JP2002529082A5 - - Google Patents

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】 ＤＮＡライブラリーを構築するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）単離されたワクシニアウイルスゲノムを切断して、第１の大きなウイルスフラグメントおよび第２の大きなウイルスフラグメントを生成する工程；
（ｂ）該第１および第２のウイルスフラグメントに相同な配列に隣接するＤＮＡインサートを含む組換え移入プラスミドを提供する工程であって、ここで該移入プラスミドは、該ウイルスフラグメントと相同組換えできる、工程；ならびに
（ｃ）該移入プラスミドならびに該第１および第２のウイルスフラグメントを、ヘルパーウイルスに感染した哺乳動物細胞に、該移入プラスミドならびに該第１および第２のウイルスフラグメントが相同組換えを受ける条件下で導入し、それにより、ＤＮＡインサートを含む、生存可能な改変ワクシニアウイルスゲノムのライブラリーを生成する工程、
を包含する、方法。
【請求項２】 （ｄ）前記ライブラリーを前記細胞から単離する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】 前記ワクシニアウイルスゲノムは、ＷＲゲノムである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】 前記ワクシニアウイルスゲノムは、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｖｉｒｕｓ Ａｎｋａｒａゲノムである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】 前記（ｃ）における前記ワクシニアウイルスゲノム 対 前記移入プラスミドのモル比は、１：１〜１：１０の範囲である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】 前記（ｃ）における前記ワクシニアウイルスゲノム 対 前記移入プラスミドのモル比は、１：１である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】 前記細胞はＢＳＣ−１細胞である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】 前記（ａ）は、２つの独特の部位で前記ワクシニアウイルスゲノムを切断する工程を包含する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】 前記（ａ）は、ワクシニアウイルスチミジンキナーゼ遺伝子中の前記ワクシニアウイルスゲノムを切断する工程を包含し、前記移入プラスミドの隣接配列は、枠しにウイルスチミジンキナーゼ遺伝子に相同である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】 前記ワクシニアウイルスゲノムは、ｖ７．５／ｔｋウイルスゲノムである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】 前記ワクシニアウイルスゲノムは、ｖＥＬ／ｔｋウイルスゲノムである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】 前記移入プラスミドは、以下：
（ａ）ｐ７．５／ＡＴＧ０／ｔｋ、
（ｂ）ｐ７．５／ＡＴＧ１／ｔｋ、
（ｃ）ｐ７．５／ＡＴＧ２／ｔｋ、および
（ｄ）ｐ７．５／ＡＴＧ３／ｔｋ、
からなる群より選択されるプラスミドに連結されるＤＮＡインサートを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】 前記移入プラスミドは、プロモーター、翻訳開始部位、翻訳終始シグナルおよび転写終始シグナルからなる群より選択される配列を含み、ここで前記ＤＮＡインサートは、該配列の制御下にある、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】 前記移入プラスミドは、プロモーターを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】 前記プロモーターは、構成性である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】 前記プロモーターは、ワクシニアウイルスｐ７．５プロモーターである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】 前記プロモーターは、合成初期／後期プロモーターである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】 前記移入プラスミドは、翻訳開始部位を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】 前記移入プラスミドは、翻訳終始シグナルを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】 前記移入プラスミドは、転写終始シグナルを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】 前記移入プラスミドは、プロモーター、翻訳開始部位、翻訳終始シグナル、および転写終始シグナルを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】 前記ＤＮＡインサートは、ｃＤＮＡである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】 前記ｃＤＮＡは、腫瘍細胞および病原体に感染した細胞からなる群より選択される細胞から単離される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】 前記ｃＤＮＡは、腫瘍細胞から単離される、請求項３２に記載の方法。
【請求項２５】 前記ｃＤＮＡは、病原体に感染した細胞から単離される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】 前記病原体は、ウイルス、真菌、およびミコバクテリアからなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】 細胞傷害性Ｔリンパ球の標的エピトープをコードするＤＮＡ分子を含む組換えウイルスに感染した細胞を選択するための方法であって、該方法は：
（ａ）哺乳動物細胞と、標的エピトープに特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球とを、該エピトープを発現する細胞が該Ｔリンパ球と接触する際に溶解事象を受ける条件下で接触させる工程であって；ここで該細胞は、ＤＮＡインサートのライブラリーを含み、該ＤＮＡインサートのうちの少なくとも１つは、該標的エピトープをコードし、ここで該ライブラリーは、該細胞において該標的エピトープを発現するワクシニアウイルスベクター中に構築され、該細胞は、該標的ペプチドと会合することができ、かつ該標的ペプチドを該細胞傷害性Ｔ細胞に提示することができる、工程、および
（ｂ）溶解事象を受ける細胞を回収し、それによって、標的エピトープをコードするＤＮＡ分子を含む組換えウイルスに感染した細胞を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項２８】 （ｃ）前記組換えウイルスを前記細胞から単離する工程をさらに包含する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】 以下の工程：
（ｄ）前記組換えウイルスを哺乳動物細胞に移入する工程であって、ここで該細胞は、前記標的エピトープと会合することができ、かつ該標的ペプチドを該標的エピトープに対して特異的な細胞傷害性Ｔ細胞に提示することができる、工程；
（ｅ）該細胞と、該細胞傷害性Ｔ細胞とを、該標的エピトープを発現する細胞が、該Ｔリンパ球と接触する際に溶解事象を受ける条件下で接触させる工程；ならびに
（ｆ）溶解事象を受ける細胞を回収し、それによって、該標的エピトープをコードするＤＮＡ分子を含む組換えウイルスに感染した細胞を選択する工程、
をさらに包含する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】 前記ベクターは、構成性プロモーターを含み、前記ＤＮＡインサートは、該プロモーターの制御下にある、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】 前記プロモーターは、ワクシニアウイルスｐ７．５プロモーターである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】 前記プロモーターは、合成初期／後期プロモーターである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】 前記ベクターは、配列番号１、３、および５からなる群より選択される配列を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】 前記ベクターは、配列番号６〜９からなる群よりセンタｋすあれる配列を含む、請求項２７〜３２に記載の方法。
【請求項３５】 前記ＤＮＡインサートは、ｃＤＮＡである、請求項２７〜３４に記載の方法。
【請求項３６】 前記標的エピトープは、腫瘍細胞に特異的である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】 前記標的エピトープは、病原体に感染した細胞に特異的である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】 前記病原体は、ウイルス、真菌、およびミコバクテリアからなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】 前記標的エピトープは、自己免疫疾患に特異的である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】 前記ライブラリーは、以下の工程：
（ａ）単離されたワクシニアウイルスゲノムを切断して、第１の大きなウイルスフラグメントおよび第２の大きなウイルスフラグメントを生成する工程；
（ｂ）該第１および第２のウイルスフラグメントに相同な配列に隣接するＤＮＡインサートを含む組換え移入プラスミドを提供する工程であって、ここで該移入プラスミドは、該ウイルスフラグメントと相同組換えできる、工程；ならびに
（ｃ）該移入プラスミドならびに該第１および第２のウイルスフラグメントを、ヘルパーウイルスに感染した哺乳動物細胞に、該移入プラスミドならびに該第１および第２のウイルスフラグメントが相同組換えを受ける条件下で導入し、それにより、ＤＮＡインサートを含む、生存可能な改変ワクシニアウイルスゲノムのライブラリーを生成する工程、
を包含する方法により構築される、請求項２７〜３９のいずれか１項にｋしあいの方法。
【請求項４１】 前記ヘルパーウイルスは、鶏痘ヘルパーウイルスである、請求項１または４０に記載の方法。
【請求項４２】 前記工程（ａ）は、ＮｏｔＩ消化およびＡｐａＩ消化により達成される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】 実施例のいずれか１項に実質的に記載される、請求項１あまたは２７に記載の方法。