JP2002539110A - スフィンゴイド塩基誘導体およびその使用 - Google Patents
スフィンゴイド塩基誘導体およびその使用Info
- Publication number
- JP2002539110A JP2002539110A JP2000604009A JP2000604009A JP2002539110A JP 2002539110 A JP2002539110 A JP 2002539110A JP 2000604009 A JP2000604009 A JP 2000604009A JP 2000604009 A JP2000604009 A JP 2000604009A JP 2002539110 A JP2002539110 A JP 2002539110A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- sphingoid base
- sphingoid
- base derivative
- derivative according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C215/00—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton
- C07C215/02—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
- C07C215/22—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated
- C07C215/24—Compounds containing amino and hydroxy groups bound to the same carbon skeleton having hydroxy groups and amino groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being unsaturated and acyclic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/68—Sphingolipids, e.g. ceramides, cerebrosides, gangliosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
- A61Q17/005—Antimicrobial preparations
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
(57)【要約】
本発明は、スフィンゴイド塩基の塩であるスフィンゴイド塩基誘導体を開示する。これらの塩は、水性環境において実質的に増大した溶解度を有し、局所使用のための組成物において増大した効力を示す。
Description
【０００１】 発明の分野 本発明は、局所適用、特に、スフィンゴイド塩基誘導体の局所適用の分野に関
する。
する。
【０００２】 発明の背景 スフィンゴシンなどのスフィンゴイド塩基は、基本的な生化学的細胞プロセス
を妨げることにより、皮膚細胞の分化および増殖の強力なエフェクターであるこ
とが知られている（Ｈａｎｎｕｎ，Ｙ．Ａ．およびＢｅｌｌ，Ｒ．Ｍ．（１９８
９），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３，５００−５０７）。例えば、遊離スフィンゴシ
ンはプロテインキナーゼＣ活性を阻害し、従って、シグナル伝達および細胞分裂
の調節に極めて重要な役割を果たしている（Ｈａｎｎｕｎ，Ｙ．Ａ．ら（１９８
６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１，１２６０４−１２６０９）。遊離スフ
ィンゴシンの作用は、皮膚表面から細胞が失われる速度のバランスを保つための
表皮細胞増殖の調節に重要な要因であるかもしれない（Ｄｏｗｎｉｎｇ，Ｄ．Ｔ
．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，３３，３０１−３１３）。さらに、
スフィンゴイド塩基については、抗菌活性などの他の生物学的活性が述べられて
いる（Ｂｉｂｅｌ，Ｄ．Ｅ．ら（１９９２），Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔ
ｏｌ．９８，２６９−２７３）。
を妨げることにより、皮膚細胞の分化および増殖の強力なエフェクターであるこ
とが知られている（Ｈａｎｎｕｎ，Ｙ．Ａ．およびＢｅｌｌ，Ｒ．Ｍ．（１９８
９），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３，５００−５０７）。例えば、遊離スフィンゴシ
ンはプロテインキナーゼＣ活性を阻害し、従って、シグナル伝達および細胞分裂
の調節に極めて重要な役割を果たしている（Ｈａｎｎｕｎ，Ｙ．Ａ．ら（１９８
６），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１，１２６０４−１２６０９）。遊離スフ
ィンゴシンの作用は、皮膚表面から細胞が失われる速度のバランスを保つための
表皮細胞増殖の調節に重要な要因であるかもしれない（Ｄｏｗｎｉｎｇ，Ｄ．Ｔ
．（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，３３，３０１−３１３）。さらに、
スフィンゴイド塩基については、抗菌活性などの他の生物学的活性が述べられて
いる（Ｂｉｂｅｌ，Ｄ．Ｅ．ら（１９９２），Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔ
ｏｌ．９８，２６９−２７３）。
【０００３】 スフィンゴイド塩基は、皮膚細胞の分化および増殖に対する作用ならびに抗菌
活性があるために、様々な化粧用組成物に活性成分として含めることができる。
例えば、スフィンゴシンは、皮膚に関する様々な異常および障害（例えば、乾燥
皮膚、乾皮症、および乾癬）の治療について述べられている。スフィンゴシンは
また、皮膚を、有害なまたは望ましくない様々な影響（例えば、ＵＶ光の影響お
よび皮膚老化）から保護することができる。特に、スフィンゴイド塩基は、抗炎
症剤または抗菌剤として局所組成物に含まれている（ＷＯ９８／４９９９９）。
活性があるために、様々な化粧用組成物に活性成分として含めることができる。
例えば、スフィンゴシンは、皮膚に関する様々な異常および障害（例えば、乾燥
皮膚、乾皮症、および乾癬）の治療について述べられている。スフィンゴシンは
また、皮膚を、有害なまたは望ましくない様々な影響（例えば、ＵＶ光の影響お
よび皮膚老化）から保護することができる。特に、スフィンゴイド塩基は、抗炎
症剤または抗菌剤として局所組成物に含まれている（ＷＯ９８／４９９９９）。
【０００４】 スフィンゴイド塩基の不利な点は、水性環境での溶解度が小さいことである。
この現象は、これらの化合物を水性製剤に使用することを妨げる。例えば、効果
的な抗菌活性を示すために、スフィンゴイド塩基を水性製剤中で可溶化すること
が重要である。
この現象は、これらの化合物を水性製剤に使用することを妨げる。例えば、効果
的な抗菌活性を示すために、スフィンゴイド塩基を水性製剤中で可溶化すること
が重要である。
【０００５】 発明の説明 本発明は、遊離塩基対応物より水中での溶解度が実質的に増大したスフィンゴ
イド塩基誘導体を開示している。結果として、これらのスフィンゴイド塩基誘導
体は、水性組成物に配合した場合、驚くほど改善した効力を示す。
イド塩基誘導体を開示している。結果として、これらのスフィンゴイド塩基誘導
体は、水性組成物に配合した場合、驚くほど改善した効力を示す。
【０００６】 本発明のスフィンゴイド塩基誘導体は、スフィンゴイド塩基の塩である。
【０００７】 本発明によれば、スフィンゴイド塩基塩のアニオンは、任意の適切な酸から誘
導される。この点に関して、適切な酸は、適切な溶媒中でスフィンゴイド塩基と
混合すると、水性媒体中での溶解度がスフィンゴイド塩基それ自体の溶解度を比
較して増大している塩を生成する酸と定義される。
導される。この点に関して、適切な酸は、適切な溶媒中でスフィンゴイド塩基と
混合すると、水性媒体中での溶解度がスフィンゴイド塩基それ自体の溶解度を比
較して増大している塩を生成する酸と定義される。
【０００８】 本発明の１つの実施態様では、前記酸は、それ自体が局所適用において効力を
有し得る酸である。
有し得る酸である。
【０００９】 本発明の１つの実施態様では、前記酸は、スフィンゴイド塩基を、化粧用組成
物または薬学的組成物の水相に送達することができる親水性酸である。
物または薬学的組成物の水相に送達することができる親水性酸である。
【００１０】 前記酸は、α−ヒドロキシアルカン酸、β−ヒドロキシアルカン酸、α，β−
ジヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸などの親水性有機酸または鉱酸であるこ
とが好ましい。親水性有機酸のさらに好ましい例は、乳酸、グリコール酸、リン
ゴ酸、ピルビン酸、コハク酸、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン
酸、および／またはピログルタミン酸（ピロリドンカルボン酸）である。鉱酸の
さらに好ましい例は、塩酸、硝酸、および／またはリン酸である。
ジヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸などの親水性有機酸または鉱酸であるこ
とが好ましい。親水性有機酸のさらに好ましい例は、乳酸、グリコール酸、リン
ゴ酸、ピルビン酸、コハク酸、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン
酸、および／またはピログルタミン酸（ピロリドンカルボン酸）である。鉱酸の
さらに好ましい例は、塩酸、硝酸、および／またはリン酸である。
【００１１】 本発明の別の実施態様では、前記酸は、スフィンゴイド塩基と混合すると、親
油性酸とスフィンゴイド塩基の両方の効力が増すような親油性有機酸である。
油性酸とスフィンゴイド塩基の両方の効力が増すような親油性有機酸である。
【００１２】 本発明のスフィンゴイド塩基塩を、以下のように調製することができる。スフ
ィンゴイド塩基を適切な有機溶媒に溶解する。その際に、少なくとも１当量の適
切な酸を添加する。一般に、酸の添加により、少なくとも約３単位のｐＨが低下
する。ｐＨの最終値は、加えられる酸によって決まることが理解される。高温（
例えば、５０℃〜７０℃の温度）で、スフィンゴイド塩基を有機溶媒に溶解する
ことが好ましい。混合物を冷却すると、スフィンゴイド塩基塩が沈殿する。濾過
により反応混合物から結晶状の沈殿物を回収し、任意に、溶媒、好ましくは、塩
調製に用いられたものと同じ溶媒で洗浄してもよい。
ィンゴイド塩基を適切な有機溶媒に溶解する。その際に、少なくとも１当量の適
切な酸を添加する。一般に、酸の添加により、少なくとも約３単位のｐＨが低下
する。ｐＨの最終値は、加えられる酸によって決まることが理解される。高温（
例えば、５０℃〜７０℃の温度）で、スフィンゴイド塩基を有機溶媒に溶解する
ことが好ましい。混合物を冷却すると、スフィンゴイド塩基塩が沈殿する。濾過
により反応混合物から結晶状の沈殿物を回収し、任意に、溶媒、好ましくは、塩
調製に用いられたものと同じ溶媒で洗浄してもよい。
【００１３】 適切な有機溶媒は、最終生成物（すなわち、スフィンゴイド塩基塩）が溶けな
い溶媒が好ましい。例えば、適切な有機溶媒は、エタノールまたはメチルイソブ
チルケトンである。
い溶媒が好ましい。例えば、適切な有機溶媒は、エタノールまたはメチルイソブ
チルケトンである。
【００１４】 本発明の１つの実施態様では、スフィンゴイド塩基塩を、別のスフィンゴイド
塩基塩を調製するための出発化合物として使用する。
塩基塩を調製するための出発化合物として使用する。
【００１５】 本発明のスフィンゴイド塩基塩を、意図される使用（例えば、局所組成物への
含有）の前に調製することが絶対に必要である。遊離スフィンゴイド塩基を局所
組成物に含めても（さらに、この局所組成物は、本明細書中、前記で定義した酸
の１または複数に由来するアニオンを含有する）、溶解度および／または効力は
増大しない。
含有）の前に調製することが絶対に必要である。遊離スフィンゴイド塩基を局所
組成物に含めても（さらに、この局所組成物は、本明細書中、前記で定義した酸
の１または複数に由来するアニオンを含有する）、溶解度および／または効力は
増大しない。
【００１６】 本発明のスフィンゴイド塩基塩は、スフィンゴイド塩基であるスフィンゴシン
、スフィンガニン、またはフィトスフィンゴシンの塩であることが好ましい。ス
フィンゴイド塩基塩は、フィトスフィンゴシンの塩であることがより好ましい。
、スフィンガニン、またはフィトスフィンゴシンの塩であることが好ましい。ス
フィンゴイド塩基塩は、フィトスフィンゴシンの塩であることがより好ましい。
【００１７】 本発明の１つの実施態様では、フィトスフィンゴシンを微生物発酵によって得
る。例えば、フィトスフィンゴシンを、適切な脱アセチル反応によりＰｉｃｈｉ
ａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ由来テトラアセチル−フィトスフィンゴシン（ＴＡＰＳ）
から得る。脱アセチルは、化学作用による（例えば、水酸化カリウムを用いた塩
基触媒加水分解による）ものでもよく、酵素によるものでもよい。ＴＡＰＳのア
ルカリ加水分解後に、結果として生じたフィトスフィンゴシンを精製してもよい
。当業者に周知の任意の方法により、このような精製を行うことができる。哺乳
動物フィトスフィンゴシン（すなわち、Ｄ−Ｄ−エリトロ配置）と同じ立体化学
配置を有することが報告されているように、酵母由来フィトスフィンゴシンはヒ
ト皮膚のものと同一である。
る。例えば、フィトスフィンゴシンを、適切な脱アセチル反応によりＰｉｃｈｉ
ａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ由来テトラアセチル−フィトスフィンゴシン（ＴＡＰＳ）
から得る。脱アセチルは、化学作用による（例えば、水酸化カリウムを用いた塩
基触媒加水分解による）ものでもよく、酵素によるものでもよい。ＴＡＰＳのア
ルカリ加水分解後に、結果として生じたフィトスフィンゴシンを精製してもよい
。当業者に周知の任意の方法により、このような精製を行うことができる。哺乳
動物フィトスフィンゴシン（すなわち、Ｄ−Ｄ−エリトロ配置）と同じ立体化学
配置を有することが報告されているように、酵母由来フィトスフィンゴシンはヒ
ト皮膚のものと同一である。
【００１８】 本発明のスフィンゴイド塩基塩は、水性環境において遊離スフィンゴイド塩基
の溶解度よりかなり大きな溶解度を有する。驚くべきことに、本発明は、遊離ス
フィンゴイド塩基もまた可溶化形態である環境でさえも、スフィンゴイド塩基塩
の効力が遊離スフィンゴイド塩基と比較して増大していることをさらに示す。こ
の遊離スフィンゴイド塩基は、水性媒体中に、有機溶媒と界面活性化合物がさら
に存在することにより可溶化された形態であってもよい。
の溶解度よりかなり大きな溶解度を有する。驚くべきことに、本発明は、遊離ス
フィンゴイド塩基もまた可溶化形態である環境でさえも、スフィンゴイド塩基塩
の効力が遊離スフィンゴイド塩基と比較して増大していることをさらに示す。こ
の遊離スフィンゴイド塩基は、水性媒体中に、有機溶媒と界面活性化合物がさら
に存在することにより可溶化された形態であってもよい。
【００１９】 本発明によるスフィンゴイド塩基誘導体を含む組成物は、局所適用に適してい
る。局所適用は、皮膚、毛、および口、鼻、眼、尿生殖路などの上皮内層への化
粧および／または皮膚科学的適用を含むことが理解される。
る。局所適用は、皮膚、毛、および口、鼻、眼、尿生殖路などの上皮内層への化
粧および／または皮膚科学的適用を含むことが理解される。
【００２０】 本発明のスフィンゴイド塩基誘導体は、０．００１〜５ｗｔ％、好ましくは０
．００５〜５ｗｔ％、より好ましくは０．０１〜２．５ｗｔ％、最も好ましくは
０．０２〜１ｗｔ％、特に好ましくは０．０２〜０．５ｗｔ％の範囲に及ぶ濃度
で局所組成物に含まれることが好ましい。
．００５〜５ｗｔ％、より好ましくは０．０１〜２．５ｗｔ％、最も好ましくは
０．０２〜１ｗｔ％、特に好ましくは０．０２〜０．５ｗｔ％の範囲に及ぶ濃度
で局所組成物に含まれることが好ましい。
【００２１】 本発明によるスフィンゴイド塩基誘導体を含む局所組成物は、炎症および／ま
たは微生物活動に関連する、様々な局所に生じる望ましくない状態および／また
は異常な状態に適用するのに特に適している。
たは微生物活動に関連する、様々な局所に生じる望ましくない状態および／また
は異常な状態に適用するのに特に適している。
【００２２】 本発明のスフィンゴイド塩基誘導体を含む局所組成物が有利に適用される、局
所に生じる望ましくない状態および／または異常な状態の例は、湿疹、乾癬、ア
トピー性皮膚炎、にきび、ふけ、口腔感染症および／または口唇感染症、真菌症
、様々な他の皮膚感染症または膣感染症である。前記スフィンゴイド塩基誘導体
を含む局所組成物は、創傷治癒（例えば、火傷の場合）および皮膚細菌叢の正常
化のために、さらに有利に適用される。
所に生じる望ましくない状態および／または異常な状態の例は、湿疹、乾癬、ア
トピー性皮膚炎、にきび、ふけ、口腔感染症および／または口唇感染症、真菌症
、様々な他の皮膚感染症または膣感染症である。前記スフィンゴイド塩基誘導体
を含む局所組成物は、創傷治癒（例えば、火傷の場合）および皮膚細菌叢の正常
化のために、さらに有利に適用される。
【００２３】 本発明のスフィンゴイド塩基誘導体は、その抗菌活性のために、化粧用組成物
および皮膚科学的組成物中で、既存の化学保存料を減らす、および／または既存
の化学保存料の代わりとなる保存料として機能する可能性がある。
および皮膚科学的組成物中で、既存の化学保存料を減らす、および／または既存
の化学保存料の代わりとなる保存料として機能する可能性がある。
【００２４】 実施例１ 乳酸ＰＳの調製 フィトスフィンゴシン５０グラムと無水エタノール５００ｍｌの混合物からな
る混合物を攪拌して、６５℃まで加熱した。次いで、ほとんど透明な溶液を熱い
ままで濾紙に通して濾過し、１リットル三首フラスコに入れた。
る混合物を攪拌して、６５℃まで加熱した。次いで、ほとんど透明な溶液を熱い
ままで濾紙に通して濾過し、１リットル三首フラスコに入れた。
【００２５】 攪拌し、温度を６６℃から７１℃に上げながら、ｐＨを９．９から５．３に下
げるために（Ｌ）−乳酸（２５．７ｇ）を濾液に少しずつ添加した。混合物を攪
拌および冷却した。約４５℃で結晶化が始まった。その間、３／４時間にわたっ
て２１℃に冷却を続けた。
げるために（Ｌ）−乳酸（２５．７ｇ）を濾液に少しずつ添加した。混合物を攪
拌および冷却した。約４５℃で結晶化が始まった。その間、３／４時間にわたっ
て２１℃に冷却を続けた。
【００２６】 沈殿物を濾過し、ケークをエタノール１５０ｍｌと交換した（急速濾過および
交換、計２分）。
交換、計２分）。
【００２７】 湿ったケーク（１１０．８ｇ）を減圧下で乾燥させて、５１．２グラムの生成
物を得た。ＮＭＲ分析は９９．３％の純度を示した。
物を得た。ＮＭＲ分析は９９．３％の純度を示した。
【００２８】 実施例２ グリコール酸ＰＳの調製 フィトスフィンゴシン５０グラムと無水エタノール５００ｍｌの混合物を攪拌
して、６５℃まで加熱した。次いで、ほとんど透明な溶液を熱いままで濾紙に通
して濾過し、１リットル三首フラスコに入れた。熱いエタノール２０ｍｌで洗浄
した。再度、濾液を６５℃まで加熱した。
して、６５℃まで加熱した。次いで、ほとんど透明な溶液を熱いままで濾紙に通
して濾過し、１リットル三首フラスコに入れた。熱いエタノール２０ｍｌで洗浄
した。再度、濾液を６５℃まで加熱した。
【００２９】 攪拌し、温度を６６℃から６８℃に上げながら、ｐＨを９．９から５．６に下
げるためにグリコール酸（１３．４ｇ）を濾液に少しずつ添加した。混合物を攪
拌および冷却した。約６６℃で結晶化が始まった。その間、２０分間にわたって
２５℃に冷却を続けた。
げるためにグリコール酸（１３．４ｇ）を濾液に少しずつ添加した。混合物を攪
拌および冷却した。約６６℃で結晶化が始まった。その間、２０分間にわたって
２５℃に冷却を続けた。
【００３０】 沈殿物を濾過し、ケークをエタノール１５０ｍｌと交換した（急速濾過および
交換、計３分）。
交換、計３分）。
【００３１】 湿ったケーク（８７ｇ）を減圧下で一晩乾燥させて、５６．６グラムの生成物
を得た。ＮＭＲ分析は９８．６％の純度を示した。
を得た。ＮＭＲ分析は９８．６％の純度を示した。
【００３２】 実施例３ ＨＣｌ・ＰＳの調製 フィトスフィンゴシン５０グラムと無水エタノール５００ｍｌの混合物を攪拌
して、６５℃まで加熱した。次いで、ほとんど透明な溶液を熱いままで濾紙に通
して濾過し、１リットル三首フラスコに入れた。熱いエタノール２０ｍｌで洗浄
した。
して、６５℃まで加熱した。次いで、ほとんど透明な溶液を熱いままで濾紙に通
して濾過し、１リットル三首フラスコに入れた。熱いエタノール２０ｍｌで洗浄
した。
【００３３】 攪拌し、温度を４５℃から５０℃に上げながら、ｐＨを１０．３から約０に下
げるために塩酸（３６％、約１３ｍｌ）を濾液に添加した。混合物を攪拌および
冷却した。種晶を入れた後に約３４℃で結晶化が始まり、０．５時間にわたって
１０℃に冷却を続けた。
げるために塩酸（３６％、約１３ｍｌ）を濾液に添加した。混合物を攪拌および
冷却した。種晶を入れた後に約３４℃で結晶化が始まり、０．５時間にわたって
１０℃に冷却を続けた。
【００３４】 沈殿物を濾過し、ケークを冷エタノール１００ｍｌと交換した（緩速濾過およ
び交換、計３／４時間）。
び交換、計３／４時間）。
【００３５】 湿ったケーク（２７２ｇ）を減圧下で乾燥させて、４８．０グラムの生成物を
得た。ＮＭＲ分析は９６．７％の純度を示した。
得た。ＮＭＲ分析は９６．７％の純度を示した。
【００３６】 実施例４ ピログルタミン酸ＰＳの調製 フィトスフィンゴシン２５グラムと、メチルイソブチルケトン（ＭＩＫ）２０
０ｍｌと、水２ｍｌからなる懸濁液を攪拌し、６５℃まで加熱した。
０ｍｌと、水２ｍｌからなる懸濁液を攪拌し、６５℃まで加熱した。
【００３７】 次いで、ＤＬ−ピログルタミン酸１２グラムを添加し、ｐＨを９．４から５．
８に変えた。
８に変えた。
【００３８】 ガラス状の沈殿物を得た。４５℃で、引っかくと結晶化し始めた試料１ｍｌを
採取した。これを、さらなる冷却の間に混合物に種晶を入れるために使用した。
採取した。これを、さらなる冷却の間に混合物に種晶を入れるために使用した。
【００３９】 次いで、混合物を１７℃までさらに冷却し、ガラスＧ３フィルターで濾過し、
新鮮なＭＩＫ５０ｍｌで洗浄／交換した（急速濾過）。湿ったケーク（５７ｇ）
を減圧下で乾燥させて、３４．３グラムの生成物を得た。
新鮮なＭＩＫ５０ｍｌで洗浄／交換した（急速濾過）。湿ったケーク（５７ｇ）
を減圧下で乾燥させて、３４．３グラムの生成物を得た。
【００４０】 実施例５ クエン酸ＰＳの調製 フィトスフィンゴシン２５グラムと、メチルイソブチルケトン（ＭＩＫ）２０
０ｍｌと、水１ｍｌからなる懸濁液を攪拌し、７２℃まで加熱した。
０ｍｌと、水１ｍｌからなる懸濁液を攪拌し、７２℃まで加熱した。
【００４１】 次いで、クエン酸一水和物１８グラムを添加し、ｐＨを９．４から１．８に変
えた。
えた。
【００４２】 沈殿物を得た。次いで、混合物を１４℃まで冷却し、ガラスＧ３フィルターで
濾過し、新鮮なＭＩＫ５０ｍｌで洗浄／交換した（急速濾過）。湿ったケーク（
８４ｇ）を減圧下で乾燥させて、３９．７グラムの生成物を得た。ＮＭＲ分析は
９６．４％の純度を示した。
濾過し、新鮮なＭＩＫ５０ｍｌで洗浄／交換した（急速濾過）。湿ったケーク（
８４ｇ）を減圧下で乾燥させて、３９．７グラムの生成物を得た。ＮＭＲ分析は
９６．４％の純度を示した。
【００４３】 実施例６ 酵母に対するＰＳの抗菌活性 ２種類の異なる酵母株：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
ＡＴＣＣ９７６３およびＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ＡＴＣＣ１０２
３１を使用した。全てのインキュベーションを、（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの
場合）３０℃または（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓの場合）３７℃で行った。両方の酵
母株を、ＹＥＰＤ２％培地（２０ｇ／ｌグルコース、１０ｇ／ｌペプトン、２０
ｇ／ｌ酵母エキス、ｐＨ＝６．０）中で増殖させた。培養物を一晩増殖させ、培
養物５０μｌ中の細胞を遠心分離により収集し、１ｍｌの滅菌緩衝液（１０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨによりｐＨ＝７．２にした）＋２０ｇ／ｌグルコース）
で洗浄し、遠心分離し、滅菌緩衝液０．５ｍｌに再懸濁した。
ＡＴＣＣ９７６３およびＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ＡＴＣＣ１０２
３１を使用した。全てのインキュベーションを、（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの
場合）３０℃または（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓの場合）３７℃で行った。両方の酵
母株を、ＹＥＰＤ２％培地（２０ｇ／ｌグルコース、１０ｇ／ｌペプトン、２０
ｇ／ｌ酵母エキス、ｐＨ＝６．０）中で増殖させた。培養物を一晩増殖させ、培
養物５０μｌ中の細胞を遠心分離により収集し、１ｍｌの滅菌緩衝液（１０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨによりｐＨ＝７．２にした）＋２０ｇ／ｌグルコース）
で洗浄し、遠心分離し、滅菌緩衝液０．５ｍｌに再懸濁した。
【００４４】 １０ｍｇ／ｍｌのフィトスフィンゴシン（ＰＳ）原液を、１体積分率のエタノ
ール、２体積分率のＴｗｅｅｎ２０、および１７体積分率の５０％グリセロール
水溶液からなる溶媒系で調製した。この溶媒系の成分を、この順番でフィトスフ
ィンゴシンに添加し、それぞれ添加した後に溶液を力強く振盪した。全溶媒を添
加した時に、混合物を、１５〜３０分間、４０℃まで加熱した。（必要であれば
）この原液から、希釈液を５％エタノール水溶液に溶かして作製した。全溶液を
、使用する２４時間前に調製し、室温で保持した。
ール、２体積分率のＴｗｅｅｎ２０、および１７体積分率の５０％グリセロール
水溶液からなる溶媒系で調製した。この溶媒系の成分を、この順番でフィトスフ
ィンゴシンに添加し、それぞれ添加した後に溶液を力強く振盪した。全溶媒を添
加した時に、混合物を、１５〜３０分間、４０℃まで加熱した。（必要であれば
）この原液から、希釈液を５％エタノール水溶液に溶かして作製した。全溶液を
、使用する２４時間前に調製し、室温で保持した。
【００４５】 これらの２種類の酵母に対するフィトスフィンゴシンの抗真菌効果を、ＬＩＶ
Ｅ／ＤＥＡＤ（登録商標） ＹＥＡＳＴ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ Ｌ−７
００９（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ．，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ
）を使用して調べた。このキットは、生細胞と死細胞を区別するために２種類の
異なる蛍光染料ＦＵＮ−１（登録商標）およびＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ（登録商標
） Ｗｈｉｔｅ Ｍ２Ｒを利用する。これらの蛍光染料を、適切なフィルターを
備える蛍光顕微鏡を用いて観察することができる。
Ｅ／ＤＥＡＤ（登録商標） ＹＥＡＳＴ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ Ｌ−７
００９（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ．，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ
）を使用して調べた。このキットは、生細胞と死細胞を区別するために２種類の
異なる蛍光染料ＦＵＮ−１（登録商標）およびＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ（登録商標
） Ｗｈｉｔｅ Ｍ２Ｒを利用する。これらの蛍光染料を、適切なフィルターを
備える蛍光顕微鏡を用いて観察することができる。
【００４６】 この分析のために、以下の量の蛍光色素（ＦＵＮ−１（登録商標） １μｌお
よびＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ（登録商標） Ｗｈｉｔｅ Ｍ２Ｒ ２．５μｌ）を
、前記のように調製した滅菌緩衝液に溶かした酵母細胞懸濁液０．５ｍｌに添加
する。混合後、これらの懸濁液を３０分間インキュベートする。次いで、フィト
スフィンゴシン原液の適切な希釈液５０μｌを、図１ａおよび１ｂに示す最終濃
度を得るように添加した。混合後、これらの懸濁液をインキュベートし、生細胞
および死細胞の割合を、ある期間にわたって追跡した。
よびＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ（登録商標） Ｗｈｉｔｅ Ｍ２Ｒ ２．５μｌ）を
、前記のように調製した滅菌緩衝液に溶かした酵母細胞懸濁液０．５ｍｌに添加
する。混合後、これらの懸濁液を３０分間インキュベートする。次いで、フィト
スフィンゴシン原液の適切な希釈液５０μｌを、図１ａおよび１ｂに示す最終濃
度を得るように添加した。混合後、これらの懸濁液をインキュベートし、生細胞
および死細胞の割合を、ある期間にわたって追跡した。
【００４７】 顕微鏡観察のために、２種類の異なるフィルターセット： １．二色性ミラー青色（Ｂ）、励起フィルターＩＦ４９０、エミッションフィル
ター０５３０（生細胞は細胞中にオレンジ色の粒子を示すが、死細胞は均一に緑
色／オレンジ色になっている） ２．二色性ミラー紫色（Ｖ）、励起フィルターＵ９５−Ｂ９３、エミッションフ
ィルターＹ４５５（生細胞は青色の細胞壁を示すが、死細胞は示さない）、を備
えるＯｌｙｍｐｕｓ ＢＨＢ蛍光顕微鏡を使用した。
ター０５３０（生細胞は細胞中にオレンジ色の粒子を示すが、死細胞は均一に緑
色／オレンジ色になっている） ２．二色性ミラー紫色（Ｖ）、励起フィルターＵ９５−Ｂ９３、エミッションフ
ィルターＹ４５５（生細胞は青色の細胞壁を示すが、死細胞は示さない）、を備
えるＯｌｙｍｐｕｓ ＢＨＢ蛍光顕微鏡を使用した。
【００４８】 結果を図１ａおよび１ｂに示す。酵母株は両方とも、用量依存的にフィトスフ
ィンゴシン（ｐｈｙｔｏｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）（ＰＳ）により殺傷されたこと
が明らかである。
ィンゴシン（ｐｈｙｔｏｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）（ＰＳ）により殺傷されたこと
が明らかである。
【００４９】 実施例７ 飢餓細胞に対するＰＳの抗真菌作用 微生物細胞は、その自然の生息環境では、たいてい飢餓状態にある。このため
に、ＰＳの抗菌作用が飢餓細胞に対しても明らかであるかどうかを調べた。
に、ＰＳの抗菌作用が飢餓細胞に対しても明らかであるかどうかを調べた。
【００５０】 この目的のために、実施例６に記載の手順を、若干、改良した（特に定めのな
い限り、方法および条件は全て同じであった）。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａ
ｎｓ ＡＴＣＣ１０２３１の一晩培養物から、細胞を遠心分離により収集した。
細胞を洗浄および再懸濁するために、２種類の異なる緩衝液：実施例６で使用し
た１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨ＝７．２にした）＋２０ｇ／ｌグルコ
ースと、グルコースを含まない同じ緩衝液を使用した。
い限り、方法および条件は全て同じであった）。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａ
ｎｓ ＡＴＣＣ１０２３１の一晩培養物から、細胞を遠心分離により収集した。
細胞を洗浄および再懸濁するために、２種類の異なる緩衝液：実施例６で使用し
た１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨ＝７．２にした）＋２０ｇ／ｌグルコ
ースと、グルコースを含まない同じ緩衝液を使用した。
【００５１】 グルコースを含む、およびグルコースを含まない２種類の細胞懸濁液（それぞ
れの条件について２．５ｍｌ）を、３７℃で１０分間インキュベートした。次い
で、フィトスフィンゴシン原液の適切な希釈液１２５μｌを、図２に示す最終濃
度を得るように添加した。混合後、これらの懸濁液をさらにインキュベートし、
指示された時点で、試料１００μｌを採取した。細胞を遠心分離により収集し、
細胞を、グルコースと実施例６と同じ濃度の蛍光色素を含む緩衝液１００μｌに
再懸濁した。この分析混合物を、色素が細胞に吸収されるように１０分以上イン
キュベートし、生細胞と死細胞の数を実施例６に記載のように測定した。
れの条件について２．５ｍｌ）を、３７℃で１０分間インキュベートした。次い
で、フィトスフィンゴシン原液の適切な希釈液１２５μｌを、図２に示す最終濃
度を得るように添加した。混合後、これらの懸濁液をさらにインキュベートし、
指示された時点で、試料１００μｌを採取した。細胞を遠心分離により収集し、
細胞を、グルコースと実施例６と同じ濃度の蛍光色素を含む緩衝液１００μｌに
再懸濁した。この分析混合物を、色素が細胞に吸収されるように１０分以上イン
キュベートし、生細胞と死細胞の数を実施例６に記載のように測定した。
【００５２】 図２に示すように、飢餓細胞は、エネルギーを与えられた細胞よりＰＳの抗真
菌作用を受けやすい。実際に、初期誘導期後では、２５０ｍｇ／ｌのＰＳが、飢
餓細胞を殺傷するのに５００ｍｇ／ｌと同じくらい効果的であることが分かった
。この誘導期は、多分、細胞の内因性エネルギー貯蔵が存在するためである。こ
れもまた、ＰＳが飢餓状態に対して特に効果的であることを示している。
菌作用を受けやすい。実際に、初期誘導期後では、２５０ｍｇ／ｌのＰＳが、飢
餓細胞を殺傷するのに５００ｍｇ／ｌと同じくらい効果的であることが分かった
。この誘導期は、多分、細胞の内因性エネルギー貯蔵が存在するためである。こ
れもまた、ＰＳが飢餓状態に対して特に効果的であることを示している。
【００５３】 実施例８ 寒天拡散試験における化粧用調製物中のＰＳの抗細菌効果 Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ１４４５８の一晩培
養物を、実施例６に記載の手順（ＢＨＩ培地（Ｄｉｆｃｏ）、３７℃でのインキ
ュベーション）と同様に調製した。
養物を、実施例６に記載の手順（ＢＨＩ培地（Ｄｉｆｃｏ）、３７℃でのインキ
ュベーション）と同様に調製した。
【００５４】 拡散試験用の寒天プレートを調製するために、１％寒天と１５％グリセロール
を添加したＢＨＩ培地３００ｍｌを融解し、５０℃まで冷却した。次いで、滅菌
グルコース溶液（５０％ｗ／ｖ）６ｍｌと微生物の一晩培養物６ｍｌを添加した
。ペトリ皿を、この寒天培地１２．５ｍｌで満たし、培地を固化させた。
を添加したＢＨＩ培地３００ｍｌを融解し、５０℃まで冷却した。次いで、滅菌
グルコース溶液（５０％ｗ／ｖ）６ｍｌと微生物の一晩培養物６ｍｌを添加した
。ペトリ皿を、この寒天培地１２．５ｍｌで満たし、培地を固化させた。
【００５５】 試験製剤を、乳酸オクチルドデシルの液相を用いて図６に示すように調製した
。これらは、１、２、または５ｇ／ｌのＰＳを含んだ。
。これらは、１、２、または５ｇ／ｌのＰＳを含んだ。
【００５６】 これらのプレートに試験試料を塗布するために、ステンレス鋼リング（６ｍｍ
内径）を、空の滅菌ペトリ皿に入れた。このリングの中に２つのペーパーディス
ク（６ｍｍ直径）を、底を覆うように入れ、このフィルターディスクに試験製剤
５０μｌを加えた。リングを、微生物を含む寒天プレートの表面上に置き、この
寒天プレートを、リングを取り出した後に試験溶液を拡散させることができる表
に示した期間の間、５℃で保存した。次いで、寒天プレートを、微生物増殖に適
した温度（３７℃）でインキュベートした。微生物を、寒天プレートの非阻害領
域で十分に増殖させた後、阻害の程度を、塗布領域から直交する二方向に広がる
増殖の無い領域（または増殖が減少した領域）として測定した。
内径）を、空の滅菌ペトリ皿に入れた。このリングの中に２つのペーパーディス
ク（６ｍｍ直径）を、底を覆うように入れ、このフィルターディスクに試験製剤
５０μｌを加えた。リングを、微生物を含む寒天プレートの表面上に置き、この
寒天プレートを、リングを取り出した後に試験溶液を拡散させることができる表
に示した期間の間、５℃で保存した。次いで、寒天プレートを、微生物増殖に適
した温度（３７℃）でインキュベートした。微生物を、寒天プレートの非阻害領
域で十分に増殖させた後、阻害の程度を、塗布領域から直交する二方向に広がる
増殖の無い領域（または増殖が減少した領域）として測定した。
【００５７】
【表１】
【００５８】 ２種類の数値を示す。１番目の数値は増殖の無い領域を示すが、２番目の数値
は増殖が減少した領域を示す。
は増殖が減少した領域を示す。
【００５９】 表１から、ＰＳによる増殖阻害は用量依存的であると思われる。
【００６０】 実施例９ ＰＳとその誘導体の一部の抗真菌作用 フィトスフィンゴシン誘導体の中には、水系での溶解度が改善しているものも
あることを発見した。このために、誘導体の抗菌活性をＰＳ自体の抗菌活性と比
較した。以下の誘導体：フィトスフィンゴシンのグリコール酸塩、乳酸塩、およ
び塩酸塩を調べた。フィトスフィンゴシン塩の原液を、フィトスフィンゴシンに
ついて実施例６に記載のように調製し、同じ実験条件を使用した。
あることを発見した。このために、誘導体の抗菌活性をＰＳ自体の抗菌活性と比
較した。以下の誘導体：フィトスフィンゴシンのグリコール酸塩、乳酸塩、およ
び塩酸塩を調べた。フィトスフィンゴシン塩の原液を、フィトスフィンゴシンに
ついて実施例６に記載のように調製し、同じ実験条件を使用した。
【００６１】 試験した３種類全ての塩が、その遊離塩基より非常に強い抗真菌活性を有する
ことを発見した。これは、適量の乳酸塩、塩化物、またはグリコール酸塩を用い
たブランクには効果がなかったので（図３ａ）、塩溶液に存在するアニオンによ
るものではなかった。図３ｂでは、塩化物の効力はＰＳ塩基の効力より２．５倍
より高かったことが分かる。
ことを発見した。これは、適量の乳酸塩、塩化物、またはグリコール酸塩を用い
たブランクには効果がなかったので（図３ａ）、塩溶液に存在するアニオンによ
るものではなかった。図３ｂでは、塩化物の効力はＰＳ塩基の効力より２．５倍
より高かったことが分かる。
【００６２】 実施例１０ 溶媒を含まない系に溶かしたＰＳおよびその誘導体の一部の抗真菌作用 脱塩水に溶かした溶液を、溶媒系について記載した手順（実施例６）（最終加
熱段階を含む）と同様に調製した。
熱段階を含む）と同様に調製した。
【００６３】 図４ａでは、試料調製間に溶媒を欠くと、遊離塩基の抗真菌効果はほとんど失
われるが、ＰＳ塩の効力は減少しなかったことが分かる。実際に、図４ｂおよび
４ｃに示すように、ＰＳ塩の効力は、溶媒を含まない系ではさらに高くなること
ができることを発見した。
われるが、ＰＳ塩の効力は減少しなかったことが分かる。実際に、図４ｂおよび
４ｃに示すように、ＰＳ塩の効力は、溶媒を含まない系ではさらに高くなること
ができることを発見した。
【００６４】 実施例１１ 細菌に対するＰＳの抗細菌効果 ２種類の異なる細菌株：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴ
ＣＣ１４４５８およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ４２１を使用した。
全てのインキュベーションを３７℃で行った。両方の細菌を実施例８に記載のよ
うに増殖させ、培養物５０μｌを遠心分離により収集し、滅菌脱塩水１ｍｌで洗
浄し、滅菌脱塩水０．５ｍｌに再懸濁した。
ＣＣ１４４５８およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ４２１を使用した。
全てのインキュベーションを３７℃で行った。両方の細菌を実施例８に記載のよ
うに増殖させ、培養物５０μｌを遠心分離により収集し、滅菌脱塩水１ｍｌで洗
浄し、滅菌脱塩水０．５ｍｌに再懸濁した。
【００６５】 １０ｍｇ／ｍｌのＰＳ原液を、前記のように調製した。（必要であれば）この
原液を、５％エタノール水溶液で希釈した。全溶液を使用する２４時間前に調製
し、室温で保持した。
原液を、５％エタノール水溶液で希釈した。全溶液を使用する２４時間前に調製
し、室温で保持した。
【００６６】 これらの２種類の細菌に対するフィトスフィンゴシンの抗細菌効果を、ＬＩＶ
Ｅ／ＤＥＡＤ（登録商標） ＢａｃＬｉｇｈｔ（登録商標） Ｂａｃｔｅｒｉａ
ｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ Ｌ−７０１２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏ
ｂｅｓ Ｉｎｃ．，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ）を使用して調べた。このキットは、
生細胞と死細胞を区別するために２種類の異なる蛍光染料：ＳＹＴＯ ９染料お
よびヨウ化プロピジウムを利用する。これらの蛍光染料を、適切なフィルターを
備える蛍光顕微鏡を用いて観察することができる。
Ｅ／ＤＥＡＤ（登録商標） ＢａｃＬｉｇｈｔ（登録商標） Ｂａｃｔｅｒｉａ
ｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｋｉｔ Ｌ−７０１２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏ
ｂｅｓ Ｉｎｃ．，Ｏｒｅｇｏｎ，ＵＳＡ）を使用して調べた。このキットは、
生細胞と死細胞を区別するために２種類の異なる蛍光染料：ＳＹＴＯ ９染料お
よびヨウ化プロピジウムを利用する。これらの蛍光染料を、適切なフィルターを
備える蛍光顕微鏡を用いて観察することができる。
【００６７】 このキットに付属している色素の溶液を、使用直前に１：１で混合し、この蛍
光色素混合物１．５μｌを細菌懸濁液０．５ｍｌに添加した。次いで、フィトス
フィンゴシン原液の適切な希釈液５０μｌを、図５に示した最終濃度を得るよう
に添加する。混合後に、これらの懸濁液をインキュベートし、生細胞と死細胞の
割合を、ある期間にわたって追跡した。
光色素混合物１．５μｌを細菌懸濁液０．５ｍｌに添加した。次いで、フィトス
フィンゴシン原液の適切な希釈液５０μｌを、図５に示した最終濃度を得るよう
に添加する。混合後に、これらの懸濁液をインキュベートし、生細胞と死細胞の
割合を、ある期間にわたって追跡した。
【００６８】 顕微鏡検査を、以下のフィルターセット：二色性ミラー青色（Ｂ）、励起フィ
ルターＩＦ４９０、エミッションフィルター０５３０（生細胞は緑色であり、死
細胞はオレンジ色／黄色である）を備えるＯｌｙｍｐｕｓ ＢＨＢ蛍光顕微鏡を
用いて行った。
ルターＩＦ４９０、エミッションフィルター０５３０（生細胞は緑色であり、死
細胞はオレンジ色／黄色である）を備えるＯｌｙｍｐｕｓ ＢＨＢ蛍光顕微鏡を
用いて行った。
【００６９】 Ｓ．ａｕｒｅｕｓは著しく殺傷されたことを発見した。しかしながら、溶解の
ために死細胞を検出することができなかったので、この効果を定量することがで
きなかった（蛍光色素を用いた測定には、死細胞の構造が完全なままであること
が必要である）。従って、殺傷効果は、生細胞数が著しく減少した点でしか明ら
かでなかった。
ために死細胞を検出することができなかったので、この効果を定量することがで
きなかった（蛍光色素を用いた測定には、死細胞の構造が完全なままであること
が必要である）。従って、殺傷効果は、生細胞数が著しく減少した点でしか明ら
かでなかった。
【００７０】 Ｅ．ｃｏｌｉ細胞もまた非常に効果的に殺傷された。この生物では、死細胞を
容易に定量することができた（図５）。細胞は、ＰＳにより用量依存的に殺傷さ
れ、この化合物に対して細菌は真菌より感受性があると思われる。
容易に定量することができた（図５）。細胞は、ＰＳにより用量依存的に殺傷さ
れ、この化合物に対して細菌は真菌より感受性があると思われる。
【００７１】 実施例１２ 拡散試験におけるＰＳ誘導体の抗細菌効果および抗真菌効果 指示された試験成分の一晩培養物を、実施例６および８に記載のように調製し
、試料を実施例８に記載のように試験プレートに塗布した。試料を、前記ように
調製した原液からの適切な希釈液として調製した。試料リングを取り出した後に
試験溶液上での拡散を可能にするように、寒天プレートを５℃で一晩保存した。
次いで、寒天プレートを、微生物増殖に適した温度（３７℃）でインキュベート
した。微生物を、寒天プレートの非阻害領域で十分に増殖させた後、阻害の程度
を、塗布領域から直交する二方向（ｍｍ）に広がる増殖の無い領域（または増殖
が減少した領域）として測定した。
、試料を実施例８に記載のように試験プレートに塗布した。試料を、前記ように
調製した原液からの適切な希釈液として調製した。試料リングを取り出した後に
試験溶液上での拡散を可能にするように、寒天プレートを５℃で一晩保存した。
次いで、寒天プレートを、微生物増殖に適した温度（３７℃）でインキュベート
した。微生物を、寒天プレートの非阻害領域で十分に増殖させた後、阻害の程度
を、塗布領域から直交する二方向（ｍｍ）に広がる増殖の無い領域（または増殖
が減少した領域）として測定した。
【００７２】
【表２】
【００７３】 表２から、ＰＳ誘導体は、拡散試験において細菌および真菌に対して十分に活
性があり、この効果は明らかに用量依存的であると思われる。
性があり、この効果は明らかに用量依存的であると思われる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｃ 59/06 Ｃ０７Ｃ 59/06 59/08 59/08 229/24 229/24 Ｆターム(参考） 4C083 AC541 CC01 EE09 4C206 AA02 FA03 MA01 MA04 NA05 ZB35 4H006 AA01 AA03 AB20 AB29 AC90 BB14 BB16 BC31 BN10 BU50
Claims (12)
- 【請求項１】 スフィンゴイド塩基の塩である、スフィンゴイド塩基誘導体
。 - 【請求項２】 前記塩のアニオンが親水性酸から誘導される、請求項１に記
載のスフィンゴイド塩基誘導体。 - 【請求項３】 前記親水性酸は親水性有機酸または鉱酸である、請求項２に
記載のスフィンゴイド塩基誘導体。 - 【請求項４】 前記親水性酸は、乳酸、グリコール酸、リンゴ酸、ピルビン
酸、コハク酸、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、およびピロ
グルタミン酸からなる群から選択される、請求項３に記載のスフィンゴイド塩基
誘導体。 - 【請求項５】 前記親水性酸は、乳酸、グリコール酸、ピログルタミン酸、
クエン酸、および塩酸からなる群から選択される、請求項３に記載のスフィンゴ
イド塩基誘導体。 - 【請求項６】 請求項１に記載のスフィンゴイド塩基誘導体を調製するため
のプロセスであって、少なくとも１当量の酸を、適切な溶媒に溶かした前記スフ
ィンゴイド塩基の溶液に添加することと、反応混合物から結晶状のスフィンゴイ
ド塩基塩を回収することを含む、プロセス。 - 【請求項７】 前記溶媒はエタノールまたはメチルイソブチルケトンである
、請求項６に記載のプロセス。 - 【請求項８】 請求項１に記載のスフィンゴイド塩基誘導体を含む局所使用
のための組成物。 - 【請求項９】 化粧用組成物である、請求項８に記載の組成物。
- 【請求項１０】 前記スフィンゴイド塩基誘導体を、０．００１〜５ｗｔ％
、好ましくは０．００５〜５ｗｔ％、より好ましくは０．０１〜２．５ｗｔ％、
最も好ましくは０．０２〜１ｗｔ％、特に好ましくは０．０２〜０．５ｗｔ％の
範囲に及ぶ濃度で含む、請求項８または９に記載の組成物。 - 【請求項１１】 医薬品として使用するための請求項１に記載のスフィンゴ
イド塩基誘導体。 - 【請求項１２】 抗菌治療および／または抗炎症治療に使用するための医薬
品を製造するための請求項１に記載のスフィンゴイド塩基誘導体の使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99200700 | 1999-03-09 | ||
| EP99200700.5 | 1999-03-09 | ||
| PCT/EP2000/002191 WO2000053568A1 (en) | 1999-03-09 | 2000-03-09 | Sphingoid base derivatives and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002539110A true JP2002539110A (ja) | 2002-11-19 |
Family
ID=8239966
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000604009A Pending JP2002539110A (ja) | 1999-03-09 | 2000-03-09 | スフィンゴイド塩基誘導体およびその使用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1159256A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002539110A (ja) |
| KR (1) | KR20010108331A (ja) |
| CN (1) | CN1360567A (ja) |
| BR (1) | BR0009265A (ja) |
| WO (1) | WO2000053568A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019510811A (ja) * | 2016-04-04 | 2019-04-18 | オキュソフト インコーポレイテッドＯＣｕＳＯＦＴ，Ｉｎｃ． | 眼瞼衛生を維持するための組成物、キット及び方法 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002060405A1 (en) * | 2001-01-29 | 2002-08-08 | Cosmoferm B.V. | Veterinary dermatologic composition comprising a sphingoid base and/or a sphingoid base derivative |
| EP1287815A1 (en) * | 2001-08-31 | 2003-03-05 | Cosmoferm B.V. | Use of a sphingoid base for inhibiting ceramidase activity |
| DE60117900D1 (de) * | 2001-09-05 | 2006-05-11 | Charmzone Co | Phytosphingosinderivate mit Antitumorwirkung |
| FR2836630B1 (fr) * | 2002-03-01 | 2004-07-09 | Lvmh Rech | Utilisation cosmetique de la phytosphingosine comme agent amincissant et compositions cosmetiques contenant de la phytosphingosine |
| WO2003092667A1 (en) * | 2002-05-02 | 2003-11-13 | Doosan Corporation | Composition for treating cancer containing n,n-dimethylphytosphingosine |
| DE10255554A1 (de) | 2002-11-28 | 2004-06-17 | Goldschmidt Ag | Emulgator-Wachs-Gele auf Wasserbasis |
| FR2855048B1 (fr) * | 2003-05-19 | 2006-07-21 | Oreal | Composition comprenant un precurseur de ceramide a base phytosphingosine et un activeur de la voie des 4-hydroxylases, utilisation pour renforcer la fonction barriere de la peau |
| FR2855049B1 (fr) * | 2003-05-19 | 2006-07-21 | Oreal | Composition comprenant un precurseur de ceramide a base 6-hydroxy-sphingenine et un activeur de la voie des 6-hydroxylases, utilisation pour renforcer la fonction barriere de la peau |
| KR101288776B1 (ko) | 2011-12-07 | 2013-07-22 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 신규한 피토스핑고신 유도체 및 이를 포함하는 염증성 피부질환과 피부과다각화증질환 예방 및 개선용 화장료 조성물 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1235162B (it) * | 1988-12-02 | 1992-06-22 | Fidia Farmaceutici | Derivati di lisosfingolipidi |
| US5190876A (en) * | 1988-12-27 | 1993-03-02 | Emory University | Method of modifying cellular differentiation and function and compositions therefor |
| CA2131184A1 (en) * | 1992-04-03 | 1993-10-14 | Jan Willem Hubert Smeets | Selective n-acylation of amino alcohols |
| US5723497A (en) * | 1993-03-17 | 1998-03-03 | Kao Corporation | Amine derivative and dermatologic preparation containing the same |
| GB2323594A (en) * | 1997-03-25 | 1998-09-30 | Victor Martin | 2-amino-alkanoic acid derivatives, 2-amino alcohols and diamines |
| JP2000513745A (ja) * | 1997-05-02 | 2000-10-17 | ギスト ブロカデス ベスローテン フェンノートシャップ | 局所用抗菌組成物 |
-
2000
- 2000-03-09 BR BR0009265-7A patent/BR0009265A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-03-09 CN CN00807004A patent/CN1360567A/zh active Pending
- 2000-03-09 JP JP2000604009A patent/JP2002539110A/ja active Pending
- 2000-03-09 KR KR1020017011411A patent/KR20010108331A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-03-09 EP EP00907673A patent/EP1159256A1/en not_active Withdrawn
- 2000-03-09 WO PCT/EP2000/002191 patent/WO2000053568A1/en not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019510811A (ja) * | 2016-04-04 | 2019-04-18 | オキュソフト インコーポレイテッドＯＣｕＳＯＦＴ，Ｉｎｃ． | 眼瞼衛生を維持するための組成物、キット及び方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2000053568A1 (en) | 2000-09-14 |
| EP1159256A1 (en) | 2001-12-05 |
| KR20010108331A (ko) | 2001-12-07 |
| BR0009265A (pt) | 2001-11-20 |
| CN1360567A (zh) | 2002-07-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100541271B1 (ko) | 국소적 사용을 위한 항균조성물 | |
| EP0749960B1 (en) | Process for the synthesis of cationic surfactants obtained from the condensation of fatty acids with esterified dibasic aminoacids | |
| US5696169A (en) | Antibacterial and antifungal activity method, therapeutic method of infectious diseases and preserving method of cosmetics | |
| JP2002539110A (ja) | スフィンゴイド塩基誘導体およびその使用 | |
| EP0049858A2 (de) | Verfahren zur Herstellung von N-substituierten Derivaten des 1-Desoxynojirimycins | |
| JP2002532531A (ja) | シス−９，トランス−１１リノール酸含有スキンケア組成物 | |
| JP2011522808A (ja) | 相乗的な保存剤混合物 | |
| DE60221126T2 (de) | Verbessertes verfahren zum nachweis und zur identifizierung eines eine infektion verursachenden mikroorganismus | |
| DE68909062T2 (de) | Verfahren und Mittel zur Verhinderung der Färbung der Zähne. | |
| JPH07107037B2 (ja) | ５α−リダクターゼ阻害活性を有するベンゾイルアミノフェノキシブタン酸誘導体およびそれらを有効成分として含有する薬剤 | |
| EP0288352A1 (fr) | Dérivés aromatiques, leur préparation et leur utilisation comme antimicrobiens | |
| US6734210B2 (en) | Therapeutically improved salts of azelaic acid | |
| DE69120318T2 (de) | Esterase von Serratia und Verfahren zur Herstellung | |
| CA1231046A (en) | Composition of matter containing imidazolidinyl urea and parabens | |
| CN114044803B (zh) | 一种乙酰基六肽-1衍生物及其应用 | |
| WO2023018694A1 (en) | Compositions, formulations, and methods for hair treatment | |
| EP1892236B9 (en) | Iodide salts of dimethylaminoethanol fatty acid esters with bacteriostatic, mycostatic, yeaststatic and/or microbicide activity for use in cleansing or purifying formulations | |
| JP3262780B2 (ja) | フィトスフィンゴシン水溶液、その製造方法及び使用方法 | |
| JPH04187618A (ja) | 皮膚外用剤 | |
| JP4349809B2 (ja) | コラーゲン生成促進剤 | |
| KR20160116690A (ko) | 파이토스핑고신 유도체 및 이를 함유하는 조성물 | |
| JP2013533307A (ja) | デアニン誘導体、その製造方法及びその抗にきび用としての用途 | |
| CN117567270A (zh) | 一种醇胺-壬二酸超分子离子盐及其制备和应用 | |
| KR102080267B1 (ko) | 홍화유 효소반응 혼합물을 함유하는 모발 트리트먼트 화장료 조성물 | |
| RU2504541C1 (ru) | 2-нитрогетерилтиоцианаты для лечения грибковых инфекций, фармацевтическая композиция для местного применения |