JP2002531585A - ポリヌクレオチドをマクロピノサイト細胞にトランスフェクションするのに有用な治療組成物を製造するための免疫複合体の使用 - Google Patents
ポリヌクレオチドをマクロピノサイト細胞にトランスフェクションするのに有用な治療組成物を製造するための免疫複合体の使用Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
(57)【要約】
ポリヌクレオチドを標的マクロピノサイト細胞に導入するための治療組成物を製造するための、少なくとも１種の抗体またはその反応性部分と少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなり、かつ、０．５〜６μｍの間から選択される粒径を有する免疫複合体の使用が記載される。
Description
【０００１】
【発明の背景】発明の分野 本発明はポリヌクレオチドのマクロピノサイト細胞へのトランスフェクション
をターゲッティングする治療組成物を製造するための免疫複合体の使用に関する
。かかる組成物は遺伝子治療、予防接種および遺伝子を基にした産物をin vitro
、ex vivoまたはin vivoでかかる細胞に投与する治療状況または予防状況のいず
れにおいても有用である。
をターゲッティングする治療組成物を製造するための免疫複合体の使用に関する
。かかる組成物は遺伝子治療、予防接種および遺伝子を基にした産物をin vitro
、ex vivoまたはin vivoでかかる細胞に投与する治療状況または予防状況のいず
れにおいても有用である。
【０００２】背景技術 一般に、遺伝子治療は、主に遺伝的に欠陥のある疾病（嚢胞性繊維症、ジスト
ロフィー、血友病など）に適用でき、そこでは機能的遺伝子を導入することによ
って永久的な治療が達成され得ると考えられてきた。しかしながら、有益なタン
パク質を産生するよう宿主細胞を一時的に遺伝子操作することによって、もっと
大きな疾病集団、特に後天的な疾病（癌、ＡＩＤＳ、多発性硬化症など）を治療
できるであろう。かかる欠陥に関与する、または治療上注目される多数の遺伝子
が同定されている。患者内でのこれらの遺伝子の直接発現は、標的とされる組織
において機能的ポリペプチドが発現することで症状の改善に著しく寄与するはず
である。遺伝子治療の具体的な適用としては予防接種がある。これに関しては、
脊椎動物の細胞に導入されるポリヌクレオチドによってコードされる免疫原性産
物が産生および／または分泌され、さらにプロセッシングされ、主要組織適合性
抗原に関する抗原提示細胞（ＡＰＣ）細胞によって提示され、それによって発現
された免疫原に対する免疫応答を誘発し得る。マクロファージおよび樹状細胞、
特に「歩哨細胞(sentinel cell)」などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）は免疫応答の
開始において必須の役割を果たしている。それらは第一に抗原獲得および細胞内
抗原プロセッシング能があり、第二に、それらはプロセッシングされた抗原性ペ
プチドのＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞への提示に関与する膜貫通糖タ
ンパク質をコードしており、また特異的な補助タンパク質も産生し、それによっ
てＴ細胞の活性化をもたらすＭＨＣクラスＩおよび／またはＩＩ遺伝子を発現す
る。(Debrick et al., J. Immunol. 147 (1991), 2846; Reis et al., J. Exp.
Med. 178 (1993), 509; Kovacsovics-Bankowski et al., PNAS 90 (1993), 4942
; Kovacsovics-Bankowski et al., Science 267 (1995), 243; Svensson et al.
, J. Immunol. 158 (1997), 4229; Norbury et al., Eur. J. Immunol. 27 (199
7), 280)。従って、予防接種目的のためには、かかるＡＰＣ細胞への遺伝子導入
に向けることができ、該遺伝子がその細胞内産生後にプロセッシングされ、さら
に該細胞表面にあるＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスII複合体によってそれぞ
れＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋細胞に対して提示され得る抗原性ポリペプチ
ドをコードする、遺伝子治療系を利用できるようにすることが有利であり得る。
ロフィー、血友病など）に適用でき、そこでは機能的遺伝子を導入することによ
って永久的な治療が達成され得ると考えられてきた。しかしながら、有益なタン
パク質を産生するよう宿主細胞を一時的に遺伝子操作することによって、もっと
大きな疾病集団、特に後天的な疾病（癌、ＡＩＤＳ、多発性硬化症など）を治療
できるであろう。かかる欠陥に関与する、または治療上注目される多数の遺伝子
が同定されている。患者内でのこれらの遺伝子の直接発現は、標的とされる組織
において機能的ポリペプチドが発現することで症状の改善に著しく寄与するはず
である。遺伝子治療の具体的な適用としては予防接種がある。これに関しては、
脊椎動物の細胞に導入されるポリヌクレオチドによってコードされる免疫原性産
物が産生および／または分泌され、さらにプロセッシングされ、主要組織適合性
抗原に関する抗原提示細胞（ＡＰＣ）細胞によって提示され、それによって発現
された免疫原に対する免疫応答を誘発し得る。マクロファージおよび樹状細胞、
特に「歩哨細胞(sentinel cell)」などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）は免疫応答の
開始において必須の役割を果たしている。それらは第一に抗原獲得および細胞内
抗原プロセッシング能があり、第二に、それらはプロセッシングされた抗原性ペ
プチドのＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋Ｔ細胞への提示に関与する膜貫通糖タ
ンパク質をコードしており、また特異的な補助タンパク質も産生し、それによっ
てＴ細胞の活性化をもたらすＭＨＣクラスＩおよび／またはＩＩ遺伝子を発現す
る。(Debrick et al., J. Immunol. 147 (1991), 2846; Reis et al., J. Exp.
Med. 178 (1993), 509; Kovacsovics-Bankowski et al., PNAS 90 (1993), 4942
; Kovacsovics-Bankowski et al., Science 267 (1995), 243; Svensson et al.
, J. Immunol. 158 (1997), 4229; Norbury et al., Eur. J. Immunol. 27 (199
7), 280)。従って、予防接種目的のためには、かかるＡＰＣ細胞への遺伝子導入
に向けることができ、該遺伝子がその細胞内産生後にプロセッシングされ、さら
に該細胞表面にあるＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスII複合体によってそれぞ
れＣＤ８＋および／またはＣＤ４＋細胞に対して提示され得る抗原性ポリペプチ
ドをコードする、遺伝子治療系を利用できるようにすることが有利であり得る。
【０００３】 遺伝子治療の成功は生存する生物の細胞内への、遺伝情報の効率のよい送達と
発現に依存する。これに関しては、機能的ポリヌクレオチドを細胞に導入するた
めの、一時的トランスフェクションと呼ばれる、注目される遺伝子の一時的発現
またはポリヌクレオチドの宿主ゲノムへの組み込むことになる宿主細胞の永久的
な形質転換のいずれかをもたらす、種々の技術が提案されている。これまでに用
いられたほとんどの送達機構はウイルスベクター、特にアデノ−およびレトロウ
イルスベクターを必要とするものである。ウイルスは種々の、かつ、非常に複雑
な機構を発達させ、細胞膜の通過、リソソーム分解を免れること、それらのゲノ
ムの核への送達を含むこの目的を達成しており、その結果、ヒトに適用される予
防接種または遺伝子治療における多数の遺伝子送達適用において用いられてきた
。ウイルスの使用にはいくつかの不利な点がある。レトロウイルスベクターは大
きなＤＮＡを保持できず（例えば、約１３Ｋｂであるジストロフィー遺伝子）、
レトロウイルスゲノムは宿主細胞ＤＮＡに組み込まれるので、受容細胞に遺伝的
変化を引き起こし、また感染性ウイルス粒子は生物体内または環境中に広まる可
能性があり、またアデノウイルスベクターは治療された患者に強力な免疫応答を
誘導し得る(Mc Coy et al., Human Gene Therapy 6 (1995), 1553-1560; Yang e
t al., Immunity 1 (1996), 433-442)。しかしながら、これらの欠点にもかかわ
らず、ウイルスベクターはその効率のために目下のところ最も有用な送達系であ
る。
発現に依存する。これに関しては、機能的ポリヌクレオチドを細胞に導入するた
めの、一時的トランスフェクションと呼ばれる、注目される遺伝子の一時的発現
またはポリヌクレオチドの宿主ゲノムへの組み込むことになる宿主細胞の永久的
な形質転換のいずれかをもたらす、種々の技術が提案されている。これまでに用
いられたほとんどの送達機構はウイルスベクター、特にアデノ−およびレトロウ
イルスベクターを必要とするものである。ウイルスは種々の、かつ、非常に複雑
な機構を発達させ、細胞膜の通過、リソソーム分解を免れること、それらのゲノ
ムの核への送達を含むこの目的を達成しており、その結果、ヒトに適用される予
防接種または遺伝子治療における多数の遺伝子送達適用において用いられてきた
。ウイルスの使用にはいくつかの不利な点がある。レトロウイルスベクターは大
きなＤＮＡを保持できず（例えば、約１３Ｋｂであるジストロフィー遺伝子）、
レトロウイルスゲノムは宿主細胞ＤＮＡに組み込まれるので、受容細胞に遺伝的
変化を引き起こし、また感染性ウイルス粒子は生物体内または環境中に広まる可
能性があり、またアデノウイルスベクターは治療された患者に強力な免疫応答を
誘導し得る(Mc Coy et al., Human Gene Therapy 6 (1995), 1553-1560; Yang e
t al., Immunity 1 (1996), 433-442)。しかしながら、これらの欠点にもかかわ
らず、ウイルスベクターはその効率のために目下のところ最も有用な送達系であ
る。
【０００４】 Wolff et al, 1990, (Science 247, 1465-1468)では、いずれの特定の送達系
も用いずに裸のＲＮＡまたはＤＮＡをマウス骨格筋へ直接注入したところ、筋細
胞内でレポーター遺伝子が発現したと示している。しかしながら、これらの結果
は核酸はin vivoである細胞においてはそれ自身によって細胞取り込み可能で、
かつ、発現可能であることを示すものであるが、実際に得られたトランスフェク
ション効率は、特に核酸のポリアニオン性によって（これは負に荷電した細胞膜
を通る、それらの通過を制限する）極めて依然限られたものであった。
も用いずに裸のＲＮＡまたはＤＮＡをマウス骨格筋へ直接注入したところ、筋細
胞内でレポーター遺伝子が発現したと示している。しかしながら、これらの結果
は核酸はin vivoである細胞においてはそれ自身によって細胞取り込み可能で、
かつ、発現可能であることを示すものであるが、実際に得られたトランスフェク
ション効率は、特に核酸のポリアニオン性によって（これは負に荷電した細胞膜
を通る、それらの通過を制限する）極めて依然限られたものであった。
【０００５】 非ウイルス性合成ベクターの使用に基づいた文献では、核酸の細胞内取り込み
を向上させるための種々の方法が提案されており、これらは大規模生産、安全性
、、トランスフェクト可能な細胞の標的化、低い免疫原性、およびＤＮＡの大断
片を送達する能力に関して有利な可能性を提供している。このように、Felgner
et al. 1989, (Nature 337, 387-388)では核酸などの大きな陰イオン性分子の細
胞への導入を容易にするための陽イオン脂質の使用が提案された。これらの陽イ
オン脂質は陰イオン分子と複合体を形成することができ、従って、これらの分子
の負の電荷を中性化して複合体を密なものにする傾向があり、細胞へのその導入
に好都合となる。脂質媒介性トランスフェクション化合物の例としては、ＤＯＴ
ＭＡ(Felgner et al., PNAS 84 (1987), 7413-7417)、ＤＯＧＳまたはトランス
フェクタム（Transfectam）（商標）(Behr et al., PNAS 86 (1989), 6982-6986
)、ＤＭＰＩＥまたはＤＯＲＩＥ(Felgner et al., Methods 5 (1993), 67-75)、
ＤＣ−ＣＨＯＬ(Gao et Huang, BBRC 179 (1991), 280-285)、ＤＯＴＡＰ（商標
）(McLachlan et al., Gene Therapy 2 (1995), 674-622)またはリポフェクタミ
ン（Lipofectamine）（商標）がある。
を向上させるための種々の方法が提案されており、これらは大規模生産、安全性
、、トランスフェクト可能な細胞の標的化、低い免疫原性、およびＤＮＡの大断
片を送達する能力に関して有利な可能性を提供している。このように、Felgner
et al. 1989, (Nature 337, 387-388)では核酸などの大きな陰イオン性分子の細
胞への導入を容易にするための陽イオン脂質の使用が提案された。これらの陽イ
オン脂質は陰イオン分子と複合体を形成することができ、従って、これらの分子
の負の電荷を中性化して複合体を密なものにする傾向があり、細胞へのその導入
に好都合となる。脂質媒介性トランスフェクション化合物の例としては、ＤＯＴ
ＭＡ(Felgner et al., PNAS 84 (1987), 7413-7417)、ＤＯＧＳまたはトランス
フェクタム（Transfectam）（商標）(Behr et al., PNAS 86 (1989), 6982-6986
)、ＤＭＰＩＥまたはＤＯＲＩＥ(Felgner et al., Methods 5 (1993), 67-75)、
ＤＣ−ＣＨＯＬ(Gao et Huang, BBRC 179 (1991), 280-285)、ＤＯＴＡＰ（商標
）(McLachlan et al., Gene Therapy 2 (1995), 674-622)またはリポフェクタミ
ン（Lipofectamine）（商標）がある。
【０００６】 ポリマーによって媒介されるトランスフェクションに基づくその他の非ウイル
ス送達系も開発されている。例えば、ポリアミドアミン(Haensler et Szoka, Bi
oconjugate Chem. ４ (1993), 372-379)、樹状ポリマー（WO95/24221）、ポリエ
チレンイミンまたはポリプロピレンイミン（WO96/02655）、ポリリシン（US-A-5
,595,897またはFR-A-2 719 316）などの陰イオンポリマーの細胞送達のための使
用に関する多数の報告がある。さらに、ＷＯ９７／０２８４０には核酸と免疫ベ
クターをリンカーとしてｐ−ベンゾキノンを用いて結合させた産物が記載されて
おり、これは免疫ベクターが核酸の細胞取り込みを可能とし、かつ、免疫ベクタ
ーが、結合した核酸を細胞核に、または細胞核のすぐ近傍に導入できる程度に細
胞ＤＮＡと親和性があることを特徴とする。病原性狼瘡自己抗体を見出すための
初期のアプローチでは、かかる抗ＤＮＡ抗体は正常なマウスへの投与後に複数の
器官の生細胞において細胞および核膜の双方を通過して核内に局在することがで
きることがと示されている。しかしながら、1998, Avrameas et al. (PNAS 95,
5601-5606)では、これらの免疫グロブリンの細胞取り込みおよびそれに続く核局
在化はそれらの抗原結合領域に依存し、また多反応性抗ＤＮＡ抗体のみが細胞特
異性もなく、試験された生細胞に侵入できたことが示されている。
ス送達系も開発されている。例えば、ポリアミドアミン(Haensler et Szoka, Bi
oconjugate Chem. ４ (1993), 372-379)、樹状ポリマー（WO95/24221）、ポリエ
チレンイミンまたはポリプロピレンイミン（WO96/02655）、ポリリシン（US-A-5
,595,897またはFR-A-2 719 316）などの陰イオンポリマーの細胞送達のための使
用に関する多数の報告がある。さらに、ＷＯ９７／０２８４０には核酸と免疫ベ
クターをリンカーとしてｐ−ベンゾキノンを用いて結合させた産物が記載されて
おり、これは免疫ベクターが核酸の細胞取り込みを可能とし、かつ、免疫ベクタ
ーが、結合した核酸を細胞核に、または細胞核のすぐ近傍に導入できる程度に細
胞ＤＮＡと親和性があることを特徴とする。病原性狼瘡自己抗体を見出すための
初期のアプローチでは、かかる抗ＤＮＡ抗体は正常なマウスへの投与後に複数の
器官の生細胞において細胞および核膜の双方を通過して核内に局在することがで
きることがと示されている。しかしながら、1998, Avrameas et al. (PNAS 95,
5601-5606)では、これらの免疫グロブリンの細胞取り込みおよびそれに続く核局
在化はそれらの抗原結合領域に依存し、また多反応性抗ＤＮＡ抗体のみが細胞特
異性もなく、試験された生細胞に侵入できたことが示されている。
【０００７】 しかしながら、ポリヌクレオチドと提案されるベクターとの間で形成される複
合体と細胞膜との相互作用ならびにこれらの複合体の細胞および核への導入を可
能にする機構に関してはほとんど知られていない。進行中の研究は依然としてか
なり経験的なものであり、特定の細胞で特定の遺伝子を発現させるための満足の
いくモデルは全く提供していない。さらに、トランスフェクトされた細胞の大多
数はＡＰＣ細胞ではない。提案される解決法には、まず遺伝子取り込みを特異的
にターゲッティングするターゲッティング分子を同定することが必要である。
合体と細胞膜との相互作用ならびにこれらの複合体の細胞および核への導入を可
能にする機構に関してはほとんど知られていない。進行中の研究は依然としてか
なり経験的なものであり、特定の細胞で特定の遺伝子を発現させるための満足の
いくモデルは全く提供していない。さらに、トランスフェクトされた細胞の大多
数はＡＰＣ細胞ではない。提案される解決法には、まず遺伝子取り込みを特異的
にターゲッティングするターゲッティング分子を同定することが必要である。
【０００８】 いくつかのタンパク質またはポリペプチドが細胞への高分子の送達のためのタ
ーゲッティング分子として提案されている。受容体媒介性遺伝子導入は種々の分
化した細胞の表面にある受容体の、リガンドと効率的に結合し、さらに内部に取
り込み、特定の組織へのＤＮＡ取り込みをターゲッティングできる能力を利用し
ている。この系は注目されるＤＮＡ、受容体ターゲッティング・リガンド含有タ
ンパク質、およびほとんどの場合において、結合性ポリカチオンを含む。以下は
受容体／ターゲッティング・リガンド系の例である：アシアロ糖タンパク質／ア
シアロオロムコイド−ポリ（Ｌ−リジン）、トランスフェリン／トランスフェリ
ン−ポリ（Ｌ−リジン）、インシュリン／アルブリン−インシュリン複合体、お
よび特に、マクロファージをターゲッティングするためのマンノース／マンノシ
ル化−ポリ（Ｌ−リジン）（総説に関しては、Perales et al., European J. Bi
och. 226 (1994), 255-266)。しかしながら、遺伝子導入において有用であるた
めには、ＤＮＡ送達ビヒクルの設計に関与する試薬の化学的特性および物理的相
互作用の双方が厳密に同定されていることが重要である。さらに、このターゲッ
ティング系の主要な不利な点の１つはＤＮＡ／リガンド複合体を調製するのが困
難であり、かつ、注目される遺伝子をすべてのＡＰＣに直接トランスフェクショ
ンする解決法を提供する系がないということである。
ーゲッティング分子として提案されている。受容体媒介性遺伝子導入は種々の分
化した細胞の表面にある受容体の、リガンドと効率的に結合し、さらに内部に取
り込み、特定の組織へのＤＮＡ取り込みをターゲッティングできる能力を利用し
ている。この系は注目されるＤＮＡ、受容体ターゲッティング・リガンド含有タ
ンパク質、およびほとんどの場合において、結合性ポリカチオンを含む。以下は
受容体／ターゲッティング・リガンド系の例である：アシアロ糖タンパク質／ア
シアロオロムコイド−ポリ（Ｌ−リジン）、トランスフェリン／トランスフェリ
ン−ポリ（Ｌ−リジン）、インシュリン／アルブリン−インシュリン複合体、お
よび特に、マクロファージをターゲッティングするためのマンノース／マンノシ
ル化−ポリ（Ｌ−リジン）（総説に関しては、Perales et al., European J. Bi
och. 226 (1994), 255-266)。しかしながら、遺伝子導入において有用であるた
めには、ＤＮＡ送達ビヒクルの設計に関与する試薬の化学的特性および物理的相
互作用の双方が厳密に同定されていることが重要である。さらに、このターゲッ
ティング系の主要な不利な点の１つはＤＮＡ／リガンド複合体を調製するのが困
難であり、かつ、注目される遺伝子をすべてのＡＰＣに直接トランスフェクショ
ンする解決法を提供する系がないということである。
【０００９】
従って、本発明の根底にある技術的な問題は核酸分子の特定の細胞への、特に
マクロピノサイト細胞への標的化送達のための手段および方法を提供することで
ある。
マクロピノサイト細胞への標的化送達のための手段および方法を提供することで
ある。
【００１０】 この問題は請求の範囲において特徴づけられる態様によって解決された。
【００１１】 従って、本発明はポリヌクレオチドを標的マクロピノサイト細胞に導入するた
めの治療組成物を製造するための、少なくとも１種の抗体またはその反応性部分
と少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなり、かつ、０．５μｍ〜６μｍ
の間から選択される粒径を有する、好ましくは少なくとも１μｍの粒径を有する
免疫複合体の使用に関する。
めの治療組成物を製造するための、少なくとも１種の抗体またはその反応性部分
と少なくとも１種のポリヌクレオチドを含んでなり、かつ、０．５μｍ〜６μｍ
の間から選択される粒径を有する、好ましくは少なくとも１μｍの粒径を有する
免疫複合体の使用に関する。
【００１２】 驚くべきことに、抗体とポリヌクレオチドを含む免疫複合体の形成は核酸の脊
椎動物のマクロピノサイト細胞へのターゲッティングされた細胞送達を達成する
ための有効な系を提供するということが判明し、従って、in vivo遺伝子治療、
および好ましくはin vivo予防接種に適用することができる。記載される核酸分
子送達系は、核酸配列を、例えば、病原体に対する哺乳類の有効な免疫保護に関
与する「歩哨」ＡＰＣとしても知られている、マクロファージおよび樹状細胞に
特異的に向けることができるので特に有利である。従って、予防接種にはこれら
の細胞を核酸分子で特異的にトランスフェクトする可能性が重要であるが、これ
はこれらの細胞において抗原を発現することが可能であるからである。次いで、
これらはさらに細胞内でプロセッシングされ、ＭＨＣ糖タンパク質によってＴ細
胞に対して提示され、病原体または該抗原性ペプチドを発現する細胞に対して向
けられる、Ｔ細胞活性化および特異的免疫応答をもたらす。可能性ある適用とし
ては、例えば、抗腫瘍予防接種、抗ウイルス予防接種などがある。
椎動物のマクロピノサイト細胞へのターゲッティングされた細胞送達を達成する
ための有効な系を提供するということが判明し、従って、in vivo遺伝子治療、
および好ましくはin vivo予防接種に適用することができる。記載される核酸分
子送達系は、核酸配列を、例えば、病原体に対する哺乳類の有効な免疫保護に関
与する「歩哨」ＡＰＣとしても知られている、マクロファージおよび樹状細胞に
特異的に向けることができるので特に有利である。従って、予防接種にはこれら
の細胞を核酸分子で特異的にトランスフェクトする可能性が重要であるが、これ
はこれらの細胞において抗原を発現することが可能であるからである。次いで、
これらはさらに細胞内でプロセッシングされ、ＭＨＣ糖タンパク質によってＴ細
胞に対して提示され、病原体または該抗原性ペプチドを発現する細胞に対して向
けられる、Ｔ細胞活性化および特異的免疫応答をもたらす。可能性ある適用とし
ては、例えば、抗腫瘍予防接種、抗ウイルス予防接種などがある。
【００１３】
本発明に従って使用される免疫複合体の大きさは、特定の適用における最適な
使用のために選択することができる。複合体の大きさの測定は、限定されるもの
ではないが、動的レーザー光散乱（光量子相関分光法、ＰＣＳ）、電子顕微鏡、
凍結破断電子顕微鏡、ならびに当業者に公知のその他の技術をはじめとするいく
つかの技術によって達成することができる（Washington, Particle Size Analys
is in Pharmaceutics and other Industries, Ellis Horwood, New York (1992)
, 135-169参照）。
使用のために選択することができる。複合体の大きさの測定は、限定されるもの
ではないが、動的レーザー光散乱（光量子相関分光法、ＰＣＳ）、電子顕微鏡、
凍結破断電子顕微鏡、ならびに当業者に公知のその他の技術をはじめとするいく
つかの技術によって達成することができる（Washington, Particle Size Analys
is in Pharmaceutics and other Industries, Ellis Horwood, New York (1992)
, 135-169参照）。
【００１４】 抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に「歩哨」ＡＰＣは抗原取り込みに関して種々の
機構を有している：（ａ）顆粒球、単球またはマクロファージで利用できる、免
疫グロブリン（Ｆｃ）または補体のための受容体などの表面受容体による抗原の
捕捉が、受容体媒介性食作用後の、抗原のプロセッシングコンパートメントへの
効率的な送達を可能にし、さらに（ｂ）細胞表面受容体に結合できなかった抗原
も液相飲作用によってさらに取り込まれ得る。液相取り込みは別個の機構：微小
飲作用、すなわち、クラスリン被覆ピットを介する小さな小胞（〜０．１μｍ）
の取り込み、およびマクロピノサイト−シス、すなわち、膜動によって媒介され
る、大きな小胞（約０．５μｍと約６μｍの間で変動する大きさを有する）の取
り込みを介して起こり得るが（Sallusto et al., J. Exp. Med. 182 (1995), 38
9-400)、これは細胞膜への接着を全く必要としない。微小飲作用が多数の細胞に
おいて構造的に起こるのに対し、マクロピノサイト−シスは少数の細胞種、より
詳しくは、マクロファージ、樹状細胞などのＡＰＣおよび増殖因子によって刺激
された上皮細胞に限定されている(Racoosin et al., J. Cell Sci. 102 (1992),
867-880)。従って、本発明によれば、「マクロピノサイト細胞」とは好ましく
は大きさが約０．５μｍ〜６μｍの範囲にわたる高分子を細胞質に取り込むため
に、これまでに定義されたマクロピノサイト−シス現象を行うことができる細胞
を指す。好ましくは、それらはマクロファージおよび樹状細胞からなる群から選
択される。
機構を有している：（ａ）顆粒球、単球またはマクロファージで利用できる、免
疫グロブリン（Ｆｃ）または補体のための受容体などの表面受容体による抗原の
捕捉が、受容体媒介性食作用後の、抗原のプロセッシングコンパートメントへの
効率的な送達を可能にし、さらに（ｂ）細胞表面受容体に結合できなかった抗原
も液相飲作用によってさらに取り込まれ得る。液相取り込みは別個の機構：微小
飲作用、すなわち、クラスリン被覆ピットを介する小さな小胞（〜０．１μｍ）
の取り込み、およびマクロピノサイト−シス、すなわち、膜動によって媒介され
る、大きな小胞（約０．５μｍと約６μｍの間で変動する大きさを有する）の取
り込みを介して起こり得るが（Sallusto et al., J. Exp. Med. 182 (1995), 38
9-400)、これは細胞膜への接着を全く必要としない。微小飲作用が多数の細胞に
おいて構造的に起こるのに対し、マクロピノサイト−シスは少数の細胞種、より
詳しくは、マクロファージ、樹状細胞などのＡＰＣおよび増殖因子によって刺激
された上皮細胞に限定されている(Racoosin et al., J. Cell Sci. 102 (1992),
867-880)。従って、本発明によれば、「マクロピノサイト細胞」とは好ましく
は大きさが約０．５μｍ〜６μｍの範囲にわたる高分子を細胞質に取り込むため
に、これまでに定義されたマクロピノサイト−シス現象を行うことができる細胞
を指す。好ましくは、それらはマクロファージおよび樹状細胞からなる群から選
択される。
【００１５】 本発明の範囲において「免疫複合体」とは、少なくとも１種の抗体と少なくと
も１種の抗原の間で形成された複合体を意味する。かかる免疫複合体に含まれる
抗体は該抗原に特異的なものであり、従って、その特異的抗原を認識し、結合す
ることができる。
も１種の抗原の間で形成された複合体を意味する。かかる免疫複合体に含まれる
抗体は該抗原に特異的なものであり、従って、その特異的抗原を認識し、結合す
ることができる。
【００１６】 免疫複合体に含まれる抗体は免疫複合体中に存在するポリヌクレオチド、また
はポリヌクレオチドとともに配合される少なくとも１種の抗原性化合物を特異的
に認識し、結合することができる。さらに、抗体はポリヌクレオチドのみを認識
し、ポリヌクレオチドとともに配合される抗原性化合物を認識しない場合もある
し、または、逆に、ポリヌクレオチドとともに処方される抗原性化合物のみを認
識し、ポリヌクレオチドを認識しない場合もある（単一反応性抗体）。もう１つ
の態様では、抗体はポリヌクレオチドとポリヌクレオチドとともに配合される抗
原性化合物を認識し、結合し得る（多反応性抗体）。
はポリヌクレオチドとともに配合される少なくとも１種の抗原性化合物を特異的
に認識し、結合することができる。さらに、抗体はポリヌクレオチドのみを認識
し、ポリヌクレオチドとともに配合される抗原性化合物を認識しない場合もある
し、または、逆に、ポリヌクレオチドとともに処方される抗原性化合物のみを認
識し、ポリヌクレオチドを認識しない場合もある（単一反応性抗体）。もう１つ
の態様では、抗体はポリヌクレオチドとポリヌクレオチドとともに配合される抗
原性化合物を認識し、結合し得る（多反応性抗体）。
【００１７】 それとともにポリヌクレオチドが配合される抗原性化合物の例としては、ポリ
ペプチド、好ましくは、ウイルスポリペプチド、陽イオン脂質および／または陽
イオンポリマーが挙げられ、これらは最終的に免疫原性エレメントで置換される
。候補化合物は遺伝子治療のための合成ベクターに関する文献に広く記載されて
おり、それらの免疫原性（または抗原性）特性は、例えば、哺乳類への直接投与
によって容易に試験できる。これらの抗原性化合物は、好ましくは少なくとも１
種のペプチド、１種の糖部分またはいずれかのその他の好適な免疫原性部分を含
んでなる化合物の中から選択される。
ペプチド、好ましくは、ウイルスポリペプチド、陽イオン脂質および／または陽
イオンポリマーが挙げられ、これらは最終的に免疫原性エレメントで置換される
。候補化合物は遺伝子治療のための合成ベクターに関する文献に広く記載されて
おり、それらの免疫原性（または抗原性）特性は、例えば、哺乳類への直接投与
によって容易に試験できる。これらの抗原性化合物は、好ましくは少なくとも１
種のペプチド、１種の糖部分またはいずれかのその他の好適な免疫原性部分を含
んでなる化合物の中から選択される。
【００１８】 好ましい態様では、抗体は抗ポリヌクレオチド抗体、より好ましくは、抗ＤＮ
Ａ抗体である。「抗ポリヌクレオチド抗体」または「抗ＤＮＡ抗体」とは、それ
ぞれ一本鎖もしくは／および二本鎖ポリヌクレオチドまたはＤＮＡ分子を認識し
、結合し得る抗体を示す。本発明によれば、抗体はポリクローナル抗体、または
好ましくは、モノクローナル抗体であり得る。好ましい態様では、抗体は自己免
疫疾患を患う哺乳類の血清から得られた自己抗体である（例えば、Yanase et al
., J. Clin. Invest. 100 (1997), 25-31参照）。かかる抗ポリヌクレオチド抗
体は、例えば、Marion et al. (Methods 11 (1997), 3-11)においてこれまでに
記載されたようなポリヌクレオチドの総てまたは一部での哺乳類の免疫化によっ
て、および当技術分野で十分に公知の方法に従ってハイブリドーマ細胞で生産す
ることによって得ることができる（例えば、Avraemas et al., PNAS 95 (1998),
5601-5606参照）。さらに、抗ポリヌクレオチド抗体およびより詳しくは抗ＤＮ
Ａ抗体はすでに市販されている(Interchim)。「抗体」とはいずれのクラスの免
疫グロブリン（単一および多重結合）も総て、好ましくはＩｇＧまたはＩｇＭ、
二重のまたは複数のエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリッド抗
体、および特異的にポリヌクレオチドまたはＤＮＡを認識し結合する能力に関係
する「その反応性部分」（これはハイブリッドフラグメントおよび抗遺伝子型（
ＵＳ４，６９９，８８０）を含む、該抗体に由来する抗体フラグメントを意味し
、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖおよび最小
認識単位からなる群から選択され得る）を包含する。
Ａ抗体である。「抗ポリヌクレオチド抗体」または「抗ＤＮＡ抗体」とは、それ
ぞれ一本鎖もしくは／および二本鎖ポリヌクレオチドまたはＤＮＡ分子を認識し
、結合し得る抗体を示す。本発明によれば、抗体はポリクローナル抗体、または
好ましくは、モノクローナル抗体であり得る。好ましい態様では、抗体は自己免
疫疾患を患う哺乳類の血清から得られた自己抗体である（例えば、Yanase et al
., J. Clin. Invest. 100 (1997), 25-31参照）。かかる抗ポリヌクレオチド抗
体は、例えば、Marion et al. (Methods 11 (1997), 3-11)においてこれまでに
記載されたようなポリヌクレオチドの総てまたは一部での哺乳類の免疫化によっ
て、および当技術分野で十分に公知の方法に従ってハイブリドーマ細胞で生産す
ることによって得ることができる（例えば、Avraemas et al., PNAS 95 (1998),
5601-5606参照）。さらに、抗ポリヌクレオチド抗体およびより詳しくは抗ＤＮ
Ａ抗体はすでに市販されている(Interchim)。「抗体」とはいずれのクラスの免
疫グロブリン（単一および多重結合）も総て、好ましくはＩｇＧまたはＩｇＭ、
二重のまたは複数のエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリッド抗
体、および特異的にポリヌクレオチドまたはＤＮＡを認識し結合する能力に関係
する「その反応性部分」（これはハイブリッドフラグメントおよび抗遺伝子型（
ＵＳ４，６９９，８８０）を含む、該抗体に由来する抗体フラグメントを意味し
、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖおよび最小
認識単位からなる群から選択され得る）を包含する。
【００１９】 本発明の範囲において「ポリヌクレオチド」とは、一本鎖もしくは二本鎖、線
状もしくは環状、天然もしくは合成、修飾もしくは非修飾ＤＮＡおよび／または
ＲＮＡ断片を意味し（修飾例としては米国特許第５５２５７１１号、同４７１１
９５５号、同５７９２６０８号または欧州特許ＥＰ３０２ １７５参照）、大き
さで限定することなく、核酸の断片または部分を規定する。それは特に、ゲノム
ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、またはかかる
ＲＮＡをコードするＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」と「核酸」は
本発明に関しては同義語である。ポリヌクレオチドは線状ポリヌクレオチドの形
態、好ましくはプラスミドの形態であってもよい。ポリヌクレオチドはまた、例
えば、アンチセンスまたはリボザイム機能のために細胞に送達されるオリゴヌク
レオチドであってもよい。本発明によれば、ポリヌクレオチドは好ましくは裸の
ポリヌクレオチドであり(Wolff et al., Science 247 (1990), 1465-1468)、ま
たは好ましくは、ポリペプチドの細胞への取り込みに関与し得る、少なくとも１
種の化合物、好ましくはポリペプチド、好ましくはウイルスポリペプチド、また
は陽イオン脂質、または陽イオンポリマーなどの抗原性化合物とともに配合され
（総説としてはLedley, Human Gene, Therapy 6 (1995), 1129-1144参照）、そ
れらの各々は抗原性化合物としても考えられる。好ましくは、ポリヌクレオチド
は転写され、翻訳されて注目されるポリペプチドを生じ得る少なくとも１種のコ
ード配列を含む。標的細胞による発現に必要な遺伝情報はＤＮＡのＲＮＡへの転
写に、および要すればｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳に必要とされる総てのエ
レメントを含んでなる。種々の脊椎動物系で用いるのに好適な転写プロモーター
は十分に公知である。例えば、好適なプロモーターとしては、ＲＳＶ、ＭＰＳＶ
、ＳＶ４０、ＣＭＶまたは７．５ｋ、ワクシニアプロモーターのようなウイルス
プロモーター、誘導プロモーターなどが挙げられる。また、ポリヌクレオチドは
イントロン配列、ターゲッティング配列、輸送配列、複製または組み込みに関与
する配列を含んでもよい。かかる配列は文献で報告されており、当業者ならば容
易に入手することができる。ポリヌクレオチドはまた、安定化させるためにスペ
ルミンのような特定の成分で修飾してもよい。本発明によれば、ポリヌクレオチ
ドはそれが導入される標的細胞に対して、同種であってもよいし、異種であって
もよい。ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの例としては、酵
素、ホルモン、サイトカイン、膜受容体、構造ポリペプチド、輸送ポリペプチド
、腫瘍、ウイルスまたは感染性抗原、アドヘシン、リガンド、転写因子、翻訳因
子、複製因子、安定化因子、抗体、ＨＰＶ由来のＥ６またはＥ７、ＭＵＣ１、Ｂ
ＲＣＡ１、インターフェロン、インターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−
６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＰ（顆粒球マクロファージコロニー刺激
因子）、１型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１）由来ｔｋ遺伝子、ｐ５３また
はＶＥＧＦが挙げられる。ポリヌクレオチドはまた、抗体をコードしていてもよ
い。この点に関しては、「抗体」とはいずれのクラスの全免疫グロブリン、二重
もしくは多重の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリ
ッド抗体、ならびにハイブリッドフラグメントおよび抗遺伝子型（ＵＳ４，６９
９，８８０）を含む、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどのフラグメントを
包含する。有利には、該ＤＮＡは免疫を付与するポリペプチドであり、かつ、内
因性免疫原として作用して、細胞内ウイルスをはじめとする感染体に対する、お
よびまた腫瘍細胞に対する体液性もしくは細胞性応答、または双方を引き起こす
ポリペプチドの総てまたは一部をコードする。「免疫を付与するポリペプチド」
とは該ポリペプチドがトランスフェクトされた細胞において発現した場合に、治
療された患者の免疫応答に関与するということを意味する。より詳しくは、ＡＰ
Ｃなどのマクロピノサイト細胞において発現された該ポリペプチドがプロセッシ
ングされ、ＭＨＣクラスＩおよび／またはII分子によって、得られるフラグメン
トがこれらの細胞表面に提示され、特異的免疫応答を誘発する。
状もしくは環状、天然もしくは合成、修飾もしくは非修飾ＤＮＡおよび／または
ＲＮＡ断片を意味し（修飾例としては米国特許第５５２５７１１号、同４７１１
９５５号、同５７９２６０８号または欧州特許ＥＰ３０２ １７５参照）、大き
さで限定することなく、核酸の断片または部分を規定する。それは特に、ゲノム
ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、またはかかる
ＲＮＡをコードするＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」と「核酸」は
本発明に関しては同義語である。ポリヌクレオチドは線状ポリヌクレオチドの形
態、好ましくはプラスミドの形態であってもよい。ポリヌクレオチドはまた、例
えば、アンチセンスまたはリボザイム機能のために細胞に送達されるオリゴヌク
レオチドであってもよい。本発明によれば、ポリヌクレオチドは好ましくは裸の
ポリヌクレオチドであり(Wolff et al., Science 247 (1990), 1465-1468)、ま
たは好ましくは、ポリペプチドの細胞への取り込みに関与し得る、少なくとも１
種の化合物、好ましくはポリペプチド、好ましくはウイルスポリペプチド、また
は陽イオン脂質、または陽イオンポリマーなどの抗原性化合物とともに配合され
（総説としてはLedley, Human Gene, Therapy 6 (1995), 1129-1144参照）、そ
れらの各々は抗原性化合物としても考えられる。好ましくは、ポリヌクレオチド
は転写され、翻訳されて注目されるポリペプチドを生じ得る少なくとも１種のコ
ード配列を含む。標的細胞による発現に必要な遺伝情報はＤＮＡのＲＮＡへの転
写に、および要すればｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳に必要とされる総てのエ
レメントを含んでなる。種々の脊椎動物系で用いるのに好適な転写プロモーター
は十分に公知である。例えば、好適なプロモーターとしては、ＲＳＶ、ＭＰＳＶ
、ＳＶ４０、ＣＭＶまたは７．５ｋ、ワクシニアプロモーターのようなウイルス
プロモーター、誘導プロモーターなどが挙げられる。また、ポリヌクレオチドは
イントロン配列、ターゲッティング配列、輸送配列、複製または組み込みに関与
する配列を含んでもよい。かかる配列は文献で報告されており、当業者ならば容
易に入手することができる。ポリヌクレオチドはまた、安定化させるためにスペ
ルミンのような特定の成分で修飾してもよい。本発明によれば、ポリヌクレオチ
ドはそれが導入される標的細胞に対して、同種であってもよいし、異種であって
もよい。ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの例としては、酵
素、ホルモン、サイトカイン、膜受容体、構造ポリペプチド、輸送ポリペプチド
、腫瘍、ウイルスまたは感染性抗原、アドヘシン、リガンド、転写因子、翻訳因
子、複製因子、安定化因子、抗体、ＨＰＶ由来のＥ６またはＥ７、ＭＵＣ１、Ｂ
ＲＣＡ１、インターフェロン、インターロイキン（ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−
６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＰ（顆粒球マクロファージコロニー刺激
因子）、１型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１）由来ｔｋ遺伝子、ｐ５３また
はＶＥＧＦが挙げられる。ポリヌクレオチドはまた、抗体をコードしていてもよ
い。この点に関しては、「抗体」とはいずれのクラスの全免疫グロブリン、二重
もしくは多重の抗原またはエピトープ特異性を有するキメラ抗体およびハイブリ
ッド抗体、ならびにハイブリッドフラグメントおよび抗遺伝子型（ＵＳ４，６９
９，８８０）を含む、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’、Ｆａｂなどのフラグメントを
包含する。有利には、該ＤＮＡは免疫を付与するポリペプチドであり、かつ、内
因性免疫原として作用して、細胞内ウイルスをはじめとする感染体に対する、お
よびまた腫瘍細胞に対する体液性もしくは細胞性応答、または双方を引き起こす
ポリペプチドの総てまたは一部をコードする。「免疫を付与するポリペプチド」
とは該ポリペプチドがトランスフェクトされた細胞において発現した場合に、治
療された患者の免疫応答に関与するということを意味する。より詳しくは、ＡＰ
Ｃなどのマクロピノサイト細胞において発現された該ポリペプチドがプロセッシ
ングされ、ＭＨＣクラスＩおよび／またはII分子によって、得られるフラグメン
トがこれらの細胞表面に提示され、特異的免疫応答を誘発する。
【００２０】 好ましい態様によれば、免疫複合体に含まれる抗ポリヌクレオチド抗体とポリ
ヌクレオチドは、それぞれ抗ＤＮＡ抗体とＤＮＡである。
ヌクレオチドは、それぞれ抗ＤＮＡ抗体とＤＮＡである。
【００２１】 もう１つの好ましい態様では、免疫複合体に含まれる抗体は大きくとも８×１
０−７に等しい、好ましくは大きくとも１０×１０−７に等しい解離速度定数（
Ｋｄ）を示す。
０−７に等しい、好ましくは大きくとも１０×１０−７に等しい解離速度定数（
Ｋｄ）を示す。
【００２２】 抗体の解離速度定数（Ｋｄ）値は、例えば、Friquet et al. (J. Immunol. Me
thods 77 (1985), 305-319)に記載された阻害アッセイを用いて算出することが
できる。この定数は平衡時の抗体反応部位とその対応する抗原性決定基との相互
作用に起因する非共有結合性斥力を例示する。これらの斥力（ｋａ）が低い場合
には、引力（ｋａ）は最大となり、抗体−抗原反応の得られる親和性（Ｋ＝ｋａ ／ｋａ）が高くなる。本発明に用いられる抗体のこの定数およびその測定法は当
業者には十分に公知である。当業者ならば過度の実験をすることなく、ある解離
速度定数によって特性決定されるかかる抗体に関しておよび抗原に関して、本発
明の免疫複合体を作製することが可能なポリヌクレオチドに対する抗体の比率を
さらに求めることができる。例１によれば、当業者は固定量のポリヌクレオチド
と組み合わせた抗体希釈範囲を試験し、公知の方法によって複合体の大きさを測
定し、最終的に好適な大きさの免疫複合体を作製するためのポリヌクレオチドに
対する抗体比率を求めることができる。この比率は性質（完全抗体もしくは抗体
のフラグメント）、または抗体の特性（解離速度定数）に従って適応させること
ができる。例えば、重量比は５０：１であり得る。当業者ならばこれらの微量調
節を取り扱うことができる。また、種々の解離定数、種々のエピトープ特異性な
どを有する種々の抗ポリヌクレオチド抗体の混合物を用いることも可能である。 特に好ましい態様によれば、免疫複合体は免疫複合体の標的細胞表面接着を媒
介し得るターゲッティング・エレメントをさらに含んでなる。このターゲッティ
ング・エレメントは免疫複合体の抗体の、またはポリヌクレオチドの一部であっ
てもよい。例えば、このターゲッティング・エレメントは免疫複合体の、Ｆｃ、
ＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ、ＦｃＲＩＩＩ、相補受容体、免疫グロブリンＡまたはＥ
受容体およびマクロファージマンノース受容体からなる群から選択される受容体
への接着を媒介することが可能であり得る。細胞表面へのこの接着は必須ではな
いが、免疫複合体が標的細胞に密接して位置するのでマクロピノサイト−シス現
象を促進し得る。
thods 77 (1985), 305-319)に記載された阻害アッセイを用いて算出することが
できる。この定数は平衡時の抗体反応部位とその対応する抗原性決定基との相互
作用に起因する非共有結合性斥力を例示する。これらの斥力（ｋａ）が低い場合
には、引力（ｋａ）は最大となり、抗体−抗原反応の得られる親和性（Ｋ＝ｋａ ／ｋａ）が高くなる。本発明に用いられる抗体のこの定数およびその測定法は当
業者には十分に公知である。当業者ならば過度の実験をすることなく、ある解離
速度定数によって特性決定されるかかる抗体に関しておよび抗原に関して、本発
明の免疫複合体を作製することが可能なポリヌクレオチドに対する抗体の比率を
さらに求めることができる。例１によれば、当業者は固定量のポリヌクレオチド
と組み合わせた抗体希釈範囲を試験し、公知の方法によって複合体の大きさを測
定し、最終的に好適な大きさの免疫複合体を作製するためのポリヌクレオチドに
対する抗体比率を求めることができる。この比率は性質（完全抗体もしくは抗体
のフラグメント）、または抗体の特性（解離速度定数）に従って適応させること
ができる。例えば、重量比は５０：１であり得る。当業者ならばこれらの微量調
節を取り扱うことができる。また、種々の解離定数、種々のエピトープ特異性な
どを有する種々の抗ポリヌクレオチド抗体の混合物を用いることも可能である。 特に好ましい態様によれば、免疫複合体は免疫複合体の標的細胞表面接着を媒
介し得るターゲッティング・エレメントをさらに含んでなる。このターゲッティ
ング・エレメントは免疫複合体の抗体の、またはポリヌクレオチドの一部であっ
てもよい。例えば、このターゲッティング・エレメントは免疫複合体の、Ｆｃ、
ＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ、ＦｃＲＩＩＩ、相補受容体、免疫グロブリンＡまたはＥ
受容体およびマクロファージマンノース受容体からなる群から選択される受容体
への接着を媒介することが可能であり得る。細胞表面へのこの接着は必須ではな
いが、免疫複合体が標的細胞に密接して位置するのでマクロピノサイト−シス現
象を促進し得る。
【００２３】 本発明の使用の好ましい態様では、標的マクロピノサイト細胞はマクロファー
ジまたは樹状細胞である。
ジまたは樹状細胞である。
【００２４】 さらに好ましい態様では、本発明の使用に従って製造される組成物は、ヒトま
たは動物の治療処置のための方法において、好ましくは予防接種法において使用
できる。この特定の場合には、組成物はまた、医薬上許容される注射用担体を含
んでなってもよい（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences,１６版 (19
80), Mack Publishing Co.参照）。担体は好ましくは、等張性、低張性または弱
高張性であり、かつ、スクロース溶液によって提供されるような相対的に低いイ
オン強度を有する。さらに、いずれかの適切な溶媒、発熱物質を含まない滅菌水
を含んでなる、水性または部分水性の液体担体、分散媒質、被覆剤、および同等
なもの、または希釈剤（例えば；Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、乳化
剤、可溶化剤または佐剤を含んでもよい。医薬製剤のｐＨはin vivo適用におい
て有用であるように適宜調節し、緩衝する。
たは動物の治療処置のための方法において、好ましくは予防接種法において使用
できる。この特定の場合には、組成物はまた、医薬上許容される注射用担体を含
んでなってもよい（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences,１６版 (19
80), Mack Publishing Co.参照）。担体は好ましくは、等張性、低張性または弱
高張性であり、かつ、スクロース溶液によって提供されるような相対的に低いイ
オン強度を有する。さらに、いずれかの適切な溶媒、発熱物質を含まない滅菌水
を含んでなる、水性または部分水性の液体担体、分散媒質、被覆剤、および同等
なもの、または希釈剤（例えば；Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、乳化
剤、可溶化剤または佐剤を含んでもよい。医薬製剤のｐＨはin vivo適用におい
て有用であるように適宜調節し、緩衝する。
【００２５】 好ましい態様では、本発明の使用に従って製造された組成物は脊椎動物組織へ
の投与形態である。これらの組織としては筋肉、皮膚、鼻、肺、肝臓、脾臓、骨
髄、胸腺、心臓、リンパ、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精巣、卵巣、
子宮、直腸、神経系、眼、腺、結合組織、血液、腫瘍などのものが挙げられる。
外来ポリヌクレオチドのトランスフェクションが行われる細胞としては、列記さ
れた標的組織（造血細胞など）の各々において認められるものが挙げられる。投
与は、例えば、シリンジまたはその他の装置を用いて、皮下、静脈内、筋内、大
脳内、気管内、動脈内、腹膜内、膀胱内、胸膜内、冠状動脈内または腫瘍内注射
、好ましくは皮内または鼻腔内によって行うことができる。
の投与形態である。これらの組織としては筋肉、皮膚、鼻、肺、肝臓、脾臓、骨
髄、胸腺、心臓、リンパ、骨、軟骨、膵臓、腎臓、胆嚢、胃、腸、精巣、卵巣、
子宮、直腸、神経系、眼、腺、結合組織、血液、腫瘍などのものが挙げられる。
外来ポリヌクレオチドのトランスフェクションが行われる細胞としては、列記さ
れた標的組織（造血細胞など）の各々において認められるものが挙げられる。投
与は、例えば、シリンジまたはその他の装置を用いて、皮下、静脈内、筋内、大
脳内、気管内、動脈内、腹膜内、膀胱内、胸膜内、冠状動脈内または腫瘍内注射
、好ましくは皮内または鼻腔内によって行うことができる。
【００２６】 もう１つの態様では、本発明はまた、細胞を本発明の使用に従って製造された
少なくとも１種の組成物と接触させることを含んでなる、ポリヌクレオチドの標
的マクロピノサイト細胞への導入法に関する。この方法はin vivoでの該組成物
の細胞への直接投与に、または治療される被験者から取り出され得る細胞のin v
itro処理に、さらにそれの被験者への再導入（ex vivo法）に適用され得る。こ
の方法はまた培養細胞に対しても用いられ得る（in vitro）。
少なくとも１種の組成物と接触させることを含んでなる、ポリヌクレオチドの標
的マクロピノサイト細胞への導入法に関する。この方法はin vivoでの該組成物
の細胞への直接投与に、または治療される被験者から取り出され得る細胞のin v
itro処理に、さらにそれの被験者への再導入（ex vivo法）に適用され得る。こ
の方法はまた培養細胞に対しても用いられ得る（in vitro）。
【００２７】 本発明は例示として記載されたものであって、用いた専門用語は限定ではなく
説明の言葉という性質のものであると理解すべきである。前記の技術に照らして
、本発明の多数の改良および変法が可能であることは明らかである。従って、本
発明は、明示されたものの他、請求の範囲の範囲内で実施され得ると理解すべき
である。
説明の言葉という性質のものであると理解すべきである。前記の技術に照らして
、本発明の多数の改良および変法が可能であることは明らかである。従って、本
発明は、明示されたものの他、請求の範囲の範囲内で実施され得ると理解すべき
である。
【００２８】
以下、実施例により本発明を説明する。例１ プラスミド／抗体複合体の製造 プラスミド／抗体複合体は、水中、またはＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中のプラス
ミドに適当量の抗体を加えることによって得られる。 プラスミドは例えば、ルシフェラーゼまたはβ−ガラクトシダーゼをコードす
る遺伝子などのレポーター遺伝子を含んでなる。サイトメガロウイルスエンハン
サー／プロモーターの制御下にフォチナス・ピラリス(Photinus pyralis)ルシフ
ェラーゼ遺伝子をコードし、イントロンＨＭＧ１含むプラスミドｐＴＧ１１０３
３（欧州特許出願９８１１２１５１．０）を用いるのが好ましい。
ミドに適当量の抗体を加えることによって得られる。 プラスミドは例えば、ルシフェラーゼまたはβ−ガラクトシダーゼをコードす
る遺伝子などのレポーター遺伝子を含んでなる。サイトメガロウイルスエンハン
サー／プロモーターの制御下にフォチナス・ピラリス(Photinus pyralis)ルシフ
ェラーゼ遺伝子をコードし、イントロンＨＭＧ１含むプラスミドｐＴＧ１１０３
３（欧州特許出願９８１１２１５１．０）を用いるのが好ましい。
【００２９】 多数の抗ＤＮＡ抗体が市販されている。以下はInterchimから購入することが
できる：精製マウスＩｇＧ１、ｋ抗ＤＮＡ（インターカレート)（参照：Ｈ５５
４０２Ｍ）、精製マウスＩｇＧ２ｂ、ｋ抗ＤＮＡ（一本鎖および二本鎖）（参照
：Ｈ５５１２４Ｍ）、精製マウスＩｇＧ２ａ抗ＤＮＡ（一本鎖および二本鎖）（
参照：Ｍ１１０２５Ｍ）、精製ヒツジ抗ＤＮＡ（ｚ）（参照：Ｍ２０１３０Ｅま
たはＳ）。
できる：精製マウスＩｇＧ１、ｋ抗ＤＮＡ（インターカレート)（参照：Ｈ５５
４０２Ｍ）、精製マウスＩｇＧ２ｂ、ｋ抗ＤＮＡ（一本鎖および二本鎖）（参照
：Ｈ５５１２４Ｍ）、精製マウスＩｇＧ２ａ抗ＤＮＡ（一本鎖および二本鎖）（
参照：Ｍ１１０２５Ｍ）、精製ヒツジ抗ＤＮＡ（ｚ）（参照：Ｍ２０１３０Ｅま
たはＳ）。
【００３０】 種々の濃度のプラスミド調製物を用いる：１０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０
．１０μｇ／ｍｌおよび０．０１０μｇ／ｍｌ。これらのプラスミド調製物を種
々の量の抗体とともにＰＢＳ中で１５分間室温でインキュベートし、４０μｇ／
μｇＤＮＡ、４μｇ／μｇＤＮＡ、０．４０μｇ／μｇＤＮＡ、０．０４０μｇ
／μｇＤＮＡの調製物中の抗体濃度を得る。
．１０μｇ／ｍｌおよび０．０１０μｇ／ｍｌ。これらのプラスミド調製物を種
々の量の抗体とともにＰＢＳ中で１５分間室温でインキュベートし、４０μｇ／
μｇＤＮＡ、４μｇ／μｇＤＮＡ、０．４０μｇ／μｇＤＮＡ、０．０４０μｇ
／μｇＤＮＡの調製物中の抗体濃度を得る。
【００３１】 動的レーザー光散乱によって形成される複合体の粒径を測定する。次いで、Ｄ
ＮＡの、または好ましくは、添加した抗体の濃度を調節して好適な複合体粒径（
０．５〜６μｍ）を得ることができる。
ＮＡの、または好ましくは、添加した抗体の濃度を調節して好適な複合体粒径（
０．５〜６μｍ）を得ることができる。
【００３２】 次いで、反応混合物を、通常の培養培地で公開された方法に従って培養された
マウス樹状細胞を含む２４ウェルプレートのウェルに加える。
マウス樹状細胞を含む２４ウェルプレートのウェルに加える。
【００３３】 ４８時間後、培地を除去し、１００μｌの溶解バッファー（Promega)を加え、
さらにルシフェラーゼ活性の解析まで−８０℃で細胞を凍結する。９６マルチウ
ェルプレート(Biolumat LB 9500, Berthold, Wilbach, Germany)で２０μｌの上
清をルシフェラーゼアッセイ系(Promega)を用いて解析する。１ｍｇの細胞タン
パク質あたりの平均相対光単位（ＲＬＵ）として値が得られる（ＢＣＡアッセイ
、Pierce）。
さらにルシフェラーゼ活性の解析まで−８０℃で細胞を凍結する。９６マルチウ
ェルプレート(Biolumat LB 9500, Berthold, Wilbach, Germany)で２０μｌの上
清をルシフェラーゼアッセイ系(Promega)を用いて解析する。１ｍｇの細胞タン
パク質あたりの平均相対光単位（ＲＬＵ）として値が得られる（ＢＣＡアッセイ
、Pierce）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/12 Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ Ｃ１２Ｎ 15/09 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA20 CA01 DA02 FA06 HA17 4B065 AA94X AB01 BD39 BD50 CA44 4C084 AA13 MA66 ZB26 ZB33 4C085 AA03 AA13 AA14 AA35 BB36 CC22 DD51 EE01
Claims (26)
- 【請求項１】 ポリヌクレオチドを標的マクロピノサイト細胞に導入するための治療組成物を
製造するための、少なくとも１種の抗体またはその反応性部分と少なくとも１種
のポリヌクレオチドとを含んでなり、かつ、０．５μｍ〜６μｍの間から選択さ
れる粒径を有する免疫複合体の使用。 - 【請求項２】 免疫複合体の粒径が少なくとも１μｍである、請求項１に記載の使用。
- 【請求項３】 抗体が抗ポリヌクレオチド抗体である、請求項１または２に記載の使用。
- 【請求項４】 抗ポリヌクレオチド抗体が単一反応性抗体である、請求項３に記載の使用。
- 【請求項５】 抗ポリヌクレオチド抗体が多反応性抗体である、請求項３に記載の使用。
- 【請求項６】 抗ポリヌクレオチド抗体が、ポリヌクレオチド分子および前記ポリヌクレオチ
ドとともに処方される少なくとも１種の抗原性化合物を認識する、請求項５に記
載の使用。 - 【請求項７】 抗体が、ポリヌクレオチドは認識しないが、前記ポリヌクレオチドとともに処
方される少なくとも１種の抗原性化合物を認識する抗体である、請求項１または
２に記載の使用。 - 【請求項８】 抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用
。 - 【請求項９】 抗体が、抗ＤＮＡ抗体であり、かつ、自己免疫疾患を患う哺乳類から単離され
ている、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１０】 抗体が免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）である、請求項１〜９のいずれか一項に記
載の使用。 - 【請求項１１】 抗体の反応性部分が、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ
ｖ、ｓＦｖおよび最小認識単位からなる群から選択される、請求項１〜１０のい
ずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１２】 ポリヌクレオチドが裸のポリヌクレオチドである、請求項１〜１１のいずれか
一項に記載の使用。 - 【請求項１３】 ポリヌクレオチドが少なくとも１種の抗原性化合物とともに処方される、請求
項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１４】 抗原性化合物がポリペプチド、陽イオン性脂質および陽イオン性ポリマーから
なる群から選択される、請求項１３に記載の使用。 - 【請求項１５】 ポリヌクレオチドが免疫を付与するポリペプチドをコードする遺伝子を含む、
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１６】 抗ポリヌクレオチド抗体が、抗ＤＮＡ抗体であり、かつ、ポリヌクレオチドが
ＤＮＡである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１７】 抗体が大きくとも８×１０−７に等しい解離速度定数（Ｋｄ）を示す、請求項
１〜１６のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１８】 抗体が大きくとも１０×１０−７に等しい解離速度定数（Ｋｄ）示す、請求項
１〜１６のいずれか１項の使用。 - 【請求項１９】 免疫複合体が、標的細胞表面への免疫複合体の接着を媒介し得るターゲッティ
ング・エレメントをさらに含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の
使用。 - 【請求項２０】 ターゲッティング・エレメントが免疫複合体の抗体の一部である、請求項１９
に記載の使用。 - 【請求項２１】 ターゲッティング・エレメントが免疫複合体のポリヌクレオチドの一部である
、請求項１９に記載の使用。 - 【請求項２２】 ターゲッティング・エレメントが、Ｆｃ、ＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ、ＦｃＲＩＩ
Ｉ、相補受容体、免疫グロブリンＡまたはＥ受容体、およびマクロファージマン
ノース受容体からなる群から選択される受容体への免疫複合体の接着を媒介し得
る、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項２３】 標的マクロピノサイト細胞がマクロファージおよび樹状細胞からなる群から選
択される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項２４】 組成物が医薬上許容される注射用担体をさらに含んでなる、請求項１〜２３の
いずれか一項に記載の使用。 - 【請求項２５】 組成物がヒトまたは動物の身体の予防接種法に用いられる、請求項１〜２４の
いずれか一項に記載の使用。 - 【請求項２６】 ポリヌクレオチドを標的マクロピノサイト細胞にin vitroにおいて導入する方
法であって、該細胞を請求項１〜２５のいずれか一項に記載の少なくとも１種の
組成物と接触させることを含んでなる、方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP98403057.7 | 1998-12-04 | ||
| EP98403057A EP1006197A1 (en) | 1998-12-04 | 1998-12-04 | Use of an immuno complex for the preparation of a therapeutic composition useful for transfecting a polynucleotide into macropinocyte cells |
| PCT/EP1999/009219 WO2000034499A1 (en) | 1998-12-04 | 1999-11-26 | Use of an immuno complex for the preparation of a therapeutic composition useful for transfecting a polynucleotide into macropinocyte cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002531585A true JP2002531585A (ja) | 2002-09-24 |
Family
ID=8235579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000586932A Pending JP2002531585A (ja) | 1998-12-04 | 1999-11-26 | ポリヌクレオチドをマクロピノサイト細胞にトランスフェクションするのに有用な治療組成物を製造するための免疫複合体の使用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1006197A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002531585A (ja) |
| AU (1) | AU2280200A (ja) |
| CA (1) | CA2349404A1 (ja) |
| WO (1) | WO2000034499A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018512862A (ja) * | 2015-04-17 | 2018-05-24 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 凝集の検出方法及びその方法を実施する際に使用する組成物 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002309567A1 (en) * | 2001-05-16 | 2002-12-03 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Dna-antibody complexes to enhance gene transfer |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2736642B1 (fr) * | 1995-07-10 | 1997-09-12 | Pasteur Institut | Immunovecteurs, notamment anticorps et fragments d'anticorps utilisables pour le transport intracellulaire et intranucleaire de principes biologiquement actifs notamment d'haptenes, de proteines et d'acides nucleiques |
| US6656734B1 (en) * | 1997-07-01 | 2003-12-02 | Transgene S.A. | Compositions for the delivery of polynucleotides to cells |
-
1998
- 1998-12-04 EP EP98403057A patent/EP1006197A1/en not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-11-26 AU AU22802/00A patent/AU2280200A/en not_active Abandoned
- 1999-11-26 WO PCT/EP1999/009219 patent/WO2000034499A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-11-26 CA CA002349404A patent/CA2349404A1/en not_active Abandoned
- 1999-11-26 JP JP2000586932A patent/JP2002531585A/ja active Pending
- 1999-11-26 EP EP99966907A patent/EP1135516A1/en not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018512862A (ja) * | 2015-04-17 | 2018-05-24 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 凝集の検出方法及びその方法を実施する際に使用する組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2349404A1 (en) | 2000-06-15 |
| AU2280200A (en) | 2000-06-26 |
| EP1006197A1 (en) | 2000-06-07 |
| WO2000034499A1 (en) | 2000-06-15 |
| EP1135516A1 (en) | 2001-09-26 |
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