JP2002539091A - ヒト成長ホルモンの精製方法 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたは両者からヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を精製する方法。該方法は、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるいは殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下で、天然ｈＧＨが富化された金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成する工程、および脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を単離する工程を含む。該方法は、さらに該複合体から精製ｈＧＨを遊離する工程を含みうる。あるいはまた、金属カチオン複合化ｈＧＨは、ｈＧＨの徐放のために生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。精製方法は、所望のｈＧＨ純度に依存して、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを用いて１回以上行なわれうる。
Description
【０００１】 発明の背景 ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、下垂体より分泌されるタンパク質であり、１
９１個のアミノ酸からなり、約２１，５００の分子量を有する。ｈＧＨはまた、
組換え遺伝子工学により作製されうる。組換え的に得られる著名な（of note ）
２種は、１９１アミノ酸天然種（ソマトロピン）、および１９２アミノ酸Ｎ−末
端メチオニン（ｍｅｔ）種（ソマトレム）である。ｈＧＨは、成長可能な全身体
組織で成長を引き起こす。
９１個のアミノ酸からなり、約２１，５００の分子量を有する。ｈＧＨはまた、
組換え遺伝子工学により作製されうる。組換え的に得られる著名な（of note ）
２種は、１９１アミノ酸天然種（ソマトロピン）、および１９２アミノ酸Ｎ−末
端メチオニン（ｍｅｔ）種（ソマトレム）である。ｈＧＨは、成長可能な全身体
組織で成長を引き起こす。
【０００２】 ｈＧＨは、典型的には、下垂体低下性小人症（hypopituitary dwarfism）に罹
患した患者を治療するのに使用される。ｈＧＨは、例えば、ｈＧＨの適切な血清
レベルを維持するために、１週間に３回または１日１回、皮下のボーラスとして
患者に投与されうる。ｈＧＨを慢性的に受ける患者に対して、この頻繁な注入方
法は、不十分な患者コンプライアンスをしばしば生じる。繰り返しの注入の使用
に代わるものが、生体適合性ポリマーのポリマーマトリックスおよびポリマー内
に分散された生物学的に活性な、金属カチオン安定化ｈＧＨの粒子を含有してな
る徐放性デバイスの使用に見出され得、それはJohnson らの米国特許第５，６６
７，８０８号明細書に記載されており、その全内容は参照により本明細書に取り
込まれる。
患した患者を治療するのに使用される。ｈＧＨは、例えば、ｈＧＨの適切な血清
レベルを維持するために、１週間に３回または１日１回、皮下のボーラスとして
患者に投与されうる。ｈＧＨを慢性的に受ける患者に対して、この頻繁な注入方
法は、不十分な患者コンプライアンスをしばしば生じる。繰り返しの注入の使用
に代わるものが、生体適合性ポリマーのポリマーマトリックスおよびポリマー内
に分散された生物学的に活性な、金属カチオン安定化ｈＧＨの粒子を含有してな
る徐放性デバイスの使用に見出され得、それはJohnson らの米国特許第５，６６
７，８０８号明細書に記載されており、その全内容は参照により本明細書に取り
込まれる。
【０００３】 発明の要約 金属カチオン複合化ｈＧＨの形成は、分解産物、特にｈＧＨの脱アミド型およ
び酸化型の存在により阻害されることがわかっている。したがって、天然ｈＧＨ
の複合体形成は、タンパク質の分解によって生じる脱アミド形および酸化形の複
合体形成より、より完全である。前記見解より、本発明は、脱アミド化ｈＧＨ、
酸化ｈＧＨまたは両者からヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を精製する方法に関する
。本方法は、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるい
は殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下で、天然ｈＧＨが富化された（
enriched）金属カチオン複合化ｈＧＨ（metal cation-complexed hGH）組成物を
形成する工程、および脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから
金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を単離する工程を含む。本方法は、さらに複合
体からｈＧＨを遊離する方法を含みうる。あるいはまた、金属カチオン複合化ｈ
ＧＨは、ｈＧＨの徐放のために生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。本
方法は、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨで１回以上行な
われうる。本方法は、ｈＧＨに対して所望のレベルの純度が得られるまで、繰り
返されうる。
び酸化型の存在により阻害されることがわかっている。したがって、天然ｈＧＨ
の複合体形成は、タンパク質の分解によって生じる脱アミド形および酸化形の複
合体形成より、より完全である。前記見解より、本発明は、脱アミド化ｈＧＨ、
酸化ｈＧＨまたは両者からヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を精製する方法に関する
。本方法は、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるい
は殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下で、天然ｈＧＨが富化された（
enriched）金属カチオン複合化ｈＧＨ（metal cation-complexed hGH）組成物を
形成する工程、および脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから
金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を単離する工程を含む。本方法は、さらに複合
体からｈＧＨを遊離する方法を含みうる。あるいはまた、金属カチオン複合化ｈ
ＧＨは、ｈＧＨの徐放のために生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。本
方法は、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨで１回以上行な
われうる。本方法は、ｈＧＨに対して所望のレベルの純度が得られるまで、繰り
返されうる。
【０００４】 特定の態様において、天然ｈＧＨ、ならびに脱アミド化ｈＧＨおよび酸化ｈＧ
Ｈの一方または両者を含有するｈＧＨ組成物の水溶液を調製する工程、脱アミド
化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるいは殆ど金属カチオンと
複合体を形成しない条件下で、金属カチオン成分を該水溶液に添加し、それによ
り、該ｈＧＨの水性組成物と比べて天然ｈＧＨが富化された金属カチオン複合化
ｈＧＨ組成物を形成する工程により、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたは両者
から天然ヒト成長ホルモンが精製される。金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を次
いで沈澱させ、沈澱物が単離されうる。本方法は、さらに金属カチオン複合化ｈ
ＧＨ組成物からｈＧＨを遊離する工程を含みうる。本方法は、所望のレベルの純
度に依存して、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨで１回以
上反復されうる。
Ｈの一方または両者を含有するｈＧＨ組成物の水溶液を調製する工程、脱アミド
化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるいは殆ど金属カチオンと
複合体を形成しない条件下で、金属カチオン成分を該水溶液に添加し、それによ
り、該ｈＧＨの水性組成物と比べて天然ｈＧＨが富化された金属カチオン複合化
ｈＧＨ組成物を形成する工程により、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたは両者
から天然ヒト成長ホルモンが精製される。金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を次
いで沈澱させ、沈澱物が単離されうる。本方法は、さらに金属カチオン複合化ｈ
ＧＨ組成物からｈＧＨを遊離する工程を含みうる。本方法は、所望のレベルの純
度に依存して、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨで１回以
上反復されうる。
【０００５】 他の態様において、本発明の方法により調製された金属カチオン複合化ｈＧＨ
組成物は、ヒト成長ホルモンの徐放のために生体適合性ポリマー内にカプセル化
され得、例えば、それはJohnson らの米国特許第５，６６７，８０８号明細書に
記載されており、その全内容は参照により本明細書に取り込まれる。
組成物は、ヒト成長ホルモンの徐放のために生体適合性ポリマー内にカプセル化
され得、例えば、それはJohnson らの米国特許第５，６６７，８０８号明細書に
記載されており、その全内容は参照により本明細書に取り込まれる。
【０００６】 本発明の方法は、ｈＧＨの精製、とりわけ脱アミド化および酸化不純物を除去
するための簡便でコスト効率のよい方法を提供する。
するための簡便でコスト効率のよい方法を提供する。
【０００７】 発明の詳細な説明 本明細書で使用される用語「ヒト成長ホルモン」または「ｈＧＨ」は、天然源
からの抽出および精製を含む方法により、ならびに組換え細胞培養系により産生
されるヒト成長ホルモンを表す。その配列および特性は、例えば、Hormone Drug
s, Gueriguian ら、U.S.P. Convention, Rockville, MD (1982) に記載されてい
る。該用語はまた、例えば全配列において１または複数のアミノ酸が異なる生物
学的に活性なヒト成長ホルモン等価物を包含する。さらに、本明細書において使
用する該用語は、ｈＧＨの置換、欠失および挿入アミノ酸バリアント、または翻
訳後修飾体を包含することが意図される。注目すべき２つの種は、一般に組換え
により得られる、１９１個のアミノ酸からなる天然種（ソマトロピン(somatropi
n)）および１９２個のアミノ酸からなるＮ−末端メチオニン（ｍｅｔ）種（ソマ
トレム(somatrem)）である。
からの抽出および精製を含む方法により、ならびに組換え細胞培養系により産生
されるヒト成長ホルモンを表す。その配列および特性は、例えば、Hormone Drug
s, Gueriguian ら、U.S.P. Convention, Rockville, MD (1982) に記載されてい
る。該用語はまた、例えば全配列において１または複数のアミノ酸が異なる生物
学的に活性なヒト成長ホルモン等価物を包含する。さらに、本明細書において使
用する該用語は、ｈＧＨの置換、欠失および挿入アミノ酸バリアント、または翻
訳後修飾体を包含することが意図される。注目すべき２つの種は、一般に組換え
により得られる、１９１個のアミノ酸からなる天然種（ソマトロピン(somatropi
n)）および１９２個のアミノ酸からなるＮ−末端メチオニン（ｍｅｔ）種（ソマ
トレム(somatrem)）である。
【０００８】 ｈＧＨは、例えば、脱アミド化、メチオニン残基の酸化、凝集、およびペプチ
ド骨格のクリッピング(clipping)を含むいくつかの分解経路を経る。本明細書に
記載の精製方法は、分解産物、特に脱アミド化および酸化に起因する分解産物を
除去するためのものである。
ド骨格のクリッピング(clipping)を含むいくつかの分解経路を経る。本明細書に
記載の精製方法は、分解産物、特に脱アミド化および酸化に起因する分解産物を
除去するためのものである。
【０００９】 本明細書で使用される用語「脱アミド化」は、ポリペプチドまたはタンパク質
にアミノ酸であるグルタミンおよびアスパラギンが存在するとき、これらのアミ
ノ酸に見られる側鎖のアミドの加水分解である。脱アミド化は、ｈＧＨなどの多
くのタンパク質の分解の主なルートである。脱アミド化は、イミド経路において
、ほぼ排他的に起こる。ポリペプチドまたはタンパク質にグルタミンおよびアス
パラギンが存在するとき、溶媒加水分解もまた、これらの側鎖のアミドの脱アミ
ド化を引き起こし得るが、この経路はあまり一般的でない。脱アミド化の最も一
般的な部位は、ｈＧＨアミノ酸配列の１４９位および１５２位に見られるアスパ
ラギン残基である（例えば、Perlman, Stability and Characterization of Pro
tein; Peptide Drugs, Chapter 1, p 28, Plenum Press, 1993を参照のこと）。
にアミノ酸であるグルタミンおよびアスパラギンが存在するとき、これらのアミ
ノ酸に見られる側鎖のアミドの加水分解である。脱アミド化は、ｈＧＨなどの多
くのタンパク質の分解の主なルートである。脱アミド化は、イミド経路において
、ほぼ排他的に起こる。ポリペプチドまたはタンパク質にグルタミンおよびアス
パラギンが存在するとき、溶媒加水分解もまた、これらの側鎖のアミドの脱アミ
ド化を引き起こし得るが、この経路はあまり一般的でない。脱アミド化の最も一
般的な部位は、ｈＧＨアミノ酸配列の１４９位および１５２位に見られるアスパ
ラギン残基である（例えば、Perlman, Stability and Characterization of Pro
tein; Peptide Drugs, Chapter 1, p 28, Plenum Press, 1993を参照のこと）。
【００１０】 本明細書で使用される用語「酸化」は、ｈＧＨ配列に存在するメチオニン、シ
ステインおよび／またはトリプトファン残基の酸化をいう。酸化は、中性ｐＨお
よび塩基性ｐＨの両方で促進される。メチオニン残基のジスルフィド結合は、ｈ
ＧＨ配列における主な酸化部位である（例えば、Perlman, Stability and Chara
cterization of Protein; Peptide Drugs, Chapter 1, p 28, Plenum Press, 19
93を参照のこと）。
ステインおよび／またはトリプトファン残基の酸化をいう。酸化は、中性ｐＨお
よび塩基性ｐＨの両方で促進される。メチオニン残基のジスルフィド結合は、ｈ
ＧＨ配列における主な酸化部位である（例えば、Perlman, Stability and Chara
cterization of Protein; Peptide Drugs, Chapter 1, p 28, Plenum Press, 19
93を参照のこと）。
【００１１】 本発明は、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたは両者からのヒト成長ホルモン
（ｈＧＨ）の精製方法に関する。該方法は、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもし
くは両者の全てが全く、あるいは殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下
で、天然ｈＧＨが富化された金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成する工程、
および脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから金属カチオン複
合化ｈＧＨ組成物を単離する工程を含む。該方法は、該複合体からｈＧＨを遊離
させる工程をさらに含みうる。あるいはまた、金属カチオン複合化ｈＧＨは、ｈ
ＧＨの徐放のための生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。該方法は、金
属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを用いて１回以上行われう
る。該方法が反復される回数は、ｈＧＨに望まれる純度レベルに基づいて決定さ
れうる。
（ｈＧＨ）の精製方法に関する。該方法は、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもし
くは両者の全てが全く、あるいは殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下
で、天然ｈＧＨが富化された金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成する工程、
および脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから金属カチオン複
合化ｈＧＨ組成物を単離する工程を含む。該方法は、該複合体からｈＧＨを遊離
させる工程をさらに含みうる。あるいはまた、金属カチオン複合化ｈＧＨは、ｈ
ＧＨの徐放のための生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。該方法は、金
属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを用いて１回以上行われう
る。該方法が反復される回数は、ｈＧＨに望まれる純度レベルに基づいて決定さ
れうる。
【００１２】 特定の態様では、天然ヒト成長ホルモンは、天然ｈＧＨ、ならびに脱アミド化
ｈＧＨおよび酸化ｈＧＨの一方または両方を含有するｈＧＨ組成物の水溶液を調
製し、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるいは殆ど
金属カチオン成分と複合体を形成しない条件下で、金属カチオン成分を該水溶液
に添加し、それにより、該ｈＧＨ組成物の水溶液と比べて天然ｈＧＨが富化され
た金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成することにより、脱アミド化ｈＧＨ、
酸化ｈＧＨまたは両者から精製される。次いで、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成
物を沈殿させ、沈殿物を単離しうる。該方法は、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成
物からｈＧＨを遊離させる工程をさらに含みうる。該方法は、所望の純度レベル
に応じて、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを用いて１回
以上反復されうる。
ｈＧＨおよび酸化ｈＧＨの一方または両方を含有するｈＧＨ組成物の水溶液を調
製し、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるいは殆ど
金属カチオン成分と複合体を形成しない条件下で、金属カチオン成分を該水溶液
に添加し、それにより、該ｈＧＨ組成物の水溶液と比べて天然ｈＧＨが富化され
た金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成することにより、脱アミド化ｈＧＨ、
酸化ｈＧＨまたは両者から精製される。次いで、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成
物を沈殿させ、沈殿物を単離しうる。該方法は、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成
物からｈＧＨを遊離させる工程をさらに含みうる。該方法は、所望の純度レベル
に応じて、金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを用いて１回
以上反復されうる。
【００１３】 別の態様では、本発明の方法に従って調製される金属カチオン複合化ｈＧＨ組
成物は、例えば、Johnson らの米国特許第５，６６７，８０８号明細書（その全
内容は参照により本明細書に取り込まれる）に記載されるヒト成長ホルモンの徐
放用生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。
成物は、例えば、Johnson らの米国特許第５，６６７，８０８号明細書（その全
内容は参照により本明細書に取り込まれる）に記載されるヒト成長ホルモンの徐
放用生体適合性ポリマー内にカプセル化されうる。
【００１４】 適当な金属カチオンには、生体適合性金属カチオン成分に含まれる金属カチオ
ンが挙げられる。金属カチオン成分は、カチオン成分が使用量においてレシピエ
ントに対して無毒性であり、かつ注入部位での免疫学的応答など、レシピエント
の身体に対して有意な有害効果または不都合な効果を呈しない場合に生体適合性
である。また、金属カチオンは、使用条件下においてｈＧＨを有意に酸化すべき
でない。好ましい態様では、金属カチオンは、多価、例えば+ ２価以上である。
好適な金属カチオンの例には、Ｋ+ 、Ｚｎ+2、Ｍｇ+2およびＣａ+2が挙げられる
が、これらに限定されない。好適な金属カチオンはまた、Ｃｕ+2などの遷移金属
のカチオンを含む。
ンが挙げられる。金属カチオン成分は、カチオン成分が使用量においてレシピエ
ントに対して無毒性であり、かつ注入部位での免疫学的応答など、レシピエント
の身体に対して有意な有害効果または不都合な効果を呈しない場合に生体適合性
である。また、金属カチオンは、使用条件下においてｈＧＨを有意に酸化すべき
でない。好ましい態様では、金属カチオンは、多価、例えば+ ２価以上である。
好適な金属カチオンの例には、Ｋ+ 、Ｚｎ+2、Ｍｇ+2およびＣａ+2が挙げられる
が、これらに限定されない。好適な金属カチオンはまた、Ｃｕ+2などの遷移金属
のカチオンを含む。
【００１５】 典型的には、ｈＧＨに対する金属カチオン成分のモル比は、ｈＧＨに複合化す
る金属カチオンで、約１０：１以下である。例えば、８：１、６：１、４：１お
よび２：１などの約１：１〜約１０：１である。しかしながら、所望レベルの天
然ｈＧＨとの複合体形成を与える、ｈＧＨに対する金属カチオン成分の比は、本
明細書に記載の教示を用いる当業者により決定されうる。
る金属カチオンで、約１０：１以下である。例えば、８：１、６：１、４：１お
よび２：１などの約１：１〜約１０：１である。しかしながら、所望レベルの天
然ｈＧＨとの複合体形成を与える、ｈＧＨに対する金属カチオン成分の比は、本
明細書に記載の教示を用いる当業者により決定されうる。
【００１６】 ｈＧＨとの複合体形成に使用される好ましい金属カチオンはＺｎ+2である。よ
り好ましい態様では、Ｚｎ+2カチオンを含む金属カチオン成分のｈＧＨに対する
モル比は約６：１である。
り好ましい態様では、Ｚｎ+2カチオンを含む金属カチオン成分のｈＧＨに対する
モル比は約６：１である。
【００１７】 ｈＧＨの複合体形成のための金属カチオンの好適性は、ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動、等電点電気泳動、逆相クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、および金属
カチオン−ｈＧＨ複合体から遊離後のｈＧＨの有効性試験などの種々の技術を実
施することにより当業者により決定されうる。
ル電気泳動、等電点電気泳動、逆相クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、および金属
カチオン−ｈＧＨ複合体から遊離後のｈＧＨの有効性試験などの種々の技術を実
施することにより当業者により決定されうる。
【００１８】 金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を調製するため、ｈＧＨを適当な水性溶媒中
で少なくとも１種の適切な金属カチオン成分と、金属カチオンとｈＧＨとの複合
体の形成に適したｐＨ条件下で混合する。典型的には、複合化ｈＧＨは、雲状沈
殿物の形態であり、溶媒中に懸濁させる。好ましい態様では、ｈＧＨは、Ｚｎ+2 と複合体を形成する。さらにより好ましい態様では、Ｚｎ+2−ｈＧＨ複合体は、
金属カチオン成分として酢酸亜鉛を用いて調製される。
で少なくとも１種の適切な金属カチオン成分と、金属カチオンとｈＧＨとの複合
体の形成に適したｐＨ条件下で混合する。典型的には、複合化ｈＧＨは、雲状沈
殿物の形態であり、溶媒中に懸濁させる。好ましい態様では、ｈＧＨは、Ｚｎ+2 と複合体を形成する。さらにより好ましい態様では、Ｚｎ+2−ｈＧＨ複合体は、
金属カチオン成分として酢酸亜鉛を用いて調製される。
【００１９】 ｈＧＨの複合体を形成するための好適なｐＨ条件には、典型的には約６．０〜
約９．０の間のｐＨ値が含まれる。好適なｐＨ条件は、典型的には、重炭酸ナト
リウムなどの水性バッファーを溶媒として使用することにより達成される。
約９．０の間のｐＨ値が含まれる。好適なｐＨ条件は、典型的には、重炭酸ナト
リウムなどの水性バッファーを溶媒として使用することにより達成される。
【００２０】 好適な溶媒は、ｈＧＨおよび金属カチオン成分のそれぞれが、水性重炭酸ナト
リウムバッファー中などにおいて少なくともわずかに可溶性であるものである。
水性溶媒について、使用される水は、脱イオン水または注射用水（ＷＦＩ）のい
ずれかであることが好ましい。
リウムバッファー中などにおいて少なくともわずかに可溶性であるものである。
水性溶媒について、使用される水は、脱イオン水または注射用水（ＷＦＩ）のい
ずれかであることが好ましい。
【００２１】 ｈＧＨは、金属カチオン成分と接触させる前は固体状または溶解された状態で
ありうることが理解される。また、金属カチオン成分は、ｈＧＨと接触させる前
は固体状または溶解された状態でありうることも理解される。好ましい態様では
、ｈＧＨの緩衝化水溶液は、金属カチオン成分の水溶液と混合される。ｈＧＨお
よび金属カチオン成分はともに、複合体を形成するときは固体形状でありえない
ことを理解されたい。
ありうることが理解される。また、金属カチオン成分は、ｈＧＨと接触させる前
は固体状または溶解された状態でありうることも理解される。好ましい態様では
、ｈＧＨの緩衝化水溶液は、金属カチオン成分の水溶液と混合される。ｈＧＨお
よび金属カチオン成分はともに、複合体を形成するときは固体形状でありえない
ことを理解されたい。
【００２２】 典型的には、複合化ｈＧＨは、雲状沈殿物の形態であり、溶媒中に懸濁させる
。さらにより好ましい態様では、ｈＧＨはＺｎ+2と複合体を形成する。次いで、
複合化ｈＧＨを、通常の単離技術を用いて非複合化ｈＧＨから単離しうる。例え
ば、複合体が固体として存在する場合、任意の固体／液体分離手段、例えば、遠
心分離または濾過を用いることができる。
。さらにより好ましい態様では、ｈＧＨはＺｎ+2と複合体を形成する。次いで、
複合化ｈＧＨを、通常の単離技術を用いて非複合化ｈＧＨから単離しうる。例え
ば、複合体が固体として存在する場合、任意の固体／液体分離手段、例えば、遠
心分離または濾過を用いることができる。
【００２３】 任意で、ｈＧＨと競合して、ｈＧＨとの複合体を形成している金属カチオンと
の不溶性複合体を形成するアニオン含有アニオン性成分を添加することにより、
金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から精製ｈＧＨを遊離させることができる。例
えば、アニオン性成分は、リン酸ナトリウムであり得、その場合、リン酸アニオ
ンがｈＧＨと競合してｈＧＨとの複合体を形成する金属カチオンを含有する不溶
性複合体を形成する。例えば、ｈＧＨ複合体の金属カチオンが亜鉛である場合、
不溶性の複合体としてＺｎＰＯ4 が形成されうる。アニオン性成分は、固体とし
て、または溶液状のいずれかで、金属カチオン複合化ｈＧＨの水性懸濁液に添加
することができ、ｈＧＨの金属カチオンとアニオン性成分のアニオンとの不溶性
複合体の形成がもたらされる。次いで、精製ｈＧＨを不溶性複合体から分離し、
凍結乾燥などにより乾燥し、精製形態のｈＧＨを得る。精製ｈＧＨを凍結乾燥す
るための許容されうる手段には、当該技術分野において公知のものが含まれる。
の不溶性複合体を形成するアニオン含有アニオン性成分を添加することにより、
金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から精製ｈＧＨを遊離させることができる。例
えば、アニオン性成分は、リン酸ナトリウムであり得、その場合、リン酸アニオ
ンがｈＧＨと競合してｈＧＨとの複合体を形成する金属カチオンを含有する不溶
性複合体を形成する。例えば、ｈＧＨ複合体の金属カチオンが亜鉛である場合、
不溶性の複合体としてＺｎＰＯ4 が形成されうる。アニオン性成分は、固体とし
て、または溶液状のいずれかで、金属カチオン複合化ｈＧＨの水性懸濁液に添加
することができ、ｈＧＨの金属カチオンとアニオン性成分のアニオンとの不溶性
複合体の形成がもたらされる。次いで、精製ｈＧＨを不溶性複合体から分離し、
凍結乾燥などにより乾燥し、精製形態のｈＧＨを得る。精製ｈＧＨを凍結乾燥す
るための許容されうる手段には、当該技術分野において公知のものが含まれる。
【００２４】 あるいはまた、金属カチオン複合化ｈＧＨは、任意の公知のカプセル化方法を
用い、徐放のための生体適合性ポリマーマトリックス内にカプセル化することが
できる。好ましい態様では、カプセル化は、Johnson らの米国特許第５，６６７
，８０８号明細書（その全内容は参照により本明細書に取り込まれる）に記載さ
れる方法に従って達成される。徐放性組成物の形成方法は、Gombotz らに付与さ
れた米国特許第５，０１９，４００号明細書、および１９９５年５月１８日に出
願された同時係属中の米国特許出願第０８／４４３，７２６号（それらの全教示
は参照により本明細書に取り込まれる）にさらに記載されている。これらの微小
粒子形成法は、相分離などの他の方法と比べて、徐放性組成物の調製に必要とさ
れる活性成分の量を低減し得る。
用い、徐放のための生体適合性ポリマーマトリックス内にカプセル化することが
できる。好ましい態様では、カプセル化は、Johnson らの米国特許第５，６６７
，８０８号明細書（その全内容は参照により本明細書に取り込まれる）に記載さ
れる方法に従って達成される。徐放性組成物の形成方法は、Gombotz らに付与さ
れた米国特許第５，０１９，４００号明細書、および１９９５年５月１８日に出
願された同時係属中の米国特許出願第０８／４４３，７２６号（それらの全教示
は参照により本明細書に取り込まれる）にさらに記載されている。これらの微小
粒子形成法は、相分離などの他の方法と比べて、徐放性組成物の調製に必要とさ
れる活性成分の量を低減し得る。
【００２５】 参照する方法において、金属カチオン複合化ｈＧＨ、または溶液状もしくは粒
子分散液として存在しうる他の活性成分をも含む生体適合性ポリマーの溶液は、
液滴にするために処理され、その場合、液滴の少なくとも有意な部分がポリマー
、ポリマー溶媒および活性剤、例えば、金属カチオン複合化ｈＧＨを含む。次い
で、微小粒子を形成するのに適した手段により、これらの液滴を凍結する。液滴
を形成するのに適した手段には、超音波ノズル、加圧ノズル、Rayleighジェット
、または溶液から液滴を作製するための他の公知の手段に溶液を供する（direct
）工程が含まれる。
子分散液として存在しうる他の活性成分をも含む生体適合性ポリマーの溶液は、
液滴にするために処理され、その場合、液滴の少なくとも有意な部分がポリマー
、ポリマー溶媒および活性剤、例えば、金属カチオン複合化ｈＧＨを含む。次い
で、微小粒子を形成するのに適した手段により、これらの液滴を凍結する。液滴
を形成するのに適した手段には、超音波ノズル、加圧ノズル、Rayleighジェット
、または溶液から液滴を作製するための他の公知の手段に溶液を供する（direct
）工程が含まれる。
【００２６】 液滴を凍結して微小粒子を形成するのに適した手段には、液体アルゴンまたは
液体窒素などの液化ガス内またはその近傍に液滴を供して凍結微小液滴を形成し
、次いで液体ガスから分離する工程を含む。次いで、凍結した微小液滴を、エタ
ノール、エタノールとヘキサンの組み合わせ、ペンタンまたはオイルなどの液体
または固体の非溶媒に曝露する。
液体窒素などの液化ガス内またはその近傍に液滴を供して凍結微小液滴を形成し
、次いで液体ガスから分離する工程を含む。次いで、凍結した微小液滴を、エタ
ノール、エタノールとヘキサンの組み合わせ、ペンタンまたはオイルなどの液体
または固体の非溶媒に曝露する。
【００２７】 凍結した微小液滴中の溶媒は、固体および／または液体として非溶媒中に抽出
し、活性成分、例えば、ｈＧＨを含有する微小粒子を形成する。
し、活性成分、例えば、ｈＧＨを含有する微小粒子を形成する。
【００２８】 本発明の徐放性組成物のポリマーマトリックスを形成するのに好適なポリマー
は、生分解性もしくは非生分解性のポリマーまたはそれらのブレンドもしくはコ
ポリマーのいずれかでありうる生体適合性ポリマーである。ポリマーおよびポリ
マーの任意の分解生成物がレシピエントに対して無毒性であり、かつ注入部位で
の免疫学的反応など、レシピエントの身体に対して有意な有害効果または不都合
な効果を有しない場合、ポリマーは生体適合性である。
は、生分解性もしくは非生分解性のポリマーまたはそれらのブレンドもしくはコ
ポリマーのいずれかでありうる生体適合性ポリマーである。ポリマーおよびポリ
マーの任意の分解生成物がレシピエントに対して無毒性であり、かつ注入部位で
の免疫学的反応など、レシピエントの身体に対して有意な有害効果または不都合
な効果を有しない場合、ポリマーは生体適合性である。
【００２９】 本明細書で規定される「生分解性」は、組成物が、インビボで分解または腐食
し、より小さな化学種を形成することを意味する。分解は、例えば、酵素的プロ
セス、化学的プロセスおよび物理的プロセスの結果生じ得る。好適な生体適合性
、生分解性ポリマーには、例えば、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポ
リ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ
カーボネート類、ポリエステルアミド類、ポリ酸無水物類（polyanydride）、ポ
リ（アミノ酸）、ポリオルトエステル類、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキ
レンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルとの（or）
コポリマー、生分解性ポリウレタン、それらのブレンドおよびコポリマーが挙げ
られる。
し、より小さな化学種を形成することを意味する。分解は、例えば、酵素的プロ
セス、化学的プロセスおよび物理的プロセスの結果生じ得る。好適な生体適合性
、生分解性ポリマーには、例えば、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポ
リ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ
カーボネート類、ポリエステルアミド類、ポリ酸無水物類（polyanydride）、ポ
リ（アミノ酸）、ポリオルトエステル類、ポリ（ジオキサノン）、ポリ（アルキ
レンアルキレート）、ポリエチレングリコールとポリオルトエステルとの（or）
コポリマー、生分解性ポリウレタン、それらのブレンドおよびコポリマーが挙げ
られる。
【００３０】 好適な生体適合性、非生分解性ポリマーには、ポリアクリレート、エチレン−
酢酸ビニルと他のアシル置換セルロースアセテートとのポリマー、非生分解性ポ
リウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニル
イミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、ポリエチレンオキシド、
それらのブレンドおよびコポリマーからなる群より選ばれる非生分解性ポリマー
が含まれる。
酢酸ビニルと他のアシル置換セルロースアセテートとのポリマー、非生分解性ポ
リウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニル
イミダゾール）、クロロスルホネートポリオレフィン、ポリエチレンオキシド、
それらのブレンドおよびコポリマーからなる群より選ばれる非生分解性ポリマー
が含まれる。
【００３１】 本発明で使用されるポリマーに許容されうる分子量は、所望のポリマー分解速
度、機械強度などの物性、および溶媒中のポリマー溶解率などの要因を考慮して
、当業者により決定されうる。典型的には、分子量の許容範囲は、約２，０００
ダルトン〜約２，０００，０００ダルトンである。好ましい態様では、ポリマー
は生分解性のポリマーまたはコポリマーである。より好ましい態様では、ポリマ
ーは、ラクチド：グリコリド比が約１：１であり、分子量が約５，０００ダルト
ン〜約７０，０００ダルトンであるポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（以下、
「ＰＬＧＡ」）である。さらにより好ましい態様では、本発明で使用されるＰＬ
ＧＡの分子量は、約５，０００ダルトン〜約４２，０００ダルトンである。
度、機械強度などの物性、および溶媒中のポリマー溶解率などの要因を考慮して
、当業者により決定されうる。典型的には、分子量の許容範囲は、約２，０００
ダルトン〜約２，０００，０００ダルトンである。好ましい態様では、ポリマー
は生分解性のポリマーまたはコポリマーである。より好ましい態様では、ポリマ
ーは、ラクチド：グリコリド比が約１：１であり、分子量が約５，０００ダルト
ン〜約７０，０００ダルトンであるポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（以下、
「ＰＬＧＡ」）である。さらにより好ましい態様では、本発明で使用されるＰＬ
ＧＡの分子量は、約５，０００ダルトン〜約４２，０００ダルトンである。
【００３２】 本発明を以下の実施例により、具体的にさらに記載する。
【００３３】 実施例 ２μフリット（Upchurch Scientific, Cat.#: C-V3X ）を有するプレカラムフ
ィルター（Upchurch Scientific, Cat.#: A314）を使用して、Nest Group（Cat.
#: 07164）から得られる7.5mm ×7.5cm ＴＳＫ−ＧＥＬカラム（DEAE-SPW 10μ
M ）上で未変性イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を行なった。流速は０
．５ｍｌ／分、カラム負荷は０．５〜２．０μｇとし、検出器を２８６ｎｍの励
起波長および３３６ｎｍの発光波長にセットした。溶出系は、移動相Ａ（HPLCグ
レード水）および移動相Ｂ（0.125M KH2PO4,10％（v/v ）アセトニトリル、約pH
5.8）からなり、以下のグラジエントを使用した。
ィルター（Upchurch Scientific, Cat.#: A314）を使用して、Nest Group（Cat.
#: 07164）から得られる7.5mm ×7.5cm ＴＳＫ−ＧＥＬカラム（DEAE-SPW 10μ
M ）上で未変性イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）を行なった。流速は０
．５ｍｌ／分、カラム負荷は０．５〜２．０μｇとし、検出器を２８６ｎｍの励
起波長および３３６ｎｍの発光波長にセットした。溶出系は、移動相Ａ（HPLCグ
レード水）および移動相Ｂ（0.125M KH2PO4,10％（v/v ）アセトニトリル、約pH
5.8）からなり、以下のグラジエントを使用した。
【００３４】 時間 ％Ａ ％Ｂ 曲線形 0.0 60 40 定組成（isocratic ） 3.0 60 40 直線 13.0 0 100 定組成 27.0 0 100 直線 28.0 60 40 定組成 45.0 60 40 定組成
【００３５】 サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して水溶液中の天然の単量体
ｈＧＨを測定した。２μフリット（Upchurch Scientific, Cat.#: C-V3X ）を有
するプレカラムフィルター（Upchurch Scientific, Cat.#: A314）を使用して、
Nest Group（Cat.#: 08540）から得られる7.8mm ×30cm G2000SWXLカラム上でＳ
ＥＣを行なった。流速は１．０ｍＬ／分、カラム負荷は２．５〜１５．０μｇと
し、検出器を２１４ｎｍにセットした。移動相は、0.05M NaH2PO4, 0.15M NaCl,
pH 7.2 ±0.1 からなった。
ｈＧＨを測定した。２μフリット（Upchurch Scientific, Cat.#: C-V3X ）を有
するプレカラムフィルター（Upchurch Scientific, Cat.#: A314）を使用して、
Nest Group（Cat.#: 08540）から得られる7.8mm ×30cm G2000SWXLカラム上でＳ
ＥＣを行なった。流速は１．０ｍＬ／分、カラム負荷は２．５〜１５．０μｇと
し、検出器を２１４ｎｍにセットした。移動相は、0.05M NaH2PO4, 0.15M NaCl,
pH 7.2 ±0.1 からなった。
【００３６】 ２μフリット（Upchurch Scientific, Cat.#: C-V3X ）を有するプレカラムフ
ィルター（Upchurch Scientific, Cat.#: A314）を使用して、Upchurch Scienti
fic （Part #: 1512-3801 ）から得られる150mm ×4.6mm PLRP-Sカラム（I.D. 8
μ, 300 Å）上で逆相ＨＰＬＣ（ｒＨＰＬＣ）を行なった。流速は２２分のラン
タイムで２．０ｍＬ／分であった。２．０〜１０μｇのカラム負荷ならびに２８
６ｎｍの励起波長および３３５ｎｍの発光波長にセットした検出器を使用した。
溶出系は、移動相Ａ（50mMリン酸緩衝液１．０Ｌに対してアセトニトリル４４０
ｍＬ）および移動相Ｂ（50mMリン酸緩衝液１．０Ｌに対してアセトニトリル１．
０Ｌ）からなり、以下のグラジエントを使用した。
ィルター（Upchurch Scientific, Cat.#: A314）を使用して、Upchurch Scienti
fic （Part #: 1512-3801 ）から得られる150mm ×4.6mm PLRP-Sカラム（I.D. 8
μ, 300 Å）上で逆相ＨＰＬＣ（ｒＨＰＬＣ）を行なった。流速は２２分のラン
タイムで２．０ｍＬ／分であった。２．０〜１０μｇのカラム負荷ならびに２８
６ｎｍの励起波長および３３５ｎｍの発光波長にセットした検出器を使用した。
溶出系は、移動相Ａ（50mMリン酸緩衝液１．０Ｌに対してアセトニトリル４４０
ｍＬ）および移動相Ｂ（50mMリン酸緩衝液１．０Ｌに対してアセトニトリル１．
０Ｌ）からなり、以下のグラジエントを使用した。
【００３７】 時間 ％Ａ ％Ｂ 曲線形 0.0 60 40 直線 15.0 0 100 直線 17.0 0 100 定組成 17.5 60 40 直線 35.0 60 40 直線
【００３８】 実施例１ Ｚｎ+2複合化ｈＧＨの形成 ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は、そのＤＮＡ配列がGoeddel らに付与された米
国特許第４，８９８，８３０号明細書に記載されており、本実施例に使用した。
ヒト成長ホルモンは、最初はpH 8.4の23mM重炭酸ナトリウム中に25mg/mL のｈＧ
Ｈ濃度を有する溶液の形態であった。12.5mg/ml の濃度を有するｈＧＨの第２溶
液もまた、4mM NaHCO3（pH=7.2）で最初の溶液を適切に希釈することにより本実
施例で使用した。
国特許第４，８９８，８３０号明細書に記載されており、本実施例に使用した。
ヒト成長ホルモンは、最初はpH 8.4の23mM重炭酸ナトリウム中に25mg/mL のｈＧ
Ｈ濃度を有する溶液の形態であった。12.5mg/ml の濃度を有するｈＧＨの第２溶
液もまた、4mM NaHCO3（pH=7.2）で最初の溶液を適切に希釈することにより本実
施例で使用した。
【００３９】 脱イオン水および酢酸亜鉛二水和物から0.9mM Ｚｎ+2溶液を調製した。各ｈＧ
Ｈ溶液（25mg/mL および12.5mg/mL の濃度）に亜鉛カチオン成分の必要量を添加
して、表１に示されるようなＺｎ+2成分対ｈＧＨのモル比 6:1、8:1 および10:1
を用いてＺｎ+2−ｈＧＨ複合体を形成した。Ｚｎ+2安定化ｈＧＨを含有してなる
雲状の（cloudy）懸濁沈澱物が両濃度のｈＧＨで各モル比に対して形成された。
希釈試料（12.5mg/mL ）におけるｈＧＨの終濃度は5mg/mLであり、非希釈試料で
は20mg/mL であった。
Ｈ溶液（25mg/mL および12.5mg/mL の濃度）に亜鉛カチオン成分の必要量を添加
して、表１に示されるようなＺｎ+2成分対ｈＧＨのモル比 6:1、8:1 および10:1
を用いてＺｎ+2−ｈＧＨ複合体を形成した。Ｚｎ+2安定化ｈＧＨを含有してなる
雲状の（cloudy）懸濁沈澱物が両濃度のｈＧＨで各モル比に対して形成された。
希釈試料（12.5mg/mL ）におけるｈＧＨの終濃度は5mg/mLであり、非希釈試料で
は20mg/mL であった。
【００４０】
【表１】
【００４１】 沈殿物を約１分間約13,200rpm での遠心分離によりペレット化した。上清試料
をＩＥＣ、ＳＥＣおよびｒＨＰＬＣによりアッセイし、脱アミド化および酸化分
解産物に対する天然ｈＧＨの比を測定した。天然ｈＧＨと脱アミド化および酸化
分解産物との比を精製前のｈＧＨと比較した。結果を表２に示す。
をＩＥＣ、ＳＥＣおよびｒＨＰＬＣによりアッセイし、脱アミド化および酸化分
解産物に対する天然ｈＧＨの比を測定した。天然ｈＧＨと脱アミド化および酸化
分解産物との比を精製前のｈＧＨと比較した。結果を表２に示す。
【００４２】 上清に存在する脱アミド化および酸化ｈＧＨの割合が、精製前のｈＧＨ溶液と
比較した時に、より大きくなったことを結果は説明する。
比較した時に、より大きくなったことを結果は説明する。
【００４３】
【表２】
【００４４】 当業者は、通常の実験を用いるのみで、本明細書に詳細に記載された本発明の
特定の態様に対する多くの均等物を認識し、理解することができるであろう。か
かる均等物は、請求の範囲内に包含されることを意図する。
特定の態様に対する多くの均等物を認識し、理解することができるであろう。か
かる均等物は、請求の範囲内に包含されることを意図する。
【図１】 図１は、濃度２０ｍｇ／ｍＬの未精製ｈＧＨ溶液のイオン交換クロマトグラフ
ィー分析の結果得られたクロマトグラムである。
ィー分析の結果得られたクロマトグラムである。
【図２】 図２は、亜鉛カチオン成分のｈＧＨに対するモル比６：１および終濃度５ｍｇ
／ｍＬでｈＧＨと亜鉛との複合体形成の結果生じる上清のイオン交換クロマトグ
ラフィー分析の結果得られたクロマトグラムである。
／ｍＬでｈＧＨと亜鉛との複合体形成の結果生じる上清のイオン交換クロマトグ
ラフィー分析の結果得られたクロマトグラムである。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年５月１８日（２００１．５．１８）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 1/32 Ａ６１Ｋ 37/36 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 ジェネンテック・インコーポレーテッド ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ． アメリカ合衆国カリフオルニア・94080− 4990・サウス・サン・フランシスコ・ディ ーエヌエー・ウェイ・１ 460 Ｐｏｉｎｔ Ｓａｎ Ｂｒｕｎｏ Ｂｌｖｄ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａ ｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ 94080 ＵＳＡ (72)発明者 ジャヴォロウィッツ，ワレン，イー． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 01719 ボックスボロ，ナンバー 334，ス ワンソン ロード 188 Ｆターム(参考） 4C076 AA58 AA94 CC30 DD22 EE13H EE22H EE24H EE25H EE48H EE59 FF31 4C084 AA02 AA03 AA06 BA44 CA18 DB22 MA05 MA37 NA12 ZC042 4H045 AA20 CA40 DA31 EA27 EA30 GA05 GA23
Claims (17)
- 【請求項１】 ａ）脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全
く、あるいは殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下で、天然ｈＧＨが富
化された金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成する工程；および ｂ）脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから金属カチオン複合
化ｈＧＨ組成物を単離する工程 を含む、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたは両者からの活性ヒト成長ホルモン
（ｈＧＨ）の精製方法。 - 【請求項２】 金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物からｈＧＨを遊離させる工
程をさらに含む請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを用
いて１回以上反復される請求項２記載の方法。 - 【請求項４】 金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物の金属カチオンがＺｎ+2、
Ｍｇ+2、Ｃａ+2およびＫ+ からなる群より選ばれる請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 ｈＧＨに対するモル比が１０：１未満の金属カチオン成分を
用いて金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を調製する請求項４記載の方法。 - 【請求項６】 金属カチオンが亜鉛である請求項４記載の方法。
- 【請求項７】 モル比が６：１である請求項６記載の方法。
- 【請求項８】 ａ）天然ｈＧＨ、ならびに脱アミド化ｈＧＨおよび酸化ｈＧ
Ｈの一方または両方を含有するｈＧＨ組成物の水溶液を調製する工程； ｂ）脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが全く、あるいは殆ど金
属カチオン成分と複合体を形成しない条件下で、金属カチオン成分を該水溶液に
添加し、それにより、該ｈＧＨ組成物の水溶液と比べて活性ｈＧＨが富化された
金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成する工程； ｃ）金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を沈殿させる工程；および ｄ）沈殿物を単離する工程 を含む、脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたは両者からの活性ヒト成長ホルモン
（ｈＧＨ）の精製方法。 - 【請求項９】 金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物からｈＧＨを遊離させる工
程をさらに含む請求項８記載の方法。 - 【請求項１０】 金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物から遊離されたｈＧＨを
用いて１回以上反復される請求項９記載の方法。 - 【請求項１１】 金属カチオン複合化ｈＧＨの金属カチオンがＺｎ+2、Ｍｇ +2 、Ｃａ+2およびＫ+ からなる群より選ばれる請求項８記載の方法。
- 【請求項１２】 ｈＧＨに対するモル比が１０：１未満の金属カチオン成分
を用いて金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を調製する請求項１１記載の方法。 - 【請求項１３】 金属カチオンが亜鉛である請求項１２記載の方法。
- 【請求項１４】 モル比が６：１である請求項１３記載の方法。
- 【請求項１５】 ａ）脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨもしくは両者の全てが
全く、あるいは殆ど金属カチオンと複合体を形成しない条件下で、天然ｈＧＨが
富化された金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を形成する工程； ｂ）脱アミド化ｈＧＨ、酸化ｈＧＨまたはその組み合わせから金属カチオン複合
化ｈＧＨ組成物を単離する工程；および ｃ）金属カチオン複合化ｈＧＨ組成物を生体適合性ポリマー内にカプセル化する
工程 を含む、ポリマーマトリックスからのヒト成長ホルモン徐放用組成物の形成方法
。 - 【請求項１６】 生体適合性ポリマーマトリックスが、ポリ（ラクチド）、
ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（乳酸）、ポリ
（グリコール酸）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポ
リカーボネート類、ポリエステルアミド類、ポリ酸無水物類、ポリ（アミノ酸）
、ポリオルトエステル類、ポリシアノアクリレート類、ポリ（ｐ−ジオキサノン
）、ポリ（アルキレンオキサレート）、生分解性ポリウレタン、それらのブレン
ドおよびコポリマーからなる群より選ばれる請求項１５記載の方法。 - 【請求項１７】 該ポリマーがポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を含有す
る請求項１６記載の方法。
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|---|---|---|---|
| US09/260,362 | 1999-03-01 | ||
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| PCT/US2000/005210 WO2000052049A2 (en) | 1999-03-01 | 2000-02-29 | A method for purifying human growth hormone |
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| Publication Number | Publication Date |
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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|---|---|---|---|---|
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| IL79681A (en) * | 1985-08-12 | 1991-06-10 | Int Minerals & Chem Corp | Transition metal complexes of growth hormones and their prolonged release compositions |
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