JP2002533415A - 心臓血管に適用するための回腸胆汁酸輸送阻害剤およびニコチン酸誘導体の組み合わせ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、および高脂血症等の心血管疾患を予防ならびに治療するための、心血管治療用化合物の組み合わせを提供する。開示される組み合わせには、ニコチン酸誘導体と併用される回腸胆汁酸輸送阻害剤が含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本出願は、1999年7月7日に出願された米国仮特許出願第60/142,550号、および
1998年12月23日に出願された米国仮特許出願第60/113,955号の優先権を主張する
ものである。

【０００２】発明の背景 発明の分野 本発明は、心血管疾患を治療する方法、具体的には、医学、特に、哺乳動物に
おけるアテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、およびその他の冠状動
脈疾患などに関連する、高脂血症状態の予防および治療において、化合物、組成
物、およびそれらの使用法を組み合わせることに関する。より具体的には、本発
明は、回腸胆汁酸輸送体（IBAT）阻害化合物に関する。本発明は、ニコチン酸誘
導体化合物にも関する。

【０００３】関連技術の説明 総コレステロール濃度および低比重リポタンパク質（LDL）コレステロール濃
度の上昇に伴う高脂血症状態が、冠状動脈性心疾患、特に、アテローム性動脈硬
化症の主要な危険因子であるということは定説となっている。LDLコレステロー
ルが高レベルになると、アテローム性動脈硬化症の危険性が増大するため、血漿
HDLコレステロールを増加させる方法は、アテローム性動脈硬化症、および血管
内の脂質蓄積に関連したその他の疾病を治療する上で有益であると考えられる。
このような疾患には、冠状動脈性心疾患、末梢血管疾患、脳卒中が含まれるが、
これらに限定されることはない。

【０００４】 アテローム性動脈硬化症によって、現代社会における罹病および死亡の主要な
原因である多くの冠状動脈性疾患（CAD）が引き起こされている。高LDLコレステ
ロール（約180 mg/dlを上回る）および低HDLコレステロール（35 mg/dlを下回る
）が、アテローム性動脈硬化症発生の重要な原因であることが示されている。そ
の他の疾患または危険因子、例えば、末梢血管疾患、脳卒中、および高コレステ
ロール血症などは、有害なHDL/LDS比によってマイナスの影響を受ける。

【０００５】 腸管の管腔からの胆汁酸の再循環を妨害することと、血清コレステロール値の
低下との間には因果関係があることが見出されている。この低下がアテローム性
動脈硬化症の病状の改善をもたらすことを示す、疫学的データが蓄積されている
。ステドロンスキー（Stedronsky）は、「胆汁酸およびコレステロールと、低コ
レステロール血症性非全身性物質との相互作用（Interaction of bile acids an
d cholesterol with nonsystemic agents having hypocholesterolemic propert
ies）」、Biochimica et Biophysica Acta, 1210, 255-287 (1994)において、胆
汁酸およびコレステロールの周囲の生化学、生理学、および既知の活性化物質に
ついて考察している。

【０００６】 ヘウビら(Heubi, J. E.)によって報告されているように、一過的な病理生理学
的変化はIBAT活性の遺伝的欠損を有するヒトにおける胆汁酸の腸肝循環の妨害に
一致することが示されている。「初期胆汁酸代謝：回腸の活性な防御的インビト
ロ胆汁酸輸送（Primary Bile Acid Malabsorption: Defective in Vitro Ileal
Active Bile Acid Transport）」、Gastroenterology, 83, 804-11(1982)を参照
。

【０００７】 胆汁酸の再循環を低下する別の方法において、回腸の胆汁酸輸送系は、特異的
な輸送阻害剤による腸肝循環の妨害に基づいた、高コレステロール血症の治療の
薬学的な標的であると推定される(Kramerら、「腸内胆汁酸吸収（Intestinal Bi
le Acid Absorption）」、The Journal of Biological Chemistry, 268(24), 18
035-46(1993)。

【０００８】 いくつかの個々の特許出願において、ヘキスト・アクティエンゲセルシャフト
（Hoechst Aktiengesellschaft）は、LDLコレステロール濃度を薬剤、詳細には
高コレステロール血症剤として使用するのに十分に有効であるように低下する目
標により、生理的な胆汁酸輸送を阻害する、胆汁酸を含む、腸肝循環系の種々の
天然型構成成分およびそれらの誘導体のポリマーを開示している。このような胆
汁酸輸送阻害化合物を開示している個々のヘキスト（Hoechst）の特許出願を以
下に各々別個に掲載する。 R1. カナダ特許出願第2,025,294号 R2. カナダ特許出願第2,078,588号 R3. カナダ特許出願第2,085,782号 R4. カナダ特許出願第2,085,830号 R5. 欧州特許出願第0 379 161号 R6. 欧州特許出願第0 549 967号 R7. 欧州特許出願第0 559 064号 R8. 欧州特許出願第0 563 731号

【０００９】 選択されたベンゾチエピンは、脂肪酸代謝および冠状血管疾患を含む数多くの
用途について、国際公開公報第93/321146号に開示されている。

【００１０】 他の選択されたベンゾチエピンは、欧州特許出願第508425号に開示されている
ように高脂血症および高コレステロール血症剤として使用するために、特にアテ
ローム性動脈硬化症を治療または予防するために知られている。フランス特許出
願第2661676号は、高脂血症および高コレステロール血症剤として使用するため
の別のベンゾチエピンを開示している。さらに、国際公開公報第92/18462号は、
高脂血症および高コレステロール血症剤として使用するための他のベンゾチエピ
ンを掲載している。米国特許第5,994,391号(Leeら)。これらの個々の特許出願に
記載されているベンゾチエピン系高脂血症および高コレステロール血症剤の各々
は、融合したビシクロベンゾチエピン環のフェニル環に隣接する炭素に結合した
アミドによって制限される。

【００１１】 高コレステロール血症および高脂血症の治療に有用なさらに別のベンゾチエピ
ンは特許出願PCT/US95/10863号に開示されている。高コレステロール血症および
高脂血症を予防および治療するのに有用なより多くのベンゾチエピン並びにこの
ようなベンゾチエピンの薬学的組成物はPCT/US97/04076号に記載されている。高
コレステロール血症および高脂血症を予防および治療するのに有用なよりさらに
別のベンゾチエピンおよびそれらの組成物は米国特許出願第08/816,065号に記載
されている。

【００１２】 インビトロにおける胆汁酸輸送阻害は、「脂質低下性ベンゾチアゼピン化合物
（Hypolipidemic Benzothiazepine Compounds）」についてのウェルカム・ファ
ウンデーション・リミテッド（Wellcome Foundation Limited）の国際公開公報
第93/16055号の開示に脂質低下作用と相関するよう開示されている。その公報は
数多くの脂質低下性ベンゾチアゼピン化合物を記載している。別の脂質低下性ベ
ンゾチアゼピン化合物（詳細には、2,3,4,5-テトラヒドロベンゾ-1-チ-4-アゼピ
ン化合物）は国際公開公報第96/05188号に開示されている。国際公開公報第96/0
5188号に開示されている特に有用なベンゾチアゼピンは式B-2の化合物である。
さらに別の脂質低下作用を有するベンゾチアゼピン化合物は国際公開公報第96/1
6051号に記載されている。

【化５】 (3R,5R)-3-ブチル-3-エチル-2,3,4,5-テトラヒドロ-7,8-ジメトキシ-5-フェニル
-1,4-ベンゾチアゼピン1,1-ジオキサイド

【００１３】 コレステロールを管理するのに有用な他のベンゾチアゼピン化合物は国際公開
公報第99/35135号に記載されている。式B-7の化合物はその記載に含まれる。

【化６】

【００１４】 さらに別のIBAT阻害剤化合物はJ. Pharmacol. Exp.Ther., 284(1), 43-50(199
8)にイチハシら(T. Ichihashi)によって記載されているナフタレン化合物のクラ
スを含む。このクラスには、S-8921(メチル1-(3,4-ジメトキシフェニル)-3-(3-
エチルバレリル)-4-ヒドロキシ-6,7,8-トリメトキシ-2-ナフトエート)が特に有
用である。S-8921の構造は式B-20で示される。高脂血症またはアテローム性動脈
硬化症を治療または予防するのに有用なさらに別のナフタレン化合物またはリグ
ニン誘導体は国際公開公報第94/24087号に記載されている。

【化７】

【００１５】 ニコチン酸（ナイアシン）は、1955年にはすでに低脂症因子として作用するこ
とが報告されていたB-複合型ビタミンである（R. Altshlら、Arch. Biochem. Bi
ophys., 54, 558-9 (1955)）。これは、低いHDLレベルを引き上げたり、VLDLレ
ベルやLDLレベルを引き下げたりするために時々使用される。ニコチン酸の有用
な市販製剤には、ナイアコール（Niacor）、ナイアスパン（Niaspan）、ニコビ
ッド（Nicobid）、ニコーラー（Nicolar）、スロナイアシン（Slo-Niacin）が含
まれる。ニコチン酸は、肝機能障害、進行中の消化性潰瘍、または動脈出血をも
つ患者には禁忌である。心血管に適用するのに有用な、このクラスの別の化合物
は、ニセリトロール（niceritrol）である（T. Kazumiら、Curr. Ther. Res., 5
5, 546-51）。J.ササキ（Sasaki）ら（Int. J. Clin. Pharm. Ther., 33 (7), 4
20-26 (1995)）は、ニセリトロールによる単剤療法によって、コレステリルエス
テル転送活性が低下することを記載している。アシピモクス（acipimox）（5-メ
チルピラジン-2-カルボン酸4酸化物、米国特許第4,002,750号）は、構造的にニ
コチン酸に類似しており、且つ抗高脂血活性をもつ。

【００１６】 心血管疾患を治療するための併用療法が、いくつか文献に記載されている。心
血管疾患の治療に有用な、IBAT阻害剤とHMG CoAレダクターゼ阻害剤との組み合
わせが、米国特許出願第09/037,308号において開示されている。

【００１７】 フルバスタチン（fluvastatin）とニセリトロールの併用療法が、J.ササキ（S
asaki）ら（前記）によって開示されている。この研究者らは、フルバスタチン
とニセリトロールの組み合わせを「750 mg/日で投薬すると、フルバスタチンの
有利な効果を増強も減衰もさせないようである」と結論づけている。

【００１８】 L.カシン-ヘムフィル（Cashin-Hemphill）ら（J. Am. Med. Assoc., 264(23),
3013-17 (1990)）は、冠状動脈のアテローム性動脈硬化症に対する、コレスチ
ポールとナイアシンの併用療法の有利な効果について記載している。そこに記載
されている効果には、生来の冠状動脈損傷の非進行および退行が含まれる。

【００１９】 アシピモクス（acipimox）とシンバスタチン（simbastatin）の併用療法は、
トリグリセリドレベルが高い患者において有利なHDL効果を示す（N. Hoogerbrug
geら, J. Inernal Med., 241, 151-55 (1997)）。

【００２０】 シトスタノールエステルマーガリンとプラバスタチンの併用療法について、H. ギリング（Gylling）らが説明している（J. Lipid Res., 37, 1776-85 (1996)
）。この療法は、インシュリン非依存性糖尿病患者の男性において、有意にコレ
ステロールの吸収を阻害すると同時に、LDLコレステロールを低下させると報告
されている。

【００２１】 ブラウン（Brown）ら（New Eng. J. Med., 323 (19), 1289-1339 (1990)）は
、ロバスタチンだけの場合に較べて、アテローム性動脈硬化症障害の進行を低下
させ、損傷部の退行を促進させる、ロバスタチンとコレスチポールの併用療法に
ついて説明している。

【００２２】 ブーフ（Buch）ら（国際公開公報第9911263号）は、狭心症、アテローム性動
脈硬化症、複合性血圧症、および高脂血症を罹患した被験者を治療し、且つ心停
止症状を治療するための、アムロジピンとスタチン化合物を含む併用療法につい
て説明している。ブーフ（Buch）らは、国際公開公報第9911259号において、ア
ムロジピンとアトルバスタチン（atorvastatin）を含む併用療法について説明し
ている。

【００２３】 スコット（Scott）ら（国際公開公報第9911260号）は、アトルバスタチンと降
圧剤との併用療法について説明している。

【００２４】 デットマー（Dettmar）およびギブソン（Gibson）（英国特許出願第GB 232933
4 A号）は、血漿中の低比重リポタンパク質およびコレステロールの量を低下さ
せるのに有用な治療用組成物における、HMG CoAレダクターゼ阻害剤と胆汁組み
合わせ物質（bile complexing agent）を含む組成物について主張している。

【００２５】 上述した参考文献は、心血管疾患を予防および治療するための安全で有効な薬
剤を見出す必要が依然として存在していることを示している。

【００２６】発明の概要 心血管疾患を予防および治療するための安全で有効な薬剤を見出すことに対す
る必要が依然として存在していることに対処するための、心血管用薬剤の併用療
法をここで報告する。

【００２７】 いくつかの態様において、本発明は、第1の量のIBAT阻害剤、および第2の量の
別の心血管治療物質を使用することを含む、高脂血症、アテローム性動脈硬化症
、または高コレステロール血症の予防および治療に有用な併用療法であって、該
第1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗高脂血症状態に有効な量、抗アテロー
ム性動脈硬化症状態に有効な量、または抗高コレステロール血症状態に有効な量
を含む併用療法を提供する。例えば、本発明における多くの態様の一つは、治療
用量のIBAT阻害化合物およびニコチン酸誘導体化合物を含む併用療法である。本
発明の好ましい態様は、ベンゾチエピンIBAT阻害化合物およびニコチン酸誘導体
化合物の治療用量を含む併用療法である。

【００２８】 本発明のさらなる態様において、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬
化症、または高脂血症を予防および治療するための、本明細書に開示された任意
の心血管併用療法を使用することを含む。したがって、一つの態様において、本
発明は、高脂血症状態の予防または治療を必要とする患者に、第1の量の回腸胆
汁酸輸送阻害化合物と第2の量のニコチン酸誘導体化合物とを含み、該第1の量と
第2の量が合わせて、化合物の抗高脂血症状態に有効な量となる組み合わせを単
位剤形にして投与する段階を含む、高脂血症状態を予防または治療するための方
法を提供する。

【００２９】 別の態様において、本発明は、アテローム性動脈硬化症状態の予防または治療
を必要とする患者に、第1の量の回腸胆汁酸輸送阻害化合物と第2の量のニコチン
酸誘導体化合物とを含み、該第1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗アテロー
ム性動脈硬化症状態に有効な量となる組み合わせを単位剤形にして投与する段階
を含む、アテローム性動脈硬化症状態を予防または治療するための方法を提供す
る。

【００３０】 さらに別の態様において、本発明は、高コレステロール血症状態の予防または
治療を必要とする患者に、第1の量の回腸胆汁酸輸送阻害化合物と第2の量のニコ
チン酸誘導体化合物とを含み、該第1の量と第2の量とが合わせて、化合物の抗高
コレステロール血症状態に有効な量となる組み合わせを単位剤形にして投与する
段階を含む、高コレステロール血症状態を予防または治療するための方法を提供
する。

【００３１】 本発明の利用可能なさらなる範囲は、以下に述べる詳細な説明から明らかにな
ると思われる。しかしながら、以下の詳細な説明および実施例は、発明の好まし
い態様を示すものではあるが、当業者には、発明の精神と範囲内において、以下
の説明からさまざまに変更や修正を行いうることが明らかであるため、例示のた
めのものにすぎないと解されるべきである。

【００３２】好ましい態様における詳細な説明 以下の詳細な説明は、本発明を実施する上で当業者の参考となるよう提供され
るものである。当業者は、本発明における発見の精神および範囲から逸脱するこ
となく、本明細書で検討している態様の修正および変更を行うことができるため
、以下の詳細な説明が本発明を不当に制限するものであるとして解釈してはなら
ない。

【００３３】 本明細書が引用する各参考文献の内容は、これらの一次参考文献の中で引用さ
れている引用文献の内容も含め、その全体が参照として本明細書に組み入れられ
る。

【００３４】a．定義 以下の定義は、本発明の詳細な説明の読み手が、その内容を理解する助けとな
るよう提供されたものである。

【００３５】 「回腸胆汁酸輸送体」または「IBAT」はアピカルナトリウム共依存的胆汁酸輸
送体、すなわちASBTと同義である。

【００３６】 「ベンゾチエピンIBAT阻害剤」は、2,3,4,5-テトラヒドロ-1-ベンゾチエピン1
,1-ジオキサイド構造を有する治療用化合物を含む回腸胆汁酸輸送阻害剤を意味
する。

【００３７】 「ニコチン酸誘導体」とは、ピリジン-3-カルボン酸構造またはピラジン-2-カ
ルボン酸構造を、酸の形態、塩、エステル、双性イオン、および互変異性体とし
て含む治療用化合物を意味する。ニコチン酸誘導体には、例えば、ニコチン酸（
ナイアシン）、ニセリトロール、およびアシピモクスなどが含まれる。

【００３８】 「併用療法」とは、例えば、アテローム性動脈硬化症および高コレステロール
血症など高脂血症状態を治療するために2種類またはそれ以上の治療物質を投与
することを意味する。このような投与には、有効成分を一定の割合で単一剤形に
して、または各阻害剤を複数の別個の剤形にして、これらの治療物質を実質的に
同時になるような様式で、同時投与することを含む。さらに、このような投与は
、それぞれの治療物質を連続した様式で用いることも含む。どちらの場合も、治
療レジメによって、高脂血症状態を治療する上で薬剤を併用することの有利な効
果が提供される。

【００３９】 「治療上有効な」という語句は、併用療法における阻害剤の併用量が適切であ
るということが意図される。この併用量によって、高脂血症状態を低下または消
失させるという目標が達成されると考えられる。

【００４０】 「治療用化合物」とは、アテローム性動脈硬化症および高コレステロール血症
を含む高脂血症状態を予防または治療する上で有用な化合物を意味する。

【００４１】b．組み合わせ 本発明の組み合わせには多くの使用法があると考えられる。例えば、用量の調
整および医学的モニタリングによって、本発明の組み合わせに用いる治療用化合
物の各用量を、治療用化合物を単剤療法で使用する場合の一般的な用量よりも減
少させることができると考えられる。用量の減少によって、単剤療法に較べて、
各治療用化合物の副作用が減少するなどの利点がもたらされると思われる。さら
に、単剤療法に較べて、併用療法には副作用が少ないため、より多くの患者に治
療レジメを適用することができる。

【００４２】 本発明において有用な化合物には、多様な治療用化合物が含まれる。本発明に
おいて有用なIBAT阻害剤のいくつかは、参照として本明細書に組み入れられる特
許出願PCT/US95/10863に開示されている。より多くのIBAT阻害剤が、参照として
本明細書に組み入れられているPCT/US97/04076号に記載されている。本発明に有
用なよりさらに別のIBAT阻害剤は、参照として本明細書に組み入れられている米
国特許出願第08/816,065号に記載されている。本発明に有用なさらに多くのIBAT
阻害化合物は、参照として本明細書に組み入れられている国際公開公報第98/403
75号に記載されている。本発明に有用な別のIBAT阻害化合物は参照として本明細
書に組み入れられている米国特許出願第08/816,065号に記載されている。本発明
に有用なさらに別のIBAT阻害化合物は、参照として本明細書に組み入れられてい
る米国特許第5,994,391号に開示されている。本発明において特に関心対象とな
るIBAT阻害剤には、表1に示す化合物、ならびに表1のIBAT阻害剤のジアステレオ
マー、鏡像異性体、ラセミ体、塩、および互変異性体などが含まれる。

【００４３】

【表１】

【００４４】 本発明の組み合わせおよび方法において有用なニコチン酸誘導体は、多様な構
造および機能性を含んでいる。本発明において好ましいニコチン酸誘導体を表2
に記載する。表2の治療用化合物は、酸や塩という形状、ラセミ体、鏡像異性体
、双性イオン、および互変異性体を含むさまざまな形態で、本発明において使用
することができる。表2で参照している各特許書類はすべて、参照として本明細
書に組み入れられる。

【００４５】

【表２】

【００４６】 本発明において有用な化合物（例えば、回腸胆汁酸輸送阻害化合物、またはニ
コチン酸誘導体化合物）は、不斉炭素分子を持たなくてもよく、あるいは、有用
な化合物は1つまたは複数の不斉炭素分子をもつことができる。有用な化合物が1
つまたは複数の不斉炭素分子をもつ場合には、当然ながら、それらは、ジアステ
レオマーや鏡像異性体などのラセミ体および立体異性体を純粋な形状および混合
物の形状で含む。このような立体異性体は、鏡像異性体の出発材料を反応させる
か、または本発明の化合物の異性体を分離するかのいずれかにより、従来の技術
を用いて調製することができる。

【００４７】 異性体には、例えば、二重結合を挟んだシス異性体またはトランス異性体など
の幾何異性体が含まれうる。このような異性体はすべて、本発明において有用な
化合物に含まれる。

【００４８】 本発明において有用な化合物には、互変異性体も含まれる。

【００４９】 以下で考察されているような、本発明において有用な化合物には、塩、溶媒化
合物、およびプロドラッグが含まれる。

【００５０】用量、製剤化、および投与経路 本発明に係る組成物は、これらの化合物を、それらが体内で作用する部位、例
えば、ヒトなどの哺乳動物の回腸の中、血漿、または肝臓などと接触させる何ら
かの方法によって、好ましくは経口で、高脂血疾患または症状を予防および治療
するために投与することができる。

【００５１】 上記症状を予防または治療するために、本発明に係る組成物および方法におい
て有用な化合物を、化合物それ自体として使用することができる。薬学的に許容
される塩は、これらの親化合物に較べて水溶性が高いため、医学的に応用するの
に特に適している。このような塩は、明確に、薬学的に許容される陰イオンまた
は陽イオンを持っていなければならない。本発明の化合物における薬学的に許容
される適当な酸付加塩は、可能な場合には、塩酸、臭化水素酸、リン酸、無水リ
ン酸、硝酸、スルホン酸、硫酸などの無機酸；酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息
香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イ
ソチオン酸、乳酸、ラクトバイオニック（lactobionic）、マレイン酸、リンゴ
酸、メタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸、酒石酸、およびトリフ
ルオロ酢酸などの有機酸に由来するものである。医療目的には、塩化物塩が特に
好ましい。薬学的に許容される適当な塩基性塩には、アンモニウム塩；ナトリウ
ム塩およびカリウム塩などのアルカリ金属塩類；ならびにマグネシウム塩および
カルシウム塩などのアルカリ土類塩などがある。

【００５２】 本発明において有用な陰イオンは、当然ながら薬学的に許容されることが必要
とされることから、上記のリストの中から選択される。

【００５３】 本発明において有用な化合物は、許容される担体とともに、薬学的組成物の形
態で提供されうる。担体は、当然ながら組成物の他の成分に適合するものという
意味で許容されるものでなければならないし、且つ受容者に有害なものであって
はならない。担体は、固体もしくは液体であっても、またはその両方であっても
よく、化合物とともに、該有効化合物を重量にして0.05％から95％含むことので
きる、例えば錠剤などの単位投薬組成物として製剤化することが好ましい。本発
明に係る別の化合物を含む、その他の薬学的有効物質を含ませることもできる。
本発明の薬学的組成物は、本質的には、成分を混合することからなる公知の製薬
技術のいずれかを用いて調製することができる。

【００５４】 選択的には、本発明の組み合わせは、回腸胆汁酸輸送阻害化合物およびニコチ
ン酸誘導体化合物を含有する組成物を含むことができる。このような組成物では
、回腸胆汁酸輸送阻害剤およびニコチン酸誘導体を、例えば、両化合物を含む丸
剤、カプセル剤、または液剤などの単一剤形を含む形態で提供することができる
。

【００５５】 別個の治療用化合物、または治療用化合物の組み合わせのいずれかとして、薬
剤とともに用いることができる通常の任意の手段によって、これらの化合物を投
与することができる。

【００５６】 所望の生物学的作用を達成するために必要とされる化合物量は、当然ながら、
選択された具体的な化合物、意図される用途、投薬方法、および受容者の臨床症
状などの多くの要素に依存する。

【００５７】 一般的には、IBAT阻害剤の一日当たり服用総量は、約0.01 mg/日から約1000 m
g/日、好ましくは、約0.1 mg/日から約50 mg/日、より好ましくは、約1 mg/日か
ら約10 mg/日の範囲でありうる。

【００５８】 一般的には、ニコチン酸誘導体の一日当たり服用総量は、一回で投与する場合
、または数回に分けて投与する場合に、約500 mg/日から約10,000 mg/日、好ま
しくは、約1000 mg/日から約8000 mg/日、より好ましくは、約3000 mg/日から約
6000 mg/日の範囲でありうる。

【００５９】 さまざまな治療用化合物について上記段落で説明した一日当たり用量は、単一
用量として患者に投与することもでき、複数回の用量に配分して投与することも
できる。配分用量（subdose）は、一日当たり2回から6回に分けて投与すること
ができる。投薬用量は、所望の結果を得るのに有効な徐放性形態にすることがで
きる。

【００６０】 薬学的に許容される塩の場合には、上記の重量は、該塩に由来する治療用化合
物の酸等価物または塩基等価物の重量を意味する。

【００６１】 本発明の組み合わせの経口送達には、当技術分野において公知のように、いく
つかのメカニズムにより、薬剤を胃腸管への延長的送達または持続的送達を行う
ための製剤が含まれうる。これらには、小腸のpH変化に基づき、pH感受性の放出
を剤形から行わせること、錠剤またはカプセルをゆっくりと溶かすこと、製剤の
物理的な性質によって胃の中で持続させること、腸管の粘膜内側に剤形を生物学
的に接着させること、または、剤形から有効薬剤を酵素的に放出させることが含
まれるが、これらに限定されることはない。本発明において有用な治療用化合物
（例えば、IBAT阻害剤またはニコチン酸誘導体）の中には、意図した作用が、剤
形を操作することによって有効な薬剤分子が作用部位（例えば、回腸）に送達さ
れるまでの時間を延長することのあるものもある。このように、腸溶性、および
腸溶性制御放出性の製剤は、本発明の範囲内に含まれる。適した腸溶コーティン
グには、酢酸セルロースフタル酸、ポリビニル酢酸フタル酸、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロースフタル酸、ならびに、メタクリル酸およびメタクリル酸メチ
ルエステルの陰イオンポリマーが含まれる。

【００６２】 本発明の組み合わせは、固体、半固体、または液体の形態のいずれかであって
、経口的に送達することができる。本発明の組み合わせを液状または半固形状に
する場合には、例えば、液剤、シロップ剤、またはゲル状カプセル（例えば、ゲ
ルキャップ）に入れた形状にすることができる。一つの態様において、IBAT阻害
剤を本発明の組み合わせで用いる場合には、液剤、シロップ剤、またはゲル状カ
プセルに入れた形状でIBAT阻害剤を提供することができる。別の態様において、
ニコチン酸誘導体を本発明に係る組み合わせで用いる場合には、液剤、シロップ
剤、またはゲル状カプセルに入れた形でニコチン酸誘導体を提供することができ
る。

【００６３】 静脈内投与する場合に、ニコチン酸誘導体の用量は、例えば、約150 mg/体重
（kg）から約3000 mg/体重（kg）、好ましくは、約300 mg/体重（kg）から約200
0 mg/体重（kg）、より好ましくは、約500 mg/体重（kg）から約1000 mg/体重（
kg）の範囲となりうる。

【００６４】 これらの治療用化合物いずれの用量も、1分間あたり約10 ng/体重（kg）から
約100 ng/体重（kg）の輸液として適宜投与することができる。この目的に適し
た輸液には、例えば、1ミリリットル当たり約0.1 ngから約10 mg、好ましくは、
約1 ngから約10 mgが含まれうる。単位用量には、例えば約1 mgから約10 gの本
発明の化合物が含まれうる。すなわち、注射用のアンプルには、例えば、約1 mg
から約100 mgが含まれうる。

【００６５】 本発明に係る薬学的組成物には、経口投与、直腸投与、局所投与、頬投与（例
えば、舌下投与）、および非経口投与（例えば、皮下、筋肉内、皮内、または静
脈内への投与）に適した薬学的組成物が含まれるが、所与の場合にもっとも適し
た経路は、治療すべき症状の性質と重度に依存し、且つ使用すべき特定の化合物
の性質にも依存する。ほとんどの場合、好適な投与経路は経口投与である。

【００６６】 経口投与に適した薬学的組成物は、予め決められた量の本発明において有用な
治療用化合物を少なくとも一つ含むカプセル剤、カシェ剤、トローチ剤、または
錠剤など；粉剤または顆粒剤など；水性または非水性液中の溶液もしくは懸濁液
など；または水中油型もしくは油中水型乳化剤などを、個別単位で提供すること
ができる。本明細書で示しているように、このような組成物は、有効化合物と担
体（1種類またはそれ以上の補助成分を構成することができる）を会合させる段
階を含む適当な製薬法によって調製することができる。一般的に、組成物は、有
効化合物を、液体担体または細かく分割した固形担体、もしくはその両方と共に
均一かつ完全に混合してから、必要な場合には、製品を成形して調製することが
できる。例えば、錠剤は、化合物の粉末または顆粒を、選択的には、1種類また
はそれ以上の補助成分と共に圧縮または鋳型に流して調製することができる。圧
縮錠剤は、場合によっては、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、および/または表
面活性/分散剤と混合した粉末または顆粒など、自由に流動する形状の化合物を
適当な機械で圧縮して調製することができる。鋳型で成形した錠剤は、不活性液
体希釈剤で湿らせた粉末化合物を適当な機械で成型して製造することができる。

【００６７】 頬に（舌下）投与するのに適した薬学的組成物には、通常、ショ糖およびアラ
ビアゴムまたはトラガカントガムなどの香味基剤の中に本発明の化合物を含むト
ローチ剤、および、ゼラチンおよびグリセリン、またはショ糖およびアラビアゴ
ムなどの不活性基剤の中に該化合物を含むトローチ剤などがある。

【００６８】 非経口投与するのに適した薬学的組成物は、本発明の化合物の滅菌水性調製剤
などを適宜含む。これらの製剤は、好ましくは静脈内投与されるが、皮下、筋肉
内、または皮内への注射という手段によって投与することも可能である。このよ
うな製剤は、化合物を水と混合し、得られた溶液を滅菌し、血液と等張にして適
宜調製することができる。本発明に係る注射用組成物は、一般的に、本明細書に
おいて開示されている化合物を0.1から5％（w/w）含むと考えられる。

【００６９】 直腸投与するのに適した薬学的組成物は、好ましくは、単位用量の坐薬として
提供される。これらは、本発明の化合物を1種類またはそれ以上の通常の固形担
体、例えば、ココアバターなどと混合した後、得られた混合物を成型することに
より調製することができる。

【００７０】 局所投与するのに適した薬学的組成物は、好ましくは、軟膏、クリーム、ロー
ション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油脂の形態をしている
。使用することのできる担体には、石油ゼリー（例えば、ワセリン）、ラノリン
、ポリエチレングリコール、アルコール類、およびこれらを2種類またはそれ以
上組み合わせたものなどがある。有効化合物は、一般的に組成物を0.1％から50
％（w/w）、例えば、0.5から2％の濃度で含んでいる。

【００７１】 経皮投与も可能である。経皮投与するのに適した薬学的組成物は、長時間にわ
たって受容者の表皮と密接に接触したままであるように調整された一枚毎のパッ
チとして提供されうる。このようなパッチは、本発明の化合物を、接着剤に溶解
および/もしくは分散させた、またはポリマーの中に分散させた、選択的には緩
衝された水溶液の中に適宜含んでいる。有効化合物の濃度として適しているのは
、約1％から35％、好ましくは、約3％から15％である。一つの具体的な可能性と
しては、例えば、Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)に記載されてい
るように、電気輸送またはイオン泳動によって、パッチから化合物を送達するこ
とができる。

【００７２】 いずれの場合にも、単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることが
できる有効成分の量は、治療を受ける本人、および特定の投与方法によって変化
しうる。

【００７３】 上記のカプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤、ゲルキャップ、および顆粒剤を含む、
経口投与するための固体剤形は、ショ糖、乳糖、またはデンプンなどの少なくと
も1つの不活性希釈剤と混合された、本発明において有用な化合物を1種類または
それ以上含む。また、このような剤形は、通常の実施におけるように、不活性希
釈剤以外の添加物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、または
、シクロデキストリンなどの溶解剤も含む。カプセル剤、錠剤、粉剤、顆粒剤、
ゲルキャップ、および丸剤の場合には、剤形が緩衝剤を含んでいてもよい。さら
に、錠剤および丸剤は、腸溶コーティングとともに調製することができる。

【００７４】 経口投与するための液状剤形には、薬学的に許容される乳剤、溶液、懸濁液、
シロップ、および当技術分野において通常使用される不活性希釈剤である水など
を含むエリキシル剤などがありうる。また、このような組成物は、湿潤剤、乳化
剤および懸濁剤、ならびに、甘味料、風味料、および香料などのアジュバントも
含みうる。

【００７５】 注射用調製物、例えば、滅菌した注射用の水性または油性の懸濁液を、適当な
分散剤または硬化剤および分散剤を用いて、既知の方法に従って製剤化すること
ができる。また、滅菌注射用調製物は、例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液の
ように、非毒性の非経口で許容される希釈剤または溶剤中の滅菌注射液または懸
濁液であってもよい。許容される賦形剤および溶剤で使用できるものには、水、
リンゲル溶液、および等張塩化ナトリウム溶液などがある。さらに、滅菌した固
定油が、溶媒または懸濁培地として通常使用される。この目的には、合成モノグ
リセリドまたはジグリセリドを含む、無菌性の固定油を用いることができる。さ
らに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射液の調製に用いることができる。

【００７６】 薬学的に許容される担体には、前記の担体などが含まれる。

【００７７】 併用療法において、本発明において有用な治療物質の2種類以上の投与は、別
個の処方剤を連続的に投与するか、または単一製剤もしくは別個の製剤を同時に
投与して行うことができる。投与は、経口経路によって、または、静脈内注射、
筋肉内注射、もしくは皮下注射によって行うことができる。製剤は、ボーラスの
形状、または水性もしくは非水性の等張滅菌注射溶液もしくは懸濁液の形状にす
ることができる。これらの溶液および懸濁液は、1種類またはそれ以上の薬学的
に許容される担体もしくは希釈剤、またはゼラチンもしくはヒドロキシプロピル
メチルセルロースなどの結合剤を、1種類またはそれ以上の潤滑剤、保存剤、表
面活性剤、または分散剤と共に含む滅菌粉剤もしくは顆粒剤から調製することが
できる。

【００７８】 経口投与するには、薬学的組成物を、例えば、錠剤、カプセル剤、懸濁液、ま
たは液剤の形状にすることができる。カプセル剤や錠剤などは、当技術分野にお
いて公知の常法によって調製することができる。薬学的組成物は、好ましくは、
特定の1種類またはそれ以上の有効成分を含む用量単位の形状にする。用量単位
の例としては、錠剤またはカプセル剤である。これらは、1種類またはそれ以上
の治療用化合物を上記の量で含みうるという利点をもつ。例えば、IBAT阻害剤の
場合、用量範囲は、約0.01 mg/日から約500 mg/日、またはこれ以外の任意の用
量であってもよいが、当技術分野において知られているように、具体的な阻害剤
によって異なる。ニコチン酸誘導体の場合には、用量範囲は、約0.01 mgから約5
00 mg、またはそれ以外の任意の用量であってもよいが、当技術分野において知
られているように具体的な阻害剤によって異なる。

【００７９】 有効成分は、例えば、食塩水、デキストロース、または水を適当な担体として
用いることのできる組成物として、注射によって投与することもできる。それぞ
れの有効な治療用化合物について一日当たりの適当な用量は、上述した経口投与
によって生じるのと同じ血液血清レベルを生じさせる用量である。

【００８０】 治療用化合物は、さらに、経口/経口、経口/非経口、または非経口/非経口の
経路を組み合わせて投与してもよい。

【００８１】 本発明の治療法において使用する薬学的組成物は、経口で投与するか、または
静脈内投与することができる。経口投与による併用療法が好適である。経口投与
のための投薬は、一日一回の投薬を必要とするレジメ、または、一日おきに一回
投薬する必要のあるレジメ、または一日中間隔をおいて複数回投与する必要のあ
るレジメによって行うことができる。併用療法を成り立たせる治療用化合物は、
組み合わされた剤形で、または実質的に同時に経口投与するための分離した剤形
のいずれかで、同時に投与することができる。また、併用療法を成り立たせる治
療用化合物は、二段階の摂取を必要とするレジメによって、投与すべき治療用化
合物をそれぞれ連続して投与することもできる。すなわち、あるレジメにおいて
は、別々の有効薬剤を、間隔を開けて摂取して、治療用化合物を連続的に投与す
る必要がある。複数の摂取段階間の時間的な間隔は数分から数時間であるが、治
療用化合物の有効性、可溶性、生物学的利用能、血漿半減期、および動力学的プ
ロフィールといった各治療用化合物の性質、ならびに食物摂取の効果、および患
者の年齢および状態によって異なる。標的分子濃度の概日変化によっても、最適
な投薬間隔が決定される可能性がある。併用療法における治療用化合物で、同時
に投与されるか、実質的に同時に投与されるか、または連続的に投与されるもの
は、一方の治療用化合物を経口経路によって投与し、他方の治療用化合物を静脈
内経路によって投与する必要のあるレジメを含んでいてもよい。治療用化合物が
、経口経路によって、もしくは静脈内経路によって投与されようと、または別々
に投与されるか、もしくは同時投与されようと、治療用化合物はそれぞれ、薬学
的に許容される賦形剤、希釈剤、またはその他の製剤組成物からなる適当な薬剤
に含まれていると思われる。薬学的に許容される適当な、経口投与用の治療用化
合物を含む製剤は上記している。

【００８２】治療レジメ 例えば、アテローム性動脈硬化症など、疾患の要素として高脂血症を示す症状
を予防、緩和、または改善するための投薬レジメ、または本発明の化合物および
/もしくは組成物によって高コレステロール血漿もしくは血液に対する防御また
は更なる治療を行うための投薬療法を、さまざまな要素にしたがって選択する。
それらの要素には、患者のタイプ、年齢、体重、性別、食事、および臨床症状、
疾患の重症度、投与経路、使用される特定の化合物の活性、効能、薬物動力学、
および毒物学的プロフィールなどの薬学的な判断要素、薬物送達システムを利用
するか否か、ならびに化合物が薬物組み合わせの一部として投与されるか否かが
含まれる。

【００８３】 高脂血症を罹患した患者の初期治療を、まず、先に示した用量で開始すること
ができる。一般的に、治療は、必要に応じ、高脂血症状態が抑制されるか消失す
るまで数週間から数ヶ月、または数年の期間にわたって続けられるべきである。
本明細書で開示された化合物または組成物による治療を受けている患者を、例え
ば、当技術分野において公知のいずれかの方法により血清中のLDL量および総コ
レステロール量を測定することによって、日常的にモニタリングして、併用療法
の有効性を判定する。このようなデータを継続的に解析することによって、治療
中に治療レジメを修正することが可能になり、その結果、いずれの時点でも、各
タイプの治療用化合物をそれぞれ最も有効な量で投与することができるようにな
り、また、治療期間を決定することも可能になる。このようにして、全治療コー
スにわたって、治療レジメ/投薬スケジュールを合理的に修正することができる
ようになり、その結果、満足のゆく効果を合わせて示す最も低量の治療用化合物
が投与され、且つ高脂血症状態の治療に成功するのに必要な期間だけ投与を続け
ることができるようになる。

【００８４】 本明細書に開示された併用療法の利点として考えられるのは、アテローム性動
脈硬化症や高コレステロール血症などの高脂血症状態を治療するのに有効な任意
の各種治療用化合物、またはすべての治療用化合物の量を減少させることができ
ることである。用量を減少させることによって、単剤療法と比較した場合に個々
の治療用化合物の副作用を減少させることを含む利点が提供されると思われる。

【００８５】 本発明のいくつかの態様の一つは、第1の量のIBAT阻害剤、および第2の量の別
の心血管治療物質を使用することを含む、高脂血症またはアテローム性動脈硬化
症の予防および治療に有用な併用療法であって、該第1の量と第2の量が合わせて
、化合物の抗高脂血症状態に有効な量または抗アテローム性動脈硬化症状態に有
効な量を含む併用療法を含む。例えば、本発明における多くの態様の一つは、治
療用量のIBAT阻害剤およびフィブリン酸誘導体を含む併用療法である。本発明の
好ましい態様は、治療用量のベンゾチエピンIBAT阻害剤およびフィブリン酸誘導
体を含む組み合わせ療法である。

【００８６】 以下の非限定的な実施例は、本発明の種々の局面を説明するのに役立つ。

【００８７】c．実施例 表3は、本発明の組み合わせの例をいくつか例示したものであり、この組み合
わせは、第1の量のIBAT阻害剤、および第2の量のニコチン酸誘導体を含み、該第
1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗高脂血症状態に有効な量、または抗アテ
ローム性動脈硬化症状態に有効な量を含んでいる。

【００８８】

【表３】

【００８９】生物学的アッセイ法 本発明の組み合わせの有用性を以下のアッセイ法によって示す。これらのアッ
セイ法は、本質的には、本発明の有用性を明らかにすると認められる方法を用い
て、インビトロ、および動物モデルで行なわれる。

【００９０】[¹⁴C]-アラニンの取り込みを阻害する化合物のインビトロアッセイ法 標識タウロコール酸の代わりに標識アラニンを用いる以外はタウロコール酸ア
ッセイ法と同じ方法で、アラニン取り込みアッセイ法を行うことができる。

【００９１】ラットの糞便中の胆汁酸濃度（FBA）の測定 個体ごとに収容したラットから排泄された糞便を24時間または48時間の間、全
部集め、窒素気流下で乾燥させ、微粉砕し、混ぜ合わせてから重さを計測する。
約0.1グラムを量り取って、有機溶媒（ブタノール/水）に抽出させる。分離およ
び乾燥の後、残渣をメタノールに溶解し、NADを減少させる、胆汁酸との3α-ヒ
ドロキシステロイドステロイドデヒドロゲナーゼ反応を用いて、存在する胆汁酸
の量を酵素的に測定する。（参照として本明細書に組み入れられるMashige, F.
ら、Clin. Chem., 27, 1352 (1981)を参照のこと。）

【００９２】ラットの胃管栄養アッセイ法 経口胃管栄養法を用いて、雄のウィスター（Wister）ラット（275〜300 g）に
IBAT阻害剤を投与する。薬剤または賦形剤（0.2％ TWEEN 80水溶液）をさまざま
な用量にし、最終容量が体重1キログラム当たり2 mLを4日間にわたり一日一回（
午前9〜10時）投与する。（TWEEN 80は、20モルのポリエチレンオキシドソルビ
タンモノオレイン酸（polyethyleneoxide sorbitan monooleate）の界面活性剤
であり、米国デラウエア州ウィルミントン（Wilmington）、ICIスペシャルティ
ケミカルズ社（ICI Specialty Chemicals）によって製造されている。）治療期
間の最後の48時間に、全部の糞便試料を集め、下述するような酵素アッセイ法を
用いて、胆汁酸含有量を分析する。治療されたラットの糞便中の胆汁酸（FBA）
濃度の上昇を、賦形剤群のラットにおける平均FBA濃度と比較して、化合物の有
効性を判定する。

【００９３】ウサギ刷子縁膜小胞（BBMV）における[³H]-タウロコール酸の取り込み マラティ（Malathi）ら（Biochimica Biophysica Acta, 554, 259 (1979)、参
照として本明細書に組み入れられる）に記載されているカルシウム沈殿法によっ
て、凍結された回腸粘膜からウサギ回腸の刷子縁膜を調製する。タウロコール酸
塩を測定する方法は、アッセイ容量が100 μlではなく200 μlになっているとこ
ろを除けば、本質的には、クレイマー（Kramer）ら（Biochimica Biophysica Ac
ta, 1111, 93 (1992)；参照として本明細書に組み入れられる）に記載されてい
るとおりである。要約すると、室温で、2 μMの[³H]-タウロコール酸（0.75 μC
i）、20 mMトリス、100 mM NaCl、100 mMマンニトール、pH 7.4を含む溶液190
μlを、10 μlの刷子縁膜小胞（60〜120 μgタンパク質）とともに5秒間インキ
ュベートする。インキュベーションは、ボルテックスをしながらBBMVを加えるこ
とによって開始し、氷冷した緩衝液（20 mM Hepes-tris、150 mM KCl）5 mlを加
えることによって停止するが、停止後、ナイロンフィルター（0.2 μm孔径）で
直ちに濾過し、さらに、5 mlの停止緩衝液でさらに洗浄する。

【００９４】アシル-CoA；コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ACAT） ハムスターの肝臓およびラットの腸ミクロソームを、前記（J. Biol. Chem.,
255, 90098 (1980)；参照として本明細書に組み入れられる）のように、組織か
ら調製し、ACAT酵素の供給源として用いる。アッセイ法は、50 mMのリン酸ナト
リウムと2 mM DTT pH 7.4の緩衝液で、0.25％ BSAおよび200 μgのミクロソーム
タンパク質を含む緩衝液の中に24 μMのオレオイル-CoA（0.05 μCi）を含む、2
.0 mlのインキュベーション液からなる。本アッセイ法は、オレイルCoAを添加す
ることによって開始する。反応は、37℃で5分間進行し、8.0 mlのクロロホルム
：メタノール（2:1）を添加することによって終結する。抽出液には、担体とし
て作用させるために、クロロホルムメタノール中の125 μgのコレステロールオ
レイン酸を加え、抽出液の有機相および水相を、完全にボルテックスした後に遠
心して分離する。クロロホルム相を取り出して乾燥させてから、シリカゲル60 T
LCプレートにスポットすると、ヘキサン/エチルエーテル（9:1）になる。発生す
るコレステロールエステルの量は、TLCプレート上のコレステロールオレイン酸
スポットに取り込まれた放射能量を、パッカードインスタイメージャー（Packar
d Instaimager）を用いて測定して決定することができる。

【００９５】肝臓コレステロール濃度（HEPATIC CHOL）の測定 肝臓組織の重さを計測した後、クロロホルム：メタノール（2:1）の中でホモ
ジナイズする。破砕して遠心分離した後、上清を分離して、窒素存在下で乾燥さ
せる。残渣をイソプロパノールに溶解させてから、アレイン（Allain）、C. A.
ら、Clin. Chem., 20, 470 (1974)（参照として本明細書に組み入れられる）に
記載されているように、コレステロールオキシダーゼとペルオキシダーゼを用い
て、コレステロール含量を酵素的に測定する。

【００９６】肝臓HMG CoAレダクターゼ活性（HMG COA）の測定 肝臓試料をリン酸/ショ糖緩衝液の中でホモジナイズした後に遠心分離によっ
て分離して、肝臓のミクロソームを調製する。最終的な沈殿物を緩衝液に再懸濁
し、アリコートを¹⁴C-HMG-CoA（デュポン-NEN社製）存在下、37℃で60分間イン
キュベートして、HMG CoAレダクターゼ活性を測定する。6 N HCLを加えて反応を
停止させた後、遠心分離する。上清のアリコートを薄層クロマトグラフィーによ
って分離し、酵素産物に対応したスポットをプレートから掻き取って抽出し、シ
ンチレーションカウントによって放射能を測定する。（参考文献：Akerlund, J.
およびBjorkhem, I. (1990) J. Lipid Res. 31, 2159）

【００９７】肝臓コレステロール7-α-ヒドロキシラーゼ活性の測定（7α-OHase） 肝臓試料をリン酸/ショ糖緩衝液中で破砕した後に、遠心分離によって分離し
て、肝臓のミクロソームを調製する。最終的な沈殿物を緩衝液に再懸濁し、アリ
コートを、NADPH存在下、37℃で5分間インキュベートして、コレステロール7-α
-ヒドロキシラーゼ活性を測定する。石油エーテル中で抽出した後、有機溶媒を
蒸発させ、残渣をアセトニトリル/メタノールに溶解させる。抽出液のアリコー
トをC18逆相HPLCカラム上に注入し、240 nmでのUV検出を用いて、溶出物の定量
を行うことによって、酵素産物を分離する。（参考文献：Horton, J.D.ら、(199
4) J. Clin. Invest. 93, 2084）

【００９８】血清コレステロール（SER.CHOL、HDL-CHOL、TGIおよびVLDL + LDL）の測定 和光純薬（Wako Fine Chemicals）(バージニア州リッチモンド)由来の市販キ
ット；コレステロールC11、カタログ番号：276-64909を用いて、総血清コレステ
ロール（SER.CHOL）を酵素的に測定する。同じキットを用いて、HDLコレステロ
ール（HDL-CHOL）を、シグマケミカル社（Sigma Chemical Co.）のHDLコレステ
ロール試薬、カタログ番号：352-3によって（デキストラン硫酸法で）VLDLおよ
びLDLを沈殿させた後に測定する。血清中の総トリグリセリド量（ブランク）（T
GI）を、シグマケミカル社のGPO-トリンダー（GPO-Trinder）、カタログ番号：3
37-Bによって酵素的に測定する。VLDLおよびLDL（VLDL + LDL）コレステロール
濃度は、総コレステロール量とHDLコレステロール量との間の差として計算する
。

【００９９】ハムスター糞便中の胆汁酸濃度(FBA)の測定 個別に飼育されているハムスターから排泄された総糞便を24〜48時間回収し、
窒素気流下で乾燥し、粉砕して、秤量する。約0.1グラムを秤量し、有機溶媒（
ブタノール/水）で抽出する。分離および乾燥後、残渣をメタノールに溶解し、
存在する胆汁酸の量を、3α-ヒドロキシステロイド・ステロイド・デヒドロゲナ
ーゼ反応を使用して胆汁酸をNADに還元することにより酵素的に測定する(Mashig
e, F.ら、Clin. Chem., 27, 1352(1981)、参照として本明細書に組み入れられる
)。

【０１００】脂肪低下剤を評価するためのイヌモデル マーシャル牧場（Marshall farm）などの販売業者から入手した、体重6〜12 k
gの雄のビーグル犬に一日一回、2時間餌を与え、水は自由に飲ませておく。イヌ
たちは、それぞれ6匹から12匹のイヌからなる、例えば、賦形剤、i.g.；1 mg/kg
, i.g.；2 mg/kg, i.g.；4 mg/kg, i.g.；2 mg/kg, p.o.（カプセルに入った粉
剤）などの投薬群に無作為に振り分ける。水溶液（例えば、0.2％ Tween 80溶液
［ポリオキシエチレンモノオレイン酸塩、ミズーリ州セントルイス、シグマケミ
カル会社（Sigma Chemical Co.）］に溶解した治療用物質の胃内への投薬は、胃
管栄養チューブを用いて行うことができる。投薬を開始する前には、血清中のコ
レステロール（総コレステロールおよびHDL）およびトリグリセリドを評価する
ため、食餌を与える前の午前中に橈側皮静脈から血液試料を採取する。数日間継
続して、午前中、食餌を与える前に動物に投薬を行う。動物には、残った食べ物
を食べ終わるまで、2時間の食事時間を与える。実験の最後に、2日間にわたる糞
便を採集し、胆汁酸含有量または脂肪含量について解析を行うことができる。実
験前の血清中の脂肪レベルと比較するため、血液試料も治療期間の終わりに採取
する。標準的なスチューデントT検定を、p<.05で用いて統計的有意性を判定する
。

【０１０１】 イヌの血清中の脂肪測定 絶食させたイヌの橈側皮静脈から血液を採取して、血清分離チューブの中に入
れる（バキュテナーSST（Vacutainer SST；ニュージャージー州フランクリンレ
イク、ベクトンディキンソン社）。血液を2000 rpmで20分間遠心して、血清をデ
カントする。

【０１０２】 比色定量的に測定できる過酸化水素を生じさせるコレステロールオキシダーゼ
反応を利用した和光の酵素診断キット（コレステロールCII）（和光純薬（Wako
Chemicals）、バージニア州リッチモンド)を用いて、96ウェルフォーマット上で
総コレステロールを測定することができる。0.5 μgから10 μgのコレステロー
ルから標準曲線をプレートの最初の2列で作成する。血清試料（20〜40 μl、予
想される脂肪濃度による）、または既知の血清対照試料を、反復して別々のウェ
ルに加える。水を加えて、それぞれのウェルを100 μlの容量にする。発色試薬
の100 μlのアリコートを各ウェルに加え、37℃で15分間インキュベートした後
、500 nmでプレートを読む。

【０１０３】 HDLコレステロールは、LDLとVLDLを選択的に沈殿させるためにデキストラン硫
酸とMgイオンとを利用する、シグマのキット番号：352-3（ミズーリ州セントル
イス、シグマケミカル会社（Sigma Chemical Co.））を用いてアッセイすること
ができる。各血清試料について150 μl容量を、各遠心チューブに加えた後、15
μlのHDLコレステロール試薬（シグマ352-3）を添加する。試料を混合して、500
0 rpmで5分間遠心する。次に、50 μlの上清アリコートを200 μlの食塩水と混
合して、総コレステロール量を測定する方法と同一の方法を用いてアッセイする
。

【０１０４】 シグマのキット番号：337を用いて、96ウェルフォーマット上でトリグリセリ
ドを測定する。この方法では、トリグリセリドがリポタンパク質リパーゼと反応
してグリセロールを遊離した後に、グリセロールを測定する。1 μgから24 μg
の範囲のグリセロール標準溶液（シグマ339-11）を用いて、標準曲線を作成する
。血清試料（20〜40 μl、予想される脂肪濃度による）を反復してウェルに加え
る。水を加えて、各ウェルの容量を100 μlにし、100 μlの発色試薬も各ウェル
に加える。混合し、15分間インキュベートした後、540 nmでプレートを読み、標
準曲線からトリグリセリド値を計算する。複製したプレートも、酵素試薬をブラ
ンクに用いて実験を行い、血清試料中の内因性グリセロールについて補正する。

【０１０５】 イヌの糞便中の胆汁酸測定 糞便試料を採集して、各動物ごとに糞便中の胆汁酸(FBA)濃度を決定すること
ができる。糞便の採集は、実験の最後の48時間の間、2つの連続する24時間の間
、投薬および餌を食べる前に、毎日午前9時から10時の間に行うことができる。
各動物からの2日分の採集物を別々にして、重さを計測し、プロセッサー（クウ
ィジナート（Cuisinart））の中で滅菌水とともにまとめて破砕して、均一なス
ラリーを作製する。約1.4 gのホモジェネートを、最終濃度50％の第3級ブタノー
ル/滅菌水（2：0.6）中、37℃の温水槽に入れ、45分間で抽出し、2000×gで13分
間遠心分離する。胆汁酸の濃度（mmoles/日）は、96ウェル酵素アッセイシステ
ム（1, 2）を用いて測定することができる。糞便抽出物の20 μlアリコートを、
3回反復（triplicate）ウェルの2組に加える。標準化されたタウロコール酸ナト
リウム溶液、および標準化された糞便抽出液（事前にプールされた試料から作製
され、その胆汁酸濃度について特徴付けられている）も、アッセイの品質管理に
ついて分析することができる。標準曲線を作成するために連続稀釈した、タウロ
コール酸ナトリウムの20ミリリットルアリコートも同様に、3回反復ウェルの2組
に加える。1 Mヒトラジン水和物、0.1 Mピロリン酸、および0.46 mg/mlのNADを
含む反応混合液230 μlを各ウェルに加える。次に、50 μlアリコートの3a-ヒド
ロキシステロイドデヒドロゲナーゼ酵素（HSD；0.8ユニット/ml）またはアッセ
イ緩衝液（0.1 Mピロリン酸ナトリウム）を、3回反復ウェル2組のうちの一つに
加える。試薬はすべて、ミズーリ州セントルイス、シグマケミカル社から入手す
ることができる。室温で60分間インキュベートした後、340 nmにおける吸光度を
測定し、3回反復試料の各セットの平均値を計算する。吸光度±HSD酵素における
差異を用い、タウロコール酸ナトリウムの標準曲線に基づいて、各試料の胆汁酸
濃度（mM）を測定する。抽出物の胆汁酸濃度、糞便ホモジェネートの重量（グラ
ム）、および動物の体重を用いて、各動物について対応するFBA濃度をmmoles/kg
/日として計算する。治療の結果としてFBA濃度が上昇した（デルタ値）ことを判
定するために、賦形剤群のFBA平均濃度（mmoles/kg/日）を、各治療群のFBA濃度
から差し引く。

【０１０６】腸コレステロール吸収アッセイ法 さまざまな化合物が、腸管からのコレステロールの吸収を阻害することが示さ
れている。これらの化合物は、外因性の供給源（食物性コレステロール）および
内因性コレステロール（胆嚢から腸管に分泌される）の双方に由来するコレステ
ロールの腸による吸収も抑制することにより、血清中のコレステロール量を低下
させる。

【０１０７】 ハムスターにおいては、腸によるコレステロールの吸収を測定するための二重
同位体血漿比率法（dual-isotope palsma ratio）の使用法が、ターレイ（Turle
y）による記載（J. Lipid Res. 35, 329-339 (1994)）のように、改良され、評
価されている。

【０１０８】 12時間間隔で明暗を繰り返す部屋の中で体重80〜100 gの雄のハムスターに自
由に食餌と水を与える。明期において4時間の時点で、各ハムスターに、イント
ラリピド（Intralipid）(20％)に懸濁した2.5 μCiの[1,2-³H]コレステロールの
静脈内投与量を初回投与し、次に、中鎖トリグリセリド（medium chain triglyc
erids: MCT）の油中の[4-¹⁴C]コレステロールの経口投与量を投与する。静脈内
投与（i.v.）用量は、0.4 ml容量のイントラリピド（Intralipid）混合液を遠位
の大腿静脈に注射することにより投与する。経口投与量は、0.6 ml容量のMCT油
脂混合物を、ポリエチレン製チューブを通して、胃内に導入する胃管栄養法によ
って投与する。72時間後、ハムスターを放血させて、血漿内における³Hおよび¹⁴ Cの量、および最初に投与された標識量を、液体シンチレーション分光測定法に
よって測定する。コレステロール吸収は、以下の等式に基づいて計算する。

【０１０９】ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（MTP）アッセイ法： MTPは、肝臓組織または培養細胞（例えば、HepG2細胞など）から、オーリンガ
ー（Ohringer）らが記載する方法（Acta Crystallogr. D52, 224-225（1996）；
参照として本明細書に組み入れられる）など、標準的な方法を用いて精製するこ
とができる。

【０１１０】 その後、MTP活性解析を、ジャミル（Jamil）らが記載するように（Proc. Natl
. Acad. Sci. 93, 11991-11995 (1996)；参照として本明細書に組み入れられる
）にしたがって行うことができる。

【０１１１】 このアッセイ法の基本は、MTP存在下で、供与体となる小胞集団から受容体と
なる小胞集団への標識トリグリセリドの転移を測定するためのものである。MTP
の阻害剤は、MTPを加える前に、MTPの阻害剤を混合液に加えることで評価するこ
とができる。供与体となる小胞は、卵のリン脂質、カルジオリピン、³H標識リン
脂質、および¹⁴C標識トリグリセリドの水性混合液を超音波破砕することにより
調製される。受容体となる小胞は、卵のリン脂質の水性混合液と超音波破砕する
ことにより調製される。この小胞溶液は、MTP阻害剤を加えて混合するか、加え
ないままにしておいてから、MTPを加えて転移反応を開始させる。このアッセイ
法では、60分後に0.5 mlのDE-52セルロースを加えて終了させ、その後、遠心分
離して供与分子を沈殿させる。沈殿物中、および混合液中に最初に存在していた
標識量中に存在する³Hと¹⁴Cの量を、液体シンチレーション分光測定法によって
測定する。脂質輸送速度は、以下の式を用いる一次反応速度に基づいて計算され
る： 式中、[S]₀および[S]は、それぞれ時間0とtにおける、供与体である膜ペレット
に存在する¹⁴C標識の画分であり、kは、単位時間当たりに転移される標識画分で
ある。

【０１１２】ウサギにおける血漿脂質アッセイ法 血漿脂質は、参照として本明細書に組み入れられる、シュー（Schuh）ら、J.
Clin. Invest., 91, 1453-1458 (1993)によって報告されているような方法を用
いて測定することができる。ニュージーランドシロウサギの雄の群に、0.3％コ
レステロールおよび2％コーン油（ザイグラーブラザーズ社、ペンシルバニア州
ガードナー（Gardner））を添加した標準的な食餌（100 g/日）を与える。水は
自由に与える。対照群および処理動物群は、処理後1ヶ月後および3ヶ月後に屠殺
する。アテローム性動脈硬化症の病変部の特徴を調べるために組織を除去する。
血漿脂質濃度を測定するために血液試料を採取する。

【０１１３】 血漿脂質 脂質分析のための血漿は、耳の静脈からEDTAを含むチューブ（バキュテナー（
Vacutainer ；ニュージャージー州ラザフォード（Rutherford）、ベクトン・デ
ィキンソン社（Becton Dickinson））の中に血液を取り出した後、遠心分離して
細胞を分離する。コレステロールオキシダーゼ反応（C.A. Allainら、Clin. Che
m.,20, 470-475 (1974)；参照として本明細書に組み入れられる）を用いて総コ
レステロール量を酵素的に測定した。HDLコレステロールも、マグネシウムを含
むデキストラン硫酸によってLDLとVLDLを選択的に沈殿させた後、酵素的に測定
した（G.R. Warnickら、Clin. Chem., 28, 1379-1388（1982）；参照として本明
細書に組み入れられる）。血漿中のトリグリセリド量は、リポタンパク質リパー
ゼによって遊離されるグリセロール量を酵素結合アッセイ法（G. Bucoloら、Cli
n. Chem., 19, 476-482 (1973)；参照として本明細書に組み入れられる）により
測定することによって決定される。

【０１１４】 アテローム性動脈硬化症 動物をペントバルビタール注射により屠殺する。胸大動脈を速やかに切り取り
、10％中性緩衝ホルマリンに浸漬して固定し、オイルレッド0（0.3％）にて染色
する。動脈口の反対側の壁に沿って縦に切り込みを一つ入れた後、病斑領域を評
価するために、血管を開いてピンで留める。解剖用顕微鏡に搭載されたカラー写
真用カメラ（東芝3CCD）を接続しているカラー画像解析装置（ビデオメトリック
150（Videometric 150；カリフォルニア州サンディエゴ、アメリカンイノビジョ
ン社（American Innovision））を用いる閾値解析によって、調べた領域全体に
関する値および染色した領域に関する値から、病斑の被覆率％を決定する。組織
中のコレステロールは、フォルク（Folch）ら、（J. Biol. Chem., 226, 497-50
9 (1957)；参照として本明細書に組み入れられる）の方法に従い、クロロホルム
：メタノール（2:1）混合物で抽出した後、既述したように酵素的に測定する。

【０１１５】 インビトロにおける血管応答 ペントバルビタールナトリウムを注射した後、腹大動脈を速やかに切り出して
、酸素添加したクレブス重炭酸緩衝液の中に入れる。血管周囲の組織を取り除い
た後、3 mmの環状セグメントを切り出して、クレブス重炭酸溶液を入れた37℃の
筋肉用温水槽に入れ、1本がフォース・トランスデューサー（force transducer
）（マサチューセッツ州クインシー（Quincy）、グラスインスツルメント社（Gl
ass InstrumentCo., MA））に接触している2本のステンレス製ワイヤの間に吊す
。温水槽にアンギオテンシンIIを加えると、それに応答して、力（force）が変
化し、それがチャート記録装置に記録される。

【０１１６】 本明細書における実施例は、前記実施例で用いた治療用化合物または不活性成
分の代わりに、一般的または具体的に記述された治療用化合物または不活性成分
を用いて実施することができる。

【０１１７】 以上、本発明を説明してきたが、同一発明が多様な方法において変化すること
があるのは明らかである。このような変化は、本発明の精神と範囲に逸脱するも
のとしては見なされるべきではなく、当業者に明らかな改変や同等なものはすべ
て特許請求の範囲内に含まれるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/77 Ａ６１Ｋ 31/77 45/00 45/00 Ａ６１Ｐ 1/00 Ａ６１Ｐ 1/00 3/06 3/06 9/10 １０１ 9/10 １０１ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 コノリー ダニエル ティー． アメリカ合衆国 ミズーリ州 ボールウィ ン マラード ウッズ ドライヴ 878 Ｆターム(参考） 4C084 AA17 NA14 ZA451 ZA661 ZC331 4C086 AA01 AA02 BB01 BC19 BC91 EA02 GA08 MA08 NA14 ZA45 ZA66 ZC33

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 第1の量の回腸胆汁酸輸送阻害化合物と第2の量のニコチン酸
   誘導体化合物とを含み、該第1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗高脂血症状
   態に有効な量、抗アテローム性動脈硬化症状態に有効な量、または抗高コレステ
   ロール血症状態に有効な量を含む治療用組み合わせ。
2. 【請求項２】 回腸胆汁酸輸送阻害化合物が、下記の式B-2の構造を有する
   化合物またはその鏡像異性体もしくはラセミ体である、請求項1記載の治療用組
   み合わせ。 【化１】
3. 【請求項３】 回腸胆汁酸輸送阻害化合物が、下記の式B-12の構造を有する
   、またはその鏡像異性体もしくはラセミ体である、請求項1記載の治療用組み合
   わせ。 【化２】
4. 【請求項４】 回腸胆汁酸輸送阻害化合物が、下記の式B-29の構造を有する
   、またはその鏡像異性体もしくはラセミ体である、請求項1記載の治療用組み合
   わせ： 【化３】 式中、PEGは約3000〜約4000分子量のポリエチレングリコールポリマー鎖である
   。
5. 【請求項５】 回腸胆汁酸輸送阻害化合物が、下記の式B-7の構造を有する
   、またはその鏡像異性体もしくはラセミ体である、請求項1記載の治療用組み合
   わせ。 【化４】
6. 【請求項６】 ニコチン酸誘導体がニコチン酸またはその塩である、請求項
   1記載の治療用組み合わせ。
7. 【請求項７】 ニコチン酸誘導体がニセリトロール(niceritrol)である、請
   求項1記載の治療用組み合わせ。
8. 【請求項８】 ニコチン酸誘導体がアシピモックス(acipimox)である、請求
   項1記載の治療用組み合わせ。
9. 【請求項９】 回腸胆汁酸輸送阻害化合物およびニコチン酸誘導体化合物を
   含有する組成物を含む、請求項1記載の治療用組み合わせ。
10. 【請求項１０】 予防または治療が必要な患者に、第1の量の回腸胆汁酸輸
    送阻害化合物と第2の量のニコチン酸誘導体化合物とを含有する組み合わせを単
    位剤形で投与することを含む、高脂血症状態を予防または治療するための方法で
    あって、該第1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗高脂血症状態に有効な量を
    含む方法。
11. 【請求項１１】 予防または治療が必要な患者に、第1の量の回腸胆汁酸輸
    送阻害化合物と第2の量のニコチン酸誘導体化合物とを含有する組み合わせを単
    位剤形で投与することを含む、アテローム性動脈硬化症状態を予防または治療す
    るための方法であって、該第1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗アテローム
    性動脈硬化症状態に有効な量を含む方法。
12. 【請求項１２】 予防または治療が必要な患者に、第1の量の回腸胆汁酸
    輸送阻害化合物と第2の量のニコチン酸誘導体化合物とを含有する組み合わせを
    単位剤形で投与することを含む、高コレステロール血症を予防または治療するた
    めの方法であって、該第1の量と第2の量が合わせて、化合物の抗高コレステロー
    ル血症状態に有効な量を含む方法。