）
に中心合わせされた伝送ヘッド（７）に、第３光学ガイド（６）によって接続さ
れた第３光源（ＳＬ₃）であって、前記第３光源（ＳＬ₃）は比濁測定を実施する
ため使用され且つ前記プロセッサ（ＭＰ）によって制御されることを特徴とする
請求項１１乃至１３のうちの１に記載のデバイス。
【請求項１５】各々分析される液体サンプルを入れるための複数の透明容器
（Ｃ）を導く自動分析デバイスの測定ステーションに集積され、前記容器（Ｃ）
は、前記支持板（Ｂ）の切り込みステーション（２３）、ピペットステーション
（２４）、前記測定ステーション及び使用された容器を与えられる前記支持板（
Ｂ）の回収ステーションで連続して働く支持板（Ｂ）に固定されていることを特
徴とする請求項１１乃至１４のうちの１に記載のデバイス。